DETERMINATION DE LA TENEUR EN CELLULOSE BRUTE DANS LES ALIMENTS POUR ANIMAUX. Version 07 Date d application

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1 Agence fédérale pour la Sécurité de la Chaîne alimentaire Laboratoires de Liège MET-LFSAL-002 I-MET DETERMINATION DE LA TENEUR EN CELLULOSE BRUTE DANS LES ALIMENTS POUR ANIMAUX Version 07 Date d application Rédaction par : M. Evrard, responsable technique Révision par : Autorisation de publication par : QAM P. Genot, Manager du LFSAL Gestion et localisation de la version valide : Serveur du laboratoire de Liège Destinataires : Collaborateurs de la section Chimie Humide Mots clefs : Cellulose, aliment, animaux LAB23 I-MET002 Cellulose brute-v /8

2 Aperçu des modifications * Révision par/date* EVRARD M / 05/08/2004 Aubry - 03/02/2009 Aubry 2012/02/06 Evrard M Motif de la révision Précisions Adaptation template et référence LIMS Adaptation suite à l audit interne Adaptation du texte pour adéquation avec la routine. Partie du texte/portée de la révision Tout tout Expression du résultat En rouge dans le texte * L écart entre la date actuelle et celle de la dernière révision ne peut pas dépasser 5 ans. Les modifications par rapport à la version précédente sont reprises en rouge. Si à cause de l ampleur des modifications, le texte n est plus lisible en utilisant les marquages, les adaptations ne sont pas marquées dans la nouvelle version. Cela est mentionné dans l historique du document. LAB23 I-MET002 Cellulose brute-v /8

3 TABLE DES MATIERES 1 OBJECTIF CHAMP D APPLICATION DOCUMENTS LEGAUX ET NORMATIFS DEFINITIONS ET ABREVIATIONS PRINCIPE INDICE DE PRESTATION REPETABILITE REPRODUCTIBILITE CONSIGNES DE SECURITE ET MESURES SPECIFIQUES REACTIFS APPAREILS METHODE PRÉPARATION DES ÉCHANTILLONS PRISE D ESSAI ELIMINATION DU CARBONATE DEGRAISSAGE DIGESTION ACIDE : PREMIERE FILTRATION DEGRAISSAGE DIGESTION ALCALINE DEUXIEME FILTRATION SECHAGE INCINERATION DETERMINATION DU BLANC CONTROLE DE LA QUALITE CALCUL ET RAPPORTAGE REFERENCE AUX PROCEDURES, INSTRUCTIONS, DOCUMENTS, FORMULAIRES OU LISTES Y AFFERENTS PROCEDURES LISTES FORMULAIRES... 8 LAB23 I-MET002 Cellulose brute-v /8

4 1 Objectif Dosage de cellulose brute dans les aliments des animaux 2 Champ d application La méthode permet de doser, dans les aliments des animaux, les matières organiques exemptes de graisses et insolubles en milieu acide et en milieu alcalin, conventionnellement désignés sous le nom de cellulose brute au-dessus de 10 g/kg. 3 Documents légaux et normatifs Norme/Fil conducteur NBN EN ISO 6865 : 2000 Règlement 939/2010/CE Clauses Dérivé de la norme : - Le principe de base suit la norme cependant la méthode a été adaptée à l automatisation par le Fibertec, - La perte en masse du blanc admis est de 4 mg (2 mg dans la norme), cependant le résultat est corrigé sur le blanc Partie A (Tolérances) 4 Définitions et abréviations Terme Origine de la définition Définition Pas applicable Abréviation Origine Signification Pas applicable 5 Principe L échantillon est éventuellement décarbonaté, dégraissé et traité successivement par des solutions bouillantes d acide sulfurique et d hydroxyde de potassium de concentrations déterminées. Le résidu est séparé par filtration sur un filtre en verre, lavé, séché, pesé puis calciné à 500 C. La perte de poids résultant de la calcination correspond à la cellulose brute présente dans l échantillon d essai. 6 Indice de prestation 6.1 Répétabilité La différence en valeur absolue entre deux résultats de test simples indépendants, obtenus en employant la même méthode sur un matériau test identique dans le même laboratoire par LAB23 I-MET002 Cellulose brute-v /8

5 le même opérateur se servant du même équipement dans un court intervalle de temps, ne dépassera pas dans plus de 5% des cas la limite de répétabilité (r) mentionnée dans la Table Reproductibilité La différence en valeur absolue entre deux simples résultats de test, obtenus en utilisant la même méthode sur un matériau de test identique dans plusieurs laboratoires par des opérateurs différents qui utilisent un équipement différent, ne dépassera pas dans plus de 5% des cas la reproductibilité limite (R) mentionnée dans la Table 1. Sample Sunflower seed meal Palm kernel expellers Cattle feed (pelleted) Corn gluten feed Tapioca Dog food Cat food Crude fibre content g/kg 223,3 190,3 115,8 73,3 60,2 30,0 22,8 r g/kg 8,4 19,4 5,3 5,8 5,6 3,2 2,7 R g/kg 16,1 42,5 13,8 9,1 8,8 8,9 6,4 Table 1 Reapeatability limit (r) and reproducibility limit (R) 7 Consignes de sécurité et mesures spécifiques - Suivre les instructions de sécurité spécifiées sur les fiches de sécurité des réactifs et dans le log book de l'appareil. - Toutes les manipulations de solvants se font sous hotte. 8 Réactifs - Eau déminéralisée - HCl 0,5 M (pour un litre : 50 ml de HCl ml d eau) - Acide sulfurique 0,13 mol/l - Solution d hydroxyde de potassium 0,23 mol/l - Acétone - Adjuvant de filtration (Célite 545 ou équivalent) - Antimousse (n-octanol) - Ether de pétrole (point d ébullition C) 9 Appareils - Balance analytique à 0,1 mg de précision - Creusets filtrants en verre robuste de 50 ml, avec un filtre en verre fritté de porosité µm. Avant la première utilisation, chauffer prudemment et graduellement le nouveau creuset filtrant pendant quelques minutes à 500 C. Refroidir. - Capsules d incinération (en quartz). - Etuve électrique chauffée et ventilée, capable de maintenir une température de 130 C. LAB23 I-MET002 Cellulose brute-v /8

6 - Dessiccateur contenant du silicagel. - Four à moufle ventilé à 500 C. - Système d extraction à froid FOSS Fibertec System Système d'extraction à chaud pour la digestion acide et alcaline (FOSS Fibertec 2010) 10 Méthode 10.1 Préparation des échantillons L échantillon est préparé suivant les directives de la procédure «LAB23 P011 Préparation des échantillons» 10.2 Prise d essai Peser environ 1g de l échantillon préparé avec une précision de 0,1 mg (m 1 ). Transférer cette quantité au creuset filtrant et y ajouter exactement 2 g de celite pesée à 0,1 mg près 10.3 Elimination du carbonate A effectuer uniquement dans le cas où il y aurait plus de 50 g/kg de carbonate exprimé en carbonate de calcium. Connecter le creuset filtrant au système de chauffage. Laver l échantillon 3 fois avec 30 ml d acide chlorhydrique 0,5 M chaque fois. Après chaque addition, laisser agir une minute avant de filtrer. Laver une fois avec 30 ml d eau déminéralisée Dégraissage Connecter le creuset filtrant au système d extraction à froid et laver l échantillon 3 fois sous vide avec 40 ml d éther de pétrole chaque fois. Sécher le résidu par succion après chaque lavage Digestion acide : Dans le système d extraction à chaud, connecter le cylindre d ébullition au creuset filtrant. Ajouter si nécessaire quelques gouttes d anti-mousse et transférer dans le cylindre 150 ml d acide sulfurique bouillant. Amener à ébullition en laisser bouillir vivement pendant 30 minutes. Surveiller l ébullition, au besoin ajouter de l antimousse Première filtration Couper le chauffage. Positionner la vanne vers le tuyau de vidange et, sous vide, filtrer l acide sulfurique à travers le creuset filtrant et laver le résidu 3 fois avec 30 ml d eau chaude déminéralisée, donner un coup de pissette d eau déminéralisée pour bien rincer les parois du cylindre. Filtrer le résidu par succion après chaque lavage. S il y a problème de filtration, refouler de l air prudemment en sens inverse pour débloquer le filtre. Remarques Si la filtration avec les solutions acide et basique est difficile, utiliser l air comprimé par le tuyau de vidange de l unité de chauffage et continuer la filtration Dégraissage Connecter le creuset filtrant au système d extraction à froid et laver le résidu sous vide avec 3 fois 40 ml d éther de pétrole chaque fois d acétone chaque fois (R076). Tout de suite après, LAB23 I-MET002 Cellulose brute-v /8

7 laver le résidu 3 fois sous vide avec 30 ml d éther de pétrole (R012) chaque fois. Sécher le résidu par succion après chaque lavage Digestion alcaline Connecter le cylindre d ébullition au creuset filtrant et rincer avec 30 ml d eau chaude. Fermer la vanne de vidange. Ajouter quelques gouttes d anti-mousse. Transférer 150 ml de solution d hydroxyde de potassium bouillant dans le cylindre connecté au creuset filtrant. Porter rapidement à ébullition et bouillir vigoureusement pendant 30 minutes Deuxième filtration Couper le chauffage. Ouvrir la vanne du tuyau de décharge et filtrer la solution d hydroxyde de potassium sous vide à travers le creuset filtrant. Laver le résidu avec 3 fois 30 ml d eau chaude déminéralisée, donner un coup de pissette d eau déminéralisée pour bien rincer les parois du cylindre. Sécher le résidu par succion, après chaque lavage. Laisser refroidir 5 minutes. S il y a problème de filtration, refouler de l air prudemment en sens inverse pour débloquer le filtre. Connecter le creuset filtrant au système d extraction à froid et laver l échantillon 3 fois sous vide avec 40 ml d acétone chaque fois. Sécher le résidu par succion après chaque lavage Séchage Pendant l incinération ou le refroidissement, des parties de la plaque de filtre sertie du creuset, peuvent se décoller. Comme cela peut causer un résultat d analyse incorrect, placer le creuset filtrant dans une capsule d incinération. Sécher la capsule avec son contenu pendant au moins 2 heures dans l étuve à 130 C. Laisser le creuset filtrant et la capsule d incinération refroidir en dessiccateur. Immédiatement après l avoir retiré du dessiccateur, peser le creuset filtrant et la capsule d incinération à 0,1 mg près (m 2 ) Incinération Placer le creuset filtrant et la capsule d incinération dans le four à moufle froid, monter à 500 C et incinérer son contenu pendant deux heures à cette température. Retirer le creuset filtrant et la capsule d incinération et laisser refroidir. Quand ils ne sont plus que légèrement chauds, les placer dans le dessiccateur. Refroidir complètement et peser à 0,1 mg près (m 3 ) Détermination du blanc Effectuer un essai à blanc sans l échantillon sur 2 g de Célite 545. La perte de poids résultant de la minéralisation ne doit pas excéder 4 mg (m 0 ) 11 Contrôle de la qualité L analyse est suivie par une carte de contrôle de type Shewhart. Tout écart de la carte doit être signalé au responsable technique ou à son remplaçant qui décidera des actions correctives à prendre. Le labo participe régulièrement à des circuits 3 ième ligen. 12 Calcul et rapportage Calculer la teneur en cellulose brute de l échantillon par l équation : LAB23 I-MET002 Cellulose brute-v /8

8 avec - m 0 : différence de masse de l essai à blanc celite - m 1 : prise d essai de l échantillon (g) - m 2 : pesée du creuset filtrant et de la capsule d incinération après le dernier séchage ( 10.10) (g) - m 3 : pesée du creuset filtrant et de la capsule d incinération après incinération ( 10.11) (g) L incertitude de mesure sur l analyse est reprise dans la liste L : Liste des incertitudes de mesure section Chimie humide Aliment 13 Référence aux procédures, instructions, documents, formulaires ou listes y afférents 13.1 Procédures LAB23 P018 : Création et suivi des cartes de contrôle qualité 13.2 Listes LAB23 L010-01: Liste des incertitudes de mesure section Chimie humide - Aliments 13.3 Formulaires F543-CH01 Feuille de travail chimie humide LAB23 I-MET002 Cellulose brute-v /8