PNF-02-P EUTHANASIE DES POISSONS Justification : Cette procédure normalisée de fonctionnement doit être connue de toute personne qui effectue l euthanasie de poissons dans le cadre d études sur le terrain ou en laboratoire. Autorité : Les personnes (étudiants, techniciens, biologistes, chercheurs) effectueront l euthanasie des poissons sous la supervision directe ou indirecte du chercheur, de l auxiliaire de recherche ou du chargé de projet. Formation préalable des opérateurs : Bonne connaissance de : l anatomie, de la physiologie, du comportement et des besoins de l espèce visée méthodes de contention physiques et chimiques si nécessaire de l'action et des règlements associés aux produits utilisés pour la contention chimique (anesthésiologie/pharmalogie/règlements sur les produits contrôlés). la manipulation des poissons vivants santé et sécurité : o Prévention des blessures o Notions de biosécurité (prévention des morsures/blessures, zoonoses, désinfection et asepsie) o Si applicable (travaux sur le terrain) : formation sur les risques inhérents au travail en mer (navire/petites embarcations) o Si applicable : SIMDUT Principe directeur du CCPA: [ ] On doit disposer des connaissances et du matériel permettant la mise en œuvre d une technique appropriée pour l espèce concernée. On doit également tenter de choisir les techniques qui interfèrent le moins possible sur la nécropsie ou sur l analyse subséquente (CCPA, lignes directrices sur le soin et l utilisation des animaux sauvages, # 43). Autres principes directeurs du CCPA concernant le soin et l utilisation des animaux sauvages Principes directeurs généraux : # 1, 2, 3, 6, 10, 11 et 12 Principes directeurs spécifiques : # 43, 44 Autres principes directeurs du CCPA concernant le soin et l utilisation des poissons en recherche, en enseignement et dans les tests. Principes directeurs généraux : # 1, 2, 3, 4, 5, Principes directeurs spécifiques : # 112 et 113
Notes sur les méthodes d euthanasie Le but de cette procédure est de s assurer que la mise à mort des poissons, pour quelque raison que ce soit, sera effectuée de façon la plus décente et la plus respectueuse possible pour le poisson. Toutes les méthodes d euthanasie utilisées doivent résulter en une perte de conscience rapide et irréversible qui durera jusqu à la mort. Tout le personnel affecté à ces opérations doit savoir comment euthanasier un poisson de façon la plus humaine possible. La manipulation des poissons doit se faire de façon respectueuse et sans causer de stress. Les difficultés propres au travail de terrain ne réduisent en rien l obligation éthique de la personne responsable à réduire autant que possible la douleur et la détresse éprouvée par l animal au moment de l euthanasie. L un des principaux critères d acceptation d une méthode d euthanasie du point de vue éthique est l inhibition précoce du système nerveux central, qui assure une insensibilité immédiate à la douleur, et doit être suivi d un arrêt cardiaque et respiratoire. Méthodes d euthanasie acceptées 1- Surdose d anesthésique 2- Coup sur la tête (hémorragie cérébrale) suivi de la décapitation 3- Section de la moelle épinière ou décapitation ou décérébration 4- Congélation immédiate pour les très jeunes stades Une anesthésie préalable à la section de la moelle épinière demeure la méthode la plus rapide et la moins susceptible d engendrer un stress inutile. Les méthodes physiques permettent une action rapide avec un niveau de stress réduit. Elles représentent une solution pratique lorsqu il faut euthanasier des poissons de tailles diverses sur le terrain et elles évitent l introduction de substances dans la chaîne alimentaire ou l environnement. Matériel PNF-03 : nettoyage et désinfection du matériel et le matériel qui s y rapporte PNF-04 : manipulation et contention et le matériel qui s y rapporte PNF-05 : collecte et disposition des poissons morts et le matériel qui s y rapporte PNF-01 : anesthésie d un poisson et le matériel qui s y rapporte si nécessaire Puise ou filet sans nœud adapté à la taille des individus manipulés Surface de travail propre et non abrasive Bac de transport aux parois lisses et sans danger d abrasion pour le poisson si le transfert du poisson de son milieu de prélèvement jusqu au bassin d anesthésie ou surface de travail prend plus de 30 secondes
Chronomètre (si nécessaire) Vêtements et matériel de protection Papiers essuie-tout Savon désinfectant Selon la méthode appliquée : o Anesthésiant et bassin d anesthésie aux parois lisses et sans danger d abrasion pour le poisson, équipé d un système de bullage et d un système de maintien de température. o Scalpel ou couteau bien aiguisé o Ciseaux o Gourdin Note : les gants et les vêtements de protection doivent être portés en tout temps durant l euthanasie des poissons ainsi que les lunettes protectrices si des produits chimiques sont utilisés. 1) Surdose d anesthésiant Nettoyer et désinfecter les bassins et le matériel qui seront utilisés (PNF-03) (si nécessaire dans le cadre de l expérience) Déterminer en fonction de l espèce, de la taille et de la condition du poisson la dose d anesthésiant nécessaire pour engendrer une mort rapide et sans douleur. Espèce Produit utilisé Concentration Ex. poisson TMS TM 200 ppm Préparer le bassin d anesthésie et s assurer que les paramètres de l eau (température, salinité et oxygène dissous) sont similaires à ceux du milieu d où provient le poisson (bassin d élevage ou milieu naturel) et que ces derniers sont stables. Si un bac de transport est utilisé pour transporter le poisson jusqu au bassin d anesthésie, s assurer que les paramètres de l eau sont similaires à ceux du milieu d où provient le poisson (bassin d élevage, milieu naturel) Si possible, mettre à jeun les poissons 18 à 72 heures avant l euthanasie Lire et s assurer de comprendre tous les PNF utilisés pour cette manipulation principalement le PNF-01sur l anesthésie des poissons. S assurer que tout le matériel est prêt
Procédure Appliquer le protocole d anesthésie (PNF 01) en appliquant la dose létale en une seule fois Le poisson est gardé dans le bassin d anesthésie jusqu à l arrêt du mouvement des opercules (arrêt respiratoire). Si nécessaire, notez le temps minimal requis pour affiner la méthode ainsi que l espèce, les paramètres de l eau et les produits utilisés. S il s agit d un protocole nouveau, faire des essais sur un petit nombre d individus auparavant. Le poisson est sorti du bassin d anesthésie et une des méthodes physiques décrites ciaprès est appliquée (coup sur la tête et décérébration, section de la moelle épinière, décapitation, exsanguination). Si, pour des raisons expérimentales, aucune méthode physique ne peut être appliquée, arrêter le système d oxygénation (bullage) du bassin d anesthésie et laisser le poisson dans le bassin d anesthésie pendant au moins 5 minutes après l arrêt de la respiration. Disposer des carcasses (PNF-05) Nettoyer et désinfecter les surfaces et le matériel ayant servi à l euthanasie (PNF-03) Se laver les mains Disposition du matériel à usage unique et des produits réglementés : Doit être effectué selon les règlements en vigueur à l UQAR. Les produits pharmaceutiques périmés doivent être récupérés et éliminés dans des contenants spécialement prévus à cet effet et selon les normes en vigueur à l UQAR 2) Coup sur la tête (traumatisme crânien) Avant d appliquer cette méthode, on doit s assurer qu elle peut être appliquée avec facilité et succès sur l espèce à euthanasier. Cette méthode est acceptable dans la mesure où la mort du poisson est provoquée par un seul coup sur le crâne afin de minimiser la souffrance et la détresse et si elle est suivie d une décérébration. Si pour certaines raisons, un doute survient quant à la réussite de cette technique, il faut utiliser une méthode alternative. Nettoyer et désinfecter le matériel utilisé (PNF 03) Lire et s assurer de comprendre tous les PNF utilisés pour cette manipulation S assurer que tout le matériel nécessaire est prêt
Procédure Appliquer le protocole de contention physique et chimique si nécessaire (PNF 04) Sortir le poisson de l eau et le maintenir fermement par la queue ou à l aide d un filet sans nœud Assener immédiatement un coup dur et franc à la tête. Le coup doit être porté sur le dessus de la tête entre les deux yeux (sauf pour les poissons plats). Le coup doit être sec et rapide et assez puissant pour produire une hémorragie cérébrale. Détruire physiquement le cerveau ou décérébrer le poisson pour s assurer de l arrêt des fonctions cérébrales de manière définitive. Disposer des carcasses (PNF-05) Nettoyer et désinfecter les surfaces et le matériel ayant servi à l euthanasie (PNF-03) Se laver les mains 3) Section de la moelle épinière ou décapitation Le poisson doit être anesthésié ou assommé avant d effectuer cette méthode d euthanasie. Cette méthode s applique à des petits poissons. Procédure Nettoyer et désinfecter les bassins et le matériel qui seront utilisés (PNF-03) (si nécessaire dans le cadre de l expérience) Préparer un bassin d anesthésie et s assurer que les paramètres de l eau (température, salinité et oxygène dissout) sont similaires à ceux du milieu d où provient le poisson (bassin d élevage, milieu naturel) et que ces derniers sont stables. Si un bac de transport est utilisé pour transporter le poisson jusqu au bac d anesthésie ou surface de travail, s assurer que les paramètres de l eau sont similaires à celles du milieu d où provient le poisson (bassin d élevage, milieu naturel). Lire et s assurer de comprendre tous les PNF utilisés pour cette manipulation S assurer que tout le matériel est prêt Une fois le poisson anesthésié ou assommé, sectionner d un seul coup la moelle épinière en arrière de la tête à l aide d un scalpel ou d un couteau. L incision se fait à la jonction du crâne et de la première vertèbre cervicale. Dans le cas d une décapitation, la tête du poisson est complètement détachée du corps. Disposer des carcasses (PNF-05)
Nettoyer et désinfecter les surfaces et le matériel ayant servi à l euthanasie (PNF-03) Se laver les mains avec un désinfectant 4) Congélation immédiate pour de très jeunes stades de développement À utiliser uniquement pour de très petits organismes et pour des stades de développement pour lesquels il est impossible de mesurer le niveau de stress (par ex. larves de plies) ou de mesurer l effet physiologique d un anesthésique. Procédure S assurer que tout le matériel est prêt Utiliser de l azote liquide pour une congélation la plus rapide possible Prélever les larves à l aide d une pipette dans les bassins d élevage et placer dans un contenant propre Prélever les larves une à une avec une pipette Pasteur et les transférer dans de l eau salée stérile à la température du milieu d élevage pour rinçage des larves Transférer les larves au fond d un tube à cryocongélation avec un peu d eau Plonger le tube à cryocongélation dans un contenant d azote liquide avec dispositif de récupération des échantillons adéquat Se laver les mains avec un désinfectant Approuvées par la résolution UQAR-CPA-33-67 du 17 avril 2008 Modifiée par la résolution UQAR-CPA-56-122 du 20 février 2014