PLATE-FORME DE MICROSCOPIE ÉLECTRONIQUE À TRANSMISSION

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Sabine Barbeau
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1 PLATE-FORME DE MICROSCOPIE ÉLECTRONIQUE À TRANSMISSION Dr. Mohamed SENNOUR Responsable de la plate-forme JOURNÉE PLATES-FORMES EVRY, GÉNOCENTRE 25 juin 2013

2 Contexte et historique 2000 : constitution du pôle commun de Microscopie et d Imagerie d Evry regroupant le Genopole, MINES ParisTech et l Inserm Acquisition du microscope électronique à transmission FEI Tecnai F : installation du MET au Centre des Matériaux (Evry) qui en assure la maintenance et la formation des utilisateurs Partage du temps d utilisation entre physiciens et biologistes du site

transmission FEI Tecnai F20 2002 : installation du MET au Centre des Matériaux (Evry) qui en assure

3 LE MICROSCOPE TECNAI F20-ST Localisation Centre des Matériaux MINES ParisTech 10 rue Henri Desbruères Corbeil-Essonnes Spécificités - Tension: kv - Canon à émission de champ (FEG) - Résolution ponctuelle: 2.4 Å (limite d information : 1.4 Å) - Grandissement : 25x 1Mx ( x 20 avec le GIF) - Capacité de tilt : α ± 45 ( ± 80 en tomographie), β ± 30 Accessoires et techniques - Analyse chimique EDX (EDAX) - Spectroscopie EELS et imagerie EFTEM (GIF) - Imagerie en mode balayage (STEM-BF, STEM-DF) - Imagerie Z-contrast (Détecteur HAADF) - Nano-tomgraphie (TEM, EFTEM, HAADF) - 3 cameras (TV, CCD, grand-angle) - 3 porte-objets (simple tilt, double tilt, tomographie)

4 Å) - Grandissement : 25x 1Mx ( x 20 avec le GIF) - Capacité de tilt : α ± 45 ( ± 80 en tomographie), β ± 30 Accessoires et techniques - Analyse chimique EDX (EDAX) -

4 PRÉPARATION DES ÉCHANTILLONS Ultramicrotome LEICA Ultracut-R Localisation Laboratoire «Structure et activité de biomolécules normales et pathologiques» Université d Evry-Val-d Essonne Directeur : Dr. Patrick Curmi Les étapes de la préparation - Fixation - Déshydratation ou cryosubstitution - Imprégnation et inclusion dans une résine - Ultramicrotomie (coupes 90 nm d épaisseur) - Coloration Enrobage Récupération Découpe Coloration

Patrick Curmi Les étapes de la préparation - Fixation - Déshydratation ou cryosubstitution - Imprégnation et

5 IMAGERIE Mode CTEM (camera grand angle) Cellule de foie Mode STEM (détecteur champ sombre) Neurone de souris 5 µm Mode HRTEM (camera CCD) Nanodiamant 500 nm 2 nm

6 ANALYSE CHIMIQUE e- N2 Analyse EDX C Impossible d'afficher l'image. Votre ordinateur manque peut-être de mémoire pour ouvrir l'image ou l'image est endommagée. Redémarrez l'ordinateur, puis ouvrez à nouveau le fichier. Si le x rouge est toujours affiché, vous devrez peut-être supprimer l'image avant de la réinsérer. Impossible d'afficher l'image. Votre ordinateur manque peut-être de mémoire pour ouvrir l'image ou l'image est endommagée. Redémarrez l'ordinateur, puis ouvrez à nouveau le fichier. Si le x rouge est toujours affiché, vous devrez peut-être supprimer l'image avant de la réinsérer. Spectre EDX sur un nanodiamant hυ Sonde < 1 nm Cu Os Os Cu Cu Os Energie (kev) 8 10 Spectroscopie EELS et cartographie EFTEM Faisceau e- Objet Fente d entrée Fente de sélection Système de lentilles Camera CCD Cellule cancéreuses de seins humains Prisme magnétique M. Diociaiuti, Journal of Electron Spectroscopy and Related Phenomena 143 (2005)

Votre ordinateur manque peut-être de mémoire pour ouvrir l'image ou l'image est endommagée. Redémarrez l'ordinateur, puis ouvrez à nouveau le fichier.

7 IMAGERIE 3D Projection Nanoparticules de Pt dans un aérogel de carbone Rendu de volume Rendu de surface 50 nm Reconstruction Reconstruction 3D de la morphologie et de la chimie d objets nanométriques Model tomographique 3D de cellule pancréatique β Bleu: granules d insuline Jaune: appareil de Golgi Vert: mitochondries Violet: membrane plasmique Alioscka A. Sousa et al., Journal of Structural Biology 174 (2011)

tomographique 3D de cellule pancréatique β Bleu: granules d insuline Jaune: appareil de Golgi Vert:

8 TRAVAUX RÉALISÉS SUR LA PLATE-FORME 5 0 n m Caractérisation MET d axonales présentes chez les souris transgéniques mutées pour la spastine Projet européen Nano4drugs: utilisation des nanodiamants pour transporter des protéines thérapeutiques au cœur des cellules. Anne Tarrade, Judith Melki, Alain Thorel, Human Molecular Genetics, 15, 2006, Coordinateur: Dr. Patrick Curmi JOURNÉE PLATES-FORMES 25 juin 2013 EVRY,

transporter des protéines thérapeutiques au cœur des cellules.

9 INFORMATIONS PRATIQUES Modalités d accès Biologistes du site d Evry Les biologistes disposent de 50% du temps d utilisation du microscope Tecnai F20. ü utilisateurs formés et autonomes : accès gratuit ü utilisateurs non autonomes : assistance facturée au tarif privilégié Extérieurs Accès payant Préparation des échantillons Vandana JOSHI Patrick CURMI Contact vandana.joshi@univ-evry.fr pcurmi@univ-evry.fr Microscope Tecnai F20 Mohamed SENNOUR Alain THOREL mohamed.sennour@ensmp.fr alain.thorel@ensmp.fr

ü utilisateurs formés et autonomes : accès gratuit ü utilisateurs non autonomes : assistance facturée au tarif privilégié

10 Merci pour votre attention!

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