P. : 1/13 Modifications version 4 Extension de la méthode pour 25 AAPs Correction LOD ANL Références Table des matières 1 Introduction... 1 2 Processus de la validation... 2 3 Plan de la validation... 3 4 Résultats de la validation... 3 4.1 Résultats qualitatifs : Temps de rétention... 3 4.1.1 4.1.2 Critère d acceptation... 3 Résultats... 4 4.2 Résultats qualitatifs : Rapport d intensité des deux ions filles... 5 4.2.1 4.2.2 Critère d acceptation... 5 Résultats... 5 4.3 Spécificité... 6 4.3.1 4.3.2 Critère d acceptation... 6 Résultats... 6 4.4 Linéarité... 7 4.4.1 4.4.2 Critère d acceptation... 7 Résultats... 7 4.5 Effet de matrice... 8 4.5.1 4.5.2 Critère d acceptation... 8 Résultats... 8 4.6 Répétabilité, Reproductibilité, Mesure d incertitude et Justesse... 8 4.6.1 4.6.2. Critère d acceptation... 8 Résultats... 8 4.7 Limite de détection (LOD) et de quantification (LOQ)... 12 4.7.1 4.7.2 Critère d acceptation... 12 Résultats... 12 4.8 Rendement... 13 4.8.1 Critère d acceptation... 13 4.8.2 Résultats... 13 5 Conclusion... 13 6 Références... 13 1 Introduction Ce rapport décrit les différents paramètres de validation et leurs applications techniques nécessaires pour prouver la fiabilité et l exactitude de la méthode d analyse. La procédure appliquée est décrite dans la SOP 23/0558/F. Le but de cette procédure est de vérifier la conformité des ustensiles en polyamide émis sur le marché belge, destinés aux consommateurs. En effet, les amines aromatiques primaires (AAP) sont utilisées
P. : 2/13 dans la production de colorants azotés donnant une couleur noire aux ustensiles de cuisine en nylon. Les amines aromatiques sont donc susceptibles de migrer dans les aliments. Une limite spécifique de migration de 0,010 mg/kg aliment (ou simulant alimentaire), soit de 0,0033 mg/dm 2 (en se référant au rapport conventionnel de 6 dm 2 par kg d aliment), est mentionné dans la Directive 10/2011 pour la quantité totale d amines primaires aromatiques. Le dossier de validation est adapté selon Technical guidelines on testing the migration of primary aromatic amines from polyamide kitchenware and for formaldehyde from melamine kitchenware, EU-RL, NRL-FCM publication, version 7, April 30 th, 2011.. La détermination des amines aromatiques primaires (Aniline (ANL), 2,4-diaminotoluene (2,4-TDA), 4,4- diaminophenylmethane (4,4 -MDA), Ortho-aminoazotoluene (o-aat), 4-aminoazobenzene (4-AAB), o- anisidine (o-asd), 4-chloro-aniline (4-CA), 4-chloro-o-toluidine (4-CoT), 1,5-diaminonaphtalene (1,5- DAN), 3,3 -dichlorobenzidine (3,3 -DCB), 2,2 -dichloro-4,4 -methylenedianiline (DCMDA), 2,4- dimethylaniline (2,4-DMA), 2,6-dimethylaniline (2,6-DMA), 3,3 -dimethylbenzidine (3,3 -DMB), 3,3 - dimethoxybenzidine (3,3 -DMOB), 4,4 -diaminodiphenylether (4,4 -DPE), 4,4 -methylene-di-o-toluidine (4,4 -MDoT), 2-methyl-5-nitroaniline (2-M-5-NA), 2,4-diaminoanisole (2-M-mPDA), 2-methoxy-5- methylaniline (2-MO-5-MA), m-phenylenediamine (m-pda), p-phenylenediamine (p-pda), 4,4 - thiodianiline (4,4 -SDA), o-toluidine (o-t), 2,6-diaminotuoluene (2,6-TDA) et 2,4,5-trimethylaniline (2,4,5- TMA)) dans des ustensiles en polyamide/nylon s effectue par UPLC-MS/MS. 2 Processus de la validation Type de méthode : Le processus de validation concerne la méthode analytique pour la détermination des 26 amines aromatiques primaires (Aniline (ANL), 2,4-diaminotoluene (2,4-TDA), 4,4-diaminophenylmethane (4,4 - MDA), Ortho-aminoazotoluene (o-aat), 4-aminoazobenzene (4-AAB), o-anisidine (o-asd), 4-chloroaniline (4-CA), 4-chloro-o-toluidine (4-CoT), 1,5-diaminonaphtalene (1,5-DAN), 3,3 -dichlorobenzidine (3,3 -DCB), 2,2 -dichloro-4,4 -methylenedianiline (DCMDA), 2,4-dimethylaniline (2,4-DMA), 2,6- dimethylaniline (2,6-DMA), 3,3 -dimethylbenzidine (3,3 -DMB), 3,3 -dimethoxybenzidine (3,3 -DMOB), 4,4 -diaminodiphenylether (4,4 -DPE), 4,4 -methylene-di-o-toluidine (4,4 -MDoT), 2-methyl-5-nitroaniline (2-M-5-NA), 2,4-diaminoanisole (2-M-mPDA), 2-methoxy-5-methylaniline (2-MO-5-MA), m- phenylenediamine (m-pda), p-phenylenediamine (p-pda), 4,4 -thiodianiline (4,4 -SDA), o-toluidine (o-t), 2,6-diaminotuoluene (2,6-TDA) et 2,4,5-trimethylaniline (2,4,5-TMA)) dans le liquide de migration après contact avec les ustensiles de par UPLC-MS/MS. Principe de la méthode : Les ustensiles (à usage répété) sont mis en contact avec le simulant en respectant les conditions de temps et température de contact pour extraire les amines aromatique primaires (ANL, 2,4-TDA, 4,4-MDA, o-aat, 4-AAB, o-asd, 4-CA, 4-CoT, 1,5-DAN, 3,3 -DCB, DCMDA, 2,4-DMA, 2,6-DMA, 3,3 -DMB, 3,3 - DMOB, 4,4 -DPE, 4,4 -MDoT, 2-M-5-NA, 2-M-mPDA, 2-MO-5-MA, m-pda, p-pda, 4,4 -SDA, o-t, 2,6- TDA et 2,4,5-TMA). Après trois migrations successives le liquide de migration est analysé par UPLC- MS/MS. Matrices Ustensiles de cuisines en polyamide Responsable du processus de validation : Tina N Goy, Els Van Hoeck, Kathy Van Den Houwe Exécuteurs de la validation : Caroline Evrard Paramètres suivants à déterminer :
P. : 3/13 La spécificité, linéarité, l effet de matrice, répétabilité et reproductibilité, mesure d incertitude, justesse, limite de détection et de quantification et rendement. Equipements utilisés : UPLC-MS/MS 3 Plan de la validation Le plan des analyses est réalisé de la façon suivante : Validation primaire pour ANL, 2,4-TDA et 4,4 -MDA Blanc matrice 2 µg/l 5 µg/l 10 µg/l 20 µg/l Jour 1 : 18/07/2011 3 3 3 3 3 Jour 2 : 19/07/2011 3 3 3 3 3 Jour 3 : 20/07/2011 3 3 3 3 3 Total : 12 12 12 12 12 Validation secondaire pour o-aat, 4-AAB, o-asd, 4-CA, 4-CoT, 1,5-DAN, 3,3 -DCB, DCMDA, 2,4-DMA, 2,6-DMA, 3,3 -DMB, 3,3 -DMOB, 4,4 -DPE, 4,4 -MDoT, 2-M-5-NA, 2-M-mPDA, 2-MO-5-MA, m-pda, p- PDA, 4,4 -SDA, o-t, 2,6-TDA et 2,4,5-TMA. Blanc matrice 2 µg/l 5 µg/l 10 µg/l 20 µg/l Jour 4 : 06/03/2012 3 3 3 3 3 Total : 3 3 3 3 3 4 Résultats de la validation 4.1 Résultats qualitatifs : Temps de rétention 4.1.1 Critère d acceptation Le temps de rétention ne peut pas varier plus de 5 % en comparant avec le temps de rétention de l analyse de référence (échantillon de contrôle ou standard de référence)
P. : 4/13 4.1.2 Résultats Validation primaire pour ANL, 2,4-TDA et 4,4 -MDA % des échantillons analysés pour lesquels les temps de rétention étaient approuvés ANL 100% 2,4-TDA 100% 4,4 -MDA 100% Validation secondaire pour o-aat, 4-AAB, o-asd, 4-CA, 4-CoT, 1,5-DAN, 3,3 -DCB, DCMDA, 2,4-DMA, 2,6-DMA, 3,3 -DMB, 3,3 -DMOB, 4,4 -DPE, 4,4 -MDoT, 2-M-5-NA, 2-M-mPDA, 2-MO-5-MA, m-pda, p- PDA, 4,4 -SDA, o-t, 2,6-TDA et 2,4,5-TMA. % des échantillons analysés pour lesquels les temps de rétention étaient approuvés ANL 100% o-t 100% p-pda 100% m-pda 100% 2,4-DMA 100% 2,6-DMA 100% 2,4-TDA 100% 2,6-TDA 100% o-asd 100% 4-CA 100% 2,4,5-TMA 100% 2-MO-5-MA 100% 2-M-mPDA 100% 4-CoT 100% 2-M-5-NA 100% 1,5-DAN 100% 4-AAB 100% 4,4 -MDA 100% 4,4 -DPE 100% 3,3 -DMB 100% 4,4 -SDA 100% o-aat 100% 4,4 -MDoT 100% 3,3 -DMOB 100% 3,3 -DCB 100% DCMDA 100%
P. : 5/13 4.2 Résultats qualitatifs : Rapport d intensité des deux ions filles 4.2.1 Critère d acceptation Le rapport du signal des deux ions filles obtenu ne peut pas différer plus que 30 % comparé avec le rapport obtenu de l analyse de référence (échantillon de contrôle ou standard de référence) 4.2.2 Résultats Validation primaire pour ANL, 2,4-TDA et 4,4 -MDA % des échantillons analysés pour lesquels les rapports d intensités des deux ions filles étaient approuvés ANL 100% 2,4-TDA 100% 4,4 -MDA 100% Validation secondaire pour o-aat, 4-AAB, o-asd, 4-CA, 4-CoT, 1,5-DAN, 3,3 -DCB, DCMDA, 2,4-DMA, 2,6-DMA, 3,3 -DMB, 3,3 -DMOB, 4,4 -DPE, 4,4 -MDoT, 2-M-5-NA, 2-M-mPDA, 2-MO-5-MA, m-pda, p- PDA, 4,4 -SDA, o-t, 2,6-TDA et 2,4,5-TMA. % des échantillons analysés pour lesquels les rapports d intensités des deux ions filles étaient approuvés ANL 100% o-t 100% p-pda 100% m-pda 100% 2,4-DMA 100% 2,6-DMA 100% 2,4-TDA 100% 2,6-TDA 100% o-asd 100% 4-CA 100% 2,4,5-TMA 100% 2-MO-5-MA 100% 2-M-mPDA 100% 4-CoT 100% 2-M-5-NA 100% 1,5-DAN 100% 4-AAB 100% 4,4 -MDA 100% 4,4 -DPE 100% 3,3 -DMB 100% 4,4 -SDA 100% o-aat 100% 4,4 -MDoT 100% 3,3 -DMOB 100% 3,3 -DCB 100% DCMDA 100%
P. : 6/13 4.3 Spécificité 4.3.1 Critère d acceptation L utilisation de blanc et du blanc matrice prouve qu il n y a aucune présence de pic éventuel pouvant perturber l identification et la quantification des amines aromatiques primaires. La méthode est sélective et spécifique car basée sur la détermination du temps de rétention et le rapport des ions filles spécifique pour chaque molécule recherchée. On considère qu il y a présence d amine aromatique primaire lorsqu on détecte un pic ayant un temps de rétention proche de ceux des standards de la même série en tenant compte de l intervalle de confiance de 5 % et qu il y a confirmation du rapport des ions filles d amine aromatique primaire en tenant compte de l intervalle de confiance de 30 %. 4.3.2 Résultats Analytes Ion parent (MH+) (m/z) Ions filles (m/z) Temps de retention** (min) Temps de retention*** (min) ANL 94 51, 77* 1.25 1.33 o-t 108 91*, 93 3.02 p-pda 109 65, 92* 0.69 m-pda 109 65, 92* 0.68 2,4-DMA 122 105, 107* 3.5 2,6-DMA 122 77, 105* 4.24 2,4-TDA 123 77, 108* 0.93 1.00 2,6-TDA 123 79, 106* 0.99 o-asd 124 65, 109* 2.75 4-CA 128 93*, 111 4.07 2,4,5-TMA 136 91, 121* 3.60 2-MO-5MA 138 78, 123* 3.37 2-M-mPDA 139 108*, 124 0.93 4-CoT 143 107*, 125 4.98 2-M-5-NA 153 90, 107* 4.78 1,5-DAN 159 115, 143* 1.69 4-AAB 198 77*, 93 5.72 4,4 -MDA 199 89, 106* 2.62 3.06 4,4 -DPE 201 80, 108* 2.20 3,3 -DMB 213 181, 198* 3.72 4,4 -SDA 217 124*, 200 4.12 o-aat 226 91*, 106 6.37 4,4 -MDoT 227 120*, 178 3.69 3,3 -DMOB 245 187*, 230 3.71 3,3 -DCB 254 183, 218* 5.62 DCMDA 268 141, 232* 5.76 * Ion fille utilisé pour la quantification ** Temps de rétention avec le gradient pour 3 AAP *** Temps de rétention avec le gradient pour 26 AAP
P. : 7/13 4.4 Linéarité 4.4.1 Critère d acceptation La linéarité ou la non-linéarité du modèle de régression utilisé pour la quantification est évaluée à l aide du test de Mandel. Ce test détermine le modèle préférentiellement utilisé : si TV (Test value) < Fcritique, alors régression linéaire si TV > Fcritique, alors régression quadratique Le coefficient de corrélation (r 2 ) des courbes obtenu doit être égal ou supérieur à 0,98. 4.4.2 Résultats Les droites d étalonnages ont été réalisées sur une gamme de concentration autour de la SML pour chaque amine. Validation primaire pour ANL, 2,4-TDA et 4,4 -MDA TV F critique Linéaire ou quadratique R² Linéarité ANL 1.737 9.074 Linéaire 0.9904 Ok 2,4-TDA 4.047 9.074 Linéaire 0.9808 Ok 4,4 -MDA 6.716 9.074 Linéaire 0.9845 Ok Validation secondaire pour o-aat, 4-AAB, o-asd, 4-CA, 4-CoT, 1,5-DAN, 3,3 -DCB, DCMDA, 2,4-DMA, 2,6-DMA, 3,3 -DMB, 3,3 -DMOB, 4,4 -DPE, 4,4 -MDoT, 2-M-5-NA, 2-M-mPDA, 2-MO-5-MA, m-pda, p- PDA, 4,4 -SDA, o-t, 2,6-TDA et 2,4,5-TMA. TV F critique Linéaire ou quadratique R² Linéarité ANL 8.986 16.258 Linéaire 0.9984 Ok o-t 4.134 16.258 Linéaire 0.9987 Ok p-pda 2.788 16.258 Linéaire 0.9970 Ok m-pda 4.202 16.258 Linéaire 0.9964 Ok 2,4-DMA 2.832 16.258 Linéaire 0.9985 Ok 2,6-DMA 5.311 16.258 Linéaire 0.9989 Ok 2,4-TDA 0.270 16.258 Linéaire 0.9988 Ok 2,6-TDA 4.161 16.258 Linéaire 0.9993 Ok o-asd 2.083 16.258 Linéaire 0.9977 Ok 4-CA 4.521 16.258 Linéaire 0.9983 Ok 2,4,5-TMA 3.022 16.258 Linéaire 0.9978 Ok 2-MO-5-MA 120.024 16.258 Linéaire 0.9976 Ok 2-M-mPDA 12.103 16.258 Linéaire 0.9971 Ok 4-CoT 5.475 16.258 Linéaire 0.9921 Ok 2-M-5-NA 5.194 16.258 Linéaire 0.9981 Ok 1,5-DAN 7.510 16.258 Linéaire 0.9995 Ok 4-AAB 12.099 16.258 Linéaire 0.9961 Ok 4,4 -MDA 8.476 16.258 Linéaire 0.9949 Ok 4,4 -DPE 5.994 16.258 Linéaire 0.9986 Ok 3,3 -DMB 2.666 16.258 Linéaire 0.9976 Ok 4,4 -SDA 3.278 16.258 Linéaire 0.9983 Ok o-aat 6.318 16.258 Linéaire 0.9974 Ok 4,4 -MDoT 0.992 16.258 Linéaire 0.9995 Ok
P. : 8/13 TV F critique Linéaire ou quadratique R² Linéarité 3,3 -DMOB 15.790 16.258 Linéaire 0.9994 Ok 3,3 -DCB 11.760 16.258 Linéaire 0.9975 Ok DCMDA 5.597 16.258 Linéaire 0.9988 Ok Conclusion : Il s avère que la linéarité est constatée pour toutes les amines primaires aromatiques dans la gamme des concentrations étudiées. 4.5 Effet de matrice 4.5.1 Critère d acceptation Comparaison entre les pentes des standards préparés dans le blanc et les standards préparés dans le blanc matrice. Les valeurs obtenues pour les 2 droites sont introduites et comparées en utilisant le t-test dans le tableau ci-dessous. Si t est inférieur au t critique, il n y a pas d effet de matrice. 4.5.2 Résultats t t critique Effet matrice ANL 0.174 2.052 non 2.4-TDA 0.783 2.052 non 4.4 -MDA 0.586 2.052 non Conclusion : il n y a pas d effet de matrice pour la molécule étudiée, car t est inférieur au t critique. 4.6 Répétabilité, Reproductibilité, Mesure d incertitude et Justesse 4.6.1 Critère d acceptation Les critères d acceptation de répétabilité et reproductibilité sont respectés lorsque les cœfficients de variation de répétabilité (CV r ) et de reproductibilité (CV RW ) ne dépassent pas le niveau de tolérance calculé avec l équation d Horwitz. La Répétabilité et reproductibilité de la méthode ont été déterminées par les résultats obtenus à partir de l échantillon de contrôle : Pour la répétabilité, 3 répliquats de l échantillon de contrôle ont été analysés par la même personne, le même jour. Pour la reproductibilité, l échantillon de contrôle a été analysé par la même personne, dans les mêmes conditions mais durant 3 jours différents. L incertitude de la mesure est égale à deux fois la reproductibilité (S RW ) exprimée en pourcentage. Comme il n existe pas d échantillon de référence certifié, la justesse pourra être déterminée à partir de l échantillon de contrôle. Un échantillon spiké dans la matrice, dont la teneur est égale à la SML, a été injecté 3 jours différents. Les résultats sont encodés dans une carte de contrôle. 4.6.2. Résultats Par l utilisation du tableau statistique (STATISTICAL ANALYSIS OF DATA ACCORDING TO ISO5725-2(1994)), on détermine les cœfficients de variation de répétabilité (CV r ) et de reproductibilité (CV RW ). Ces coefficients sont comparés au niveau de tolérance donné à 2/3 d Horwitz par l équation d Horwitz.
P. : 9/13 Validation primaire pour ANL, 2,4-TDA et 4,4 -MDA Sr (mg/l) CVr 2/3 Horwitz S RW (mg/l) CV RW 2/3 Horwitz Apparent Recovery Uncertainty 2 ppb ANL 0.119 5.718 14.7 0.119 5.718 22.0 104 11.4 2,4-TDA 0.156 7.421 14.7 0.156 7.421 22.0 108 14.8 4,4 -MDA 0.277 14.312 14.7 0.277 14.312 22.0 97 28.6 5 ppb ANL 0.640 12.7 14.7 0.640 12.7 22.0 101 25.4 2,4-TDA 0.651 14.6 14.7 0.651 14.6 22.0 89 29.3 4,4 -MDA 0.523 11.29 14.7 0.985 21.3 22.0 93 42.5 10 ppb ANL 0.306 2.910 14.7 0.347 3.296 22.0 105 6.6 2,4-TDA 0.799 8.733 14.7 0.799 8.733 22.0 92 17.5 4,4 -MDA 1.226 13.485 14.7 1.399 15.388 22.0 91 30.8 20 ppb ANL 0.562 2.656 14.7 0.594 2.807 22.0 106 5.6 2,4-TA 2.720 14.300 14.7 2.720 14.300 22.0 95 28.6 4,4 -MDA 1.870 9.186 14.7 3.602 17.697 22.0 102 35.4 Validation secondaire pour o-aat, 4-AAB, o-asd, 4-CA, 4-CoT, 1,5-DAN, 3,3 -DCB, DCMDA, 2,4-DMA, 2,6-DMA, 3,3 -DMB, 3,3 -DMOB, 4,4 -DPE, 4,4 -MDoT, 2-M-5-NA, 2-M-mPDA, 2-MO-5-MA, m-pda, p- PDA, 4,4 -SDA, o-t, 2,6-TDA et 2,4,5-TMA. Sr (mg/l) CVr 2/3 Horwitz Apparent Recovery 2 ppb ANL 0.071 3.215 14.7 111 o-t 0.140 6.087 14.7 115 p-pda 0.088 4.291 14.7 102 m-pda 0.171 9.102 14.7 94 2,4-DMA 0.041 1.913 14.7 107 2,6-DMA 0.034 1.655 14.7 103 2,4-TDA 0.073 3.441 14.7 106 2,6-TDA 0.027 1.249 14.7 107 o-asd 0.029 1.297 14.7 110 4-CA 0.007 0.292 14.7 112 2,4,5-TMA 0.072 3.598 14.7 101 2-MO-5-MA 0.054 2.585 14.7 105 2-M-mPDA 0.071 3.174 14.7 112 4-CoT 0.234 9.619 14.7 122 2-M-5-NA 0.015 0.637 14.7 118 1,5-DAN 0.107 4.240 14.7 126 4-AAB 0.052 2.626 14.7 99 4,4 -MDA 0.024 1.093 14.7 111
P. : 10/13 Sr (mg/l) CVr 2/3 Horwitz Apparent Recovery 4,4 -DPE 0.023 1.064 14.7 106 3,3 -DMB 0.354 16.450 14.7 108 4,4 -SDA 0.135 5.933 14.7 113 o-aat 0.033 1.797 14.7 93 4,4 -MDoT 0.221 10.438 14.7 106 3,3 -DMOB 0.284 13.653 14.7 104 3,3 -DCB 0.050 2.199 14.7 113 DCMDA 0.022 0.899 14.7 121 5 ppb ANL 0.209 3.810 14.7 110 o-t 0.130 2.869 14.7 91 p-pda 0.101 2.083 14.7 97 m-pda 0.396 8.597 14.7 92 2,4-DMA 0.091 1.735 14.7 104 2,6-DMA 0.064 1.280 14.7 100 2,4-TDA 0.128 2.473 14.7 103 2,6-TDA 0.083 1.564 14.7 106 o-asd 0.081 1.502 14.7 108 4-CA 0.125 2.235 14.7 112 2,4,5-TMA 0.151 3.007 14.7 100 2-MO-5-MA 0.089 1.689 14.7 105 2-M-mPDA 0.133 2.487 14.7 107 4-CoT 0.192 3.072 14.7 125 2-M-5-NA 0.050 0.845 14.7 118 1,5-DAN 0.284 4.419 14.7 129 4-AAB 0.154 3.090 14.7 99 4,4 -MDA 0.015 0.275 14.7 105 4,4 -DPE 0.124 2.362 14.7 105 3,3 -DMB 0.643 12.916 14.7 100 4,4 -SDA 0.265 4.826 14.7 110 o-aat 0.035 0.691 14.7 100 4,4 -MDoT 0.655 13.162 14.7 99 3,3 -DMOB 0.689 13.358 14.7 103 3,3 -DCB 0.096 1.672 14.7 115 DCMDA 0.020 0.330 14.7 119 10 ppb ANL 0.453 4.218 14.7 107 o-t 1.549 15.244 14.7 102 p-pda 0.260 2.582 14.7 101 m-pda 0.714 7.583 14.7 94 2,4-DMA 0.080 0.758 14.7 105 2,6-DMA 0.075 0.752 14.7 100
P. : 11/13 Sr (mg/l) CVr 2/3 Horwitz Apparent Recovery 2,4-TDA 0.524 5.141 14.7 102 2,6-TDA 0.161 1.496 14.7 107 o-asd 0.080 0.725 14.7 110 4-CA 0.167 1.507 14.7 111 2,4,5-TMA 0.076 0.763 14.7 99 2-MO-5-MA 0.032 0.311 14.7 104 2-M-mPDA 0.116 1.099 14.7 105 4-CoT 0.195 1.615 14.7 121 2-M-5-NA 0.156 1.337 14.7 117 1,5-DAN 0.194 1.448 14.7 134 4-AAB 0.241 2.346 14.7 103 4,4 -MDA 0.104 0.977 14.7 107 4,4 -DPE 0.129 1.210 14.7 106 3,3 -DMB 1.105 11.833 14.7 93 4,4 -SDA 0.478 4.344 14.7 110 o-aat 0.159 1.545 14.7 103 4,4 -MDoT 0.980 9.954 14.7 98 3,3 -DMOB 0.995 10.584 14.7 94 3,3 -DCB 0.128 1.102 14.7 117 DCMDA 0.141 1.171 14.7 121 20 ppb ANL 0.433 2.035 14.7 106 o-t 1.216 6.462 14.7 94 p-pda 0.239 1.217 14.7 98 m-pda 1.214 6.551 14.7 93 2,4-DMA 0.0483 0.242 14.7 100 2,6-DMA 0.288 1.487 14.7 97 2,4-TDA 0.339 1.686 14.7 100 2,6-TDA 0.336 1.602 14.7 105 o-asd 0.059 0.272 14.7 109 4-CA 0.188 0.860 14.7 109 2,4,5-TMA 0.400 2.100 14.7 95 2-MO-5-MA 0.236 1.187 14.7 100 2-M-mPDA 0.394 1.918 14.7 103 4-CoT 0.268 1.095 14.7 122 2-M-5-NA 0.306 1.317 14.7 116 1,5-DAN 0.461 1.679 14.7 137 4-AAB 0.591 3.004 14.7 98 4,4 -MDA 0.226 1.078 14.7 105 4,4 -DPE 0.080 0.376 14.7 106 3,3 -DMB 1.381 8.171 14.7 85 4,4 -SDA 1.032 4.862 14.7 106
P. : 12/13 Sr (mg/l) CVr 2/3 Horwitz Apparent Recovery o-aat 1.036 5.120 14.7 101 4,4 -MDoT 1.772 9.476 14.7 93 3,3 -DMOB 1.8111 11.206 14.7 81 3,3 -DCB 0.854 3.786 14.7 113 DCMDA 0.716 3.065 14.7 117 S r : déviation standard sur la répétabilité CV r : coefficient de répétabilité S RW : déviation standard sur la reproductibilité CV RW : coefficient de reproductibilité Conclusion : Les paramètres de répétabilité et reproductibilité satisfont aux critères d acceptation. 4.7 Limite de détection (LOD) et de quantification (LOQ) 4.7.1 Critère d acceptation La limite de détection (LOD) est égale à trois fois le signal du bruit. Il s agit de la plus petite concentration identifiable des amines. La limite de quantification (LOQ) est égale à dix fois le signal du bruit. Il s agit de la plus petite concentration quantifiable des amines. 4.7.2 Résultats Validation primaire pour ANL, 2,4-TDA et 4,4 -MDA Analyte LOD (ppt) LOQ (ppb) ANL 57 500 2,4-TDA 51 171 4,4 -MDA 5 15 Validation secondaire pour o-aat, 4-AAB, o-asd, 4-CA, 4-CoT, 1,5-DAN, 3,3 -DCB, DCMDA, 2,4-DMA, 2,6-DMA, 3,3 -DMB, 3,3 -DMOB, 4,4 -DPE, 4,4 -MDoT, 2-M-5-NA, 2-M-mPDA, 2-MO-5-MA, m-pda, p- PDA, 4,4 -SDA, o-t, 2,6-TDA et 2,4,5-TMA. Analyte LOD (ppt) LOQ (ppb) ANL 47.2 2 o-t 398.4 2 p-pda 8.3 2 m-pda 64.0 2 2,4-DMA 28.6 2 2,6-DMA 7.2 2 2,4-TDA 8.3 2 2,6-TDA 26.4 2 o-asd 23.2 2 4-CA 4.7 2 2,4,5-TMA 6.9 2 2-MO-5-MA 1.8 2 2-M-mPDA 25.0 2 4-CoT 56.2 2
P. : 13/13 Analyte LOD (ppt) LOQ (ppb) 2-M-5-NA 2.6 2 1,5-DAN 0.8 2 4-AAB 5.1 2 4,4 -MDA 4.8 2 4,4 -DPE 47.5 2 3,3 -DMB 7.8 2 4,4 -SDA 3.1 2 o-aat 1.9 2 4,4 -MDoT 11.8 2 3,3 -DMOB 6.6 5 3,3 -DCB 21.3 2 DCMDA 20.8 2 4.8 Rendement 4.8.1 Critère d acceptation Le rendement est établi à partir de l injection de l échantillon de contrôle au cours de la validation. Le rapport entre les concentrations obtenues en mg/l à partir de l équation de régression linéaire et la concentration théorique de l échantillon de référence permet d établir le rendement, exprimé en pourcentage. 4.8.2 Résultats La limite pour le rendement est fixée à 70%. Le rendement doit être supérieur à 70% 5 Conclusion La validation de la méthode d analyse des amines primaires aromatiques a satisfait aux critères. Il est conclu que la méthode est apte à détecter ANL, 2,4-TDA, 4,4-MDA, o-aat, 4-AAB, o-asd, 4-CA, 4-CoT, 1,5-DAN, 3,3 -DCB, DCMDA, 2,4-DMA, 2,6-DMA, 3,3 -DMB, 3,3 -DMOB, 4,4 -DPE, 4,4 -MDoT, 2-M-5- MA, 2-M-mPDA, 2-MO-5-MA, m-pda, p-pda, 4,4 -SDA, o-t, 2,6-TDA et 2,4,5-TMA dans le liquide de migration après contact avec les ustensiles de. 6 Références Règlement (UE) N 10/2011 concernant les matériaux et objets en matière plastiques destinés à entrer en contact avec des denrées alimentaires SOP 22/N/16 SOP I/03/03/NF SOP I/03/09/NF Les normes d assurance de qualité ISO 17025 sont d application pour les analyses. Technical guidelines on testing the migration of primary aromatic amines from polyamide kitchenware and for for formaldehyde from melamine kitchenware, EU-RL, NRL-FCM publication, version 7, April 30 th, 2011