IBCP- Service Culture Cell- Règlement Intérieur des laboratoires de culture cellulaire Table des matières I -Liste des laboratoires de culture cellulaire de l IBCP :... 2 II -Conditions requises pour l accès aux pièces de culture cellulaire :... 2 III -Conduite à tenir en cas d incident matériel ou d accident corporel... 2 IV -Recommandations d utilisation de la pièce culture :... 3 V -Entretien des locaux et équipements :... 4 VI -Tri des déchets :... 4 VII -Conduite à tenir en cas de contamination des cultures :... 4 VIII -Règlementation / niveaux de confinement... 5 IX -Annexes :... 6 Ce document sera éliminé lorsque la version suivante sera disponible 1
I -Liste des laboratoires de culture cellulaire de l IBCP : Numéro de la pièce Nom du Téléphone Adresse mail responsable Pièce S04, Sous sol P2+ Bernard Verrier 04 72 72 26 36 bernard.verrier@ibcp.fr Pièce S 30 sous sol P3 Bertrand Duclos 04 72 72 26 89 bertrand.duclos@ibcp.fr bactériologie Pièce R45, Rez de Chaussée Géraldine Aimond et Sandrine 04 72 72 26 92 04 72 72 26 22 g.aimond@ibcp.fr s.magnard@ibcp.fr Magnard Pièce 117 118, 1 er étage Isabelle Grosjean 04 37 65 29 32 i.grosjean@ibcp.fr Pièce 115, 1 er étage Suzana Salcedo 04 72 72 26 27 suzanna.salcedo@ibcp.r Pièce 116-116B, 1 er étage Emeline Groult 04 72 72 26 17 emeline.groult@ibcp.fr Pièce 161 bis, 1 er étage Christophe 04 72 72 26 88 c.grangeasse@ibcp.fr bactériologie Grangeasse Pièce 377, 3 ème étage Patricia Rousselle 04 72 72 26 39 patricia.rousselle@ibcp.fr II -Conditions requises pour l accès aux pièces de culture cellulaire : - Avoir l autorisation de la médecine du travail qui vérifie que la personne ne présente pas de contre-indication médicale. - Se présenter aux responsables des pièces de culture pour obtenir une habilitation. - Suivre le séminaire technique sur la pratique de la culture cellulaire programmé au moment de la journée des nouveaux entrants. - Lire, comprendre et signer le règlement intérieur de la pièce culture (N 117-118) définissant l organisation de travail (gestion des stocks de consommable /entretien et ménage de la pièce / utilisation des Poste de Sécurité Microbiologique (PSM) et autres équipements / Gestion des déchets). Le règlement intérieur engage le manipulateur à respecter les règles d utilisation des pièces de culture en vigueur à l IBCP, le document signé est conservé par le responsable de la pièce. - L habilitation est matérialisée par un badge d accès qui est personnel. - Seules les personnes habilitées peuvent manipuler dans une pièce de culture cellulaire. - Les personnels permanents et non permanents sont sous la responsabilité du chef de leur équipe. - Les stagiaires n ayant pas de badge d accès ne sont pas autorisés à rester seuls en pièce de culture, ils seront donc accompagnés. - Cas particulier des utilisateurs occasionnels : ils seront sous la responsabilité du responsable de la pièce de culture. Ils doivent avoir une habilitation pour leur propre laboratoire de culture cellulaire, et devront signer le règlement intérieur de la pièce culture qu ils souhaitent utiliser de manière occasionnelle. - Jours et Horaires de travail : Lundi, mardi, mercredi, jeudi, vendredi de 8h00 à 19h00, l accès est autorisé exceptionnellement les week end avec accord préalable du responsable de la pièce culture. III -Conduite à tenir en cas d incident matériel ou d accident corporel La procédure en cas d accident corporel est affichée dans la pièce culture. - En cas de coupure ou piqûre : laver aussitôt au savon liquide pendant 3 minutes au moins, rincer soigneusement, désinfecter pendant 15 minutes avec de l alcool 70 C, de la javel diluée au tiers ou du dakin. Ce document sera éliminé lorsque la version suivante sera disponible 2
- En cas de projection dans l œil : laver aussitôt à l eau courante pendant 15 minutes, ne pas enlever les lentilles cornéennes, ne pas utiliser de collyres, consulter un ophtalmologiste en urgence. - En cas de projection sur la peau : laver aussitôt à l eau courante. - Dans tous les cas : consulter le médecin référent dans les 2h qui suivent l accident, faire une déclaration d accident de travail, avertir le responsable des risques biologiques : Géraldine Aimond poste 26-92, ainsi que l ACMO de l IBCP : Perrine Mercier poste 26-95 et la direction de l IBCP. - Pour un incident de type renversement d un liquide potentiellement dangereux sur le plan de travail du PSM : Couvrir le liquide d un papier absorbant. Déterminer les priorités. Refermer les tubes et flacons. Essuyer en entourant la zone d épandage de l extérieur vers l intérieur. Décontaminer en fonction du danger. Par exemple : Nettoyer d abord avec un agent mouillant ou détergent puis ensuite avec un désinfectant (de l alcool 70 C, 15min ou de la javel 2 de Chlore, 15 min ou Ecodiol). Tous les déchets de nettoyage partent ensuite dans les poubelles jaunes. IV -Recommandations d utilisation de la pièce culture : - Entrée dans la pièce Respecter le planning des réservations Se laver les mains (voir annexe n 2) Mettre une blouse pour culture cellulaire et des gants - Microscope Le premier utilisateur allume le microscope le matin et le dernier utilisateur l éteint le soir. - PSM Se laver les mains avant et après le travail Mise en marche du PSM 5min avant de travailler Prévoir un protocole d évacuation des déchets avant de commencer à travailler. Organiser son plan de travail, minimiser la production d aérosols. Ne pas obturer les grilles de reprise d air. Ne pas encombrer plus de 40% de la zone de travail. Vider et nettoyer le plan de travail après utilisation. - Centrifugeuse : Equilibrer correctement les tubes 2 à 2 et utiliser des tubes bien fermés afin de limiter la production d aérosol. - Incubateurs Respecter la propreté de l incubateur Annoter vos flacons de culture en identifiant la culture, le pseudo du manipulateur et une date. - Bain marie Surveiller la propreté de l eau. - Réfrigérateur-congélateur Annoter vos flacons de culture en indiquant les suppléments, la date d ouverture et votre pseudo. Il est conseillé de travailler avec sa bouteille de milieu personnelle. - Poubelles Lorsqu elles sont pleines, fermer les poubelles jaunes hermétiquement, annoter avec «le numéro de la pièce + IBCP» et les descendre dans le local déchets bio au sous sol. Lorsqu il est plein, fermer le sac plastique noir contenant les déchets banals (emballage, papier essuie tout...) et le poser dans le couloir. - Les stocks de consommables Maintenir les stocks de consommables communs à la pièce et prévenir le responsable si un matériel commun doit être commandé. - Les ressources biologiques manipulées Ce document sera éliminé lorsque la version suivante sera disponible 3
Les cultures cellulaires seront manipulées en fonction de leur niveau de danger et du niveau de danger des expériences réalisées. Les manipulations de culture cellulaire doivent respecter la règlementation du domaine. La traçabilité des ressources biologiques doit être documentée et accessible aux manipulateurs. Les manipulations doivent faire l objet d un compte rendu dans le cahier de laboratoire ou autre support. - Respecter le mode de fonctionnement de la pièce culture Se rappeler que «la communication et la courtoisie sont les piliers du bon fonctionnement d un laboratoire de culture cellulaire multi-utilisateurs». Tout manquement aux respects des règles établies entrainera l exclusion et le retrait de l accès à la pièce de culture (la décision est prise en concertation par le responsable de la pièce culture et le responsable d équipe après en avoir informé la direction de l IBCP). Inscrivez dans le cahier de suivi de la pièce les évènements comme : les séances ménage, les épisodes de contamination, la date et résultat du contrôle annuel des PSM, la révision des pipetmans. V -Entretien des locaux et équipements : La société «ONET» lave le sol des pièces culture (à l exception de la salle de culture du sous sol) tous les 1 ers vendredi de chaque mois. Chaque responsable de pièce culture définit et rédige les instructions concernant l entretien de la pièce et gère le planning des séances ménage assurées à tour de rôle par les utilisateurs. En ce qui concerne les pièces 117-118 : Les équipements de la pièce sont entretenus selon la procédure P_GEI_laboratoire de culture cellulaire. Cette procédure est disponible dans la pièce de culture et dans la base de données Labcollector VI -Tri des déchets : Le tri des déchets dépendant de la nature et de la quantité de déchets générés par le manipulateur : solide ou liquide, dangereux, Organisme Génétiquement Modifié (OGM), toxiques, chimiques Le manipulateur doit connaitre la nature des déchets et la manière de les gérer avant de commencer à les produire; Et contacter son responsable d équipe ou le responsable de la pièce culture ou l ACMO en cas de doute. - Les poubelles «blanches» équipées d un sac plastique noir sont prévues pour accueillir les déchets non souillés par les expériences ou déchets banals : emballages plastiques, papier - Les poubelles «jaunes» en plastique sont destinées à éliminer les Déchets d Activités de Soin à Risque Infectieux (DASRI) solides tel que pipettes, flacons, tubes, tip, gants,... - Les liquides utilisés pour la culture sont inactivés par un traitement javel 2 de Chlore pendant 12 heures (eau de javel est entre 9 et 10 de Chlore donc la diluer au 1/5 ème ), puis jetés à l évier (Enr_utilisation javel_2012) ou bien traités par la chaleur de l autoclave puis jetés à l évier. VII -Conduite à tenir en cas de contamination des cultures : En cas de contamination isolée par des moisissures, des levures, des bactéries ou des mycoplasmes: traiter, inactiver puis jeter vos cultures sans ouvrir les boites dans la pièce de culture et signaler le problème dans le cahier de la pièce culture en précisant : date, nom de la culture, nom de l opérateur et mesures prises. Ce document sera éliminé lorsque la version suivante sera disponible 4
Dans le cas d une contamination sur une culture très précieuse il est éventuellement possible de traiter la culture à condition de pouvoir réaliser le traitement dans un espace de quarantaine. En cas de contamination récurrente le responsable de la pièce prendra des mesures collectives par exemple : nettoyage exceptionnel + revoir les méthodes de travail. VIII -Règlementation / niveaux de confinement Les manipulations en culture cellulaire sont encadrées par des règlementations, vous pouvez consulter sur internet les documents suivants : - Document BPL en culture cellulaire du CNRS ou de l université. - Code de la santé publique, Article L1245-2, modifié par la Loi N 2004-800 du 6 aout 2004 art. 12 JORF 7 aout 2004. Pour l obtention des consentements de patients. - Autorisation de conservation et préparation d éléments du corps humain : COnservation D Eléments du Corps Humain. (CODECOH) - Agrément OGM - Règlementation Micro-Organismes et Toxine (MOT) - Transport des cellules - Règlementation sur l utilisation de l azote liquide - Cahier de prévention sur les risques biologiques du CNRS : http://www.dgdr.cnrs.fr/cnps/guides/risquebio.htm Nom et Prénom du manipulateur : Fonction : Date et Signature : Nom et Prénom du responsable d équipe : Date et Signature : Nom et Prénom du responsable de la pièce culture qui habilite le manipulateur : Date et Signature : Ce document sera éliminé lorsque la version suivante sera disponible 5
IX -Annexes : - 1-Qui fait quoi en culture cellulaire à l IBCP? Numéro de la pièce Pièce S04, Sous sol P2+ Pièce S30, sous sol P3 Pièce R45, Rez de Chaussée Pièce 117 118, 1 er étage Pièce 116-116B, 1 er étage Pièce 115, 1 er étage Pièce 377, 3 ème étage Activités/ Techniques maitrisées Sang humain, Nanoparticules, culture de Leishmania, production de virus MVA, culture primaire de kératinocytes, culture de lignées cellulaires Brucella (MOT) Fibroblastes humains, hypoxie, culture cellules d insectes/baculovirus, culture de lignées cellulaires Lignées cellulaires, contrôle qualité, décontamination, mise au point de protocole. Culture primaire chondrocytes, transfection, hypoxie, production de protéines jusqu à 1L de culture, fibroblastes, lignées cellulaires Culture de cellules eucaryotes et de bactéries Culture en l absence d antibiotique, Culture primaire fibroblastes et kératinocytes, lignées cellulaires, marquage métabolique (radioactivité) - 2-Lavage hygiénique des mains Quand? Avant de commencer à travailler en pièce culture et avant de sortir du laboratoire de culture cellulaire. Savon? Une partie de la molécule de savon est lipophile = elle s accroche au sébum. L autre partie est hydrophile = avec un bon rinçage, l eau entraine le savon accroché au sébum porteur de micro-organismes. Comment? Bien mouiller les mains et les poignets, prendre une dose de savon, frotter les mains et les poignets au moins 30 secondes, rincer abondamment pour éliminer le savon, sécher soigneusement mains et poignets avec un essuie-mains à usage unique, fermer le robinet avec l'essuie-mains, jeter ensuite ce dernier dans la poubelle. - 3-Situation de la pièce et plan de son aménagement Ce document sera éliminé lorsque la version suivante sera disponible 6
Situation du laboratoire de culture cellulaire au 1 er étage, pièce 117 et 118 + 1 sas + 1 placard Ce document sera éliminé lorsque la version suivante sera disponible 7
Ne pas oublier qu une cellule en culture : «Se nourrit» donc elle consomme les constituants nutritifs du milieu et l'épuise. «Digère» donc elle rejette des déchets toxiques qui s'accumulent dans le milieu. «Respire» et donc effectue des échanges gazeux O2-CO2 «Si adhère au support» peut arrêter de se multiplier à confluence. «Se multiplie exponentiellement» = consomme exponentiellement. «Est sensible au ph» sans être capable d'assurer l'équilibre du ph du milieu. «Est fragile» donc à manipuler avec précaution. «Est une particule» donc sédimente spontanément. «Préfère en générale la multitude à la solitude» mais peut être clonée «Se déplace» même si elle adhère. (Denis Gerlier, version initiale ~1988, révisée 03/2010) Document créé par Date Validé par Isabelle Grosjean et Marielle Pasdeloup 2012-07-19 Christophe Geourjon Document modifié par Date Validé par Changements Géraldine Aimond 2012-08-29 Enumération des pièces cultures selon le nouvel agencement. Marielle Pasdeloup 2012-09-11 Précisions traitement des déchets liquides et contaminations. Ce document sera éliminé lorsque la version suivante sera disponible 8