Initiation aux Bonnes Pratiques de Laboratoire Pr C. PASQUIER - 2008 UFR Pharmacie - Microbiologie CHU Toulouse - Virologie INSERM U563 UE Stage M1 Janvier 2008
Objectifs pédagogiques Connaître les principales règles d hygiène et de sécurité Prendre en compte les risques dans l établissement des protocoles techniques (prévention) Réagir correctement en cas d exposition à un risque
Objectifs pratiques Se protéger Protéger les autres Protéger l environnement Protéger la qualité des manipulations Respecter les réglementations
Les risques? Liés à l environnement de travail Température, bruit, lumière, incendie, Liés aux manipulations et produits manipulés Risque biologique, toxique, radioactivité, animaux, Liés aux comportements humains absence de communication, non respect des règles,.
Les différents risques Biologiques Chimiques Radioactivité Froid Divers: gaz, électricité, incendie, accident, Identification / prévention / CAT si exposition
Evaluation des risques Présent ou absent Quantifier et localiser Proposer des réponses adaptées Supprimer Réduire l exposition (durée, intensité) CAT en cas d exposition Contrôler les conséquences éventuelles
Principes de prévention Quatre grands principes de prévention : évaluation du risque, élimination du risque, protection collective et protection individuelle (Source www.inrs.fr)
Votre arrivée au laboratoire Votre encadrant (interlocuteur N 1) Le responsable hygiène et sécurité (informations et conseils) Le Directeur du laboratoire (responsabilité) Visite du laboratoire Accès - Sorties de secours Extincteurs - plan d évacuation - douches sécurité - rince yeux - salle premier soins Espaces tertiaires - vestiaires - techniques Localisation des risques (signalétique)
Signalétique Sas zone BM3 Risques Toxique et infectieux
Signalétique des sas
Vos facteurs de risques Signaler tout facteur de risque! Immunodépression Allergie Asthme Risque de perte de conscience (épilepsie, diabète, ) Grossesse Blessure ou plaie (à couvrir)
Risque Biologique QuickTime et un UE Stage M1 Janvier 2008
Manuel de sécurité biologique en laboratoire, OMS 2005 QuickTime et un Définition Les risques biologiques résultent de la manipulation de: - Microorganisme pathogène (bactérie, virus, champignon, parasite) -ATNC - Lignée cellulaire immortalisée - Organisme génétiquement modifié (OGM) qui sont susceptibles de provoquer une infection / infestation, une allergie, une toxi-infection, l implantation d une tumeur
QuickTime et un Facteurs de risque - Réservoir d agent biologique - Porte de sortie - Transmission - Portes d entrée - Hôte / Prédisposition = chaîne de transmission
QuickTime et un Transmissions Inhalation Contact avec la peau ou les muqueuses Inoculation Ingestion (toux, poussières, aérosols) (projection, manipulation) (piqûre, coupure, morsure) (main à la bouche, manger, fumer)
Directive 93/88/CEE, arrêté du 18/7/94, arrêté du 17/4/97, directive 97/59/CE, arrêté du 30/6/98) QuickTime et un Groupes de risque 1 Individu Faible/nul Risque Collectivité Faible/nul Pas de maladie sf terrain Bacillus subtilis, E.coli non patho, 2 3 4 Modéré Important Important Faible Faible Important Traitement et prévention Staphylococcus aureus, Aspergillus fumigatus, CMV, Maladie grave, Traitement et/ou prévention Mycobacterium tuberculosis, HIV, ATNC, Maladie grave, transmissible Pas traitement/prévention Variole, Ebola, Crimée-Congo,
(Directive 90-219, Circulaire du 16/4/96, arrêté du 28/8/96, décret 30/5/97, décret du 8/1/98) QuickTime et un OGM Evaluation Organisme donneur Hôte receveur Vecteur ADN recombiné Groupe I Classe 1 Pas de risque (Homme, animaux, plantes et environnement) Groupe II Classes risque croissant 2 à 4 = Agréments spécifiques
QuickTime et un Maîtrise du risque Bonnes pratiques de laboratoire Précautions universelles Agir sur la source de l infection (réservoir) Agir sur le mode de transmission Agir sur les expositions potentielles (procédures d hygiène et de travail)
QuickTime et un Manipulateur Vaccinations Tenue et hygiène Lavage ou désinfection des mains
(Code santé publique, art L10, arrêté du 153/91, arrêtés du 6/3/07) QuickTime et un Vaccinations Première mesure préventive Vaccinations systématiques Calendrier vaccinal 2007, BEH 31-32, www.invs.sante.fr Vaccinations supplémentaires ou adaptées aux risques Médecine préventive / responsabilité
(Code santé publique, art L10, arrêté du 153/91, arrêtés du 6/3/07) QuickTime et un Vaccins VACCINATION (corps de sant) RAPPELS Tuberculose Obligatoire (IDR) Diphtrie Obligatoire Tous les 10 ans Ttanos Obligatoire Tous les 10 ans Poliomylite Obligatoire Tous les 10 ans Hpatite B Obligatoire Srologie Fivres typho des Prconise Tous les 3 ans Rubole Prconise Grippe Prconise
QuickTime et un Tenue de travail Blouse personnelle Ininflammable (coton) Manches longues Propre (blanchisserie du labo, pas à la maison) Laissée dans les espaces techniques Vêtements de villes et effets personnels (sacs, portable, ) dans le vestiaire (ou bureau) En fonction du risque: tenue spécifique adaptée (ex pyjama + blouse)
Différentes tenues BSL2 BM3 BSL3
QuickTime et un Hygiène individuelle Hygiène des mains Ongles courts, sans vernis Pas de bague, bijou, bracelet, montre au poignet Lavage simple des mains Avant et après le port des gants Après tout geste potentiellement contaminant Aux entrées et sorties des espaces techniques Avant de manger, boire, fumer Avant et après être allé aux toilettes Cheveux courts ou attachés Interdiction de boire, manger, fumer (ou de porter quelque chose à la bouche ou au visage) dans les espaces techniques. Pas de nourriture ou boisson.
QuickTime et un Lavage des mains Lavage simple Mouiller les mains et poignets Appliquer une dose de savon Savonner 30s Rincer abondamment Sécher avec du papier à usage unique Fermer le robinet avec le papier (sf si automatique) Jeter le papier usagé Friction avec solution hydro-alcoolique Lavage chirurgical Désinfection des mains
QuickTime et un Gants Gants en latex (non poudrés) Toute manipulation à risque biologique Manipulation de biologie moléculaire (RNAse) Gants poudrés en 2nde paire (BSL3) Gants en vinyles Allergie au latex Gants en nitriles Manipulation BET, SYBR green Gants pour congélateurs Gants de ménage
QuickTime et un Port des gants Obligatoire pour toute manipulation de matériel biologique À la fin de chaque manipulation les retirer Quand les changer? Dés qu ils sont endommagés ou souillés Après toute manipulation sous PSM Ils ne doivent pas servir de vecteur de contamination Poignées de portes Circulation dans les couloirs Téléphone Clavier d ordinateur
Autres matériels QuickTime et un de protection Lunettes de protection En cas de risque de projection ou d aérosols Se porte par dessus les lunettes de vue Masques de protection Normes FFP1 à 3 (différent des masques antiprojections) En cas de risque d aérosols ou transmission aérienne Pyjama, surblouse, surchaussure, calot, sabot, visière,
Postes de Sécurité QuickTime et un Microbiologique - PSM PSM : Hotte à flux laminaire, safety cabinet Protection du manipulateur Protection de l environnement Protection du matériel manipulé Nécessite : - matériel propre, entretenu et contrôlé - conditions d utilisation correctes - manipulations correctes
QuickTime et un PSM type I Protection de l atmosphère Protection du manipulateur QuickTime et un Pas de protection du produit
QuickTime et un PSM type II Protection de l atmosphère Protection du manipulateur QuickTime et un Protection du produit
QuickTime et un PSM type III Protection de l atmosphère Protection du manipulateur QuickTime et un Protection du produit
Manipulation QuickTime et un Sous PSM-II Maintien du caractère laminaire du flux Flux en fonction depuis > 15 min Débuté les manipulations 1 min après entrée des bras Plan de travail dégagé et préparé (pipettes, embouts, poubelle, vortex, pipetaid, ) - pas de source de chaleur Mouvements de bras anticipés pour être minimaux et précis Mouvements lents, pas au dessus du matériel Décontamination du plan de travail et matériels sortis Enlever les gants après manipulation
QuickTime et un Matériel Matériel à usage unique Tubes, pipettes, bouchons, Jeter dans poubelle à risque biologique (Déchets d Activité de Soins à Risques Infectieux - DASRI) Matériel réutilisable Nettoyage, décontamination, stérilisation Filières différentes
QuickTime et un Surfaces Lisses, non poreuses, sans joint, résistantes aux désinfectants Rangement Le moins de matériels possible sur paillasse Facilite le nettoyage et désinfection Limite l empoussièrement Nettoyage Fréquent Désinfection Régulière
QuickTime et un Niveaux de confinement Imposés par le groupe à risque des agents / OGM NSBL 1 à 4 (L1 à L4) NSBA 1 à 4 (animalerie A1 à A4) Réglementation Enceinte du laboratoire Équipements obligatoires Organisation précise Contrôles AFSSAPS (Agence Française de Sécurité Sanitaire des produits de Santé)
QuickTime et un Confinement L1 Manipulation d agent du groupe 1 Locaux Isolé par une porte et des fenêtres fermées Paillasses, murs et sols lisses et facilement lavables Matériel Autoclave dans le bâtiment (optionnel) Pratiques Vêtements de protection Paillasses propres et rangées
(arrêté du 16/7/07) QuickTime et un Confinement L2 Manipulation d agent du groupe 2 Locaux Accès réglementé pour les personnes autorisées Lavabos à commandes non manuelles Stockage des agents biologiques en lieu sûr (la majorité des labos) Matériel Autoclave dans le bâtiment Postes de Sécurité Microbiologique II Centrifugeuses sécurisées Pratiques Vêtements de protection (rangement) Décontamination matériel/déchets,containers spécifiques Minimisation formation aérosols
Laboratoire L2
(arrêté du 16/7/07) QuickTime et un Confinement L3 Manipulation d agent du groupe 3 (3 à TOULOUSE) Locaux L2 + 2 sas, oculus. Fermeture hermétique Filtration de l air (entrant) et sortant, P négative (alarme). (Douche pour décontamination) Matériel Autoclave dans le laboratoire à double entrée Postes de Sécurité Microbiologique type II Centrifugeuses sécurisées Pratiques L2 + surbottes et surblouses. Gants x 2 Inactivation des effluents des éviers et des douches
Autoclave double entrée
Laboratoire L3
Laboratoire L3
(arrêté du 16/7/07) QuickTime et un Confinement L4 Manipulation d agent du groupe 4 (Mérieux - LYON) Locaux L3 + double sas. Douche obligatoire. Double filtre HEPA (air sortant). Ventilation-électricité secourue. Interphone obligatoire Matériel L3 + Postes de Sécurité Microbiologique type III Pratiques L3 + scaphandre
Laboratoires L 4
QuickTime et un Limiter les aérosols Circonstances de génération Centrifugation Vortex Va et vient à la pipette Prévention Matériels propres, entretenus et contrôlés Vérifier cuve centrifugeuse (stylo), équilibrage Fermer tubes, plots et couvercles Utiliser tubes plastiques Vortex et va et vient à la pipette sous PSM
QuickTime et un En cas d exposition Nettoyage et décontamination immédiate Prévenir immédiatement un responsable (encadrant, RHS, chef) pour mesures complémentaires Déclaration d accident et mise en place d un suivi médical Si Accident d Exposition au Sang (AES) Appel au SMIT (risque HIV)
QuickTime et un Décontamination Autoclavage Universel : Glutaraldéhyde, Hypochlorite de sodium, formol Détergent désinfectant Désinfectant : Eau de javel 1,2 Cl Alcool 70 C
Gestion des déchêts Trier les déchets QuickTime et un QuickTime et un OM DASRI Chimiques Radioactifs Conditionnement spécifique Identification producteur et du risque Elimination par filière spécifique (prestataire) Traçabilité obligatoire jusqu à destruction
QuickTime et un Déchêts biologiques Solide - Liquide Non coupant Solide - Liquide coupant Matériel réutilisable Nettoyage autoclavage
Déchêts à risque infectieux
Déchêts toxiques
Risque Chimique QuickTime et un UE Stage M1 Janvier 2008
QuickTime et un Définition INDICATIONS de PRODUITS DANGEREUXÊ:
QuickTime et un Identification Logo sur chaque emballage primaire Le reprendre en cas d emballage secondaire Associé à des phrases R et S R explicite le risque (ex R25: toxique en cas d ingestion) S explicite les conseils de sécurité (ex S9: conserver le récipient dans un endroit bien ventilé) Obligation du fournisseur de donner une FDS Fiche de données de sécurité précisant composition, risque, précaution d usage, d élimination et CAT en cas d exposition Vous devez connaître le risque des produits que vous manipulez ou présents dans les pièces ou vous manipulez
Armoire à toxique et SPS
QuickTime et un Stockage Armoire verrouillée et ventilée pour les solvants Armoire verrouillée pour les toxiques Armoire pour les chimiques Balisage du risque Quantité minimale pour utilisation quotidienne (hebdomadaire) dans les labos Liste à jour des toxiques (quantité, localisation par pièce)
QuickTime et un Quelques précautions Port de gants adéquats Manipulation des acides et des bases: Lunettes + gants, toujours verser l acide dans l eau Renseignez vous toujours sur les interactions entre produits en cas de mélange Si nécessaire manipulation sous une sorbonne (aspiration connectée sur l extérieur) ou une hotte à filtre charbon (pas sous PSM!) Pas de solvant dans un congélateur ou réfrigérateur (ventilation nécessaire) Gants en nitrile (pas de latex pour BET), pas de NaOCl INTEGRER les règles spécifiques dans les modes opératoires
Adapter sa tenue Tenue décontamination au HCl 0,1N
QuickTime et un CAT Dispersion de produits chimiques Baliser, évacuer, kit anti-dispersion, voir FDS, nettoyage et élimination Contact Rincer immédiatement à l eau (douche, rince-yeux), voir FDS Pas de javel sur BET Contacter centre anti-poison ou SAMU (15)
Autres risques UE Stage M1 Janvier 2008
Radioactivité Risque d irradiation et de contamination radioélément (ou de la source du rayonnement), type de rayonnement Dose manipulée et durée d exposition Responsable radioprotection Pièce spécifique pour la manipulation La manipulation nécessite une formation spécifique Écran, masque et gants de protection Condition de stockage avant et après élimination spécifique Dosimètre
Froid Azote liquide (-195 C) et carboglace (-57 C) Risque de brûlure (pas de contact ou gants spécifiques pour la carboglace - lunettes anti-projection) Aération (dégagement d azote ou C0 2 pouvant conduire à des hypoxies) - locaux spécifiques Risque infectieux souvent associé Congélateurs (-140 C, -80 C, -20 C) Risque de brûlure (gants spécifiques) Réfrigérateur et chambre froide (+4 C) Vérifier que personne n est enfermé dans la chambre froide (ouverture intérieure obligatoire)
Gaz Gaz de ville (méthane + tétrahydrotiophène) Risque de brûlure, d incendie et d explosion (pas de bec buzen, éteindre le gaz, vérifier la vanne de fermeture générale) Risque d asphyxie CO 2, N 2, Risque d asphyxie O 2 Risque d incendie et d explosion (comburant)
Electricité 220 V alternatif (ou supérieur) Risque de brûlure, d incendie et d électrocution (pas de prise multiple, pas de mains mouillées) Contrôles de installation obligatoire Attention aux cuves d électrophorèse! (et aux UV pour les photos de gels : écran / masque /gants) Laser (FACS, Séquenceur, ) Champ magnétique
Incendie Plan d évacuation Guide et serre-file, ne pas utiliser d'ascenseur, lieu de rassemblement, refuge pour les PMR Exercices réguliers Matériel de secours et prévention Couverture ininflammables, alarme, détecteur de fumer, portes coupe-feu Extincteurs (eau + additifs agissant par refroidissement, plus rarement CO 2 pour les feux électriques et poudres pour les feux gaz agissant par étouffement) ou lance à incendie
QuickTime et un Biologie Moléculaire QuickTime et un Risque pour les manipulations Pièce propre (réactifs) (BM1) Pièce Pré-PCR (extraction, ADN, ARN)(BM2) Pièce post-pcr (manipulation d amplicons, plasmides) avec sas en surpression (BM3) Prévention Organisation et circulation des matériels et personnes Respect des protocoles Tenue adaptée Hotte PCR Décontamination (NaOCl, HCl) Blancs, témoins négatif, Wipe-test, aliquotage
Personnes isolées et accidents Ne travaillez jamais seul Nécessité de pouvoir vous secourir Toujours prévenir une personne de confiance (travail le soir et les WE) - autorisation de votre encadrant Bip (homme mort), vidéo-surveillance Ne jamais courir Les couloirs doivent être dégagés et propres
Couloir Couloir propre et dégagé
Contrôles des accès Accès restreints Ne pas diffuser clés, cartes ou codes Ne pas pas faire visiter les zones à accès restreint aux personnes non autorisées Vérifier les fermetures Fenêtres fermées Courants d air diffusant micro-organismes et toxiques Intrusion d animaux (oiseaux, rats) - lutte contre les insectes et rongeurs
Accès restreint Accès par carte personnelle
Accès labo BSL3
Synthèse Tous concernés par la sécurité Consulter les procédures et les référents Poser des questions! Réfléchissez avant d agir (visualiser vos manipulations) Signaler tout incident ou anomalie Obligation de respecter les réglementations Mise en place de système qualité (dispositif d amélioration continu)
Conclusion La qualité Contrôler l ensemble des processus d un laboratoire grâce à une traçabilité (gestes, formation du personnel, matériels, environnement de travail et organisation) Analyse des dysfonctionnements et des indicateurs choisis Amélioration continue et reconnaissance extérieure Certification (ISO) et accréditation (COFRAC)
Votre rapport Présenter votre laboratoire d accueil Encadrant, Responsable H&S, directeur du labo Installations spécifiques (BSL2, BSL3, radioactivité, animalerie, ) Dans votre Matériels et méthodes préciser vos conditions de manipulations Sous PSM II Pièce post-pcr, Préciser les produits toxiques et groupes des agents que vous manipulez,