PAPILLOMAVIRUS - HPV. et Cancer ORL. JC Nicolas Université Pierre et Marie Curie

Transcription

1

2 PAPILLOMAVIRUS - HPV et Cancer ORL JC Nicolas Université Pierre et Marie Curie

3 PAPILLOMAVIRUS DNA en minichromosome Virus nus, résistants Cancérigènes chez l animal Et, pour certains génotypes chez l homme

4 PAPILLOMAVIRUS HUMAIN (HPV) Réplication dans les épithéliums malpighiens en // avec la différenciation des kératinocytes Verrues/peau Condylomes/muqueuses > 120 génotypes dont HPV 16, 18 et 31 = associés au cancer du col utérin protéines précoces anti-apoptiques + cofacteur(s)

5 HPV- Verrue plantaire

6 HPV Condylome acuminé

7

8 HPV Principaux génotypes infectieux humains Répartition de différents génotypes d HPV en fonction de leur potentiel oncogène à bas risque 6, 11, 26, 34, 40, 42 à 44, 53 à 55, 62, 66 à haut risque 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, % des infections génitales liés au génotypes 16 (puis 18, 45, 31, 35.) 80-90% des condylomes liés aux génotypes 6-11.

9 Vaccin Gardasil 6, 11, 16, 18 Merck Cervarix GSK GlaxoSmithKline 16 et 18 Cancer du Col 6 11 Verrues Génitales + Papillome laryngé

10 Le génomeg URR E6 E7 L / région précoce E région tardive Protéines structurales E4 E1 Protéines de régulation L2 E2 E5

11 :Fonctions de la région de régulation et des protéines des HPV URR/LCR - amplificateur (enhancer) transcriptionnel constitutif, cible de facteurs de transcription cellulaires ou viraux (ex : E2) - contient l origine de réplication E1 E2 E4 E5 E6 E7 L1 L2 - réplication virale - transactivateur ou répresseur (E6/E7) transcriptionnel - rôle auxiliaire dans la réplication virale - maturation et relarguage des particules virales - localisation dans les endomembranes cellulaires - liaison avec la sous-unité de 16 kda de l ATPase H + vacuolaire et avec le récepteur du facteur de croissance PDGF * (β) - rôle oncogène potentiel - rôle dans la transformation cellulaire - liaison à p53 et ciblage vers la dégradation (protéasome) - rôle dans la transformation cellulaire - liaison à prb et d autres protéines du cycle cellulaire protéine majeure de capside, liaison au récepteur protéine mineure de capside

12

13 Cycle viral (1) Tropisme pour les épithéliums malpighiens spécificité transcriptionnelle Cycle viral étroitement lié à la différenciation cellulaire +++ Différenciation cellulaire Membrane basale

14 HPV La multiplication des HPV est liée à la différenciation de la cellule hôte, c est-à-dire à la kératinisation

15 Cycle viral (3) Infection PRODUCTIVE Infection LATENTE 5. Libération des virions L 4. Synthèse des protéines tardives et assemblage 3. Amplification du génome viral E 2. ETABLISSEMENT & MAINTIEN E 1. INFECTION DE LA COUCHE BASALE

16 Evolution de l infectionl Réponse immunitaire efficace +++ RI inefficace HPV HR (col) CV élevée Clairance +++ (80%) HPV HR Persistance intégration Transformation Ho et al, 1998 ; Franco et al, 1999 ; Elfgren et al, 2000 ; Nobbenhuis et al, 2001 ; Giulano et al, 2002 ; Van Duin et al, 2002 ; Schlecht et al, 2003 ; Syrjänen et al, 2005

17

18 Papilloma virus et Cancer ORL

19 Papilloma virus et Cancer ORL Carcinomes des voies Aéro digestives 5ème Cancer chez l homme En France 2ème Cancer au monde Cancer Épidermoïdes DAns 95 % des cas De pronostic sévère Intoxication Alcoolo-tabagique Augmentation de la Prévalence des Cancers Alors que l Intoxication Alcoolo-tabagique Est en régression Etiologie Cancer chez Des sujets N ayant Pas d antécédents Alcolo-Tabagique mais ayant un Nombre important De partenaires sexuels Recherche d un virus Oncogène associé à Une MST :HPV

20 Les questions : Quel est la fréquence des papilloma virus dans les cancers oropharyngés Et quelle est la localisation des tumeurs associées à L HPV Quel est le type d infection qui est pré requise pour le déclenchement de la carcinogenèse Y-a-t-il une ou plusieurs protéines qui sont exprimé ou sur-exprimées dans les cancers oropharyngés lié à l HPV. Les cancers oropharyngés lié à l HPV ont il un meilleur pronostic ou une sensibilité différentes à la chimio ou à la radio thérapie Est il difficile de faire le diagnostic d une infection à HPV Que sait-on sur la transmission de HPV Oral Y a-t-il une prévention de l HPV possible et utile, Que faut il penser de la Thérapie génique.

21 Quel est la fréquence des papilloma virus dans les cancers Oropharyngés Quelle est la localisation précise de la tumeur associé à L HPV Prévalence de L HPV dans le muqueuses orale normales: Disparité des résultats suivant les publications 0 à 100 % Prévalence de L HPV dans les tumeurs de la tête et du cou HNSCC (Head and Neck Squamous Cell Carcinoma) Kreimer et al résume 60 études qui portent sur 5046 cas de HNSCC HNSCC : 25, 9 % Oral SCC : 23,5 % HPV16 : 68,2% HPV18 34 % Oropharyngeal SCC : 35,6 % HPV16: 86,7% HPV18 2.8% Laryngeal SCC: 24 % HPV16 69% HPV18 17%

22 Quel est le type d infection est pré requise pour le déclenchement de la carcinogenèse Peu de chose sont encore connues mais on peut se baser sur les connaissances de la physiopathologie du col pour établir ce qui se passe dans l oropharynx Dans le cancer du col l infection persistante de l HPV doit être d au moins un an et le virus est retrouvé en quantité importante dans les mucosités du col Dans les cancer de l oropharynx le virus le est rarement retrouvé dans les mucosités orales en raison probablement à la clearance du virus par la salive Il doit toutefois y avoir une l infection persistante de l HPV située probablement dans les cryptes amygdalienne ou «glottiques» sites ou on retrouve fréquemment du virus

23 Y a-t-il une ou plusieurs protéines Cellulaires qui sont exprimé ou sur- exprimées dans les cancers, oropharyngés lié à l HPV. Analyse l expression de Quelques protéines cellulaire (p16), p53 prb OSCC: 3 Classes Class I : HPV p16 Non exprimée Class II : HPV + p16 Non exprimée Class III : HPV + p16 Exprimée Seuls les patients de la Class III : HPV + p16 exprimée Ont une diminution de l expression de p53 et prb

24 Y a-t-il une ou plusieurs protéines Cellulaires qui sont exprimé ou over exprimées dans les cancers, oropharyngés lié à l HPV. Rien de très précis pour l instant profil protéomique * profil protéomique de la tumeur oropharyngée (HPV 16+) de la tumeur cervical (HPV 16-) Comparé au Comparé au profil protéomique profil protéomique du tissu sain du même patient du tissu sain du même patient analyse différentielle analyse différentielle * Spectromètrie de Masse

25 Les cancers oropharyngés lié à l HPV ont il un meilleur pronostic ou une sensibilité différentes à la chimio ou à la radio thérapie HPV + OSCC Meilleur pronostic Réduction de 60%-80% du la léthalité Seuls les patients de la Class III : HPV + p16 exprimée ont une diminution de l expression de p53 et prb La survie à 5 ans des patients de la Class III fut dans cette étude de 79% et de 20 et 18 % dans les deux autres classes Guérison complète des patients de la Class III fut dans cette étude dans 75% des cas et de 15 et 13 % dans les deux autres classes Récidive locale des patients de la Class III fut dans cette étude de 14% et de 45 et 74 % dans les deux autres classes

26 Les cancers oropharyngés lié à l HPV ont il un meilleur pronostic ou une sensibilité différentes à la chimio ou à la radio thérapie HPV + OSCC Meilleur pronostic Réduction de 60%-80% du la léthalité Deux comportements distincts Class 1 Tumeurs HPV neg p16 Expr neg Alcool et tabac induisent par mutation Ou un phénomène épi génétique une altération Mutationnelle de de p53,p16,prb1 dans des étapes progressives allant de De la cellule normale; cellules dysplasiques, carcinomes Class III Tumeurs HPV pos p16 Expr pos HPV E6, HPV E7 Inactive les voies P53 et prb1 et les circuits quelles contrôlent (p16) Class 2 Tumeurs HPV + p16 Expr neg

27 Que sait on sur la transmission de HPV Oral Transmission périnatale Papillomatose respiratoire Récurrente Possibilité de transmission in Utéro Pratique sexuelle Oral génitale Et partenaire multiple Pb du safe sex? Auto transmission Par analyse des Mucosités Orales Chez des patients HPV Col + 20 % dans certaines études

28 Est il difficile de faire le diagnostic d une infection à HPV Infection Primaire Mettre en évidence l association avec l HPV Clairance Persistance Charge virale HPV Intra tumorale Diagnostic Sérologique Intérêt épidémiologique Intégration Transformation Détection et Quantification Des génomes intégrés Transcription E6, E7 Quantification Des ARNm E6 E7

29 Y a-t-il une prévention de l HPV possible et utile Vaccination Est-ce que l on peut classer les Cancer de l oropharynx dans la catégorie des cancers associés aux virus et proposer une vaccination préventive (Homme/femme) Que faut il penser de la Thérapie génique Si ARN ou ARN antisens pour bloquer l expression de E6/E7

30 Papilloma virus et Cancer ORL Paricularité - Atteignent des patients plus jeunes -Seraient moins différentiées -Localisation préférentielles oropharyngées -Plus radio-sensibles et plus chimio-sensibles -Meilleur pronostic -Survie sans récidive et survie globale méliorée (-60% de la mortalité à 5 ans) Détection des HPV et une meilleure connaissance de leur rôle serait donc Susceptible d avoir des implications dans le futur pour le diagnostic, le pronostic et le traitement des tumeurs

31

32 Oncogenèse du cancer du col utérin Cin:cervical Intraepithelial Neoplasia Clairance de l infectionl Cofacteurs Infection persistante Col normal Régression CIN 1 CIN 2 Instabilité génomique Echappement immunitaire CIN 3 Cancer invasif Augmentation de l expression l des oncoprotéines E6/E7 Infection HPV oncogène ne Immortalisation Invasion 2-33 ans ans Intégration du génome g viral D après Steenbergen et al, 2005

33 Frottis du col Analyse de la cytologie Coloration à l acide Acétique Biopsie Conisation Surveillance

34 Mettre en évidence en intra-tumoral l association avec l HPV Inno Lipa Puce ADN PCR Séquençage Analyse de séquence

35 Amplification Par PCR Hybridation genotypes Haut risques (16, 18, 26, 31, 33, 35, 39, 45, 51,52, 53, 56, 58, 59, 66, 68, 73, 82) Genotypes bas risques (6, 11, 40, 43, 44, 54, 70) + types (69, 71, 74).

36

37 Papilloma Virus Cancer ORL 1: positive types 6 and 18; 2: negative control; 3-99 Echantillons; 3: HPV 16; 4: HPV 18; 5: HPV 16; 6: HPV 6 and 16; 7: HPV 16 and 18; 8: HPV 16 9: HPV 16 and 51.

38 Papilloma Virus Tumeur ORL 13/06/2008 1,2 : positive types 6 and 16; 3 : negative control; 4-99 Echantillons; 4: HPV 31 ; 5 : neg; 6 : Neg; 7: HPV 16; 8 : Neg 9 : Neg.

39

40 Papilloma virus et Cancer ORL Incidence des carcinomes Aero-digestif associés aux HPV augmente tandis que l incidence des cancers non associés a diminué dans La même période. HPV 16 le plus fréquemment associé (90% des Cancers HPV +) HPV16 multiplie par 14 le risque de développer un cancer HPV, Par rapport aux autres virus (10 % des cancers HPV +) Association non systématique Comme dans le cas du cancer du col Utérin. 20 à 30 % des cancer aérodigestifs sont associés à l HPV alors que 100% dans le cas des cancers du Col

41 Diagnostic HPV génital

42 HPV- Verrue plantaire

43 HPV Condylome acuminé

44 HPV. Condylome acuminé ou "crête de coq"

45 HPV- Condylome acuminé au cours du SIDA

46 Papillomavirus nm

47 HPV- Condylome cervical après application d acide acétique

48 HPV - Koïlocytes Cellules de l épithélium malpighien (Coloration Papanicolaou x200) Cellules de l épithélium malpighien typique de HPV de cytologie modifiée: Noyau de taille augmentée (réplication virale) avec chromatine hypercondensée pouvant être binuclée Halo perinucléaire marquée typique (nécrose?)

49 Est il difficile de faire le diagnostic d une infection à HPV