Le Laboratoire de Biologie Médicale Auvergne-Loire

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1 Etablissement français du sang AUVERGNE RHONE-ALPES 111 rue Elisée Reclus DECINES CHARPIEU Tél : Fax : L LE Le Laboratoire de Biologie Médicale Auvergne-Loire Manuel de prélèvement Octobre RAA/LAB/FI/027 version 4 Version électronique GEDEON faisant foi 1/26

2 SOMMAIRE A - INTRODUCTION p 3 B - LABORATOIRE DE BIOLOGIE MEDICALE AULO p 4-5 p Exigences relatives aux demandes d examens p 6 2 Exigences relatives aux échantillons primaires p 8 3 Exigences relatives aux conditions de conservation et d acheminement p 10 4 Gestion des non conformités p 11 5 Liste des examens p 13 6 Modalités de prescription d examens complémentaires p 17 7 Prise en charge des demandes d examens Délai de rendu p 17 8 Transmission des comptes rendus d examens p 18 9 Modalités de conservation ou de restitution des échantillons p Facturation p 19 D - MANAGEMENT DE LA QUALITE p 20 1 Continuité du service p 20 2 Ecoute client p 20 3 Service à la clientèle p 20 GLOSSAIRE p 21 ANNEXES p Annexe 1 - Liste des examens IHE p 23 Annexe 2 - Liste des examens HLA p 24 Annexe 3 Formulaires de prescription d examens IHE, HLA p 25 Version électronique GEDEON faisant foi 2/26

3 A - INTRODUCTION Ce manuel concerne les prélèvements, leurs documents associés et leurs conformités quand ils sont transmis : - par des Etablissements de Soins (ES) ou - par des Laboratoires de Biologie Médicale (LBM). Le respect de ces exigences conditionne l obtention d un résultat analytique fiable et la garantie du lien patient- prélèvement, indispensable à la qualité des résultats d examens, à la prestation de conseils et à la sécurité transfusionnelle. Ce document est à disposition des clients, téléchargeable à l adresse : (seule la version électronique faisant foi). Les clients sont systématiquement informés en cas de modifications majeures. De plus la date de mise à jour et le lien de ce manuel de prélèvement sont indiqués en bas des comptes rendus Ce symbole est inséré dans le texte en regard des modifications apportées par rapport à la version antérieure. Version électronique GEDEON faisant foi 3/26

4 B LE LABORATOIRE DE BIOLOGIE MEDICALE DE L EFS AULO Le laboratoire unique multisite de Biologie Médicale Auvergne Loire appartient à l EFS Auvergne Rhône-Alpes. Ce laboratoire sous la responsabilité de Leila Medjenah regroupe 2 activités: - l Immuno-Hématologie érythrocytaire (IHE) - l Histocompatibilité et l immunologie plaquettaire (HLA) 1 - Les 5 sites IHE Réalisent les examens nécessaires pour assurer la sécurité transfusionnelle et participer au suivi de l allo-immunisation fœto-maternelle. Les examens sont référencés Annexe 1 - Liste des examens IHE qui précise les examens réalisés dans le laboratoire ou transmis à un autre site de l EFS dans le cadre de la co-traitance ainsi que le délai de rendu et la cotation. CLERMONT FERRAND 58 rue Montalembert TEL : ou CLERMONT-FERRAND FAX : ou Contact : Guillaume BERLIE Biologiste médical guillaume.berlie@efs.sante.fr Roxana BESCHIERU Biologiste médical roxana.beschieru@efs.sante.fr Corinne CHABRE Biologiste médical corinne.chabre@efs.sante.fr Aurélie LAUTRETTE Biologiste médical aurelie.lautrette@efs.sante.fr Hélène ODENT-MALAURE Biologiste médical helene.odent-malaure@efs.sante.fr LE PUY EN VELAY 12 bd du Docteur A. Chantemesse TEL : LE PUY EN VELAY FAX : Entre 21h et 7h du lundi au vendredi, du samedi 12h au lundi 7h et jours fériés - Tel : Contact : Rachel CONDUCTIER Biologiste médical rachel.conductier@efs.sante.fr Ramona PIRVAN Biologiste médical ramona.pirvan@efs.sante.fr MOULINS 10 av. Général de Gaulle, BP TEL : MOULINS FAX : Entre 20h et 8h du lundi au vendredi, du samedi 16h au lundi 8h et jours fériés - Tel : Contact : Guillaume BERLIE Biologiste médical guillaume.berlie@efs.sante.fr ROANNE 28 route de Charlieu TEL : ROANNE FAX : Contact : Philippe TRUBLEREAU Biologiste médical philippe.trublereau@efs.sante.fr Dr Albert FROGET Biologiste médical albert.froget@efs.sante.fr SAINT PRIEST EN JAREZ Plateau de Biologie TEL : SAINT PRIEST en JAREZ cedex FAX : Contact : Cristina IOBAGIU Biologiste médical cristina.iobagiu@efs.sante.fr Sébastien DUBOEUF Biologiste médical sebastien.duboeuf@efs.sante.fr Dr Leila MEDJENAH Biologiste médical leila.medjenah@efs.sante.fr Dans les périodes d astreinte (assurée 24/24, 365/365), selon habilitation, les biologistes médicaux interviennent pour leur activité respective selon un planning défini. Dans les périodes d absence, les biologistes médicaux sont amenés à se remplacer pour leur activité respective. Version électronique GEDEON faisant foi 4/26

5 B LE LABORATOIRE DE BIOLOGIE MEDICALE DE L EFS AULO 2 Le site HLA Réalise les examens référencés dans l Annexe 2, visant à assurer : La compatibilité des greffes de Cellules Souches Hématopoïétiques (CSH). Le suivi des patients en pré ou post transplantation d organes. Les examens HLA dans le cadre des associations HLA et maladies. Le typage HLA des Donneurs Volontaires de CSH. La compatibilité HLA dans le cadre des inefficacités transfusionnelles, le bilan de suspicion de TRALI La compatibilité HPA dans le cadre des inefficacités transfusionnelles1 Les examens d immunologie plaquettaire et d incompatibilité fœto-maternelle1. 1 Examens envoyés et réalisés au Laboratoire EFS AuRa site de DECINES se référer au manuel de prélèvement accessible sur le site internet du LBM Rhône Alpes : SAINT ETIENNE 25 Boulevard Pasteur SAINT ETIENNE CEDEX 2 TEL : FAX : Contact : Anne KENNEL Biologiste médical anne.kennel@efs.sante.fr Julie BONNEAU Biologiste médical julie.bonneau@efs.sante.fr Dans les périodes d astreinte (assurée 24/24 365/365), selon habilitation, les biologistes médicaux interviennent pour leur activité respective selon un planning défini. Dans les périodes d absence, les biologistes médicaux sont amenés à se remplacer pour leur activité respective. Version électronique GEDEON faisant foi 5/26

6 1- Exigences relatives aux demandes d examens Demande d examens Chaque prélèvement doit être accompagné d une prescription d examen et/ou une ordonnance qui, a minima, comporte de manière lisible : - identification du patient : Nom de famille (nom de naissance), Prénom, Nom d usage (s il y a lieu), Date de naissance, Sexe, Identifiant patient (lorsqu il existe) - identification du prescripteur et date de prescription - nom du préleveur - date et heure du prélèvement - nombre d échantillons transmis - identification de l établissement demandeur : Etablissement de soin avec service, UF et numéro de téléphone (et si possible fax) Laboratoire avec adresse et n de téléphone (et si possible fax) - nature des examens demandés - identification du laboratoire ou service de soins destinataires du compte rendu d examens - contexte clinique et/ou degré d urgence à préciser afin d assurer un rendu de résultat compatible avec son utilisation clinique La prescription d examens IHE ou HLA peut être rédigée selon une trame mise à disposition par le laboratoire de biologie médicale multisite de l EFS Pour les laboratoires de biologie médicale, le bon de demande d examen s accompagne de préférence de l ordonnance médicale. Pour tous les clients, la demande/prescription d examen formalise les exigences entre les deux parties. Remarque: Les données d identification du patient portées sur les échantillons doivent être strictement identiques à celles de la demande d examens. Cas particulier : Les prélèvements des donneurs d organes (ganglions et /ou rate) sont conditionnés dans un pot identifié par un numéro cristal selon les recommandations de l Agence de la Biomédecine. Ils sont adressés au laboratoire accompagnés du compte rendu du résultat HLA du donneur Version électronique GEDEON faisant foi 6/26

7 1.2 Renseignements cliniques minimum exigés sur la demande Examens IHE Toute information pertinente pouvant influer sur les résultats et leur interprétation doit être communiquée par le client: - Diagnostic medical ou chirurgical - Contexte pathologique ou obstetrical - Notion d injection d immunoglobulines anti-rh1 (dose et date) - Antécédents obstétricaux et transfusionnels (nombre et date, pour la demande de groupe sanguin et de phénotype érythrocytaire, toute transfusion de moins de 4 mois doit être signalée) et réactions transfusionnelles éventuelles dans le cadre d un incident post transfusionnel - Transfusion de PSL envisagée, si oui date et heure - Notion de greffe de CSH date de la greffe - Notion greffe de rein - date de la greffe (dans le cadre du titrage des anticorps immuns anti- A, anti-b) - Notion d hémolyse (clinique ou biologique) ou d inefficacité transfusionnelle - Origine ethnique, si elle est utile en vue de rechercher un phénotype érythrocytaire rare, dans l intérêt des soins prodigués au patient - Traitement par un anti-cd38 Remarque: 1- Les demandes de RAI de patiente ayant reçu une injection prophylactique d immunoglobulines anti-rh1 doivent indiquer la date d injection, la dose injectée, la date et le résultat de la dernière RAI avant injection et le groupage ABO RH-KEL1. 2- Dans le cadre d exploration d anémie hémolytique: préciser le contexte clinique (notamment contexte infectieux récent) et la prise éventuelle de médicaments. 3- En cas de demande d un test de Kleihauer, préciser le terme de la grossesse et le contexte clinique, traumatisme ou accouchement. Dans ce dernier cas et dans le cadre de la prévention de l allo-immunisation anti-rh1, indiquer le groupe sanguin de la mère et associer si possible le prélèvement de l enfant à celui de la mère. 4- Les prélèvements transmis pour exploration complémentaire doivent être accompagnés des résultats préliminaires : pour RAI, résultats réactionnels avec composition du panel utilisé et résultat de groupage sanguin ABO RH- KEL1 si réalisé, intensité réactionnelle pour les TDA, nature d un problème de groupe...dans le cas contraire, ces examens pourront être réalisés (à l initiative du biologiste) et tarifés (NABM). Cas particulier du nouveau-né: Dans les cas d exploration d incompatibilité foeto-maternelle ou de prévention d allo-immunisation maternelle par immunoglobulines anti-rh1 : la fiche de renseignements cliniques ou la prescription pour l enfant doit mentionner: l identité complète de la mère et, si des prélèvements maternels ne sont pas transmis concomitamment, le statut immunohématologique maternel (groupe ABO-RH1 - phénotype RH-KEL1 - résultat et date de la dernière RAI, spécificité des anticorps connus et/ou notion d injection prophylactique d immunoglobulines anti- RH1). Cas particulier des patients non identifiables: Les procédures vigilances de l Etablissement de Santé s appliquent en respectant un identifiant unique. Version électronique GEDEON faisant foi 7/26

8 1.2.2 Examens HLA Toute information pertinente pouvant influer sur les résultats et leur interprétation doit être communiquée par le client sur la feuille de prescription: - Transplantation d organes : Tout événement immunisant ou traitement ayant un impact sur les résultats (Transfusion, rejet aigu ou chronique, transplantectomie, infection, vaccination, traitement IVIg, plasmaphérèse, SAL, anti CD20 ). - Greffe de CSH : o Diagnostic clinique o Leucopénie <500 G/L - Association HLA et maladie : o Diagnostic Clinique o Antigène ou allèle recherché - Transfusion réfractaire, incident transfusionnel, suspicion de TRALI Pour les examens envoyés et réalisés au Laboratoire EFS AuRa site de DECINES se référer au manuel de prélèvement accessible sur le site internet du LBM Rhône Alpes : 2- Exigences relatives aux échantillons primaires 2.1 Modalités de prélèvement Les modalités de prélèvement doivent répondre aux exigences réglementaires dans le domaine de la biologie médicale. Le prélèvement doit être réalisé sur sang veineux par une personne habilitée à prélever avec du matériel à usage unique. Il ne nécessite pas de préparation particulière du patient. Il est porté une attention toute particulière à l identification du prélèvement : Une étiquette d identification est apposée sur le(s) tube(s) par la personne qui a prélevé, au moment du prélèvement (immédiatement après) du patient et en sa présence. Les mentions portées sur l étiquette sont décrites au chapitre 2.3. Elles peuvent être manuscrites. Une dernière vérification des informations portées sur l étiquette est effectuée en demandant au patient de décliner son identité. A défaut, la confrontation de plusieurs types de documents ou sources d informations d identité est systématiquement effectuée (dossier, famille, entourage ). Vérifier si la demande est urgente et la traiter comme telle. Les matériels utilisés et les déchets produits par l activité de prélèvement (les déchets à risques infectieux) sont éliminés selon la réglementation en vigueur pour l élimination des DASRI. Cas particulier des prélèvements pour groupage sanguin : il s agit de deux déterminations de groupage ABO RH KEL résultant de deux actes de prélèvements différents effectués si possible par deux préleveurs différents (circulaire DGS/DHOS/AFSSAPS N 03/ 582 du 15 décembre 2003 relative à la réalisation de l acte transfusionnel). Cas particulier des prélèvements pour typage HLA : il s agit de deux déterminations résultant de deux actes de prélèvements différents effectués si possible par deux préleveurs différents Remarque : lorsque 2 déterminations de groupage sont adressées concomitamment, chaque demande doit être séparée physiquement (deux sachets) afin de pouvoir différencier les deux prélèvements. Version électronique GEDEON faisant foi 8/26

9 2.2 - Exigences qualitatives et quantitatives Facteurs ayant une influence sur la qualité du prélèvement et/ou des résultats d examen Laboratoires IHE Les exigences qualitatives et quantitatives relatives aux types de tubes sont fonction des examens cf. Annexe 1. Tous les prélèvements transmis doivent être non décantés. Caractéristiques des tubes : les tubes doivent être totalement remplis. Les tubes insuffisamment remplis seront traités si possible en technique manuelle. Il est demandé aux préleveurs d informer le LBM de tout changement de référence de tubes utilisés. Rq: Dans le cadre de l exploration d Événement Indésirable Receveur impliquant des Concentrés de Globules Rouges, le tube pré-transfusionnel peut être demandé par l EFS à un LBM extérieur Laboratoire HLA Les exigences qualitatives et quantitatives relatives aux types de tubes sont fonction des examens cf. chapitre 5.2 La liste des examens HLA réalisés au laboratoire est en Annexe 2. - Facteurs liés au prélèvement pouvant entraîner le non-traitement du prélèvement : Prélèvement réalisé sur anticoagulant inadéquat ou arrivé hors délai de conservation des cellules Les traitements par corticoïdes et immunothérapie doivent être signalés. - Pour les typages HLA en biologie moléculaire : > 500 leucocytes/µl. Pour les examens envoyés et réalisés au Laboratoire EFS de DECINES se référer au manuel de prélèvement accessible sur le site internet du LBM Rhône Alpes : Exigences relatives à l identification de chaque tube prélevé Les mentions ou une étiquette d identification sont apposées sur chaque tube par la personne qui a prélevé, au moment du prélèvement du patient et en sa présence. L étiquetage doit mentionner : le nom de famille, le prénom, le nom d usage (s il y a lieu), le sexe, la date de naissance, l identifiant patient lorsqu il existe, si possible la date et l heure de prélèvement. Dans tous les cas, ces éléments seront sur la prescription ou la fiche de prélèvement. Version électronique GEDEON faisant foi 9/26

10 3 - Exigences relatives aux conditions de conservation et d acheminement Le transport des examens vers le laboratoire doit s effectuer le plus rapidement possible après le prélèvement en prenant toutes les mesures nécessaires pour éviter les risques de contamination du personnel. Il doit se faire selon la réglementation en vigueur (la séparation échantillons/documents est obligatoire, l emballage doit répondre aux exigences réglementaires). 3.1 Examens IHE Le délai d acheminement des échantillons primaires doit être inférieur à 72 heures (moins de 48 heures pour la recherche et le titrage des agglutinines froides et TDA). En cas de transmission non immédiate du prélèvement (> 12 heures), les prélèvements doivent être conservés entre 2 et 8 C avant l envoi, à l exception des agglutinines froides (à conserver à température du laboratoire avant envoi). Les prélèvements pour examens IHE ne nécessitent pas le respect de température particulière de transport (à l'exception des températures négatives). Un contrôle à réception écartera les prélèvements hémolysés. Remarque : lorsque 2 déterminations de groupage sont adressées concomitamment, chaque demande doit être séparée physiquement afin de pouvoir différencier les deux prélèvements. 3.2 Examens HLA Les échantillons doivent être acheminés dans les meilleurs délais : 2 jours pour les recherches d anticorps anti-hla et les typages HLA par technique de lymphocytotoxicité 4 jours pour les typages HLA par technique de biologie moléculaire Les prélèvements sont conservés et transportés à température ambiante. Pour les examens envoyés et réalisés au Laboratoire EFS de DECINES se référer au manuel de prélèvement accessible sur le site internet du LBM Rhône Alpes : Version électronique GEDEON faisant foi 10/26

11 4 Gestion des non-conformités (NC) La revue de contrat est conduite pour chaque demande. A réception des examens, les demandes sont horodatées. Outre la vérification de la conformité, une adaptation éventuelle de la prescription peut être réalisée (ajout ou suppression d examens), faisant systématiquement l objet d un enregistrement informatique et d une information au prescripteur. Les prescriptions orales supplémentaires sont acceptées et tracées sur la demande initiale si le prélèvement est conforme. La détection au laboratoire d une NC de demande peut être réalisée à trois niveaux : à l occasion de la vérification pré-analytique, à l occasion de l enregistrement informatique et à l occasion de la confrontation des résultats avec l antériorité. 4.1 Anomalies à réception A la réception des demandes, la vérification pré-analytique s assure du respect des exigences décrites ci-dessus. Toute NC fait l objet d un enregistrement informatique. Elle est signalée sur le compte rendu de résultats. La conduite à tenir vis à vis des NC est la suivante : l observation d une NC de la demande d examen ou de l échantillon biologique peut entraîner le refus de la demande ou sa mise en attente pour complément d information, en fonction de son niveau de gravité. Dans aucun cas, un refus ne doit retarder la fourniture des Produits Sanguins Labiles (PSL) notamment en cas d urgence vitale, ni l éventualité d une greffe. En cas de NC majeure, aucun examen n est réalisé. Dans certains cas (prélèvement unique, d obtention difficile ou en cas d urgence vitale), le biologiste peut déroger à ces critères. Cette dérogation est tracée. Lors de discordances d identité patients / données connues à l EFS, une conduite à tenir est formalisée : demande de renseignements complémentaires en vue de mise à jour du dossier. Anomalies imposant un nouveau prélèvement En cas d anomalie majeure, il sera demandé, un nouveau prélèvement Exemples d anomalies imposant un nouveau prélèvement : - Absence de demande d examens. - Tube sans identité, présence de plusieurs étiquettes, étiquette illisible. - Tube avec identité incomplète. - Discordance existante entre l identité figurant sur le tube et la feuille de demande d examens. - Double étiquetage (2 étiquettes de 2 patients différents superposées) - Tube absent, vide ou non adapté (erreur d anticoagulant), - Tube décanté (hors prélèvement(s) précieux (contraintes de logistiques, prélèvements de banque de sang plaquettaire, donneurs étrangers), - Pour les examens de groupages (érythrocytaires ABORHK): Absence de critères permettant de différencier 2 déterminations demandées simultanément dans le même sachet, empêchant l association tube/demande. Les deux determinations sont refusées. - Pour les examens de groupages (érythrocytaires ABORHK, plaquettaires HPA, leucocytaires HLA) : absence de critères acceptables permettant de garantir qu il s agit de deux actes de prélèvement différents (les deux groupes prélevés par la même personne au même moment) : Seule une détermination peut être effectuée. Version électronique GEDEON faisant foi 11/26

12 Anomalies imposant une reformulation de la demande Une régularisation peut s avérer possible pour des anomalies susceptibles de n imposer qu une reformulation de la demande, si elle est réalisée dans un délai compatible avec l exécution de l examen et de rendu des résultats. Elle est tracée sur le compte rendu d examens. Régularisation : il s agit de la réception d une nouvelle demande conforme (par fax ou transmission à l accueil du laboratoire) ou de l obtention par téléphone des renseignements manquants (ceux-ci sont tracés par le laboratoire) Exemples d anomalies imposant une reformulation de la demande d examens : - Absence de l identification du préleveur - Absence du nom du prescripteur. - Absence du nom du service prescripteur. - Absence de la date et/ou heure de prélèvement. - Absence de la nature des examens à réaliser. - Conditions de dérogation S il s agit d un échantillon critique ou irremplaçable du point de vue clinique, d obtention difficile ou en cas d urgence, l examen pourra être réalisé sous dérogation formalisée. Le compte rendu indiquera la nature du problème et, le cas échéant, les conséquences qui en résultent sur l interprétation des résultats. 4.2 Autres anomalies détectées Une remise en cause du lien patient / échantillon primaire peut survenir à l occasion de la confrontation du résultat de certains examens avec leur antériorité, après élimination d une cause liée au laboratoire. Cette discordance avec l historique pourra faire évoquer entre autres les hypothèses suivantes : - Greffe, transfusions récentes, - Erreur de patient pour l échantillon concerné, - erreur de patient lors d un prélèvement antérieur, - patient réellement différent (homonymie, usurpation d identité). La discordance est tracée dans le logiciel médico-technique; de nouveaux prélèvements et demandes d examens sont nécessaires. Dans tous les cas, l hémovigilant de l ES, le prescripteur et/ou le cadre du service sont informés, ainsi que le biologiste dans le cadre d un prélèvement transmis. Version électronique GEDEON faisant foi 12/26

13 5 Liste des examens 5.1 Examens Immuno-Hématologie EXAMENS Type Echantillon Groupe sanguin standard ABO RH1 Phénotype érythrocytaire RH KEL1 1 tube EDTA 5mL Phénotype étendu (FY1, FY2, JK1, JK2, MNS3, MNS4) Phénotype élargi (autres antigènes) 1 tube EDTA 5mL PRINCIPE DE LA METHODE - COMMENTAIRES Détermination du groupe sanguin et du phénotype Rhésus D et du phénotype érythrocytaire C,E,c,e,K (RH1, RH2, RH3, RH4, RH5, KEL1) par hémagglutination en vue d une transfusion ou dans le cadre d un suivi de grossesse. Un groupage sanguin ABO RHKEL1 valide est réalisé sur deux prélèvements effectués à des moments différents ou par deux préleveurs à raison d une détermination par prélèvement. Le Groupe sanguin standard ABO RH1 et le Phénotype érythrocytaire RH KEL1 sont réalisés systématiquement de façon associée. La recherche de D faible ou D partiel s accompagne obligatoirement du groupe sanguin et du phénotype RH KEL1 Les tubes EDTA sont acceptés de 2 à 4 ml Pour les enfants de moins de 6 mois, un volume minimal de 500 μl est exceptionnellement accepté Un phénotype étendu comporte 6 antigènes : FY1, FY2, JK1, JK2, MNS3, MNS4 déterminés par hémagglutination. Cette analyse est réalisée : -Chez les patients d hématologie (incluant les thalassémies) : une détermination est conseillé (rarement respecté surtout indicatif en cas de rares allo-anticorps (ACI) et surtout d'autoanticorps). -Chez les patients présentant un syndrôme drépanocytaire majeur : deux déterminations sont nécessaires (patients transfusés en respectant le phénotype étendu). Il est recommandé de réaliser également le phénotype MNS1/MNS2. -Chez les patients traités par anti-cd38 : deux déterminations sont nécessaires. -Chez les patients présentant une allo-immunisation simple ou complexe pouvant masquer un alloanticorps (ex : anti-rh4 ; anti-mns1 ou mélange d anticorps) : à l initiative du biologiste : une détermination est conseillée. -Chez les patients présentant un allo-anticorps anti-jk1 ou JK2 ou FY1 ou FY2 ou MNS3 ou MNS4 permettant la validation de l identification de l anticorps anti-érythrocytaire (deux déterminations sont nécessaires selon disponibilité du second prélèvement). En l absence de résultat valide de groupage ABO-RH1 et/ou de phénotypage RH-KEL1, cette analyse est obligatoirement complétée par un groupage ABO-RH1 et un phénotypage RH-KEL1. Un phénotype élargi comporte la détermination des autres antigènes : MNS1, MNS2, LE1, LE2, P1, KEL2, KEL3, KEL4, LU1, LU2, RH8, KEL2 par hémagglutination. Cette analyse est réalisée : Chez les patients présentant une allo-immunisation complexe pouvant évoquer un anti-public ; Chez les patients présentant un allo-anticorps correspondant à un des antigènes du phénotype élargi. Particularités : Les phénotypes étendus et élargis ne sont pas réalisables chez un patient avec antécédent transfusionnel de CGR de moins de 4 derniers mois. La détermination des antigènes LE1, LE2 n est pas réalisable pour les enfants de moins de 2 ans. Les antigènes Lewis peuvent disparaitre chez la femme enceinte (donc ne sont pas réaliser). La détermination de l antigène P1 n est pas réalisable pour les enfants de moins de 7 ans. Ces examens sont facturés (maximum 5 antigènes facturés). Version électronique GEDEON faisant foi 13/26

14 EXAMENS Type Echantillon Recherche d Anticorps Irréguliers antiérythrocytaires (RAI) 1 tube EDTA 5mL PRINCIPE DE LA METHODE - COMMENTAIRES Détermination par hémagglutination de la présence d anticorps anti-érythrocytaire dans le plasma en vue d une transfusion, après transfusion ou dans le cadre d un suivi de grossesse. Cet examen comporte un dépistage suivi d une identification s il est positif. En cas d échantillon sanguin reçu au laboratoire dans un délai supérieur à 72 heures suivant le prélèvement, la RAI n est pas validée pour la transfusion sauf protocole RAI étendue. Pour les demandes d identification ou de suivi de prophylaxie anti- RH, l étape de dépistage n est pas systématique à condition de joindre les résultats du dépistage avec l antigramme et indiquer les données concernant l injection (cf. chapitre 1.2.1) Pour les enfants de moins de 6 mois, le volume minimal du prélèvement est de 2 ml Dans le cadre d une transfusion néonatale (de 0 à 4 mois), la RAI est valable jusqu au 4ème mois échu de l enfant que ce dernier soit transfusé ou non. Une RAI maternelle datant de moins de 3 jours avant l accouchement peut se substituer à la RAI de l enfant. Epreuve Directe de Compatibilité au laboratoire (EDC) 1 tube EDTA 5mL Test Direct à l Antiglobuline (TDA Anciennement Test de Coombs Direct) 1 tube EDTA 5mL Compatibilité in vitro entre les Concentrés de Globules Rouges à transfuser et le plasma du patient par hémagglutination. L EDC n est jamais réalisée sans RAI valide. Document associé : demande de PSL (nombre et qualification). En cas d examen réalisé pour un nouveau-né de moins de 4 mois, joindre si possible un échantillon sanguin de la mère. En cas de RAI positive chez la mère ou l enfant et en cas de TDA positif chez l enfant, une épreuve de compatibilité est obligatoire avant toute transfusion. Mise en évidence de la sensibilisation in vivo des hématies dans le cadre des anémies hémolytiques, d un incident transfusionnel, du suivi des greffés de CSH et des nouveau-nés. Ce test est effectué quand on suspecte la présence dans le plasma d auto-anticorps antiérythrocytaire ou d allo-anticorps anti-érythrocytaire dans un contexte post transfusionnel récent. Test effectué avec une antiglobuline anti-igg et une antiglobuline anti-c3d En cas de TDA positif de type complément, une recherche d agglutinines froides peut être ajoutée à l initiative du biologiste En cas de TDA positif en contexte post transfusionnel, une épreuve d élution peut être ajoutée à l initiative du biologiste Délai de validité de l échantillon : 48h Titrage d Agglutinines Froides 1 tube EDTA 5mL Mise en évidence et titrage éventuel d agglutinines froides dans le plasma d un patient dans le cadre d un bilan d anémie hémolytique auto-immune La réalisation d un TDA (IgG et C3D) est associée à cet examen. Cet examen peut être effectué à l initiative du biologiste à l occasion d un TDA positif de type complément (C3d). Transport et conservation à température ambiante (< 48h). Version électronique GEDEON faisant foi 14/26

15 EXAMENS PRINCIPE DE LA METHODE - COMMENTAIRES Type Echantillon Titrage d anticorps Immuns/ Naturels anti-a / anti-b 1 tube EDTA 5mL Détermination du titre des anticorps anti-a et anti-b naturels et/ou immuns dans le cadre du suivi des greffes de cellules souches hématopoïétiques, de greffes d organes. Le titrage est réalisé sur le prélèvement du donneur et du receveur. Détermination du titre des anticorps anti-a et anti-b naturels et/ou immuns dans le cadre de l incompatibilité foeto-maternelle de type ABO. Le titrage est réalisé uniquement sur le prélèvement maternel. Dans ce cas, fournir le résultat du groupe sanguin et du test direct à l antiglobuline du nouveau-né. Titrage d anticorps irréguliers autres que les anticorps immuns anti-a / anti-b 1 tube EDTA 5mL Exploration d un déficit immunitaire Titrage obligatoire d un allo-anticorps anti-érythrocytaire d intérêt obstétrical dans le cadre du suivi d une grossesse. Cet examen peut être ajouté à l initiative du biologiste après identification d un anticorps immun dans le cadre d un suivi de grossesse. Dans ce cadre, titrage effectué comparativement avec l échantillon antérieur conservé en sérothèque. L élution permet en cas de sensibilisation des hématies du patient par des auto-anticorps ou des allo-anticorps, de dissocier les liaisons antigènes-anticorps et de recueillir les éventuels anticorps fixés sur les hématies puis de les identifier. Elution d anticorps 1 tube EDTA 5mL Cet examen est mis en œuvre en cas : - d incompatibilité fœto-maternelle (IFM ABO, IFM par allo Ac maternel de nature IgG), - d un Effet Indésirable Receveur - à l initiative du biologiste à la découverte d un TDA positif (type IgG) L élution doit toujours être suivie d une identification de l éluât en utilisant un panel d hématies-tests adapté Test de Kleihauer 1 tube EDTA 5mL Technique cytochimique (frottis sur lame) qui permet de quantifier la présence d érythrocytes contenant de l hémoglobine fœtale. Interprétation rendue en fonction du nombre d hématies maternelles. Une technique complémentaire en cytométrie de flux peut être réalisée sur le site de GHE du LBM Rhônes-Alpes (se référer au manuel de prélèvement accessible sur le site internet du LBM Rhône Alpes : Remarque : examens réalisables sur un même échantillon de 5 ml : groupe sanguin RH KEL1, phénotype étendu, phénotype élargie, test direct à l antiglobuline, recherche d anticorps irréguliers, épreuve de compatibilité. Version électronique GEDEON faisant foi 15/26

16 5.2 Examens HLA EXAMENS ECHANTILLONS DE SANG PRINCIPES DES METHODES Typage HLA classe I et II Chimérisme 2x 5 ml EDTA (1 er détermination) 2x5 ml EDTA + 2x10 ml ACD (2 ème détermination) 4 x 5 ml EDTA Sérologie : technique de lymphocytotoxicité complément dépendante sur des cellules mononuclées isolées à partir du sang périphérique, des ganglions ou de la rate. Biologie moléculaire : technique PCR-SSP, Luminex (PCR-SSO) sur ADN extrait à partir des cellules nucléées. Technique PCR-STR en multiplex sur ADN extrait à partir du sang périphérique ou de la moelle. Un tri cellulaire des populations CD3 et CD33 est réalisé en parallèle du sang total. Recherche et identification Des Ac anti HLA 1 x 7 ml sec En lymphocytotoxicité complément dépendante avec la détermination des isotypes IgG/IgM. En technique sensible : Luminex pour le dépistage et l identification des Ac anti HLA et des Ag permis. Cross match lymphocytaire sur lymphocytes T et B Receveur : 1x7mL sec + 2x10mL ACD Donneur d organe : 2 à 3 ganglions et un morceau de la rate Donneur vivant : 4x10mL ACD En lymphocytotoxicité complément dépendante. En Technique sensible = Cytométrie en flux Contrôle du typage HLA du donneur d organe en lymphocytotoxicité/ PCR-SSP. Pour les examens envoyés et réalisés au Laboratoire EFS de DECINES se référer au manuel de prélèvement accessible sur le site internet du LBM Rhône Alpes : Version électronique GEDEON faisant foi 16/26

17 6 Modalités de prescriptions d examens complémentaires Le laboratoire pourra être en devoir d ajouter ou conseiller des examens complémentaires pour la qualité des soins prodigués aux patients dans les cas suivants : - permettre l interprétation des examens réalisés (ex : phénotype érythrocytaire si identification d anticorps). - assurer la sécurité transfusionnelle (ex : élution d anticorps fixés sur les globules rouges si Test Direct à l Antiglobuline de type IgG et antécédent transfusionnel de moins de 3 mois.). - s assurer de l identité du patient. - assurer le suivi Immuno-hématologique des grossesses (ex : titrage si identification d alloanticorps ). Le prescripteur peut rajouter oralement des examens complémentaires à une demande après que celle-ci soit enregistrée au laboratoire. Cette information sera tracée sur la prescription. Le compte-rendu précise, le cas échéant, les modifications de la prescription médicale. Selon les recommandations de l Agence de la Biomédecine, ou les protocoles convenus avec les clients, ou après validation par le prescripteur et/ou CSTH dans le cadre des ES, le laboratoire peut être amené à réaliser des examens complémentaires nécessaires à l interprétation des résultats et à la conclusion du bilan, à conseiller des examens complémentaires jugés utiles dans le cadre du suivi du patient, ou à supprimer des examens inutiles ou redondants pour le même patient. En cas de prélèvement avéré insuffisant pour valider des examens complémentaires, le prescripteur en est informé sur le compte-rendu. Les examens complémentaires seront traités comme une nouvelle demande. 7 Prise en charge des demandes d examens Délai de rendu 7.1 Examens IHE Après la revue de contrat, les demandes d examens sont prises en charge et les examens réalisés dans les délais spécifiés dans l Annexe 1. En cas d urgence, la réalisation de l examen est effectuée à réception des échantillons et les résultats sont communiqués le plus rapidement possible. En cas de limite de méthode, de difficulté fortuite et ponctuelle d un des sites à assurer le rendu de résultats, une transmission entre sites EFS AULO est possible. Rq: le laboratoire IHE ne réalise que les examens cités dans la liste des examens (Annexe 1). Néanmoins, il peut être amené à transmettre à des laboratoires spécialisés, certains examens liés à la sécurité transfusionnelle ou foeto-maternelle tels que : dosage pondéral, génotypage érythrocytaire ( examen pouvant être Hors Nomenclature)...dans ces cas, le délai de rendu est précisé dans le CR. Version électronique GEDEON faisant foi 17/26

18 Cas particulier : Le génotypage RHD foetal sur plasma maternel est un examen biologique de diagnostic prénatal non invasif : mise en évidence du gène RHD fœtal codant pour l antigène érythrocytaire RH1 dans le sang des femmes enceintes RH :-1 (technique de biologie moléculaire ; 2 tubes EDTA 5mL et 1 tube sec sur gel séparateur ; codification NABM 4085 ; B260). Cette demande doit être accompagnée d un formulaire de demande spécifique comportant obligatoirement la signature du médecin prescripteur ayant apporté l information à la patiente et la signature de cette dernière qui atteste de son consentement éclairé. 7.2 Examens HLA En cas d urgence (typage pour PMO, crossmatch pré-greffe), la réalisation des examens 24h/24 est effectuée à réception des échantillons et les résultats sont communiqués le plus rapidement possible au service prescripteur (délai 5h). En dehors de cas d urgence : o Typage HLA (délai : 2 à 3 semaines) o Recherche et identification anticorps anti-hla (délai : 2 à 4 semaines) o Chimérisme (délai 15 jours) 8 Transmission des comptes-rendus d examens Les résultats d examens sont transmis au prescripteur dans le respect des dispositions réglementaires permettant de sauvegarder la confidentialité. Aucun résultat de groupe n est transmis par téléphone. Les comptes rendus sont adressés au prescripteur (ou ES prescripteur) et/ou au patient soit : - Par courrier, sous enveloppe, expédition selon la demande contractuelle du client, par voie postale ou par coursier de l ES. - Directement retirés par le patient (sur présentation d une pièce d identité). - Par fax (à titre exceptionnel et à condition que le client s assure que le télécopieur se situe dans un endroit permettant le respect de la confidentialité des résultats des patients, procédure encadrée réservée aux cas d urgence signalés ou en cas d exigence du client). Il est suivi de l envoi du compte rendu par courrier. - Par réseau informatique (pour les examens et clients concernés sous réserve d une convention et d un dossier de validation) suivi de l envoi du compte-rendu par courrier. Le prescripteur est averti par téléphone lorsqu un résultat est critique ou nécessite une attitude thérapeutique particulière. Version électronique GEDEON faisant foi 18/26

19 9 Modalités de conservation ou de restitution des échantillons 9.1 Examens IHE Après examens, les échantillons sont conservés à minima 4 jours à température contrôlée, ce qui permet dans ce délai: - de réaliser un examen complémentaire (selon validité de la méthode et quantité restante). - de demander la restitution des échantillons. Cette demande peut être faite par écrit par le prescripteur, le LBM ou l établissement de soin, à qui revient l organisation de retour. Les plasmas de femmes enceintes immunisées sont conservés en sérothèque au laboratoire. Dans le cadre d un suivi de grossesse, le titrage est effectué comparativement sur le prélèvement présent et sur le prélèvement antérieur. 9.2 Examens HLA Le laboratoire conditionne les échantillons selon les examens demandés (sérum, cellules, ADN) et les conserve pour une durée garantissant la possibilité de réaliser des examens complémentaires (selon quantité restante). 10 Facturation Les examens réalisés sont facturés au client demandeur : - selon la réglementation en vigueur pour les actes cotés en B - selon Annexe 1 et les modalités de fonctionnement établies entre le client et l EFS pour les examens IHE - selon les modalités de fonctionnement établies entre le client et l EFS pour les examens HLA. Version électronique GEDEON faisant foi 19/26

20 D - MANAGEMENT DE LA QUALITE L EFS AuRA est certifié ISO 9001 pour l ensemble de ses activités depuis Le laboratoire unique multisite AULO est engagé dans une démarche d accréditation selon la norme ISO Le certificat n du «COFRAC» mentionnant les examens réalisés sous accréditation selon la norme NF EN ISO15189 est consultable : Liste des sites et portées disponibles sur Le site d histocompatibilité est accrédité: WMDA pour le registre des donneurs de CSH, EFI pour l ensemble de leurs activités de greffe d organes/csh et association HLA-maladies. Tous les examens sont réalisés conformément à des modes opératoires écrits, mis à jour au fur et à mesure de l évolution des techniques. La politique de contrôle qualité interne de chaque examen fait l objet d une description détaillée quant aux échantillons de contrôles, à leurs conditions de réalisation, aux règles d acceptabilité et à la conduite à tenir en cas de NC. La conformité des activités des laboratoires par rapport aux différents référentiels opposables est régulièrement évaluée par des audits internes. Toute NC relevée donne lieu à une analyse des causes suivie d action(s) corrective(s) dont l efficacité est suivie dans le temps. Le laboratoire s engage à ne collecter que les informations nécessaires à l identification correcte du patient, à la réalisation des examens et aux besoins de facturation. Les patients disposent d un droit d accès et, en cas d inexactitude, de rectification des données les concernant. Le laboratoire s engage à assurer la confidentialité des données collectées, des résultats des examens transmis et la protection du stockage électronique des données. Les accès aux locaux du LBM sont sécurisés et le personnel est soumis au secret professionnel, à la clause de non concurrence et de conflit d intérêt. 1 Continuité du service La continuité de service est organisée 24h/24 : - par la présence en garde ou en astreinte de technicien(s) - par l existence d une astreinte de biologie, de conseil transfusionnel et de greffe. Des procédures dites dégradées décrivent les modalités de gestion en situation de crise pouvant mettre en cause la continuité du service. 2 Ecoute client Dans un souci d efficacité et d amélioration continue de la qualité, le laboratoire a mis en place une démarche d écoute client à travers laquelle toutes les réclamations et observations des clients sont prises en compte et traitées dans la mesure du possible. 3 Service à la clientèle De façon à assurer aux clients une totale transparence des activités du LBM, ces derniers ont la possibilité de visiter les sites du laboratoire sur simple demande. En cas de retard dans la réalisation des examens, de changement de méthode ou de modalités de transmission d examens non énoncés ci-dessus, chaque site s engage à prévenir ses clients notamment en cas d impact pour le patient. Les biologistes assurent les conseils en matière de choix des examens et d utilisation des prestations du laboratoire, notamment quant à la fréquence des prescriptions et le type d échantillon primaire requis. Ils fournissent les prestations de conseil et les avis et interprétations en fonction des résultats des examens. Les biologistes participent régulièrement aux staffs cliniques avec les services de transplantation ou le CSTH. L ensemble des biologistes est à la disposition des prescripteurs à l occasion de réunions ayant pour objet le recours aux prestations du laboratoire et la délivrance de conseils sur des sujets scientifiques particuliers. Version électronique GEDEON faisant foi 20/26

21 GLOSSAIRE AULO Auvergne-Loire AuRA Auvergne Rhône-Alpes CSH Cellules Souches Hématopoïétiques CSTH Comité de Sécurité Transfusionnelle et d Hémovigilance DASRI Déchets d Activités de Soins à Risques Infectieux EDC Epreuve Directe de Compatibilité EFI European Federation of Immunogenetics EFS Etablissement Français du Sang EIR Effet Indésirable Receveur ES Etablissement de Santé HLA Human Leucocyte Antigen HPA Human Platelet Antigen IFM Incompatibilité Foeto-Maternelle IHE Immuno-Hématologie Erythrocytaire LBM Laboratoire de Biologie Médicale NC Non-conformité PMO Prélèvement Multi Organes PSL Produits Sanguins Labiles RAI Recherche d Anticorps Irréguliers TDA Test Direct à l Antiglobuline TRALI Transfusion-Related Acute Lung Injury/syndrome respiratoire aigu post- transfusionnel WMDA World Marrow Donor Association Version électronique GEDEON faisant foi 21/26

22 ANNEXES Version électronique GEDEON faisant foi 22/26

23 Annexe 1 : Liste des examens IHE Examen Tube Clermont-Ferrand Saint-Priest-en-Jarez Le-Puy-en-Velay Moulins Roanne Délai de réalisation Réalisée dans le cadre de la permanence des soins Cotation Code NABM Réception (*pour les demandes urgentes) Groupage sanguin ABO- RH1 24h/24 24h/24 24h/24* 24h/24* 24h/24 1 tube EDTA 5 ml X X X X X 24h ¹ OUI B Phénotypes RH (RH2, 1 tube RH3, RH4, RH5) et EDTA 5 ml X X X X X 24h ¹ OUI B Kell (KEL1) Antigène érythrocytaire FY1 FY2 JK1 JK2 MNS3 MNS4 et autres antigènes RAI Dépistage RAI - Identification EDC : Epreuve Directe de Compatibilitépour chaque unité de sang TDA : Test Direct à l Antiglobuline AGH spécifique Titrage des allo anticorps (autres que les anticorps naturels ou anti A ou anti B) dans le cadre d'un suivi de grossesse. AF : Titrage d Agglutinines Froides Titrage des anticorps Immuns anti-a anti-b Elution d anticorps Test de Kleihauer Quantification des Hématies X : réalisé sur site. 1 tube EDTA 5 ml X X T T T 48h ¹ NON B15 par antigène (max 5 Ag) tube EDTA 5 ml X X X X X 24h ¹ OUI B tube EDTA 5 ml X X X X X 24h ¹ ² OUI B tube EDTA 5 ml X X X X X 24h ¹ ² 1 tube EDTA 5 ml X X X X X 24h ¹ OUI OUI B B15 par AGH Spécifique tube EDTA 5 ml X X T T T 48h ¹ NON B tube EDTA 5 ml X X T T T 48h ¹ NON B B15 par tube X X T T T 48h ¹ NON spécificité 1151 EDTA 5 ml 1 tube EDTA 5 ml X X T T T 48h ¹ NON B tube EDTA 5 ml X T 24h ¹ NON B T : transmission intersite (vers les sites de Clermont-Ferrand ou Saint Priest en Jarez). ¹ : En jour ouvré, hors situation d urgence. ² : Sauf cas complexe. Le délai d acheminement des échantillons primaires doit être le plus court possible afin d obtenir des résultats d examens compatibles avec leur utilisation clinique et les méthodes validées du laboratoire. Les prélèvements sont transportés à température ambiante : -en contexte transfusionnel : le plus rapidement après le prélèvement (limite de validité usuelle de la RAI 72h). -en cas de transmission différée ( 48h) : conserver l échantillon à 5 +/- 3 C avant transport. Remarque : TDA et Agglutinines Froides délai de transport 48 h maximum, pour Agglutinines Froides strictement à température ambiante. Version électronique GEDEON faisant foi 23/26

24 Annexe 2 : Liste des examens HLA site St Etienne Bellevue LIBELLE DE L EXAMEN Typage HLA Typage HLA classe I par technique de lymphocytotoxicité Typage HLA classe I (ABC) générique par technique de biologie moléculaire Typage HLA classe II (DRDQDP) générique par technique de biologie moléculaire Typage HLA classe I (ABC) allélique par technique de biologie moléculaire Typage HLA classe II (DRDQDP) allélique par technique de biologie moléculaire Recherche d allèles dans le cadre de susceptibilité aux maladies auto-immunes et de pharmacogénétique 1 Anticorps anti HLA Recherche Ac anti Lymphocytaires par technique de lymphocytotoxicité avec et sans DTT Recherche des Ac anti HLA classe I et II en Luminex Identification des Ag permis de classe I en Single Antigen Identification des Ag permis de classe II en Single Antigen Cross match Cross match par technique de lymphocytotoxicité Cross match par technique de cytométrie en Flux Chimérisme Etude du chimérisme sur sang ou moelle Etude du chimérisme sur cellules triées CD3/CD33 du sang ou de la moelle Mise au point d'un suivi de chimérisme post greffe Plaquettes1 Typage plaquettaire (HPA) Dépistage Auto Ac anti plaquettes Identification des Auto Ac anti plaquettes Dépistage Allo Ac anti plaquettes Identification des Allo Ac anti plaquettes Cross match plaquettaire Pour les examens envoyés et réalisés au Laboratoire EFS de DECINES se référer au manuel de prélèvement accessible sur le site internet du LBM Rhône Alpes : Version électronique GEDEON faisant foi 24/26

25 Annexe 3 : Formulaires de prescription EXAMENS IHE Disponible en ligne à partir du lien suivant : EXAMENS HLA Disponible en ligne à partir du lien suivant : Version électronique GEDEON faisant foi 25/26

26 Etablissement français du sang Auvergne Rhône-Alpes 111 rue Elisée Reclus DECINES CHARPIEU Tél : Fax : Version électronique GEDEON faisant foi 26/26

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