EAUX : TECHNIQUES DE PRELEVEMENT ET TRANSPORT DES ECHANTILLONS

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1 Service : Microbiologie Méthode technique Mise en service de la première version : Mise en application de cette version : EAUX : TECHNIQUES DE PRELEVEMENT ET TRANSPORT DES ECHANTILLONS Rédaction : BLETTNER.C Visa : Date : Vérification technique : BOCA.J Visa : Date : Vérification qualité : BRIER.M Visa : Date : Approbation : BLETTNER.C Visa : Date : Nature de la modification : Ajout des conditions de prise de la température de l eau. Personnes ayant lu et compris le document : NOM FONCTION DATE VISA Remarques : Diffusion du document Lieu de diffusion (et/ou personne) Mode de diffusion Interne Externe Date de diffusion Visa Date de reprise de la version Table des matières : Page n 1/9

2 1. OBJET ET DOMAINE D APPLICATION REFERENCES DOCUMENTS ASSOCIES DEFINITION ORGANISATION MATERIEL POINT DE PRELEVEMENT TECHNIQUES DE PRELEVEMENTS EAUX POTABLES Eaux de réseau Eaux de dialyses Eaux embouteillées, conteneurs EAUX DE SOURCE, PUITS EAUX DE PISCINE TRANSPORT ET CONSERVATION TRANSPORT CONSERVATION CLASSEMENT ET ARCHIVAGE... 9 Page n 2/9

3 1. OBJET ET DOMAINE D APPLICATION Le présent document a pour objet de décrire les modes opératoires de prélèvement de l eau en vue de l analyse microbiologique ainsi que le transport, la manipulation et la conservation des échantillons avant le début de l analyse. Seuls les protocoles concernant les types d eaux les plus courants seront traités dans ce document : eaux potables (réseaux de distribution, conteneurs ), eaux de dialyses, eaux de piscines, surfaces, puits Pour les autres cas (eaux de baignade, mer, résiduaire ) se référer directement à la norme EN ISO REFERENCES - Norme Européenne : NF EN ISO " Qualité de l eau Echantillonnage pour analyse microbiologique ". - Norme Internationale : ISO " Directives concernant la préparation et le management de la qualité des fluides d hémodialyse et de thérapies annexes ". - Norme Européenne : NF EN ISO/CEI "Exigences générales concernant la compétence des laboratoires d étalonages et d essais". 3. DOCUMENTS ASSOCIES - MB PS 04 F2 : Fiche de demande d analyse d eaux. 4. DEFINITION Prélèvement : acte qui consiste à obtenir l échantillon. Echantillon : volume global d eau représentatif de l eau à contrôler, prelevé en un endroit défini selon des modalités définies et destiné à la réalisation d analyses. Fiche de prélèvement : document renseigné par le préleveur pour assurer la traçabilité complète des conditions de prélèvement. Flambage : action consistant à porter le matériau d un point de prélèvement à une température élevée à l aide d une flamme afin d assurer sa désinfection. 5. ORGANISATION 5.1. Matériel -Désinfectant (éthanol à 70% ou Isopropanol). -Désinfectant pour les mains + papier essuie-mains. -Gants stériles -Seringues stériles -Chalumeau à gaz avec recharges. -Briquet. -Marqueurs, stylos, étiquettes. -Clés à molette. -Glacière avec blocs réfrigérants. Page n 3/9

4 -Thermomètre. -Porte flacon lesté avec chaine ou perche. -Flacons PEHD stériles à usage unique de 500ml avec thiosulfate de (min 10mg/flacon). -Flacons PEHD stériles à usage unique de 1L avec thiosulfate de (min 20mg/flacon) -Flacons stériles exempts d endotoxines -Flacons verre : type selon paramètres chimie 5.2. Point de prélèvement Il doit être identifié avec précision. Il convient d éviter les points de prélèvements pour lesquels les conditions ne sont pas stables afin de réaliser un échantillonnage le plus homogène et représentatif possible du site de prélèvement Techniques de prélèvements Flaconnage utilisé Eaux potables Type d eau Eaux de réseau Eaux embouteillées / Conteneurs Eaux de surface / puits Eaux de piscine Eaux de dialyse Eaux de baignade Type de flacon Flacon 500 ml stérile + thiosulfate de 2 flacons 500ml stériles + thiosulfate de Flacon 500 ml emballé stérile + thiosulfate de Flacon de 500 ml emballé stérile + thiosulfate de Flacon de 500 ml emballé stérile + thiosulfate de Objectifs du prélèvement : a/ Connaitre la qualité de l eau dans le réseau de distribution ou un appareil de dialyse. Prélèvement au plus près de la conduite principale du réseau (généralement juste après le compteur) pour éviter toute source de contamination par le réseau secondaire. b/ Connaitre la qualité de l eau au robinet. Méthode de choix pour évaluer la qualité de l eau potable. c/ Connaitre la qualité de l eau telle qu elle est consommée. Cas utilisé dans des situations particulières comme en cas d épidémié ou demande spécifique du client. Objectif Type d eau Retirer accessoires et inserts Désinfecter Rincer a Eau dans le réseau principal/dialyse OUI OUI OUI b Eau telle qu elle parvient au robinet OUI OUI * NON (minimal) c Eau telle qu elle est consommée NON NON NON * : rincer brièvement, uniquement pour annuler les effets de la désinfection du robinet. Page n 4/9

5 Règles de base : - Utiliser obligatoirement des flacons stériles à l intérieur et à l extérieur pour tout prélèvement réalisé en profondeur. - Toujours prélever aseptiquement avec des mains propres ou avec des gants stériles en protégeant l échantillon contre les courants d air et les éclaboussures. - Pendant le remplissage, le dispositif de fermeture du flacon ne doit entrer en contact avec aucun élément (doigts, sol, poche ). - Laisser un volume d air (hauteur du goulot au minimum) dans le flacon de sorte à permettre l agitation appropriée avant l analyse. - Refermer le flacon immédiatement après le prélèvement. Ne pas utiliser cet échantillon pour la prise de température ou tout autre paramètre mesuré sur site. - La prise de température de l eau est à effectuer de façon systématique avant échantillonnage et directement à la sortie du robinet ou dans un récipient autre que le flacon de prélèvement Eaux potables Eaux de réseau Cas (a) : a1/ Conduite principale (réseau de distribution) - Démonter les éventuels inserts et accessoires (mousseur ) présents sur le robinet. - Eviter si possible les robinets mélangeur ou présentant des fuites à la manette - Gratter toute salissure (tartre, film biologique, graisse ) puis éliminer celles-ci en manoeuvrant le robinet à plusieures reprises. - Stériliser à la flamme ou à l aide d un désinfectant approprié (pissette d éthanol). - Refroidir et rincer le robinet : ouvrir le robinet au débit maximal pendant 5s à 10s puis réduire le débit de moitiée pendant le temps nécessaire jusqu à obtention d une température d eau constante. - Remplir le flacon dans des conditions aseptiques en laissant un volume d air dans le flacon pour permettre une agitation correcte avant l analyse. - Inscrire sur le flacon et sur la fiche de demande d analyse d eaux toutes les informations concernant le prélèvement (site, lieu, date, heure, éventuels problèmes rencontrés ). Cas (b) : eau telle qu elle parvient au robinet des concommateurs - Démonter les éventuels inserts et accessoires (mousseur ) présents sur le robinet. - Eviter si possible les robinets mélangeur ou présentant des fuites à la manette - Gratter toute salissure (tartre, film biologique, graisse ) puis éliminer celles-ci en manoeuvrant le robinet à plusieures reprises. - Stériliser à la flamme ou à l aide d un désinfectant approprié (pissette d éthanol). - Refroidir et rincer le robinet : laisser l eau couler juste assez pour assurer que l échantillon ne subit pas d effets résiduels thermiques ou désinfectants. Ne pas fermer le robinet avant prélèvement. - Remplir le flacon dans des conditions aseptiques en laissant un volume d air dans le flacon pour permettre une agitation correcte avant l analyse. - Inscrire sur le flacon et sur la fiche de demande d analyse d eaux toutes les informations concernant le prélèvement (site, lieu, date, heure, éventuels problèmes rencontrés ). Page n 5/9

6 Cas (c) : eau telle qu elle est consommée Dans ce cas il convient de prendre en considération la contamination de l eau par des bactéries provenant de l extérieur du robinet et de tout accessoire ou autre dispositif. Procéder comme pour le cas (b) sans démonter les éventuels insères et accessoires ni désinfecter le robinet avant d effectuer le prélèvement Eaux de dialyses Eau pour dialyse (eau osmosée ) - Préléver les échantillons directement dans les ports d échantillonnage situés dans différentes parties du système de distribution d eau pour dialyse ou de liquide de dialyse. - Les prélèvements d échantillons des fluides pour hémodialyse doivent êtres réalisés en configuration dialyse stable (sans branchement du patient) et recueillis dans des flacons stériles (analyse bactériologique), exempts d endotoxines (recherche d endotoxines) et adaptés aux paramètres analysés (analyse physico-chimique). - Il convient de laisser l eau pour dialyse et le liquide de dialyse s écouler pendant au moins 60s avant de prélever un échantillon. - Avant l échantillonnage, se désinfecter les mains à l alcool et mettre des gants stériles puis désinfecter l intérieur de la sortie par rinçage à l aide d un désinfectant approprié (éthanol à 70% ou isopropanol) ou écouvillonnage à l aide d une gaze stérile ou un coton stérile imbibé d éthanol à 70%. - Laisser en contact le désinfectant pendant au moins 15s puis rincer en laissant sortir au moins 200ml d eau du système ou pendant pendant au moins 60s avant de prélever un échantillon. - Remplir un flacon de 1L (ou 2x500ml) dans des conditions aseptiques en laissant un volume d air dans le flacon pour permettre une agitation correcte avant l analyse. - Inscrire sur le flacon et sur la fiche de demande d analyse d eaux toutes les informations concernant le prélèvement (site, lieu, dénomination point de prélèvement, dénomination/référence appareil, date, heure, éventuels problèmes rencontrés ). Liquide de dialyse (dialysat) - Préléver les échantillons au niveau de la conduite de liquide de dialyse conformément aux instructions d échantillonnage du fabricant de l appareil. - Les prélèvements d échantillons du liquide de dialyse doivent êtres réalisés en configuration dialyse stable (sans branchement du patient) et recueillis dans des flacons stériles (analyse bactériologique), exempts d endotoxines (recherche d endotoxines) et adaptés aux paramètres analysés (analyse physico-chimique). - se désinfecter les mains à l alcool et mettre des gants stériles puis : Echantillonnage avec seringue - désinfecter le port d échantillonnage à l aide d un désinfectant approprié (éthanol à 70% ou isopropanol) et laisser sécher à l air. - aspirer à l aide d une seringue stérile le liquide de dialyse contenu dans le port et la jeter. - prélever aseptiquement ensuite un échantillon de liquide de dialyse avec une nouvelle seringue stérile. - pour les ports d échantillonnage constitués d un septum simple pénétré par une aiguille, il n est pas nécessaire d utiliser une seconde seringue. - transférer ainsi le liquide prélevé (au moins 40ml) avec la seringue dans un flacon en laissant un volume d air dans le flacon pour permettre une agitation correcte avant l analyse. - inscrire sur le flacon et sur la fiche de demande d analyse d eaux toutes les informations concernant le prélèvement (site, lieu, dénomination point de prélèvement, dénomination/référence appareil, date, heure, éventuels problèmes rencontrés ). Page n 6/9

7 Echantillonnage sans seringue - si le générateur d hémodialyse le permet, il est possible de prélever des échantillons de liquide d hémodialyse directement après le dialyseur en débranchant le raccordement d effluent. - prélever aseptiquement un échantillon ponctuel «libre/propre» après avoir laissé le liquide de dialyse circuler pendant 30s à 60s. - prélever au moins 40ml de liquide et remplir le flacon en laissant un volume d air suffisant pour permettre une agitation correcte avant l analyse. - inscrire sur le flacon et sur la fiche de demande d analyse d eaux toutes les informations concernant le prélèvement (site, lieu, dénomination point de prélèvement, dénomination/référence appareil, date, heure, éventuels problèmes rencontrés ) Eaux embouteillées, conteneurs Procéder comme pour les cas (b) et (c) selon l objectif Eaux de source, puits Le principe est le même que pour les eaux de réseau. Selon l objectif du prélèvement (à déterminer avec le client), se référer aux différents cas correspondants et appliquer les mêmes méthodes de prélèvement. Dans le cas où il n est pas présent de système de pompage avec robinet, il est nécessaire d utiliser un système avec porte flacon-lesté ou perche (stérilisés au préalable). Pour l objectif 3 prélever alors directement en plongeant le flacon stérile dans un sceau ou dans le même contenant que celui utilisé par le consommateur. Pour tout prélèvement effectué en profondeur il est nécessaire d utliser des flacons stériles (intérieur et extérieur) et de se désinfecter les mains au préalable ou de proter des gants stériles Eaux de piscine Prélèvement en subsurface - se désinfecter les mains ou mettre des gants stériles. - utiliser une perche de prélèvement et prélever à l opposé de l arrivée d eau. - plonger le flacon à l horizontale (pour éviter le déversement du thiosulfate) entre -10 et - 30cm puis le redresser jusqu à ce que le volume d eau recueilli soit suffisant tout en gardant un volume d air dans le flacon pour permettre une agitation correcte avant l analyse. - inscrire sur le flacon et sur la fiche de demande d analyse d eaux toutes les informations concernant le prélèvement (site, lieu, date, heure, éventuels problèmes rencontrés ). Prélèvement en aval des filtres ou sur tuyau d alimentation Effectuer le prélèvement au robinet comme indiqué dans le cas (a) des eaux de réseau. Prélèvement à l arrivée d eau après traitement Prélever l échantillon à une certaine distance du point d injection, où le résidu de désinfectant est stable. Page n 7/9

8 Pocéder comme indiqué dans le cas (a) des eaux de réseau Transport et conservation Transport Le prélèvement ainsi réalisé doit être acheminé au laboratoire dans les plus brefs délais. Pour les eaux potables, il convient dans l idéal de commencer l analyse le jour même. Durant le transport, les échantillons sont conservés dans une enceinte réfrigérée avec blocs réfrigérants et à l abri des rayonnements solaires. Il est recommandé de séparer les échantillons chauds des échantillons froids. Ne pas mettre de blocs réfrigérants en contact direct avec l échantillon, car cela pourrait entraîner sa congélation. La formation de glace peut entraîner la mort de la majorité des cellules. Seuls les échantillons destinés à l analyse des virus peuvent être conservés à -70 C. NB : Pour les échantillons transportés pendant une durée supérieure à 8h, il est nécessaire de surveiller et d enregistrer la température Conservation Le tableau ci-après, tiré de la norme NF EN ISO :2006, propose des durées et des températures de conservation acceptables pour les échantillons d eau du prélèvement à l analyse. Des critères spécifiques à appliquer ont été déterminés par le laboratoire dans chaque méthode technique. Arrivées au laboratoire et dans l attente d analyses, les eaux sont conservées au réfrigérateur à 5 C ± 3 C. Après analyse, l échantillon est conservé au réfrigérateur 5 C ± 3 C pendant une semaine et en tout cas jusqu au rendu des résultats d analyse. Page n 8/9

9 6. CLASSEMENT ET ARCHIVAGE Cette MT et les documents associés sont archivés selon la PG 12. Page n 9/9