- Page 1 sur 9 1 O B J E T Cette instruction décrit les différentes étapes pour réaliser les prélèvements bactériologiques, au sein du laboratoire. 2 D O M A I N E D A P P L I C A T I O N. Ces prélèvements ont pour but le recueil du matériel, en vue d un examen bactériologique. 3 D O C U M E N T S R E F E R E N C E E T A N N E X E S Documentation externe : Remic Bactériologie médicale Techniques usuelles Documents associés : Renseignements pré-analytiques pour examens bactériologiques : MU-EN-PAACC-003 Norme ISO 15189. Manuel Qualité du laboratoire. GBEA relatif à la bonne exécution des analyses de biologie médicale 4 C O N T E N U 4.1 Responsabilité : Les prélèvements sont réalisés par le biologiste. 4.2 Déroulement 4.2.1 Accueil du patient Dans la salle de prélèvement adaptée, porte verrouillée pour prélèvements gynécologiques. Dialogue avec le patient, remplir la fiche de renseignements pré-analytiques, compléter le feuille de travail «Prélèvement bactério» Réaliser le prélèvement avant le début d un traitement antibiotique. Répondre aux questions, renseigner le délai de rendu du résultat 4.2.2 Matériel Gants en latex à usage unique, pour le préleveur. Poubelle avec sac «DASRI» pour les autres déchets. Copie valide au : 6/3/2018 - Imprimée par GALLO Valérie - Ref : MU-IN-PAPVT-008-
- Page 2 sur 9 Nature du prélèvement Matériel utilisé Sondage urinaire chez la Compresse de coton +Dakin ou lingette femme Sonde vésicale stérile à usage unique (n 8 en standard, n 6 plus fine si besoin). Flacon stérile «ECBU» identifié avec l étiquette du dossier. Prélèvement vaginal 1 spéculum usage unique 1 écouvillon avec milieux de transport (ESWABécouvillon «régular»)* Prélèvement urétral 1 écouvillon fin avec mileu de transport (ESWABécouvillon «minitip»)* Chlamydiae par PCR 1 écouvillon spécifique fournis par Biomnis Mycoplasme 1 écouvillon tige plastique ou 1 écouvillon spécifique avec milieu de transport (UTM)* Prélèvements ORL 2 écouvillons, classiques ou fins Ou 1 écouvillon avec milieu de transport (ESWAB- «régular» ou «minitip»)* 1 spécifique «Strepto A» si TDR Eau distillée stérile Prélèvement oculaire 2 écouvillons fins 1 écouvillon fin avec milieu de transport (ESWAB- «minitip»)* + si besoin : 1 écouvillon spécifique chlamydiae 1 écouvillon + milieu de transport spécifique virus 2 lames microscope Prélèvement de pus 2 écouvillons classiques ou 1 écouvillon avec milieu de transport (ESWAB «régular»)* Sérum physiologique stérile *Si le prélèvement est réalisé sur le site technique (Laboratoire du Breuil) les écouvillons avec milieux de transport peuvent être remplacés par des écouvillons secs, dans ce cas le prélèvement doit être transmis à la technique sans délais. 4.2.3 Mode opératoire : Se laver soigneusement les mains avec un savon antiseptique. Mettre des gants à usage unique Copie valide au : 6/3/2018 - Imprimée par GALLO Valérie - Ref : MU-IN-PAPVT-008-
- Page 3 sur 9 4.2.3.1 Sondage urinaire chez la femme : Les premières urines du matin (pas nécessairement à jeun). Dans la journée à distance de 3 ou 4 heures d une miction précédente si possible. Faire une toilette soigneuse avec une lingette. Chez la femme, de la vulve, des grandes et des petites lèvres en les écartant du méat urinaire; et d avant en arrière. Introduire délicatement la sonde (coté le plus fin) dans le méat urétéral, en maintenant le flacon stérile ouvert à l autre extrémité de la sonde, faire progresser la sonde le long de la voie urinaire jusqu à ce que l urine s écoule dans le flacon (l extrémité de la sonde à alors atteint la vessie). Lorsque le flacon est plein, retirer doucement la sonde. Refermer le flacon avec précaution. 4.2.3.2 Prélèvement génitaux chez la femme : Eviter toute toilette intime, tout traitement local (savon, crème, gel), et tout rapport sexuel dans les 24h précédant l examen. Sauf avis contraire du prescripteur éviter la période menstruelle (modification de la flore) Prélèvement avant ou à distance de tout traitement antibiotique local ou général (> 5 jrs). Patiente en position gynécologique. La nature du prélèvement sera déterminée par le diagnostic clinique et l examen du biologiste à la recherche de signes d inflammation, d ulcérations ou de pustules. 4.2.3.2.1. Prélèvement vulvaire : Chez la petite fille, ou lors de lésions vulvaires. Prélever les leucorrhées sur 2 écouvillons. Frotter sur les lésions inflammatoires. 4.2.3.2.2. Prélèvement vaginal : Mise en place du spéculum : La taille du spéculum sera choisie en fonction de l âge et de la parité de la femme. Maintenir les petites lèvres écartées avec les 2 doigts d une main. En évitant la zone sous urétrale et le clitoris, introduire le spéculum fermé soit perpendiculairement à l axe de la vulve directement dans le plan de la cavité vaginale, soit parallèlement à l axe de la vulve en tournant de 90 tout en l enfonçant pour le ramener dans le plan de la cavité vaginale. Après l introduction sur 5 à 6 cm l ouverture légère permet un contrôle visuel de sa progression vers le sacrum selon un axe de 45 (/plan de la table). Copie valide au : 6/3/2018 - Imprimée par GALLO Valérie - Ref : MU-IN-PAPVT-008-
- Page 4 sur 9 Dès visualisation du col, on écarte avec la vis les 2 valves qui se placent l une dans le cul de sac antérieur, l autre dans le cul de sac postérieur, exposant correctement le col. On prélève là où la femme se plaint, sur les lésions observées, ou les sécrétions anormales. Charger au maximum les écouvillons. Cas particulier de la femme enceinte : Recherche systématique avant l accouchement de Strepto. agalactiae, Ne pas utiliser de spéculum pour réaliser le prélèvement. En cas d antécédents ou de menace d accouchement prématuré ou de rupture des membranes : Ecouvillonner la paroi vaginale pour la recherche de vaginose ou d une vaginite. 4.2.3.2.3. Prélèvement au niveau du col utérin : Pour la recherche de Chlamydiae trachomatis, Gonocoques et Mycoplasmes Nettoyer le col avec un écouvillon. Introduire un nouvel écouvillon stérile et par frottement léger et prolongé on ramène de la glaire cervicale et des cellules endo-cervicales. Prélever un écouvillon spécifique pour chaque recherche. 4.2.3.2.4. Prélèvement urétral : En enlevant le spéculum, il arrive qu une goutte de pus s écoule au niveau du méat urétral, elle est recueillie sur un écouvillon pour recherche de Chlamydiae trachomatis, Gonocoques et Mycoplasmes Le prélèvement dans le canal urétral est réalisé en introduisant sur 1 cm un petit écouvillon adapté au germe recherché. Ce prélèvement peut être remplacé par un prélèvement d urines. La patiente ne doit pas avoir uriné depuis plus de 2 heures, recueillir les 10 à 20 premiers ml de la miction. 4.2.3.2.5. Prélèvement au niveau d une ulcération génitale : Après repérage de l ulcération on prélève d abord par écouvillonnage pour les germes courants (Strepto pyogènes, Staph auréus, levures) Puis par grattage de la base et des bords de l ulcère, après avoir débarrassé la lésion des tissus nécrosés on recueille les sérosités qui apparaissent pour les recherches : De Tréponéma pallidum (syphilis) D herpès simplex de type 1 ou 2 Haemophilus ducreyi (chancre mou), prélever la base de l ulcère en évitant le pus Chlamydiae trachomatis (lymphogranulomatose vénérienne) Klebsiella granulomatis (Donovanose) Copie valide au : 6/3/2018 - Imprimée par GALLO Valérie - Ref : MU-IN-PAPVT-008-
- Page 5 sur 9 4.2.3.3 Prélèvement génitaux chez l homme : Le prélèvement doit être réalisé le matin, avant toute toilette. Prélèvement avant ou à distance de tout traitement antibiotique local ou général. (> 5 jrs) Patient installé confortablement, position semi-allongé. La nature du prélèvement sera déterminée par le diagnostic clinique et l examen du biologiste à la recherche de signes d inflammations, d ulcérations ou de pustules. 4.2.3.3.1. Prélèvement urétral : En cas d écoulement recueillir la goutte sur une lame pour l ED. Prélever avec des écouvillons fins. 1 er écouvillon en coton fin, introduit sur 1 cm pour la recherche des germes standard et la réalisation de l ED. Le 2 ème écouvillon, en alginate, introduit sur 2 à 3 cm en effectuant un raclage léger permettant le recueil des cellules pour la recherche des mycoplasmes. Le 3 ème écouvillon spécifique Chlamydiae introduit sur 2 à 3 cm. Les Chlamydiaes et les Mycoplasmes peuvent être recherchés sur le 1 er jet d urines, 10 à 20ml d urines de la nuit ou au moins 2h après la dernière miction, sans toilette, ni désinfection préalable. 4.2.3.3.2. Prélèvement au niveau d une ulcération : Après repérage de l ulcération on prélève d abord par écouvillonnage pour les germes courants ( Strepto pyogènes, Staph auréus, levures) Puis par grattage de la base et des bords de l ulcère, après avoir débarrassé la lésion des tissus nécrosés on recueille les sérosités qui apparaissent pour les recherches : De Tréponéma pallidum (syphilis) D herpès simplex de type 1 ou 2 Haemophilus ducreyi (chancre mou), prélever la base de l ulcère en évitant le pus Chlamydiae trachomatis (lymphogranulomatose vénérienne) Klebsiella granulomatis (Donovanose) 4.2.3.4 Prélèvements de la sphère oropharyngée: Avant toute antibiothérapie locale ou générale 4.2.3.4.1. Prélèvement de gorge : Copie valide au : 6/3/2018 - Imprimée par GALLO Valérie - Ref : MU-IN-PAPVT-008-
- Page 6 sur 9 Emission du son «Â» par le patient pour diminuer le réflexe nauséeux. Il peut être utile d abaisser la langue pour dégager le pharynx et éviter tout contact salivaire. Ecouvillonner les amygdales (ou l amygdale atteinte en cas d amygdalite unilatérale) Ou, en leur absence, les piliers du voile du palais. Faire 2 écouvillons. En présence d ulcération ou d exsudat prélever à leur niveau Si suspicion de diphtérie, faire le prélèvement sur la périphérie ou sous les fausses membranes. Recherche rapide de Streptocoque A ou «TDR». Prélever de la même manière 2 écouvillons : 1 spécifique fournit dans le kit commercial, 1 second classique pour l éventuelle mise en culture en cas de recherche négative. 4.2.3.4.2. Prélèvement buccal et langue : Prélever 2 écouvillons au niveau de la langue, du palais, et de la face interne des joues. 4.2.3.4.3. Prélèvement auriculaire : Prélever 2 écouvillons fins par rotations légères dans la partie externe du conduit auditif. En cas d otite externe, éliminer les débris et les croûtes présents avec un 1 er écouvillon humide avant les 2 écouvillonnages. 4.2.3.4.4. Prélèvements nasal et rhinopharyngé : Ecouvillonnage soigneux du tiers inférieur des 2 narines avec le même écouvillon, qui peut être humidifié avec de l eau distillée stérile. Faire 2 écouvillons. 4.2.3.5 Prélèvements oculaires : Avant toute antibiothérapie locale ou générale, si traitement commencé il doit être suspendu depuis au moins 24h. Eviter la toilette faciale et l utilisation de maquillage. 4.2.3.5.1. Conjonctivite : Prélever par frottement doux de la conjonctive inférieure en partant de l angle externe pour aboutir à l angle interne de l œil où l on récupère la sécrétion. Bien prélever le pus et les éventuelles croutes. Faire 2 écouvillons. 4.2.3.5.2. Prélèvement systématique en préopératoire : Prélever les larmes le long de la conjonctive et surtout l angle interne de l œil. Copie valide au : 6/3/2018 - Imprimée par GALLO Valérie - Ref : MU-IN-PAPVT-008-
- Page 7 sur 9 4.2.3.5.3. Chez un porteur de lentilles de contact : En plus du prélèvement, faire également l examen microbiologique sur les lentilles et le boitier. Bien préciser au patient de ne pas les nettoyer. 4.2.3.5.4. Recherche de Chlamydiae : Il faut recueillir de nombreuses cellules (bactérie à développement intra-cellulaire). La conjonctive est raclée prudemment avec les écouvillons spécifiques chlamydiaes fournis 4.2.3.5.5. Recherche virales : En fonction de la symptomatologie prélèvement de conjonctive, de larmes ou vésicule cutanée, avec un écouvillon spécifique déchargé dans un milieu de transport spécifique. 4.2.3.5.6. Annexes de l oeil : dacryocystite Prélever au niveau du canal lacrymal. Faire en plus 2 étalements sur lame, les bactéries responsables pouvant être de culture lente et difficile. 4.2.3.5.7. Annexes de l oeil : Paupières Arracher à la pince à épiler, 8 à 10 cils avec leur bulbe, par œil, bien répartis, le long des paupières supérieures et inférieures. Déposer dans une boite de pétri pour recherche de Demodex. 4.2.3.5.8. Recherche d une allergie oculaire : Recueillir les sécrétions conjonctivales, pour faire un frottis. Recueillir 200 μl de larmes dans le cul de sac conjonctival inférieur, pour le dosage des IgE. 4.2.3.6 Hémocultures : Prélever le plus tôt possible au cours de la maladie, et avant toute mise en route d antibiothérapie. Sinon il est recommandé de respecter une fenêtre thérapeutique de 48 à 72 h. Le prélèvement doit être réalisé après une asepsie rigoureuse. Lavage des mains du préleveur, port de gants. Désinfection de la peau du patient à l alcool à 70, désinfection du bouchon du flacon d hémoculture avec un tampon d alcool à 70 C. Le prélèvement se réalise par ponction veineuse, en respectant le volume de sang nécessaire au système utilisé au laboratoire. 1 seul flacon est prélevé, il permet la culture des germes aérobies et anaérobies. Etiqueté avec date et heure de prélèvement. Le schéma classique comprend 2 à 3 hémocultures par 24 h espacées de 30 à 60 min appelé «prélèvement multiple». Sauf pour les endocardites, actuellement on conseille le «prélèvement unique» = 1 seule ponction pour ensemencer 1 à 3 flacons. Copie valide au : 6/3/2018 - Imprimée par GALLO Valérie - Ref : MU-IN-PAPVT-008-
- Page 8 sur 9 4.2.3.7 Prélèvement de plaie, écoulements purulents, infections cutanées : On ne réalise au laboratoire que les prélèvements de zones superficielles (classe III), possédant au voisinage leur propre flore commensale, donc toujours contaminées. Les prélèvements provenant de zones fermées (classe I : liquide pleural, articulaire), et ceux provenant de zones profondes communicants avec la surface (classe II), sont réalisés par le médecin et apportés au laboratoire. Les informations cliniques sont essentielles : nature de l échantillon, modalités de prélèvement, contexte global (âge, diabète, ), traitement antibiotiques récents éventuel. 4.2.3.7.1. Prélèvement sur peau saine, ou lésions non suintantes : Prélever 2 écouvillons préalablement imbibés d eau physiologique stérile. 4.2.3.7.2. Peau avec lésions superficielles (impétigo, ecthyma, folliculite, furoncle ) Prélever 2 écouvillons en prenant soin de ne pas contaminer avec des bactéries colonisant les alentours de la lésion. Si le transport > 4h, utiliser des écouvillons avec milieux de transport. 4.2.3.7.3. Inflammation cutanée (érysipèle, hypodermite) : Désinfecter le site, puis avec une seringue et une aiguille fine, injecter un peu de sérum physiologique stérile dans la lésion, réaspirer tout ce qu il est possible d obtenir. Aspirer ensuite 1 ml de sérum physiologique dans la seringue pour éviter le dessèchement, boucher stérilement. Transmettre la seringue. 4.2.3.7.4. Prélèvement sur morsures : Aspirer le liquide présent dans la blessure avec une seringue, aspirer ensuite 1 ml de sérum physiologique. A défaut pratiquer 3 écouvillonnages profonds : 1 pour bactéries aérobies, 1 pour anaérobies, 1 pour ED Copie valide au : 6/3/2018 - Imprimée par GALLO Valérie - Ref : MU-IN-PAPVT-008-
- Page 9 sur 9 4.3 Transfert de l échantillon à la technique Les flacons dûment étiquetés, sont transmis en technique selon les modalités suivantes : Nature du prélèvement Délais et conditions de transfert CBU Délai maximal acceptable (dans le manuel de prélèvement les délais sont volontairement raccourcis, pour obtenir des conditions optimales) < 2h à température ambiante < 24h à +4 C (au delà de 12h altération possible des leucocytes) < 48h si recueil sur milieux de conservation (borate par ex) Prélèvement génitaux : Vaginal Endocol Urétral Sur écouvillon ordinaire < 2 h à température ambiante Sur écouvillon avec milieu de transport liquide < 24 h à température ambiante Ulcération génitale, Examen direct extemporané L/l urétral Prélèvements ORL, oculaires < 2h ou milieu de transport (24 h) température ambiante Hémocultures Le plus rapidement possible pour être incubé. (36 C +/-1) Si transfert impossible immédiatement incuber (36 C +/-1) et transfert dans les 24 h. Pus < 4 h à température ambiante < 24 h milieu de transport température ambiante 5 C l a s s e m e n t e t a r c h i v a g e Les documents introduits par le mode opératoire sont classés et archivés selon les règles décrites dans l instruction MU-IN-DOCLA-001 «Classement et archivage des documents». Copie valide au : 6/3/2018 - Imprimée par GALLO Valérie - Ref : MU-IN-PAPVT-008-