Sommaire. Première partie Les concepts de base
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- Jean-Pascal Paradis
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1 Sommaire Préface à la troisième édition... Préface à la deuxième édition... Avant-propos à la troisième édition... Avant-propos à la deuxième édition... Avant-propos à la première édition... XV XVII XIX XXI XXIII Chapitre 1. Biologie moléculaire et médecine : un panorama... 1 Les étapes d une révolution biologique... 1 L impact médical de la génétique moléculaire... 5 La conquête des génomes... 7 Perspectives «post-génomiques»... 8 Première partie Les concepts de base Chapitre 2. Le génome des eucaryotes : le stockage de l information La double hélice Le DNA est considérablement compacté dans le noyau La vie cellulaire suit un rythme : notion de cycle cellulaire Le matériel génétique des eucaryotes est en très large excès Une petite fraction du DNA est extranucléaire : le DNA mitochondrial Chapitre 3. Constance et variation du DNA La constance du DNA résulte de deux processus : la réplication et la réparation Les variations du DNA : mutations, recombinaisons, transpositions Chapitre 4. Du gène à la protéine La RNA polymérase I transcrit les RNA des ribosomes Maturation des RNA ribosomaux et formation du ribosome sont liées Le rôle principal de la RNA polymérase II est de transcrire les RNA messagers Les transcrits subissent une maturation nucléaire qui débute immédiatement après l initiation de la transcription La RNA polymérase III transcrit les petits RNA : trna, RNA 5S Du RNA à la chaîne polypeptidique : la traduction IX
2 Un signal d adressage indique la destination de la protéine Les protéines peuvent subir des modifications post-traductionnelles Chapitre 5. La régulation de l expression des gènes. Différenciation et embryologie moléculaire Rappel du modèle procaryotique Les opérons inductibles codent des enzymes de la voie catabolique L anabolisme fait appel à des opérons répressibles Un système modulateur d expression : l atténuation Régulation par inversion de séquences de DNA Vers la connaissance des mécanismes chez l homme : les systèmes eucaryotes L environnement chromatinien des gènes actifs Régulation par modification de la structure primaire du DNA La régulation transcriptionnelle La regulation post-transcriptionnelle La régulation traductionnelle Le dernier niveau de régulation possible est le niveau post-traductionnel Les mécanismes moléculaires de l embryogenèse Le développement précoce : les gènes à effet maternel Les gènes zygotiques de segmentation définissent une série de régions Les gènes homéotiques définissent l identité finale de chaque segment Le modèle de la drosophile peut être extrapolé aux autres organismes Un modèle de différenciation : la myogenèse Chapitre 6. Virus des eucaryotes et biologie moléculaire Les virus sont des organismes incomplets et parasites SV40 et polyome, deux papovavirus à pouvoir transformant Les adénovirus Les rétrovirus Le virus de l hépatite B (HBV) Le virus de l hépatite C (HCV) Deuxième partie Biologie moléculaire et pathologie Chapitre 7. Bases de l exploration du génotype Pourquoi analyser le génotype? Bases moléculaires du phénotype Comment analyser le génotype? Le DNA peut être analysé au niveau des chromosomes métaphasiques Le DNA mitochondrial Le DNA des organismes exogènes Une approche globale : l exploration de l ensemble des produits d expression du génome Chapitre 8. Les polymorphismes du DNA Les polymorphismes du DNA sont des marqueurs génotypiques Les différents types de polymorphismes L exploitation des polymorphismes du DNA Chapitre 9. Génomique Introduction à la génomique : un champ nouveau de la biologie Première phase : les cartes du génome Principes généraux de la cartographie du génome humain X
3 La cartographie génétique La cartographie physique Les différentes cartes du génome Deuxième phase : l acquisition des séquences des génomes Le double défi du projet HGP La réalisation : le grand séquençage Le séquençage du génome humain Les recherches en génomique ne se limitent pas à la simple reconstitution du puzzle de la séquence brute Troisième phase : l exploitation du génome L impact cognitif : génomique et biologie La génomique in silico : une gestion de la complexité Interroger les bases de données génomiques L organisation du travail in silico Génomique mode d emploi : quelques scénarios d utilisation Perspectives Chapitre 10. Pathologie spontanée et expérimentale du DNA génomique Pathologie spontanée du génome humain La très riche palette des mutations Une ou plusieurs mutations? Un ou plusieurs gènes? De la mutation à la maladie : pas de relation simple Pathologie expérimentale du DNA génomique Les stratégies de pathologie génique expérimentale L exploitation des modèles animaux de pathologie génique Les autres utilisations de la transgenèse Chapitre 11. Le diagnostic génotypique Les principes du diagnostic génotypique Le diagnostic génotypique dans son contexte médical DNA et médecine légale : l identification des individus par le génotype Chapitre 12. Gènes et maladies La part des gènes Du phénotype au génotype Le concept de gène de maladie La quête des gènes de maladies monogéniques Quelques maladies monogéniques à titre d exemple Le modèle des maladies de l hémoglobine Bases moléculaires des maladies par pathologie du gène CFTR (mucoviscidose et autres) Myopathies de Duchenne et de Becker : le concept de dystrophinopathies Les maladies par instabilité de séquences répétées Les maladies mitochondriales Complexité des maladies mitochondriales Le génome mitochondrial et sa pathologie L exploration moléculaire des anomalies du génome mitochondrial Vers les gènes des maladies à déterminisme complexe Les maladies communes Bases moléculaires de la notion de terrain Les maladies dues à d autres pathologies génomiques Du génotype au phénotype : au-delà de Mendel Il n y a pas de relation univoque entre pathologie génique et symptomatologie L impact sur la pratique médicale XI
4 Chapitre 13. DNA et cancers Les bases moléculaires de l oncogenèse Comment l oncologie est devenue moléculaire Les gènes de cancer et leur pathologie Les voies du cancer : une tentative d organisation des connaissances Biologie moléculaire et cancérologie médicale Vers une sémiologie moléculaire des cancers Les cancers d origine virale Les cancers héréditaires Les cancers hématologiques Deux cancers solides à titre d exemple : côlon, sein Les bases moléculaires des traitements en oncologie Perspectives Chapitre 14. Pathologie due à des génomes exogènes Un cahier des charges du diagnostic génotypique des bactéries, virus, parasites, Considérations techniques Quelques exemples d application pratique Chapitre 15. Gènes et thérapies L évolution du concept de thérapie génique : du transfert de «DNA médicament» aux thérapies dérivées de la connaissance des gènes La thérapie génique de première génération : le transfert de gènes Préalables généraux Problèmes méthodologiques L expérimentation préclinique Le passage à l homme Thérapies ciblées dérivées de la connaissance des gènes Agir sur le génome Les manipulations thérapeutiques de l épigénome Les interventions thérapeutiques sur les transcrits Agir sur le protéome Perspectives Chapitre 16. Biologie moléculaire et société La situation créée par l accès aux gènes et au génome Les implications éthiques de l accès au génome humain L encadrement de la génétique moléculaire médicale Quelques faits de société Troisième partie Les outils du génie génétique Chapitre 17. Le matériel biologique et les techniques générales de biologie moléculaire Le matériel biologique Techniques générales utilisées en biologie moléculaire Chapitre 18. Les techniques d amplification élective in vitro (PCR, etc.) La technique PCR (Polymerase Chain Reaction) Les techniques d amplification isotherme NASBA (Nucleic Acid Sequence Based Amplification) et TMA (Transcription Mediated Amplification) La LCR (Ligase Chain Reaction) XII
5 L amplification des RNA : le système de la Qβ réplicase (amplification de sonde) Le DNA branché (bdna) permet une amplification du signal (Quantiplex ) Chapitre 19. Les outils enzymatiques du génie génétique Les enzymes de restriction Les méthylases du DNA bactérien Applications particulières des enzymes de restriction Autres enzymes d usage courant en biologie moléculaire Chapitre 20. L hybridation moléculaire Notion de température de fusion du DNA Notion d hybridation Hybridation en phase liquide Hybridation sur support solide Hybridation in situ Chapitre 21. Les vecteurs : plasmides, phages, cosmides, YAC, BAC, PAC, virus Les plasmides Les phages Les autres types de vecteurs Les chromosomes artificiels Chapitre 22. Les sondes et leur marquage Le concept de sonde Les stratégies de marquage L agent de marquage Chapitre 23. Le clonage moléculaire Les banques génomiques Les banques de cdna La recherche du clone contenant le recombinant désiré : le criblage Le clonage après PCR Le clonage des cdna des partenaires d une protéine Le clonage des facteurs protéiques reconnaissant une séquence nucléotidique cible : la technique simple hybride Chapitre 24. Les micro- et nanotechnologies : puces, laboratoires sur puce, etc Les puces et les micro-arrays Quelques microtechnologies originales Les microtechnologies permettent de créer des laboratoires sur des puces (lab on a chip) Les premiers pas des nanotechnologies Les systèmes et les puces du futur Chapitre 25. Détermination de la séquence d un acide nucléique Les techniques manuelles Les techniques automatisées Chapitre 26. Analyse du génome et de ses modifications Visualisation d une portion du génome : la méthode de Southern Applications de la méthode de Southern La mise en évidence des mutations étendues La mise en évidence des mutations ou des variations ponctuelles de séquence XIII
6 Chapitre 27. Analyse de l expression des gènes (régulations, transcriptome, protéome, etc.) Analyse qualitative des transcrits Analyse quantitative des transcrits Analyse de la transcription in vitro Analyse des mécanismes de régulation de l expression des gènes Traduction in vitro et production de protéines recombinantes Analyse des protéines : la protéomique Chapitre 28. Les techniques de modification du matériel génétique ou de son expression Modification in vitro d une portion de séquence Constructions permettant de mettre en évidence les effets des modifications apportées Les vecteurs utilisés pour le transfert ex vivo et in vivo du matériel génétique Transfert ex vivo du matériel génétique Transfert et modification in vivo du matériel génétique La RNAi (RNA interférence) peut être utilisée comme outil pour éteindre l expression d un gène : le «knock-down» Chapitre 29. Informatique et biologie moléculaire L équipement pour utiliser l outil informatique La communication avec l extérieur Les utilisations d Internet en biologie moléculaire Glossaire Index XIV
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