Déterminants moléculaires et spécificité du Priming immunitaire chez le mollusque d eau douce Biomphalaria glabrata.

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1 Délivré par UNIVERSITE DE PERPIGNAN VIA DOMITIA Préparée au sein de l école doctorale ED305 Energie et Environnement Et de l unité de recherche UMR5244 Ecologie et Evolution des Interactions Spécialité : Biologie Présentée par Julien Portela Déterminants moléculaires et spécificité du Priming immunitaire chez le mollusque d eau douce Biomphalaria glabrata. Soutenue le 02/12/2013 devant le jury composé de M. Mathieu SICARD, PR, UM2 Rapporteur M. Jean-Marc REICHHART, PR, Université de Strasbourg Rapporteur Mme Delphine DESTOUMIEUX-GARZON, CR, UM2 Examinateur M. Yannick MORET, CR, Université de Bourgogne Examinateur M. Guillaume MITTA, PR, UPVD Examinateur M. Benjamin GOURBAL, MC, UPVD Co-Directeur M. André THERON, DR, UPVD Co-Directeur

2 TABLE DES MATIERES TABLE DES MATIERES... 1 PROLOGUE... 4 LA PREMIERE DESCRIPTION D UN PHENOMENE IMMUNITAIRE :... 5 LA VACCINATION :... 5 LES MECANISMES ET LA MISE EN PLACE DES PREMIERES THEORIES :... 6 IMMUNITE CELLULAIRE ET IMMUNITE HUMORALE :... 7 LES THEORIES DE L IMMUNITE MODERNE :... 8 INTRODUCTION RANG TAXONOMIQUE, COMPLEXITE, DUREE DE VIE UNE NOUVELLE VISION L IMMUNITE CHEZ LES INVERTEBRES QU EN EST-IL DE LA MEMOIRE IMMUNITAIRE? LE PRIMING IMMUNITAIRE CHEZ LES INVERTEBRES : LES MECANISMES DU PRIMING IMMUNITAIRE LE MODELE : BIOMPHALARIA GLABRATA (SAY, 1818)/SCHISTOSOMA MANSONI (SAMBO, 1907) L IMMUNITE CHEZ BIOMPHALARIA GLABRATA LE PRIMING IMMUNITAIRE CHEZ BIOMPHALARIA GLABRATA L INTERACTION BIOMPHALARIA / SCHISTOSOMA METHODOLOGIE GENERALE MAINTIEN DES CYCLES EXPERIENCES DE PRIMING VALEURS MESUREES CHAPITRE PREMIER : LE PRIMING IMMUNITAIRE CHEZ BIOMPHALARIA GLABRATA EVIDENCE FOR SPECIFIC GENOTYPE-DEPENDENT IMMUNE PRIMING IN THE LOPHOTROCHOZOAN BIOMPHALARIA GLABRATA SNAIL CHAPITRE DEUX : LA VACCINATION CHEZ BIOMPHALARIA GLABRATA VACCINATION OF BIOMPHALARIA GLABRATA WITH PROTEIC EXCTRACTS FROM DIFFERENTS LARVAL STAGES OF ITS TREMATODE PARASITE SCHISTOSOMA MANSONI INTRODUCTION MATERIEL ET METHODE

3 Souches de parasites et de mollusques Transformation in-vitro des miracidia en SpI Récupération des Sporocystes secondaires et des échantillons contrôles Extraction protéique native des miracidia, Sp1 et SpII Effet dose Vaccination Analyses statistiques RESULTATS Effet dose Vaccination DISCUSSION CHAPITRE TROIS : MECANISMES MOLECULAIRES DU PRIMING IMMUNITAIRE CHEZ BIOMPHALARIA GLABRATA A GLOBAL COMPARATIVE PROTEOMIC APPROACH TO INVESTIGATE THE FIRST HUMORAL FACTORS RESPONSIBLE FOR IMMUNE PRIMING IN THE LOPHOTROCHOZOAN SNAIL BIOMPHALARIA GLABRATA ABSTRACT INTRODUCTION MATERIAL AND METHODS Ethic statements Snail and parasite strains Histological procedures Plasma transfer Proteomics Quantitative Real time PCR (qrt-pcr) Statistical analysis RESULTS Histology Plasma transfer Global comparative proteomic approach of primed snail plasma Quantitative Real Time PCR (qrt-pcr) DISCUSSION REFERENCES CHAPITRE QUATRE :

4 LA BIOMPHALYSINE, UN EFFECTEUR DE LA REPONSE IMMUNITAIRE HUMORALE DE BIOMPHALARIA GLABRATA BIOMPHALYSIN, A NEW Β PORE-FORMING TOXIN INVOLVED IN BIOMPHALARIA GLABRATA IMMUNE DEFENSE AGAINST SCHISTOSOMA MANSONI DISCUSSION LE PRIMING IMMUNITAIRE CHEZ BIOMPHALARIA GLABRATA LES CANDIDATS DU PRIMING IMMUNITAIRE CHEZ BIOMPHALARIA GLABRATA CONCLUSION PERSPECTIVES Les molécules au cœur de la réponse de priming immunitaire Le support cellulaire de l information immunitaire L évolution des systèmes immunitaires invertébrés Des études sur le terrain D un point de vue populationnel En Conclusion BIBLIOGRAPHIE ANNEXES

5 Résumé : L immunité des invertébrés a longtemps été définie comme reposant sur une immunité innée simple basée sur une reconnaissance peu spécifique. Cependant depuis 20 ans les preuves que l immunité des invertébrés présente de la spécificité se multiplient. De la même façon un phénomène de mémoire immunitaire nommé priming immunitaire a également été décrit chez ces derniers. Dans le cadre de ce travail de thèse j ai pu étudier sous différents aspect le priming immunitaire chez Biomphalaria glabrata, un mollusque d eau douce, face à son parasite naturel Schistosoma mansoni. Dans un premier temps nous avons pu démontrer que le priming immunitaire était spécifique du génotype du premier parasite entrant dans le mollusque. De plus, il apparaît que la succession des différents stades de développement du parasite stimule l immunité séquentiellement afin d engendrer une protection totale. Enfin nous nous sommes intéressés aux mécanismes sous jacents à ce priming immunitaire en focalisant notre attention sur les facteurs humoraux impliqués dans cette réponse de priming immunitaire. Nous avons observé différentes molécules pouvant être associées à la réponse de priming tant dans la spécificité de reconnaissance que dans la phase effectrice de la réponse immunitaire. Mots clés : Biomphalaria glabrata, Schistosoma mansoni, priming immunitaire. Abstract : Invertebrate immunity was defined as simple and based on an aspecific recognition. Since twenty years there are some evidence that invertebrate immunity presented high levels of specificity. In the same way, a memory process named immune priming was also described in invertebrates. In this work, we studied under different aspects the immune priming in Biomphalaria glabrata, a fresh water snail, against its natural parasite Schistosoma mansoni. In a first approach we demonstrated that immune priming was genotype dependent. It also appeared that the successive developmental stages of the parasite are responsible of the total protection that occurred. Finally we were interested on the molecular mechanisms responsible of this immune priming and we identified some molecular candidates in the plasma of the snails. These molecules could be implicated in the specific recognition and/or in the parasite killing. Key words : Biomphalaria glabrata, Schistosoma mansoni, immune priming.

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