PARAMETRES HEMATOLOGIQUES. Vanessa DESPLAT Collège Sciences de la Santé Faculté de Pharmacie Année

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1 PARAMETRES HEMATOLOGIQUES Vanessa DESPLAT Collège Sciences de la Santé Faculté de Pharmacie Année L HEMATOPOIESE 1

2 LES CELLULES SANGUINES Les globules rouges ou érythocytes ou hématies Les globules blancs ou leucocytes: Neutrophiles - Les polynucléaires Eosinophiles Basophiles - Monocytes Les plaquettes ou thrombocytes - Lymphocytes Types de cellules Fonctions Taux/L Durée de sang de vie (jours) Globules Rouges Transport O 2 /CO x Plaquettes Hémostase x Globules blancs: 4-10 x 10 9 Neutrophiles Phagocytose, bactéricidie 2-7,5 x Eosinophiles Phénomènes allergiques < 0,5 x 10 9 Basophiles <0,1x10 9 Monocytes - Activation des lymphocytes < 1 x Précurseurs des macrophages impliqués dans la phagocytose des micro-organismes et des cellules sénescentes. Lymphocytes T/NK Immunité cellulaire 1-4 x 10 9 >1 Lymphocytes B Immunité humorale >1 2

3 BESOINS Production très importante: cellules sanguines/jour. Ex: hématies/sec Production assurée par une petite population de cellules de la moelle osseuse: les cellules souches hématopoïétiques. HEMATOPOÏESE FOETALE: SIEGE DE L HEMATOPOIESE Chez l homme = la MOELLE OSSEUSE -Stade primitif mésodermique: 5 premières semaines de gestation. Différenciation des îlots sanguins primitifs. -Stade hépato-splénique: 3 au 6 mois fœtal. - Stade médullaire: fin de la gestation, dans les cavités osseuses médullaires. Différenciation des îlots sanguins primitifs. HEMATOPOÏESE FOETALE 3

4 CHEZ L ADULTE - localisée dans les os courts et plats: sternum, cotes, vertèbres, os iliaques, sacrum. - localisée exclusivement dans la moelle osseuse en situation extra-vasculaire dans des espaces délimités par les sinus veineux (site d'échange exclusif entre la MO et le sang circulant), LOCALISATION ECTOPIQUE: Au niveau du foie ou de la rate au cours des syndromes myéloprolifératifs ou anémies chroniques. 4

5 LA MOELLE OSSEUSE Mélange de tissu hématopoïétique et de tissu graisseux. FONCTIONS: - production et libération dans la circulation des cellules sanguines. - permet la différenciation des cellules sanguines grâce à sa vascularisation et à son réseau de cellules stromales. Variations physiologiques de la moelle au cours de la vie 2typesdeMO: -la MO rouge active: riche en érythroblastes, GR et vaisseaux sanguins, localisée dans la cavité des os. - la MO jaune inactive: constituée d'adipocytes. L augmentation de l activité médullaire ou sa diminution se traduit par la réduction ou l extension de la surface adipocytaire. X 10 en cas de régénération. 5

6 Décroissance avec l âge de la moelle active dans les principaux os ans Cellularité % Tibia Fémur Côtes Vertèbres Sternum Âge (années) L équilibre du système hématopoïétique dépend de 3 éléments majeurs: les cellules hématopoïétiques les facteurs de régulation le microenvironnement médullaire ou stroma médullaire 6

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8 EXPLORATION DE LA MOELLE OSSEUSE MYELOGRAMME: - Examen cytologique - Ponction sternale (ou iliaque) à l aide d un trocart: Aiguille de type Illinois - Anesthésie du sternum - Prélèvement - < 1ml de moelle Frottis Coloration au MGG Formule. - Analyse la morphologie et la composition des cellules de la moelle osseuse. - Permet d'apprécier quantitativement et qualitativement les précurseurs hématopoïétiques. - Mise en évidence des cellules anormales ou d'un déséquilibre. Myelogramme (Objectifx40) Myelogramme (Objectifx100) 8

9 BIOPSIE OSTEO-MEDULLAIRE (BOM): - Examen histologique - en complément du myélogramme - se fait en iliaque: prélèvement de tissu osseux - permet de détecter: une aplasie médullaire ou une hyperplasie une éventuelle fibrose de la moelle osseuse. Trocart de Jamshidi Examen d une BOM Cellularité Lignées hématopoïétiques Autres cellules Tissu de soutien BM - Cellularité Naissance : 100 % Enfant : 70 % Adulte : 50 % > 65 ans : 30 % Enfant Adulte 9

10 HEMOGRAMME NFS Examen de laboratoire le plus demandé. Réalisé à partir d une ponction veineuse : le sang est recueilli dans un tube contenant de l EDTA (anticoagulant). Il comprend 2 types d examen : un examen QUANTITATIF ou numération sanguine. un examen QUALITATIF: étude morphologique des différentes cellules sanguines comportant la formule leucocytaire et la recherche des anomalies morphologiques. 10

11 Comme pour tous les examens de biologie médicale, 3 phases sont nécessaires à sa réalisation: 1. Une phase préanalytique: prélevement, recueil des éléments cliniques utiles, préparation, transport, conservation de l échantillon jusqu au laboratoire d analyse. 2. Une phase analytique 3. Une phase post-analytique: validation et compte rendu de l hémogramme. 1. NUMERATION Principe: La numération détermine le taux des différentes cellules sanguines pour un volume de sang donné. SI exprime le volume en litre de sang, en pratique par mm 3 de sang. Valeurs normales : HOMME FEMME Globules Rouges 4,5 à 6 x /L 4 à 5,5 x /L Globules Blancs 4 à 10 x 10 9 /L 4 à 10 x 10 9 /L Plaquettes 150 à 400 x 10 9 /L 150 à 400 x 10 9 /L Valeurs pathologiques : Leucocytes Plaquettes > 10x10 9 /L: Hyperleucocytose < 4 x 10 9 /L: Leucopénie > 400 x 10 9 /L: Thrombocytose < 150 x 10 9 /L: Thrombopénie 11

12 Formule leucocytaire 2. LES CONSTANTES ERYTHROCYTAIRES Le taux d HEMOGLOBINE: Il détermine la quantité d Hémoglobine érythrocytaire contenue dans un volume de sang. Valeurs Normales: - chez l homme : g/dl - chez la femme : g/dl - chez l enfant : g/dl Valeurs Anormales: Si le taux d Hb < à la normale : ANEMIE 12

13 L HEMATOCRITE: Elle représente le volume occupé par les globules rouges dans un certain volume de sang. Valeurs normales:chez l homme : 42 à 54% chez la femme : 37 à 47% chez l enfant : 38-44% chez le nouveau-né : 44-64% chez la femme enceinte : 36% VOLUME GLOBULAIRE MOYEN = Ht/ nombre de GR = fl VGM normal : Normocytose VGM < 80 fl : Microcytose VGM > 100 fl : Macrocytose CONCENTRATION CORPUSCULAIRE MOYENNE EN HEMOGLOBINE = Hémoglobine/Hématocrite = g/dl (ou %) CCMH normale : Normochromie CCMH < 30 g/ dl : Hypochromie TENEUR CORPUSCULAIRE MOYENNE EN HEMOGLOBINE = Hémoglobine / nombre de GR = pg TCMH : Normochromie TCMH < 27 pg : Hypochromie 13

14 Les Réticulocytes Ils sont le reflet de la production érythroblastique de la moelle. Normal: 1% à 2 % des Globules Rouges soit entre 20-80x10 9 /L. Si taux > 150x10 9 /L: hyper-réticulocytose: anémie régénérative. Si taux < 150x10 9 /L: anémie arégénérative EXAMEN QUALITATIF : LE FROTTIS SANGUIN La lecture du frottis comporte : une analyse de la morphologie des différentes populations cellulaires. une recherche de cellules pathologiques orientée par le contexte clinicobiologique. une formule sanguine : % des différents types de cellules sur 100 éléments. 14

15 Coloration du frottis au MGG Principe: action complémentaire de 2 colorants : - le May-Grünwald: contenant un colorant acide, l éosine et un colorant basique le bleu de méthylène (sous forme d éosinate de bleu de méthylène) ainsi que du méthanol qui permet de fixer le frottis. - le Giemsa: contenant de l éosine et de l azur de méthylène (sous forme d éosinate d azur de méthylène). Technique : Appliquer le May Grunwald pur sur toute la surface de la lame pendant 3 minutes. Compter les gouttes de réactif. Ajouter autant de gouttes d eau pour réaliser une dilution au demi. Laisser en contact 2 minutes. Rejeter le May Grunwald sans rincer (par retournement) et verser le Giemsa dilué à 7 % pendant 15 minutes. Rincer doucement à l eau en inclinant légèrement le frottis. Séchage à l air libre. 15

16 Formule leucocytaire : valeurs normales Type Pourcentage Nombre absolu x10 9 /l Nombre total de globules blancs 4 à 10 Polynucléaires 50 à 75 % 2 à 7,5 neutrophiles Polynucléaires (1 à 2 %) < 5 % < 0,5 (0,05-0,2) éosinophiles Polynucléaires (0 à 1%) < 1 % < 0,1 (0,02-0,06) basophiles Lymphocytes 20 à 40 % 1 à 4 Monocytes < 10 % < 1 Valeurs Pathologiques: Neutrophiles > 8 x 10 9 /L : Polynucléose neutrophiles <1,8x10 9 /L : Neutropénie <0,5x10 9 /L : Agranulocytose Eosinophiles > 0,7 x 10 9 /L : Hyperéosinophilie Basophiles > 0,1 x 10 9 /L : Basophilie Monocytes > 1 x 10 9 /L : Monocytose Lymphocytes : - Variations physiologiques en fonction de l âge : Chezl enfantde1an:11x10 9 /L de4ans:8x10 9 /L de 10 ans : 6 x 10 9 /L Chez l adulte : > 4 x 10 9 /L : hyperlymphocytose <1x10 9 /L : lymphopénie 16

17 Mise en évidence de cellules anormalement présentes ou morphologiquement anormales. - Blastes: Ex: leucémie aiguës - Myélémie: présence de précurseurs médullaires Ex: présence de précurseurs granuleux Leucémie Myéloïde Chronique (LMC). - Présence d erythroblastes: Ex: hémolyse aiguës - Cellules mononucléees hyperbasophiles: Syndrome mononucléosique. - Plasmocytes: virose (rubéole), myélome Trophozoite en bague P. falciparum 17

18 Les Globules rouges CYTOLOGIE Les Plaquettes Les Globules blancs Les Polynucléaires Le Monocyte Les lymphocytes 18