EFFET DU REPIQUAGE DE PSEUDOMONAS AERUGINOSA SUR LES CARACTÈRES MORPHOLOGIQUES, BIOCHIMIQUES ET SENSIBILITÉ AUX ANTIBIOTIQUES

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1 UNIIVERSITE MOHAMMED V -SOUISSI- FACULTE DE MEDECINE ET DE PHARMACIE RABAT- ANNEE: 2013 THESE N :06 EFFET DU REPIQUAGE DE PSEUDOMONAS AERUGINOSA SUR LES CARACTÈRES MORPHOLOGIQUES, BIOCHIMIQUES ET SENSIBILITÉ AUX ANTIBIOTIQUES THESE Présentée et soutenue publiquement le: PAR Mlle. SOLBI Soukaina Née le 19 Mai 1988 à Mechraa belksiri Pour l''obtention du Doctorat en Pharmacie MOTS CLES : Repiquage, Pseudomonas aeruginosa, pureté, viabilité. MEMBRES DE JURY Mr. M. ZOUHDI Professeur de Microbiologie Mme. S. EL HAMZAOUI Professeur de Microbiologie Mme. S. TELLAL Professeur de Biochimie et Biochimie clinique Mme. F.JABOURIK Professeur de Pédiatrie PRESIDENT RAPPORTEUR JUGES

2 سبحانك لا علم لنا ا لا ما علمتنا ا نك ا نت العليم الحكيم سورة البقرة: الا ية: 32

3 UNIVERSITE MOHAMMED V- SOUISSI FACULTE DE MEDECINE ET DE PHARMACIE RABAT DOYENS HONORAIRES : : Docteur Abdelmalek FARAJ : Professeur Abdellatif BERBICH : Professeur Bachir LAZRAK : Professeur Taieb CHKILI : Professeur Mohamed Tahar ALAOUI : Professeur Abdelmajid BELMAHI ADMINISTRATION : Doyen : Professeur Najia HAJJAJ Vice Doyen chargé des Affaires Académiques et estudiantines Professeur Mohammed JIDDANE Vice Doyen chargé de la Recherche et de la Coopération Professeur Ali BENOMAR Vice Doyen chargé des Affaires Spécifiques à la Pharmacie Professeur Yahia CHERRAH Secrétaire Général : Mr. El Hassane AHALLAT PROFESSEURS : Février, Septembre, Décembre Pr. CHKILI Taieb Neuropsychiatrie Janvier et Décembre Pr. HASSAR Mohamed Pharmacologie Clinique Mars, Avril et Septembre Pr. EL KHAMLICHI Abdeslam Neurochirurgie 4. Pr. MESBAHI Redouane Cardiologie Mai et Octobre Pr. BOUZOUBAA Abdelmajid Cardiologie 6. Pr. EL MANOUAR Mohamed Traumatologie-Orthopédie 7. Pr. HAMANI Ahmed* Cardiologie 8. Pr. MAAZOUZI Ahmed Wajih Chirurgie Cardio-Vasculaire 9. Pr. SBIHI Ahmed Anesthésie Réanimation 10. Pr. TAOBANE Hamid* Chirurgie Thoracique Mai et Novembre Pr. ABROUQ Ali* Oto-Rhino-Laryngologie 12. Pr. BENOMAR M hammed Chirurgie-Cardio-Vasculaire

4 13. Pr. BENSOUDA Mohamed Anatomie 14. Pr. BENOSMAN Abdellatif Chirurgie Thoracique 15. Pr. LAHBABI ép. AMRANI Naïma Physiologie Novembre Pr. ALAOUI TAHIRI Kébir* Pneumo-phtisiologie 17. Pr. BALAFREJ Amina Pédiatrie 18. Pr. BELLAKHDAR Fouad Neurochirurgie 19. Pr. HAJJAJ ép. HASSOUNI Najia Rhumatologie 20. Pr. SRAIRI Jamal-Eddine Cardiologie Décembre Pr. BOUCETTA Mohamed* Neurochirurgie 22. Pr. EL GUEDDARI Brahim El Khalil Radiothérapie 23. Pr. MAAOUNI Abdelaziz Médecine Interne 24. Pr. MAAZOUZI Ahmed Wajdi Anesthésie -Réanimation 25. Pr. NAJI M Barek * Immuno-Hématologie 26. Pr. SETTAF Abdellatif Chirurgie Novembre et Décembre Pr. BENJELLOUN Halima Cardiologie 28. Pr. BENSAID Younes athologie Chirurgicale 29. Pr. EL ALAOUI Faris Moulay El Mostafa Neurologie 30. Pr. IHRAI Hssain * Stomatologie et Chirurgie Maxillo-Faciale 31. Pr. IRAQI Ghali Pneumo-phtisiologie 32. Pr. KZADRI Mohamed Oto-Rhino-laryngologie Janvier, Février et Décembre Pr. AJANA Ali Radiologie 34. Pr. AMMAR Fanid Pathologie Chirurgicale 35. Pr. CHAHED OUAZZANI Houriaép.TAOBANE Gastro-Entérologie 36. Pr. EL FASSY FIHRI Mohamed Taoufiq Pneumo-phtisiologie 37. Pr. EL HAITEM Naïma Cardiologie 38. Pr. EL MANSOURI Abdellah* Chimie-Toxicologie Expertise 39. Pr. EL YAACOUBI Moradh Traumatologie Orthopédie 40. Pr. ESSAID EL FEYDI Abdellah Gastro-Entérologie 41. Pr. LACHKAR Hassan Médecine Interne 42. Pr. OHAYON Victor* Médecine Interne 43. Pr. YAHYAOUI Mohamed Neurologie

5 Décembre Pr. BENHAMAMOUCH Mohamed Najib Chirurgie Pédiatrique 45. Pr. DAFIRI Rachida Radiologie 46. Pr. FAIK Mohamed Urologie 47. Pr. HERMAS Mohamed Traumatologie Orthopédie 48. Pr. TOLOUNE Farida* Médecine Interne Décembre 1989 Janvier et Novembre Pr. ADNAOUI Mohamed Médecine Interne 50. Pr. AOUNI Mohamed Médecine Interne 51. Pr. BENAMEUR Mohamed* Radiologie 52. Pr. BOUKILI MAKHOUKHI Abdelali Cardiologie 53. Pr. CHAD Bouziane Pathologie Chirurgicale 54. Pr. CHKOFF Rachid Urologie 55. Pr. KHARBACH Aîcha Gynécologie -Obstétrique 56. Pr. MANSOURI Fatima Anatomie-Pathologique 57. Pr. OUAZZANI Taïbi Mohamed Réda Neurologie 58. Pr. SEDRATI Omar* Dermatologie 59. Pr. TAZI Saoud Anas Anesthésie Réanimation Février Avril Juillet et Décembre Pr. AL HAMANY Zaîtounia Anatomie-Pathologique 61. Pr. ATMANI Mohamed* Anesthésie Réanimation 62. Pr. AZZOUZI Abderrahim Anesthésie Réanimation 63. Pr. BAYAHIA Rabéa ép. HASSAM Néphrologie 64. Pr. BELKOUCHI Abdelkader Chirurgie Générale 65. Pr. BENABDELLAH Chahrazad Hématologie 66. Pr. BENCHEKROUN BELABBES Abdellatif Chirurgie Générale 67. Pr. BENSOUDA Yahia Pharmacie galénique 68. Pr. BERRAHO Amina Ophtalmologie 69. Pr. BEZZAD Rachid Gynécologie Obstétrique 70. Pr. CHABRAOUI Layachi Biochimie et Chimie 71. Pr. CHANA El Houssaine* Ophtalmologie 72. Pr. CHERRAH Yahia Pharmacologie 73. Pr. CHOKAIRI Omar Histologie Embryologie 74. Pr. FAJRI Ahmed* Psychiatrie 75. Pr. JANATI Idrissi Mohamed* Chirurgie Générale 76. Pr. KHATTAB Mohamed Pédiatrie 77. Pr. NEJMI Maati Anesthésie-Réanimation 78. Pr. OUAALINE Mohammed* Médecine Préventive, Santé Publique et Hygiène

6 79. Pr. SOULAYMANI Rachida ép.bencheikh Pharmacologie 80. Pr. TAOUFIK Jamal Chimie thérapeutique Décembre Pr. AHALLAT Mohamed Chirurgie Générale 82. Pr. BENOUDA Amina 83. Pr. BENSOUDA Adil Microbiologie Anesthésie Réanimation 84. Pr. BOUJIDA Mohamed Najib Radiologie 85. Pr. CHAHED OUAZZANI Laaziza Gastro-Entérologie 86. Pr. CHRAIBI Chafiq 87. Pr. DAOUDI Rajae Gynécologie Obstétrique Ophtalmologie 88. Pr. DEHAYNI Mohamed* Gynécologie Obstétrique 89. Pr. EL HADDOURY Mohamed Anesthésie Réanimation 90. Pr. EL OUAHABI Abdessamad 91. Pr. FELLAT Rokaya Neurochirurgie Cardiologie 92. Pr. GHAFIR Driss* Médecine Interne 93. Pr. JIDDANE Mohamed Anatomie 94. Pr. OUAZZANI TAIBI Med Charaf Eddine Gynécologie Obstétrique 95. Pr. TAGHY Ahmed Chirurgie Générale 96. Pr. ZOUHDI Mimoun Microbiologie Mars Pr. AGNAOU Lahcen Ophtalmologie 98. Pr. AL BAROUDI Saad Chirurgie Générale 99. Pr. BENCHERIFA Fatiha Ophtalmologie 100. Pr. BENJAAFAR Noureddine Radiothérapie 101. Pr. BENJELLOUN Samir Chirurgie Générale 102. Pr. BEN RAIS Nozha Biophysique 103. Pr. CAOUI Malika Biophysique 104. Pr. CHRAIBI Abdelmjid Endocrinologie et Maladies Métaboliques 105. Pr. EL AMRANI Sabah ép. AHALLAT Gynécologie Obstétrique 106. Pr. EL AOUAD Rajae Immunologie 107. Pr. EL BARDOUNI Ahmed Traumato-Orthopédie 108. Pr. EL HASSANI My Rachid Radiologie 109. Pr. EL IDRISSI LAMGHARI Abdennaceur Médecine Interne 110. Pr. EL KIRAT Abdelmajid* Chirurgie Cardio- Vasculaire 111. Pr. ERROUGANI Abdelkader Chirurgie Générale 112. Pr. ESSAKALI Malika Immunologie 113. Pr. ETTAYEBI Fouad Chirurgie Pédiatrique 114. Pr. HADRI Larbi* Médecine Interne 115. Pr. HASSAM Badredine Dermatologie 116. Pr. IFRINE Lahssan Chirurgie Générale 117. Pr. JELTHI Ahmed Anatomie Pathologique 118. Pr. MAHFOUD Mustapha Traumatologie Orthopédie 119. Pr. MOUDENE Ahmed* Traumatologie- Orthopédie 120. Pr. OULBACHA Said Chirurgie Générale 121. Pr. RHRAB Brahim Gynécologie Obstétrique 122. Pr. SENOUCI Karima ép. BELKHADIR Dermatologie 123. Pr. SLAOUI Anas Chirurgie Cardio-Vasculaire

7 Mars Pr. ABBAR Mohamed* Urologie 125. Pr. ABDELHAK M barek Chirurgie Pédiatrique 126. Pr. BELAIDI Halima Neurologie 127. Pr. BRAHMI Rida Slimane Gynécologie Obstétrique 128. Pr. BENTAHILA Abdelali Pédiatrie 129. Pr. BENYAHIA Mohammed Ali Gynécologie Obstétrique 130. Pr. BERRADA Mohamed Saleh Traumatologie Orthopédie 131. Pr. CHAMI Ilham Radiologie 132. Pr. CHERKAOUI LallaOuafae Ophtalmologie 133. Pr. EL ABBADI Najia 134. Pr. HANINE Ahmed* Neurochirurgie Radiologie 135. Pr. JALIL Abdelouahed Chirurgie Générale 136. Pr. LAKHDAR Amina Gynécologie Obstétrique 137. Pr. MOUANE Nezha Pédiatrie Mars Pr. ABOUQUAL Redouane Réanimation Médicale 139. Pr. AMRAOUI Mohamed Chirurgie Générale 140. Pr. BAIDADA Abdelaziz Gynécologie Obstétrique 141. Pr. BARGACH Samir Gynécologie Obstétrique 142. Pr. BEDDOUCHE Amoqrane* Urologie 143. Pr. BENAZZOUZ Mustapha Médecine Interne 144. Pr. DIMOU M barek* Anesthésie Réanimation 145. Pr. DRISSI KAMILI Mohammed Nordine* Anesthésie Réanimation 146. Pr. EL MESNAOUI Abbes Chirurgie Générale 147. Pr. ESSAKALI HOUSSYNI Leila Oto-Rhino-Laryngologie 148. Pr. FERHATI Driss Gynécologie Obstétrique 149. Pr. HASSOUNI Fadil Médecine Préventive, Santé Publique et Hygiène 150. Pr. HDA Abdelhamid* Cardiologie 151. Pr. IBEN ATTYA ANDALOUSSI Ahmed Urologie 152. Pr. IBRAHIMY Wafaa Ophtalmologie 153. Pr. MANSOURI Aziz Radiothérapie 154. Pr. OUAZZANI CHAHDI Bahia Ophtalmologie 155. Pr. RZIN Abdelkader* Stomatologie et Chirurgie Maxillo-faciale 156. Pr. SEFIANI Abdelaziz Génétique 157. Pr. ZEGGWAGH Amine Ali Réanimation Médicale Décembre Pr. AMIL Touriya* Radiologie 159. Pr. BELKACEM Rachid Chirurgie Pédiatrie 160. Pr. BELMAHI Amin Chirurgie réparatrice et plastique 161. Pr. BOULANOUAR Abdelkrim Ophtalmologie 162. Pr. EL ALAMI EL FARICHA EL Hassan Chirurgie Générale 163. Pr. EL MELLOUKI Ouafae* Parasitologie 164. Pr. GAOUZI Ahmed Pédiatrie 165. Pr. MAHFOUDI M barek* Radiologie

8 166. Pr. MOHAMMADINE EL Hamid Chirurgie Générale 167. Pr. MOHAMMADI Mohamed 168. Pr. MOULINE Soumaya Médecine Interne Pneumo-phtisiologie 169. Pr. OUADGHIRI Mohamed Traumatologie-Orthopédie 170. Pr. OUZEDDOUN Naima Néphrologie 171. Pr. ZBIR EL Mehdi* Novembre 1997 Cardiologie 172. Pr. ALAMI Mohamed Hassan Gynécologie-Obstétrique 173. Pr. BEN AMAR Abdesselem Chirurgie Générale 174. Pr. BEN SLIMANE Lounis Urologie 175. Pr. BIROUK Nazha Neurologie 176. Pr. BOULAICH Mohamed O.RL Pr. CHAOUIR Souad* Radiologie 178. Pr. DERRAZ Said Neurochirurgie 179. Pr. ERREIMI Naima Pédiatrie 180. Pr. FELLAT Nadia Cardiologie 181. Pr. GUEDDARI Fatima Zohra Radiologie 182. Pr. HAIMEUR Charki* Anesthésie Réanimation 183. Pr. KANOUNI NAWAL Physiologie 184. Pr. KOUTANI Abdellatif Urologie 185. Pr. LAHLOU Mohamed Khalid Chirurgie Générale 186. Pr. MAHRAOUI CHAFIQ Pédiatrie 187. Pr. NAZI M barek* Cardiologie 188. Pr. OUAHABI Hamid* Neurologie 189. Pr. SAFI Lahcen* Anesthésie Réanimation 190. Pr. TAOUFIQ Jallal Psychiatrie 191. Pr. YOUSFI MALKI Mounia Gynécologie Obstétrique Novembre Pr. AFIFI RAJAA Gastro-Entérologie 193. Pr. AIT BENASSER MOULAY Ali* Pneumo-phtisiologie 194. Pr. ALOUANE Mohammed* Oto-Rhino-Laryngologie 195. Pr. BENOMAR ALI Neurologie 196. Pr. BOUGTAB Abdesslam Chirurgie Générale 197. Pr. ER RIHANI Hassan Oncologie Médicale 198. Pr. EZZAITOUNI Fatima Néphrologie 199. Pr. KABBAJ Najat Radiologie 200. Pr. LAZRAK Khalid (M) Traumatologie Orthopédie Novembre Pr. BENKIRANE Majid* Hématologie 202. Pr. KHATOURI ALI* Cardiologie 203. Pr. LABRAIMI Ahmed* Anatomie Pathologique

9 Janvier Pr. ABID Ahmed* Pneumophtisiologie 205. Pr. AIT OUMAR Hassan Pédiatrie 206. Pr. BENCHERIF My Zahid Ophtalmologie 207. Pr. BENJELLOUN DAKHAMA Badr.Sououd Pédiatrie 208. Pr. BOURKADI Jamal-Eddine Pneumo-phtisiologie 209. Pr. CHAOUI Zineb Ophtalmologie 210. Pr. CHARIF CHEFCHAOUNI Al Montacer Chirurgie Générale 211. Pr. ECHARRAB El Mahjoub Chirurgie Générale 212. Pr. EL FTOUH Mustapha Pneumo-phtisiologie 213. Pr. EL MOSTARCHID Brahim* Neurochirurgie 214. Pr. EL OTMANYAzzedine Chirurgie Générale 215. Pr. GHANNAM Rachid Cardiologie 216. Pr. HAMMANI Lahcen Radiologie 217. Pr. ISMAILI Mohamed Hatim Anesthésie-Réanimation 218. Pr. ISMAILI Hassane* Traumatologie Orthopédie 219. Pr. KRAMI Hayat Ennoufouss Gastro-Entérologie 220. Pr. MAHMOUDI Abdelkrim* Anesthésie-Réanimation 221. Pr. TACHINANTE Rajae Anesthésie-Réanimation 222. Pr. TAZI MEZALEK Zoubida Médecine Interne Novembre Pr. AIDI Saadia Neurologie 224. Pr. AIT OURHROUI Mohamed Dermatologie 225. Pr. AJANA Fatima Zohra Gastro-Entérologie 226. Pr. BENAMR Said Chirurgie Générale 227. Pr. BENCHEKROUN Nabiha Ophtalmologie 228. Pr. CHERTI Mohammed Cardiologie 229. Pr. ECH-CHERIF EL KETTANI Selma Anesthésie-Réanimation 230. Pr. EL HASSANI Amine Pédiatrie 231. Pr. EL IDGHIRI Hassan Oto-Rhino-Laryngologie 232. Pr. EL KHADER Khalid Urologie 233. Pr. EL MAGHRAOUI Abdellah* Rhumatologie 234. Pr. GHARBI Mohamed El Hassan Endocrinologie et Maladies Métaboliques 235. Pr. HSSAIDA Rachid* Anesthésie-Réanimation 236. Pr. LACHKAR Azzouz Urologie 237. Pr. LAHLOU Abdou Traumatologie Orthopédie 238. Pr. MAFTAH Mohamed* Neurochirurgie 239. Pr. MAHASSINI Najat Anatomie Pathologique 240. Pr. MDAGHRI ALAOUI Asmae Pédiatrie 241. Pr. NASSIH Mohamed* Stomatologie Et Chirurgie Maxillo-Faciale 242. Pr. ROUIMI Abdelhadi Neurologie

10 Décembre Pr. ABABOU Adil Anesthésie-Réanimation 244. Pr. AOUAD Aicha Cardiologie 245. Pr. BALKHI Hicham* Anesthésie-Réanimation 246. Pr. BELMEKKI Mohammed Ophtalmologie 247. Pr. BENABDELJLIL Maria Neurologie 248. Pr. BENAMAR Loubna Néphrologie 249. Pr. BENAMOR Jouda Pneumo-phtisiologie 250. Pr. BENELBARHDADI Imane Gastro-Entérologie 251. Pr. BENNANI Rajae Cardiologie 252. Pr. BENOUACHANE Thami Pédiatrie 253. Pr. BENYOUSSEF Khalil Dermatologie 254. Pr. BERRADA Rachid Gynécologie Obstétrique 255. Pr. BEZZA Ahmed* Rhumatologie 256. Pr. BOUCHIKHI IDRISSI Med Larbi Anatomie 257. Pr. BOUHOUCH Rachida Cardiologie 258. Pr. BOUMDIN El Hassane* Radiologie 259. Pr. CHAT Latifa Radiologie 260. Pr. CHELLAOUI Mounia Radiologie 261. Pr. DAALI Mustapha* Chirurgie Générale 262. Pr. DRISSI Sidi Mourad* Radiologie 263. Pr. EL HAJOUI Ghziel Samira Gynécologie Obstétrique 264. Pr. EL HIJRI Ahmed Anesthésie-Réanimation 265. Pr. EL MAAQILI Moulay Rachid Neuro-Chirurgie 266. Pr. EL MADHI Tarik Chirurgie-Pédiatrique 267. Pr. EL MOUSSAIF Hamid Ophtalmologie 268. Pr. EL OUNANI Mohamed Chirurgie Générale 269. Pr. EL QUESSAR Abdeljlil Radiologie 270. Pr. ETTAIR Said Pédiatrie 271. Pr. GAZZAZ Miloudi* Neuro-Chirurgie 272. Pr. GOURINDA Hassan Chirurgie-Pédiatrique 273. Pr. HRORA Abdelmalek Chirurgie Générale 274. Pr. KABBAJ Saad Anesthésie-Réanimation 275. Pr. KABIRI EL Hassane* Chirurgie Thoracique 276. Pr. LAMRANI Moulay Omar Traumatologie Orthopédie 277. Pr. LEKEHAL Brahim Chirurgie Vasculaire Périphérique 278. Pr. MAHASSIN Fattouma* Médecine Interne 279. Pr. MEDARHRI Jalil Chirurgie Générale 280. Pr. MIKDAME Mohammed* Hématologie Clinique 281. Pr. MOHSINE Raouf Chirurgie Générale 282. Pr. NABIL Samira Gynécologie Obstétrique 283. Pr. NOUINI Yassine Urologie 284. Pr. OUALIM Zouhir* Néphrologie 285. Pr. SABBAH Farid Chirurgie Générale

11 286. Pr. SEFIANI Yasser Chirurgie Vasculaire Périphérique 287. Pr. TAOUFIQ BENCHEKROUN Soumia Pédiatrie 288. Pr. TAZI MOUKHA Karim Urologie Décembre Pr. AL BOUZIDI Abderrahmane* Anatomie Pathologique 290. Pr. AMEUR Ahmed * Urologie 291. Pr. AMRI Rachida Cardiologie 292. Pr. AOURARH Aziz* Gastro-Entérologie 293. Pr. BAMOU Youssef * Biochimie-Chimie 294. Pr. BELMEJDOUB Ghizlene* Endocrinologie et Maladies Métaboliques 295. Pr. BENBOUAZZA Karima Rhumatologie 296. Pr. BENZEKRI Laila Dermatologie 297. Pr. BENZZOUBEIR Nadia* Gastro-Entérologie 298. Pr. BERNOUSSI Zakiya Anatomie Pathologique 299. Pr. BICHRA Mohamed Zakariya Psychiatrie 300. Pr. CHOHO Abdelkrim * Chirurgie Générale 301. Pr. CHKIRATE Bouchra Pédiatrie 302. Pr. EL ALAMI EL FELLOUS Sidi Zouhair Chirurgie Pédiatrique 303. Pr. EL ALJ Haj Ahmed Urologie 304. Pr. EL BARNOUSSI Leila Gynécologie Obstétrique 305. Pr. EL HAOURI Mohamed * Dermatologie 306. Pr. EL MANSARI Omar* Chirurgie Générale 307. Pr. ES-SADEL Abdelhamid Chirurgie Générale 308. Pr. FILALI ADIB Abdelhai Gynécologie Obstétrique 309. Pr. HADDOUR Leila Cardiologie 310. Pr. HAJJI Zakia Ophtalmologie 311. Pr. IKEN Ali Urologie 312. Pr. ISMAEL Farid Traumatologie Orthopédie 313. Pr. JAAFAR Abdeloihab* Traumatologie Orthopédie 314. Pr. KRIOULE Yamina Pédiatrie 315. Pr. LAGHMARI Mina Ophtalmologie 316. Pr. MABROUK Hfid* Traumatologie Orthopédie 317. Pr. MOUSSAOUI RAHALI Driss* Gynécologie Obstétrique 318. Pr. MOUSTAGHFIR Abdelhamid* Cardiologie 319. Pr. MOUSTAINE My Rachid Traumatologie Orthopédie 320. Pr. NAITLHO Abdelhamid* Médecine Interne 321. Pr. OUJILAL Abdelilah Oto-Rhino-Laryngologie 322. Pr. RACHID Khalid * Traumatologie Orthopédie 323. Pr. RAISS Mohamed Pneumophtisiologie 324. Pr. RHOU Hakima Néphrologie 325. Pr. SIAH Samir * Anesthésie Réanimation 326. Pr. THIMOU Amal Pédiatrie 327. Pr. ZENTAR Aziz* Chirurgie Générale 328. Pr. ZRARA Ibtisam* Anatomie Pathologique

12 PROFESSEURS AGREGES : Janvier Pr. ABDELLAH El Hassan 330. Pr. AMRANI Mariam Ophtalmologie Anatomie Pathologique 331. Pr. BENBOUZID Mohammed Anas Oto-Rhino-Laryngologie 332. Pr. BENKIRANE Ahmed* Gastro-Entérologie 333. Pr. BENRAMDANE Larbi* 334. Pr. BOUGHALEM Mohamed* Chimie Analytique Anesthésie Réanimation 335. Pr. BOULAADAS Malik Stomatologie et Chirurgie Maxillo-faciale 336. Pr. BOURAZZA Ahmed* Neurologie 337. Pr. CHAGAR Belkacem* Traumatologie Orthopédie 338. Pr. CHERRADI Nadia 339. Pr. EL FENNI Jamal* Anatomie Pathologique Radiologie 340. Pr. EL HANCHI ZAKI Gynécologie Obstétrique 341. Pr. EL KHORASSANI Mohamed Pédiatrie 342. Pr. EL YOUNASSI Badreddine* 343. Pr. HACHI Hafid Cardiologie Chirurgie Générale 344. Pr. JABOUIRIK Fatima Pédiatrie 345. Pr. KARMANE Abdelouahed Ophtalmologie 346. Pr. KHABOUZE Samira Gynécologie Obstétrique 347. Pr. KHARMAZ Mohamed Traumatologie Orthopédie 348. Pr. LEZREK Mohammed* Urologie 349. Pr. MOUGHIL Said Chirurgie Cardio-Vasculaire 350. Pr. NAOUMI Asmae* Ophtalmologie 351. Pr. SAADI Nozha Gynécologie Obstétrique 352. Pr. SASSENOU ISMAIL* Gastro-Entérologie 353. Pr. TARIB Abdelilah* Pharmacie Clinique 354. Pr. TIJAMI Fouad Chirurgie Générale 355. Pr. ZARZUR Jamila Cardiologie 356. Janvier Pr. ABBASSI Abdellah Chirurgie Réparatrice et Plastique 358. Pr. AL KANDRY Sif Eddine* Chirurgie Générale 359. Pr. ALAOUI Ahmed Essaid Microbiologie 360. Pr. ALLALI Fadoua Rhumatologie 361. Pr. AMAR Yamama Néphrologie 362. Pr. AMAZOUZI Abdellah Ophtalmologie 363. Pr. AZIZ Noureddine* Radiologie 364. Pr. BAHIRI Rachid Rhumatologie 365. Pr. BARKAT Amina Pédiatrie 366. Pr. BENHALIMA Hanane Stomatologie et Chirurgie Maxillo Faciale 367. Pr. BENHARBIT Mohamed Ophtalmologie 368. Pr. BENYASS Aatif Cardiologie 369. Pr. BERNOUSSI Abdelghani Ophtalmologie 370. Pr. BOUKLATA Salwa Radiologie 371. Pr. CHARIF CHEFCHAOUNI Mohamed Ophtalmologie 372. Pr. DOUDOUH Abderrahim* Biophysique

13 373. Pr. EL HAMZAOUI Sakina Microbiologie 374. Pr. HAJJI Leila Cardiologie 375. Pr. HESSISSEN Leila Pédiatrie 376. Pr. JIDAL Mohamed* Radiologie 377. Pr. KARIM Abdelouahed Ophtalmologie 378. Pr. KENDOUSSI Mohamed* Cardiologie 379. Pr. LAAROUSSI Mohamed Chirurgie Cardio-vasculaire 380. Pr. LYAGOUBI Mohammed Parasitologie 381. Pr. NIAMANE Radouane* Rhumatologie 382. Pr. RAGALA Abdelhak Gynécologie Obstétrique 383. Pr. SBIHI Souad Histo-Embryologie Cytogénétique 384. Pr. TNACHERI OUAZZANI Btissam Ophtalmologie 385. Pr. ZERAIDI Najia Gynécologie Obstétrique AVRIL Pr. ACHEMLAL Lahsen* Dermatologie 425. Pr. AKJOUJ Said* Radiologie 426. Pr. BELGNAOUI Fatima Zahra Dermatologie 427 Pr. BELMEKKI Abdelkader* Hématologie 428. Pr. BENCHEIKH Razika O.R.L 429 Pr. BIYI Abdelhamid* Biophysique 430. Pr. BOUHAFS Mohamed El Amine Chirurgie - Pédiatrique 431. Pr. BOULAHYA Abdellatif* Chirurgie Cardio Vasculaire 432. Pr. CHEIKHAOUI Younes Chirurgie Cardio Vasculaire 433. Pr. CHENGUETI ANSARI Anas Gynécologie Obstétrique 434. Pr. DOGHMI Nawal Cardiologie 435. Pr. ESSAMRI Wafaa Gastro-entérologie 436. Pr. FELLAT Ibtissam Cardiologie 437. Pr. FAROUDY Mamoun Anesthésie Réanimation 438. Pr. GHADOUANE Mohammed* Urologie 439. Pr. HARMOUCHE Hicham Médecine Interne 440. Pr. HANAFI Sidi Mohamed* Anesthésie Réanimation 441 Pr. IDRISS LAHLOU Amine Microbiologie 442. Pr. JROUNDI Laila Radiologie 443. Pr. KARMOUNI Tariq Urologie 444. Pr. KILI Amina Pédiatrie 445. Pr. KISRA Hassan Psychiatrie 446. Pr. KISRA Mounir Chirurgie Pédiatrique 447. Pr. KHARCHAFI Aziz* Médecine Interne 448. Pr. LAATIRIS Abdelkader* Pharmacie Galénique 449. Pr. LMIMOUNI Badreddine* Parasitologie 450. Pr. MANSOURI Hamid* Radiothérapie 451. Pr. NAZIH Naoual O.R.L 452. Pr. OUANASS Abderrazzak Psychiatrie 453. Pr. SAFI Soumaya* Endocrinologie

14 454. Pr. SEKKAT Fatima Zahra Psychiatrie 455. Pr. SEFIANI Sana Anatomie Pathologique 456. Pr. SOUALHI Mouna Pneumo Phtisiologie 457. Pr. TELLAL Saida* Biochimie 458. Pr. ZAHRAOUI Rachida Pneumo Phtisiologie Octobre Pr. LARAQUI HOUSSEINI Leila Anatomie pathologique 459. Pr. EL MOUSSAOUI Rachid Anesthésie réanimation 460. Pr. MOUSSAOUI Abdelmajid Anesthésier réanimation 461. Pr. LALAOUI SALIM Jaafar * Anesthésie réanimation 462. Pr. BAITE Abdelouahed * Anesthésie réanimation 463. Pr. TOUATI Zakia Cardiologie 464. Pr. OUZZIF Ezzohra * Biochimie 465. Pr. BALOUCH Lhousaine * Biochimie 466. Pr. SELKANE Chakir * Chirurgie cardio vasculaire 467. Pr. EL BEKKALI Youssef * Chirurgie cardio vasculaire 468. Pr. AIT HOUSSA Mahdi * Chirurgie cardio vasculaire 469. Pr. EL ABSI Mohamed Chirurgie générale 470. Pr. EHIRCHIOU Abdelkader * Chirurgie générale 471. Pr. ACHOUR Abdessamad * Chirurgie générale 472. Pr. TAJDINE Mohammed Tariq* Chirurgie générale 473. Pr. GHARIB Noureddine Chirurgie plastique 474. Pr. TABERKANET Mustafa * Chirurgie vasculaire périphérique 475. Pr. ISMAILI Nadia Dermatologie 476. Pr. MASRAR Azlarab Hématologie biologique 477. Pr. RABHI Monsef * Médecine interne 478. Pr. MRABET Mustapha * Médecine préventive santé publique et hygiène 479. Pr. SEKHSOKH Yessine * Microbiologie 480. Pr. SEFFAR Myriame Microbiologie 481. Pr. LOUZI Lhoussain * Microbiologie 482. Pr. MRANI Saad * Virologie 483. Pr. GANA Rachid Neuro chirurgie 484. Pr. ICHOU Mohamed * Oncologie médicale 485. Pr. TACHFOUTI Samira Ophtalmologie 486. Pr. BOUTIMZINE Nourdine Ophtalmologie 487. Pr. MELLAL Zakaria Ophtalmologie 488. Pr. AMMAR Haddou * ORL 489. Pr. AOUFI Sarra Parasitologie 490. Pr. TLIGUI Houssain Parasitologie 491. Pr. MOUTAJ Redouane * Parasitologie 492. Pr. ACHACHI Leila Pneumo phtisiologie 493. Pr. MARC Karima Pneumo phtisiologie 494. Pr. BENZIANE Hamid * Pharmacie clinique 495. Pr. CHERKAOUI Naoual * Pharmacie galénique

15 496. Pr. EL OMARI Fatima Psychiatrie 497. Pr. MAHI Mohamed * Radiologie 498. Pr. RADOUANE Bouchaib* Radiologie 499. Pr. KEBDANI Tayeb Radiothérapie 500. Pr. SIFAT Hassan * Radiothérapie 501. Pr. HADADI Khalid * Radiothérapie 502. Pr. ABIDI Khalid Réanimation médicale 503. Pr. MADANI Naoufel Réanimation médicale 504. Pr. TANANE Mansour * Traumatologie orthopédie 505. Pr. AMHAJJI Larbi * Traumatologie orthopédie Mars 2009 Pr. BJIJOU Younes Anatomie Pr. AZENDOUR Hicham * Anesthésie Réanimation Pr. BELYAMANI Lahcen * Anesthésie Réanimation Pr. BOUHSAIN Sanae * Biochimie Pr. OUKERRAJ Latifa Cardiologie Pr. LAMSAOURI Jamal * Chimie Thérapeutique Pr. MARMADE Lahcen Chirurgie Cardio-vasculaire Pr. AMAHZOUNE Brahim * Chirurgie Cardio-vasculaire Pr. AIT ALI Abdelmounaim * Chirurgie Générale Pr. BOUNAIM Ahmed * Chirurgie Générale Pr. EL MALKI Hadj Omar Chirurgie Générale Pr. MSSROURI Rahal Chirurgie Générale Pr. CHTATA Hassan Toufik * Chirurgie Vasculaire Périphérique Pr. BOUI Mohammed * Dermatologie Pr. KABBAJ Nawal Gastro-entérologie Pr. FATHI Khalid Gynécologie obstétrique Pr. MESSAOUDI Nezha * Hématologie biologique Pr. CHAKOUR Mohammed * Hématologie biologique Pr. DOGHMI Kamal * Hématologie clinique Pr. ABOUZAHIR Ali * Médecine interne Pr. ENNIBI Khalid * Médecine interne Pr. EL OUENNASS Mostapha Microbiologie Pr. ZOUHAIR Said* Microbiologie Pr. L kassimihachemi* Microbiologie Pr. AKHADDAR Ali * Neuro-chirurgie Pr. AIT BENHADDOU El hachmia Neurologie Pr. AGADR Aomar * Pédiatrie Pr. KARBOUBI Lamya Pédiatrie Pr. MESKINI Toufik Pédiatrie Pr. KABIRI Meryem Pédiatrie Pr. RHORFI Ismail Abderrahmani * Pneumo-phtisiologie Pr. BASSOU Driss * Radiologie Pr. ALLALI Nazik Radiologie

16 Pr. NASSAR Ittimade Pr. HASSIKOU Hasna * Pr. AMINE Bouchra Pr. BOUSSOUGA Mostapha * Pr. KADI Said * Octobre 2010 Pr. AMEZIANE Taoufiq* Pr. ERRABIH Ikram Pr. CHERRADI Ghizlan Pr. MOSADIK Ahlam Pr. ALILOU Mustapha Pr. KANOUNI Lamya Pr. EL KHARRAS Abdennasser* Pr. DARBI Abdellatif* Pr. EL HAFIDI Naima Pr. MALIH Mohamed* Pr. BOUSSIF Mohamed* Pr. EL MAZOUZ Samir Pr. DENDANE Mohammed Anouar Pr. EL SAYEGH Hachem Pr. MOUJAHID Mountassir* Pr. RAISSOUNI Zakaria* Pr. BOUAITY Brahim* Pr. LEZREK Mounir Pr. NAZIH Mouna* Pr. LAMALMI Najat Pr. ZOUAIDIA Fouad Pr. BELAGUID Abdelaziz Pr. DAMI Abdellah* Pr. CHADLI Mariama* Radiologie Rhumatologie Rhumatologie Traumatologie orthopédique Traumatologie orthopédique Médecine interne Gastro entérologie Cardiologie Anesthésie Réanimation Anesthésie réanimation Radiothérapie Radiologie Radiologie Pédiatrie Pédiatrie Médecine aérotique Chirurgie plastique et réparatrice Chirurgie pédiatrique Urologie Chirurgie générale Traumatologie orthopédie ORL Ophtalmologie Hématologie Anatomie pathologique Anatomie pathologique Physiologie Biochimie chimie Microbiologie ENSEIGNANTS SCIENTIFIQUES PROFESSEURS 1. Pr. ABOUDRAR Saadia Physiologie 2. Pr. ALAMI OUHABI Naima Biochimie 3. Pr. ALAOUI KATIM Pharmacologie 4. Pr. ALAOUI SLIMANI Lalla Naïma Histologie-Embryologie 5. Pr. ANSAR M hammed Chimie Organique et Pharmacie Chimique 6. Pr. BOUKLOUZE Abdelaziz Applications Pharmaceutiques 7. Pr. BOUHOUCHE Ahmed Génétique Humaine 8. Pr. BOURJOUANE Mohamed Microbiologie 9. Pr. CHAHED OUAZZANI LallaChadia Biochimie

17 10. Pr. DAKKA Taoufiq Physiologie 11. Pr. DRAOUI Mustapha Chimie Analytique 12. Pr. EL GUESSABI Lahcen Pharmacognosie 13. Pr. ETTAIB Abdelkader Zootechnie 14. Pr. FAOUZI Moulay El Abbes Pharmacologie 15. Pr. HMAMOUCHI Mohamed Chimie Organique 16. Pr. IBRAHIMI Azeddine Pharmacologie 17. Pr. KABBAJ Ouafae Biochimie 18. Pr. KHANFRI Jamal Eddine Biologie 19. Pr. REDHA Ahlam Biochimie 20. Pr. OULAD BOUYAHYA IDRISSI Med Chimie Organique 21. Pr. TOUATI Driss Pharmacognosie 22. Pr. ZAHIDI Ahmed Pharmacologie 23. Pr. ZELLOU Amina Chimie Organique * Enseignants Militaire

18 Dédicaces

19 géâàxá Äxá ÄxààÜxá Çx átâüt xçà àüéâäxü Äxá ÅÉàá ÖâË Ä ytâàaaa géâá Äxá ÅÉàá Çx átâüt xçà xåñü ÅxÜ Ät zütà àâwx? ÄËtÅÉâÜ? Äx ÜxáÑxvà? T vxâå Öâ Åx áéçà Äxá ÑÄâá v{xüá T vxâå Öâ ÉÇà àéâ}éâüá vüâ xç ÅÉ T vxâå Öâ ÅËÉÇà àéâ}éâüá xçvéâütz Tâáá? vëxáà àéâà á ÅÑÄxÅxÇà Öâx ]x w w x vxààx g{ áx

20 A mes très chers parents Vous avez été pour moi au long de mes études le plus grand symbole d'amour, de dévouement qui ont ni cessé ni diminué. Votre bonté et votre générosité sont sans limite. Vos prières m'ont été d'un grand soutien au cours de ce long parcours. J espère de tout mon cœur qu en ce jour vous soyez fière de moi, et que je réalise l un de vos rêves. Pour tous les encouragements et le réconfort qui n'ont cessé de me servir de guide. J espère être la fille que vous aviez voulu que je sois, et je m efforcerai d être digne de ce que vous auriez souhaité que je sois. Ce titre de Docteur en Pharmacie je le porterai fièrement et je vous le dédie tout particulièrement. Puisse Dieu vous procurer bonheur, santé, longue vie et vous garder à mes côtés le plus longtemps possible Je vous adore.

21 A mes très chères sœurs Inass, Jihane et leurs maris, Wijdane, et Nouha. Pour l'affection qui nous lie, pour l'intérêt que vous portez à ma vie, pour vos soutiens, vos compréhensions et vos encouragements. Que ce travail soit le témoin de la reconnaissance infinie. Je vous souhaite une vie pleine de bonheur et que je sois toujours la sœur dont vous serez fier. J'espère que vous trouverez dans cette thèse le témoignage de mes sentiments les plus sincères et les plus affectueux. Que Dieu vous protège et consolide les liens sacrés qui nous unissent. Je vous adore.

22 A mon petit ange Yahya Amria La joie Le bonheur L espoir L amour Merci pour tous ce que tu m offres dans ton regard. Je te dédie ce travail en te souhaitant longue vie, prospérité et bonne santé. Je t aime du fond du fond du cœur.que dieu te garde. A Mes grands parents Aucune expression ne pourrait exprimer à leur juste valeur, la reconnaissance, le soutien, le respect et l estime que je vous dois. Puisse Dieu vous accorder santé, longue vie et prospérité. A mes oncles et tantes, A mes cousins et cousines A tous les membres de la famille En témoignage de ma gratitude et de mon affection la plus sincère, je vous dédie ce travail.

23 A mes très chères amies Siham, Amina Ou, Oumnia, Lamyae, Meriama, meryem, houda, Chaimae, Ibtissam, Amina M, Asmae, Amal, Hanae, Ilham, Hanaa.. Aucun mot ne saurait exprimer toute ma gratitude et ma reconnaissance envers vous, pour votre soutien et votre patience, pour vos efforts et votre dévouement. Je dédie ce travail à toutes nos préparations, les jours et les nuits blanches, nos larmes et nos fous rires, nos déceptions et nos éclats de joie. A tous les moments qu on a passés ensemble.a notre belle amitié. Que dieu vous comble de bonheur, de santé, de succès et de prospérité dans votre vie et vous protège. A tous ceux dont l oubli du nom n est pas celui du cœur. Dans le regret de ne pouvoir tous citer, je dédis ce travail à toute personne qui a contribué de près ou de loin à sa réalisation.

24 Remerciements

25 A notre maître et président de thèse Monsieur Mimoun Zouhdi Professeur de Microbiologie Nous sommes très sensibles à l honneur que vous nous faites en acceptant de présider le jury de ce travail. Nous avons pour vous l estime et le respect qu imposent votre compétence, votre sérieux et votre richesse d enseignement. Veuillez trouver, cher maître, dans ce modeste travail, l expression de notre très haute considération et notre profonde gratitude.

26 A notre maître et rapporteur de thèse Madame Sakina El Hamzaoui Professeur de Microbiologie Vous nous avez fait le grand honneur d accepter de nous diriger dans ce travail avec bienveillance et rigueur. Votre attachement au travail bien fait est l objet de notre considération. Votre amabilité, Votre dynamisme, votre dévouement pour le travail et votre compétence ont suscité notre admiration. En espérant que cet humble travail saura combler vos attentes, veuillez recevoir cher maitre l expression de notre profonde gratitude.

27 A notre maître et juge de thèse Madame Saida Tellal Professeur de Biochimie et Biochimie clinique Nous sommes très sensibles par l honneur que vous nous faites en acceptant de juger notre travail. Nous avons admiré vos qualités scientifiques, humaines et pédagogiques. Veuillez trouver, cher maître, à travers ce modeste travail la manifestation de notre plus haute estime et de nos sentiments les plus respectueux.

28 A notre maître et juge de thèse Madame Fatima Jabourik Professeur de Pédiatrie C est un réel plaisir et un honneur pour nous de vous compter parmi les membres de ce jury de thèse. En dépit de vos nombreuses occupations vous avez accepté de venir juger ce travail Veuillez trouver, cher maître, l expression de notre très haute considération et notre profonde gratitude.

29 P. aeruginosa : Pseudomonas aeruginosa Liste des abréviations : HMMIV : Hôpital militaire d instruction Mohamed V. BGN CIP RD AK TOB CN CFS IPM FOS CT TIC ATM CAZ TZP CPO PRL FEP BCP M.H L.D.C VF API : Bacilles à Gram Négatif. : Ciprofloxacine : Rifampicine : Amikacine : Tobramycine : Gentamicine : Cefsulodine : Imipénème : Fosfomycine : Colistine : Ticarcilline : Aztéonam. : Céftazidime. : Pipéracilline+tazobactam : Céfépime : Pipéracilline : Céfépime : Pourpre de bromocrésol. : MUELER-HINTON. : Lysine-décarboxylase. : VIANDE-FOIE. : Appareillage et Procédés d Identification.

30 NE VP H2S NO 3 TRP GLU ADH URE ESC GEL PNPG ARA MNE MAN NAG MAL GNT CAP ADI MLT CIT PAC : Non Entérobactéries. : Voges-Proskauer. : Thiosulfate de sodium. : Potassium nitrate : Tryptophane : Glucose : Arginine : Urée : Esculine : Gélatine : Nitrophényl galactopyranoside : Arabinose : Mannose : Mannitol : Acétyl-glucosamine : Maltose : Potassium gluconate : Acide caprique : Acide adipique : Acide malique : Trisodium citrate : Acide phénylacétique

31 Liste des figures : Figure 1 : P. aeruginosa en microscopie électronique Figure 2 : Ciliature monotriche de P. aeruginosa Figure 3 : Aspect des colonies larges de P. aeruginosa Figure 4 : Aspect des colonies Small de P. aeruginosa Figure 5 : Aspect des colonies muqueuses de P. aeruginosa Figure 6 : Mécanismes de résistance aux antibiotiques Figure 7 : photo de la gélose au sang cuit Figure 8 : photo de la gélose BCP Figure 9 : milieu Mueller-Hinton avec des colonies de Pseudomonas aeruginosa et deux disques de la Tobramycine et gentamicine réalisés au laboratoire de bactériologie, HMIMV Rabat-2012 / SOLBI soukaina Figure 10 : Milieu de citrate de Simmons Figure 11 : milieu Lactose-Glucose-H2S (KLIGLER-HAJNA) Figure 12 : milieu MANNITIOL-MOBILITE-NITRATE Figure 13 : Image du milieu LDC réalisée au laboratoire de bactériologie, HMIMV-Rabat /SOLBI soukaina Figure 14 : Milieu viande foie avec des bactéries productrice (1) et non (2) du gaz Figure 15 : Milieu urée indole réalisée au laboratoire de bactériologie, HMIMV-Rabat /SOLBI soukaina Figure 16:Bec bensen/propane

32 Figure 17 : Boite de pétri Figure 18 : Une anse en platine Figure 19 : Pipettes pasteur avec un embout permettant de pomper le liquide Figure 20 : lames en verre Figure 21 : microscope optique Figure 22 : portoir des tubes de la galerie classique réalisé au laboratoire de microbiologie, HMMIV, Rabat / SOLBI soukaina Figure 23 : Tubes d eau stériles Figure 24 : tubes à hémolyses Figure 25 : étuve d incubation Figure 26 : bain marie utilisé en bactériologie Figure 27 : méthode d ensemencement en quadrant Figure 28 : ensemencement en quadrant d une souche de P. aeruginosa laboratoire de bactériologie, HMIMV-Rabat-2012/SOLBI soukaina sur BCP au Figure 29 : méthode de réalisation de l inoculum pour le remplissage de la galerie classique. Figure 30 : méthode de réalisation de l inoculum pour le remplissage de l antibiogramme Figure 31: Aspect des colonies de P. aeruginosa après repiquages successifs sur milieu BCP réalisé au laboratoire de microbiologie, HMIMV Rabat-2012-/SOLBI soukaina Figure 32: Gram de P. aeruginosa après repiquages successifs. Laboratoire de microbiologie, HMIMV Rabat-2012-/SOLBI soukaina Figure 33 : Aspect de la galerie classique de LEMINOR ensemencée par P. aeruginosa après incubation à 37 C, Laboratoire de microbiologie, HMIMV, Rabat / SOLBI soukaina

33 Figure 34 : milieu mannitol mobilité ensemencé par Pseudomonas aeruginosa. Laboratoire de microbiologie, HMIMV, Rabat /SOLBI soukaina Figure 35: Antibiogramme de P. aeruginosa réalisé au sein de laboratoire de microbiologie. HMIMV, Rabat/ SOLBI soukaina

34 Liste des tableaux : Tableau I : classification de Pseudomonas aeruginosa selon Bergey Tableau II: Classification des principaux antibiotiques actifs sur P. aeruginosa Tableau III : Lecture de la galerie miniaturisée API 20 NE Tableau IV : Caractéristiques macroscopiques de P. aeruginosa cultivée sur milieu BCP après incubation à 37 C. HMIMV. Rabat. 2011/2012 Tableau V: Paramètres biochimiques de P. aeruginosa lus par la galerie classique après incubation à 37 C Tableau VI : Paramètres biochimiques de P. aeruginosa sur la galerie API 20 NE après incubation à 37 C Tableau VII : Comportement de P. aeruginosa vis-à-vis certains antibiotiques.

35 SOMMAIRE I. INTRODUCTION.1 II. GENERALITE SUR PSEUDOMONAS AERUGINOSA... 4 II.1 Pseudomonas aeruginosa : Prérequis et rappels bactériologiques 5 II.2. Caractères phénotypiques..6 II.3. Caractères génotypiques 10 II.4. Facteurs de virulence.10 II.5. Mécanismes de résistance aux antibiotiques 13 II.6. Résistance de Pseudomonas aeruginosa aux antibiotiques. 15 II.6.A. Résistance naturelle Résistance aux bêtalactamines Résistance aux aminosides Résistance aux autres antibiotiques.15 II.6.B. Principaux antibiotiques actifs sur Pseudomonas aeruginosa 15 II.7.Phenotype de la souche bactérienne.. 17 III. MATERIELS ET METHODES 18 Type d étude, date et lieu.. 19 III.1 Matériels...19 III.1.1 La souche incluse...19 III.1.2 Les milieux de culture utilisés...19 III.1.3 Autres matériels.27 III.2 Méthodes.. 31 III.2.1 Préparation des milieux de culture 32 III.2.2 Repiquage.. 32 III.2.3 Ensemencement.33 III.2.4 Incubation.. 34 III.2.5 Identification..35 II Aspect macroscopique (colonies)..35

36 III État frais entre lame et lamelle 35 III Aspect microscopique (gram).35 III Caractères biochimiques (la galerie classique de leminor) III caractères biochimiques de la galerie API 20 NE...38 III Antibiogramme...40 III Définition..40 III Réalisation.40 III Inoculum. 40 III Milieu d ensemencement...41 III Technique utilisée d ensemencement...41 III Application des disques...41 III Liste des antibiotiques utilisés pour P. aeruginosa. 42 III Incubation III Lecture d antibiogramme...42 IV. RESULTAT.44 IV.1 LES CARACTERISTIQUES MACROSCOPIQUES DE LA SOUCHE BACTERIENNE.47 IV.1.1 La pureté IV.1.2 La viabilité IV.1.3 La forme des colonies :.. 49 IV Allure des contours des colonies...49 IV la forme du relief des colonies.50 IV.1.4 Aspect de la surface des colonies IV.1.5 La taille des colonies..50 IV.1.6 La couleur et/ou pigment des colonies IV.2 LES CARACTERISTIQUES MICROSCOPIQUES.. 50 IV.2.1 Les caractéristiques microscopiques à l état frais. 50 IV.2.2 Les caractéristiques microscopiques après coloration de Gram IV.3 LES PARAMETRES BIOCHIMIQUES..52 IV.3.1 Galerie classique de LEMINOR... 52

37 IV.3.2 Galerie API 20 NE (Non entérobactéries) IV.4 COMPORTEMENT VIS-A-VIS CERTAINS ANTIBIOTIQUES...56 V. DISCUSSION...58 VI. LIMITES..62 VII. PERSPECTIVES D AVENIR..64 VIII. CONCLUSION RESUME REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES

38 I. INTRODUCTION 1

39 Le repiquage correspond au prélèvement d une petite partie d une culture de bactéries ou de [1, 2] tissus pour la transplanter sur un milieu neuf où elle continuera sa croissance. Le repiquage des bactéries est nécessaire pour obtenir un nombre de bactérie correcte pour les analyses. Il se fait par la culture de bactéries dans un milieu nutritif à 37 C pendant 24 heures. [3] Cela permet de : Isoler les bactéries pour les dénombrer en cas de contrôle sanitaire par exemple ; Identifier une bactérie en cas d une souche pure ; Réaliser un antibiogramme à partir d une colonie pure afin de déterminer la sensibilité de la bactérie et de trouver un traitement adapté à une infection ; Avoir un nombre important de bactéries à partir d une colonie pure pour d éventuelle utilisation. Le repiquage nécessite des conditions de travail rigoureuses tel que la stérilisation du matériel et l hygiène du manipulateur pour éviter toute contamination de la souche en question ainsi que de l environnement y compris le manipulateur. Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa) est un bacille à Gram négatif non fermentant, aérobie stricte dont l habitat est particulièrement étendu. Il s agit d un microorganisme saprophyte de l environnement, notamment au niveau de l eau, des sols humides et des végétaux. Il est également un commensal de l homme, en particulier au niveau intestinal. Pseudomonas aeruginosa est dit pathogène opportuniste car bien que pouvant être isolé d infections communautaires, il est le plus souvent responsable d infections nosocomiales. [6, 7,8]. [4, 5] Depuis quelques décennies, ce bacille pose de grands problèmes thérapeutiques partout dans le monde. La capacité de survie dans des conditions rudimentaires, la résistance naturelle et la grande diversité des plasmides confèrent à cette bactérie un grand potentiel d acquisition des résistances. Par ailleurs, l utilisation croissante d antibiotiques à large spectre sélectionne les 2

40 souches multirésistantes. La résistance touche de nombreuses classes d antibiotiques: les [6, 8] bêtalactamines à large spectre, les aminosides et les fluoroquinolones. L objectif général du travail Le but de notre travail, est l étude de l effet des repiquages successifs sur le comportement de Pseudomonas aeruginosa de point de vue morphologique, biochimique, et sensibilités aux antibiotiques. 3

41 II.GENERALITES SUR PSEUDOMONAS AERUGINOSA 4

42 II.1 Pseudomonas aeruginosa : prérequis et rappels L espèce bactérienne Pseudomonas aeruginosa du latin aeruginosus=couvert de rouille, autrefois appelé «bacille pyocyanique», du grec puon=pus et kuanos=bleu foncé, a été découvert en 1882 par un pharmacien militaire français A. Gessard. La création du genre Pseudomonas remonte à Migula (1900). [9,10] C est l espèce la plus connue, la plus répandue du genre Pseudomonas, et la plus pathogène, elle constitue l espèce typedu genre. Les autres espèces du genre étant : P. fluorescens,p. putida, P.stuzeri, P.alcaligenes, P. pseudoalcaligenes,p.suringae. [9,10] P.aeruginosa appartient aux bacilles à Gram négatif non fermentant, cultivant sur des milieux ordinaires et possédant un métabolisme respiratoire strict (utilisation de l oxygène comme accepteur terminal d électrons). Ces bacilles à métabolisme oxydatif ne fermentent pas les sucres en anaérobiose et sont qualifiées de «non fermentant» ou «non fermentaires». [11] Figure 1 : P. aeruginosa en microscopie électronique [12] P.aeruginosa est une bactérie qui vit normalement à l état de saprophyte dans l eau et le sol humide ou sur les végétaux. Elle résiste mal à la dessiccation. Cette bactérie peut vivre en commensale dans le tube digestif de l Homme et de divers animaux. [10, 13, 14, 15] 5

43 Pseudomonas aeruginosa est classée d après Bergey comme suit : Tableau I : classification de Pseudomonas aeruginosa selon Bergey [14] : Pseudomonas aeruginosa Phylum Classe Ordre Famille Genre Espèce Proteobacteria Gammaproteobacteria Pseudomonadales Pseudomonaceae Pseudomonas Aeruginosa La classification de P. aeruginosa (comme toutes les bactéries) a d abord été fondée sur l étude de leurs caractères phénotypiques (morphologiques, biochimiques.); puis sur leur caractères génotypiques (l étude du génome). [16] II.2 Caractères phénotypiques : P. aeruginosa est un bacille à Gram négatif aérobie stricte: 1 à 3µm de long ; 0,5 à 1µm de large. Parfois entouré d une pseudo-capsule appelée slime qui peut jouer un rôle important dans la pathogénicité de cette bactérie, il est très mobile grâce à une ciliature polaire en général monotriche. 6

44 Figure 2 : Ciliature monotriche de P. aeruginosa [17] Il peut être cultivé facilement sur tous les milieux en aérobiose (température de 37 C ou 30 C), il dégage une odeur aromatique caractéristique de seringa due à la production d ortho amino-acétophénone, intermédiaire du métabolisme du tryptophane et non liée à la production de pigment. Un milieu sélectif comme le milieu de Drigalski convient pour la culture. Des milieux sélectifs à base de Cétrimide que l on peut additionner d antibiotiques (acide nalidixique) sont proposés pour la recherche dans des produits très contaminés ou dans les eaux (hydrologie). [10,13] Trois types de colonies peuvent être observées simultanément ou de manière isolée [10,11, 13]: _ Colonies la «large» : isolées, grandes, avec une partie centrale bombée et un contour irrégulier. Elles sont caractérisées par une autolyse qui donne un aspect métallique, irisé lors de la ciliature en nappe de la bactérie. Ce phénomène est lié à l action des enzymes protéolytiques bactériennes. 7

45 Figure 3 : Aspect des colonies larges de P. aeruginosa [18]. _ Colonies S «small» : petites, mates, légèrement bombées avec un bord circulaire régulier. Figure 4 : Aspect des colonies Small de P. aeruginosa [19]. _ Colonies M «muqueuses» : bombées, opaques, visqueuses, parfois coulantes. Ces colonies se rencontrent presque spécifiquement dans des infections chroniques, urinaires ou pulmonaires. La bactérie produit alors un polysaccharide extracellulaire (l acide alginique) qui est différent du «slime». 8

46 Figure 5 : Aspect des colonies muqueuses de P. aeruginosa [20]. Cette espèce est caractérisée par la production des pigments : _ La pyocyanine : pigment bleu, soluble dans l eau et le chloroforme, caractéristique du P. aeruginosa qui est la seule espèce à le produire (composé fortement polaire, de nature phénazinique). _ La pyoverdine : pigment jaune-vert fluorescent, soluble dans l eau insoluble dans le chloroforme. _ D autres pigments hydrosolubles peuvent être produits parfois de manière transitoire : la pyomélanine brune et la pyorubine rouge. P.aeruginosa possède : _ Une oxydase _ Une nitrate-réductase (réduction des nitrates en nitrites pouvant aller jusqu au stade d azote gazeux) _ Un métabolisme oxydatif des sucres, et non fermentatif contrairement aux entérobactéries. _ Une arginine-dihydrolase. _ Une lécithine (qui ne peut être révélée qu en milieu liquide) _ Un pouvoir protéolytique. 9

47 II.3Caractères génotypiques [13, 14] Le génome de P. aeruginosa est le plus grand génome bactérien, jamais séquencé. Le chromosome bactérien comprend 6,3 millions de paires de bases, codant pour 5570 gènes, dont la fonction est soit connue avec certitude, soit supposée par comparaison des séquences avec des génomes d autres espèces bactériennes, soit inconnue. Soixante-dix à 90 des gènes sont spécifiques de l espèce, et 10 à 30 sont spécifique du clone bactérien. Le génome chromosomique code notamment pour la plupart des facteurs de pathogénicité de P. aeruginosa, et pour les multiples protéines conférant la résistance aux différentes classes d antibiotiques. La proportion de gènes de régulation est la plus importante de tous les génomes bactériens séquencés connus. Outre le chromosome bactérien, P. aeruginosa possède de nombreux plasmides transférables par conjugaison ou par transduction. La taille, la complexité et la variabilité de génome de P. aeruginosa reflètent une évolution adaptative de l espèce lui permettant de survivre dans différents environnements, et explique en partie la fréquence des résistances aux antibiotiques. II.4 Facteurs de virulence [9,21] Le bacille pyocyanique est une bactérie de faible virulence cependant lorsque les défenses immunitaires de l hôte sont effondrées, ce germe peut exprimer de nombreux facteurs de virulence qui jouent un rôle certain dans la pathogénicité : Composants de la membrane externe : -Le lipopolysaccharide (LPS) : déterminant antigénique principal de la membrane externe, très hétérogène, il est constitué d un socle lipidique, d un noyau commun, et d une chaine polysaccharidique plus ou moins longue. P. aeruginosa synthétise un LPS homopolymérique de structure conservée, et un LPS hétéropolymérique dont la structure varie. Lorsque le LPS est complet, la bactérie se présente sous sa forme la plus virulente, qui résiste à l action bactéricide de sérums, inaccessibles au complément et protégée de la phagocytose. Vingt antigènes lipopolysaccharidiques ont été 10

48 définis, dont 16 sont déterminables par agglutination à l aide de sérums de lapins, et permettent de définir les sérotypes O des souches de P.aeruginosa. Les sérotypes les plus fréquemment isolés sont O: 6 et O:11. Le sérotype O: 12 est souvent très résistant aux antibiotiques. Il existe des souches non sérotypables qui sont de types muqueux, non agglutinables ou poly-agglutinables. -Le flagelle [22] : unique et polaire, il confère la mobilité à P. aeruginosa. (Quelques rares cellules portent plusieurs flagelles polaires). -Les pilis: filaments fins situés en position polaires, reconnaissant spécifiquement des récepteurs des cellules épithéliales respiratoires et capables de rétraction, conférant à P. aeruginosa des caractéristiques d adhésion et de mobilité par tiraillement lui permettant de se déplacer sur des surfaces solides. -Les adhésines : participent à l adhésion aux cellules épithéliales après que les pilis ont réalisé un premier ancrage. -Les porines : protéines formant des canaux permettant le passage des molécules hydrophiles à travers la membrane externe hydrophobe. Leur nombre et leur taille conditionnent la perméabilité aux antibiotiques. Le principal est l OprF. Les porines permettent la pénétration des β-lactamines et leur mutation peut être associée à la résistance. -L alginate [23] : la production d alginate réalise un biofilm qui favorise l adhésion, et protège la bactérie de la phagocytose, des anticorps, du complément et de l action des antibiotiques. Les bactéries qui le produisent ne sont pas sérotypables (diminution de production du LPS). 11

49 Produits diffusibles : -Pigments : sont des sidérophores: molécules contenant du fer, synthétisées à partir des cellules eucaryotes de l hôte, et se comportant comme de véritables chélateurs du fer entrant en compétition avec la transferrine (dans le sang) et la lactoferrine (dans les voies respiratoires). Elles ont aussi une action pro- inflammatoire, et interfèrent avec les défenses antioxydants en inhibant la catalase. Elles sont produites dans le milieu extérieur puis récupérées sous forme complexée. Les sidérophores sont : la pyoverdine et la pyocyanine. -Toxines : -La cytotoxine : elle détruit la membrane des leucocytes en entrainant la formation de pores et la fuite de granules et d enzymes lysosomales. -L exotoxine A: elle a des similitudes de structure et d action avec la toxine diphtérique. Elle interfère avec la synthèse protéique, inactive le facteur d élongation des chaines peptidiques des eucaryotes, ce qui aboutit à la lyse cellulaire avec lésions tissulaires et à l invasion bactérienne. Elle participe au caractère systémique de l infection. -L exotoxine S: c est une enzyme qui dépolarise les filaments d actine et de vimentine du cytosquelette dans les macrophages. Elle a également une action sur l invasion tissulaire et la dissémination bactérienne. -Hémolysines : -la phospholipase C (PLC) : enzyme essentielle dans le pouvoir pathogène de P. aeruginosa comme en témoigne la faible virulence des mutants dans le gène correspondant. Elle est produite en réponse à un taux bas de phosphore dans l environnement bactérien, et hydrolyse les phospholipides des membranes des cellules eucaryotes, Mais aussi des hématies, et des surfactants pulmonaires. 12

50 -Le rhamnolipide: il émulsifie les phospholipides des parois membranaires -protéases [24] : Elles sont surtout efficaces dans les premières étapes de l infection, en créant les lésions tissulaires permettant l implantation de P. aeruginosa, mais aussi en Inactivant des protéines de défense de l hôte. Elles comprennent : -L élastase B : elle détruit les jonctions entre les cellules épithéliales et les composants des lames basales des épithéliums (notamment pulmonaires et cutanées), dégrade la fibrinoctine et la fibrine, stimule la sécrétion muqueuse et inactive l inhibiteur α1 des protéases des polynucléaires. Elle dégrade aussi les anticorps (formation d anticorps bloquants non fonctionnels), les protéines du complément, et certaines cytokines. -L élastase A : elle détruit l élastine et la rend plus vulnérables à l action de l élastase B (action synergique). -L élastase D -La porine alcaline : elle dégrade l interféron γet les composants du complément. Son rôle a surtout été décrit dans les lésions oculaires (cornée). II.5 Mécanismes de résistance aux antibiotiques [25, 26, 27] : Il existe deux grands types de résistance aux antibiotiques, la résistance intrinsèque et la résistance acquise. La résistance intrinsèque (ou naturelle ou insensibilité) est présente chez toutes les bactéries de la même espèce ou du même genre bactérien. Elle délimite le spectre d action des antibiotiques. Par exemple, la présence d une membrane externe chez les bacilles à Gram négatif entraîne la résistance à diverses classes de molécules par imperméabilité (glycopeptides, macrolides, lincosamides, streptogramines, etc.) 13