Vidéo microscope. Convention d utilisation

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1 Vidéo microscope Convention d utilisation I. Gestion du matériel 1.1 Matériel Une station d acquisition constituée : - d un microscope inversé DMIRB (Leica). Objectifs : à huile: Plan-Néofluar, 16x0.3 LD Achroplan, 40x0.6 Korr Plan Apochromat, 63x1.4 oil Dic à sec: N PLAN 10x/0.25 PH1 N PLAN L 20x/0.35 PH1 HCX PL FL L 40x/0.60 CORR PH2. Cubes d observation pour l épifluorescence : DAPI FITC/GFP TRITC/rhodamine/Cy3 Cy5 Fura2 - d une caméra DP30W (Olympus) - du logiciel Cell P (Olympus) Une station d analyse d images avec les logiciels : - photoshop CellP - Amira 1.2 Localisation pièce S274, 2 ème sous-sol, asc.b UFR de Médecine Paris Diderot-Site Xavier Bichat 16 rue Henri Huchard Paris Cedex Responsabilités Samira Benadda UFR de Médecine Paris Diderot-Site Xavier Bichat ICB/IFR2 16 rue Huchard-BP Paris Cedex 18 Tel : Fax : e.mail : samira.benadda@inserm.fr Version du

2 II. Réglementation de l accès 2.1 Conditions d accès L appareil est accessible à toutes les équipes de recherche Inserm, universitaires et hospitalières de l ICB. Une clé de la pièce est remise à chaque unité utilisatrice. 2.2 Modalités d accès Le vidéomicroscope n est accessible qu aux utilisateurs ayant suivi une formation adaptée. Pour une première utilisation, il faut donc impérativement contacter 15 jours avant le responsable qui assurera la formation. Le formulaire de demande de formation page 5 est à remplir et signer et envoyer au responsable du service. Il permet d examiner la pertinence des demandes, les grandes lignes du projet scientifique dans lesquelles elles s insèrent et les conditions concrètes de l analyse. Les étudiants et post-doctorants doivent par ailleurs faire signer ce formulaire par leur directeur. Par la suite, l utilisateur devra s inscrire sur le planning de réservation en ligne à l adresse suivante : Ce service est accessible uniquement les jours ouvrables. Horaires d accès : 7h-9h 9h-12h 13h-17h 17h-20h acces aux autonomes accès aux prestataires III. Aspects organisationnels 3.1 Respect du matériel Comme pour tout équipement collectif le bon fonctionnement dépend du soin que les utilisateurs en prennent. Tout dommage dû à une mauvaise manipulation devra donc être réparé aux frais de l équipe de l utilisateur. 3.2 Utilisation de l appareil L appareil ne peut-être manipulé que par un utilisateur ayant acquis la formation nécessaire. Pour cette raison, tout nouvel utilisateur doit obligatoirement contacter le responsable de l appareil qui assurera une formation (environ 2h). Un guide d utilisation est disponible pour mémoire à côté du microscope, pièce S Tarification Les frais de fonctionnement sont supportés par l ICB. Cependant, une contribution financière est demandée aux équipes utilisatrices, une subvention modulée est accordée aux équipes académiques. - Equipes mutualisées auprès de l ICB : 7 / h - Equipes académiques hors ICB : 20 / h Version du

3 Une facturation est établie à la fin de chaque trimestre pour l ensemble des prestations réalisées et envoyée au secrétariat de l unité. 3.4 Gestion des résultats Les utilisateurs doivent régulièrement sauvegardées leurs données sur CD ou clé USB. Toutes les données se trouvant sur le disque dur seront automatiquement effacées à la fin de chaque mois. Dans un souci de valorisation de la plate-forme d imagerie il est convenu que l ICB sera mentionné dans toute publication utilisant les données qui y ont été obtenues. L ajout de l adresse du site web de l ICB ou un lien hypertexte vers ce site chaque fois que possible, est fortement recommandé. 3.5 Publications scientifiques : Visibilité du plateau d imagerie cellulaire de l ICB Cette plateforme est animée par un personnel qualifié qui veille à son bon fonctionnement, à l encadrement des utilisateurs et qui peut être amené à participer au développement de projets. Dans un souci de valorisation, il est convenu que les utilisateurs mentionneront dans les remerciements, la personne «encadrante» et le plateau d imagerie cellulaire de l Institut Claude Bernard, ICB/IFR2, dans toute publication utilisant les données qui y ont été obtenues. Lorsque la participation d un membre de la plateforme a été décisive dans la conduite du projet, les utilisateurs le feront figurer dans la liste des signataires de l article. L ajout de l adresse du site web de l IFR ou un lien hypertexte vers ce site chaque fois que possible, est fortement recommandé. VI. Hygiène et sécurité Les consignes usuelles de laboratoire doivent être respectées. Il est de plus souhaitable que l utilisateur se renseigne auprès du responsable pour les consignes particulières. L'accès au microscope n'est pas autorisé pour des prélèvements comportant des agents pathogènes qui nécessitent un confinement spécial. (Prélèvements infectés expérimentalement par virus, bactéries, champignons, parasites). 1. Echantillons ou lignées cellulaires d origine humaine : L échantillon est impérativement : - soumis à une fixation aldéhydique ou à l alcool - monté entre lame et lamelle de façon hermétique avec un milieu de montage polymérisant. ex: milieu de montage anti-fading contenant du DABCO (protocole de préparation mis à votre disposition par le responsable); milieu de montage commercial Prolong Antifade de Molecular Probe. N.B: Si l'une de ces conditions n'est pas respectée, les lames ne pourront pas être analysées. Version du

4 2. Cellules Vivantes Tout matériel d origine humaine considéré comme potentiellement dangereux sera manipulé avec les protections individuelles appropriées (blouse, gants...) et sous le PSM type II situé dans la pièce de vidéomicroscopie. 3. Radio-isotopes: Le service de microscopie n'est pas agréé à la manipulation des radioisotopes. Tout échantillon contenant des éléments radioactifs ne pourra pas être analysé. Il est strictement interdit de pénétrer dans toute salle du plateau avec des gants. (possibilité de mettre des gants neufs dans les locaux). N.B.: Les personnes lisant de façon autonome avertiront de la présence d'échantillons humains ou infectés expérimentalement l'ingénieur responsable du microscope, qui veillera au respect du règlement. V. Document associé -Mode opératoire vidéomicroscopie Version du

5 IFR 02 VIDEO - MICROSCOPIE Samira Benadda /73.75 MICROSCOPIE CONFOCALE Pièce S 275 samira.benadda@inserm.fr Demande de formation à la vidéo-microscopie. Demandeur: Mr, Mme, Melle: Laboratoire: Téléphone: Date: Indiquer en quelques lignes la nature de votre projet: Marquage à analyser: Structure ou molécule étudiée (indiquer l'anticorps et le fluorochrome utilisés) Nature de l'échantillon: Espèce: A t'il été infecté in vivo ou in vitro (si oui, par quel agent infectieux)? Est-il cancéreux? Provient-il d'un OGM (si oui, de quelle classe)? Fixation: PFA 4% autre, laquelle? Milieu de montage Est-il, liquide polymérisant Pour du vivant (cellules ou souris) Origine des cellules ou souris : Nature des cellules : Type de culture cellulaire : Type d infection : J atteste avoir pris connaissance de la convention d utilisation et m engage à la respecter. Signature: Demandeur Directeur d'équipe Samira Benadda Version du

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