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1 Conflits d intérêts des modérateurs Dr S. Hillaire :.Aucun conflit d intérêt JC. Trinchet :.Activités de conseil et participation à des séminaires de formation pour les laboratoires Bayer, BMS et Janssen..Investigateur dans les essais cliniques des laboratoires Biomérieux, Gilead, Bayer, BMS, Lilly et Boehringer.

2 Caractérisation des adénomes hépatocellulaires par séquençage haut débit: identification de mutations récurrentes de FRK C. Pilati ; E. Letouzé ; JC. Nault ; S. Imbeaud ; A. Boulai ; J. Calderaro ; K. Poussin ; A. Franconi ; B. Terris ; V. Paradis ; JY. Scoazec ; Y. Bacq ; C. Guettier- Boutier ; P. Bioulac-Sage ; J. Zucman-Rossi Inserm UMR674

3 Pas de conflits d'intérêts

4 Adénomes Hépatocellulaires (HCA) Prolifération hépatocellulaire bénigne Femme jeune ans (sex ratio F/H: 9/1) Facteurs de risque: - Contraception orale (80 %)* *Edmondson et al. NEJM 1976 Complications: - Hémorragie (taille > 5 cm) - Rare transformation maligne en carcinome hépatocellulaire (CHC)

5 Classification Moléculaire HNF1a inactivés H-HCA 30-35% β-cat mutés bhca 10-12% β-cat mutés + Inflammatoires bihca 10-12% Inflammatoires IHCA Inflammation 35-45% % Non-classifiés UHCA 10-15% Caractéristiques cliniques et pathologiques Adénomatose Familiale Diabète MODY3 Stéatose marquée Hommes Anomalies cytologiques Risque de transformation en CHC Infiltrats inflammatoires Vaisseaux dystrophiques Télangiectasies Marqueurs IHC & qrt-pcr Perte d expression de LFABP expression H-HCA Surexpression de SAA/CRP IHCA NT Surexpression de la glutamine synthase bhca NT NT Bluteau et al, Nature Genet, 2002; Zucman-Rossi et al. Hepatology 2006; Rebouissou et al. Nature, 2009; Pilati et al, JEM, 2011

6 Analyse génomique intégrée des adénomes hépatocellulaires Objectifs : Identification de nouveaux oncogènes Méthodes: Série de 250 adénomes hépatocellulaires Séquençage exome, CGH-SNP, analyse méthylome (Infenium 610K), Transcriptome

7 Séquençage exome des HCA : Mutations somatiques délétères dans 35 HCA 7.5 mutations somatiques délétères par tumeur (1-15) Moyenne dans les CHC: 41.4 mutations/échantillon (5-121)

8 Séquençage exome des HCA : Gènes mutés de façon récurrente dans les adénomes hépatocellulaires => Validés dans 250 HCA

9 Séquençage exome des HCA : Gènes mutés de façon récurrente dans les adénomes hépatocellulaires => Validés dans 250 HCA 3 adénomes inflammatoires (IHCA) sans mutations connues

10 Série de validation (n=250) Spectre de mutations de FRK (Src-like kinase) SH3 domain SH2 domain Linker region Catalytic domain Regulatory domain FRK N SH3 SH2 N-lobe C-lobe E346 Y387 Y497 C Substitution (n=4) In Frame Del/Ins (n=8) 10% des IHCA sont mutés FRK 1 ère identification de mutations récurrentes somatiques de FRK dans des tumeurs humaines

11 Analyses fonctionnelles de FRK Les mutations FRK activent STAT3 en absence d IL-6 FRK FRK

12 Analyses fonctionnelles de FRK FRK est un nouvel oncogène Prolifération des cellules BaF3 après déplétion IL-3 BaF3: Lignée pro-b murine dépendante de l IL-3

13 Analyses fonctionnelles de FRK FRK est un nouvel oncogène Injection sous-cutanée de cellules BaF3 dans des souris nude BaF3: Lignée pro-b murine dépendante de l IL-3

14 Analyses fonctionnelles de FRK Inhibition de FRK par le Dasatinib (10 mg/kg/day, 14 days) => Les xénogreffes de cellules BaF3 exprimant le mutant FRK VK dans des souris nude répondent au Dasatinib

15 Série de validation (n=250) Spectre de mutations de CTNNB1/β-Caténine K335 (n=17) N387 (n=6) CTNNB1 ex 3 ex 7 ex 8 ARM TD 781aa Hot-spot classique Nouveaux hot-spots

16 Série de validation (n=250) Spectre de mutations de CTNNB1/β-Caténine K335 (n=17) N387 (n=6) CTNNB1 ex 3 ex 7 ex 8 Hot-spot classique % des HCA mutés β-caténine 67% 22% 8% χ 2 % des CHC mutés p< β-caténine 94% 3% 3% ARM Nouveaux hot-spots TD 781aa

17 Analyses fonctionnelles de CTNNB1 : Les mutations CTNNB1 exon 7 et 8 activent faiblement la voie WNT/ß-caténine dans les adénomes Glutamine Synthase (GLUL) staining CTNNB1 Exon 3 (T41A) CTNNB1 Exon 7 (K335I) Wild Type CTNNB1

18 Séquençage exome des HCA : Identification de mutations JAK1 dans 2% des IHCA S703I A723D 2108G>T Ser703Ile 2168C>A Ala723Asp N N T T

19 Analyses fonctionnelles de JAK1 : Les mutations JAK1 activent STAT3 en absence d IL-6

20 Conclusions L analyse génomique intégrée des adénomes hépatocellulaires a permis de : Définir des gènes «driver» de la tumorigenèse bénigne : HNF1A, CTNNB1, IL6ST, STAT3, FRK, GNAS, JAK1 Identifier FRK comme un nouvel oncogène activant STAT3

21 Inserm U674, Paris Jessica Zucman-Rossi Camilla Pilati Jean-Charles Nault Sandrine Imbeaud Julien Calderaro Gabrielle Couchy Karine Poussin Anaïs Boulai Giuliana Amaddeo Qian Cao Clement Meiller Sandra Rebouissou Nabahet Ameur Maxime Mallet Andrea Fanconi Bordeaux Hospital Paulette Bioulac-Sage Charles Balabaud Jean Saric Jean-Frédéric Blanc Créteil Hospital Daniel Azoulay Alexis Laurent Inserm UMR-1053 Eric Chevet Integragen Mélanie Letexier Ligue Nationale Contre le Cancer Eric Letouzé Inca: Fabien Calvo CRB: Bruno Clement Françoise Degos Synergie: Gilles Thomas All clinicians and pathologists

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