SAFARI MICROSCOPIQUE

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Coralie Beaudoin
il y a 6 ans
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verticale tangente Lab 4 : Microscopie. SAFARI MICROSCOPIQUE 1. OBJECTIFS 1.1. Déterminer le diamètre du champ visuel au microscope et évaluer la taille de cellules. 1.2.

1 verticale tangente Lab 4 : Microscopie. SAFARI MICROSCOPIQUE 1. OBJECTIFS 1.1. Déterminer le diamètre du champ visuel au microscope et évaluer la taille de cellules Rendre compte d observations au microscope selon les normes de présentation standard Effectuer l étude comparative des cellules procaryotes et eucaryotes, animales et végétales Explorer un échantillon de la diversité des organismes microscopiques. 2. SÉCURITÉ AU LABORATOIRE Sarrau Blessure Rappel Le port du sarrau est obligatoire. Attention aux instruments à dissection. En cas de blessure, aviser un responsable et soigner la plaie (désinfection et pansement). Comme toujours, il est interdit de manger ou de boire au laboratoire. 3. INTRODUCTION La microscopie nous transporte vers de nouvelles dimensions. Celles-ci se mesurent alors en: Millimètres (mm) ou 1/1000 m Micromètres (µm) ou 1/1000 mm Nanomètres (nm) ou 1/1000 µm En plus de grossir une image, le microscope augmente sa résolution. On l évalue par la plus petite distance qu on peut distinguer entre deux points. Le pouvoir de résolution de l œil humain est de 0,1 mm (100 µm). Avec un bon microscope grossissant 1000 fois, le pouvoir de résolution passe à 0,0002 mm (0,2 µm ou 200 nm), soit la taille d une petite bactérie ou d une mitochondrie [1; p.104]. 4. MANIPULATIONS (Consulter l Annexe 2 : Comment utiliser un microscope) 4.1. Détermination du diamètre du champ visuel au microscope à divers grossissements Pour mesurer le diamètre du champ visuel, nous observerons du papier millimétrique fixé sur une lame Grossissement total. Un microscope contient 2 systèmes de lentilles situés dans l oculaire et l objectif. Le grossissement total s obtient en multipliant celui de l oculaire (10X) par celui de l objectif sélectionné (4X, 10X ou 40X). Complétez les 3 ères colonnes du tableau 1 de la feuille réponse Diamètre à 40X Ajustez la position du papier de façon à ce que une ligne horizontale traverse le centre du champ visuel. une ligne verticale soit tangente à la gauche du champ visuel. Puis, déterminez le diamètre en comptant le nombre de carreaux visibles le long de la ligne horizontale centrée. Dans l exemple illustré ici, le diamètre mesure environ 2,5mm. À 40X, quel est le diamètre du champ en mm? en µm? Reportez au Tableau 1. horizontale centrée Page 1 sur 6

2 Diamètre à 100X Une fois la mise au point effectuée, ajustez la position du papier comme à l étape précédente. À 100X, quel est le diamètre du champ en mm? en µm? Reportez au Tableau Diamètre à 400X Une fois la mise au point effectuée, ajustez la position du papier comme à l étape précédente. À 400X, est-ce que le papier millimétrique permet une mesure précise du diamètre du champ? Pouvez-vous l évaluer mathématiquement à partir du diamètre mesuré à 40X? Reportez au Tableau Observation de cellules d épithélium buccal humaines 1. Déposez une goutte de bleu de méthylène sur une lame. 2. Faites un prélèvement de cellules à l aide d un cure-dent. 3. Étalez le prélèvement dans la goutte. 4. Recouvrez d une lamelle déposée à 45 o. 5. Au microscope, repérez à faible grossissement une cellule isolée, bien étalée et présentant un noyau bien visible. Puis, observez-la à 400X Dessinez une des cellules observées à 400X en respectant les règles de présentation (voir Annexe 1). Identifiez précisément : membrane plasmique, cytoplasme, membrane nucléique, noyau, chromatine. À l aide de vos données du tableau 1, évaluez le diamètre de la cellule en µm. Indiquez vos calculs Observation de cellules foliaires d oignon 1. À l'aide d'un scalpel et d'une pince, prélevez un petit fragment d épiderme inférieur d une feuille d oignon. 2. Placez sur une lame microscopique et ajoutez une goutte de lugol. 3. Recouvrez d une lamelle déposée à 45 o. 4. Au microscope, observez l apparence des cellules à un grossissement de 100X. Dessinez une des cellules observées à 100X en respectant les règles de présentation (voir Annexe 1). Identifiez précisément : paroi cellulaire, cytoplasme, noyau, membrane nucléique, chromatine. À l aide de vos données du tableau 1, évaluez les dimensions de la cellule en µm (longueur et largeur) Observations diverses Divers types de cellules sont présentés en démonstration. Répondez aux questions sur la feuille réponse. 5. MÉDIAGRAPHIE [1] Reece, J.B. et coll. (2012). Campbell Biologie. 4 e éd., Éd. Renouveau pédagogique (ERPI), 1458 pages. [2] Jankowiak, C., Biopathe, Cyclose de cellule d élodée, [En ligne], URL : [Consulté le 19 sept. 2017] Page 2 sur 6

3 Annexe 1. Comment présenter un dessin. Page 3 sur 6

4 Annexe 2. Comment utiliser le microscope. GROSSISSEMENTS Oculaire (10X) X Objectif (4X ou 10X ou 40X) 40X ou 100X ou 400X Avant d observer 1. Brancher. Allumer l interrupteur situé sur ou derrière la base 1 2. Choisir un éclairage moyen avec le rhéostat 2 et le diaphragme 4 3. Placer la lame sur la platine 7, entre les valets 8a 8b 4. Sélectionner le plus petit objectif (rouge, 4X). 5. Center la lame avec les vis de déplacement 3a et 3b 6. Faire monter la platine au plus haut avec la vis macrométrique 5 7. Essuyer la vitre de l oculaire avec du papier à lentilles. Grossissement 40X 8. Faire la mise au point en abaissant la platine avec la vis macrométrique 5 ; ajuster avec la vis micrométrique 6 9. Ajuster l éclairage avec le rhéostat 2 et le diaphragme Centrer l image désirée avec les vis de déplacement 3a et 3b Grossissement 100X 11. Sélectionner le 2 e objectif (jaune, 10X) 12. Faire la mise au point avec les vis macro 5 et micrométrique Ajuster l éclairage avec le rhéostat 2 et le diaphragme Centrer l image désirée avec les vis de déplacement 3a et 3b Oculaire 10X GROSSISSEMENT TOTAL : a 7 4 Tige Objectifs 4X 10X 8b 40X 3a 3b Lame avec préparation à observer Grossissement 400X 15. Sélectionner le 3 e objectif (bleu, 40X). 16. Ajuster la mise au point uniquement avec la vis micrométrique 17. Ajuster l éclairage avec le rhéostat 2 et le diaphragme Page 4 sur 6

5 FEUILLE RÉPONSE NOMS : 1. Détermination du diamètre du champ visuel du microscope à divers grossissements Tableau 1. Diamètre du champ visuel à différents grossissements. Grossissement des Grossissement objectifs total Grossissement de l oculaire Diamètre du champ ( m) Q1 Si vous regardez un objet à 40X et 400X, auquel de ces grossissements apercevrez-vous une surface plus grande de l objet observé? Q2 Sachant que le diamètre d un globule rouge est de 7,5 m, combien de globules pourrait-on aligner sur une ligne imaginaire qui traverserait le centre du champ microscopique avec l objectif 4X? (Écrire le calcul) 2. Observation de cellules d épithélium buccal humaines G : Figure 1. Diamètre de la cellule en m: Indiquez votre calcul du diamètre de la cellule : Page 5 sur 6

6 3. Observation de cellules d épiderme d oignon G : Figure 2. Dimensions de la cellule en m (longueur et largeur) : X 4. Observations diverses PROTISTES [1; p.673, 677] Q3 Les organismes observés sont-ils uni- ou pluricellulaires? Q4 Quel type de structure permet leur locomotion? Euglènes : Paramécies : GLOBULES ROUGES [1; p.1058] Q5 En observant un globule rouge, on peut affirmer qu il ne s agit pas d une cellule végétale? En effet, quelle structure très évidente chez les cellules végétales est absente ici? Q6 Quelle structure est présente dans le globule rouge de grenouille et absente chez l humain? Q7 Quel serait l avantage adaptatif pour l humain de cette caractéristique? SPERMATOZOÏDES [1; p.1168] Q8 Derrière la tête d un spermatozoïde, on trouve de nombreuses mitochondries. À quoi servent-elles? BACTÉRIES [1; p.8] Q9 Par rapport aux eucaryotes, comment se distinguent les bactéries au niveau de la taille? Du noyau? Des organites membranaires? CELLULES D ÉLODÉE [1; p Fig. 6.27] et [2] Q10 Un mouvement spécial est observable dans une cellule d élodée bien éclairée, la «cyclose». Indiquer un rôle de ce mouvement : Quelles sont les 2 protéines du cytosquelette responsables? et Comment s y prennent-elles pour faire bouger les chloroplastes? Q11 Quelles sont les 2 protéines responsables de la contraction des cellules musculaires humaines? et Page 6 sur 6

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