[ Technique QuEChERS simplifiée] Technique. simplifiée

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1 [ Technique QuEChERS simplifiée] Technique QuEChERS simplifiée

2 QuEChERS est l acronyme de Quick (rapide), Easy (facile), Cheap (peu cher), Effective (efficace), Rugged (robuste) et Safe (sûr). La combinaison de la technique QuEChERS à l extraction en phase solide en mode dispersif ou d-spe constitue une méthode simple et rapide pour la préparation des échantillons ; elle est idéale pour l analyse des résidus de pesticides, de médicaments vétérinaires et de mycotoxines pour un large éventail de produits alimentaires et agricoles. Les produits nécessaires à la préparation des échantillons par extraction en mode dispersif selon la technique DisQuE sont conditionnés en privilégiant l aspect pratique : supports et tampons pré-pesés en sachets et en tubes, comme décrit dans les protocoles et méthodes réglementaires.

3 [ Technique QuEChERS simplifiée ] Avantages des solutions DisQuE par rapport aux techniques classiques de préparation d échantillons : Rapidité de la préparation des échantillons Méthode rentable et efficace Produit fiable et de qualité, dans un format pratique

4 [ Technique QuEChERS simplifiée ] Principe de la technique DisQuE Pour surmonter les défauts des méthodes classiques d extraction des pesticides à partir des fruits et légumes, Anastassiades et al.* ont amélioré le mode opératoire. La technique se base sur une extraction initiale monophasique de 10 ou 15 g d échantillon par de l acétonitrile, à raison de 1 ml d acétonitrile pour 1 g d échantillon. L ajout en excès de sels et de tampons favorise la séparation liquide-liquide. Après centrifugation, on récupère la phase acétonitrile contenant le pesticide. La matrice peut être purifiée davantage, et l eau en excès éliminée, lors d une étape unique d extraction en phase solide et en mode dispersif qui consiste à mélanger l extrait dans l acétonitrile avec du MgSO 4 anhydre et des supports de type amines primaires et secondaires (PSA). Le principal avantage de cette technique, en plus de sa rapidité et de sa simplicité de mise en œuvre, est la possibilité d analyser directement l extrait final par GC/MS ou par LC/MS/MS après simple dilution. Certaines variations de la technique QuEChERS ont recours à l ajout de tampons pendant l étape d extraction. Aujourd hui, les deux modes opératoires les plus courants sont la méthode du Comité européen de normalisation (CEN), qui utilise un tampon citrate pour l extraction, et la méthode officielle AOAC (États-Unis), qui utilise un tampon acétate. *Anastassiades, M., Lehotay, S.J., tajnbaher, D., & Schenck, F.J. (2003) J. AOAC. Int. 86, Méthode Taille de l échantillon Solvant Contenu du tube Méthode CEN 15662, tampon citrate 10 g 10 ml d acétonitrile 4 g de MgSO 4, 1 g de NaCl 1,5 g de citrate de sodium Méthode AOAC , tampon acétate 15 g 15 ml d acétonitrile avec 1 % d acide acétique 6 g de MgSO 4 1,5 g d acétate de sodium Choix du kit en fonction de la méthode privilégiée Extraction de denrées à faible teneur en eau L extraction QuEChERS est conçue pour l analyse de résidus de pesticides dans les fruits et légumes qui présentent une teneur en eau élevée. Pour l analyse QuEChERS de denrées de faible teneur en eau, l extraction doit être optimisée par ajout d eau supplémentaire. Les instructions relatives à l ajout d eau dans la méthode du CEN sont reprises ci-après. Type d échantillon Masse de l échantillon Ajout d eau Remarque Fruits et légumes dont la teneur en eau est supérieure à 80 % 10 g Fruits et légumes dont la teneur en eau est comprise entre 25 et 80 % 10 g X g X = 10 g - quantité d eau dans 10 g d échantillon Céréales 5 g 10 g Fruits secs 5 g 7.5 g L eau peut être ajoutée pendant l étape de broyage Miel 5 g 10 g Épices 2 g 10 g Lignes directrices de la méthode CEN pour l ajout d eau dans les denrées à faible teneur en eau

5 Protocole DisQuE Protocole simplifié de préparation des échantillons de la technique QuEChERS Homogénéisation de l'échantillon Transfert de l'échantillon dans un tube de 50 ml Ajout d'acétonitrile et d'étalon interne Agitation vigoureuse pendant 1 minute Ajout de tampons salins et centrifugation Transfert du surnageant dans un tube pour le purifier davantage par d-spe Agitation et centrifugation Analyse par LC/MS/MS Dilution de l'extrait avec la phase mobile Analyse par GC/MS En injection à grand volume ou LV I, analysez directement l'extrait. Hors LV I, le solvant de l'extrait doit être échangé avec le toluène. 402 résidus de pesticides à 10 ppb (ng/g) en une seule analyse de 10 minutes Données relatives au rendement d extraction pour trois types de matrices supplémentées à 10 ng/g Conditions UPLC Système : Système ACQUITY UPLC de Waters Colonne : ACQUITY UPLC BEH C 18 2,1 x 100 mm, 1,7 μm Référence : Temp. de colonne : 40 C Temp. de l échantillon : 4 C Débit : 0,450 ml/min Phase mobile A : 98:2 eau/méthanol + 0,1 % d acide formique Phase mobile B : méthanol + 0,1 % d acide formique Gradient : Temps %A %B 0, , , , , Durée totale de l analyse : 10 min Volume d injection : 20 μl, en mode Full Loop (Boucle pleine) Conditions MS Système MS : Mode d ionisation : Tension du capillaire : Gaz de désolvatation : Gaz de cône : Temp. de la source : Acquisition : Gaz de collision : Détecteur ACQUITY TQ de Waters ESI, ionisation positive 1 kv azote, 800 L/h, à 400 C azote, 5 L/h 120 C MRM argon à 3,5 mbar Atrazine Carbendazime Cyprodinil Pesticide Flufénacet Imazalil Rendement d extraction en % Tébuconazole Thiabendazole Min. Aliment pour bébé Mangue Avocat

6 Sélection des produits d extraction d-spe pour la purification de l échantillon Type de denrée Type de nettoyage Taille Méthode AOAC Méthode CEN Fruits et légumes courants (céleri, laitue pommée, melon) Élimination des acides organiques polaires, de certains sucres et des lipides Tubes de 2 ml Tubes de 15 ml 50 mg de PSA, 150 mg de MgSO 4 Réf mg de PSA, 150 mg de MgSO 4 Réf mg de PSA, 900 mg de MgSO 4 Réf Denrées alimentaires contenant des cires et matières grasses (céréales, noix, produits laitiers, avocat) Élimination des acides organiques polaires, de certains sucres, de quantités importantes de lipides et des stérols Tubes de 2 ml Tubes de 15 ml 50 mg de PSA, 50 mg de C 18, 150 mg de MgSO 4 Réf mg de PSA, 25 mg de C 18, 150 mg de MgSO 4 Réf mg de PSA, 25 mg de C 18, 900mg MgSO 4 Réf Nettoyage des fruits et légumes colorés Certains fruits et légumes, comme l épinard, le poivron rouge et la carotte, présentent des teneurs importantes en pigments non polaires comme les caroténoïdes ou la chlorophylle. La technique QuEChERS permet d éliminer efficacement certains constituants courants des matrices, comme les acides gras et les sucres. Cependant, les échantillons à forte teneur en pigments exigent un traitement supplémentaire. Le noir de carbone graphitisé ou GCB élimine efficacement ces pigments. Il peut être ajouté au tube dans lequel s effectue la purification, en même temps que PSA et MgSO 4 pendant l étape de nettoyage par extraction en phase solide et en mode dispersif. L élimination des pigments est particulièrement importante dans le cas de la chromatographie en phase gazeuse : en effet, ces substances ont tendance à s accumuler au niveau du port d injection, contaminant rapidement l injecteur. Effet de quantités croissantes de noir de carbone graphitisé sur la décoloration d extraits d épinards. Aucun nettoyage PSA uniquement 2,5 mg de GCB 7,5 mg de GCB 12,5 mg de GCB 25 mg de GCB 50 mg de GCB Aujourd hui, les laboratoires doivent fournir des résultats de qualité irréprochable dans des délais toujours plus courts. Les scientifiques de Waters évaluent avec soin les performances des produits. Pour l analyse d un large éventail de contaminants alimentaires, ils peuvent vous recommander des méthodes pour la préparation des échantillons, pour la séparation chromatographique et pour l optimisation des paramètres analytiques des instruments. Ces conseils d experts sont regroupés dans notre Guide d applications dédié à l analyse alimentaire. Pour obtenir un exemplaire, consultez

7 [ Technique QuEChERS simplifiée] Références commerciales Kits Nom Description Qté Réf. Kit d extraction en phase solide et en mode dispersif DisQuE, format sachet (Méthode AOAC ) Sachet : 1,5 g d acétate de sodium et 6 g de MgSO 4 Tube de 50 ml : vide Tube de 2 ml : 150 mg de MgSO4 et 50 mg de PSA Kit d extraction en phase solide et en mode dispersif DisQuE, format sachet (Méthode CEN 15662) Kit d extraction en phase solide et en mode dispersif DisQuE (Méthode AOAC ) Sachet : 1 g de citrate de trisodium dihydrate, 0,5 g d hydrogénocitrate de disodium sesquihydrate, 1 g de NaCl et 4 g de MgSO 4 Tube de 50 ml : vide Tube de 2 ml : 150 mg de MgSO 4, 25 mg de PSA et 25 mg de C 18 Tube de 50 ml : 1,5 g d acétate de sodium, 6 g de MgSO 4 Tube de 2 ml : 150 mg de MgSO 4, 50 mg de PSA Kit d extraction en phase solide et en mode dispersif DisQuE (Méthode CEN 15662) Tube de 50 ml : 4 g de MgSO 4, 1 g de NaCl, 1 g de citrate de trisodium déshydraté, 0,5 g d hydrogénocitrate de disodium sesquihydrate Tube de 2 ml : 150 mg de MgSO 4, 25 mg de PSA, 25 mg de C 18 Tubes d extraction Nom Description Qty Réf. Tube vide de 50 ml pour extraction QuEChERS Tube de 50 ml, bouchon bleu (méthode AOAC) ,5 g d acétate de sodium, 6 g de MgSO Tube de 50 ml, bouchon blanc (méthode CEN) 4 g de MgSO 4, 1 g de NaCl, 1 g de citrate de trisodium déshydraté, 0,5 g d hydrogénocitrate de disodium sesquihydrate Sachets de support Nom Description Qté Réf. Sachet pour DisQuE (méthode AOAC) 1,5 g d acétate de sodium, 6 g de MgSO Sachet pour DisQuE (méthode CEN) 4 g de MgSO 4, 1 g de NaCl, 1 g de citrate de trisodium déshydraté, 0,5 g d hydrogénocitrate de disodium sesquihydrate Tube de purification Nom Description Qté Réf. Tube de 2 ml, bouchon blanc 150 mg de MgSO 4, 50 mg de PSA Tube de 2 ml, bouchon bleu 150 mg de MgSO 4, 50 mg de PSA, 25 mg de C Tube de 2 ml, bouchon jaune 150 mg de MgSO 4, 25 mg de PSA Tube de 2 ml, bouchon vert 150 mg de MgSO 4, 25 mg de PSA, 25 mg de C Tube de 15 ml, bouchon blanc 900 mg de MgSO 4, 150 mg de PSA Tube de 15 ml, bouchon bleu 900 mg de MgSO 4, 150 mg de PSA, 150 mg de C Support vrac Nom Qté Réf. Noir de carbone graphitisé 25 g Silice C 18 à greffage trifonctionnel 100 g WAT035672

8 [ Technique QuEChERS simplifiée] Bureaux de vente : Allemagne Australie Autriche Belgique et Luxembourg Brésil Canada Chine Corée Danemark Espagne Finlande France Hong Kong Hongrie Inde Irlande Italie Japon Mexique Norvège Pays-Bas Pologne Porto Rico Royaume-Uni Russie/CEI / République tchèque Singapour Suisse Suède Taïwan Autres pays : Waters Corporation États-Unis Le système de gestion de la qualité des sites de production de Waters situés à Tauton aux États-Unis et Wexford en Irlande est conforme aux normes d assurance et de gestion de la qualité rassemblées sous la norme internationale ISO Le système de gestion de la qualité de Waters fait l objet d audits périodiques de la part de l organisme de certification pour garantir sa conformité. Waters, UPLC, ACQUITY et ACQUITY UPLC sont des marques déposées de Waters Corporation. DisQuE et The Science of What s Possible sont des marques de Waters Corporation. Toutes les autres marques appartiennent à leurs propriétaires respectifs Waters Corporation. Imprimé aux États-Unis d Amérique. Juin FR IH-KK-FP