GENERALITES ET SECURITE AU LABORATOIRE Le travail du collaborateur ( trice ) scientifique et technique représente, dans les laboratoires, des risques qu il est important de connaître. Ce règlement a pour but d attirer l attention du personnel de l UNIL sur les dangers et les risques rencontrés fréquemment dans les laboratoires. En général, les collaborateurs ( trices ) scientifiques et techniques sont confrontés essentiellement aux dangers résultant des manipulation: fluides cryogéniques, biologiques, produits chimiques et solvants. A ces dangers s ajoutent les risques habituels électriques, d explosion et d incendie. Responsabilités individuelles: Chaque membre de l UNIL veille à assurer sa propre sécurité et celle de son entourage. Il est impératif de connaître les règles de sécurité en vigueur à l UNIL et surtout de les appliquer. Responsabilités de l employeur: Le chef de chaque groupe de recherche est responsable de la sécurité dans son ( ses ) laboratoire ( s ). Il doit s assurer que ses collaborateurs ( trices ) respectent, appliquent et transmettent les règles. Bonnes Pratiques au Laboratoire ( BPL ): Au laboratoire, il est interdit : De fumer, boire, manger, pipeter avec la bouche De stocker des aliments dans les réfrigérateurs ou chambres froides Il est obligatoire : D utiliser le matériel de protection (blouse, gants, lunettes, masque approprié). De se laver les mains avant et après une manipulation. D enlever ses gants avant toute saisie du combiné téléphonique, avant tout déplacement nécessitant l ouverture de portes, avant l utilisation de clavier informatique, la consultation de livres, de protocoles communs etc. De travailler sous une hotte avec les produits toxiques ou volatils voire dans un local convenablement ventilé. De stocker les produits volatils loin des sources de chaleur. De réaliser les manipulations avec des microorganismes génétiquement modifiés et les expériences de transformations génétiques uniquement sous les flux laminaires. De désinfecter les flux laminaires avant et après utilisations et de les vider de tout matériel sale. De respecter les consignes de gestion des déchets. Il est souhaitable : De ne pas travailler seul (surtout en dehors des horaires habituels). De travailler avec des appareils en bon état ( signaler au responsable toute anomalie). De ne pas porter de lentilles de contact.
De se protéger les yeux avec des lunettes spéciales lors de travaux avec des rayons UV, lasers etc. Utilisation des produits chimiques/biologiques: Ne stocker que les produits utilisés couramment et uniquement pour les protocoles en vigueur dans le laboratoire. Ne stocker que des quantités limitées. Identifier les solutions: nom et concentration du produit, nom du préparateur et date, sur une étiquette et jamais directement sur le verre ( même le plus indélébile des feutres s efface Ranger par famille chimique, correctement identifiés en fonction de leurs risques et de leur comportement chimique. Compatibilité des produits: Certains produits peuvent réagir violemment les uns avec les autres, ils ne doivent donc pas être stockés au même endroit. + peuvent être stockés ensemble O ne doivent être stockés ensemble que si certaines conditions sont remplies - ne doivent pas être stockés ensemble Transport des produits: NE JAMAIS PORTER DES PRODUITS OU DU MATERIEL DANGEREUX A LA MAIN Transporter le matériel et les bouteilles (acides, solvants, milieux, etc ) dans un conteneur approprié (bac, boîte, plateau ).
Les risques chimiques au laboratoire: Propriétés des substances Tous les produits chimiques sont susceptibles de présenter un danger. Ce danger peut être lié à: Leurs propriétés physiques: inflammabilité, explosibilité. Leurs propriétés chimiques: actions nocives sur l'organisme. Conduite à tenir pour l utilisation/stockage: phrases «P» ex: P1 Conserver sous clé. Anciennement S. Risque et toxicité: phrases «H» ex: H1 Explosif à l'état sec. Anciennement R. Ne jamais oublier que: Prévention: A APPLIQUER AVEC LES NOVEAUX PICTOGRAMMES SGH Lire les étiquettes, c est déjà se protéger! Connaître, consulter et appliquer les règles d'étiquetage pour identifier les dangers des produits chimiques: symboles de danger, phrases H et P. Lire les fiches de sécurité des produits chimiques ( MSDS ). Ne pas oublier les avertissements CMR ( mutagène, tératogène etc ). Ne mélangez pas n'importe quoi sans en connaître les effets! Choisir dans la mesure du possible les produits les moins dangereux. Respecter les règles de rangement des produits. Stocker les produits sensibles dans les armoires adéquates. La manipulation de tout produit nécessite une protection appropriée Dispositif de filtration de l'air (hotte de protection). Protection individuelle (lunettes, gants, blouse, masque ). Pour obtenir des informations plus précises sur la classe de toxicité d un produit envisagé pour une expérience, consulter la littérature du produit avant de l utiliser.
MANIPULATION DES PRODUITS CHIMIQUES/BIOLOGIQUES ET GESTION DES DECHETS Les déchets chimiques et biologiques sont soumis à une procédure d'élimination et transport définie par l'ordonnance sur les mouvements de déchets (OMoD ) Le Département fédéral de l environnement, des transports, de l énergie et de la communication (DETEC) édicte une ordonnance comprenant une liste des déchets. Il tient compte de la liste établie par la Communauté européenne. Il désigne dans la liste des déchets comme: Déchets spéciaux: les déchets qui, pour être éliminés de manière respectueuse de l environnement, requièrent, en raison de leur composition, de leurs propriétés physicochimiques ou biologiques, un ensemble de mesures techniques et organisationnelles particulières même en cas de mouvements à l intérieur de la Suisse Autres déchets soumis à contrôle: les déchets qui, pour être éliminés de manière respectueuse de l environnement, requièrent, en raison de leur composition ou de leurs propriétés physico-chimiques ou biologiques, un nombre restreint de mesures techniques et organisationnelles particulières même en cas de mouvements à l intérieur de la Suisse. ACIDES ET BASES Le contact avec des acides et bases concentrés peut provoquer des brûlures graves de la peau, des muqueuses et des yeux. Manipulations: Blouse, gants adéquats et des lunettes de protection. Le port de verres de contact ne constitue en aucun cas une protection contre les projections d acide/base. Travailler sous hotte type «Sorbonne» avec les acides concentrés. Jamais d eau dans l acide ou la base En cas de contact avec des acides/bases, rincer immédiatement et abondamment à l eau Destruction des acides minéraux: HCl, HBr, HI, HNO3, HClO4, H2SO4 etc Neutralisation progressive par une base minérale diluée : NaHCO3, Na2CO3, NaOH ou KOH, puis vérifier que le ph est proche de 7. Eliminer à l évier sous courant d eau. Destruction des bases minérales: NH4OH, NaOH, KOH, Ca(OH)2 etc Neutralisation progressive par un acide minéral dilué HCL ou H2SO4. Avec Ca(OH)2 utiliser uniquement HCl car le sulfate de calcium est insoluble! Vérifier que le ph est proche de 7. Eliminer à l évier sous courant d eau.
Récupération pour destruction «Déchets Spéciaux»: Diluer à l eau et recueillir dans un bidon plastique ( type PEHD ) libellé «ACIDES/BASES DILUES» En cas d élimination du produit pur, laisser dans le contenant d origine LES SOLVANTS A l'exception de certains dérivés halogénés, tous les solvants sont inflammables. Aucun solvant ne doit être stocké dans un réfrigérateur, ni un congélateur. Les solvants dont le point d éclair est inférieur à la température du frigo sont susceptibles de provoquer une explosion!!!!!! Les solvants peuvent pénétrer dans l'organisme par 3 voies: Voie respiratoire (grâce à leur volatilité) Voie cutanée (quel que soit l'état de la peau) Voie digestive (absorption accidentelle) Manipulations des solvants: Eviter l'inhalation de vapeurs: travailler sous hotte type «Sorbonne». Eviter le contact avec la peau: utiliser des gants appropriés. Ne pas transvaser un solvant dans un flacon ayant contenu un autre produit chimique. Travailler loin d une source de chaleur. Utiliser des systèmes d aspiration mécanique et des pipettes ( en verre pour certains solvants ). Eviter tout déversement vers l'égout. Limiter les pertes dues à l'évaporation ( flacons ouverts etc ). Conserver les déchets dans des récipients spécialement prévus à cet effet. Déchets solvants Les solvants halogénés et non-halogénés usagés doivent se stocker dans des bidons séparés, (même les solutions souillées). Attention à ne pas y verser d'acide. Explosion!!! Solvants halogénés ( chlorés ): sont considérés comme des solvants halogénés les solvants qui contiennent au total plus de 2 % masse de substances halogénées.
Par exemple: Dichlorométhane 1,1-dichloroéthane Chloroforme (sans phénol ) Trichloréthylène Tétrachloréthylène Bidon: «DECHETS SOLVANT HALOGENES» Solvants non-halogénés ( non-chlorés ): Par exemple: Ethanol Méthanol Tetrahydrofurane Bidon: «DECHETS SOLVANT NON-HALOGENES» Benzène Acetonitrile En cas de fuite ou de déversement accidentel, récupérer immédiatement les produits après les avoir recouverts de matériau absorbant inerte approprié à la substance, dont on maintient une réserve à disposition dans ou près des laboratoires. Si le déversement est important, supprimer toute source potentielle d'ignition, aérer la zone, évacuer le personnel en ne faisant intervenir que des opérateurs entraînés munis d'équipements de protection appropriés. PHENOL Stocker le phénol dans des locaux frais, bien ventilés, à l abri des rayons solaires, de toute source d ignition ou de chaleur et à l écart des produits oxydants. Eviter tout contact avec la peau et les yeux. Eviter l inhalation de vapeurs. Provoque des brûlures. En cas de projection cutanée, laver immédiatement à grande eau pendant 15 minutes. En cas de souillure sur le sol, récupérer immédiatement le produit en l épongeant avec un absorbant s il est en solution. Laver à grande eau la surface ayant été souillée. Si le versement est important, évacuer le personnel et faire intervenir des opérateurs munis d équipement de protection.
Déchets phénol: Ce produit et ses résidus doivent être considérés comme des déchets spéciaux. Phénol, Phénol-Chloroforme Contenant en verre: «PHENOL/PHENOL-CHCl3» (Solution) AZOTE LIQUIDE Risque d'asphyxie. Surpression. Risque explosion. L azote dont la température est de -196 C, entraîne des brûlures par le froid qui peuvent être extrêmement graves surtout si l azote atteint la cornée. Il y a aussi risque d asphyxie en cas de dégagement massif. C est pourquoi il est recommandé de le stocker dans un local suffisamment ventilé. Le port de gants de protection contre le froid ( cryogants ) et surtout de lunettes sont obligatoires! La prévention repose sur: Pas de rejet de l azote dans tout endroit où son accumulation pourrait être dangereuse (égouts, sous-sols, fosses, salle fermée). Pas de givre dans la soupape de sécurité. Agissez lentement quand vous plongez un élément dans le bain d'azote liquide. Jamais d azote dans des récipients fermés, ni dans une bouteille thermos. Brûlures à l azote liquide: UTILISER DE RÉCIPIENTS SPÉCIAUX À LARGES OUVERTURES ATTENTION! La température de la lésion doit retrouver le plus rapidement possible celle du corps! Rincer la brûlure à l'eau tiède au minimum 15 minutes. Recouvrir d'un pansement stérile et consulter un médecin.
LES PRODUITS GENOTOXIQUES Cancérogènes, mutagènes, tératogène Se rapporter aux recommandations CMR. Attention, il s agit de produits étiquetés «Toxiques» comportant en plus les phrases suivantes sur l étiquette ( liste non exhaustive ): R45 peut provoquer le cancer, R46 peut provoquer des altérations génétiques héréditaires, R49 peut provoquer le cancer par inhalation, R60 peut altérer la fertilité, R61 risque pendant la grossesse d'effets néfastes pour l'enfant Les femmes enceintes ne doivent pas manipuler les produits portant les indications suivantes R46, R60, R61 Produits très cancérogènes: bromure d éthidium, β-mercaptoéthanol, Acrylamide/Bisacrylamide Tout les récipients contenant des produits génotoxiques (purs ou en solution) doivent porter de façon claire et indélébile la mention «DANGER GENOTOXIQUE». Manipulations de produits génotoxiques: Blouse, double paire de gants appropriés, lunettes de protection, masque avec filtre adapté et sous hotte type «Sorbonne» ou flux laminaire Pour les liquides très volatils un masque à cartouche est indispensable! Pesée: Si possible, utiliser une balance prévue exclusivement pour les produits génotoxiques. Utiliser le système de double-pesée: dans un flacon préalablement taré, placer une quantité de produit et effectuer la pesée. Ajouter la quantité de solvant nécessaire pour obtenir la concentration désirée. Refermer le flacon. Décontamination du matériel: La vaisselle doit être décontaminée par le manipulateur lui-même avant qu elle ne rejoigne le circuit habituel de lavage. Cette décontamination dépend du produit utilisé. L utilisation de vaisselle à usage unique est préférable. Stockage des déchets: Pour les produits purs ou en solutions concentrées, conserver les récipients d origine et n effectuer aucun transvasement. Ces récipients doivent être placés dans un double emballage scellé incassable et immobilisé par un absorbant.
Il ne faut pas jeter à l évier même des solutions diluées des produits génotoxiques Récupération dans des bidons «DECHETS GENOTOXIQUE (LIQUIDES)» Au fur et à mesure de la manipulation, les déchets solides à éliminer sont emballés avec un plastique résistant et placés dans le bidon «DECHETS GENOTOXIQUE (SOLIDES)», ainsi que les pipettes et embouts à usages uniques déjà utilisés. ACRYLAMIDE/BIS-ACRYLAMIDE L'acrylamide (C3H5NO): non polymérisée, c'est un neurotoxique, même par contact. Pipeter avec une poire, travailler sous hotte «Sorbonne», porter une blouse, un masque et des gants appropriés Déchets: Conserver les déchets dans les bidons prévus à cet effet «DECHETS ACRYLAMIDE» En cas de souillure sur le sol, récupérer immédiatement le produit en l épongeant avec un matériau absorbant inerte. Laver à grande eau la surface souillée BROMURE D ETHIDIUM: BET Le bromure d éthidium (C21H20BrN3, N CAS : 1239-45-8) est un mutagène puissant à manipuler avec précaution (trop de risque en jeu), le port d une double paire de gants est souhaitable. Destruction des déchets liquides BET : Absorption sur charbon actif Traiter la solution de BET par du charbon actif, quantité minimale efficace: 1000 mg de charbon par mg de BET. Éliminer la solution traitée dans les bidons appropriés «BROMURE D ETHIDIUM LIQUIDE» ( vérifier l efficacité du traitement avec les UV, la solution doit être incolore). Les déchets solides contenant du BET (charbon actif contaminé) doivent être stockés dans les bidons appropriés. Eliminer également les gels (emballés dans un plastique résistant) et gants dans le même bidon «BROMURE D ETHIDIUM SOLIDE»
Produits de substitution: Nous citons ici cet exemple tout en sachant qu il existe d autres produits sur le marché. SYBR SafeTM DNA Gel Stain http://probes.invitrogen.com/products/sybrsafe/ SYBR SafeTM DNA Gel Stain The safer ethidium bromide alternative PAS SI SAFE QU ON NOUS LE DIT. AUCUN RECUL OU ETUDE FIABLE SUR LE PRODUIT! Destruction des déchets liquides Bidon : «SELS» ( ni acide/base, ni oxydants, ni métaux lourd ) Destruction des déchets solides: Les gels peuvent être emballés et jetés dans les poubelles spécifiques. Ce sont les précautions minimales à l heure actuelle. AUTRES DECHETS Le déchet à collecter contient-il des oxydants? MnO4, ClO4, (Cr2O7)2, Ce4+, (CrO4)2, (S2O8)2 etc Eau oxygénée, H2O2: diluer et verser dans l évier. Bidon : «SELS OXYDANTS». Le déchet à collecter contient-il des sels de métaux lourds? Cu2+, Zn2+, Pb2+, Sn2+, Al3+, Cd2, Fe2+, Fe3+ etc Bidon: «SELS DE METAUX LOURDS». DECHETS CHIMIQUES SOLIDES Il est interdit de jeter des produits chimiques potentiellement dangereux avec des ordures ménagères! Les produits encore étiquetés seront laissés dans leur emballage d origine. Les produits qui ne sont plus identifiés seront laissés dans leur emballage indiquant «PRODUITS INCONNUS». DECHETS DES BAINS DE DEVELOPPEMENT PHOTOGRAPHIQUE Bains de développement Bidon: «REVELATEUR PHOTO». Bains de blanchiment et bains de blanchiment/fixations Bidon: «FIXATEUR PHOTO».
ELIMINATION DES BOUTEILLES VIDES AYANT CONTENU UNPRODUIT CHIMIQUE Rincer le récipient vide sous l'eau courante. Jeter le bouchon et tracer clairement l'étiquette à l'aide d'un feutre noir. OBJETS TRANCHANTS Lames de rasoir, aiguilles, etc... Bidon spécial ( doit pouvoir être scellé ): «OBJETS TRANCHANTS» POUBELLE SPECIFIQUE. MATERIEL VEGETAL: TERRE ET PLANTES Stérilisation des déchets végétaux: mettre uniquement la terre et les déchets des plantes dans les poubelles jaunes: BIOHAZARD BAG. RESPECTER L'UTILISATION DES POUBELLES ET LA GESTION DES DECHETS AUCUN DECHET, PRODUIT, MATERIEL OU CARTON NE SERA ABANDONNE EN UN QUELCONQUE ENDROIT, A L'INTERIEUR OU A L'EXTERIEUR DU LABORATOIRE/ BATIMENT. PILES, PAPIER, CARTON, VERRE, SAGEX, CARTOUCHES LASER, CAPSULES NESPRESSO, BOUTEILLES DE GAZ, ALU, VERRE, FER BLANC SONT A APPORTER AU LOCAL RECYCLAGE DE VOTRE BATIMENT. BIOSECURITE La plupart des micro-organismes utilisés sont rangés par groupes ( groupes de risque des microorganismes et les classes d activité ). La manipulation des microorganismes génétiquement modifiés et les expériences de transformation génétique doivent être effectuées uniquement sous les hottes à flux laminaire. Avant et après utilisation, les hottes doivent être nettoyées avec un désinfectant. Afin d'éviter tout risque de dissémination de matériel génétiquement modifié (ADN, microorganismes, ou matériel végétal transformé), les tubes, les pipettes, les boîtes de Pétri et les Kleenex contaminés par les microorganismes ou les plasmides recombinants doivent être inactivés avant élimination. Il en est de même du matériel végétal et des cultures bactériennes. Les déchets liquides: sont traités à l hypochlorite de sodium (eau de javel 1/3 javel 13%-14% + 2/3 eau ), ou par d autres désinfectants dont l efficacité est connue.
Ils peuvent être autoclavés avant d être éliminés dans l évier, pour autant qu il ne s agisse pas de déchets liquides chimiques ou radioactifs qui doivent être éliminés comme déchets spéciaux. Les déchets solides: les objets tranchants ou coupants qui ont servi à la culture ou à la manipulation de matériel biologique sont collectés respectivement dans des sacs ou des conteneurs spéciaux avec le sigle BIOHAZARD avant d être autoclavés. Décontamination à l'éthanol: utiliser une solution aqueuse à 70 % pour décontaminer par exemple les plans de travail, la vaisselle, les pots et rotors de centrifugeuse. Attention ne pas autoclaver le matériel traité à la javel. Les vapeurs de chlore sont dangereuses pour les utilisateurs et corrosives pour l autoclave. Chaque groupe assigne un responsable de l autoclavage des déchets biologiques Pour plus de renseignements consulter: http://www.lyon.inserm.fr/riskbio/decontamination/index.html