Mise en place d une méthodologie de transposition TLC à HPTLC au Laboratoire d analyse

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1 Mise en place d une méthodologie de transposition TLC à HPTLC au Laboratoire d analyse ORIL Industrie Développement Analytique Myriam MEHSEN-NDOMBI 11/06/2009 ORIL Industrie - Présentation CCCM 1

2 Sommaire Pourquoi mettre en place une méthodologie au sein du Laboratoire? Comparaison TLC/HPTLC Les paramètres à prendre en compte pour la transposition Exemple d application : vérification de nettoyage Conclusion 11/06/2009 ORIL Industrie - Présentation CCCM 2

3 Pourquoi mettre en place une méthodologie au sein du Laboratoire? Promouvoir un retour à l utilisation de la technique de chromatographie sur couches minces, Utiliser l ensemble des équipements associés, disponibles au Développement Analytique, Avoir à disposition une technique : Rapide, Sensible, Complémentaire à l HPLC!! 11/06/2009 ORIL Industrie - Présentation CCCM 3

4 Comparaison TLC/HPTLC Dimensions plaque (mm) Distance migration (mm) Répartition granulométrique Quantité déposée (µg) TLC 20x20 ou 10x Large (12µm) 100 HPTLC 10x10 ou 20x10 50 Etroite (5µm) 20 11/06/2009 ORIL Industrie - Présentation CCCM 4

5 Paramètres Choix de la plaque Préparation de la plaque Le dépôt La migration La lecture 11/06/2009 ORIL Industrie - Présentation CCCM 5

6 Choix de la plaque Polarité Normale Intermédiaire Inverse Diol RP2 Phase Si NH2 CN RP8 RP18W RP18 11/06/2009 ORIL Industrie - Présentation CCCM 6

7 Paramètres Choix de la plaque Préparation de la plaque Le dépôt La migration La lecture 11/06/2009 ORIL Industrie - Présentation CCCM 7

8 Préparation préalable de la plaque Migration «à blanc» avec du Méthanol ou Isopropanol, Séchage : 20min à 120 C Refroidissement dans un dessiccateur avant emploi. 11/06/2009 ORIL Industrie - Présentation CCCM 8

9 Paramètres Choix de la plaque Préparation de la plaque Le dépôt La migration La lecture 11/06/2009 ORIL Industrie - Présentation CCCM 9

10 Le dépôt Position du dépôt 2 ou 3 mm au-dessus du niveau du solvant 1 à 2 cm des bords de la plaque 11/06/2009 ORIL Industrie - Présentation CCCM 10

11 Le dépôt Type de dépôt Bandes de 6 ± 2 mm Spray avec V dépôt < V évaporation solvant Séchage des dépôts gaz 11/06/2009 ORIL Industrie - Présentation CCCM 11

12 Paramètres Choix de la plaque Préparation de la plaque Le dépôt La migration La lecture 11/06/2009 ORIL Industrie - Présentation CCCM 12

13 Migration Type de cuve Double bacs (20 x 10cm) Rappels : saturation de la cuve (10 à 20min) avec papier filtre Bac 1 : la plaque / Bac 2 : papier filtre Sans saturation de la cuve Avec saturation de la cuve et pré conditionnement de la plaque Avec saturation de la cuve 11/06/2009 ORIL Industrie - Présentation CCCM 13

14 Migration Distance de migration Plaque de 10cm : d = 5cm 120 mm 50 mm 11/06/2009 ORIL Industrie - Présentation CCCM 14

15 Paramètres Choix de la plaque Préparation de la plaque Le dépôt La migration La lecture 11/06/2009 ORIL Industrie - Présentation CCCM 15

16 Lecture de la plaque Visuelle Choix de la longueur d onde limité Subjectif Densitomètre : Choix de la longueur d onde la plus adaptée, Objectivité de la lecture 11/06/2009 ORIL Industrie - Présentation CCCM 16

17 Le matériel disponible au DA Déposeur Camag ATS4 Numérisateur Densitomètre Système AMD 11/06/2009 ORIL Industrie - Présentation CCCM 17

18 Exemple d application : vérification de nettoyage Vérification de «salle propre» : salle de conditionnement des principes actifs pharmaceutiques. Test aux limites => sélectivité, sensibilité Réponse rapide nécessaire 11/06/2009 ORIL Industrie - Présentation CCCM 18

19 Méthode TLC Méthode transposée (HPTLC) 11/06/2009 ORIL Industrie - Présentation CCCM 19

20 Conclusion Transposition relativement simple Gains notables pour les laboratoires analytiques Séparation 4 x plus rapide Améliorations de la sensibilité et résolution Choix élargis du mode de lecture Bon rapport coût / performance Complémentaire à l HPLC!! 11/06/2009 ORIL Industrie - Présentation CCCM 20

21 Merci pour votre attention 11/06/2009 ORIL Industrie - Présentation CCCM 21

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