INHIBITION PLAQUETTAIRE DANS
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- Gabin Denis
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1 INHIBITION PLAQUETTAIRE DANS UN NOUVEL ACCIDENT ISCHEMIQUE TRANSITOIRE ET ACCIDENT ISCHEMIQUE CEREBRAL MINEUR (PLATELET-ORIENTED INHIBITION IN NEW TIA AND MINOR ISCHEMIC STROKE) ÉTUDE AUXILIAIRE SUR LES BIOMARQUEURS PROTOCOLE RELATIF AUX ÉCHANTILLONS DE SANG Sites OUS ADN et plasma
2 TABLE DES MATIÈRES I. PROTOCOLE CONCERNANT LES ÉCHANTILLONS D ADN ET DE PLASMA CONDITIONS REQUISES SUR LES SITES CONCERNANT LE PRÉLÈVEMENT D ÉCHANTILLONS D ADN ET DE PLASMA TROUSSES DE PRÉLÈVEMENT D ÉCHANTILLONS D ADN ET DE PLASMA PRÉLÈVEMENT ET PRÉPARATION D ÉCHANTILLONS D ADN ET DE PLASMA CENTRIFUGATION STOCKAGE DES ÉCHANTILLONS D ADN ET DE PLASMA CONDITIONNEMENT ET EXPÉDITION DES ÉCHANTILLONS D ADN ET DE PLASMA Pour plus d informations, voir le manuel de laboratoire LabCorp II. ERREURS/PROBLÈMES COURANTS... 8 III. ADRESSE DE LABCORP POUR L EXPÉDITION DES ÉCHANTILLONS... 8 IV. ADRESSE DE MAYO CLINIC POUR LE STOCKAGE DES ÉCHANTILLONS... 9 V. ANNEXES... 9 Annexe A : TUBE POUR ÉCHANTILLON DE SANG EDTA À BOUCHON LAVANDE DE 10 ML Annexe B : BTUBE DE CRYOPRÉSERVATION DE 10 ML POUR LES CELLULES RESTANTES ET LA COUCHE LEUCO-PLAQUETTAIRE Annexe C : SCHÉMA D UN ÉCHANTILLON DE SANG APRÈS CENTRIFUGATION Annexe D : TUBE DE CRYOPRÉSERVATION À PLASMA DE 2 ML Page 1
3 I. PROTOCOLE CONCERNANT LES ÉCHANTILLONS D ADN ET DE PLASMA 1. CONDITIONS REQUISES SUR LES SITES CONCERNANT LE PRÉLÈVEMENT D ÉCHANTILLONS D ADN ET DE PLASMA L accès aux éléments suivants est nécessaire pour pouvoir traiter et stocker les échantillons de manière appropriée : Souhaitable (non requis) - Centrifugeuse fonctionnant à 1000 g et 4 C. Requis - Centrifugeuse fonctionnant à 1000 g. Souhaitable (non requis) - Congélateur fonctionnant entre -70 C et -90 C. Les échantillons peuvent être conservés pendant 3 mois avant d êtres expédiés. Les échantillons doivent être expédiés sur de la glace carbonique. Requis - Congélateur fonctionnant à -20 C, -30 C ou -40 C. Si vous utilisez un congélateur fonctionnant à -20 C, -30 C ou -40 C, les échantillons doivent être expédiés sur de la glace carbonique dans les 4 jours. Glace carbonique pour l expédition de tous les échantillons. (Voir le manuel de laboratoire LabCorp pour obtenir une liste de fabricants de glace carbonique.). 2. TROUSSES DE PRÉLÈVEMENT D ÉCHANTILLONS D ADN ET DE PLASMA LabCorp Clinical Trials fournit des trousses de prélèvement d échantillons. Celles-ci, assemblées à LabCorp, sont envoyées directement aux sites dans un carton pouvant être réutilisé pour envoyer les échantillons à LabCorp. Chaque trousse de prélèvement d échantillons d ADN et de plasma contient les éléments nécessaires pour prélever, préparer et renvoyer les échantillons à LabCorp Clinical Trials. (Des fournitures supplémentaires en vrac sont également envoyées au site afin de parer à tout risque de bris ou d endommagement des trousses de prélèvement d échantillons.) Chaque trousse de prélèvement d échantillons d ADN et de plasma contient les éléments suivants : ARTICLE QUANTITÉ FORMULAIRES Formulaire de demande d analyse en laboratoire avec code-barres 1 ] FOURNITURES DE PRÉLÈVEMENT DE SANG Prélèvement de sang : 1 a. 1- Tube EDTA à bouchon lavande de 10 ml (Vacutainer) avec code-barres b. 1- Tube de cryopréservation de 10 ml pour couche leucoplaquettaire et cellules restantes avec code-barres c. 6- Tubes de cryopréservation de 2 ml pour plasma avec code-barres Page 2
4 d. 1- Tampon à l alcool e. 1- Aiguille f. 1- Garrot g. 1- Compresse de gaze h. 1- Bandage i. 1- Pipettes non stériles Sac à échantillons anti-contamination 1 FOURNITURES D EXPÉDITION Boîte pour trousses (carton d expédition) 1 Bordereau de transport aérien préimprimé et prépayé 1 Carton d expédition avec mousse 1 Étiquette d expédition pour glace carbonique Plusieurs REMARQUE : les sites doivent obtenir de la glace carbonique pour l envoi des échantillons. Voir le manuel LabCorp pour obtenir une liste de fabricants de glace carbonique. Le formulaire de demande d analyse en laboratoire (voir le manuel de laboratoire LabCorp) et les articles munis d un code-barres inclus dans chaque trousse de prélèvement d échantillons sont préimprimés et contiennent le même numéro de code-barres. Ne transférez pas le contenu d une trousse de prélèvement d échantillons à une autre. COMMANDE DE FOURNITURES SUPPLÉMENTAIRES 1. Pour commander des trousses de prélèvement d échantillons et des fournitures supplémentaires, voir les instructions fournies dans le manuel de laboratoire LabCorp. Lorsque vous commandez des fournitures supplémentaires, veuillez prévoir au minimum 5 à 7 jours ouvrables pour la préparation et la livraison de votre commande. 3. PRÉLÈVEMENT ET PRÉPARATION D ÉCHANTILLONS D ADN ET DE PLASMA Des échantillons de sang seront prélevés lors de l inscription à l étude. Dans l idéal, les échantillons sont prélevés au moment de la randomisation, après l administration de la dose d attaque au sujet. Cependant, en cas de nécessité, il est possible de prélever les échantillons jusqu'à 12 heures après la randomisation. Un laboratoire hospitalier de prélèvement sanguin peut être mis à contribution si le coordinateur de l étude est incapable d exercer le prélèvement sanguin, mais le coordinateur est responsable du Page 3
5 transport de l échantillon de sang au laboratoire pour centrifugation et de l organisation de tous les échantillons en vue de leur conditionnement et expédition à LabCorp. PROCÉDURE À SUIVRE AVANT LE PRÉLÈVEMENT D ÉCHANTILLONS 1. Vérifiez que vous êtes en possession du Consentement éclairé pour l étude des biomarqueurs. 2. Vérifiez que la trousse que vous avez sélectionnée est bien adaptée au prélèvement d échantillons DNA et Plasma. 3. Vérifiez la date de péremption de la trousse de prélèvement d échantillons que vous avez choisie. (Respectez les consignes locales relatives à la destruction des trousses de prélèvement d échantillons périmées.) 4. Consultez le calendrier LabCorp figurant dans le manuel de laboratoire LabCorp pour connaître les dates de fermeture en raison de fêtes locales et nationales. PRÉLÈVEMENT ET PRÉPARATION DES ÉCHANTILLONS 1. Effectuez la ponction veineuse selon une technique stérile standard. 2. En cas d intraveineuse dans un bras, utilisez l autre bras. Si une intraveineuse est administrée dans les deux bras, prélevez le sang d une veine distale par rapport à l intraveineuse. 3. Remplissez entièrement le tube EDTA à bouchon lavande (voir l Annexe A) fourni dans la trousse de prélèvement d échantillons. 4. Retournez avec précaution le tube au moins 6 à 8 fois immédiatement après le prélèvement pour éviter la coagulation. Évitez d exposer le tube à des températures extrêmement chaudes ou froides. Indiquez sur le tube le numéro d identification du sujet POINT et le numéro de randomisation (numéro de la bouteille du médicament de l étude). REMARQUE : utilisez un stylo à encre indélébile ou à bille pour remplir les étiquettes des échantillons et le formulaire de demande d analyse en laboratoire. 5. Séparez immédiatement le plasma des cellules par centrifugation ou dans les 30 à 60 minutes suivant le prélèvement (voir la section Centrifugation du manuel de laboratoire LabCorp). Maintenez les tubes à la verticale avant la centrifugation. Pour obtenir de l aide concernant la centrifugation, recherchez dans le manuel de laboratoire LabCorp les coordonnées du surveillant de projet LabCorp. Page 4
6 6. Après centrifugation, si vous ne voyez pas de couche distincte entre les cellules sanguines, la couche leuco-plaquettaire et le plasma, centrifugez l échantillon une deuxième fois. L Annexe C contient un schéma illustrant la couche leucoplaquettaire d un échantillon de sang après centrifugation. 7. À l aide d une pipette fournie dans la trousse de prélèvement d échantillons, transférez 0,7 ml de plasma du tube EDTA à bouchon lavande dans chacun des six tubes de cryopréservation de 2 ml. Remplissez chaque tube de cryopréservation de 2 ml jusqu à la ligne indiquant 0,7 ml (voir l Annexe D). REMARQUE : veillez à ne pas perturber la couche leuco-plaquettaire entre les cellules sanguines et le plasma. Vous devriez voir une couche distincte, appelée couche leuco-plaquettaire, entre le plasma et les cellules. 8. Assurez-vous de NE PAS prélever à la pipette la couche leuco-plaquettaire avec le plasma. Si vous aspirez une partie de la couche leuco-plaquettaire avec le plasma, notez-le en bas du Formulaire de demande d analyse en laboratoire. 9. Placez les bouchons sur les tubes de cryopréservation de plasma. 10. Indiquez sur les six tubes de cryopréservation de 2 ml le numéro d identification du sujet POINT et le numéro de randomisation (numéro de la bouteille du médicament de l étude). REMARQUE : utilisez un stylo à encre indélébile ou à bille pour remplir les étiquettes des échantillons et le formulaire de demande d analyse en laboratoire. 11. À l aide de la pipette supplémentaire fournie dans la trousse de prélèvement d échantillons, transférez les cellules restantes et la couche leuco-plaquettaire du tube EDTA de 10 ml dans le tube de cryopréservation de 10 ml. 12. Replacez le bouchon sur le tube de cryopréservation de 10 ml. 13. Placez les six tubes de cryopréservation à plasma de 2 ml et le tube de cryopréservation de 10 ml contenant les cellules restantes et la couche leucoplaquettaire dans la poche Aqui-Pak (porte-tubes à 6 compartiments avec matériau absorbant). 14. Placez la poche Aqui-Pak à l intérieur du plus grand compartiment du sac à échantillons anti-contamination. Insérez une copie du formulaire de demande d analyse en laboratoire dans la poche extérieure du sac à échantillons (conservez une copie pour vos dossiers). 15. PLACEZ IMMEDIATEMENT LE SAC A ECHANTILLONS DANS LE CONGELATEUR EN POSITION VERTICALE. Page 5
7 16. Les échantillons doivent rester dans le congélateur jusqu à leur CONGÉLATION avant d être expédiés. Une fois congelés, les échantillons doivent être expédiés congelés sur de la glace carbonique. Suivez les instructions de conditionnement et d expédition figurant dans le manuel de laboratoire LabCorp, puis expédiez le tube de cryopréservation de 10 ml et les six tubes de cryopréservation de 2 ml ensemble sur de la glace carbonique. 17. Si les cellules restantes et le plasma sont congelés dans un congélateur à -20 C, -30 C ou -40 C, les échantillons doivent être expédiés sur de la glace carbonique dans les 4 jours. Si les échantillons sont conservés dans un congélateur entre - 70 C et -90 C, ils peuvent être conservés trois mois maximum avant d être expédiés sur de la glace carbonique. PROBLÈMES LIÉS AU PRÉLÈVEMENT ET À LA PRÉPARATION DES ÉCHANTILLONS Si un article de la trousse de prélèvement d échantillons est cassé ou perdu, remplacez-le par l un des articles fournis dans les fournitures en vrac. Chaque trousse de prélèvement d échantillons comprend des étiquettes à code-barres supplémentaires. Lorsque vous collez l une des étiquettes à code-barres supplémentaires, veillez à ce qu elle puisse être lue facilement (dans le sens de la longueur pour un tube, par exemple). Assurez-vous que le code-barres d expiration du lot est lisible. Remplissez les informations requises sur l étiquette. 4. CENTRIFUGATION Pour préparer le plasma acellulaire, les échantillons de sang doivent être centrifugés. Utilisez le nomogramme figurant dans le manuel de laboratoire LabCorp pour calculer la vitesse (RPM ou révolutions par minute) de centrifugation de l échantillon. Pour calculer la vitesse, vous devez connaître le rayon (distance entre le centre de la centrifugeuse que vous utilisez et le centre du tube étant centrifugé) et la FCR (force centrifuge relative, exprimée en «g» ; dans cette étude, g = 1000). La vitesse (ou RPM) doit être calculée une fois pour chaque centrifugeuse. Une fois que la vitesse a été déterminée, centrifugez le tube EDTA de 10 ml à 1000 g pendant 15 minutes afin de séparer le plasma des cellules. Vous devriez voir une couche distincte, appelée couche leuco-plaquettaire, entre le plasma et les cellules. Veillez à ne pas perturber la couche leuco-plaquettaire. Il est essentiel que la couche leuco-plaquettaire reste avec les cellules restantes pour l extraction de l ADN dans les locaux de LabCorp. Si vous ne voyez pas de couches distinctes entre les cellules, la couche leuco-plaquettaire et le plasma, centrifugez l échantillon une deuxième fois. REMARQUE : si vous avez besoin d aide, contactez le surveillant de projet LabCorp (voir le manuel de laboratoire LabCorp). Page 6
8 5. STOCKAGE DES ÉCHANTILLONS D ADN ET DE PLASMA Les cellules restantes et les échantillons de plasma doivent être congelés sur le site avant d être expédiés. Les échantillons doivent être conservés congelés dans un congélateur fonctionnant entre -70 C et -90 C OU à -20 C, -30 C ou -40 C jusqu au moment de l expédition. Si vous utilisez un congélateur fonctionnant à -20 C, -30 C ou -40 C, les échantillons doivent être expédiés sur de la glace carbonique dans les 4 jours. Si vous utilisez un congélateur fonctionnant entre -70 C et -90 C, les échantillons peuvent être conservés pendant 3 moisavant d être expédiés sur de la glace carbonique. Pendant la congélation, les échantillons doivent rester dans des sacs à échantillons anti-contamination en position verticale. REMARQUE : les cellules restantes et le plasma prélevé doivent être expédiés ensemble sur de la glace carbonique. AVANT L EXPEDITION 1. Vérifiez que les six tubes de cryopréservation de 2 ml et le tube de cryopréservation de 10 ml sont correctement étiquetés. 2. Vérifiez que l étiquette apposée sur chaque tube de cryopréservation de 2 ml indique le numéro d identification du sujet POINT et le numéro de randomisation (numéro de la bouteille du médicament de l étude). 3. Vérifiez que l étiquette apposée sur le tube de cryopréservation de 10ml indique le numéro d identification du sujet POINT et le numéro de randomisation. 6. CONDITIONNEMENT ET EXPÉDITION DES ÉCHANTILLONS D ADN ET DE PLASMA Pour plus d informations, voir le manuel de laboratoire LabCorp. 1. Assemblez les matériaux d expédition. 2. Remplissez la moitié du carton d expédition de glace carbonique. 3. Placez le sac à échantillons sur la glace carbonique en position verticale et remplissez le reste du carton d expédition de glace carbonique. REMARQUE : les échantillons provenant de plusieurs sujets peuvent être expédiés dans un même carton, mais doivent être placés dans leur sac attitré avec le formulaire de demande d analyse en laboratoire correspondant. 4. Fermez hermétiquement le carton d expédition. Page 7
9 5. Voir le manuel de laboratoire LabCorp pour connaître le transporteur à utiliser dans votre pays et obtenir des informations spécifiques relatives au bordereau de transport aérien. Veuillez remplir vos bordereaux de transport aérien entièrement ; les bordereaux de transport aérien sont préimprimés avec le nom de votre site et les informations propres à LabCorp. 3. Conservez une copie pour vos dossiers. 7. Voir le manuel de laboratoire LabCorp pour déterminer si une étiquette «Glace carbonique» est apposée au préalable à votre carton d expédition ou si vous devez apposer une étiquette d expédition «Glace carbonique» fournie sur la boîte d expédition. 9. Expédiez l échantillon à LabCorp Clinical Trials. Pour toute question concernant l expédition, contactez votre représentant des laboratoires LabCorp dont les coordonnées figurent dans le manuel de laboratoire LabCorp. RAPPEL : expédiez uniquement les échantillons à LabCorp Clinical Trials DU LUNDI AU JEUDI II. ERREURS/PROBLÈMES COURANTS Aspiration de la couche leuco-plaquettaire lors du prélèvement du plasma Si vous avez accidentellement aspiré une partie de la couche leuco-plaquettaire dans l une des pipettes, notez-le sur le Formulaire de demande d analyses en laboratoire. Ceci peut affecter la précision des niveaux des biomarqueurs. Séparation insuffisante des cellules, de la couche leuco-plaquettaire et du plasma Centrifugez l échantillon une deuxième fois. Glace carbonique insuffisante Ceci peut entraîner la décongélation des échantillons et affecter la précision des niveaux des biomarqueurs. III. ADRESSE DE LABCORP POUR L EXPÉDITION DES ÉCHANTILLONS Voir le manuel de laboratoire LabCorp. Page 8
10 IV. ADRESSE DE MAYO CLINIC POUR LE STOCKAGE DES ÉCHANTILLONS Mayo Clinic est responsable du stockage à long terme des échantillons d ADN et de plasma. V. ANNEXES N ENVOYEZ PAS DIRECTEMENT VOS ÉCHANTILLONS À MAYO CLINIC Mayo Clinic ATTENTION : Owen Ross, PhD 4500 San Pablo Road Birdsall Room 225 Jacksonville, FL (États-Unis) Téléphone : (904) Page 9
11 Annexe A TUBE POUR ÉCHANTILLON DE SANG EDTA À BOUCHON LAVANDE DE 10 ML Page 10
12 Annexe B TUBE DE CRYOPRÉSERVATION DE 10 ML POUR LES CELLULES RESTANTES ET LA COUCHE LEUCO-PLAQUETTAIRE Code-barres préimprimé Veillez à ce que le code-barres soit lisible. Sur l étiquette apposée au préalable, indiquez ce qui suit : Numéro d identification du sujet POINT (SubjID) Numéro de randomisation (Random#) Étiquette de prélèvement d ADN apposée au préalable Code-barres préimprimé Veillez à ce que le code-barres soit lisible. Sur l étiquette apposée au préalable, indiquez ce qui suit : Numéro d identification du sujet POINT (SubjID) Numéro de randomisation (Random#) Étiquette de prélèvement d ADN apposée au préalable Page 11
13 Annexe C SCHÉMA D UN ÉCHANTILLON DE SANG APRÈS CENTRIFUGATION Remarque : veillez à ne pas perturber la couche leuco-plaquettaire entre les cellules sanguines et le plasma. Page 12
14 Annexe D TUBE DE CRYOPRÉSERVATION À PLASMA DE 2 ML À l aide d une pipette fournie dans la trousse de prélèvement d échantillons, transférez 0,7 ml de plasma du tube EDTA à bouchon lavande dans chacun des six tubes de cryopréservation à plasma de 2 ml. Remplissez le tube de cryopréservation à plasma jusqu à la ligne indiquant 0,7 ml. Remarque : veillez à ne pas perturber la couche leuco-plaquettaire entre les cellules sanguines et le plasma. Si une partie de la couche leuco-plaquettaire est aspirée avec le plasma, notez-le en bas du Formulaire de demande d analyses en laboratoire. L Annexe C contient un schéma illustrant la couche leuco-plaquettaire d un échantillon de sang après centrifugation. Page 13
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