FACTEUR VIII DOSAGE DES FACTEURS 1. TECHNOCHROM FVIII:C. Dosage colorimétrique TECHNOCHROM FVIII:C
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- François Lessard
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1 TECHNOCHROM FVIII:C Exemple : méthode manuelle ( cinétique et point final ) FACTEUR VIII. TECHNOCHROM FVIII:C coffret 2 x 20 2 flacons de Substrat FXa-+ αnapap (2 ml) 2 flacons de Réactif A (Phospholipide, Albumine) (2 ml) 2 flacons de Réactif B (Facteur IXaß, Facteur X, Ca ++, Albumine, Thrombin) (2 ml) flacon de Ref. Stand. FVIII ( 30 %) ( ml) flacon de Ref. Stand. FVIII 2 ( 70 %) ( ml) flacon de Ref. Stand. FVIII 3 ( 0 %) ( ml) flacon de Ref. Stand. FVIII 4 (< 0,5 %) ( ml) 3 flacons de Tampon de dilution F VIII (30 ml) 2 flacons de Tampon de réaction FVIII (8 ml) Coffret de dosage colorimétrique du facteur VIII. 0,30 0,25 kinetic method endpoint method,2,0 Le coffret TECHNOCHROM FVIII:C contient des réactifs pour la détermination colorimétrique de l activité du facteur VIII dans le plasma et dans les dérivés plasmatiques. L insuffisance du facteur VIII ainsi que les thérapies de substitution du facteur VIII peuvent être surveillées. delta A/min 0,20 0,5 0,0 0,05 0,8 0,6 0,4 0,2 Absorbance ( nm) Utilisation Linéarité : 0-44 (activité %). Limite de détection : 0 % (activité %) Incubation de 5 minutes et lecture sur 3 minutes. Point final ou cinétique 0, % F VIII 36 Produits associés Coagulation Reference Coagulation Control N Coagulation Control A Stabilité des réactifs sur analyseurs de 24 h Réactifs recongelables 5 jours à -20 C
2 . ROX FACTOR IX coffret 2 x 50 ROX Factor IX FACTEUR IX 2 flacons de Réactif A (lyophilisat de facteurs humains VIII et X, et de facteur V bovin, inhibiteur de la polymérisation de la fibrine) 2 flacons de Réactif B (facteurs humains lyophilises XIa et II, du chlorure de calcium et des phospholipides) flacon de Substrat Chromogène du FXa (6 ml) flacon de Tampon de Dilution (20 ml) Coffret de dosage enzymatique du facteur IX humain dans les concentrés de facteur IX humain et dans le plasma. Le coffret Rox Factor IX contient des réactifs pour la détermination colorimétrique de l activité du facteur IX dans le plasma et dans les dérivés plasmatiques. L insuffisance du facteur IX ainsi que les thérapies de substitution du facteur IX peuvent être surveillées. Linéarité : UI/mL. Deux courbes possibles : º Linéarité comprise entre 3 et 25 miu/ml. º Linéarité comprise entre 50 et 500 miu/ml. Excellente sensibilité autour de 0,00 UI / ml avec un signal > 30 ma à 405 nm. Aucun plasma déficient en facteur IX n est utilisé. Adaptation sur STAR et ACL Top Courbe FIX log-log entre 3 et 25 mui / ml Le ROX FACTOR IX est un coffret de dosage enzymatique chromogénique pour la détermination du facteur IX dans les concentrés de facteur IX humain. Les résultats sont exprimés en UI. Les mesures s effectuent sur le domaine mui/ml ou 3-25 mui/ml. Cette méthode est basée sur l activation du facteur IX humain par le facteur XIa humain. Le facteur IXa ainsi formé active le facteur X en facteur Xa en présence de facteur VIII, thrombine, phospholipides et d ions calcium. La quantité de facteur Xa générée est déterminée par l hydrolyse d un substrat chromogène du facteur Xa. La quantité de para-nitroaniline libérée lors de cette hydrolyse et mesurée à 405 nm est proportionnelle à la concentration de facteur IXa dans le milieu réactionnel. Absorbance ( nm) Activité en mui / ml 25 r 2 = 0,99 37
3 FACTEUR IXa. ROX FIX-A coffret 2 x 50 2 flacons de Réactif A (facteurs humains VIII et X lyophilisés) 2 flacons de Réactif B (thrombine humaine lyophilisée, du chlorure de calcium et des phospholipides) flacon de Substrat Chromogène du FXa (6 ml) flacon de Tampon de Dilution FIXa (20 ml) 2 3 ROX FIX-A Factor IXa Calibrator Factor IXa Control Coffret de dosage enzymatique du facteur IXa humain dans les concentrés de facteur IX humain. Le coffret Rox Factor IXa contient des réactifs pour la détermination colorimétrique de l activité du facteur IXa dans le plasma et dans les dérivés plasmatiques. La présence très faible de facteur IXa peut être mesurée. 38 Linéarité comprise entre 0,02 et 0,8 mui/ml Limite de quantification = 0,02 mui FIXa / mui FIX La sensibilité de 0,005 % est bien meilleure que celle de la méthode NAPTT. Réactifs stables 48 h à 2-8 C Calibrateur et contrôle fournis Le ROX FIX-A est un coffret de dosage enzymatique chromogénique pour la détermination de très faibles quantités de facteur IXa dans les concentrés de facteur IX humain. Les résultats sont exprimés en UI. La sensibilité du dosage est de 0, mui/ml. Cette méthode est basée sur l activation du facteur X par le facteur IXa (considéré comme un contaminant dans le concentré de facteur IX) en présence de facteur VIII, thrombine, phospholipides et d ions calcium. La quantité de facteur Xa générée est déterminée par l hydrolyse d un substrat chromogène du facteur Xa. La quantité de para-nitroaniline libérée lors de cette hydrolyse et mesurée à 405 nm est proportionnelle à la concentration de facteur IXa dans le milieu réactionnel. 2.FACTOR IXa CALIBRATOR x 2,0 ml Préparation purifiée de facteur IXa pour le coffret ROX FIX-A, étalonnée contre le standard international WHO (OMS). Plasma de calibration pour le dosage du facteur IXa en colorimétrie, il est utilisable directement sans dilution après reconstitution. 3.FACTOR IXa CONTROL x 2,0 ml Préparation purifiée de facteur IXa pour le coffret ROX FIX-A, titrée contre le standard international WHO (OMS). Plasma de contrôle de qualité pour le dosage du facteur IXa en colorimétrie.
4 FACTEUR XIa. ROX FACTOR XIa coffret 2 x 50 2 flacons de Réactif A (facteurs humains IX et VIII lyophilisés) 2 flacons de Réactif B (lyophilisat de facteur humain X et thrombine bovine, du chlorure de calcium et des phospholipides) flacon de Substrat Chromogène (Z-D-Arg-Gly-Arg-pNA) (6 ml) flacon de Tampon de Dilution (20 ml) 2 3 ROX Factor XIa Factor XIa Calibrator Factor XIa Control Coffret de dosage quantitatif du facteur XIa humain dans les préparations enrichies ou hautement concentrées de facteur XIa humain. Non validé pour les dosages plasmatiques. Le coffret Rox Factor XIa contient des réactifs pour la détermination colorimétrique de l activité du facteur XIa dans le plasma et dans les dérivés plasmatiques. La présence très faible de facteur XIa peut être mesurée. Excellente sensibilité autour de,2 mui / ml FXIa Aucun plasma déficient en facteur XI n est utilisé Utilisable directement sans dilution après reconstitution 2.FACTOR XIa CALIBRATOR x 4,0 ml Préparation purifiée de facteur XIa pour le coffret ROX FXIa, étalonnée contre le standard international WHO (OMS). Plasma de calibration pour le dosage du facteur XIa -20 C Le ROX FACTOR XIa est un coffret de dosage enzymatique quantitatif et chromogénique pour la détermination de facteur XI activité dans les concentrés de facteur XI humain. Les résultats sont exprimés en UI. Les mesures s effectuent sur le domaine mui/ml ou 3-25 mui/ml. Cette méthode est basée sur l activation du facteur IX humain par le facteur XIa. Le IXa ainsi formé active le facteur X en facteur Xa en présence de facteur VIII, thrombine, phospholipides et d ions calcium. La quantité de facteur Xa générée est déterminée par l hydrolyse d un substrat chromogène du facteur Xa. La quantité de para-nitroaniline libérée lors de cette hydrolyse et mesurée à 405 nm est proportionnelle à la concentration de facteur IXa dans le milieu réactionnel. 3.FACTOR XIa CONTROL x 4,0 ml Préparation purifiée de facteur XIa pour le coffret ROX FXIa, titrée contre le standard international WHO (OMS). Plasma de contrôle de qualité pour le dosage du facteur XIa -20 C 39
5 Dosages colorimétrique et ELISA FACTEUR XIII. TECHNOCHROM FXIII coffret 3 x 20 3 flacons d Activateur (3 ml) 3 flacons de Réactif de Détection (3 ml) 3 flacons de Solution NADPH (3 ml) 3 flacons de Réactif Inhibiteur ( ml) flacon de Solution de Stabilisation (6 ml) COLORIMÉTRIQUE TECHNOCHROM FXIII PLASMA DÉFICIENT 2 Factor XIII Deficient Plasma S ELISA 3 TECHNOZYM FXIII Ag ELISA 4 TECHNOZYM FXIII-A Sub ELISA 5 TECHNOZYM FXIII-B Sub ELISA Coffret de dosage pour pour la détection des déficiences congénitales ou acquises en FXIII, de taux de FXIII anormal avec une activité faible ou de taux élevé en FXIII. Le TECHNOCHROM FXIII est un coffret de dosage enzymatique chromogénique pour la détermination de l activité du facteur XIII. Le facteur XIII présent dans le plasma est activé en présence de thrombine et de calcium. Le FXIIIa formé catalyse la transformation d un substrat aminé d éthylester de glycine (GEE) en résidu glutaminé d un substrat peptidique spécifique Pl(-2) en libérant de l ammoniaque. Ce test peut donc être utilisé pour suivre les taux de facteur XIII lors de traitement visant à complémenter le patient en facteur XIII. Avantages La méthode est linéaire jusqu à une activité FXIII de 300 %. La limite de détection est de 0,6 % car le blanc réactif est inclus. Les réactifs concurrents qui n intègrent pas de blanc plasma surestiment les valeurs et ont une limite de quantification > 3-5 % (H. P. KOHLER and all, Diagnosis and classification of factor XIII deficiencies, journal of Thrombosis and Haemostasis, 9 : July 20). 40 La déficience congénitale en FXIII est rare. On observe une déficience occasionnelle de la cicatrisation et chez la femme des avortements à répétition. La déficience acquise en FXIII due à des autoanticorps anti-fxiii est également une très importante cause de diathèse hémorragique. La consommation en FXIII dans différentes maladies (infections malignes, maladie de Chron, purpura Henoch-Schoenlein, chirurgie majeure, ) résulte habituellement d une baisse modérée du taux de FXIII. Produits associés Coagulation Reference Coagulation Control N Coagulation Control A 2. FACTOR XIII DEFICIENT PLASMA x,0 ml Coffret de plasma déficient en facteur XIII. Le FACTOR XIII DEFICIENT Plasma est un plasma humain immunoadsorbé, stabilisé et lyophilisé préparé à partir de plasma avec des anti-corps anti-hiv négatifs, et dont la contenance en facteur XIII est inférieure à %, considérant que tous les autres facteurs de coagulation présentent des valeurs normales.
6 3. TECHNOZYM FXIII AG ELISA coffret 2 x 8 2 x 8 puits Barrette ELISA sécable de 8 puits flacon Anticorps de capture flacon Conjugué (anticorps de détection) flacon de 00 ml Tampon de lavage concentré flacon de 00 ml Tampon de dilution des échantillons 5 flacons de 0,25 ml Calibrateurs numérotés de à 5 2 flacons de 0,25 ml Contrôles plasmatiques, niveau haut et bas 2 flacons de 2 ml Substrat chromogène TMB flacon de 2 ml Solution d arrêt Coffret de dosage ELISA du facteur XIII antigène de la sous unité A et B. Le TECHNOZYM FXIII Ag ELISA est un coffret de dosage ELISA pour la détermination du facteur XIII antigène dans le plasma humain. Il permet de mesurer la concentration du complexe hétérotétramère (FXIII A2B2) en utilisant des anticorps monoclonaux spécifiques du FXIII-A et FXIII-B. Une gamme de 5 calibrateurs, contrôle haut et bas sont inclus dans le coffret. La linéarité est comprise entre 0 % et 60 %. La disponibilité peut ne pas être garantie. La détection des FXIII-A et B permet la classification de la déficience en FXIII et orientera le choix du traitement de remplacement. La méthode ELISA est recommandée aux fins du diagnostic et de la classification du FXIII parce qu elle permet la mesure directe des FXIII-A et B en utilisant des anticorps spécifiques et la surveillance thérapeutique de la déficience en FXIII [Fadoo et al., 203; Kessel et al., 203; Kohler et al., 20; Muszbek et al., 20; Schroeder et al., 2007]. Le déficit congénital en FXIII résulte d une déficience du FXIII-A due à la mutation du gène F3A localisé sur le chromosome 6 ou du FXIII-B causée par la mutation du gène F3 B localisé sur le chromosome. Jusqu en 2009, plus de 70 mutations du gène du FXIII-A et quatre mutations du gène du FXIII-B ont été décrites [Muszbek et al., 20]. Les formes homozygotes ou hétérozygotes représentent les formes graves de la maladie. Le déficit en FXIII-A peut-être quantitatif (type I) résultant d une diminution de synthèse de la protéine ou qualitatif (type II) lorsque la concentration de FXIII-A est normale ou presque normale mais la protéine est défectueuse sur le plan fonctionnel (figure 2). Le déficit en FXIII-B est relativement plus rare et les symptômes hémorragiques sont mineurs [Kohler et al., 20; Muszbek et al., 20]. Spécificités et linéarité du coffret TECHNOZIM FXIII Ag ELISA O.D. 450 nm,8,5,2 0,9 0,6 0,3 A 2 B 2 0, Protéine concentration µg / ml A 2 B 0 4. TECHNOZYM FXIII-A SUB ELISA coffret 2 x 8 Coffret de dosage ELISA de la sous-unité A du facteur XIII antigène. Le TECHNOZYM FXIII-A ELISA est un coffret de dosage ELISA pour la détermination de la sous unité A du facteur XIII antigène dans le plasma humain en utilisant des anticorps monoclonaux spécifiques du FXIII-A. Une gamme de 5 calibrateurs, contrôle haut et bas sont inclus dans le coffret. La linéarité est comprise entre 0 % et 60 %. La disponibilité peut ne pas être garantie. 5. TECHNOZYM FXIII-B SUB ELISA coffret 2 x 8 Coffret de dosage ELISA de la sous-unité B du facteur XIII antigène. Le TECHNOZYM FXIII-B ELISA est un coffret de dosage ELISA pour la détermination de la sous unité B du facteur XIII antigène dans le plasma humain en utilisant des anticorps monoclonaux spécifiques du FXIII-B. Une gamme de 5 calibrateurs, contrôle haut et bas sont inclus dans le coffret. La linéarité est comprise entre 0 % et 60 %. La disponibilité peut ne pas être garantie. 4
7 ROX Factor Prothrombin Courbe FIX log-log entre 3 et 25 mui / ml PROTHROMBINE. ROX FACTOR PROTHROMBIN coffret 4 x 30 4 flacons de Réactif Activateur (facteur Xa humain, facteur Va bovin, chlorure de calcium, phospholipides) (3 ml) flacon de Substrat Chromogène (H-D-Phe-Pip-Arg-pNA) (6 ml) flacon de Tampon de Dilution (20 ml) Coffret de dosage enzymatique de la prothrombine humaine dans le plasma humain et dans les concentrés sur plasma citraté ou EDTA. Le coffret Rox Prothrombin Factor contient des réactifs pour la détermination colorimétrique de l activité du facteur II dans le plasma et dans les dérivés plasmatiques. L insuffisance du facteur II ainsi que les thérapies de substitution du facteur II peuvent être surveillées. Absorbance ( nm) Activité en mui / ml 25 r 2 = 0,99 Excellente sensibilité autour de 0,25 mui / ml non affecté par l hémoglobine, bilirubine, triglycéride, héparines HNF et HBPM Basé sur le complexe de prothrombinase pour refléter l activité biologique Dilution importante de l échantillon qui limite la génération de la thrombine Dosage très robuste car activation complète de la prothrombine Le complexe prothrombinase est sensible à la gamma carboxylation et la DE gamma- CarboxyProthrombine (DCP) n est pas activé dans cette méthode contrairement aux méthodes qui activent la prothrombine à l aide d un venin de serpent. L activité fonctionnelle du facteur II est déterminée par méthode enzymatique de la prothrombinase chromogénique dans laquelle le facteur II humain est activé en thrombine (IIa) par le facteur Xa en présence de facteur V bovin, de phospholipides et d ions calcium. La quantité de facteur IIa ainsi générée est déterminée par l hydrolyse d un substrat chromogène du facteur IIa. L activité du facteur II de l échantillon est déterminée contre un standard concentré ou plasmatique et le résultat est exprimé en Unité Internationale (UI). La DE gamma-carboxyprothrombine (DCP), également appelée protéine induite par l absence de vitamine K / antagoniste-ii (PIVKA-II), est une protéine précurseur de la prothrombine biologiquement inactive. Normalement, le précurseur de la prothrombine subit une carboxylation posttraductionnelle (addition d un groupe acide carboxylique) par gamma-glutamyl carboxylase dans le foie avant la sécrétion dans le plasma. La DCP / PIVKA-II peut être détectée chez les personnes avec une déficience de vitamine K (due à une mauvaise nutrition ou malabsorption) et chez ceux prenant de la warfarine ou d autres médicaments qui inhibent l action de la vitamine K. 42
PICT DOSAGE DES ANTICOAGULANTS 1. PEFAKIT PICT. Dosage chronométrique. PEFAKIT PiCT. PEFAKIT PiCT Calibrateur HNF. PEFAKIT PiCT Contrôles HNF
Dosage chronométrique PICT 1. PEFAKIT PICT Nombre de tests 8-505-01 coffret 80 3 flacons d activateur (2 ml) 3 flacons de réactif Start (2 ml) Mesure des anticoagulants par méthode chronométrique. 1 2
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