Coxiella burnetii (Q-Fever) Phase 1 IgG ELISA

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1 Fiche technique Coxiella burnetii (Q-Fever) Phase 1 IgG ELISA Dosage immunoenzymatique pour la détermination qualitative des anticorps IgG dirigés contre Coxiella burnetii dans le sérum humain. RE C I B L I N T E R N A T I O N A L G M B H Flughafenstrasse 52a Phone: +49 (0) IBL@IBL-International.com D Hamburg, Germany Fax: +49 (0)

2 1. INTRODUCTION La rickettsie de Coxiella burnetii, un pathogène retrouvé dans le monde entier, est responsable de la maladie appelée la fièvre Q. La petite bactérie à Gram négatif, obligatoirement intracellulaire, se reproduit dans le système digestif des tiques (Dermacentor marginatus) et dans le trophoblaste du placenta. Ainsi, les excréments de tiques et le placenta des mammifères infectés (particulièrement les moutons) sont très infectieux. Les professionnels qui travaillent en contact direct avec les animaux de ferme sont particulièrement à risque. Dans ce groupe, les anticorps contre le Coxiella burnetii peuvent être détectés dans 30 à 70 % des cas. L infection se fait généralement par inhalation des particules contaminées présentes dans l air, particulièrement pendant les mois secs de l été. Le temps d incubation dure entre 2 à 4 semaines. Des symptômes cliniques se développent chez 30 à 50 % des personnes infectées, pour les autres (50 à 70 %) la maladie se manifeste plutôt par des symptômes sous-clinique ou non spécifiques. Des symptômes ressemblant à l influenza sont souvent présents. Dans environ 50% des cas, une pneumonie interstitielle et atypique se développe. Moins fréquemment, l infection entraîne une hépatite. Dans de rares cas, la phase aiguë peut être compliquée par la méningo-encéphalite, la myocardite ou la péricardite. Si l infection n est pas traitée, le pathogène persiste dans 1 à 11 % des cas dans divers organes, qui se termine, après des mois et des années, en une infection chronique. L évolution chronique de l infection conduit à une endocardite (particulièrement chez les patients avec une pathologie au niveau des valves cardiaques) et/ou une hépatite granulomateuse. Environ 65 % des cas de la fièvre Q sont mortels. Suite à une infection primaire, des anticorps dirigés contre les antigènes de la phase 2 sont produits au cours de la phase aiguë de la fièvre Q. Les anticorps IgM apparaissent après environ 2 semaines suivi des IgG dans les deux mois suivants l'infection. Alors que les anticorps IgM peuvent être détectés jusqu à 3 mois après l infection, l IgG est fréquemment détectable jusqu à 5 ans. C est seulement lorsque l infection entre en phase chronique, que des anticorps IgA et IgG dirigés contre l'antigène de phase 1 de C. burnetii apparaissent. Ces anticorps sont particulièrement pertinents lors du diagnostic de l endocardite de la fièvre Q. Étant donné que les anticorps IgM dirigés contre les antigènes de phase 1 ne sont présents qu après une période de temps plus longue, il n y a pas lieu de détecter les IgM lors d une évolution chronique. Il y a une augmentation important des facteurs rhumatoïdes au cours de la phase chronique. À cause de l'absence de symptômes cliniques caractéristiques de l'infection aiguë et chronique de la fièvre Q, le diagnostic est principalement basé sur des techniques sérologiques. L utilisation des systèmes de test ELISA est recommandée par l'oms étant donné leurs sensibilités et spécificités élevées dans l analyse différentielle de la réponse des anticorps. Les maladies suivantes doivent être considérées lors du diagnostic différentiel: Les infections de Chlamydia, les infections de Mycoplasma pneumoniae, les infections de Legionella pneumophila et Legionella micdadei, les pneumonies causées par un virus et les leptospiroses. 2. UTILISATION PRÉVUE L'ELISA est prévue pour le dosage qualitatif des anticorps IgG contre Coxiella burnetii phase 1 dans les premiers stades de l infection en sérum humain. 3. PRINCIPE DE L'ANALYSE La détermination immunoenzymatique qualitative des anticorps IgG contre Coxiella burnetii est basée sur la technique ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay). Les puits de la microplaque sont recouverts avec les antigènes de la phase 1 pour fixer les anticorps correspondant. Après le lavage des puits l anticorps anti- IgG humain conjugué à HRP (horseradish peroxidase) est ajouté. Ce conjugué se fixe aux anticorps spécifiques pour Coxiella burnetii. Le complexe immun constitué par le conjugué attaché est visualisé en ajoutant le substrat de Tetramethylbenzidine (TMB) qui donne un produit de réaction bleu. L'intensité de ce produit est proportionnelle à la quantité d'anticorps IgG spécifiques pour Coxiella burnetii phase 1 dans le spécimen. De l'acide sulfurique est ajouté pour arrêter la réaction. Ceci produit une couleur jaune. L'absorbance à 450 nm est lue en utilisant un lecteur de microplaque ELISA. VN /7

3 4. MATÉRIAUX 4.1. Réactifs fournis Puits recouverts de C. burnetii phase 1 (IgG): 12 barrettes sécables contenant 8 puits recouverts des antigènes de la phase 1; dans un sachet d'aluminium refermable. Diluant de l échantillon IgG***: 1 bouteille contenant 100 ml de tampon pour la dilution de l'échantillon; ph 7.2 ± 0.2; coloré en jaune; prêt à utiliser; couvercle blanc. Solution d'arrêt: 1 bouteille contenant 15 ml d'acide sulfurique, 0.2 mol/l; prête à utiliser; couvercle rouge. Solution de Lavage (20x concentré)*: 1 bouteille contenant 50 ml de tampon 20-fois concentré (ph 7.2 ± 0.2) pour laver les puits; couvercle blanc. Conjugué anti-igg C. burnetii**: 1 bouteille contenant 20 ml d'anticorps de lapin conjugués à peroxydase contre l IgG humain; coloré bleue, prêt à utiliser; couvercle noir. Solution de Substrat de TMB: 1 bouteille contenant 15 ml 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine (TMB); prêt à utiliser ; couvercle jaune. Contrôle Positif d IgG C. burnetii***: 1 bouteille contenant 2 ml; coloré jaune; prêt à utiliser; couvercle rouge. Contrôle Cut-off d IgG C. burnetii***: 1 bouteille contenant 3 ml, coloré jaune; prêt à utiliser; couvercle vert. Contrôle Négatif d IgG C. burnetii***: 1 bouteille contenant 2 ml, coloré jaune; prêt à utiliser; couvercle bleu. * contient 0.1 % Bronidox L après la dilution ** contient 0.2 % Bronidox L *** contient 0.1 % Kathon 4.2. Matériaux fournis 1 cadre de plaque 1 feuille adhésive 1 protocole d'essai 4.3. Matériaux et Equipement requis lecteur de microplaque 'ELISA, équipé pour mesurer l'absorbance à 450/620 nm Incubateur 37 C Équipement manuel ou automatique pour rincer les puits Pipettes pour usage entre 10 et 1000 µl Vortex Eau désionisée ou (fraîchement) distillée Tubes jetables Support de tubes Chronomètre 5. STABILITÉ ET STOCKAGE Les réactifs sont stables jusqu'à la date d'échéance indiquée sur l'étiquette une fois stockés à 2-8 C. 6. PRÉPARATION DE RÉACTIF Il est très important que tous les réactifs, échantillons et contrôles soient à la température ambiante (18-25 C) avant de commencer l'analyse! 6.1. Barrettes coatées cassables Les micropuits cassables sont recouverts des antigènes de la phase 1 et sont prêts à utiliser. Conserver à 2-8 C. Après avoir détaché des barrettes, placer celles restantes dans le sachet d'aluminium avec le dessicateur fourni les conserver à 2-8 C; stables jusqu'à la date d'échéance. Après premier usage stable jusqu'à la date d'échéance une fois stocké à 2-8 C. VN /7

4 6.2. Conjugué anti-igg C. burnetii La bouteille contient 20 ml d'une solution de peroxydase de raifort anti- IgG humaine, tampon, stabilisateurs, conservateurs et un colorant bleu inerte. La solution est prête à utiliser. Conserver à 2-8 C. Après premier usage stable jusqu'à la date d'échéance une fois stocké à 2-8 C Contrôles Les flacons marqués avec Contrôle Positif, Contrôle Cut-off et Contrôle Négatif contiennent des solutions de contrôles prêtes à utiliser. Elles contiennent 0.1 % de Cathon et doivent être stockées à 2-8 C. Après premier usage stable jusqu'à la date d'échéance une fois stocké à 2-8 C Diluant pour les Echantillons IgG La bouteille contient 100 ml d un tampon phosphate, stabilisateurs, conservateurs et un colorant jaune inerte. Elle est employée pour la dilution de l échantillon du patient. Cette solution prête à utiliser doit être stockée à 2-8 C. Après premier usage stable jusqu'à la date d'échéance une fois stocké à 2-8 C Solution de Lavage (20x conc.) Le flacon contient 50 ml d'un tampon concentré, détergents, stabilisateurs et conservateurs. Diluer la solution de lavage au 1/20 ème ; par exemple 10 ml de la Solution de Lavage ml d eau bidistillée récente et non contaminée. Le tampon dilué est stable pendant cinq jours si conservé à température ambiante. Après premier usage stable jusqu'à la date d'échéance une fois stocké à 2-8 C Solution de Substrat TMB La bouteille contient 15 ml d'un système de peroxyde de tetramethylbenzidine/hydrogen. Le réactif est prêt à utiliser et doit être stocké à 2-8 C, loin de la lumière. La solution devrait être sans couleur ou avoir une légère teinte bleue. Si le substrat se transforme en bleu, il a pu être contaminé et devrait être remplacé. Après premier usage stable jusqu'à la date d'échéance une fois stocké à 2-8 C Solution d Arrêt La bouteille contient 15 ml d une solution acide sulfurique de 0.2 M (R 36/38, S 26). Cette solution est prête à utiliser et doit être stocké à 2-8 C. Après premier usage stable jusqu'à la date d'échéance. 7. COLLECTION ET PRÉPARATION DES SPÉCIMENS Utilisez des échantillons de sérum humain pour cette analyse. Si l'analyse est exécutée dans un délai de 5 jours après la collection des échantillons, les spécimens doivent être maintenus à 2-8 C; autrement ils doivent être aliquotés et conservés surgelés (-20 à -70 C). Si les échantillons sont conservés congelés, bien mélanger les échantillons décongelés avant l'analyse. Évitez congélation et décongélation répétée. L inactivation par la chaleur des échantillons n est pas recommandée Dilution de l échantillon Avant l'analyse, tous les échantillons doivent être dilués avec le Diluant de l Echantillon IgG. Diluer 10 µl de l échantillon avec 1 ml du Diluant de l Echantillon IgG dans des tubes pour obtenir une dilution et bien vortexer. 8. PROCÉDÉ D'ANALYSE Lire attentivement la notice d emploi avant de réaliser le dosage. La fiabilité des résultats dépend du suivi strict du protocole. La technique de dosage suivante a été validée uniquement pour une procédure manuelle. Si le dosage doit être effectué sur un automate, nous conseillons d augmenter le nombre d étapes de lavage de trois à cinq et le volume de la solution de lavage de 300 à 350 µl. Avant de commencer le dosage, déterminer, sur la feuille fournie dans la trousse, le plan de distribution et d identification des échantillons et des étalons. Sélectionner le nombre de barrettes ou de puits nécessaires et les placer sur le support. Veuillez assigner au moins: 1 puits (par exemple A1) pour le blanc substrat, 1 puits (par exemple B1) pour le contrôle négatif, 2 puits (par exemple C1+D1) pour le contrôle cut-off et 1 puits (par exemple E1) pour le contrôle positif. Il est recommandé de déterminer les contrôles et les échantillons du patient deux fois, si nécessaire. VN /7

5 Exécutez toutes les étapes de l'analyse dans l'ordre donné et sans délai entre les étapes. Une pointe de pipette propre et jetable devrait être employée pour aliquoter chaque contrôle et échantillon. Ajuster l'incubateur à 37 C ± 1 C. 1. Pipettez 100 µl de contrôles et d échantillons dilués dans leurs puits respectifs. Gardez le puits A1 pour le substrat blanc. 2. Couvrez les puits de couvertures autocollantes. 3. Incuber pour 1 heure ± 5 minutes à 37±1 C. 4. Quand l'incubation a été accomplie, enlevez la couverture, aspirez le contenu des puits et lavez chaque puits trois fois avec 300 µl de Solution de Lavage. Évitez les débordements des puits de réaction. Le temps de trempage entre chaque cycle de lavage devrait être > 5sec. À la fin, enlevez soigneusement le fluide restant en tapant les bandes sur des papiers en tissu avant la prochaine étape! Note: Le lavage est décisif! Un lavage insuffisant peut mener à une précision faible et à des valeurs d'absorbance faussement élevées. 5. Pipettez 100 µl du conjugué anti-igg C. burnetii dans tous les puits sauf le puits blanc (p. ex. A1). Fermez avec la couverture autocollante. 6. Incuber pendant 30 minutes à température ambiante. Ne pas exposer à la lumière directe du soleil. 7. Répétez l'étape numéro Pipetter 100 µl de la Solution de Substrat de TMB dans tous les puits. 9. Incuber pendant exactement 15 minutes à la température ambiante dans l'obscurité. 10. Pipetter 100 µl de la Solution d'arrêt dans tous les puits dans le même ordre et à la même vitesse que pour la Solution de Substrat de TMB. N'importe quelle couleur bleue développée pendant l'incubation se transforme en jaune. Note: Des échantillons de patients fortement positifs peuvent causer des précipités foncés du chromogène! Ces précipités peuvent influencer les valeurs mesurées de la densité optique. Il est recommandé de diluer l échantillon avec de la solution physiologique de chlorure de sodium, par exemple 1+1. Ensuite diluer l'échantillon avec le tampon et multiplier les résultats en U (unités) par Mesurer l'absorption du spécimen à 450/620 nm dans un délai de 30 minutes après l'addition de la Solution d'arrêt Mesure Ajuster le lecteur de microplaque ELISA à zéro en utilisant le substrat blanc dans le puits A1. Si - pour raisons techniques - le lecteur d'elisa ne peut pas être ajusté à zéro en utilisant le substrat blanc dans le puits A1, soustraire la valeur d'absorption du puits A1 de toutes les autres valeurs d absorption mesurées afin d'obtenir des résultats fiables! Mesurer l'absorption de tous les puits à 450 nm et enregistrer les valeurs d'absorption pour chaque contrôle et échantillon de patient dans le plan de distribution et d'identification. Une lecture bichromatique de longueur d'onde employant 620 nm comme longueur d'onde de référence est recommandée. En cas de plusieurs mesures, calculer les valeurs moyennes d'absorption de tous les résultats. 9. RÉSULTATS 9.1. Critères De Validité Afin qu une analyse soit considérée valide, les critères suivants doivent être respectés: Blanc Substrat dans A1: Valeur d absorbance < Contrôle négatif dans B1: Valeur d absorbance < et < cut-off Contrôle seuil (cut-off) dans C1 et D1: Valeur d absorbance Contrôle positif dans E1: Valeur d'absorbance >contrôle seuil (cut-off). Lorsque ces critères ne sont pas remplis, le test n est pas valide et doit être recommencé. VN /7

6 9.2. Calcul des Résultats La valeur seuil correspond à la moyenne des valeurs d absorbance du contrôle seuil (cut-off). Exemple: 0.39 DO Contrôle Seuil DO Contrôle Seuil = 0.76 / 2 = 0.38 Cut-off = Interprétation des Résultats Des échantillons sont considérés POSITIFS si la valeur d'absorption est plus élevée que 10 % au-dessus du «cut-off». Des échantillons avec une valeur d'absorption de 10 % au-dessus ou au-dessous du «cut-off» ne devraient pas être considérés comme clairement positifs ou négatifs zone grise. Il est recommandé de répéter l'analyse après 2-4 semaines avec un échantillon frais. Si les résultats de la deuxième analyse sont encore dans la zone grise l'échantillon doit être considéré NÉGATIF. Des échantillons sont considérés NÉGATIFS si la valeur d'absorption est inférieure à 10 % au-dessous du «cut-off» Résultats en unités (Unités = U) Valeur (moyenne) d'absorption du patient x 10 = [Unités = U] Cut-off Exemple: x 10 = 47 U (Unités) 0.38 Cut-off : 10 U Zone grise: 9-11 U Négatif : <9 U Postitif : >11 U 10. CARACTÉRISTIQUES D'EXÉCUTION Précision Inter-Analyse n Moyenne (U) CV (%) Sérum Equivoque 5 (2) Sérum Pos. 6 (2) Intra-Analyse n Moyenne (DO) CV (%) Sérum Pos Sérum Pos Spécificité Diagnostique La spécificité diagnostique est définie comme la probabilité d obtenir un résultat négatif en l'absence d'un analyte spécifique. Elle est > 90 % Sensibilité Diagnostique La sensibilité diagnostique est définie comme la probabilité d obtenir un résultat positif en présence d'un analyte spécifique. Elle est 88 % Interférence Aucune interférence n a été observée sur des sérums hémolytiques, lipémiques ou ictériques pour des concentrations allant jusqu à 10 mg/ml d hémoglobine, 5 mg/ml de triglycérides et 0.5 mg/ml de bilirubine. Note: Ces résultats s appuient sur les groupes d échantillons étudiés; il n agit pas de caractéristiques techniques garanties. VN /7

7 11. LIMITATIONS DU PROCÉDÉ Une contamination bactérienne ou des cycles gel-dégel répétés du spécimen peuvent affecter les valeurs d'absorption. Le diagnostic d'une maladie infectieuse ne devrait pas être établi sur la base du résultat d une seule analyse. Un diagnostic précis devrait prendre en considération l'histoire clinique, la symptomatologie ainsi que les données sérologiques. Les données sérologiques sont de valeur limité dans le cas des patients immunocompromis et des nouveaux-nés. 12. PRÉCAUTIONS ET AVERTISSEMENTS En accord avec l article 1 paragraphe 2b de la directive européenne 98/79/EC, l utilisation des dispositifs médicaux de diagnostic in vitro est destinée par le fabricant à garantir le bien-fondé, les performances et la sécurité du produit. Par conséquent, la procédure de dosage, l information, les précautions et mises en garde de la notice d emploi, doivent être suivies de façon stricte. L utilisation de ces trousses avec des automates ou dispositifs similaires doit être validée. Aucun changement de la conception, composition et procédure de dosage, ainsi que l utilisation avec d autres produits non approuvés par le fabricant, ne sont autorisés ; seul l utilisateur est responsable de tels changements. Le fabricant n est pas responsable des faux résultats et des incidents dus à ces motifs. Le fabricant n est pas responsable des résultats fournis par analyse visuelle des échantillons des patients. Uniquement pour diagnostic in vitro. Tous les composants d'origine humaine utilisés pour la fabrication de ces réactifs ont été analysés et ont été trouvés non réactifs en Ag HBs, en anticorps anti-vhi 1 et 2 et en anticorps anti-vhc. Néanmoins, tous les produits doivent être considérés et traités comme étant potentiellement infectieux. Ne pas échanger les réactifs ou les barrettes provenant de différents lots de production. Ne pas utiliser de réactifs provenant d'autres fabricants avec les réactifs de cette trousse. Ne pas utiliser les réactifs après la date de péremption indiquée sur l'étiquette. Utiliser seulement des embouts de pipette, des distributeurs et du matériel de laboratoire propres. Ne pas échanger les bouchons des flacons, pour éviter la contamination croisée. Fermer soigneusement les flacons après utilisation pour éviter l'évaporation et la contamination microbienne. Avant une nouvelle utilisation, vérifier les flacons de conjugué et de contrôle, déjà utilisés, pour exclure une contamination microbienne. Pour éviter la contamination croisée et des résultats faussement élevés, introduire les échantillons de patients et le conjugué exactement au fond des puits sans éclabousser. L ELISA est uniquement destiné à l utilisation par un personnel compétent, maîtrisant parfaitement les techniques de travail. AVERTISSEMENT: Dans la concentration utilisée, Bronidox L ne pose pratiquement aucun risque toxicologique lors du contact avec la peau et les membranes muqueuses! AVERTISSEMENT: L'acide sulfurique irrite les yeux et la peau. Garder hors de portée des enfants. Lors du contact avec les yeux, rincer soigneusement avec de l'eau et consulter un médecin! Mesures d élimination Les résidus de réactifs et des préparations sont considérés comme de déchets potentiellement dangereux. L élimination de ces déchets est soumise à des réglementations nationales et locales. Contacter les autorités locales ou les sociétés spécialisées pour obtenir des conseils sur l élimination des déchets dangereux. 13. LITTERATURE Mc Dade JE: Historical aspects of Q-Fever: The disease. CRC Press, 1990, 5 Marrie TS: Coxiella burnetii pneumonia. Clin Infect Disease 21 (Suppl. 3), 1995, 253 Raoult D and Marrie T: Q-Fever. Clin Infect Disease 20, 1995, 489 Kaplan MM and Bertagna, P: The geographical distribution of Q-Fever. Bull World Health Organ 13, 1995, 829 Dellacasagrande J, et al.: C. burnetii survives in monocytes from patients with Q-Fever endocarditis. Infect Immun 68, 2000, 160 VN /7

8 SCHEMA DU TEST Coxiella burnetii (Q-Fever) Phase 1 IgG ELISA Préparation du test Préparer les réactifs et échantillons comme indiqué dans la fiche technique. Etablir un plan d identification et de plaque pour tous les échantillons et contrôles. Sélectionner le nombre nécessité de mircropuits pour l analyse et les placer dans le cadre prévu à cet effet. Blanc substrat (par ex. A1) Procédure du test Contrôle négatif Contrôle positif Contrôle cut-off Contrôle Négatif µl contrôle positif µl - - contrôle Cut-off Echantillon µl - Echantillon (dilué 1+100) (dilué 1+100) µl Couvrir les puits avec la feuille fournie dans le kit. Incuber à 37 C pendant 1h. Laver les puits trois fois avec 300 µl de solution de lavage. Conjugué µl 100 µl 100 µl 100 µl Couvrir les puits avec la feuille fournie dans le kit. Incuber pendant 30 min à température ambiante. Laver les puits trois fois avec 300 µl de solution de lavage. Substrat TMB 100 µl 100 µl 100 µl 100 µl 100 µl Incuber 15 minutes exactement à température ambiante et à l obscurité Solution d arrêt 100 µl 100 µl 100 µl 100 µl 100 µl Mesure photométrique à 450 nm (longueur d onde de référence : 620 nm) Photometric measurement at 450 nm (reference wavelength: 620 nm) VN /7

9 Symbols / Symbole / Symbôles / Símbolos / Símbolos / Σύμβολα REF LOT CONC LYO IVD Cat.-No.: / Kat.-Nr.: / No.- Cat.: / Cat.-No.: / N.º Cat.: / N. Cat.: / Αριθμός-Κατ.: Lot-No.: / Chargen-Bez.: / No. Lot: / Lot-No.: / Lote N.º: / Lotto n.: / Αριθμός -Παραγωγή: Use by: / Verwendbar bis: / Utiliser à: / Usado por: / Usar até: / Da utilizzare entro: / Χρησιμοποιείται από: No. of Tests: / Kitgröße: / Nb. de Tests: / No. de Determ.: / N.º de Testes: / Quantità dei tests: / Αριθμός εξετάσεων: Concentrate / Konzentrat / Concentré / Concentrar / Concentrado / Concentrato / Συμπύκνωμα Lyophilized / Lyophilisat / Lyophilisé / Liofilizado / Liofilizado / Liofilizzato / Λυοφιλιασμένο In Vitro Diagnostic Medical Device. / In-vitro-Diagnostikum. / Appareil Médical pour Diagnostics In Vitro. / Dispositivo Médico para Diagnóstico In Vitro. / Equipamento Médico de Diagnóstico In Vitro. / Dispositivo Medico Diagnostico In vitro. / Ιατρική συσκευή για In-Vitro ιάγνωση. Evaluation kit. / Nur für Leistungsbewertungszwecke. / Kit pour évaluation. / Juego de Reactivos para Evaluació. / Kit de avaliação. / Kit di evaluazione. / Κιτ Αξιολόγησης. Read instructions before use. / Arbeitsanleitung lesen. / Lire la fiche technique avant emploi. / Lea las instrucciones antes de usar. / Ler as instruções antes de usar. / Leggere le istruzioni prima dell uso. / ιαβάστε τις οδηγίες πριν την χρήση. Keep away from heat or direct sun light. / Vor Hitze und direkter Sonneneinstrahlung schützen. / Garder à l abri de la chaleur et de toute exposition lumineuse. / Manténgase alejado del calor o la luz solar directa. / Manter longe do calor ou luz solar directa. / Non esporre ai raggi solari. / Να φυλάσσεται μακριά από θερμότητα και άμεση επαφή με το φως του ηλίου. Store at: / Lagern bei: / Stocker à: / Almacene a: / Armazenar a: / Conservare a: / Αποθήκευση στους: Manufacturer: / Hersteller: / Fabricant: / Productor: / Fabricante: / Fabbricante: / Παραγωγός: Caution! / Vorsicht! / Attention! / Precaución! / Cuidado! / Attenzione! / Προσοχή! Symbols of the kit components see MATERIALS SUPPLIED. Die Symbole der Komponenten sind im Kapitel KOMPONENTEN DES KITS beschrieben. Voir MATERIEL FOURNI pour les symbôles des composants du kit. Símbolos de los componentes del juego de reactivos, vea MATERIALES SUMINISTRADOS. Para símbolos dos componentes do kit ver MATERIAIS FORNECIDOS. Per i simboli dei componenti del kit si veda COMPONENTI DEL KIT. Για τα σύμβολα των συστατικών του κιτ συμβουλευτείτε το ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΥΛΙΚΑ. COMPLAINTS: Complaints may be submitted initially written or vocal. Subsequently they need to be filed including the test performance and results in writing in case of analytical reasons. WARRANTY: The product is warranted to be free from material defects within the specific shelf life and to comply with product specifications delivered with the product. The product must be used according to the Intended use, all instructions given in the instructions for use and within the product specific shelf life. Any modification of the test procedure or exchange or mixing of components of different lots could negatively affect the results. These cases invalidate any claim for replacement. LIMITATION OF LIABILITY: IN ALL CIRCUMSTANCES THE EXTENT OF MANUFACTURER S LIABILITY IS LIMITED TO THE PURCHASE PRICE OF THE KIT(S) IN QUESTION. IN NO EVENT SHALL MANUFACTURER BE LIABLE FOR ANY INCIDENTAL OR CONSEQUENTIAL DAMAGES, INCLUDING DAMAGES FOR LOST PROFITS, LOST SALES, INJURY TO PERSON OR PROPERTY OR ANY OTHER INCIDENTAL OR CONSEQUENTIAL LOSS. IBL International GmbH Flughafenstr. 52A, Hamburg, Germany Tel.: + 49 (0) Fax: IBL@IBL-International.com WEB: Symbols Version 4.5 /