Page 1/6 Kit chromatographie sur couche mince de pigments chlorophylliens Réf. CCMPCH A RECEPTION DU COLIS : þ Vérifier la composition du colis indiquée cidessous þ Stocker les articles du colis dans les bonnes conditions : Les flacons notés «solvant d extraction» et «solvant d élution» sont à stocker dans une armoire pour produits chimiques inflammables et toxiques Le matériel, les plaques de silice et le sachet noté «poudre d extraction» sont à laisser! à température ambiante!et ne présentent pas de risque. þ Avant toute manipulation, étudier la fiche sécurité COMPOSITION (pour 12 binômes): 1 flacon noté «solvant d extraction» de 100 ml de solvant d extraction (Ethanol) 1 flacon noté «solvant d élution» de 150 ml de solvant d élution (mélange Ether de pétrole/acétone/cyclohéxane) 1 sachet noté «poudre facilitant l extraction» contenant 5 g de poudre pour extraction de chlorophylle (Carbonate de Potassium) 24 capillaires de dépôt 6 plaques de silice (90 x 45 mm) MATERIEL NECESSAIRE : Enceintes de chromatographie avec 6 bouchons pleins et 6 bouchons avec dispositifs d accrochage des bandes de silice Quelques pincées de sable Feuilles fraîches de couleurs différentes (rouges, vertes, jaunes ) Mortier et pilon Filtre Entonnoir en verre Bécher en verre de 50 ml ou moins Eprouvette en verre de 50 ml ou de 25 ml Papier aluminium Glace Cristallisoir Crayon à papier, ciseaux et perforatrice Gants Lunettes SORDALAB PARC SUDESSOR 15 Avenue des Grenots 91150 ETAMPES FRANCE Tél. : +33 1 69 92 26 72 Fax : +33 1 69 92 26 74 www.sordalab.com Mail : info@sordalab.com
Page 2/6 MATERIEL CONSEILLE : Hotte ou endroit bien ventilé OBJECTIFS COGNITIFS Cette manipulation sur la composition en pigments chlorophylliens de feuilles peut être complétée par des manipulations sur l effet de la longueur d onde sur l intensité de la photosynthèse et par un spectre d absorption avec spectrophotomètre. PREPARATION Stocker les 6 mortiers et pilons au réfrigérateur quelques heures avant le TP. Prévoir des éprouvettes de 100 ml et quelques pincées de sable. Préparer les enceintes de migration : Sous hotte ou dans un endroit ventilé, avec gants, blouse et lunettes, remplir les 6 enceintes avec 2025 ml de «solvant de migration» Fermer les enceintes avec le couvercle plein sans crochet Vérifier avec une feuille de papier coupée aux dimensions des plaques de chromatographie qu il n y a pas trop de solvant : la plaque doit tremper sur moins d un cm dans le solvant. Disposer des feuilles bien fraîches de différentes couleurs pour les élèves (6 types différents). Préparer de la glace pilée dans des cristallisoirs. MANIPULATION 1) PREPARATION DE LA PLAQUE DE CHROMATOGRAPHIE Vous disposez d une plaque de 9,5 x 4 cm pour réaliser 4 dépôts. Si vous êtes une classe de 12 binômes, vous disposez d une plaque pour 2 binômes. Utiliser un crayon à papier à mine tendre pour préparer les plaques Poser la plaque le côté de 4 cm vers vous Tracer un trait fin horizontal à 1 cm du bord inférieur Repérer 4 points sur cette ligne : le premier à 1 cm du bord, le second à 0,6 cm du premier, le troisième à 0,6 cm du second et le quatrième à 0,6 cm du troisième. Tracer un trait fort (appuyer assez fortement) horizontal à 1 cm du bord supérieur de la plaque A l aide d une paire de ciseaux, couper les deux bords inférieurs de la plaque en enlevant un triangle isocèle de 0,25 cm de côté Avec une perforatrice, réaliser un trou au milieu du bord supérieur de la plaque à environ 0,5 cm de ce bord SORDALAB PARC SUDESSOR 15 Avenue des Grenots 91150 ETAMPES FRANCE Tél. : +33 1 69 92 26 72 Fax : +33 1 69 92 26 74 www.sordalab.com Mail : info@sordalab.com
Page 3/6 Schéma représentant la plaque de chromatographie : "NB" : Les croix permettent de repérer l endroit des dépôts de suspensions de pigments Les deux coupures des coins de la plaque permettent au solvant de migrer par capillarité de façon plus régulière dans la plaque. Le trou dans la plaque permet d attacher la plaque au couvercle pour faciliter la manipulation et éviter les contacts avec le solvant de migration dangereux. Le trait fort en haut de la plaque permet de repérer le moment où il faut arrêter la migration (le front du solvant est ainsi noté) 2) PREPARATION DE LA SOLUTION DE CHLOROPHYLLE : Vous pouvez préparer 6 solutions de chlorophylle avec des feuilles de différents types de manière à pouvoir analyser diverses compositions en pigments. Si vous êtes 12 binômes, vous pouvez donc manipuler par groupe de deux binômes pour cette étape. Poser le mortier stocké au réfrigérateur sur la glace dans les cristallisoirs Prendre quelques feuilles de la même couleur et les poser dans le mortier Saupoudrer les feuilles d une bonne pincée de «poudre facilitant l extraction» de la chlorophylle ainsi que d une pincée de sable Broyer les feuilles avec le pilon en ajoutant progressivement 15 ml de «solvant d extraction» jusqu à ce que la suspension obtenue prenne une coloration suffisamment intense Laisser la suspension sur la glace 3) REALISATION DES DEPOTS SUR LA PLAQUE : Chaque binôme réalise deux dépôts consécutifs sur une plaque avec la même suspension de chlorophylle. Une plaque de chromatographie sert à deux binômes (il est préférable de déposer la solution de pigments de deux feuilles différentes sur la même plaque) Tremper les capillaires dans le mortier contenant la solution de pigments Laisser monter la solution colorée dans le capillaire Appliquer le capillaire sur la croix de la plaque de chromatographie de manière à former un dépôt de petite taille et bien rond SORDALAB PARC SUDESSOR 15 Avenue des Grenots 91150 ETAMPES FRANCE Tél. : +33 1 69 92 26 72 Fax : +33 1 69 92 26 74 www.sordalab.com Mail : info@sordalab.com
Page 4/6 Refaire cette opération plusieurs fois de manière à ce que le dépôt soit suffisamment coloré tout en veillant à ce qu il ne s étale pas trop ## ATTENTION ## : Utiliser un capillaire pour réaliser un dépôt et ne pas réaliser ce capillaire pour les dépôts suivant "NB" : il est important de réaliser deux dépôts identiques consécutifs sur une plaque de chromatographie de manière à vérifier que la migration des pigments est bien rectiligne. 4) MISE A MIGRER : Mettre des gants, des lunettes et une blouse et se placer dans un endroit aéré Accrocher la plaque sur le couvercle avec le crochet Ouvrir l enceinte contenant le solvant Fermer, avec le couvercle portant le crochet et la plaque, l enceinte contenant le solvant de migration en veillant à visser dans l axe pour que la plaque de chromatographie trempe dans le solvant de façon régulière sur un demicentimètre Laisser migrer jusqu à ce que le front du solvant arrive au niveau du trait du bord supérieur de la plaque Sortir la plaque de l enceinte en enlevant le couvercle Refermer l enceinte avec le couvercle plein (sans le crochet) Laisser sécher la plaque de chromatographie quelques instants Entourer les tâches de couleur avec un crayon de manière à bien les repérer Relever les distances entre le trait de dépôt et les tâches ainsi qu entre le trait de dépôt et le front de migration. Calculer les rapports de migration (Rf = distance dépôttâche / distance dépôtfront) permettant d identifier les pigments et les couleurs des tâches 5) COMPLEMENTS DE MANIPULATION : Réalisation possible d un spectre d absorption des pigments chlorophylliens au spectrophotomètre Réalisation possible d une manipulation sur l effet de la longueur d onde sur l intensité de la photosynthèse RESULTATS ET INTERPRETATIONS Résultats obtenus avec une feuille de pissenlit : Nom du pigment Couleur de la tâche obtenue Carotène Chlorophylle a Chlorophylle b Xanthophylles Jauneorangé Vert Vert kaki Jaune Rapport de migration au front du solvant : Rf 0,92 0,41 0,39 Deux taches comprises entre des Rf de0,28 à 0,37 SORDALAB PARC SUDESSOR 15 Avenue des Grenots 91150 ETAMPES FRANCE Tél. : +33 1 69 92 26 72 Fax : +33 1 69 92 26 74 www.sordalab.com Mail : info@sordalab.com
Page 5/6 FICHE SECURITE (guide non exhaustif) La «poudre facilitant l extraction» de la photosynthèse n est pas dangereuse. Le «solvant d extraction» contient de l éthanol. Le «solvant de migration» contient des composés organiques (éther de pétrole, acétone, cyclohexane) à manipuler avec gants, blouse et lunettes. Produit Risques normalisés Cyclohexane Facilement inflammable Irritant pour la peau Très toxique pour l environnement Nocif par ingestion (atteinte des poumons) et inhalation (somnolence et vertige) Ether de pétrole Facilement inflammable Irritant pour la peau Toxique pour l environnement Nocif par ingestion (atteinte des poumons et altération de la fertilité) et inhalation (somnolence et vertige) de contact avec la peau Laver immédiatement la peau avec une grande quantité d eau savonneuse 15 minutes. Laver les vêtements contaminés avant de les utiliser. Laver immédiatement la peau avec une grande quantité d eau savonneuse 15 minutes. Laver les vêtements contaminés avant de les utiliser. Actions à mener en cas d inhalation De projection dans les yeux Donner de l air Rincer frais. immédiatement les En cas yeux à grande eau d asphyxie, procéder à la 15 minutes en respiration séparant les artificielle. paupières. Donner de l air frais. En cas d asphyxie, procéder à la respiration artificielle. Rincer immédiatement les yeux à grande eau 15 minutes en séparant les paupières. SORDALAB PARC SUDESSOR 15 Avenue des Grenots 91150 ETAMPES FRANCE Tél. : +33 1 69 92 26 72 Fax : +33 1 69 92 26 74 www.sordalab.com Mail : info@sordalab.com d ingestion Ne pas donner à boire ni faire vomir en cas de perte de connaissance Eviter de vomir, utiliser de l huile de vaseline comme laxatif (3mL/kg). Ne pas donner à boire ni faire vomir en cas de perte de connaissance. Utiliser de l huile de vaseline comme laxatif (3mL/kg). Administrer une solution de charbon actif à usage médical. Ne pas boire de lait. Eviter le lavage d'estomac.
Page 6/6 Produit Risques normalisés Acétone Facilement inflammable Irritant pour les yeux et la peau (desséchement et gerçure) Nocif par inhalation (somnolence et vertige) Actions à mener en cas Laver immédiatement la peau avec une grande quantité d eau savonneuse 15 minutes. Laver les vêtements contaminés avant de les utiliser. Produit Donner de l air frais. En cas d asphyxie, procéder à la respiration artificielle. Risques normalisés Rincer immédiatement les yeux à grande eau 15 minutes en séparant les paupières. FICHE TRI ET RECUPERATION Le «solvant de migration» doit être récupéré dans les containers pour les solvants organiques. SORDALAB PARC SUDESSOR 15 Avenue des Grenots 91150 ETAMPES FRANCE Tél. : +33 1 69 92 26 72 Fax : +33 1 69 92 26 74 www.sordalab.com Mail : info@sordalab.com Actions à mener en cas Ne pas donner à boire ni faire vomir en cas de perte de connaissance. Eviter de vomir, boire beaucoup d eau (pas de lait) Administrer une solution de charbon actif à usage médical. Laxatifs: sulfate sodique (1 cuillerée à soupe dans 250 ml d'eau).