QUANTA Lite TM β 2 GPI Screening ELISA Uniquement pour Diagnostics In-Vitro Complexité de CLIA: Haut

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1 QUANTA Lite TM β 2 GPI Screening ELISA Uniquement pour Diagnostics In-Vitro Complexité de CLIA: Haut Application QUANTA Lite TM β 2 GP1 Screen est un test ELISA (Enzyme-linked Immunosorbent Assay) pour le dépistage qualitatif des anticorps sériques anti-β 2 glycoprotéines 1 (anti-β 2 GP1), d isotypes IgA, IgG, IgM. La recherche des anticorps anti-β 2 GP1 contribue à l'évaluation des risques de thrombose auto-immunes comme les thromboses secondaires chez les sujets atteints de Lupus Erythémateux Disséminé (LED) ou de pathologies qui s'en rapprochent. Informations concernant le test La présence d anticorps anti-cardiolipides (ACA) a souvent été associée aux thromboses veineuses et artérielles. 1-5 Ces observations ont été faites pour la première fois au cours d études sur le Lupus Erythémateux Disséminé (LED), une maladie dont un de ses nombreux symptômes sont les thromboses. 6,7 De nouvelles études plus récentes 8-12 ont montré qu un cofacteur de 50kD est indispensable pour que les anti-cardiolipides puissent se fixer sur les cardiolipides tapissant les puits des plaques d ELISA. Le cofacteur a été identifié comme étant la β 2 Glycoprotéine 1 (β 2 GP1), aussi appelée apo-lipoprotéine H 8,12,13,14. Alors que la β 2 GP1 est connue comme un inhibiteur in vitro du réseau intrinsèque de la coagulation sanguine 15, de l'agrégation ADP-dépendante 16 et de l'activité prothrombinase des plaquettes activées 17, sa fonction physiologique est encore inconnue. Aujourd'hui, on sait que les anticorps des patients présentant le Syndrome des Anti-Phospholipides (SAP) ne reconnaissent pas les cardiolipides mais une structure modifiée de la β 2 GP1 ou la β 2 GP1 native ou bien encore un épitope structurel formé par l'association cardiolipide-β 2 GP Galli et al 9 et Viard et al 18 ont chacun mis en évidence que les anticorps anti-cardiolipides des patients ayant des maladies autoimmunes (LED et/ou SAP) sont dirigés contre la molécule de β 2 GP1 tapissant la plaque de polystyrène d ELISA. Koike 11 et Matsuura 12 ont définitivement montré que la β 2 GP1 est en effet l'antigène sur lequel de nombreux anticorps anti-cardiolipides des patients se lient et ces auteurs ont même montré que le phospholipide sert plutôt à lier la β 2 GP1 à la phase solide. Les tests traditionnels de détection des anticorps anti-cardiolipides sont reconnus pour engendrer des résultats faussement positifs dûs à des réactions croisées des phospholipides avec certains sérums issus de patients ayant des maladies infectieuses, notamment la syphilis et aussi avec certains autres auto-anticorps comme par exemple l'adn double brin 2,3. En éliminant le phospholipide de la phase solide et en utilisant seulement la β 2 GP1, le test devient alors plus spécifique pour détecter des problèmes potentiels de coagulation. L'augmentation de cette spécificité a été définitivement démontrée par différents groupes d'étude 11, 12, 16, 17, Le test de détection des auto-anticorps anti-β 2 GP1 est un test utile et plus spécifique à utiliser en conjonction avec les tests traditionnels de détection des anti-cardiolipides et du facteur lupique anticoagulant pour évaluer les risques de thromboses chez les patients à risque. Les anticorps anti-β 2 GP1 de classe IgG ont été trouvés chez 17 des 47 patients LED (36%) de ces 47 patients LED eurent des thromboses et 8 d'entre eux soit 89% avaient des anti-β 2 GP1. Hisham et al 20 trouvèrent des anticorps anti-β 2 GP1 de classe IgG chez tous les 5 patients (100%) ayant montré au moins 2 manifestations cliniques relatives au SAP. Ces 5 patients sont classés dans la catégorie de ceux à niveaux élevés en anticorps anti-β 2 GP1. 8 des 14 patients (57%) à faible taux d anticorps anti-β 2 GP1 ont eu au moins un accident thrombotique. Tsutsumi. et al. 22 trouvèrent des anticorps anti-β 2 GP1 IgG et IgM chez 10,1% et 5,8% respectivement des 308 patients LED japonais. Les anti-β 2 GP1 d'isotype IgG sont plus courants chez les patients ayant déjà eu des accidents thrombotiques. Ce même groupe de travail a aussi rapporté que parmi 15 patientes ayant eu des fausses couches récurrentes, 20% d'entre elles sont anti-β 2 GP1 IgG positives. Ils ont par ailleurs mis en évidence que les patients ayant eu des accidents thrombotiques sont d'une part plus souvent anti-β 2 GP1 IgM positifs que ceux qui n'ont pas eu de problème thrombotique et d'autre part que le niveau d'anti-β 2 GP1 IgM est plus élevé dans le groupe des thromboses que dans le groupe sans thrombose. Parmi les 15 patientes n'ayant pas eu de fausse couche, aucune n ont d anti-β 2 GP1 IgM positive. Cabledes et al. 23 ont étudié 94 patients LED dont 34 avaient des manifestations cliniques du SAP. L'association des manifestations cliniques du SAP avec les anti-β 2 GP1 est beaucoup plus courante qu'avec les anti-cardiolipides traditionnels. Les anti-β 2 GP1 IgG sont présents dans le sérum de 16 des 18 patients avec SAP (89%). Sur les 22 patients positifs en anticardiolipides mais sans manifestation clinique du SAP, aucun n est positif en β 2 GP1. Cerrato et al. 24 ont détecté des anti-β 2 GP1 IgG chez 87,5% de patients dans un groupe de 32 ayant un historique thrombotique (SAP). Des anti-β 2 GP1 IgM furent mis en évidence chez 71,9% de ce même groupe de 32 patients. 1

2 Sebastiani et al. 25 ont détecté des anti-β 2 GP1 IgG chez 110 patients (20,3%) et des anti-β 2 GP1 IgM chez 109 patients (20,1%) sur un total de 542 malades atteints de LED. La présence d'anti-β 2 GP1 a été fortement associée à la présence d'anti-cardiolipides (p<10-5 ). Ils montrèrent aussi que les anti-β 2 GP1 IgG et IgM sont associées aux 2 types de thromboses artérielles et veineuses. Principe du test L antigène β 2 GP1 est purifié et fixé dans les puits d une plaque de microtitration en polystyrène dans des conditions qui préservent son état natif. Les contrôles prêt-à-l emplois et les sérums dilués de patients sont ajoutés dans différents puits. Une étape d incubation permet la liaison entre l anticorps anti-β 2 GPI présents dans le sérum et l antigène immobilisé dans le puits. Les molécules non liées aux antigènes sont éliminées par lavage. Un conjugué enzymatique anti-igg,a,m humaine est alors ajouté dans chaque puits pour révéler les auto-anticorps du patient. Après une étape d incubation, le conjugué non fixé est éliminé par lavage. L activité enzymatique résiduelle est quantifiée grâce à l addition d un substrat chromogène suivie d une étape de mesure de l intensité de la coloration ainsi développée. Les résultats peuvent être évalués par comparaison entre la couleur du puits échantillon et celle des puits de contrôle. Contenu du coffret 1. Plaque de microtitration ELISA revêtue d antigène β 2 GPI, portoir de 12 barrettes de 8 puits en polystyrène sécables, dans un sachet d aluminium avec un dessiccant 2. Contrôle Négatif prédilué, 1 flacon de 1,2 ml de sérum humain sans anticorps humains anti-β 2 GPI, dans du tampon avec du stabilisateur 3. Point de décision prédilué β 2 GPI (Valeur limite standard), 1 flacon de 1,2 ml de sérum humain avec des anticorps humains anti-β 2 GPI, dans du tampon avec du stabilisateur 4. Contrôle de dépistage prédiluéβ 2 GPI, 1 flacon de 1,2 ml de sérum humain avec des anticorps humains anti-β 2 GPI, dans du tampon avec du stabilisateur 5. Diluant d échantillons HRP, teinté en rose, 1 flacon de 50 ml contenant du tampon Tris salin, du Tween 20, des stabilisateurs de protéines et des conservateurs 6. Tampon de lavage HRP concentré 40X tampon Tris salin avec du Tween 20, teinté de rouge, 1 flacon de 25 ml. Consulter le paragraphe Méthode pour la dilution. 7. Conjugué IgGAM-HRP, anticorps de chèvre anti-iggam humaines dans du tampon avec des stabilisateurs de protéines et des conservateurs, teinté en jaune-clair, 1 flacon de 10 ml 8. TMB Chromogène, avec stabilisateurs, 1 flacon de 10 ml 9. Solution d arrêt HRP, acide sulfurique 0,344M, non teinté, 1 flacon de 10 ml Avertissements 1. ATTENTION: Le diluant des échantillons, les contrôles et le conjugué contiennent 0,02% de chloramphénicol, considéré comme cancérigène dans l état de Californie. 2. Tout le matériel d'origine humain utilisé pour la préparation des contrôles a été testé et trouvé négatif lors de la recherche d'anticorps anti-vih, anti-antigène de surface de l'hépatite B et anti-virus de l Hépatite C à l'aide de tests approuvés par la FDA. Cependant, aucune méthode ne peut donner une garantie complète quant à l'absence de VIH, VHB, du VHC ou d'autres agents infectieux. En conséquence, tous les sérums humains de contrôle doivent être manipulés avec les mêmes précautions que celles utilisées pour un matériel potentiellement infectieux L azide de sodium (NaN 3 ) est utilisé comme conservateur. NaN 3 est un poison et il est toxique en cas d ingestion et de contact avec les yeux et la peau. Eviter de l exposer aux bases, métaux ou autres composants, réagissant avec les acides. Après l évacuation des réactifs, laver à grande eau afin d éviter des dépôts dans les canalisations. 4. Le conjugué Peroxydase HRP contient un composant chimique dilué qui est un poison corrosif, toxique en cas d'ingestion en grande quantité. Pour éviter des brûlures chimiques, il est recommandé d'éviter tout contact avec la peau ou les yeux. 5. Le chromogène TMB est irritant et peut être toxique en cas d'inhalation, d'ingestion et d absorption en grande quantité. Eviter tout contact avec la peau ou les yeux et toute inhalation. 6. La solution d'arrêt HRP est une solution diluée d'acide sulfurique. Eviter de l exposer aux bases, aux métaux, aux oxydants ou tout autre composé susceptible de réagir avec les acides. L acide sulfurique est toxique et corrosif en cas d absorption. Eviter le contact avec la peau et les yeux pour éviter toute brûlure chimique. 7. Lors de la manipulation de ces produits, utiliser les équipements de protection personnelle appropriés. 8. Les éclaboussures de réactifs doivent être nettoyées immédiatement. Respecter les règlements en vigueur concernant l élimination des déchets. Précautions 1. Ce test est pour un usage diagnostic in vitro. 2. Toute substitution par d autres réactifs que ceux fournis dans le coffret entraîne des variations de résultats. 3. Un lavage incomplet ou insuffisant et une aspiration insuffisante du liquide dans les puits d ELISA entraînent des imprécisions et un bruit de fond élevé. 4. L automatisation, complète ou partielle, du traitement des échantillons dans ce test peut produire des différences de résultats par rapport au traitement manuel. Chaque laboratoire est responsable de la validation des procédures automatiques afin que les résultats des tests restent dans les limites acceptables. 2

3 5. Un certain nombre de facteurs influencent la performance du test: la température initiale des réactifs, la température ambiante, l exactitude et la reproductibilité de la technique de pipetage, la qualité du lavage et de vidange des puits d ELISA, le photomètre utilisé pour mesurer les résultats et la durée des temps d incubation pendant le test. Il est donc recommandé de prêter attention à tous ces facteurs pour obtenir des résultats reproductibles et rigoureux. 6. Il est recommandé de suivre strictement le protocole. Chaque modification est au risque de l utilisateur. 7. La fermeture incomplète de la pochette contenant les puits de microtitration et le dessiccant entraîne la dégradation de l antigène et en conséquence une mauvaise précision des résultats. 8. Des valeurs faibles et inacceptables d absorption peuvent être progressivement observées dès le deuxième prélèvement dans le même flacon de conjugué HRP. Il est donc important de suivre exactement les instructions fournies pour éviter ce risque. 9. Un nettoyage ou rinçage inapproprié des appareils et instruments pourrait provoquer une contamination chimique du conjugué HRP. Des résidus de produits chimiques courants de laboratoire comme le formol, l eau de javel, l éthanol ou les détergents, entraînent la dégradation progressive du conjugué HRP. Il est absolument recommandé de rincer abondamment tous les instruments et appareils après l utilisation des détergents chimiques. Conditions de conservation 1. Conserver tous les réactifs du coffret entre 2-8 C. Ne pas congeler. Les réactifs sont stables jusqu à la date limite d utilisation dans des conditions de stockage et d utilisation conformes. 2. Les puits non utilisés devront être remis dans l emballage en aluminium avec le dessiccant, bien refermé et stocké à 2-8 C. 3. La solution de tampon diluée reste stable une semaine à 2-8 C. Echantillons Ce test doit être réalisé avec des sérums comme échantillons. L addition d azide ou d autres conservateurs aux échantillons peut affecter le bon déroulement de la procédure. Les sérums contaminés par des agents microbiens, prétraités par la chaleur ou contenant des particules visibles ne doivent pas être utilisés. Les sérums ou échantillons hémolysés ou lipémiques sont à éviter. Après prélèvement, le sérum doit être séparé du culot. Le document H18-A2 du NCCLS recommande les conditions suivantes de conservation: 1) Conserver les échantillons à température ambiante pas plus de 8 heures. 2) Si le test ne peut pas être fait dans les 8 heures, conserver les échantillons à 2-8 C. 3) Si le test ne s effectue pas dans les 48 heures ou si on doit envoyer les échantillons, les congeler à 20 C ou à plus basse température. Bien agiter les échantillons décongelés Procédure Matériel fourni 1 Plaque microtitration ELISA β 2 GPI (12-1 x 8 puits), avec support 1 1,2 ml Contrôle ELISA Négatif prédilué 1 1,2 ml Point de décision prédilué β 2 GPI (Valeur limite standard) 1 1,2 ml Contrôle de dépistage prédilué β 2 GPI 1 50 ml diluant HRP pour échantillons 1 25 ml tampon de lavage HRP concentré 40X 1 10 ml conjugué-hrp de chèvre, anti-igg,a,m humaines 1 10 ml substrat TMB 1 10 ml solution d arrêt HRP (acide sulfurique 0,344M) Autre matériel nécessaire non fourni Pipettes 5, 100, et 500 µl Cônes jetables Tubes de 4ml pour la dilution de sérum Eau distillée ou déionisée Récipient de 1 litre pour le tampon de lavage HRP dilué Lecteur ELISA avec filtre de 450nm (et 620nm pour les lectures à double longueur d ondes) Méthode Préparation du test 1. Porter tous les réactifs et échantillons à la température ambiante (20-26 o C) et bien les agiter avant de les utiliser. 2. Diluer la totalité de la solution de lavage (25ml) avec 975 ml d eau distillée (1/40). La solution de tampon diluée reste stable une semaine à 2-8 C. Si la totalité de la plaque de microtitration n est pas utilisée en une seule fois, un plus petit volume de tampon sera suffisant, par exemple pour traiter 16 puits, diluer 2ml de tampon concentré dans 78ml d eau distillée. 3. Préparer les sérums des patients en les diluant au 1/101 dans le diluant d échantillon (5µl dans 500µl). Les sérums doivent être utilisés dans les 8 heures qui suivent leur dilution. Ne pas diluer les contrôles Point de décision β 2 GPI, Contrôle de dépistage β 2 GPI et ELISA négatif. 4. La détermination de la présence ou de l absence de la β 2 IgGAM GPI en unités arbitraires nécessitent deux puits pour chacun des trois contrôles et un ou deux puits pour chacun des sérums de patients. Il est recommandé de tester les échantillons en double. 3

4 Exécution du test 1. PORTER TOUS LES REACTIFS ET LES ECHANTILLONS À TEMPERATURE AMBIANTE (20-26 o C) AVANT DE LES UTILISER. Placer le nombre nécessaire de micro puits ou de barrettes sur le portoir. Remettre immédiatement les barrettes non utilisées dans la pochette en aluminium avec le dessiccant, fermer hermétiquement pour éviter toute condensation de vapeur d eau. 2. Distribuer 100 µl de chacun des contrôles Point de décision diluée β 2 GPI Contrôle de dépistage β 2 GPI et négatif prédilué et de sérums des dilués patients dans les puits. Recouvrir les barrettes et laisser incuber pendant 30 minutes à température ambiante. Le temps d incubation commence après l ajout du dernier échantillon. 3. Lavage: aspirer le contenu de tous les puits. Ajouter µl de tampon dilué dans tous les puits et l aspirer ensuite complètement. Répéter cette opération deux fois supplémentaires pour un total de trois lavages. Après le dernier lavage, retourner la plaque en la tapotant sur du papier absorbant, pour enlever tout liquide de lavage résiduel. Pour l'aspiration, maintenir la même séquence que celle utilisée lors de la distribution des échantillons. 4. Distribuer 100 μl de conjugué HRP IgGAM dans chaque puits. Le conjugué doit être prélevé du flacon dans des conditions aseptiques. Prélever en une seule fois la quantité de conjugué nécessaire à la réalisation de la série. POUR EVITER LE RISQUE DE CONTAMINATION, NE JAMAIS REMETTRE LE RESTE DU CONJUGUE NON UTILISE DANS LE FLACON. Recouvrir les barrettes et incuber pendant 30 minutes à température ambiante, comme décrit à l étape Lavage: Répéter la procédure décrite à l étape Distribuer 100 µl de chromogène TMB dans chaque puits et laisser incuber à l obscurité 30 minutes à température ambiante. 7. Ajouter 100 µl de solution d arrêt HRP dans chaque puits. Maintenir la même séquence et le même timing lors de l addition de la solution d arrêt que ceux utilisés lors de la distribution du chromogène TMB. Tapoter délicatement les plaques pour bien mélanger le contenu des puits. 8. Lire la densité optique (DO) de chaque puits à 450nm dans l heure qui suit l arrêt de la réaction. Pour une lecture bi-chromatique, la longueur d onde de référence peut être 620nm. Contrôle de qualité 1. Les contrôles de dépistage β 2 GPI, Point de décision β 2 GPI (Valeur limite standard) et négatif doivent être inclus à chaque série de tests afin de s assurer du bon fonctionnement des réactifs et du bon déroulement de la procédure. 2. Etant donné que les contrôles de dépistage β 2 GPI, Point de décision β 2 GPI et négatif négatifs sont prédilués, il n est pas possible de valider le procédé de dilution des échantillons. 3. Des contrôles de qualité supplémentaires peuvent être réalisés selon les directives nationales, les réglementations internationales ou celles des organismes d accréditation. Des contrôles appropriés peuvent être obtenus en aliquotant un pool de sérums humains conservé à une température inférieure ou égale à -20 C. 4. Pour valider les résultats obtenus, tous les critères décrits ci-dessous devront être vérifiés. Si un ou plusieurs de ces critères ne sont pas réalisés, le test devra être considéré comme non valide et à refaire. a. La densité optique du Contrôle de dépistage β 2 GPI prédilué doit être supérieure à celle du Contrôle Point de décision β 2 GPI prédilué. D autre part, la densité optique du Contrôle Point de décision β 2 GPI doit être supérieure à celle du Contrôle ELISA négatif prédilué. b. La densité optique du Contrôle de dépistage β 2 GPI prédilué doit être supérieure à 1,0. Celle du Contrôle ELISA négatif prédilué doit être inférieure à 0,2. c. L absorption du Contrôle Point de décision β 2 GPI doit être deux fois supérieure à celle du Contrôle négatif d ELISA ou supérieure à 0,25. d. Les Contrôles ELISA négatif et de dépistage β 2 GPI permettent le contrôle d un bon fonctionnement des tests. Le Contrôle de dépistage β 2 GPI n assure pas la précision de la valeur seuil du test. e. L utilisateur du test peut se référer au document C24-A du NCCLS pour des informations supplémentaires concernant le contrôle qualité. Calcul des résultats 1. Déterminer la valeur moyenne des lectures en double. 2. Comparer la moyenne des absorbances à celle du Point de Décision. Tous les échantillons dont la densité optique est égale ou supérieure à celle du Point de Décision sont susceptibles de contenir des anticorps anti-β 2 GP1 de classe IgG, IgM ou IgA ou une quelconque combinaison de ces 3 isotypes. Il est alors recommandé pour ces échantillons de pratiquer un test spécifique quantitatif pour titrer ces anticorps anti-β 2 GP1 en IgG, IgM ou IgA. Interprétation des résultats Les échantillons rendus positifs par le test QUANTA Lite TM β 2 GP1 Screening ELISA sont testés pour déterminer leur spécificité en IgG, IgM ou IgA β 2 GP1 et leur titre en unités SGU, SMU ou SAU. NOTE: Certains résultats sont faussement positifs en β 2 GP1 Screen quand on les compare avec ceux obtenus par le typage en IgG, IgA et IgM β 2 GP1. Pour ne pas passer à côté des sérums faiblement positifs en typage, une plus grande sensibilité a été introduite dans le test β 2 GP1 Screen. Un certain nombre d échantillons ayant des taux d IgG, d IgA ou d IgM β 2 GP1 en dessous de la valeur seuil en typage, mais par leur effet additionnel, obtiennent des résultats positifs en β 2 GPI Screen. 4

5 Limites du test 1. La signification clinique de β 2 GPI dans les maladies autres que le LED est actuellement en recherche. 2. Quand les résultats d anti-β 2 GPI sont négatifs en présence d'indication clinique, il est indispensable de rechercher du lupus anticoagulant, d'anticorps anti-aca, ou d'autres tests. 3. Le diagnostic ne peut pas être fait sur l'unique résultat des β 2 GPI. Les résultats obtenus à l'aide de ce test doivent être corrélés avec les signes cliniques. 4. Le traitement ne peut être initialisé sur la seule base d'un résultat β 2 GPI positif. Des indications cliniques doivent aussi supporter ces résultats. 5. Il est attendu que des sérums peuvent être ACA positifs et β 2 GPI négatifs. Ce dernier est un test plus spécifique en tant que marqueur de risque de thrombose. Les tests ACA peuvent montrer des résultats faussement positifs à cause de réactions croisées avec l'adndb ou certaines maladies infectieuses. 6. Les performances du coffret pour les échantillons autres que les sérums n ont pas été établies. Performances Valeur normale Le coffret QUANTA Lite β 2 GP1 Screening ELISA a été évalué sur un panel de 186 sérums normaux âgés de 15 à 69 ans dont 20% sont des hommes et 80% des femmes. 11 sont positifs (5,9%). 9 de ces 11 échantillons sont confirmés positifs pour au moins un des isotypes IgG, IgM ou IgA à l'issue des tests de typage en β 2 GP1. En tenant compte de ces résultats, le nombre réel de faux positifs rendus s'élève à 2 échantillons soit 1,1%. Sensibilité et spécificité relatives Concordance avec des tests de typage Tous les sérums furent testés en parallèle sur le coffret QUANTA Lite β 2 GP1 Screening ELISA et les coffrets de typage des anti-β 2 GP1 IgG, IgM et IgA. Les résultats sont résumés dans le tableau ci-dessous : Résultats : β 2 GP1 Screen + - Typage Sensibilité relative 99,1% β 2 GP1 Spécificité relative 98,1% IgG, IgM, IgA Efficacité relatif 98,5% Sensibilité et spécificité clinique Le tableau ci-dessous résume les différentes études cliniques réalisées sur le coffret QUANTA Lite β 2 GP1 Screening ELISA: Groupe Nbre de Nbre de positifs (%) de patients Sérums en β 2 GP1 Screen SAP (88,1%) Mal. infect. 6 0 (0%) LED 1 1* (100%) Normaux ** (5,9%) * Cet échantillon est rendu positif à l'issue des tests de typage en β 2 GP1 IgG et IgA. ** 9 de ces 11 sérums sont aussi rendus positifs en typage β 2 GP1 IgG, IgM et/ou IgA. Précision Le contrôle positif, le contrôle négatif et le point de décision ont été testés chacun à 6 reprises en 6 jours consécutifs. La moyenne du contrôle négatif est de 0,098, celle du point de décision est de 0,530 et celle du contrôle positif est de 1,47. Les écarts type (ET) et les coefficients de variation (CV) de chaque échantillon, calculés selon les densité optiques (DO) obtenus, sont résumés dans les tableaux ci-dessous : Négatif Point de décision Contrôle du dépistage ET CV ET CV ET CV Global 0,009 9,5% 0,068 12,7% 0,164 11,2% Intra-essais 0,008 8,2% 0,012 2,3% 0,034 2,3% Inter-essais 0,009 9,3% 0,020 3,8% 0,025 1,7% 5

6 Références 1. Harris, E.N., A.E. Gharavi, M.L. Boey, B.M. Patel, C.G. Mackworth-Young, S. Loizou and G.R.V. Hughes. Anticardiolipin antibodies: detection by radioimmunoassay and association with thrombosis in systemic lupus erythematosus. Lancet, 2: , Koike, T., M. Sueishi, H. Funaki, H. Tomioka and S. Yoshida. Antiphospholipid antibodies and biological false positive serological test for syphilis in patients with systemic lupus erythematosus. Clin Exp Immunol, 56: , Asherson, R.A. and E.N. Harris. Anticardiolipin antibodies: clinical associations. Postgrad Med J, 61: , Lockshin, M.D., M.L. Druzin, S. Goei, T. Qamar, M.S. Magid, L. Jovanovic and M. Ferenc. Antibody to cardiolipin as the predictor of fetal distress or death in pregnant patients with systemic lupus erythematosus. N Engl J Med, 313: , McNeil, H.P., C.N. Chesterman and S.A. Krilis. Immunology and clinical importance of antiphospholipid antibodies. Adv Immunol, 49: , Harris, E.N., A.E. Gharavi and G.R.V. Hughes. Anti-phospholipid antibodies. Clin Rheum Dis, 11: , Hughes, G.R.V., E.N. Harris and A.E. Gharavi. The anticardiolipin syndrome. J Rheumatol, 13: , McNeil, H.P., R.J. Simpson, C.N. Chesterman and S.A. Krilis. Anti-phospholipid antibodies are directed against a complex antigen that includes a lipid-binding inhibitor of coagulation: β 2 - glycoprotein I (apolipoprotein H). Proc Natl Acad Sci USA, 87: , Galli, M., P. Comfurius, C. Maassen, H.C. Hemker, M.H. De Baets, P.J.C. Van Breda-Vriesman, T. Barbui, R.F.A. Zwaal and E.M. Bevers. Anticardiolipin antibodies (ACA) directed not to cardiolipin but to a plasma protein cofactor. Lancet, 335: , Matsuura, E., Y. Igarashi, M. Fujimoto, K. Ichikawa and T. Koike. Anticardiolipin cofactor(s) and differential diagnosis of autoimmune disease. Lancet, 336: , Koike, T. and E. Matsuura. What is the "true" antigen for anticardiolipin antibodies? Lancet, 337: , Matsuura, E., Y. Igarashi, M. Fugimoto, K. Ichikawa, T. Suzuki, T. Sumida, T. Yasuda and T. Koike. Heterogeneity of anticardiolipin antibodies defined by the anticardiolipin cofactor. J Immunol, 148: , Matsuura, E., M. Igarashi, Y. Igarashi, H. Nagae, K. Ichikawa, T. Yasuda and T. Koike. Molecular definition of human β 2 -glycoprotein I (β 2 -GPI) by cdna cloning and inter-species differences of β 2 - GPI in alternation of anticardiolipin binding. Int Immunol, 3: , Igarashi, M., E. Matsuura, Y. Igarashi, H. Nagae, Y. Matsuura, K. Ichikawa, T. Yasuda, D.R. Voelker and T. Koike. Expression of anticardiolipin cofactor, human β 2 -glycoprotein I, by a recombinant baculovirus/insect cell system. Clin Exp Immunol, In press. 15. Schousboe, I. β 2 -glycoprotein I: a plasma inhibitor of the contact activation of the intrinsic blood coagulation pathway. Blood, 66: , Nimph, J., H. Wurm and G.M. Kostner. β 2 -glycoprotein I (apo-h) inhibits the release reaction of human platelets during ADP-induced aggregation. Atherosclerosis, 63: , Nimph, J., E.M. Bevers, P.H. Bomans, U. Till, H. Wurm, G.M. Kostner and R.F. Zwaal. Prothrombinase activity of human platelets is inhibited by β 2 -glycoprotein I. Biochim Biophys Acta, 884: , Viard, J.P., Z. Amoura and J.F. Bach. Association of anti-β 2 -glycoprotein I antibodies with lupus-type circulating anticoagulant and thrombosis in systemic lupus erythematosus. Am J Med, 93: , Keil, L.B., M. Galazka, H. El-Kadi, E. Erickson and V. DeBari. Binding of β 2 -glycoprotein I to activated polystyrene and its recognition by human IgG autoantibodies. Biotechnol Appl Biochem, 22: , Hisham, E., L. Keil and V. DeBari. Analytical and Clinical Relationships between human IgG autoantibodies to β 2 -glycoprotein I and anticardiolipin antibodies. J Rheumatol, 22: , Roubey, R.A. Immunology of the Antiphospholipid Syndrome. Arthritis and Rheumatism, 39: , Tsutsumi, A. et al. Antibodies to β 2 -Glycoprotein I and Clinical Manifestations in Patients with Systemic Lupus Erythematosus. Arthritis and Rheumatism, 39: , Cabiedes, et al. Clinical manifestations of the antiphospholipid syndrome in systemic lupus erythematosus patients associate more strongly with anti β 2 glycoprotein I than with antiphosphlipid antibodies. J Rheumatol, 22: 1899, Cerrato, et al. Antibodies to prothrombin and β 2 glycoprotein I in antiphospholipid syndrome. Lupus, 5: 516, Sebastiani, G.D. et al. Anti β 2 GPI and acl in SLE-association with clinical manifestation of APS. Lupus, 5: 519, Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. Center for Disease Control/National Institute of Health, 2007, Fifth Edition. 6

7 Fabricant: INOVA Diagnostics, Inc Old Grove Road San Diego, CA United States of America : Représentant Autorisé: Medical Technology Promedt Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D St. Ingbert, Germany Tel.: Fax.: Technical Service FRA August 2009 Revision 5 7