TD N 1. Matériels Indispensables au Laboratoire de Bactériologie

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1 TD N 1 Matériels Indispensables au Laboratoire de Bactériologie

2 Introduction La microbiologie est la science qui étudie les microorganismes. soit: Certains eucaryotes Champignons et certaines algues. Protozoaires (êtres unicellulaires animaux). Tous les procaryotes Cyanophycées ou algues bleues. Bactéries. Les Virus Les virus ne sont pas des micro-organismes car ils ne sont pas autonomes, ils ne peuvent pas se reproduire sans détourner la machinerie cellulaire d'un autre individu.

3 La microscopie La microscopie est un ensemble de techniques permettant d'obtenir une image des structures biologiques. Le microscope optique Le microscope électronique

4 1. La microscopie optique Le premier microscope fut sans doute fabriqué par Hans et Zacharias Janssen, deux fabricants de lentilles néerlandais, en 1590, mais le modèle final fut inventé par Antoine van Leeuwenhœk en 1664, puis fut amélioré par Christian Huygens. La microscopie optique regroupe: Le microscope à fond clair Le microscope à fond noir Le microscope à contraste de phase Le microscope à fluorescence

5 1-1. La microscopie à fond clair Utilise des rayons lumineux. Permet le grossissement de fois. Épaisseur de coupe ( 1-5 µm). Observation vitale et colorée.

6 Bactérie Microscope à fond clair Paramécie

7 1-2. La microscopie en contraste de phase Cette technique permet d'observer les cellules sans préparation ni coloration dans leur milieu d'origine. A l observation, on voit une image en noir et blanc où les différentes structures apparaissent bordées de blanc d un côté et de noir de l autre. Culture cellulaire

8 1-3. La microscopie à fond noir Utilise les rayons lumineux dans un fond noir. Utilisé pour les éléments trop transparents. Les éléments observés apparaissent très brillants ( les flagelles, les fibres ).

9 Bulles d'air dans l'eau Le microscope à fond noir

10 1-4. La Microscopie à fluorescence Consiste à utiliser coloration fluorescente. colorants très utilisés sont : une Deux la rhodamine (émet une lumière rouge) et la fluorescéine (lumière verte).

11 Culture cellulaire Le microscope à fluorescence Legionella pneumophila

12 2. La microscopie électronique Il existe deux variantes de la microscopie électronique : La microscopie à transmission La microscopie à balayage

13 Le microscope électronique à transmission Bactériophage

14 Le microscope électronique à balayage Fournis des images en 3D Bifidobacterium adolescentis

15 PSM Poste de sécurité microbiologique

16 Définition Un poste de sécurité microbiologique (PSM) est une enceinte destinée à assurer la protection de l'utilisateur et de l'environnement contre les dangers liés aux aérosols dans la manipulation de micro-organismes dangereux, l'air rejeté dans l'atmosphère étant filtré. Selon la nature de la protection Il existe trois (03 ) types de de PSM TYPE I TYPE II TYPE III

17 SCHEMA DE PRINCIPE D UN PSM TYPE II

18 PSM TYPE I Selon la nature de la protection de : manipulateur: 1.Par la création d un flux d air entrant dans l enceinte De l environnement 2. Par filtration de l air de l enceinte à travers un filtre à très haute efficacité(hepa) Du produit manipulé Non protégé puisqu on contacte avec l air du laboratoire

19 PSM :TYPE II Selon la nature de la protection: Du manipulateur Par une aspiration créée au bord avant du plan de travail (barrière immatérielle entre lui et le produit manipulé ). De l environnement Par filtration de l air de l enceinte à travers un filtre à très haute efficacité. Du produit manipulé Par un flux d air descendant préalablement filtré à travers un filtre à très haute efficacité

20 PSM TYPE III Selon la nature de la protection manipulateur Par une paroi matérielle ( le produit et manipulé par l intermédiaire de manchons souples terminés par des gants l environnement Par filtration de l air de l enceinte à travers deux filtres en série à très haute efficacité Du produit manipulé Par absence de contact avec l air du laboratoire

21 Matériels de Biologie Moléculaire

22 Thermocycleur Le thermocycleur est composé de : 1. Bloc chauffant 2. Clavier pour la programmation des cycles. Utilisation : Amplification de l ADN

23 Cuve pour électrophorèse La cuve vertical ou horizontal d électrophorèse est Composée de : 1- Générateur 2- Electrodes

24 SCAN GEL UTILISATION : Pour visualiser le gel sous les rayon ultra violet. Déterminer le nombre et la taille des bandes d ADN.

25

26 Pipette graduées Pipette jaugées Pipette pasteur

27 Cristallisoir Flacon Boite de pétri Entonnoir Dessiccateur Tube à essai

28 Ballon Erlenmeyer Verre à pied Becher Éprouvette Fiole