II. SYNTHESE BIBLIOGRAPHIQUE 3

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1 I. INTRODUCTION GENERALE 1 II. SYNTHESE BIBLIOGRAPHIQUE 3 1 LA VIRGINIAMYCINE INTRODUCTION LA FAMILLE DES STREPTOGRAMINES LA NOMENCLATURE DE LA VIRGINIAMYCINE PRODUCTION ET APPLICATIONS DE LA VIRGINIAMYCINE MÉTHODES D ANALYSE DE LA VIRGINIAMYCINE MODIFICATIONS CHIMIQUES DE LA VIRGINIAMYCINE MODIFICATIONS CHIMIQUES DU FACTEUR M 1 DE LA VIRGINIAMYCINE Modifications chimiques au niveau de la fonction hydroxyle sur le carbone numéro Modifications chimiques au niveau de la fonction cétone du carbone numéro Modifications chimiques au niveau du carbone Modifications chimiques au niveau de la double liaison conjuguée à la fonction lactone (carbone numéro 26 et 27) CONCLUSION 19 2 SYNTHÈSE CHIMIOSÉLECTIVE DE PROTÉINES ET DE PEPTIDES INTRODUCTION CONCEPT DE SYNTHÈSE CHIMIOSÉLECTIVE PROPREMENT DITE CONCEPT DE SYNTHÈSE CHIMIOSÉLECTIVE NATIVE LA CHIMIE DU CARBONYLE EMPLOYÉE DANS LE DOMAINE DE LA SYNTHÈSE CHIMIOSÉLECTIVE PROPREMENT DITE RÉACTIONS DE CONDENSATION DES ALDÉHYDES ET DES CÉTONES AVEC LES COMPOSÉS COMPORTANT UNE AMINE PRIMAIRE Formation d oximes Formation d hydrazones Formation de thiazolidines ou d oxazolidines MÉTHODES D INCORPORATION D UNE FONCTION ALDÉHYDE DANS UN PEPTIDE Introduction d un aldéhyde à l extrémité N-terminale Introduction d un aldéhyde à l extrémité C-terminale 28

2 2.5 SYNTHÈSE CHIMIOSÉLECTIVE DE PROTÉINES SYNTHÈSE CHIMIOSÉLECTIVE DE PEPTIDES CYCLIQUES SYNTHÈSE CHIMIOSÉLECTIVE DE GLYCOPROTÉINES ET DE GLYCOPEPTIDES SYNTHÈSE CHIMIOSÉLECTIVE DE LIPOPEPTIDES MODIFICATION CHIMIQUE DE SURFACE CELLULAIRE PAR SYNTHÈSE CHIMIOSÉLECTIVE CONCLUSION 38 3 TENSIOACTIFS À BASE D ACIDES AMINÉS ET DE PEPTIDES INTRODUCTION STRUCTURE DES TENSIOACTIFS À BASE D ACIDES AMINÉS OU DE PEPTIDES CLASSIFICATIONS STRUCTURALES GÉNÉRALES QUELQUES STRUCTURES PARTICULIÈRES Structure de dérivés de type N α -acyle à longue chaîne d acides aminés dibasiques Structure de tensioactifs à base d arginine Structure de tensioactifs mimant la lécithine naturelle SYNTHÈSE DE TENSIOACTIFS À BASE D ACIDES AMINÉS OU DE PEPTIDES MATIÈRES PREMIÈRES POUR LA SYNTHÈSE DE TENSIOACTIF À BASE D ACIDES AMINÉS OU DE PEPTIDES STRATÉGIE DE SYNTHÈSE DE DÉRIVÉS TENSIOACTIFS D ACIDES AMINÉS OU DE PEPTIDES DE TYPE N α -ACYLE PROPRIÉTÉS PHYSICO-CHIMIQUES DES TENSIOACTIFS À BASE D ACIDES AMINÉS OU DE PEPTIDES ACTIVITÉS BIOLOGIQUES DES TENSIOACTIFS À BASE D ACIDES AMINÉS OU DE PEPTIDES BIOCOMPATIBILITÉ ACTIVITÉS ANTIMICROBIENNES ACTIVITÉS ANTIVIRALES BIODÉGRADABILITÉ CONCLUSION 56

3 III. OBJECTIFS ET STRATEGIE 59 IV. MATERIEL ET METHODES 63 1 ECHANTILLONS DE VIRGINIAMYCINE FOURNIS PAR PHIBRO ANIMAL HEALTH S.A. (BELGIQUE) 63 2 LISTE ET RÉFÉRENCES DES RÉACTIFS UTILISÉS 63 3 MÉTHODES ANALYSES PAR CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE À HAUTE PERFORMANCE MÉTHODE D ANALYSE GÉNÉRALE (GRADIENT) MÉTHODE D ANALYSE RAPIDE DU FACTEUR M 1 DE LA VIRGINIAMYCINE (ISOCRATIE) MÉTHODE GÉNÉRALE D ANALYSE D ÉCHANTILLONS DISSOUS DANS UN TAMPON AQUEUX (GRADIENT) PURIFICATION DU FACTEUR M 1 DE LA VIRGINIAMYCINE PRÉPURIFICATION PAR FILTRATION SUR GÂTEAU DE SILICE PURIFICATION PAR CHROMATOGRAPHIE FLASH RECONSTITUTION D UN CHROMATOGRAMME DE PURIFICATION PAR CHROMATOGRAPHIE FLASH ETUDE DE LA STABILITÉ DU FACTEUR M 1 DE LA VIRGINIAMYCINE EN FONCTION DU PH DU MILIEU OBTENTION D ESTERS DU FACTEUR M 1 DE VIRGINIAMYCINE (MONO-DÉRIVÉS AVEC DES ACIDES GRAS) SYNTHÈSE DES ESTERS PURIFICATION DES ESTERS Prépurification des esters par chromatographie flash Purification des esters par HPLC préparative OBTENTION D OXIMES DU FACTEUR M 1 DE VIRGINIAMYCINE (MONO-DÉRIVÉS AVEC DES ACIDES AMINÉS) INTRODUCTION D UNE FONCTION AMINOOXY SUR LES ACIDES AMINÉS À COUPLER À M SYNTHÈSE DES OXIMES DE M 1 75

4 3.5.3 PURIFICATION DES OXIMES DE M Etude de la stabilité des isomères des oximes de M Purification des oximes de M 1 par HPLC préparative OBTENTION DE DI-DÉRIVÉS DU FACTEURS M 1 DE LA VIRGINIAMYCINE SYNTHÈSE DES DI-DÉRIVÉS DE M PURIFICATION DES DI-DÉRIVÉS DE M 1 PAR HPLC PRÉPARATIVE OBTENTION DE MOLÉCULES TÉMOINS DE TYPE CXAA (X=8, 12 OU 14 ET AA = LYS OU ASP) SYNTHÈSE DES AMIDES CXAA PURIFICATION DES AMIDES CXAA PAR HPLC PRÉPARATIVE ANALYSES SPECTRALES ANALYSES PAR SPECTROMÉTRIE INFRAROUGE ANALYSES PAR SPECTROMÉTRIE DE MASSE ANALYSES PAR RÉSONANCE MAGNÉTIQUE NUCLÉAIRE ETUDE DES PROPRIÉTÉS PHYSICO-CHIMIQUES ETUDE AU TENSIOMÈTRE À VOLUME DE GOUTTE Principe de la mesure de la tension de surface au tensiomètre à volume de goutte Conditions des analyses réalisées au tensiomètre à volume de goutte ETUDE À LA BALANCE À FILM Etude des isothermes de compression Etude de la pénétration au travers d une monocouche de dipalmytoylphosphatidylcholine Etude de l adsorption à l interface air / tampon acétate CRIBLAGE DES ACTIVITÉS ANTIMICROBIENNES MATÉRIEL LISTE ET RÉFÉRENCE DES PRODUITS Produits pour les milieux de culture Produits de référence LISTE ET RÉFÉRENCE DES MICRO-ORGANISMES UTILISÉS MÉTHODES Préparation des milieux de culture Préparation des disques Tests d activités antibactériennes Tests d activités antifongiques 94

5 V. RESULTATS ET DISCUSSION 95 1 ANALYSE HPLC-UV DES ÉCHANTILLONS DE VIRGINIAMYCINE FOURNIS PAR PHIBRO ANIMAL HEALTH S.A. (BELGIQUE) 95 2 PURIFICATION DU FACTEUR M 1 DE LA VIRGINIAMYCINE PURIFICATION PAR CHROMATOGRAPHE DE TYPE ÉCLAIR OU FLASH CONFIRMATION DE L IDENTITÉ DU FACTEUR M SPECTROMÉTRIE INFRAROUGE SPECTROMÉTRIE DE MASSE SPECTROMÉTRIE RMN CONCLUSION ETUDE DE LA STABILITÉ DU FACTEUR M 1 DE LA VIRGINIAMYCINE EN FONCTION DU PH DU MILIEU ETUDE QUALITATIVE DE LA STABILITÉ ETUDE QUANTITATIVE DE LA DÉGRADATION DE M CONCLUSION SYNTHÈSE DES DÉRIVÉS DU FACTEUR M 1 DE LA VIRGINIAMYCINE SYNTHÈSE D ESTERS DU FACTEUR M 1 DE LA VIRGINIAMYCINE CHOIX DES CONDITIONS DE SYNTHÈSE SYNTHÈSE DES ESTERS DE M 1 AVEC DES ACIDES GRAS DE LONGUEUR DE CHAÎNE CROISSANTE (DE 4 À 14 ATOMES DE CARBONE) DISCUSSION SUR LA SYNTHÈSE DES ESTERS DU FACTEUR M Influence de la nature de la forme activée et du catalyseur sur le rendement en ester Formation d un co-produit lors de la synthèse de l ester avec l anhydride, la pyridine et la 4-DMAP PURIFICATION DES ESTERS DU FACTEUR M 1 DE LA VIRGINIAMYCINE Pré-purification par extraction sur phase solide Purification par HPLC préparative des esters de M 1 127

6 4.1.5 CONFIRMATION DE L IDENTITÉ DES ESTERS Spectrométrie infrarouge Spectrométrie de masse Spectrométrie de résonance magnétique nucléaire CONCLUSION SYNTHÈSE D OXIMES DU FACTEUR M 1 DE LA VIRGINIAMYCINE CHOIX DE LA STRATÉGIE DE SYNTHÈSE GREFFAGE D ACIDES AMINÉS SUR M 1 PAR SYNTHÈSE CHIMIOSÉLECTIVE PAR FORMATION D UNE LIAISON OXIME Couplage de M 1 à l acide amino-oxy acétique par synthèse chimiosélective Greffage sur M 1 de différents acides aminés par synthèse chimiosélective PURIFICATION DES OXIMES DE M Etude de la stabilité des isomères des oximes de M Purification par HPLC préparative CONFIRMATION DE L IDENTITÉ DES OXIMES Spectrométrie infra rouge Spectrométrie de masse Spectrométrie de résonance magnétique nucléaire CONCLUSION SYNTHÈSE DE DI-DÉRIVÉS DU FACTEUR M 1 DE LA VIRGINIAMYCINE SYNTHÈSE EN DEUX ÉTAPES DES DI-DÉRIVÉS DE M Estérification de la fonction hydroxyle secondaire de M Formation d oxime des esters de M PURIFICATION DES DI-DÉRIVÉS DE M 1 PAR HPLC PRÉPARATIVE CONFIRMATION DE L IDENTITÉ DES DI-DÉRIVÉS DE M Spectrométrie infra rouge Spectrométrie de masse Spectrométrie de résonance magnétique nucléaire CONCLUSION SUR LA SYNTHÈSE DE DI-DÉRIVÉS DE M 1 205

7 5 SYNTHÈSE DE MOLÉCULES TÉMOINS SYNTHÈSE DES TÉMOINS DE TYPE CXAA PURIFICATION DES TÉMOINS DE TYPE CXAA CONFIRMATION DE L IDENTITÉ DES TÉMOINS DE TYPE CXAA Spectrométrie infrarouge Spectrométrie de masse CONCLUSION TABLEAU RÉCAPITULATIF DES MOLÉCULES SYNTHÉTISÉES ETUDE DES PROPRIÉTÉS DE SURFACE DU FACTEUR M 1 DE LA VIRGINIAMYCINE ET DES DÉRIVÉS SYNTHÉTISÉS ETUDE PRÉLIMINAIRE : M 1 ET SES MONO-DÉRIVÉS EVALUATION DU CARACTÈRE TENSIOACTIF DU FACTEUR M 1 DE DÉPART EVALUATION DU CARACTÈRE TENSIOACTIF DES MONO-DÉRIVÉS DE M CONCLUSION DE L ÉTUDE PRÉLIMINAIRE ETUDE DES DI-DÉRIVÉS DE M ETUDE DE LA CINÉTIQUE D ADSORPTION DES DI-DÉRIVÉS Introduction Etude qualitative de la cinétique d adsorption des di-dérivés Analyse quantitative de la cinétique d adsorption des di-dérivés Conclusions de l étude de la cinétique d adsorption des di-dérivés ETUDE DE LA FORMATION DE MICELLES DES DI-DÉRIVÉS Introduction Détermination de la CMC, de la γ CMC et du rapport CMC/C Détermination de l aire moléculaire à la CMC (A min ) des di-dérivés et comparaison à celles des témoins Conclusions de l étude de la formation de micelles des di-dérivés ETUDE DES PROPRIÉTÉS DES MONOCOUCHES DES DI-DÉRIVÉS Introduction Etude des isothermes de compression 259

8 Conclusion de l étude des propriétés des monocouches des di-dérivés ETUDE DE LA CAPACITÉ DE M 1, DES DI-DÉRIVÉS ET DES TÉMOINS À PÉNÉTRER UN MODÈLE MEMBRANAIRE : UNE MONOCOUCHE DE DPPC Introduction Analyse des résultats Conclusion de l étude la capacité de M 1, des di-dérivés et des témoins à pénétrer une monocouche de DPPC CRIBLAGE DE L ACTIVITÉ ANTIMICROBIENNE DE M 1 ET DE SES DÉRIVÉS SYNTHÉTISÉS INTRODUCTION RÉSULTATS CONCLUSION 285 VI. CONCLUSION ET PERSPECTIVES 287 VII. PRODUCTIONS SCIENTIFIQUESISSUES DE CE DOCTORAT 295 VIII. REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES 297