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Analyse du risque Culture L1: - cellules animales non infectieuses - lignées commercialisées et classées L1 (ATCC) - bactéries non pathogènes et/ou OGM de classe 1 Culture L2: - cellules primaires humaines ou simiennes saines - eucaryotes ou procaryotes commercialisées L2 - cellules humaines non commercialisées - animaux sauvages Culture L3: - virus HIV, hépatites, bactéries L3, prion - cellules simiennes ou humaines infectées Culture L4: - virus ébola

Les risques encourus Culture L1: -les mêmes risques que dans le laboratoire traditionnel, plus la virose provenant du SVF Culture L2: - implantation de tumeurs si utilisation de lignées cancéreuses - viroses avec les cellules primaires humaines «saines» - infection par l agent étudié, mais traitement performant Culture L3: - viroses avec les cellules simiennes et humaines infectées - infection par l agent étudié (virus, bactérie), traitement possible mais non curatif. Culture L4: - infection par l agent étudié, mais risque mortel car pas de traitement connu C est pourquoi vous devez passer une visite médicale avant de commencer la culture cellulaire.

Pour se protéger les BPL Dans tous les types de confinement, comme dans le laboratoire ordinaire, il ne faut pas boire, ni manger Ne pas pipeter à la bouche Porter une blouse et des gants (quand nécessaire) Porter des lunettes de protection si un risque de projection existe Porter un masque en cas d utilisation de produits irritants pour les voies respiratoires, ou travailler sous une sorbonne Il faut éviter la banalisation psychologique des expérimentations

Confinement L1 Pièce de culture qui peut ne pas être séparée du reste du laboratoire. Port de la blouse et des gants non obligatoire mais recommandé à cause du SVF présent dans le milieu de culture et pouvant être virosé Manipulation sous une hotte de culture qui protège la culture de la contamination, mais pas le manipulateur.

Confinement L2 Pièce de culture séparée du reste du laboratoire par au moins une porte Se laver les mains en entrant et en sortant de cette pièce Port obligatoire de la blouse spéciale culture et des gants Travail sous un PSM (poste de sécurité microbiologique) de type II Ne pas utiliser d objet tranchant ou piquant Nettoyer et désinfecter le plan de travail après chaque utilisation Utiliser au maximum du matériel jetable

Confinement L3 Pièce de culture en dépression et sas en surpression (pas de fuite d agents pathogènes) Air de la pièce filtré sur filtre HEPA et évacué en terrasse Port d une combinaison intégrale ou d une blouse, de surchaussures, d une charlotte, de gants, de lunettes et d un masque de protection. Aucun objet contondant n est autorisé

Les déchets Les Déchets d activités de soins à risques infectieux (DASRI): - déchets solides de classe L2, L3 et les OGMs. Les déchets psychologiques et biochimiques - seringue, cône, eppendorf, ARNs, ADNs, protéines. Les déchets liquides: - ils sont javélisés (dilution au tiers) avant de partir à l égout. Les Déchets industriels banaux (DIB): -les emballages plastiques, sopalin non souillé par des agents biologiques ou chimiques. Le carton et les papiers sont recyclés.

Si un accident arrive? Délimiter la zone contaminée Eponger le milieu de culture avec un sopalin en allant de l extérieur vers l intérieure et le mettre ensuite dans les déchets biologiques. Nettoyer d abord avec un agent mouillant et ensuite avec un désinfectant à large spectre Si vous vous êtes coupé: faire saigner la plaie, nettoyer avec de l eau savonneuse, et faire tremper la plaie dans de la javel diluée au tiers. Prévenir un responsable.