ScanGel ScanBrom ml
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- Jean-Luc Perrot
- il y a 6 ans
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1 ScanGel ScanBrom ml BROMELINE POUR EPREUVE DE COMPATIBILITE IVD Tous les produits fabriqués et commercialisés par la société Bio-Rad sont placés sous un système d assurance qualité de la réception des matières premières jusqu à la commercialisation des produits finis. Chaque lot de produit fini fait l objet d un contrôle de qualité et n est commercialisé que s il est conforme aux critères d acceptation. La documentation relative à la production et au contrôle de chaque lot est conservée par le fabricant. 7
2 I - UTILISATION ET PRINCIPE DU RÉACTIF Ce réactif est strictement réservé à des usages professionnels et diagnostiques in vitro. Destiné à la réalisation de l épreuve directe de compatibilité en technique enzymatique 1 temps, le test associe les principes d'agglutination et de filtration sur gel. La réaction est obtenue et lue après centrifugation de microtubes spécialement conçus, remplis de gel neutre. La suspension de globules rouges, le sérum ou le plasma à tester et le réactif ScanBrom sont déposés dans la cupule des microtubes et centrifugés après une période d'incubation. Les globules rouges non agglutinés sont collectés au fond du microtube, tandis que les agglutinats sont retenus dans la hauteur de gel en fonction de leur taille. Leur position dans le gel détermine l'intensité de la réaction II - CARACTERISTIQUES DU REACTIF ScanBrom est une solution de broméline sous forme liquide, prête à l emploi, stable et stérile, préparée à partir d un extrait d Ananas Comosus. La broméline est une enzyme protéolytique qui modifie les antigènes des globules rouges de telle sorte que la réactivité de certains couples antigène/anticorps est augmentée, particulièrement pour les systèmes RH, P, I, JK, LE. Par contre, les antigènes des systèmes MNS, FY, YT, CH/RG, XG, IN et GE sont détruits ou altérés par les enzymes protéolytiques. Ce réactif contient de l'azide de sodium (< 0,1 %) comme conservateur. L azide de sodium peut former des azides de plomb ou de cuivre dans les canalisations du laboratoire. Ces azides sont explosifs. Pour éviter toute accumulation d azides, rincer à grande eau les canalisations si les solutions contenant de l azide sont éliminées par l évier après leur inactivation. Le code produit et le volume sont mentionnés sur l'étiquette de la boîte. III - CONSERVATION - VALIDITÉ Ce réactif doit être conservé de +2 C à +8 C, en aucun cas congelé. La date limite d utilisation et les conditions de stockage sont indiquées sur l étiquette de chaque flacon. 8
3 Le réactif peut être utilisé 4 semaines après ouverture sous réserve de conservation et de respect des conditions de manipulation visant à éviter toute contamination. Ne pas utiliser le réactif en cas de changement d aspect (par exemple : trouble, dépôt, ) IV - AVERTISSEMENTS ET PRECAUTIONS La fiabilité des résultats dépend de la bonne exécution des Bonnes Pratiques de Laboratoire suivantes : Ne pas utiliser les réactifs au delà de la date de péremption indiquée sur l étiquette. Ne pas utiliser de cartes montrant des signes de dessèchement, des bulles ou une languette de scellage endommagée ou partiellement enlevée. Il est indispensable de prendre les précautions nécessaires pour ne pas provoquer de contaminations inter-microtubes et ce, particulièrement lors des étapes de distribution. Utiliser un embout de pipette différent pour chaque échantillon. Vérifier la précision et le bon fonctionnement des pipettes et autres équipements. Porter des gants et des lunettes de sécurité lors de la manipulation de réactifs et d échantillons. Ne jamais pipeter directement à la bouche. Eviter les éclaboussures. En cas d éclaboussures, nettoyer avec de l eau de javel à 12 Cl diluée au 1/10, et essuyer avec un papier absorbant. Le matériel utilisé pour nettoyer devra être jeté dans un conteneur pour résidus contaminés. Les consommables et produits ayant été en contact avec les échantillons de patients ou des réactifs d origine humaine ne doivent être éliminés qu après décontamination. Les fiches de sécurité sont disponibles sur demande. V - RECUEIL ET TRAITEMENT DES ÉCHANTILLONS Le sang du receveur doit être prélevé aseptiquement dans un tube sans ou avec un anticoagulant (EDTA). Le test doit être pratiqué le plus tôt possible après le recueil. Les échantillons qui ne peuvent être analysés rapidement devront être conservés entre +2 C et +8 C et testés dans les 48 heures. En aucun cas une hémolyse ne doit être visible. Le sang du donneur est obtenu à partir d un segment de la tubulure de la poche de sang (CPD). Ne pas chauffer les échantillons. 9
4 VI - TECHNIQUES Matériel fourni ScanBrom Autre matériel nécessaire non fourni ScanLiss : milieu de suspension des globules rouges ScanLiss 100 ml ScanLiss 500 ml ScanGel NEUTRAL IH QC : Contrôle de qualité en immunohématologie IH QC 4 x 6 ml Incubateur : ScanGel Incubator Centrifugeuse : ScanGel Centrifuge Pipettes automatiques ou semi-automatiques Embouts de pipette Tubes à usage unique Récipient pour déchets à risques biologiques Eau de Javel Gants latex Papier absorbant Lunettes de sécurité Contrôles Témoins positif (sérum connu, contenant au moins un anticorps détectable dans la technique préconisée) et négatif (sérum connu, ne contenant aucun anticorps). IH QC : Contrôle de qualité en immunohématologie. Mode opératoire Le mode opératoire doit être strictement suivi. Tous les réactifs doivent être remis à température ambiante avant utilisation. Par centrifugation (2000 g x 2 minutes) séparer le sérum ou le plasma des globules rouges de l'échantillon à tester. Lorsque le sang est prélevé sur tube sec, le sérum doit être recentrifugé à 1500 g pendant 10 minutes. a) Préparation de la suspension de globules rouges du donneur Distribuer 1 ml de ScanLiss dans un tube à usage unique, identifié. Ajouter 10 µl de culot globulaire du donneur. Mélanger. La suspension de globules rouges est prête à être utilisée. 10
5 b) Technique 1. Identifier chaque carte ou partie de carte par le nom ou numéro du receveur et le numéro du ou des donneurs correspondants. Retirer la totalité de la languette aluminium des cartes. Remettre en suspension les globules rouges avant utilisation. 2. Déposer 50 µl de chaque suspension de globules rouges préparée en a) dans la cupule des microtubes appropriés. 3. Ajouter immédiatement 25 µl de sérum ou de plasma du receveur dans la cupule des microtubes appropriés. En aucun cas le délai entre la distribution des suspensions de globules rouges et celle du plasma ou du sérum ne doit dépasser 10 minutes. 4. Ajouter 25 µl de ScanBrom dans la cupule de chaque microtube. 5. Incuber immédiatement 15 minutes à +37 C dans ScanGel Incubator. 6. Centrifuger immédiatement 10 minutes dans ScanGel Centrifuge. En aucun cas le délai entre la fin de l incubation et le début de la centrifugation ne doit dépasser 10 minutes. 7. Lire les réactions. VII - RÉSULTATS ET INTERPRÉTATION La présence d'agglutinats (en surface ou dispersés dans le gel) et/ou d une hémolyse dans un microtube correspond à un résultat positif. Un culot de globules rouges collectés au fond du microtube et l absence d hémolyse correspond à un résultat négatif. Résultat positif Résultat négatif + à Les résultats sont valides uniquement si les témoins positif et négatif donnent les résultats attendus. Un résultat positif (agglutination et/ou hémolyse) dans un des microtubes démontre l existence d une incompatibilité entre le sérum ou le plasma du receveur et les globules rouges du donneur. VIII - PERFORMANCES L évaluation des performances a donné des résultats concordants avec le réactif utilisé comme référentiel. Chaque résultat a été comparé avec celui obtenu en technique gel filtration. Quelques incompatibilités n ont pu être mises en évidence par ce seul test mais l ont, par contre, été par le test indirect à l antiglobuline en technique ScanGel. 11
6 De plus, certains antigènes tels que MNS1 (M), MNS2 (N), MNS3 (S), FY1 (Fy a ), FY2 (Fy b ) et XG1(Xg a ) sont détruits ou altérés quand les globules rouges test sont traités avec des enzymes protéolytiques. La technique enzymatique ne peut donc pas être utilisée comme seule technique pour l épreuve de compatibilité. La reproductibilité de l application a été testée et a montré de bonnes performances aussi bien en intra qu en inter-essais. LIMITES Des résultats anormaux peuvent être provoqués par : une contamination bactérienne ou chimique du sérum, du plasma, des globules rouges ou du matériel. une médication ou un état pathologique du patient donnant une réaction croisée. l utilisation d un milieu de suspension des globules rouges autre que celui préconisé. une préparation des globules rouges différente de celle préconisée. une remise en suspension incomplète des globules rouges. une hémolyse des échantillons ou des globules rouges. la présence de fibrine (image d un bouton compact au fond du microtube accompagné d une fine bande rosée en haut du gel correspondant aux globules rouges retenus par les résidus de fibrine). une dégradation de l activité enzymatique de la broméline (non respect des consignes de conservation). une contamination inter-microtubes. tout autre usage que celui décrit dans cette notice. 12
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8 Bio-Rad 3, bd Raymond Poincaré Marnes-la-Coquette - France Tél.: /2007 Fax.: Code:
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