Méthodes diagnostiques : culture, PCR et sérologie. Que faire?

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1 Méthodes diagnostiques : culture, PCR et sérologie. Que faire? Sophie GIBAUD Pole de biologie - chu de Nantes - Laboratoire de Bactériologie et Hygiène

2 Outils du diagnostic biologique Culture PCR temps réel Sérologie

3 Surveillance des maladies à prévention vaccinale - Des réseaux de surveillance utilisant des diagnostics standardisés doivent accompagner la vaccination Ces diagnostics cliniques et biologiques doivent être régulir gulièrement évalués s et adaptés à l'évolution de la maladie

4 Diagnostics biologiques Direct Indirect Bactérie (culture) ADN (PCR) Détection d anticorps spécifiques dans le sérum des patients infectés

5 Diagnostic biologique direct Prélèvement Devenir du prélèvement -Aspiration nasopharyngée (chez le nourrisson) -Aspiration ou Expectorations (chez l adolescent et l adulte) - à température ambiante culture : délai maximum de 2 à 4 heures PCR : délai maximum de 24 heures

6 Culture Isolement de B. pertussis sur milieu sélectif FRAIS Seuls certains centres hospitaliers et le CNR sont équipés pour réaliser la culture Envoi au CNR de l isolat pour confirmation et analyse POURQUOI? Car la surveillance de l évolution spatiotemporale des isolats est indispensable

7 PCR en temps réel pour B. pertussis ou B. parapertussis Amplification d un fragment d ADN de B. pertussis suivant les recommandations de la réunion de consensus Centres réalisant ce test: Les laboratoires Pasteur-Cerba certains centres hospitaliers et en cas d urgence ou d épidémie le CNR Les centres qui acceptent un contrôle qualité sont listés sur le site web du CNR

8 Diagnostic biologique indirect Dosage d agglutinines Immunoempreinte : Pasteur-Cerba [ELISAELISA (bactérie entière, facteur purifié) : CNR] Hémagglutination indirecte Etude du pouvoir bactéricide du sérum Immunodiffusion Immunofluorescence Fixation du complément

9 Sérologie Immunoempreinte Aucun test commercial n est validé Seul Pasteur Cerba utilise de la toxine de pertussis (PT) et de l adényl cyclasehémolysine dont la pureté est connue Son diagnostic par immunoempreinte (western blot) est remboursé

10 Sérologie Immunoempreinte Si une seule sérologie est pratiquée, le sérum doit être prélevé tardivement (au moins après trois semaines de toux). Il ne faut alors tenir compte que de la sérologie réalisée avec la toxine de pertussis (PT) mais pas de celle réalisée avec l adényl cyclase hémolysine Souvent la sérologie du cas primaire est à réaliser plutôt que celle du cas index Une sérologie ne doit pas être pratiquée chez un nouveau-né mais celle de ses parents peut l être. Celle de sa mère, en particulier, car on peut tester à la fois, et donc comparer, le sérum pré-partum et celui au moment de la toux de son enfant

11 Sérologie ELISA Détection d anticorps (IgG) spécifiquement dirigés contre la PT par dosage immunoenzymatique Méthode quantitative, rapide mais non remboursée Technique uniquement réalisée par le CNR pour des enquêtes épidémiologiques ou dans le cas d épidémies L'augmentation ou la diminution du taux d'anticorps anti-pt dans le sérum tardif confirme l'infection si aucune vaccination n'a eu lieu dans les 3 ans qui précèdent Un taux d'anticorps anti-pt 125 UE/ml dans un sérum plus de trois ans après une vaccination confirme aussi l'infection

12 Diagnostics biologiques de la coqueluche Dans les deux premières semaines de toux : Culture et PCR Dans les trois premières semaines de toux : PCR Après trois semaines de toux : Sérologie si aucune vaccination dans les trois ans qui précèdent Dans tous les cas faire l interrogatoire pour savoir si une personne n a pas toussé dans l entourage dans les trois semaines qui précèdent Ne pas faire de sérologie à un enfant de moins de 5 ans vacciné suivant les recommandations

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