MRI. Microscopie de fluorescence champ plein et confocale 2 jours 1/2 FORMATION. Nicole Lautrédou, MRI-IURC, Montpellier

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Estelle Martine Grenier
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1 MRI FORMATION Microscopie de fluorescence champ plein et confocale 2 jours 1/2 Contacts : Vicky Diakou, pverdin@unvi-montp2.fr, (Plate-forme régionale d imagerie Cellulaire Montpellier RIO Imaging) Nicole Lautrédou, MRI-IURC, Montpellier

2 MRI FORMATION La formation est destinée à un public de 5 personnes (ITA, chercheur ou étudiant). Cette formation est réalisée en partenariat avec la service de formation permanente de l INSERM, et à ce titre les personnels INSERM ou travaillant dans une unité INSERM sont prioritaires. Cette formation est assurée par Mme Nicole Lautrédou (IR2 CNRS), responsable du plateau MRI-IURC, Mrs Sylvain de Rossi (IE2 INSERM) et Julien Cau (IR2 CNRS) responsables du plateau MRI-CRBM.. Les demandes d inscriptions sont à envoyer à Vicky Diakou (pverdin@univ-montp2.fr) en mentionnant ses nom et prénom. Les frais d inscription sont de 192 par personne. Ces frais couvrent l utilisation du matériel de la plate-forme MRI aux tarifs fixés pour les actions de formation par les services financiers du CNRS pour l année Un support de cours relié est fourni. Ces frais d inscription peuvent être : - payés par bon de commande à faxer au : Désignation : Formation Acquisition de niveau 2 Montpellier RIO Imaging Fournisseur : agent comptable secondaire du CNRS, délégation Languedoc Roussillon Référence : FI-Ac-1 PU HT : 48 Quantité de demi-journées : 4 Prix total : 192 HT En cas de prise en charge partielle de ces frais par deux parties, merci de contacter l administrateur de MRI (administrator@mri.cnrs.fr). - payés en équivalent heures de référence (8hr) par débit du compte MRI de la personne formée. Une copie de l ordre de transaction sera envoyée au responsable du compte.

Cette formation est assurée par Mme Nicole Lautrédou (IR2 CNRS), responsable du plateau MRI-IURC, Mrs Sylvain de Rossi (IE2 INSERM) et Julien Cau (IR2 CNRS) responsables du plateau MRI-CRBM.

3 Demi-journée théorie, 9h30-12h, Salle C IGMM Anatomie d'un microscope, théorie MRI Objectifs : maîtriser les principes de la microscopie photonique et ses limites - Introduction : microscope à champ plein (présentation d'un microscope, vue générale de ses composants). - Eclairage (propriétés de la lumière, lampes halogène et mercure, LASERs) - Le tube optique (éclairage de Köhler, interêt) - Condenseur (rôle, diaphragme de champ et d'ouverture) - Les objectifs (caractéristiques principales, grossissement, ouverture numérique, limites de résolution axiale et latérale, diffraction, correction des aberrations) Mélanie Franco, CRBM, Montpellier - Les oculaires (grossissement) - Caméras CCD (fonctionnement résolution, compromis vitesse d acquisition/résolution) - Principe de l épifluorescence - Imagerie en transmission (Contraste de phase, fond noir, contraste interférentiel/dic/nomarski) - Autres configurations en microscopie photonique types de microscopes - microscope à champ plein inversé - microscope confocal ( point par point ou Nipkow/spinning disk) - microscope bi-photonique Mathieu Gabut, IGMM, Montpellier

$(caractéristiques principales, grossissement, ouverture numérique, limites de résolution axiale et latérale, diffraction, correction des aberrations) Mélanie Franco, CRBM, Montpellier - Les oculaires$

Jour 2, 9h30-12h30 et 14h-17h30, MRI-CRBM MRI MRI Microscopie de fluorescence champ plein Objectifs : Connaître la technique d épifluorescence adaptée à un microscope droit à champ plein, être à même

4 Jour 2, 9h30-12h30 et 14h-17h30, MRI-CRBM MRI MRI Microscopie de fluorescence champ plein Objectifs : Connaître la technique d épifluorescence adaptée à un microscope droit à champ plein, être à même de prendre des images 2 et 3D à partir d'échantillons fixés des utilisateurs. - Mise sous tension - Identifier les différents éléments du microscope - Choisir son objectif en fonction de ses besoins, grossissement utile et résolution latérale - Choisir les filtres d'excitation et d'émission, bleed-through - Module acquire du logiciel metamorph (temps d'exposition, binning, mode autoscale, saturation de l'image, encodage de l'image 8 ou 12bits, vitesse de lecture, gain ADC). - Acquisition fleuve (Stream acquisition) - Acquisition 3D, résolution axiale, sous-échantillonage et suréchantillonage Julien Cau, MRI-CRBM, Montpellier Liliana Krasinska, CRBM, Montpellier

- Mise sous tension - Identifier les différents éléments du microscope - Choisir son objectif en fonction de ses besoins, grossissement utile et résolution latérale - Choisir les filtres d'excitation

5 Jour 3, 9h30-12h30 et 14h-17h30, MRI-IURC Microscopie confocale Objectifs : Utiliser un microscope à épifluorescence confocal (LSM510 META). Acquérir des images 2 et 3D à partir d'échantillons fixés (apportés par les utilisateurs). Appréhender les techniques de séparation spectrale, FRAP/FLIP. - Mise sous tension - Identifier les différents éléments du microscope - Comprendre le fonctionnement d un microscope confocal, taille du pinhole, avantage en résolution axiale et latérale. - Detection de l image via les PMT (gain, offset) Loïc Deleyrolle, INM, Montpellier - Compromis vitesse de balayage/qualité de l image, moyennage, résolution. - Comprendre pourquoi le microscope confocal apporte une meilleure résolution latérale (et axiale) s il est bien utilisé - Modes simultanés ou séquentiels (single track/multitrack), avantages et désavantages - Mode spectral (les différents modes, mis en oeuvre sur le LSM510 META) - Mise en oeuvre du photoactivation Geneviève Conéjéro, MRI-Agropolis, Montpellier FRAP/FLIP avec des échantillons - Discussion sur des techniques avancées de fluorométrie (FRET, etc...)

- Mise sous tension - Identifier les différents éléments du microscope - Comprendre le fonctionnement d un microscope confocal, taille du pinhole, avantage en résolution axiale et latérale.

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