Évaluation d une trousse de réactifs consommables compatibles SFRI sur l analyseur de numération sanguine Micros 60

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1 pratique quotidienne abc Ann Biol Clin 2007 ; 65 (6) : Évaluation d une trousse de réactifs consommables compatibles sur l analyseur de numération sanguine Micros 60 Statistical comparison of the results of the blood cells count obtained with a Micros 60 analyzer using the genuine reagents and generics reagents kits R. Taouinet 1 G. Mougin 2 C. Brun 2 P. Darodes de Tailly 1 1 Établissement français du sang Lorraine Champagne, Nancy <patrickdetailly@wanadoo.fr> 2 Bordeaux Résumé. En utilisant d une part, la trousse de réactifs consommables originaux et, d autre part, la trousse de consommables compatibles commercialisée par la société sur l automate d hématologie 18 paramètres Micros 60, les résultats de Numération sanguine obtenus ont été comparés. Matériel et méthode : 50 échantillons de sang issus de donneurs de sang bénévoles obtenus après leur exploitation biologique par le service de qualification du don ont été étudiés. Les paramètres suivants ont été comparés : numération des globules rouges, des leucocytes totaux, des plaquettes, mesure du taux d hémoglobine, mesure du taux d hématocrite. La linéarité, le coefficient de corrélation, le coefficient de variation (%), les moyennes et leur écart-type ont été calculés et comparés. Résultats : les calculs du coefficient de corrélation, du coefficient de variation et de la linéarité sont excellents. Ils montrent une superposition des résultats mesurés quelle que soit la trousse de réactifs consommables utilisée. Conclusion : les résultats obtenus permettent de conclure à l absence de risque qualitatif dans la mesure des paramètres de numération, en utilisant une trousse de réactifs consommables compatibles. L utilisation de cette trousse devrait contribuer à améliorer très significativement le ratio Coût Qualité des paramètres de numération sanguine. Mots clés : analyseur d hématologie, consommables génériques, comparaison statistique doi: /abc Article reçu le 19 mars 2007, accepté le 31 août 2007 Abstract. Using the haematology automated analyser Micros 60 (Horiba, Montpellier, France), the results of the blood cells count obtained with the generic reagents kit made by Company (Saint-Jean d Illac, France, have been compared with the results obtained with the genuine reagents supplied by Horiba Company. Materials and method: 50 whole blood samples (EDTA tubes) collected during the blood donation procedures were used after their biological tests in the blood bank, for the statistical study. Linearity, correlation coefficients, coefficient of variation (CV), means and DS were calculated and compared. Results: overall correlations calculated between the both reagents kits were excellent. No statistical differences were found comparing the means, linearity and CV. These results were suggesting that uses of these generic reagents kits sensibly were able to improve the ratio Price Quality of the blood cell counts in routine. Key words: haematology analyzer, genuine and generic reagents, statistical study Ann Biol Clin, vol. 65, n 6, novembre-décembre

2 Comparaison des résultats sur les Contrôles normaux L étude statistique de comparaison des moyennes obtenues sur les 5 paramètres mesurés sur les Contrôles normaux ne montrait aucune différence statistique significapratique quotidienne La commercialisation de réactifs génériques de laboratoire, à l instar des médicaments, pose toujours la question de leur qualité au moins équivalente au produit original au regard de leur moindre coût. Pour y répondre l EFS Lorraine Champagne a été sollicité par la société, créée en 1977, pour évaluer une trousse de réactifs génériques en comparaison avec la trousse des réactifs originaux sur un automate d hématologie. L objet de l étude a consisté à comparer les résultats des paramètres mesurés selon les recommandations de l ICSH [1], sur le compteur de cellules Micros 60 de la société Horiba en utilisant d une part, les réactifs consommables originaux (réactifs Horiba, Montpellier, France) et, d autre part, les réactifs de type compatible (réactifs, Saint-Jean d Illac, France). Matériel et méthode Un analyseur d hématologie 18 paramètres Micros 60 (Horiba ) a été fourni par la société à l établissement français du sang Lorraine Champagne dans son site de Nancy. Le choix de l automate Micros 60 a été proposé en raison d une part, de sa grande diffusion en Europe et, d autre part, de sa simplicité et de sa robustesse d utilisation. Les tests d évaluation ont été réalisés dans les locaux du Laboratoire de qualification biologique du don. Cet analyseur produit 18 paramètres de la numération sanguine dont en particulier : 5 paramètres mesurés : le nombre de globules rouges (GR : /L, impédancemétrie), le nombre de globules blancs (GB : 10 9 /L, impédancemétrie après lyse des GR), le nombre des plaquettes (Pl : 10 9 /L, impédancemétrie), le taux d hémoglobine (Hb : g/dl, photométrie après lyse des GR), le taux d hématocrite (Ht : %, intégration numérique) ; 3 paramètres calculés : le volume globulaire moyen (VGM ; calcul : taux d hématocrite/nombre de GR ; unité : lm 3 ), le taux moyen en hémoglobine intraglobulaire (TGMH ; calcul : taux d hémoglobine/nombre de GR ; unité : pg), la concentration moyenne en hémoglobine intraglobulaire (CCMH ; calcul : (taux d hémoglobine/ taux d hématocrite) x 100 ; unité : g/dl). Consommables La trousse de réactifs Horiba comportait : 1 diluant, 1 tampon de lyse et un nettoyant. La trousse de réactifs compatibles comportait : 1 diluant, 1 tampon de lyse et un nettoyant. Échantillons testés Contrôles normaux : cinquante tubes de sang total prélevés sur EDTA obtenus à partir d une population de donneurs de sang bénévoles ont été récupérés après leur exploitation (groupage sanguin et numération sanguine réglementaires) par le laboratoire de la qualification biologique du don (QBD) de l EFS Lorraine Champagne. Ces échantillons avaient été précédemment testés par le laboratoire de QBD sur automate Sysmex XT, Roche. Chaque tube transmis était accompagné de ses valeurs respectives de numération obtenue (valeurs cibles). Contrôles bas : dix tubes prélevés dans les mêmes circonstances ont été dilués au demi dans du sérum physiologique (1 volume/1 volume). Contrôles hauts : dix tubes prélevés dans les mêmes circonstances ont été préalablement centrifugés et la moitié du surnageant plasmatique a été soustrait (concentration : x 1,5). Comparaison des mesures La comparaison des mesures a été réalisée : après calibration de l analyseur (échantillons calibrants du fournisseur Horiba ), chaque tube échantillon a été passé manuellement en utilisant la trousse réactif fournisseur ; puis après lavage et recalibration (échantillons calibrants du fournisseur Horiba ) avec la trousse de réactifs compatibles, chaque tube échantillon a été passé manuellement en utilisant la trousse de réactifs compatibles. Les résultats mesurés par l automate (et non calculés) obtenus avec chacune des deux trousses de réactifs ont été respectivement comparés. Tests de répétabilité Ils ont été effectués pour des raisons arbitraires sur les 10 échantillons Contrôles hauts seulement. Il a été effectué 3 passages par échantillon, respectivement avec les deux trousses de réactif. Le coefficient de variation (CV) a été calculé puis exprimé en pourcentage. Les tests de répétabilité n ont pas été effectués sur les Contrôles normaux et sur les Contrôles bas pour des raisons techniques. En effet, après manipulation des tubes primaires, les volumes résiduels des échantillons restant dans les tubes Contrôles normaux et Contrôles bas étaient trop limités pour permettre des tests de répétabilité fiables en nombre et en qualité. Résultats 672 Ann Biol Clin, vol. 65, n 6, novembre-décembre 2007

3 Analyseur de numération sanguine tive selon qu on utilisait les réactifs compatibles ou les réactifs originaux. Le calcul du coefficient de corrélation (tableau 1) entre les deux séries montrait une superposition excellente des points mesurés. La représentation sous forme de courbes (figure 1) confirmait cette très bonne superposition des points mesurés malgré l existence d un point aberrant de mesure sur le canal GR (nombre des GR, hémoglobine, hématocrite) au sujet de l échantillon 26, manifestement d allure artefactuelle. Comparaison des résultats sur les Contrôles bas L étude statistique de comparaison des moyennes obtenues sur les 5 paramètres mesurés ne montrait aucune différence statistique significative sur les Contrôles bas selon qu on utilisait la trousse de réactifs compatibles ou celle des réactifs originaux (tableau 2). Les coefficients de corrélation montraient une très bonne superposition des 5 paramètres mesurés. Comparaison des résultats sur les Contrôles hauts L étude statistique de comparaison des moyennes obtenues sur les 5 paramètres mesurés ne montrait aucune différence statistique significative selon qu on utilisait les réactifs compatibles ou les réactifs originaux (tableau 3). Les coefficients de corrélation montraient une très bonne superposition des 5 paramètres mesurés. Tests de répétabilité L étude des CV obtenus pour chaque paramètre mesuré ne montrait pas de différences significatives selon le type de trousse utilisé. Les CV étaient compris dans un intervalle de 1,7 % à 2,7 %. Par ailleurs, on pouvait noter que les CV pour les paramètres calculés semblaient apparaître meilleurs, c est-à-dire généralement plus faibles avec les réactifs compatibles. Discussion Comparaison des moyennes L évaluation des deux trousses de réactifs consommables, compatible et originale, sur l automate Micros paramètres, n a montré aucune différence significative sur l ensemble des 5 paramètres mesurés. Le calcul du coefficient de corrélation a révélé une très bonne superposition des résultats obtenus (quasi superposition des points), sur les échantillons Contrôles normaux, bas ou hauts. La comparaison des résultats mesurés sur l analyseur Micros 60 avec les valeurs cibles montrait un écart constant (tableau 1), qui n a pas été analysé en raison du risque de biais de type «automate dépendant» (analyseur Micros 60 d une part et analyseur XT d autre part). Ces mesures sont données à titre indicatif seulement. Test de répétabilité Les résultats obtenus ne montraient pas de différence quel que soit le type de réactifs utilisés. On pouvait en outre remarquer une tendance à une meilleure répétabilité en utilisant la trousse des réactifs compatibles, en particulier sur le taux d hémoglobine (tableau 4). Alors que de nombreuses évaluations en termes de performances analytiques de nouveaux analyseurs d hématologie sont réguliè- Tableau 1. Tableau comparatif des 8 paramètres mesurés obtenus sur analyseur Micros 60 à partir de 50 échantillons normaux issus de donneurs de sang bénévoles. Réactifs Réactifs Horiba Valeurs Cibles a Moyenne Écart-type Moyenne Écart-type Coefficient de Corrélation vs Moyenne Écart-type GB (10 9 /L) 8,62 1,78 8,66 1,80 0,97 7,78 1,60 (p = 0,11) GR (10 12 /L) 5,09 0,45 4,99 0,49 0,85 4,7 0,40 (p = 1,06) Hb (g/dl) 14,87 1,28 15,15 1,44 0,84 13,85 1,12 (p = 1,03) Hte (%) 44,52 3,79 43,34 4,11 0,84 41,9 3,06 (p = 1,49) VGM (µ 3 ) 87,60 3,56 86,94 3,52 NC 89,08 3,67 TGMH (pg) 29,26 1,39 30,39 1,44 NC 29,46 1,33 CCMH (g/l) 33,40 0,54 34,96 0,58 NC 33,07 0,75 Plaq (10 9 /L) , ,29 0,95 (p = 0,11) 281,14 54,30 NC : non calculé. a Valeurs issues de l analyseur Sysmex XT. Elles sont données à titre indicatif seulement. Ann Biol Clin, vol. 65, n 6, novembre-décembre

4 pratique quotidienne rement publiées [2, 3], il n existe pas à notre connaissance d études relatives aux performances analytiques de différentes trousses de réactifs pour un analyseur donné. Pourtant d autres réactifs génériques existent sur le marché. Ils sont commercialisés principalement par 3 grandes firmes : Mallinckrodt Baker (Deventer, Pays-Bas), Diagon (Budapest, Hongrie) et Labex (New Dehli, Inde). On peut observer que Diagon présente toutefois sur son site «Diagon-.com» des courbes de comparaisons entre ses trousses compatibles et les trousses originales, mais il n est rap- Globules blancs (10 9 /L) Hémoglobine (g/dl) 20,00 18,00 16,00 14,00 12,00 10,00 8,00 6,00 2 4,00 2, Globules rouges (10 12 /L) 7,00 6,00 5,00 4,00 3,00 2,00 Hématocrite (%) 60,00 50,00 40,00 30,00 20,00 1,00 0, ,00 0, Plaquettes (10 9 /L) 450,00 400,00 350,00 300,00 250,00 200,00 150,00 100,00 50,00 0, Figure 1. Comparaison des courbes obtenues sur les 5 paramètres mesurés par l analyseur Micros 60 avec respectivement les réactifs compatibles et les réactifs originaux Horiba sur les Contrôles normaux. 674 Ann Biol Clin, vol. 65, n 6, novembre-décembre 2007

5 Analyseur de numération sanguine Tableau 2. Tableau comparatif des 8 paramètres obtenus sur analyseur Micros 60 sur 10 échantillons Contrôles bas dilués au demi à partir d échantillons normaux issus de donneurs de sang bénévoles. Réactifs Réactifs Horiba Moyenne Écart-type Moyenne Écart-type Coefficient corrélation GB 3,89 0,67 3,87 0,66 0,97 GR 2,57 0,21 2,55 0,20 0,96 Hb 7,45 0,59 7,33 0,58 0,93 Hte 22,04 1,48 21,72 1,61 0,96 VGM 86,15 5,13 85,48 4,85 NC TGMH 29,12 2,20 28,84 1,78 NC CCMH 33,79 1,23 33,74 0,51 NC Plaq ,97 Tableau 3. Tableau comparatif des 8 paramètres obtenus sur analyseur Micros 60 sur 10 échantillons Contrôles hauts concentrés à partir d échantillons normaux issus de donneurs de sang bénévoles. Réactifs Réactifs Horiba Moyenne Écart-type Moyennes Écart-type Coefficient corrélation GB 10,9 2,8 11,1 2,7 0,98 GR 6,8 0,5 6,8 0,4 0,98 Hb 20,2 1,1 22,5 1,5 0,80 Hte 59,9 3,8 59,7 2,9 0,95 VGM 88,4 4,7 88,2 5,7 NC TGMH 29,8 1,5 33,0 1,8 NC CCMH 33,8 2,0 37,6 2,8 NC Plaq 248,7 45,6 256,0 42,6 0,96 Tableau 4. Coefficients de variation (%) des 5 paramètres mesurés sur 10 échantillons Contrôles hauts (concentrés à partir d échantillons normaux issus de donneurs de sang bénévoles). Réactifs Réactifs Horiba GB 1,5 1,7 GR 1,1 1,4 Hb 0,6 1,5 Hte 1,2 1,4 VGM 1,8 3,0 TGMH 1,0 1,0 CCMH 2,4 2,9 Plaq 2,9 2,7 porté aucune publication, ni même les protocoles d étude utilisés à l appui de ces courbes. Par ailleurs, deux grandes firmes nord-américaines se partagent sur le plan mondial le marché des calibrants génériques Streck (Omaha, États- Unis) et RnD Systems Inc (Minneapolis, États-Unis), sachant qu elles sont elles-mêmes aussi sous-traitantes auprès des constructeurs d analyseurs d hématologie pour la production de leurs calibrants dédiés originaux. Enfin, l étude du facteur coût montrerait une économie variant d un diviseur compris entre 2 et 5. Cette variation est expliquée par la grande disparité des coûts des réactifs originaux préalablement négociés avec le fournisseur lors de l installation de l analyseur dans les laboratoires de biologie médicale. Conclusion Les réactifs compatibles analysés lors de cette étude semblent parfaitement se substituer aux réactifs originaux. Aucune différence statistiquement significative n a été mise en évidence sur l ensemble des paramètres mesurés par l automate d hématologie utilisé. L ensemble de ces résultats semble pouvoir contribuer efficacement à améliorer le rapport coût-qualité qui reste une préoccupation constante des laboratoires de biologie médicale de proximité. Une première estimation laisse à penser que le budget réactifs compteur de cellules du laboratoire pourrait être divisé au moins par deux. Références 1. International commitee for standardization in haematology. Protocol for evaluation of automated haematology analyzer. ICSH, Ann Biol Clin, vol. 65, n 6, novembre-décembre

6 pratique quotidienne 2. Langford K, Luchtan-Jones L, Miller R, Walck D. Performance evaluation of the Sysmex XT-2000i Automated hematology analyzer. Lab Hematol 2003 ; 9 : Pedrsaud M, Clancy T, Sheridan B, Quinsey P. An evaluation of the Act5dif Cap Pierce haematology analyzer. Lab Hematol 2001; 7: Ann Biol Clin, vol. 65, n 6, novembre-décembre 2007