Bienvenue au 1er congrès International de l Association Tunisienne de Physiologie et de Biosurveillance de l Environnement

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2 Bienvenue au 1er congrès International de l Association Tunisienne de Physiologie et de Biosurveillance de l Environnement Chers collègues, Les crises sanitaires des dernières années ont clairement mis en évidence les relations étroites entre l homme et son environnement et les conséquences parfois dramatiques d une mauvaise évaluation du risque sanitaire. Par ailleurs, le développement de nouvelles technologies et les innovations dans les domaines de l industrie et de la recherche font que des substances nouvelles sont constamment générées. Les effets de l environnement sur la santé (environnement général, environnement professionnel, alimentation) constituent à l échelle mondiale une préoccupation majeure. De nombreuses études mettent en évidence la présence dans l'environnement de substances toxiques de classes chimiques et d'origines très diverses (e.g. dioxines, HAPs, PCBs, métaux, pesticides organochlorés, organophosphorés ), pour lesquels des méthodes analytiques sont relativement bien établies. L émergence de nouveaux types de contaminants, comme les médicaments, les produits cosmétiques ou les composés issus des activités domestiques complexifie l évaluation du degré de toxicité de la substance. La surveillance en routine de ces substances est confrontée à différents problèmes, en particulier quelles substances et comment les surveiller? La directive européenne de toxicologie et de la surveillance des xénobiotiques a partiellement répondu au problème en définissant une liste de substances prioritaires. Toutefois, au regard des milliers de substances libérées dans l environnement, les scientifiques et les gestionnaires de l environnement s accordent à penser que cela reste insuffisant pour établir une évaluation réaliste du risque pour l environnement et la santé humaine et animale. De plus, les substances polluantes sont le plus souvent présentes à de faibles concentrations (<1µg/l). Ceci pose un réel problème lors de l analyse de ces substances dans la mesure où les instruments de mesure utilisés en routine par la majorité des laboratoires d analyse présentent des limites de détection supérieures aux seuils fixés. La multiplicité de ces polluants, présents le plus souvent à de faibles concentrations et pour lesquels peu d informations toxicologiques sont disponibles, pose donc clairement la question du risque associé aux expositions chroniques à faibles 2

3 doses de xénobiotiques et de l évaluation de ce risque. Le programme proposé dans ce premier congrès international vise à mieux comprendre les mécanismes d action des xénobiotiques et des bactéries pathogènes sur le plan cellulaire et moléculaire par des approches in vivo et in vitro afin de répondre aux défis liés à la santé humaine et animale, et la recherche de nouvelles stratégies thérapeutiques visant à prévenir et /ou remédier leurs effets sur la santé. Les thèmes principaux de ce premier congrès international seront: La Biosurveillance de l Environnement Les Biomolécules et Santé Pour le comité d organisation, 3

4 Comité Scientifique : Nom et Prénom Pays Pr Abdelfattah El Feki FSS-Tunisie Dr Ahmed Chakroun Sfax-Tunisie Pr Badiaa Lyoussi Fès-Maroc Pr Ferjani Ben Abdallah FSS-Tunisie Dr Hamadi Fetoui FSS-Tunisie MC Mahfoudh Messrah Annaba-Algérie Pr Michèle Bouchard Montréal-Canada MC Mohamed Bouaziz ISBS-Tunisie Dr Mohamed Dammak Sfax-Tunisie Dr Mohamed Makni ISBS-Tunisie Pr Mohamed Ksibi ISBS-Tunisie Pr Mondher Jaziri ULB-Belgique Pr Monique Simmonds KEW-Londres Dr Mongi Saoudi Sfax-Tunisie Pr Nozha Cohen Casa-Maroc Pr Radhouane Gdoura FSS- Tunisie MC Riadh Ksouri CRBC-Tunisie Pr Emna Ammar ENIS- Tunisie 4

5 Comité d Organisation Nom et Prénom Pays Pr Abdelfettah El Feki FSS-Tunisie Pr Ferjani Ben Abdallah FSS-Tunisie Dr Hamadi Fetoui FSS-Tunisie Dr Mohamed Makni ISBS-Tunisie Dr Mongi Saoudi FSS-Tunisie Pr Radhouane Gdoura FSS-Tunisie Dr Noomen Hmidet FSS-Tunisie Dr Riadh Badraoui FMT-Tunisie Dr Slim Abdelkefi ENIS-Tunisie Dr Zouhair Noumi FSS-Tunisie Dr Walid Kriaa FSS-Tunisie MC Mohamed Bouaziz ISBS-Tunisie Dr Bessam Khemakhem ISBM-Tunisie 5

6 19, 20, 21 et 22 décembre 2012 Hôtel EL Mouradi Douz - Tunisie Programme du 1er Congrès de l Association Tunisienne de Physiologie & de Biosurveillance de l Environnement Mercredi 19 Décembre Accueil des participants & Inscriptions Cérémonie d ouverture Monsieur le Ministre de l Enseignement Supérieur et de la Recherche Scientifique Monsieur le Président de l Université de Sfax. Monsieur le Doyen de la Faculté des Sciences de Sfax Monsieur le Président de l ATP-BE Session 1 Présidents : Pr. Mondher El JAZIRI (Université Libre de Bruxelles Belgique) Pr. Emna AMMAR (ENIS, Sfax.Tunisie), Pr. Abdelfettah El FEKI (FSS. Sfax.Tunisie) Conférence 1 : Etudes épidémiologiques sur les risques sanitaires des métaux lourds, dioxines et PCB polluant l environnement. Pr. Badiaa Lyoussi (Université de Fès. Maroc) Conférence 2 : Considérations toxicocinétiques dans l'interprétation des données biologiques d'exposition aux contaminants de l'environnement. Pr. Michèle Bouchard (Faculté de Médecine de Montréal. Canada) Communications orales (PO > PO6) Présidents : Pr. Emna AMMAR (ENIS, Sfax.Tunisie) ; Pr. Ferjani BEN ABDALLAH (FSS. Sfax.Tunisie) ; CO1. Boutheina Gargouri, Olfa Dridi, Souhel Kallel, Mohamed Bouaziz, &Ridha Abdelhedi electrochemical treatment of produced water generated by petrochemical industry CO2. Farah Chettibi, Meriem Aberkane, Badis bakhouche, khalil Draidi, Hassiba Zediri, Zihed Bouslama & Mousa Houhamdi Ecologie de la Reproduction de l Érismature à tête blanche Oxyura Leucocephala dans le lac Tonga (nord-est algérien) CO3. Najoua Msilini, Thouraya Amdouni, Robert Carpentier, Zeineb Ouerghi. Inhibition of electron transfer from the quinone acceptor QA to QB by iron deficiency CO4. Ibtissem Louiz, Sélim Aït-Aïssa, Mossadok Ben-Attia, Olivier Palluel & Oum Kalthoum Ben-Hassine Gobius niger as a relevant bioindicator for lagoons biominoring: A case study of the Bizerta lagoon (Tunisia) CO5. Olfa Dridi Gargouri, S. Kallel Trabelsi, R. Abdelhedi, E. Brillas. Oxydation électrochimique de l acide syringique en milieu aqueux sur des électrodes d oxydes de plomb CO6. Younes Bouallegui, Ridha Ben Younes, & Ridha Oueslati Impact du Cadmium ou Chysène sur l'expression des gènes MgBD3, Lysozyme, Catalase et SOD chez Mytilus galloprovincialis Dîner 6

7 Jeudi 20 Décembre Session 2 Présidents : Pr. Monique SIMMONDS (Kew Garens Jodrell Laboratory,UK ) ; Pr. Nozha COHEN (Institut Pasteur du Maroc, Maroc) ; Pr. Amina Bakhrouf (Faculté de Pharmacie. Monastir. Tunisie); Conférence 3: Plant-bacteria interaction and biotechnological applications: the Rhodococcusfascians case. Pr. Mondher El JAZIRI (Université Libre de Bruxelles Belgique) Conférence 4: Technologies for Advanced Wastewater Treatment: Application for a Sustainable Regional Development. Pr. Mohamed KSIBI (Institut Supérieur de Biotechnologie de Sfax. Tunisie) Pause Café Conférence 5 : Les légionelles dans l environnement : risques et prévention Pr. Nozha COHEN (Institut Pasteur du Maroc) Communications orales (PO > PO12) Présidents : Pr. Mondher El JAZIRI (Université Libre de Bruxelles. Belgique) ; Pr. Amina Bhakrouf (F. Pharmacie Monastir.Tunisie) CO7. Jalila Tai, Mostafa Mliji, Mohamed Nabil Benchekroun, Mly Mustapha Ennaji, Mariam Mekkour, Hayat Ennaji, Nozha Cohen, Influence des matériaux et de la température de distribution de l eau chaude sur la formation de biofilm par Legionella pneumophila CO8. Nihed Ben Halima, Imen Fendri, Mohamed-Ali Ayadi,Slim Abdelkafi & Bassem KhamekhemValorisation biotechnologique de l avoine (Avena sativa L.) CO9. Khaoula AYARI, MAHROUKI Sihem, BOUROUIS Ame, CHIHI Hela, BEN MOUSSA Mohamed & BELHADJ Omrane. Implication of the enzymatic mechanism in the emergence and dissemination of multiresistant strain of Pseudomonas aeruginosa CO10. MEKKOUR Mariam, BEN DRISS El khalil, JARRAUD Sophie,SQUINAZI Fabien, TAI Jalila, COHEN Nozha. Legionella pneumophila sérogroupe 1 dans le réseau d eau chaude sanitaire au Maroc: Caractérisation par électrophorèse en champs pulsé et Anticorps Monoclonaux CO11. Youssef Lahbib, Anwar Meliki, Ionan Marigomez et Najoua Trigui El Menif. Accumulation du Cuivre, Zinc et Cadmium chez le gastéropode marin Hexaplex trunculus collecté dans les côtes tunisiennes CO12. Zouhir Mallek, Imen Fendri, Radhouane Gdoura. Role de la supplemetation de la zeolite dans la production de chair Déjeuner Session 3 Présidents : Pr. Badiaa Lyoussi (Université de Fès. Maroc) ; Pr. Mohamed KSIBI (Institut Supérieur de Biotechnologie de Sfax. Tunisie); Pr. Ferjani BEN ABDALLAH (Faculté des Sciences de Sfax. Tunisie) Conférence 6 : Unlocking the power of plants Pr. Monique SIMMONDS (Kew Garens Jodrell Laboratory, UK ) 7

8 Conférence 7 : Activités biologiques de quelques espèces extrêmophiles, identification de leurs composés phénoliques et utilisations industrielles Pr. Riadh Ksouri (Centre de recherche Borj Cedria, Tunisie) Pause Café Conférence 8 : Place de la phytothérapie dans la lutte contre la chute des cheveux Dr. Mohamed DAMAK (Association Tunisienne de Phytothérapie clinique, Tunisie) Conférence 9 : Les argiles et la Santé Dr. Ahmed CHAKROUN (Médecin Phytothérapeute, Tunisie) Communication orales Communications orales (PO > PO18.) Présidents : Pr. Raoudha Jarraya (FSS. Sfax, Tunisie) ; Mohamed BOUAZIZ (Institut Supérieur de Biotechnologie de Sfax. Tunisie) CO13. Lahmer Imen, Belghith Karima et Ben abdallah Ferjani. Exploration de quelques activités antioxydantes d une espèce spontanée: Pergularia tomentosa CO14. Ines Jallali, Yosr Zaouali, Riadh Ksouri & Chedly Abdelly Effect of geographical variation on chemical composition, antioxidant and antibacterial activities of the Tunisian edible halophyte Inula crithmoїdes essential oil CO15. Jamila Bettaib, Mariem Saada, Mohamed Baaka, Abderrazak Smaoui, Chedly Abdelly et Riadh Ksouri Composition phénolique et activités antioxydantes de l espèce Polygonum equisetiforme CO16. Mohamed MIHOUBI, Wafa MIHOUBI, Ali GARGOURI, Mohamed DAMAK 1 et Raoudha JARRAYA Composition Chimique et activités biologiques des huiles essentielles de «Senecio gallicus» CO17. Yousri Grojja, Imed Koubaa, Mohamed Trigui, Slim Tounsi, Nicolas Fabre, Mohamed Damak & 1 Raoudha Jarraya Chemical composition and antioxidant activity of essential oils of Cynara cardunculus L. from Tunisia CO18. Faten Omezzine, Mejda Daami-Remadi, Afef Ladhari & Rabiaa Haouala. Effet de la colchicine et du stade de développement sur les potentialités antifongiques de Trigonella foenum-graecum L Diner Session Posters Session 4 Vendredi 21 Décembre 2012 Présidents : Pr. Badiaa Lyoussi (Université de Fès. Maroc) ; Pr. Leila Tekaya-Mannoubi (Faculté de Médecine. Tunis.Tunisie) ; Pr. Abdelfettah El FEKI (FSS. Sfax.Tunisie), Conférence 10 : Stress oxydant et nutrition: intérêt de la supplémentation en antioxydants Pr. Mahfoudh Messarah (Université de Annaba, Algérie) Conférence 11 : Les coproduits de l'olivier, déchets ou matières premières d'avenir? Pr. Mohamed BOUAZIZ (Institut Supérieur de Biotechnologie de Sfax. Tunisie) Pause Café Conférence 12 : La phytoremediation: Un procédé prometteur Pr. Ferjani BEN ABDALLAH (Faculté des Sciences de Sfax. Tunisie) 8

9 Communications orales (PO > PO24.) Présidents : Pr. Mahfoudh Messarah (Université de Annaba, Algérie) ; Pr. Dalila Saidane (F. Pharmacie Monastir) ; Pr. Abdelfettah El FEKI (FSS. Sfax. Tunisie) CO19. Ahlem Ben Slima, Ameni Ellouze, Radhouane Gdoura L impact des pesticides sur la fertilité des souris mâles fertiles CO20. Ezzeddine Bourogaa, Raoudha Jarraya, Mohamed Damak, & Abdlfattah El Feki Hammada scoparia modulates GSK-3 β pathway in liver rat during ethanolintoxication CO21. Mohamed Ali BOUJBIHA, Ghada BEN SALAH, Riadh NCIRI, Ali BOUSLAMA, Asma OMEZZINE, Hassen KAMOUN, Faiza FAKHFAKH and Abdelfattah EL FEKI Hematological and Splenic Toxicity in Mercuric Chloride Treated Rats: Association with Oxidative Stress CO22. Mondher Boulaaba, Soninkhishig Tsolmon, Junkyu Han, Kiyokazu Kawada, Abderrazak Smaoui 1, Hiroko Isada, Riadh Ksouri & Chedly Abdelly Antiproliferative effect of Arthrocnemum indicum extracts on the control of the cell cycle arrest in Caco-2 human colon cancer cells CO23. Samira Missaoui, Mounira Tlili, Mohsen Sakly, Khémais Ben Rhouma & Olfa Tebourbi.Impact du sulfate de vanadium sur la fonction hépatique chez les rats normaux et diabétiques CO24. Hichem Alimi, Zouhour Bouoni, Najla Hfaeidh, Sakhria Mbarki, Mohsen Sakly and Khémais Ben Rouma. Protective effect of Opuntia ficus indica f. inermis prickly pears juice against ethanol-induced hepatic and renal oxidative stress in rats Déjeuner Départ au Sahara, Diner et soirée folklorique Samedi 22 Décembre Session 5 Présidents : Pr. Badiaa Lyoussi (Université de Fès. Maroc)Pr. Mondher El JAZIRI (Université Libre de Bruxelles Belgique) ; Pr. Radhouane GDOURA (FSS, Sfax.Tunisie), Communications orale (PO > PO 33) CO25. Faten Saïdane Bchir, Anouar El Falleh, Emna Ghabbarou, Hamdi Moktar Bioethanol production from microalgae isolated from slaughterhouse wastewater CO26. Assaâd Sila, Zeineb Kamoun, Mohamed Makni et Ali Bougatef Activité antidiabétique in vivo de l astaxanthine extrait à partir des déchets de crevettes (Parapenaeus longirostris) CO27. Mouna Chakroun, Mohamed Makni, and Bassem Khemakhem. Analgesic and anti-inflammatory activities of the ethanolic and methanolic extracts of the Phoenix Dactylifera L. leaves. CO28. Zayneb Chaâbene, Bassem Khemakhem, Amine Elleuch and Hafedh Mejdoub. Copper excess induced morphological, physiological and proteomic changes in germination and growth of fenugreek seeds CO29. Hanen Ben Ayed, Noomen Hmidet, Philippe Jacques, Valérie Leclère, Max Béchet, Moncef Nasri. Detection and production of mixture of fengycin and surfactin by Bacillus mojavensis A21 CO30. Hana Maalej, Noomen Hmidet, Alain Heyraud & Moncef Nasri Structural investigation of a gel forming exopolysaccharide substituted with a lactyl ether group produced by Pseudomonas stutzeri AS22 CO31. Rahma Trabelsi, Mohamed Ali Triki, Yâakoub Gharbi, Ali Rhouma, Samira Krid, Ines Hammemi and Radouane Gdoura Inventory of phytopathogenic soilborne fungi causing wilt and die-back disease olive tree in Tunisia 9

10 Pause café CO32. Jomni Chiraz, Omar tarak, Ben Abdallah Ferjani.Comportement des plantes d olivier sur des substrats contenant différentes proportions de phosphogypse Table ronde Clôture et remise des prix 10

11 Liste des Communications P.3. CHEDAD Abdelwahab, BERRAYAH Mohamed. Les principales méthodes de la biosurveillance. P.5. Abdessalem HAMMOUDA & 2 Slaheddine SELMI. Prévalence des anticorps anti-influenza A chez le Goéland leucophée Larus michahellis nichant dans le golfe de Gabès-Tunisie P.6. Adel Najdib Chaker, Habiba Boukhebti, Noura Abidri et Masaoud Ramdhani. Variabilité de la composition chimique des huiles essentielles de trois plantes médicinales appartenant à la famille des lamiacées P.7. Afef Ladhari, Faten Omezzine, & Rabiaa Haouala. Allelopathic effect of Capparis spinosa L. P.8. Ayadi Ahlem, Maghraoui Samira, Sayda Kammoun & Tekaya Leila Gadolinium in the lactating mammary gland tissue. Ultrastructural, microanalytical and endocrinological study P.9. Youcef Necib, Ahlem Bahi, & Sakina Zerizer Protective role of selenium against mercuric chloride induced oxidative stress in rat Albinos Wistar. P.10. Ahlem Ben Slima, Ameni Ellouze, Radhouane Gdoura L impact des pesticides sur la fertilité des souris mâles fertiles P.13. BEN HASSANA Amal, FENDRI Imen, GDOURA Radhouane. Real-time PCR as a tool for detection of Salmonella spp. isolated from Tunisian broilers and comparison with culture traditional method P.15. Hadj-Ziane-Zafour, D. Youcefi et K. Belkadi Valorisation mukorossi en tant que biopesticide des substances bioactives extraites du sapindus P.16. Amina Ben Saad, Youssef Samet & Ridha Abdelhédi Traitement de la margine par le procédé d oxydation avancée photo-fenton P.17. Amina Dhieb, Amine Elleuch, Walid Kriaa and Nourredine Drira. The Complete Chloroplast and Mitochondrial GenomeSequences of Phoenix dactylifera: Insights into the Evolution P.18. Amira EL AREM, Emna Behija SAAFI, Fatma GHRAIRI, Amira TAHOURI, Mouna ZEKRI & Lotfi ACHOUR, Protective effect of date fruit extract on dichloro and trichloroacetic acids induced damage on liver biomarker and modified glycemie and hemoglobin levels P.19. Ridha Dalhoumi, Amor Hadfi, Patricia Aîssa & Stéphane Aulagnier. Pipistrellus kuhlii du Parc National de Bou Hedma : Suivi annuel et terrains de chasse P.20. Anouar Abidi, Raja Beji, Nadia Kourda, Moncef Feki & Saloua Ben Khamsa Role of flaxseed oil in reducing inflammation in an experimental model of lung fibrosis induced by bleomycin in rats P.21. Anouar Feriani, Hichem Alimi Sakhria Mbarki, Sabah Dhibi, Abdlfattah El Feki & Mhd Salah Allagui Exploration des effets toxiques de la deltamethrine sur la fonction rénale et évaluation de l effet protecteur de la vitamine C P.22. Boucif Asma, Bendjeddou Mouna, & Khelili kamel Evaluation d une agression chimique d une combinaison des solvants : toluène et xylène, administrées par gavage sur la reproduction masculine chez lapin mâle adulte Cuniculus lepus P.23. SENOUSSI Asma, SAOUDI Zineddine, AISSAOUI ZITOUN Ouarda, ZIDOUNE Mohamed Nasereddine Caractérisation microbiologiques de la peau de chèvre utilisée dans la fabrication d un formage tradionnel algérien. P.24. Assaâd Sila, Zeineb Kamoun, Mohamed Makni et Ali Bougatef Activité antidiabétique in vivo de l astaxanthine extrait à partir des déchets de crevettes (Parapenaeus longirostris) P.25. Assia Djeffal, Lilia Kadeche, Amel Boumendjel, Mahfoud Messarah. Effet protecteur de la vitamine C contre la néphrotoxicité induite par le méthomyl chez le rat de la souche wistar 11

12 P.26. Aymen Souid, Raoudha Abdellaoui, Karim Ben Hamed, Chedly Abdelly & Mohamed Neffati. Effect of natural long storage duration on seed germination characteristics of Periploca angustifolia Labill. P.27. Boutheina Gargouri, Olfa Dridi, Souhel Kallel, Mohamed Bouaziz, &Ridha Abdelhedi electrochemical treatment of produced water generated by petrochemical industry P.28. Chafik Redha Messaï, Djamel Khelef, Karima Tamina Boukhors, Mossadek Hamdi-Taha & Rachid Coucem Antibiotic resistance patterns of Escherichia coli strains isolated from broiler chicken affected with colibacillosis in Algeria P.29. MBADRA chaker, BAHLOUL Moez, BEN ABDALLAH ferjani et AZRI chafai La pollution particulaire dans le secteur sud de la ville de Sfax : Suivi, simulation et analyse P.30. Jomni Chiraz, Omar tarak, Ben Abdallah FerjaniComportement des plantes d olivier sur des substrats contenant différentes proportions de phosphogypse P.32. D. AOUADI AND H. BEN SALEM Effects of oral administration of essential oils extracted from Rosmarinus officinalis and Artemisia herba alba on rumen fermentation in Barbarine sheep P.33. EL-Attafia BENHAMIMED, Fatiha Missoun. (Mostaganem, Algeria) Determination of some plants purifying Stidia Lagoon P.34. Ezzeddine Bourogaa, Raoudha Jarraya, Mohamed Damak, & Abdlfattah El Feki Hammada scoparia modulates GSK- 3 β pathway in liver rat during ethanol-intoxication P.35. Farah Chettibi, Meriem Aberkane, Badis bakhouche, khalil Draidi, Hassiba Zediri, Zihed Bouslama & Mousa Houhamdi Ecologie de la Reproduction de l Érismature à tête blanche Oxyura Leucocephala dans le lac Tonga (nordest algérien) P.36. Bounaceur F Djemai I Senouci H Rezzoug W et Samraoui B Les odonates un model de biosurveillence de la qualité des écosystèmes humides au niveau de l Atlas Blidéen P.37. Faten Dendana, Hayet Sellami, Houaida Trabelsi & Ali Ayadi Acanthamoeba T4 genotype associated with keratitis infections in Tunisia P.38. Faten Medini, Samia Oeuslati, Serge Lavoie, Jean Legault & Riadh Ksouri. Anticancer activity of gallic acid purified from a halophyte Limonium densiflorum on human adenocarcenome colorectal cell line (DLD1) P.39. Faten Omezzine, Mejda Daami-Remadi, Afef Ladhari & Rabiaa Haouala. Effet de la colchicine et du stade de développement sur les potentialités antifongiques de Trigonella foenum-graecum L. P.40. Faten Saïdane Bchir, Anouar El Falleh, Emna Ghabbarou, Hamdi Moktar Bioethanol production from microalgae isolated from slaughterhouse wastewater P.41. Fatiha Malki, Abdelkader Touati, Kahina Hamza. Effet des substituants sur l activité antioxydante des anilides P.43. Fatima Oukerro-Haouari, Jihène Khouja & Mustapha Haouari Evaluation de la contamination par les aflatoxines de certains fruits secs: (Sorgho, Pistaches, Amandes et Arachides) P.45. Mseddi Fatma, Jarboui Mohammed Ali, Sellami Hayet & Ayadi Ali Environmental distribution and characterization of Cryptococcus neoformans in the Sfax region Tunisia P.46. Sabri Fatima Zohra, Belarbi Meriem, Beghdad Chokri, Sabri Samira. The importance of some biomolecules of mallow. P.48. ABIDI Fethia, BEN RAYANA Chiheb, BENLASFAR Zakaria, BEN SALAH Faiçal Impact of chronic toxicity of lead on the endocrine system in pubescent male rats. P.49. AMAMOU Fouzia, BOUAFIA Miloud, MEZIANE Radjaa, DIDI Amel, YAZIT Sidi Mohamed, CHABANE SARI Daoudi. Effect of Citrulus colocynthis extracted oil on cadmium induced nephrotoxicity in rats 12

13 P.50. ALLAILI Hadjar, MEZIANE Khadidja, KERFOUF Ahmed Inventaire des zooplanctons du lac Sidi M hamed Ben Ali et impacte de la pollution sur ses espèces P.52. Hadjer Boussoussa & Mohamed Yousfi Antioxidant and antimicrobial activities of natural phenolic extracts from Rhanterium adpressum flowers P.53. Hafedh RIGANE, Khaled MEDHIOUB Effects of valorization of olive mill wastewaters by spreading on soils and co-composting with industrial organic wastes in semiarid Mediterranean soil P.54. Hafida Gaffour & Malika Mokhtari Elimination of 4-nitrophenol by using TiO 2 semiconductor under solar radiation P.55. Ben Othman, H., Rekik, M., Lassoued, N. Innovative itineraries minimizing hormones to synchronize and induce Oestrus and ovulation in goats P.56. Hana Maalej, Noomen Hmidet, Alain Heyraud & Moncef Nasri Structural investigation of a gel forming exopolysaccharide substituted with a lactyl ether group produced by Pseudomonas stutzeri AS22 P.57. Hanen Ben Ayed, Noomen Hmidet, Philippe Jacques, Valérie Leclère, Max Béchet, 1 Moncef Nasri. Detection and production of mixture of fengycin and surfactin by Bacillus mojavensis A21 P.58. Hanène Ben Miled, Riadh Ksouri, Olfa Tebourbi Antioxidant activities and phenolic content of Rhus tripartitum L. P.60. DJENIDI H.1, BENTCHICOU M2., BACHA S.1 et BENGHARAICHI F1. Valeur thérapeutique de biomolécules extraits du pistachier de l atlas Algérien P.61. El Moussouli Hind and Imziln Boujamâa. Research and characterization of Legionella spp in different aquatic environment of Marrakesh Morocco P.63. Hmed ben Nasr, Riadh Badraoui, Lobna Mahmoudi, Hammami Serria, Khaled Zghal Aqueous leaves extract of Artemisia campestris inhibition of the scorpion venom induced hypertension. P.65. Khadidja Houda Benabed, Nadhir Gourine, Mohamed Ouinten & Mohamed Yousfi. Chemical composition, antioxidant and antibacterial activities of Thymus vulgaris essential oil P.67. Houda Hamed, Abdelfattah El Feki, Ahmed Gargouri Contribution of plasmin activity and somatic cell count in proteolysis of camel and cow milk P.68A. Ibtissem Louiz, Sélim Aït-Aïssa, Mossadok Ben-Attia, Olivier Palluel & Oum Kalthoum Ben-Hassine Gobius niger as a relevant bioindicator for lagoons biominoring: A case study of the Bizerta lagoon (Tunisia) P.68B. Ibtissem Louiz, Olivier Palluel, Sélim Aït-Aïssa, Mossadok Ben-Attia & Oum Kalthoum Ben-Hassine Factors influencing antioxydant biomarkers, TBARS and GSH tot activity, in Gobius niger (Gobiidae) from Bizerta lagoon, Tunisia. P. 69. Ihcen Khacheba, Amar Djeridane, Mohamed Yousfi. Évaluation de l activité antioxydante et étude du pouvoir d inhibition des extraits phénoliques naturels sur l α - glucosidase et l α - amylase P.70. Amouri I., Abbes S., Hadrich I., Karray M, Sellami H., A. Ayadi.Etude de l immunité humorale locale en cas de Candidose Vulvovaginale P.72. Imen Ben Mahmoud, Bouhaouach Habib, Emna Ammar, Khaled MedhioubPalm residues composting for soil amendment in Chenini Oasis (Gabes Region, Tunisian Southeast) P.74. Imen Fendri, Rania Ben Saad, Bassem Khemakhem, Nihed Ben Halima, Radhouane Gdoura 1 and Slim Abdelkafi. Effect of treated and untreated domestic wastewater on seed germination, seedling growth and amylase and lipase activities in Avena sativa L. P.75. Lahmer Imen, Belghith Karima et Ben abdallah Ferjani. Exploration de quelques activités antioxydantes d une espèce spontanée: Pergularia tomentosa 13

14 P.78. Ines Jallali, Yosr Zaouali, Riadh Ksouri & Chedly Abdelly Effect of geographical variation on chemical composition, antioxidant and antibacterial activities of the Tunisian edible halophyte Inula crithmoїdes essential oil P.79. Ines Khlif, Karim Jellali, Mohamed Ayedi, biological activity of olea europaea extracts Noureddine Allouche Characteristics, chemical composition and P.80. Ines MAALEJ-ACHOURI; INES BELHADJ-BEN ROMDHAN, Mouna CHELLIGUE and Hafedh BELGHITH. Xylanase application for biological production of xylitol from wheat bran hydrolysate P.81. Zrafi Ines; Bakhrouf Amina ; Saidane-Mosbahi Dalila Investigation de la contamination par les hydrocarbures aliphatiques et polycycliques et leurs origines possibles dans l environnement P.82. Insaf BANKAJI, Noomene SLEIMI, Rosa P. Clemente, Aurelio G. Cadenas Répartition des phytohormones chez Atriplex Halimus traitée par le Cd P.83. Issam Saidi, Yassine Chtourou, Marwa Ayouni, Amina Dhieb, Wided Chaïbi, & Wahbi Djebali. Role of salicylic acid in regulating cadmium induced oxidative stress in bean (Phaseolus vulgarus) roots P.84. Jalila Tai, Mostafa Mliji, Mohamed Nabil Benchekroun, Mly Mustapha Ennaji, Mariam Mekkour, Hayat Ennaji, Nozha Cohen, Influence des matériaux et de la température de distribution de l eau chaude sur la formation de biofilm par Legionella pneumophila P. 85. Jalila Ben Salah-Abbès, Samir Abbès & Ridha Oueslati. Immunotoxicity of Zearalenone counteracted by Raphanus sativus extract and Tunisian Montmorillonite composite P. 86. Jamel Mejri, Nesrine Zakhama, & Safouane Ben Sik Ali.Investigation de la composition chimique de l huile essentielle et des extraits organiques de Pinus halepensis poussant en Tunisie P.87. Jamila Bettaib, Mariem Saada, Mohamed Baaka, Abderrazak Smaoui, Chedly Abdelly et Riadh Ksouri Composition phénolique et activités antioxydantes de l espèce Polygonum equisetiforme P.89. Jihen Maâtoug Béjaoui, Tahani Ayari, Ferdaous Jaafar Kefi et Najoua Trigui El Menif ; Malformations morphologiques du pied chez la praire Venus verrucosa prélevée au nord de la Tunisie P.90. Zekri j, Lehout A, Souilah N.Evaluation des teneurs métalliques et minérales dans des sols amendés par les boues résiduaires chez végétaux P.91. Sawssen Hajji, Islem Younes, Olfa Ghorbel, Moncef Nasri & Kemel Jellouli Extraction and characterization of chitin and chitosan from Tunisian marine sources P.92. Bouterfas Karim, Zoheir Mehdadi, Bachir Bouidjra Sallah Edine & Benchiha Walid. Bio-surveillance de la pollution atmosphérique de la ville de Sidi Bel Abbés (Nord Ouest Algérien) par le biais des bio-indicateurs lichéniques. P Khadija BAZOUZI, & 1 Rachid ROUABHI Effects assessment of Rimon only, and combined with calcium on aquatic eukaryotic model P.94. Meziane Khadidja, ALLAILI hadjer, Kerfouf Ahmed. Inventaire et analyse écologique des mollusques de la zone intertidale de la cote ouest Algérienne P.95. Khaled BELLASSOUD, Jos Van PET, & Abdelfattah ELFEKI Hepatotoxicité et stress oxydatif chez les rats induits par la toxicité des organes de la saupe P.96. Khaled BOUCHAMA, Rachid ROUABHI, khadija BAZOUZI Antioxidative response in leaves and roots of Phragmites australis treated with cadmium P.97. Boutemak. K, Medjdoub. R, Tedjini. A, Laribi.H Composition chimique de l huile essentielle d Ajuga iva L. Et détermination de l activité antibactérienne P.98. AYARI Khaoula, MAHROUKI Sihem, BOUROUIS Ame, CHIHI Hela, BEN MOUSSA Mohamed & BELHADJ Omrane. Implication of the enzymatic mechanism in the emergence and dissemination of multiresistant strain of Pseudomonas aeruginosa 14

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18 P.178. Rayda Siala, Nahed Fakhfakh, Ibtissem Hamza-Mnif, Moncef Nasri, Tatiana Vallaeys, and Alya Sellami-Kamoun Arthrobacter arilaitensis Re117 Oxidant-stable Alkaline Metalloprotease: Purification and Biochemical Characterization P.180. Riadh Badraoui, Hmed Ben-Nasr, & Tarek Rebai Malignant Walker 256/B cells-induced tumor osteolysis in rats; effects of α-tocopherol supplementation P.181. Riadh Nciri, Mohamed Salah Allagui, Abdelfattah Elfeki, Christian Vincent, Françoise Croute Post-translational modification of GRP94 and HSP27 under chronic treatment with low lithium concentrations in SH-SY5Y neuronal cells P.182. Ridha Dalhoumi, Amor Hadfi, Patricia Aîssa & Stéphane Aulagnier Effet des micropolluants (Cadmium et Phénanthrène) sur quelques paramètres hémolymphatiques de la moule méditerranéenne (Mytilus galloprovincialis). P.183. Ridha Dalhoumi 1, Amor Hadfi 1, Patricia Aîssa 1 & Stéphane Aulagnier Pipistrellus kuhlii du Parc National de Bou Hedma : Suivi annuel et terrains de chasse P.185. Rym Ouni, 2 Hassouna Gouta & 1 Messaoud MarsMorphométrie florale et suivi de la floraison chez des cultivars locaux d amandier Prunus dulcis (Mill.) D.A.Webb P.186. Rim NASRI, Ikram Ben Amor, Ali Bougatef, Naïma Nedjar-Arroume, Maha Karra-Chaâbouni 1, Pascal Dhulster, Jalel Gargouri et Moncef NasriCaractérisation d activités anti-thrombotiques et antihypertensives dans les hydrolysats protéiques du muscle de Gobie (HPMG) pour une valorisation dans le domaine pharmaceutique et nutraceutique. Identification de peptides bioactifs P.187. Sabah Dhibi 1, Sakhria Mbarki 1, Abdlfattah El Feki 1 & Najla Hfaiedh L effet protecteur d Eucalyptus globulus réduit les effets toxiques induits par l acétaminophéne chez le rat mâle au niveau des paramètres hématologiques P.188. Saber Abdelkader Saïdi Mohamed Salah Azaza, Petra Windmolders, Jos van Pelt, & Abdelfattah El-Feki Effect of Cd, Pb and Hg found in tuna by-product on antioxidants enzymes expression in hepatic rat cell line FTO2B P.189. BOUCETTA Sabrine, ADJADJ Nadjah radia, ADJEL Nour el houda Evaluation et modélisation des impacts de l Entreprise Nationale des Produits ElectroChimiques Unité Affinage du Plomb P.190. Sabrine Sellimi, Donia Mili, Mohamed Hajji, & Moncef Nasri Antioxidant and antiproliferative properties of a brown marine seaweed collected from a Tunisian island P.191. Safouane BEN SIK ALI, Jamel MEJRI & Mouna MHADHBI Etude comparative du comportement des différentes huiles et graisses végétales raffinées vis-à-vis à la friture P.192. Sahla Bel hadj, Olfa Hentati, Khaled Hamdène & Abdelfattah El Feki Effects of Sardine oil administration on the variation of some renal plasmatic parameters and histological properties of the kidney of diabetic rats P.193. Sakhria Mbarki, Sabah Dhibi, Abdlfattah El Feki & Najla Hfeidh L effet préventif du Chlorure de magnésium contre le stress oxydatif induit par le tétrachlorure de carbone sur la fonction hépatique P.194. Salha Boulila, Mallek Kawthar, Abdlfattah El Feki & Hafedh El Feki. Etude des impacts biologiques et physicochimiques d un biomatériau apatitique sur la maturation de l os chez le rat male de souche «wistar» P Taleb Salima, Boulaba Kafila. Syndrome métabolique et interactions de quelques paramètres biochimiques chez le sujet obèse et le patient diabétique type 2 P.196. Sami SAIDI, Marie-Pierre BELLEVILLE, André DERATANI and Raja BEN AMAR Production of Interesting Peptides Fractions by Enzymatic Hydrolysis of Tuna Dark Muscle By-product Using Alcalase P.197. Benhamiche Samia, Chabane Kheira, Benhassaini Hachemi. Etude préliminaire de la physiologie de germination du févier d Amérique (Gleditsia triacanthos L.) et perspectives de valorisation en Algérie P Somia Lakhdari, 2 Yamama Nedjar, 3 Hizia Smail & 4 Balgacem Houha L impact de l agriculture sur la qualité des eaux souterraines dans le bassin versant de Foum El Gueiss (Wilaya de Khenchela-Algérie) P S. Khnissi, N. Lassoued, H. Ben Salem, M. Rekik, K. Krayem Physiological and chemical responses to water deprivation in Barbarine ewes 18

19 P.200. Oueslati Samia, Lavoie Serge, Legault Jean, Pichette André, Girard-Lalancette Karl, Chedly Abdelly, Ksouri Riadh. Assessment of antioxidant, anti-inflammatory and anticancer activities of new flavonol glycoside isolated from medicinal halophyte Suaeda fruticosa P.202. Samira Akkache, Ourdia Slimani, Malika Mansour & Salem Aired Valorisation d un résidu de culture de champignon comestible (Pleurotus ostreatus) sur grignon d olive dans l alimentation des lapines en reproduction P.203. Jebahi Samira, Oudadesse Hassane, Hafedh Elfekih, Nacer Abdessalem Tarek Rebai, 4 Hassib Keskes, 2 Abdlfattah El Feki The Strontium-doped bioactive glass: a Bone Grafting Material without adverse effects on the mineral profile P.204. Samira Krid, Ali Rhouma, Ajmi Larbi, Mongi Msallem. Houssem Baklouti, et Mohamed Ali Triki Susceptibility of an olive progeny (Picholine Meski) to olive leaf spot disease caused by Fusicladium oleagineum P.205. Samira Maghraoui, Ahlem Ayadi, Abderraouf Jebali, Tekaya Walid-Habib, Ben Rayana Med-Chiheb et Tekaya Leila Effets de l administration intrapéritonéale de l or sur la fonction endocrine et exocrine des testicules P.206. Samira Missaoui, Mounira Tlili, Mohsen Sakly, Khémais Ben Rhouma & Olfa Tebourbi.Impact du sulfate de vanadium sur la fonction hépatique chez les rats normaux et diabétiques. P.207. Samira Nia, & Mohamed Yousfi Extraction et quantification des composés phénoliques P.208. Sana Banaceur, Marie Pierre Blanchard, Kevin Baranger, Eliane Charrat, Abdelmelek Hafedh 3, Sakly Mohsen, Michel Khrestchatisky and Lotfi Ferhat Study of the effects of inflammation on the regulation of the expression of drebrin in primary cultures of neurons and glial cells P.209. S. El fadeli, R. Bouhouch, A. El abbassi, M. Chaik¹, A. Aboussad 3, N.Lekouch¹, R. F. Hurrell², M.B. Zimmermann ², A.Sedki¹.The risk of environmental contamination of lead on food chain from Marrakech area, Morroco P.210. Saoussen Ben Abdallah, Lisa Amilot, 1 Najoua Mssilini, 3 Hanen Falleh, 2 Abdelali Hannoufa, Mokhtar Lachaâl & Najoua Karray Bouraoui. Production des caroténoïdes et des flavonoïdes chez deux espèces du genre Solanum: Solanum nigrum L. et Solanum villosum L. sous contrainte saline P.211. Sarra Khlifi, Faouzi.Raoufi, Halima Ben Ahmed, Hajer Abaza, Houda Ben Jemaa, Abdelmajid Abid, Fethi Guemira, Ali Belhani, Abdallah Aouidet. Alpha tocopherol and lipid profile in Tunisian Type 2 diabetic patients with and without cardiovascular diseases. P LEZZOUM S; 1 HAMDI TM; 2 BENDEDDOUCHE B.Outils de la gestion alimentaire : le HACCP méthodologie et impacts. de la qualité et de la sécurité P.213. BEKKA S., DJEBBAR R. et ABROUS-BELBACHIR O.Effet de la proline exogène sur le comportement morphologique et physiologique d une monocotylédone et d une dicotylédone sous contrainte hydrique P.215. Sihem Banasr, Oualid Sbai, Sana Banaceur, Adlane Ould-yahoui, Yatma Gueye, Michel Khrestchatisky, Mohsen Sakly and Hafedh Abdelmelek. Electromagnetic field exposure and neural cells P.216. Sihem Jebri, Fatma Hmaied, Joan Jofre, Francisco Lucena, Insaf Barkallah, Mouldi Saidi, & Moktar Hamdi Comparison of two methods for Enteroviruses detection in sludge samples P.217. Sonda Ammar, Amir Ben Mansour, Ridha Abdelhedi, Mohamed Bouaziz Etude comparative de la qualité et de la stabilité des huiles d olive obtenues par deux phases trois phases et repassage P.218. Zribi Soumaya & Tekaya Saïda Etude de l ovogenèse et de l ultrastructure des gamètes d une Annélide Polychète : Perinereis macropus dans le golfe de Gabès P.219. Takwa Bedhiafi, Samir Abbès, Jalila Ben Salah-Abbès 1 Ridha Ben Younes rhomnosus GG prevents Zearalenone immunotoxicological effects in Balb/c mice & 1 Ridha Oueslati Lactobacillus P.220. Tasnime Slama, Sami Abidli, & Najoua Trigui El Menif Biosurveillance de la pollution organostannique par la bernique Patella caerulea utilisée comme espèce bioaccumulatrice P Propriétés antibactériennes et antiprolifératives de plantes médicinales du Burkina Faso Ben Ajmia Wafa, Khannous Lamia, Traoré Al Ibrhim, Gdoura Radhouane 19

20 P.223. Wafa Kharroubi Nawa, Monia Zaouali, Fadwa Neffati, Mohammed Hammami, Rachid SaklyEffect of sodium arsenite on plasma gonadotrophins, testosterone and intratesticular testicular fluids in rats P.224. Wafa Marouane, Ahlem Soussi, Rim Frikha, Youssef Gargouri, Abdelfattah El Feki & Sofiane Bezzine Protective effects of Malva sylvestris on carrageenan-induced inflammatory paw edema in rats P225. Wahida Ghiloufi, Mohamed Chaieb Arid environnments intunisia are they prone to desertification P.226. Walid Kriaa, Hamadi Fetoui et Noureddine Drira, Caractérisation phénolique des extraits floraux de palmier dattier (Phoenix dactylifera L.) CV Deglet Noor et contribution à l étude de leurs propriétés biologiques P Y. Nedjar S. Lakhdari, M. Benounis L impact des rejets de la station d épuration de Khenchela sur la qualité des eaux souterraines du milieu récepteur région de Baghai wilaya de Khenchela P.230. YAZIT SIDI M., BOUAFIA M., AMAMOU F., MEZIAN R K., DIDI A., KHMMAR L., CHABANE SARI D. Effect de l huile des grains de la coloquinte sur les parameters biochimiques chez des rats males de souche wistar rendu obese par des régimes à base de 40% matière grasse. P.231. Y. BOUFERKAS, I. ZERIOUH, S. ADDOU, O. KHEROUA, D. SAIDI L effet de la consommation du lait de soja sur certains paramètres de la fonction de reproduction mâle chez la souris Swiss P.233. Younes Bouallegui, Ridha Ben Younes, & Ridha Oueslati Impact du Cadmium ou Chysène sur l'expression des gènes MgBD3, Lysozyme, Catalase et SOD chez Mytilus galloprovincialis P.234. Youssef Lahbib, Anwar Meliki, Ionan Marigomez et Najoua Trigui El Menif. Accumulation du Cuivre, Zinc et Cadmium chez le gastéropode marin Hexaplex trunculus collecté dans les côtes tunisiennes P.235. Djenane Zahia, Amezian Meriem, Yaici Lamia, Selama Okba, Darenfed Amel, Madour Nawel, Sadouk Zohra, Saidi Mahdia, Hamana Soukaina, Benayad Tahar, Ghozlane Najet 1, Abderrahmani Ahmedet Nateche Farida. Criblage de l activité entomocide, antifongique et antibactérienne chez des souches de Bacillus isolées en Algérie. P.236. Zayneb Chaâbene, Bassem Khemakhem, Amine Elleuch and Hafedh Mejdoub Copper excess induced morphological, physiological and proteomic changes in germination and growth of fenugreek seeds P.238. Zouhaier Noumi Does presence of birds influenced the direction of the interaction under arid bioclimate? A test from arid zone of Tunisia P.239. Hichem Alimi, Zouhour bouoni, Abdelfettah Elfeki, Mohamed Salah Allagui Protective effect of Aloysia triphylla extract against manganese-induced oxidative damage in rats reproductive system P.241. Amel Elarbi, Mohamed ali triki, Noureddine Drira & Gharsallah Neji Isolation, screening, Characterization and Antagonism Assay of PGPR Isolates from Rhizosphere of oases soil from south of Tunisia P.242. Mourad Jridi,Amel Kammoun, Imen Lassoued, Nadhem Sayari, Moncef chaâbouni & Moncef Nasri Screening factors influencing the extraction of gelatin from the skin of cuttlefish (Sepia officinalis), characterization and application. P.243. Ben Gara Amel, Hamden Khaled, Belghith Karim et Feki Abdelfattah. Extraction, caractérisation physicochimique et activité biologique des algues marines P.244. Inès Hammami, Mohamed Ali Triki, Aymen Mseddi & Radouane Gdoura Antifungal and antibacterial activity of leaf and essential oil extracts of Ruta montana L. from Tunisia P.245. Henda Keskes, Kais Mnafgui, Khaled Hamden, Mohamed DAMAK, Abdelfattah EL FEKI, & 1 Noureddine Allouche. In vitro anti-diabetic, anti-obesity and antioxidant proprieties of Juniperus phoenicea L. leaves from Tunisia P.246. Kais Mnafgui, Khaled Hamden, Mouna Kchaou, Hichem Ben Salah, Noureddine Allouche, Abdelfattah Elfeki Inhibitory activities of Zygophyllum album a natural weight-lowering plant on key enzymes in high fat diet-fed rats P.247. Raja Serairi Beji, Anouar Abidi, Rihab Zemni & 1 Saloua Ben Khamsa Antifibrosis effects of All-trans-Retinoic Acid in a rat model of bleomycin-induced pulmonary fibrosis 20

21 P.248. Leila SAADI and Rafika MATALLAH. RENAL PHYSIOPATHOLOGY IN RAT TREATED BY IMIDACLOPRIDE P.250. Ben Fraj Nesrine, Elleuch Amine, Dhieb Amina and Noureddine Drira In silico screening of genes involved in flowering in Date palm (Phoenix dactylifera L.) P.252. Hichem Alimi, Zouhour Bouoni, Najla Hfaeidh, Sakhria Mbarki, Mohsen Sakly and Khémais Ben Rouma. Protective effect of Opuntia ficus indica f. inermis prickly pears juice against ethanol-induced hepatic and renal oxidative stress in rats P Gdoura Morsi ; Khannous Lamia ; ketata Najib; Gharsallah Néji, Gdoura Radhouane Utilisation de la zéolithe dans l épuration des bivalves (Ruditapes decussatus) P Mohamed Chtourou 1, Boutheina Gargouri 1, Mohamed Bouaziz Evaluation of antioxidant capacity and Fatty acid characteristics of virgin olive oil from Chemlali Sfax vs Arbequina cultivated in Tunisia P.257. Yousri Grojja, Imed Koubaa, Mohamed Trigui, Slim Tounsi, Nicolas Fabre, Mohamed Damak & 1 Raoudha Jarraya Chemical composition and antioxidant activity of essential oils of Cynara cardunculus L. from Tunisia P Hanen Falleh, Mareim Saada, Riadh Ksouri & Chedly Abdelly Effet de la salinité sur la physiologie, la nutrition minérale et la capacité antioxydante de Mesembryanthemum edule P.264. Mongi Saoudi, Mahfoudh Messarah, Amel Boumendjel, Kamel Jamoussi, Choumous Kallel & Abdelfattah El Feki. Protective role of Opuntia vulgaris fruit extract against methanol induced toxicity in rats 21

22 P. 3. LES PRINCIPALES METHODES DE LA BIO SURVEILLANCE Chedad Abdelwahab (1), Berrayah Mohamed (2) 1. Université Ibn Khaldoun, TIARET(ALGERIE) 2. Enseignant université Ibn Khaldoun, TIARET (ALGERIE) Résumé L Algérie est parmi les pays qui possèdent une différenciation soit sur le plant climatique (Etage : Subhumide, Humide, Semi-aride, Aride, Saharien) ou sur le plan géographique (Sahara, Forêt, Steppe) ces derniers permettent une diversité sur la faune et la flore et cette diversité ce dégrade avec plusieurs causes (Changement de climat, désertification, érosion et pollution...etc.). La pollution parmi les principales causes de dégradation, alors en va voire l'intervention de l'état, les entreprises et les organisations a l'aide des bio marqueur, bio indicateur, bio surveillance...etc. Cette étude est faite pour résumer les principales méthodes de la bio surveillance au niveau de la région méditerranéenne pour détecter la pollution au niveau de sol, eau et air. Mots Clés : Bio marqueur, Bio indicateur, Bio surveillance, Pollution. 22

23 P. 5. Prévalence des anticorps anti-influenza A chez le Goéland leucophée Larus michahellis nichant dans le golfe de Gabès-Tunisie 1 Abdessalem Hammouda & 2 Slaheddine Selmi Unité de recherche: Biodiversité et Valorisation des Bioressources en Zones Arides (BVBZA) Faculté des Sciences de Gabès. Cité Erriadh, Zrig 6072, Gabès Tunisia 1 h_abdesslem@yahoo.fr, 2 slah_selmi@yahoo.fr Abstract L objectif de notre travail était d estimer l intensité d exposition aux virus Influenza A chez le Goéland leucophée (Larus michahellis) qui niche dans deux colonies situées dans golfe de Gabès : salin de Thyna-Sfax au nord et des îlots entre Djerba et Zarzis au sud. L approche utilisée a consisté à déterminer la séroprévalence des anticorps anti-influenza A chez les oiseaux adultes. Nos résultats ont montré que les deux sites étudiés sont les sièges de circulation à bas bruit des virus Influenza A. La séroprévalence des anticorps anti-influenza A dans la colonie de Thyna-Sfax était significativement plus élevée que celle de Djerba-Zarzis. Ce résultat pourrait s expliquer par le fait que la forte concentration d oiseaux d eau au sein du salin de Thyna semble favoriser la transmission des virus Influenza A entre individus et entre espèces, aboutissant à une importante prévalence de ces virus au sein de cette avifaune. Keywords: Influenza A, Goéland leucophée, golfe de Gabès. 1 Introduction Les virus Influenza A (VIAs) sont des agents pathogènes émergents qui peuvent causer des décès chez les oiseaux et les humains [1,2]. Les oiseaux sauvages, en particulier l ordre des Anseriformes (Canards, Oies et Cygnes) et des Charadriiformes (Goélands, Sternes et Limicoles) sont communément considérés comme réservoirs naturels de ces virus [1]. Le potentiel de dispersion des VIAs par les oiseaux sauvages devient une préoccupation et fait l objet d'une vigilance accrue suite à la propagation et l émergence sans précédent de certaines souches dans des zones préalablement indemnes [1,3]. La Tunisie se trouve sur les parcours migratoires des oiseaux qui relient deux foyers épizootiques des VIAs, l Europe de l Ouest et l Afrique subsaharienne [4]. Elle n est donc pas à l abri d une épidémie grippale. Très peu d études ont été réalisées sur les VIAs au sein de l avifaune sauvage et jusqu à aujourd hui aucun cas d infection au virus Influenza A hautement pathogène n a été reporté en Tunisie. Toutefois, la circulation à bas bruit des souches faiblement pathogène est soupçonnée chez la communauté d oiseaux sauvages. Sur cette base, nous avons défini comme objectif de ce travail, la description de la situation épidémiologique des VIAs dans la population du Goéland leucophée (Larus michahellis) qui niche dans le golfe de Gabès. 2. Méthodologie Les données présentées au cours de ce travail ont été collectées au cours de la saison de reproduction (Mars/Avril 2009) sur deux sites de nidification du Goéland leucophée situés de part et d autre du golfe de Gabès au sud-est de la Tunisie : Le salin de Thyna-Sfax au nord ( N E) et les îlots de Djerba-Zarzis au sud ( N E). Nous avons capturé des oiseaux adultes au moyen de pièges «clapnets» placés directement sur le nid. Un échantillon de sang, de 1 ml en moyenne, a été prélevé au niveau de la veine brachiale à l aide d une seringue stérile héparinée. 23

24 Les concentrations d anticorps anti-influenza A (anti-via) dans le plasma ont été déterminées à l aide d un test de type ELISA par compétition, en utilisant des Kits (ID Screen-Antibody Influenza A Competition, IDVET. Montpellier, France). Ce Kit a été développé pour le diagnostic chez les oiseaux, il est conçu pour détecter tous les sous-types du virus. Les données de plasma ont été utilisées pour estimer la prévalence globale d anticorps anti-via dans la population du Goéland leucophée étudiée. Nous avons ensuite comparé, au moyen de tests χ 2, la prévalence d anticorps anti-via entre les deux colonies étudiées (Sfax vs Djerba) et entre mâles et femelles. Nous avons aussi utilisé le test de Fisher, approprié aux petits échantillons, pour déterminer si le statut sérologique (séropositif vs séronégatif) diffère entre mâle et femelle. Nous avons réalisé tous les tests statistiques à l'aide du logiciel SAS (SAS, 1998) [5]. 3 Résultats Nos résultats ont montré une forte prévalence (77%) des anticorps anti-via dans la population de Goéland leucophée qui niche dans le golfe de Gabès. Cette forte prévalence d'anticorps anti-via, peut être due, en partie, au fait que les Goélands sont des espèces relativement longévives, ce qui augmente leur probabilité d être exposés aux VIAs. De plus, la persistance des anticorps anti-via assez longtemps, augmente la probabilité de les détecter chez les individus positifs. D autre part, et vu que le Goéland leucophée est une espèce coloniale, l'agrégation des oiseaux sur les sites de nidification ou d'alimentation semble augmenter le contact entre les individus [6], et faciliter la transmission des virus. Aucune différence significative n a été observée entre les deux sexes (Femelles: 81% ; Mâles: 73% ; χ 2 [1] = 0,4830 ; p = 0,4871), même, au sein de couples reproducteurs, (test de Fisher: p = 0,2727 ; n = 11). Nos résultat ont également montré une prévalence des anticorps anti-via significativement plus élevée au niveau du salin de Sfax qu à Djerba-Zarzis (95% à Sfax vs 68% à Djerba, χ 2 [1] = 5,7676 ; p = 0,0163). Cette différence serait due aux différences qui existent entre les deux sites concernant la composition et la densité de leurs avifaunes, en particulier les Laridés. Nous pensons que la densité plus élevée des Laridés dans le salin de Sfax par rapport au site de Djerba-Zarzis serait favorable à une plus forte transmission des VIAs, essentiellement les sous types H13 et H16 spécifiques aux Laridés, au Goéland leucophée. 4 Références [1] Olsen B., Munster VJ., Wallensten A., Waldenstrom J., Osterhaus A., & Fouchier R., 2006, Global patterns of influenza A virus in wild birds. Science, 312, pp [2] Gaidet N., Dodman T., Caron A., Balanca G., et al. (2007). Avian influenza viruses in water birds, Africa. Emerging Infectious Diseases; 13, pp [3] Hubálek Z., 2004, An annotated checklist of pathogenic microorganisms associated with migratory birds. Journal of Wildlife Diseases. 40, pp [4] Jourdain E., Gauthier-Clerc M., Bicout DJ., & Sabatier P., 2007, Bird migration routes and pathogen dispersion risk in western Mediterranean wetlands, Emerging Infectious Diseases. 13, pp [5] SAS Statistical Institute, ed. SAS/STAT User s Guide, Version 8. Cary, NC: SAS Statistical Institute, [6] McCallum H., Barlow N., & Hone J., 2001, How should pathogen transmission be modelled?, Trends in Ecology and Evolution, 16, pp

25 P.6. Variabilité de la composition chimique des huiles essentielles de trois plantes médicinales appartenant à la famille des lamiacées Adel Najdib Chaker, Habiba Boukhebti, Noura Abidri et Masaoud Ramdhani. Laboratoire de Valorisation des Ressources Biologiques Naturelles (VRBN), Département Biologie et Ecologie végétale, UFA, Sétif, Algérie. E.mail: Résumé Dans le cadre de la valorisation des ressources végétales, nous sommes intéressés à l étude chimique des huiles essentielles de trois plantes (Mentha aquatica, Mentha pulegium et Mentha spicata) qui sont très répandue dans la médecine traditionnelle algérienne. Les huiles essentielles extraites des trois espèces obtenues par hydrodistillation avec un appareil de type Clevenger pendant une durée de trois heures. Les extractions fournissent des huiles essentielles de couleur jaunâtre avec une très forte odeur. L analyse chimique des huiles essentielles est procurée par chromatographie en phase gaz couplée à la spectrométrie de masse (CPG/SM). Le composé majoritaire pour l huile essentielle d M. pulegium est le pulegone ( %), et d autres constituants contient des pourcentages moindres comme menthone ( %), pipériténone ( %). L huile essentielle de M. aquatica est composée en premier lieu par le Acetate de linalyle (26,109%) et d autres constituants α- Pinène (22,708%), Linalol (13,755%), par contre l analyse des huiles essentielles de M. spicata montrée que le constituant majeur est le carvone %, cependant d autres constituants sont présents à des concentrations moindres: le limonène (6.12%), 1,8-cinéol, germacrène-d (04.66%). Mots clés: Huiles essentielles, L analyse chimique, M. aquatica, M. spicata, M. pulegium. Introduction Les huiles essentielles sont utilisées pour leurs propriétés antiseptiques contre les maladies infectieuses d origine bactérienne ou les champignons. Ils présentent également des propriétés cytotoxiques [1]. Les menthes (Lamiaceae) sont des plantes herbacées, vivaces, très odorantes que l on trouve particulièrement dans les milieux humides. Il existe de nombreuses espèces de menthe dont certaines, telles M. pulegium et M. rotundifolia, poussent spontanément en Algérie [2]. Matériels et Méthodes Matériels végétal Les parties aériennes de M. pulégium, M. aquatica et de M. spicata ont été récoltées durant le mois de Juin dans localité du nord de l Algérie ensuite, Elles sont débarrassées des impuretés puis séchées à l ombre à une température ambiante. Extraction Le matériel végétal est soumis à l hydrodistillation en se Servant du dispositif d extraction type Clevenger. L hydrodistillation se base sur le pouvoir que possède la vapeur d eau à transporter les Huiles essentielles. Les huiles essentielles obtenues sont conservées dans des flacons opaques bien scellés à l abri de la lumière et à une température de 4 à 6 C. Analyse chimique La séparation et l identification des constituants des huiles essentielles ont été réalisées par chromatographie en phase gazeuse (CPG) et par chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse (CPG/MS). 25

26 Résultats L analyse des huiles essentielles par chromatographie phase gazeuse couplée à un spectromètre de masse (GC/MS) a permis d identifier 57 constituants dans l HE de M. spicata, parmi lesquels 44 constituants sont identifiés représentant 97,022% de l huile; le constituant majeur est le carvone 59.40%, puis vient Limonène 6.13% et Germacrène-D 4.665%. L analyse de l huile de M. pulegium a montré 43 constituants dont 29 sont identifiés représentant 99.52% de l huile; le Pulégone est le constituant majeur avec un pourcentage de % de l huile, d autres constituants sont présents en concentration moindre tels que le menthone %, pipériténone %, pipéritone 6.84%. L analyse de l huile essentielle de M. aquatica a permis d identifier 43 constituants, l huile essentielle de M. aquatica est composée en premier lieu par linalyl acetate (26.1 %), puis: α- pinene (22.7 %), linalool (13.755%), α-terpeneol (3.42%) et geranyl butyrate (3.39%). Ces résultats sont proches de ceux trouvés par [3], pour l huile esentielle de M. pulegium avec pourcentage de pulégone (33.03%); Par contre [4], ont trouvé que l huile essentielle de M. pulegium contient des constituants suivant: piperitone %38.0, piperitenone 33.0%, α-terpineol 04.7%, pulégone 02.3%; par contre l étude de [5], sur même plante confirme la présence de pulégone (88%) à de pourcentage élevé dans leur huile. les résultats trouvés par [6], ont prouvé que Le carvone (% 45) a été rapportée comme constituant majoritaire de l huile essentielle de M. spicata, alors que le pulégone (83.7%) a été le constituant majoritaire de l huile essentielle de M. pulegium. soixante-seize constituants sont identifiés pour l échantillon de Mentha longifolia qui provenant de Liban, où le menthol est le constituant majeur avec un pourcentage de 50[7]. References [1] V.G.de Billerberck, 2007, Huiles essentielles et bactéries résistantes aux antibiotiques. Phytothérapie, 5, [2] Moussa Brada, Mouhamed Bezzina, Michel Marliel, Annabelle Carlier, Georges Lognay, 2007, Variabilité de la composition chimique des hiules essentielles de Mentha rotundifolia du nord dalgérie. Biotechnol. Agron. Soc.11(1), 3-7. [3] Benayad N., Mosaddak M., Hakiki A., (22 Juin 2007), Evaluation Chimique et Insecticide de l huile essentielle de Mentha pulégium. Journée Scientifique «Ressources Naturelles et Antibiothérapie», Faculté des Sciences Kenitra. [4] Mahboubi M., Haghi G., 2008, Antimicrobial activity and chemical composition of Mentha pulegium L. essential oil. Journal of Ethnopharmacology, 119, [5] Ouraini D., Agoumi A., Alaoui M.I., Alaoui K., Cherrah Y., Benlemlih M., Belabbas M., 2005, Approche thérapeutique des dermatophyties par les huiles essentielles de plantes médicinales aromatiques marocaines. Phytothérapie, 1, 3-12 [6] Vian M.A., Fernandez X., Visinoni F., Chemat F., 2008, Microwave hydrodiffusion and gravity, a new technique for extraction of essential oils. Journal of Chromatography A, 1190, [7] Hilan C., Sfeir R., Jawish D. et Aitour S., 2006, Huiles essentiélles de certaines plantes médicinales Libanaises de le famille des lamiaceae. Lebanese Science Journal, 7 ( 2):

27 P.7. Allelopathic effect of Capparis spinosa L. 1 Afef Ladhari, 1 Faten Omezzine, & Rabiaa Haouala 2 1 Department of Biology, Faculty of Sciences of Bizerte, Jarzouna 7021, Tunisia. (UR03AGR04) 2Department of Biological Sciences and Plant Protection, Higher Institute of Agronomy of Chott Meriem, University of Sousse, 4042, Tunisia. (UR03AGR04) Abstract Weeds management is facing the economic and ecological challenge worldwide due to the human and environmental hazards caused by majority of the synthetic agrochemicals; a search for an alternate technique for the management of weeds arises in recent years. The present study was carried out under laboratory conditions; to evaluate allelopathic potential of C. spinosa organs on radish and thistle by testing their aqueous and residues. Results showed that C. spinosa had a significant phytotoxic effect which was increased in a dose dependent manner. In fact, leave residue was the most toxic; it induced a total inhibition at the highest concentration. While roots aqueous extract was the most toxic with a significant inhibition of 92% for thistle and 76% for radish growth. Numerous growth inhibitors identified from this allelopathic plant may be a useful source for the future development of bio-herbicides and pesticides Keywords: Allelopathic potential; Capparis spinosa; Phytotoxicity; Seedling growth 1 Introduction Due to increasing numbers of herbicide-resistant weed biotypes and environmental concerns about the safety of synthetic herbicides, considerable effort has been put into designing alternative weed-management strategies and reducing dependence on synthetic herbicides. Towards these ends, the use of plants with strong allelopathic properties for weed control has shown promising results. Capparis spinosa L. (caper) (family Capparidaceae) is one of the most common aromatic and medicinal plants growing in wild in the dry regions around the west or central Asia and the Mediterranean basin[1]. This shrub has become an interesting and specialized crop of great economic importance in the Mediterranean area. The aim of the current study was to investigate the phytotoxic effect of different parts of Capparis spinosa plants roots, stems and leaves on 2 target species: Rapahnus sativus and Scolymus maculatus. 2 Methodology Irrigation and powder incorporation with aqueous extract in soil To determine whether the phytotoxic effects of C. spinosa extract would be maintained in soil, additional trial was carried out in an incubator set at 20 C with 14/10 h, day / night. In this study, the medium used was sand. Nursery trays (7 x 11 grids, each square 3 cm x 3 cm) were filled with soil. Five pre-germinated seeds (radish and thistle) were planted per square just under the soil surface then sprayed with distilled water to moisten the soil. Three days later, 5 ml of each extract treatment of different plant parts at 50 g L -1 were added per square. Distilled water was the control. Treatments were arranged in a completely randomized design with three replications and data were transformed to percent of control for analysis. The second experiment was done according to [2]. 3 Main Results Powder incorporation in soil 27

28 Powder of C. spinosa different organs was mixed with soil 2.5, 25 and 50 g/kg. Results showed that in most cases, C. spinosa residues reduced seedling growth of target species and the effect depended on residues amount, organs and target species (Fig.1). Radish and thistle growth were completely inhibited in presence of leaves treatment at the highest concentration and no more than 80% of inhibition for the lowest concentration. Similarly, roots and stems residues induced an inhibition of 95% for root length and 89% for shoot length of target species at the highest concentration. While, the lowest concentration exhibited an average inhibition of 73 % and 58%, respectively, towards root and shoot length of target species. Fig.1. Effect of residue incorporation of roots, stems and leaves of C. spinosa in soil at 12.5, 25 and 50 g/kg, on root and shoot inhibition (% over control) of test spp. 15 days after germination. (N=3±S.E.). Different letters in columns indicate significant differences among target species at P<0.05 (LSD test). Irrigation with different organs aqueous extracts Irrigation with aqueous extracts (at 50 g/l) of C. spinosa different organs induced more or less inhibition of target species seedling length (Fig.2). Roots extract was the most toxic, which induced a significant inhibition of 92% for thistle and 76% for radish growth. The effect of the other extract varied with target species, stems and leaves extracts induced, respectively, an average inhibition of 80% for thistle growth. However, considerable stimulation of 48% was observed for radish shoot growth. Fig.2. Effects of aqueous extracts (at 50 g/l) of C. spinosa root, stems and leaves, on root and shoot inhibition (% over control) of test spp. 15 days after germination. Values (N=3±S.E.). Different letters in columns indicate significant differences among target species at P<0.05 (LSD test References [1] Sultan A.O., Çelik T.A., 2009, Genotoxic and antimutagenic effects of Capparis spinosa L. on the Allium cepa L. root tip meristem cells, Caryologia. 262, pp [2] Arshad J., Shazia S., Sobiya S., Tariq, R Effects of rice extracts and residue incorporation on Parthenium hysterophorus management. Allelopathy J. 22, pp

29 P.8. Gadolinium in the lactating mammary gland tissue. Ultrastructural, microanalytical and endocrinological study 1 Ayadi Ahlem, 1 Maghraoui Samira, 2 Sayda Kammoun & 1 Tekaya Leila 1 Laboratoire de physiologie Faculté de Médecine de Tunis (Université de Tunis El Manar), 15, Rue Djebel Lakhdar, La Rabta Tunis, Tunisie. 2 Laboratoire d'immunopathologie, Vaccinologie et Génétique Moléculaire, Institut Pasteur de Tunis, Tunisie Abstract Gadolinium is increasingly used in medicine and industry, reason for which previous works have attempted to study its behavior in many organs such as liver, kidney, etc. However, the precise intracellular localization of this element in the lactating mammary gland cells and the consequence of its presence on the plasmatic concentration of some hormones remains poorly understood. Ultrastructural observations showed the presence of dense granules in the lysosomes of mammary epithelial cells of the gadolinium treated rats. The electron probe microanalysis has demonstrated the presence of gadolinium and phosphorus in these intralysosomal deposits. We have also observed a significant decrease of the prolactin plasmatic concentration in the treated rats compared to the control ones. These results showed that the lysosomes are the main organelles in which the gadolinium is concentrated as an insoluble phosphate salt and that the presence of this element is not innocuous since it causes hormonal disruptions. Keywords: gadolinium, mammary gland cells, lysosomes, conventional transmission electron microscopy, ion mass spectrometry. 1 Introduction Gadolinium (Gd), a rare earth, is frequently used in the medical and industrial domains. In the medical field Gd is essentially employed as a contrast agent in the Magnetic Resonance Imaging (MRI) [1,2]. In the industrial field it is used to manufacture televisions, car batteries, computer components, CD Roms,... All these material are thrown in the environment after utilizations, reason for which we are worry about its behaviour into the organism [3]. The aim of this work was to study the intracellular localization of gadolinium in the rat lactating mammary gland, the chemical form of the intracellular deposits and the plasmatic prolactin concentration. 2 Methodology The ultrastructural localization of the gadolinium was studied using the conventional transmission electron microscopy (CTEM), the chemical determination of the intracellular deposit were performed using electron probe microanalysis (EPMA) and the plasmatic prolactin concentration were determined using the ELISA method. 3 Main Results Ultrastructural observations showed the presence of many dense granules in the lysosomes of mammary glandular epithelial cells of the gadolinium treated rats (Figure 1). The EPMA showed that the intralysosomal deposits were composed of gadolinium and phosphorus (Figure 1). The gadolinium 29

30 treated rats showed a significant decrease in the plasmatic prolactin concentration compared to the control ones (figure 2). Lu ,15 ±1,74 29,67 ± 3,14 0 Gadolinium Gadolinium Témoin control Figure 1: Loaded down lysosomes in the mammary glandular epithelial cells Figure 2: decrease of plasmatic prolactin concentration of the treated rats Theses results showed that after its intraperitoneal administration, gadolinium was concentrated in the lysosomes of the glandular epithelial cells as an insoluble gadolinoium phosphate salt. Theses observations remind those previously published showing that after its parenteral administration this element was observed in the liver [3,4], the kidney, the spleen and the bone marrow [5,6]. The decrease of the plasmatic prolactin concentration is very probably due to impairments in the nervous cells. More sophisticated methods have to been carried out to better explain the processes inducing the decrease of the prolactin concentration. References [1] Bellamy D.D., Pereira R.S., McKenzie C.A., & al. 2001, Gd-DTPA bolus tracking in the myocardium using T1 Fast acquisition relaxation maping (T1 FARM), Magn. Reson. Med. 46(3): pp [2] Thornhill R.E., Prato F.S., Pereira R.S., Wisenberg G. & Sykes J., 2001, Examining a canine model of stunned myocardium with Gd-DTPA-enhanced MRI, Magn. Reson. Med., 45(5), pp [3] Ayadi A., El Hili A., Galle P. & Tekaya L., 2008a, Rôle des lysosomes des cellules duodénales et hépatiques dans le phénomène d accumulation du gadolinium, C. R. Biologies. 331, pp [4] Ayadi A., El Hili A. & Tekaya L., 2008b Lysosomes of the liver and the duodenal enterocytes, a site of handling of two rare earths. Ultrastructural and microanalytical study, Biol. Trace. Elem. Res. 124, pp [5] Hocine N., Berry J.P., Escaig F. & Galle P., 1994, Mapping and localization of gadolinium. A study using ion microanalysis and electron microprobe., Les éditions de physique, pp [6] Hocine N., Berry J.P., Jaafoura H., Escaig F., Masse R. & Galle P., 1995, Subcellular localization of gadolinium injected as soluble salt in rats: A microanalytical study, Cell. Mol. Biol. 41(2), pp

31 P. 9. Protective role of selenium against mercuric chloride induced oxidative stress in rat Albinos Wistar. 1 Youcef Necib, 1 Ahlem Bahi, & 2 Sakina Zerizer. 1 Department of Microbiology and Biochemistry, university of Constantine, BP 2500, Algeria. 2 laboratory of microbiological engineering and application, university of Constantine, BP 2500, Algeria. Abstract This study was undertaken to evaluate the protective role of selenium against mercuric chloride induced oxidative stress in rats. males were divided into four groups, the first group was served as the control, the second group was given intraperitoneally mercuric chloride (0.25 mg/kg b.w ip), while the third group was given sodium selenite at dose of 0.25mg/kg b.w by gavage, however the fourth group was treated with a combination of mercuric chloride and sodium selenite, the rats were treated consecutively for 3 weeks. The effects of Se on HgCl 2 induced oxidative stress in rat, were evaluated by serum: total bilirubin, direct bilirubin, total protein and albumin, and liver GSH, lipid peroxidation levels and GSH-Px activity. Exposure of rats to HgCl 2 caused a significant increase in liver lipid peroxidation level and total bilirubin; direct bilirubin levels in the serum, also, HgCl 2 induced oxidative stress, as indicate by a significant decrease in the serum total protein, albumin levels and in the liver GSH level and GSH-Px activity compared to control. The coadministration of Se decreased liver lipid peroxidation level and serum total bilirubin, direct bilirubin levels, the contents of liver GSH level, GSH-Px activity and serum total protein, albumin levels were increased compared to control. These results indicate that the sodium selenite might have a protective effect against HgCl 2 induced oxidative stress in rats. Keywords: mercury, selenium, lipid peroxidation, GSH, GSH-Px. 1 Introduction Mercury (Hg) is one of the heavy metals known to be toxic for humans and other organisms [1]. Inorganic mercury in the Hg +2 forms has a great affinity for SH groups of endogenous biomolecules [2]. Thus, it is invariably found in cells and tissues attached to thiol-containing proteins and small-molecular-weight thiols such as cysteine and GSH. Additionally, Hg can also give rise to free radicals that induce lipid, protein, and DNA oxidation. The antioxidant defence is an important factor for the prevention of oxidative damage. In case of reduced or impaire defence mechanism and excess generation of free radicals that are not counter balanced by endogenous antioxidant defence, so that an imbalance between free-radical-generating HgCl 2 and the radicalscavenging system is created. Previously exogenous administered antioxidants like vitamin C, and Se, have proven helpful to overcome oxidative damage. The biological important of Se is forms the prosthetic group of some critical selenocysteine containing enzymes, such as GSH-Px [3], protective against a number of toxicants and excessive intake cause toxic potential [4]. The aim of present study is to evaluate the protective role of Se against HgCl 2 induced oxidative stress in rats. 2 Methodology Twenty four hours after the last administration, blood was collected by retro- orbital sinus punction from each anesthetized rats. After centrifugation, the serum was separated immediately. Biochemical parameters were determined spectrophotometrically using an automated analyzer. Subsequently, rats were decapitated and liver were removed. The samples of liver were homogenized and centrifuged; the low supernatants were separated and used for determination of: GSH following the method of Weeckbeker et cory (1988) [5], TBARS level measured by the method of Buege and Aust (1978) [6], and GSH-PX activity according the method of Flohe and 31

32 TBARS (nmol MDA/mg protein) GSH (nmol/mg protein) 19, 20, 21 et 22 décembre 2012 Hôtel EL Mouradi Douz - Tunisie Gunzler(1984) [7]. Protein was measured by the method of Bradford (1976) [8]. The data were subjected to student t test for comparison between groups. 3 Main Results 3.1. Effects of treatments on serum biochemical parameters Table 1: Changes in biochemical parameters of control and rats treated with selenium (Se), mercuric chloride, and combined treatment of mercuric chloride with selenium after 3weeks of treatment. Parameters Control Se HgCl 2 HgCl 2 +Se Total Billirubin(mg/l) Direct Billirubin (mg/l) 1.84± ± ± ± ±0.35 *** 0.73±0.03*** 2.56±0.19*** 0.53±0.10*** Total protein (g/l) 83.41± ± ±3.18 *** 62.9±12.7 Albumin (g/l) 30.6± ± ±3.07*** 23.10±4.24 Values are given as mean ± SEM for group of 8 animals each. *P 0.05, compared to controls. **P 0.01, compared to controls. ***P 0.001, compared to controls Effects of treatments on hepatic oxidative stress parameters Treatment control Se HgCl2 HgCl2+Se ** Treatment ** 0,06 0,04 0,02 0 *** *** Treatment Fig.1. Reduced glutathione (nmol/ mg protein) and TBARS (nmol MDA /mg protein) levels and GPx (µmol GSH/ mg protein) activity in liver of control and rats treated with selenium, mercuric chloride, and combined treatment of mercuric chloride with selenium after 3weeks of treatment. Values are given as mean±sem for group of 8animals each significant difference: * compared to controls (*P 0.05; **P 0.01; ***P 0.001). References [1] WHO, 1991, Environmental health criteria 118: inorganic mercury-environmental aspects. World health organization, geneva, Switzerland, PP [2] Clarkson T.W., 1997, The toxicology of mercury. Crit. Rev. Clin. Sci. 34, [3] Stadtman T.C., 1996, Selenocysteine. Annu. Rev. Biochem. 65, [4] Combs G.F. and Gray W.P., 1998, Chemopreventive agents: selenium. Pharmacol. Ther. 79, [5] Weckbercker G., Cory J.G., 1988, ribonucleotide reductase activity and growth of glutathione-depended mouse leukaemia L 1210 cells in vitro. Cancer let.40, [6] Buege J.A., Aust S.D., 1984, Microsomal lipid peroxidation. Methods. enzymol. 105, [7] Flohe L., Gunzler W.A., 1984, analysis of glutathione peroxidase. Methods enzymol. 105, [8] Bradford M.A., 1976, Rapid and sensitive method for the quantities of microgram quantities of protein utilizing the principale of protein-dye binding. Anal. biochem. 72,

33 P.10. L impact des pesticides sur la fertilité des souris mâles fertiles 1 Ahlem Ben Slima, 1 Ameni Ellouze, & 1 Radhouane Gdoura 1 Unité de recherche de Toxicologie Microbiologie-Environnementale et Santé, Faculté des Sciences de Sfax, TUNISIE. Résumé Les pesticides posent un véritable problème de santé publique non pas seulement pour les utilisateurs qui sont les plus exposés mais aussi pour la population générale. Dans ce cadre nous nous sommes proposé d étudier l impact de la Deltaméthrine, insecticide pyréthrinoïde de synthèse largement utilisé en Tunisie, sur la fertilité masculine chez les souris adultes fertiles. Des souris mâles sont traitées par gavage pendant 35 jours par 5mg/Kg/j de la deltaméthrine afin d étudier l effet de ce traitement sur l indice de fertilité et d accouplement des souris, sur les paramètres spermatiques de l éjaculat, sur la structure histologique des testicules et sur la sécrétion de testostérone. Notre étude a montré que l exposition des souris à la deltamethrine a entrainé une diminution significative de l indice d accouplement, de l indice de fertilité, de taux de testostérone plasmatique et des paramètres spermatiques au niveau de l éjaculat. Des changements histo-pathologiques des testicules ont été observées chez les souris mâles traitées. Mots clés : Deltaméthrine, Fertilité, mâle, Ejaculat, Testostérone, Testicule, Souris 1 Introduction Après la seconde guerre mondiale, les pesticides ont permis le développement de l agriculture et ont contribué à l augmentation des rendements et à la régulation de la production agricole. Par ailleurs, de nombreuses études épidémiologiques suggèrent une corrélation entre l utilisation professionnelle des pesticides et l apparition de certaines pathologies dans les populations concernées [1]. L`objectif de notre travail est d`étudier l effet de la deltaméthrine, un insecticide pyréthrinoïdes de synthèse largement utilisé en Tunisie dans l agriculture et dans l usage domestique, sur la fertilité masculine chez les souris adultes fertiles. 2 Matériels et Méthodes Notre étude a apporté sur un lot de souris fertiles traitées par gavage de la deltamèthrine pendant 35 jours par 5mg/kg de souris : Les poids corporels ainsi que les poids de certains organes reproducteur des souris mâles pubères et fertiles du lot traité ont été comparés avec ceux d un lot de souris fertiles adultes non traitées (lot témoin). L impact du traitement par ce pesticide sur la fertilité masculine des souris mâles par les paramètres spermatiques de sperme éjaculé (mobilité, vitalité, numération et morphologie des spermatozoïdes), l aspect l histologique des testicules et sur hormonémie par dosage de la testostérone ont été étudié chez le lot des souris mâles traitées et le lot des souris mâles témoin 33

34 3 Résultats et Discussion Dans le présent travail, nous avons observé une baisse du poids corporel des souris traitées par la deltaméthrine, une diminution non significative des poids de certains organes de reproduction (testicules et épididymes). Cette diminution semble être la conséquence de la perturbation du taux de testostérone. En effet nous avons observé, chez les souris traitées, une diminution du taux de testostérone plasmatique, relativement aux témoins. Une étude antérieure a rapporté des résultats similaires concernant l effet de la deltaméthrine sur le poids des organes reproducteurs [2]. En plus, cette étude a aussi signalé une diminution significative du poids corporel [2]. Dans notre étude, nous avons remarqué que l exposition des souris à la deltaméthrine à raison de 5 mg/kg PC (1/10DL50) pendant 35 jours provoque une diminution de la mobilité et de la vitalité des spermatozoïdes et une augmentation des spermatozoïdes anormaux ainsi qu une diminution significative de leur densité. Ceci est en accordance avec El Aziz et al. en 1994 [3]. Ces résultats sont corrélés avec l aspect histologique des testicules qui ont montré chez les souris traitées au deltaméthrine, une atrophie au niveau des tubes séminifères, un blocage de la spermatogénèse confirmé par une dégénération des cellules germinales au niveau de l épithélium séminal. En conclusion, nos résultats viennent compléter et confirmer les effets toxiques des pesticides sur la fertilité des souris mâles Remerciements: Nos remerciements vont également à Madame Tahia Boudawara, chef service d Anatomie Pathologique de l Hôpital Régional Habib -Bourguiba de Sfax pour la réalisation des coupes histologiques. References [1] Roshini J,Peiris-John, Rajitha Wickremasinghe. Impact of low-level exposure to organophosphates on human reproduction and survival.the Royal Society of Tropical Medicine and Hygiene; 102, , 2008 [2] F. Ben Abdallah, A. Ben Slima, I. Dammak, L. Keskes-Ammar & Z. Mallek, Comparative effects of dimethoate and deltamethrin on reproductive system in male mice, Andrologia 41, 1 5, January 29, 2009 [3] Vawda, G. and A.G.Davies. Effects of cisplasum on the mouse testis. Acta Endocrinol. 112, ;

35 P. 13. Real-time PCR as a tool for detection of Salmonella spp. isolated from Tunisian broilers and comparison with culture traditional method BEN HASSANA Amal 1, FENDRI Imen 1, GDOURA Radhouane 1 Unité de Recherche Toxicologie-Microbiologie Environnementale et Santé ; Faculté des Sciences de Sfax- Université de Sfax-Tunisie. 1 - Introduction L incidence Salmonella is a gram-negative rod shaped bacteria from the family of Entrobacteriacea. The genus Salmonella is further divided by serology into over 2,500 serovars using the Kauffman and White scheme. Salmonella has a wide range of animal reservoirs, poultry and poultry products are the predominant sources of Salmonella contaminated food products leading to food-borne illness in human, followed by pork, cattle and dairy products. Almost all Salmonella that infects mammals and birds belong to the specie enterica.. Established conventional routine method to detect and identify Salmonella according to the ISO 6579 are laborious and time consuming and include a non-selective pre-enrichment, selective enrichment, subsequent culturing on selective media and characterization of suspicious colonies by biochemical and serological. This can prevent a rapid response to the presence of the bacteria. To overcome this drawback, a number of techniques for improving the detection of Salmonella serovars, such PCR, are rapid and reliable methods for detection and identification of this pathogen. In the present work, we evaluated the ability of a real time PCR to detect salmonella in poultry samples rapidly and efficiently in comparison with the traditional method according to the ISO standard. 2- Materials and methods Sample collection Samples were collected from a regional industry specialized in the breeding, slaughtering, cutting, packaging and distribution of poultry. Several groups of 4 or 5 broilers were slaughtered during the period from January 2011 to march 2011, intestine and livers samples were held in ice and delivered to laboratory. Salmonella detection according to the standard ISO Traditional culture method ISO 6579:2002 PCR amplification program: Salmonella strains were examined by PCR for the presence of the SiiA gene according to the following instructions: PCR-assays were performed in 10 µl reaction mixture (EvaGreen mixture biorad) containing 1µl of template DNA (50ng/µl), 0,3µl of each primer (1µM) and 5 µl of Mix ( SsoFast EvaGreen Supermix Biorad). Amplifications were carried out in a CFX thermocycler (Biorad). PCR-program consisted in a hot start cycle of 94 C for 3 min, followed by 40 cycles of: 94 for 30 s, hybridization step at 58 C for 30 s and 72 C for 1 min. Finally, an extension step of 72 C for 5 min. In all experiments a negative control without template DNA was introduced. 3- Results and Discussion 35

36 Detection results with reference method ISO 6579 Out of the 46 samples tested (intestines and livers), 14 gave positive result for culture method (30,4%). Within livers, Salmonella was present in 30,4% (7/23) of the samples tested, Craven et al., 1999 found a prevalence percentage of 24 % only. Within intestines, this current study gave a prevalence percentage of 30,4% while Kapondorah et al., 2007 reported a percentage of 35% in poultry intestines. Salmonella detection using real time PCR directly on liver sample tissues Because enrichment procedures may be time consuming, we used samples without an enrichment technique. 16 negative samples (livers) confirmed with traditional method were subjected to total DNA extraction with the QuiaGen kit (QIamp DNA blood Cat. No 51104) according to manufacture instructions. The extracted DNA was the matrices of real time PCR with SiiA primers and according to the mentioned protocol, 4 DNA extracts have shown an amplification curves testifying the identity of Salmonella DNA. (Figure 1). The contamination percentages raises to 47.8 % (11/46 instead of 7/46) as we recovered this 4 positive cases. These results prove the sensibility of real time PCR versus the culture method. Fig1: Amplification profiles with the corresponding melt curves for liver tissues DNA extracts 36

37 P.15. Valorisation des substances bioactives extraites du sapindus mukorossi en tant que biopesticide Hadj-Ziane-Zafour, D. Youcefi et K. Belkadi Laboratoire de génie chimique, faculté des sciences technologiques, université Saad Dahlab, Blida, Algérie Résumé L objectif de cette étude consiste en l extraction et la caractérisation des substances bioactives des fruits du sapindus mukorossi et son application en tant que bioinsecticide contre les pucerons des agrumes et des mollusques causant de graves maladies et des nuisances pour l environnement Mots clés: extraction-sapindus -mukorossi-saponines-biopesticide 1 Introduction Reconnues pour avoir un fort potentiel pharmacologique, les saponines ; substances majoritaires extraites des fruits du sapindus mukorossi ont été intensivement étudiées au cours des dernières années. les saponisides à génines stéroïdiques et triterpéniques exercent des activités biologiques très variées telles qu'hémolytique, hypocholestérolimique, immunostimulant, molluscicide, anti-inflammatoire, antifongique, antibactérienne, antiparasitaire, cytotoxique et antitumorale, pour il a été démontré que les saponines jouent un rôle essentiel dans la protection des plantes contre les espèces pathogènes L objectif de de ce modeste travail est de valoriser la ressource végétale par extraction de la matière bioactive par des solvants spécifiques. La caractérisation des extraits par des méthode sspectroscopiques ; IR, CGMS et RMN et des tests physico-chimiques (test de mousse,cmc,teneur en familles d hydrocarbures),ont montré la richesse de l extrait en matières actives.ainsi, pour une faible teneur, les extraits ont manifesté un taux de mortalité de 100% en 24H contre les pucerons qui attaquent les agrumes Aussi, son application en tant que biomollucicide a montré qu a de très faibles teneurs, les extraits ont pu donner un taux de mortalité de 100% des mollusques d eau qui causent de graves maladies et des nuisances pour l environnement 2 Méthodologie L extraction des matières actives a été réalisée par soxhlet en utilisant le méthanol et l éthanol comme solvants. L extraction a été assistée par chauffage microonde et par sonication Les caractérisations ont été réalisées par des méthodes spectroscopiques (IR, CGMS, RMN, HPLC) et des méthodes physico-chimiques (détermination de la CMC, test de mousse etc ) Les tests en tant que biomollucicide ont été réalisés sur les mollusques à des concentrations de l ordre de 100µg et sur les pucerons des arbres à agrumes selon les normes de l OMS 3 résultats Les rendements d extraction ont été estimés à 89.8%, les méthodes de caractérisation ont montré que l extrait est très riche en saponisides. Aussi, par détermination des paramètres physico-chimiques, les résultats ont montré que nos produits sont conformes aux normes La figure ci-après illustre les résultats de l application des extraits en tant que biomollucicide 37

38 Taux de mortalité 19, 20, 21 et 22 décembre 2012 Hôtel EL Mouradi Douz - Tunisie 100% 80% 60% 40% 20% 0% Taux de mortalité dans concentration Figure 1 : taux de mortalité des mollusques en fonction de la concentration On remarque que le taux de mortalité a atteint les 100% pour de faibles concentrations L application en tant que bioinsecticide contre les pucerons des agrumes a montré une efficacité remarquable..les résultats sont illustrés sur les figures suivantes Avant traitement Figure 2 illustrations de l effet bioinsecticide des extraits après traitement Il a été constaté qu après 24H, aucune trace d insecte n existe sur l arbre et que pour une durée de 8jours, les insectes ne s y rapprochent pas Conclusion Compte tenu des efficacités remarquables en tant que biopesticide des extraits du sapindus mukorossi, il est du devoir de toute la communauté pour la sauvegarder, de contribuer ainsi à son exploitation dans le respect de la diversité des espèces et de faire prendre conscience aux populations des risques encourus du fait de la déforestation Références 1. Pandey, B.P., Taxonomy of Angiosperms, Chand and Company Ltd. Ram Nagar, Newdelhi, (2001), Buerki, S., Worldwide biogeography and systematics of Sapindaceae: a molecular and taxonomic survey combining large data sets and novel methodological approaches. Thèse de doctorat, Université de Neuchâtel Switzerland, (2009) 3. Angiosperm Phylogeny Group (APG II), An update of the Angiosperm Phylogeny Group classification for the orders and families of flowering plants: APGII, Botanical Journal of the Linnean Society 141, (2003), Muellner, A.N., Vassiliades, D.D. and Renner. S.S., Placing Biebersteiniaceae, a herbaceous clade of Sapindales, in a temporal and geographic context PI. Syst. Evol. 266, (2007),

39 P. 16. Traitement de la margine par le procédé d oxydation avancée photo- Fenton Amina Ben Saad, Youssef Samet & Ridha Abdelhédi Laboratoire d Electrochimie et Environnement, Ecole Nationale d Ingénieur de Sfax 3038 BP 1173 Sfax. Université de Sfax, Tunisie. Résumé Le présent travail représente un essai de traitement des margines par le procédé de photo-fenton (H 2 O 2 /Fe 2+ /radiations solaires). Une étude préliminaire de polymérisation et d extraction des produits organiques se trouvant dans la margine a été réalisée afin de réduire la quantité de H 2 O 2 utilisée. La solution aqueuse ainsi obtenue a été traitée par le réactif de photo-fenton à l aide d un montage pilote de volume 1 L. Deux paramètres expérimentaux ont été étudiés. Il s agit de la quantité de H 2 O 2, et de Fe Introduction Les effluents aqueux d huileries d olive, appelés margines, présentent une composition plus au moins variable. Elle dépend de la qualité des olives, de leur degré de maturité, du système d extraction et de la qualité d eau ajoutée lors de la phase d extraction de l huile [1]. L industrie oléicole en Tunisie produit prés de tonnes de margine par an [2]. Les effluents sont généralement constitués de 83,2% d eau, 15% de substances organiques et de 1,8% de substances minérales [1]. Ces effluents, peuvent poser de sérieux dégâts de pollution des eaux de surface, de la faune, de la flore et de la microflore des cours d eau et du sol. Pour éliminer ou réduire cette pollution, plusieurs techniques ont été utilisées. Parmi ces techniques, on peut citer les Procédé d Oxydation Avancée (POA). Ces procédés reposent sur la formation in situ des radicaux hydroxyles HO qui possèdent un pouvoir oxydant supérieure à celui des oxydants traditionnels, tels que Cl 2, ClO 2, ClO, H 2 O 2, O 2 ou O 3. Ces radicaux sont capables de détoxifier ou de minéraliser totalement la charge organique des margines. L objectif du présent travail est de tester le procédé photo-fenton pour le traitement des margines. 2 Méthode de travail Tous d abord nous avons caractérisé la margine étudiée. Ensuite, nous avons prétraité la margine par ajout de quantités variables de H 2 O 2 afin de polymériser au maximum les composés organiques qu elle contient. Après centrifugation, le surnagent a été traité par le procédé photo-fenton à l aide d un dispositif schématisé dans la figure 1. L analyse du milieu réactionnel a été réalisée par la mesure de la DCO. 39

40 Figure 1. Schéma du dispositif expérimental utilisé pour le traitement des margines. (1) Erlenmeyer, (2) H 2 O 2, (3) Tubes en verre, (4) Pompe péristaltique, (5) Bain thermostaté, (6) Agitateur magnétique. 3 Résultats Tableaux 1: Récapitulation des résultats obtenus. Margine Phénols totaux flavonoïdes flavonols IC 50 (margine) IC 50 (BHT) Valeurs 10,58 g/l 3,52 g/l 0,50 g/l 0,486 g/ml 1,9 g/ml DCO initial 4,88 g d O 2 /L DCO final 0,4 g d O 2 /L ph 5 Les résultats obtenus ont montré que le procédé photo-fenton est efficace pour le traitement de la margine. Le taux d abattement de la DCO peut atteindre 92% pour un rapport volumique eau oxygénée - margine équivalent à 1,03 et des concentrations initiales respectivement égales à 7,75 mol/l et 4,88 g d O 2 /L. References [1] Fiestas J.A., Borja R., 1992, Use and treatment of olive mill wastewater: current situation and prospects in Spain. Grasas y Aceites. 43, pp [2] Samet Y., Wali I., Abdelhédi R., 2011, Kinetic degradation of the pollutant guaiacol by dark Fenton and solar photo-fenton processes: Environmental Science and Pollution Research. 18, 9, pp [3] Samet Y., Ayadi M., Abdelhédi R., 2009, Degradation of 4-chloroguaiacol by Dark Fenton and Solar Photo-Fenton Advanced Oxidation Processes: Water Environment Research. 81, 12, pp

41 P.17. The Complete Chloroplast and Mitochondrial Genome Sequences of Phoenix dactylifera: Insights into the Evolution Amina Dhieb, Amine Elleuch, Walid kriaa, Nourredine Drira Laboratoire des Biotechnologies Végétales Appliquées à l Amélioration des Plantes, Department of Biology, Faculty of Sciences of Sfax, BP 1171, 3000 Sfax, Tunisia. amina_dhieb@hotmail.fr Abstract The complete nucleotide sequences of the chloroplast (cp) and mitochondrial (mt) genomes of date palm as other plants have been sequenced and have been determined with the lengths of 158,462 bp and 715,001 bp, respectively. The cp-derived sequences including trnas found in angiosperm mt genomes support the conclusion that frequent gene transfer events may have begun early in the land plant lineage. 1 Introduction Date palm (Phoenix dactylifera L.), a member of Arecaceae family, is one of the three major economically important woody palms. It is a dioecious, perennial, monocotyledonous plant, and its heterozygous form makes its progeny strongly heterogeneous. Most of the published studies on genetic characterization, detection of genetic variations and genes mutations have concentrated on the variations in chromosomes number, isozyme polymorphism and biochemical diversity [1]. The complete cp genome of date palm is the first member of the Arecaceae family to be sequenced from an elite cultivar Khalas [2]. The same based on next-generation sequencing data, the mitochondrial (mt) genome of date palm has been sequenced and published [3]. In this study, we analyze genomic features and structures of both cp and mt genomes of P. dactylifera. 2 Methodology In this work we developed a comparative study for date palm using a whole genome data from mitochondria and chloroplast organ. Mitochondrial genome Chloroplast genome 3 Main Results The Pd cp genome is 153,493 bp in length and has a GC content of %. Similar to those of other angiosperms [2, 4, 5], a typical quadripartite structure of the large (LSC, 86,198 bp) and small single-copy (SSC, 17,712 bp) regions separated by a pair of inverted repeats (IRs, 27,276 bp). Similar to what has been found among most angiosperms, the date palm cp genome harbors 112 unique genes and 19 duplicated fragments in the IR regions (Table1).The mt genome of P. dactylifera encodes 38 proteins, 30 trnas, and 3 ribosomal RNAs, which constitute a gene content of 6.5% (46,770 bp) over the full length. The rest, 93.5% of the genome sequence, is comprised of cp (chloroplast)-derived (10.3% with respect to the whole genome length) and noncoding sequences (Table1). 41

42 Table 1: Features of P. dactylifera cp genome and mt genome Feature Chloroplast Mitochondrion Genome size(bp) 158, ,001 GC content (%) 37, Coding sequences (%) a 22,950 16,8 Gene content (%) b 12, protein-coding gene 66,71 38 trna gene 2,34 30 rrna operons 7,48 3 Intron 54,45 4,3 Repeat sequences (%) 17,2 2.3 Chloroplast-derived (%) a: Conserved genes, unique ORFs, introns, and intron ORFs are considered as coding sequences. b: Unique ORFs and intron ORFs are not taken into account. The date palm mt genome also contains the second highest proportion (10.3%) of cp-derived sequences among the sequenced mt genomes to date, of which several intact genes, such as peta, petg, petl, psaj, psbt, rpl20, rpl33, and rps8 are identified. Figure 1 shows the chloroplast genome evolution derived from mitochondrial genome, we observed that the cp genome is more important in the Poaceae family (monocots species) than in the solanaceae family (dicotyledons species) References Figure 1: Representative schema of evolution of chloroplast genome derived [1] Iturra P, Medrano JF, Bagley M, Lam N, Vergara N, and Marin JC (1998) Identification of sex chromosome molecular markers using RAPDs and fluorescent in situ hybridization in rainbow trout. Genetica 101: [2] Yang M, Zhang X, Liu G, Yin Y, Chen K,Yun Q, Zhao D, Al-Mssallem IS, and Yu J (2010) The complet chloroplast genome sequence of data palm (Phoenix dactylifera L. PLoS One 5: e [3] Yongjun Fang, Hao Wu, Tongwu Zhang, Meng Yang, Yuxin Yin, Linlin Pan, Xiaoguang Yu, Xiaowei Zhang, Songnian Hu, Ibrahim S. Al-Mssallem, Jun Yu. A Complete Sequence and Transcriptomic Analyses of Date Palm (Phoenix dactylifera L.) Mitochondrial Genome. PLoS 7 :e [4] Palmer J (1991) Plastid chromosomes: structure and evolution. Cell Culture and Somatic Cell Genetics of Plants, vol 7A, The Molecular Biology of Plastids. Pp [5] P. Uthaipaisanwong, J. Chanprasert, J.R. Shearman, D. Sangsrakru, T. Yoocha, N. Jomchai, C. Jantasuriyarat, S. Tragoonrung, S. Tangphatsornruang. Characterization of the chloroplast genome sequence of oil palm (Elaeis guineensis Jacq.). Gene 500 (2012)

43 P.18. Protective effect of date fruit extract on dichloro and trichloroacetic acids induced damage on liver biomarker and modified glycemie and hemoglobin levels 1 Amira EL AREM, 1 Emna Behija SAAFI, 2 Fatma GHRAIRI, 1 Amira TAHOURI, 1 Mouna ZEKRI & 1 Lotfi ACHOUR 1 Research Unit Genome, Immune Diagnosis and Recovery, Higher Institute of Biotechnology of Monastir, Tunisia, Avenue Tahar Hadded, BP 74, 5000, Monastir, University of Monastir, Tunisia. 2 Laboratory of Biochemistry, Faculty of Medicine Sousse, Mohamed Karoui Avenue, 99/UR/08-45, 4002 Sousse, University of Sousse, Tunisia Abstract This study was designed to show the ameliorative effect of aqueous extract of the flesh of date on dichloro and trichloroacetic acids induced liver damage biomarker [bilirubin (BIL), cholesterol (CHL) and proteins (PRT) and modified hemoglobin (HGB) and glycemie (GLY) levels in rats at subchronic period. Forty eight male rats were divided into six equal groups of 8. Two groups were controls, one treated with aqueous Degla extract (ADE) and one with only saline (C). Two groups received 2g/L, one of TCA and other of DCA in drinking water. Two groups treated with DE 30 min before received TCA or DCA. Results showed that both TCA and DCA caused a significant increase in the plasma BIL, whereas decrease in PRT, CHL, HGB and GLY levels in comparison to those of control. Pre-treatment with DE showed significant hepatoprotection by reducing the bilirubin plasma concentration and ameliorate the CHL, PRT, HGB and GLY levels. Keywords: date palm fruit, trichloroacetic acid, dichloroacetic acid, liver biomarker 1 Introduction Dichloroacetate (DCA) and trichloroacetate (TCA) are hepatocarcinogenic by-products of water chlorine-tion and metabolites of several industrial solvents. Health or medicinal foods have recently received immense interest among the health professionals and public. Consequently, the global health market has been swamped with such products claiming to improve health as well as prevents chronic diseases and intoxication. Date palm (Phoenix dactylifera L.) fruits have attracted the attention of many researchers [1-3] due to their richness in antioxidants and micronutrients with nutritional and pharmacological properties such as polyphenolic compounds (phenolic acids, flavonoids), carotenoids and vitamins (vit A, vit C, vit B). The aqueous extract of date was reported to posses antiulcer, hepatoprotective, anti-mutagenic and antidiarrhoeal effects [4]. Therefore, this study was designed to show the ameliorative effect of aqueous extract of the flesh of date on dichloro and trichloroacetic acids induced liver damage biomarker (bilirubin, cholesterol and proteins) and modified hemoglobin and glycemie levels. 2 Methodology 2.1. Date palm fruit extract preparation: Degla variety was collected from the station of Douz (Kébili, Tunisia) at besser stage. The flesh was manually separated from the pits and soaked in cold distilled water (1:3 ratio, weight to volume) and kept for 48 hours at a temperature of 4 C. Then the mixture was centrifuged at 4 C for 20 min at 4,000 g and the supernatant collected Animal treatment: Male adult Wistar rats, weighing 180 to 200 g, were purchased from Central Phar-macy of Tunisia. Animals were housed for 2 week before experiments under standard laboratory conditi-ons with a 12- hour light-dark cycle and constant temperature (22 C ± 2 C) and humidity (55 ± 5%). Water and a standard aliment were available ad libitum. The animals were handled according to the guide-lines of the Tunisian Society for the Care and Use of Laboratory Animals, and the study was conducted at the animal facilities of the Faculty of Pharmacy, Monastir, with the approval of the local Ethics committee After an acclimatization period, forty eight rats were randomly divided into six equal groups of 8. Two groups were controls, one treated daily by oral 43

44 gavage for 2 months with saline (0.9%, w/v) and other with only aqueous Degla extract (ADE) (4ml/Kg). Two groups received 2g/L, one of TCA and other of DCA in drinking water. Dose of TCA and DCA was selected on the basis of a 0.2% concentration which caused carcinogenic effect in vivo [5]. Two groups treated with ADE 30 min before received TCA or DCA Preparation of plasma and biochemical analysis: After 2months of treatments, the rats were anesthe-tized by inhalation of diethyl ether, the blood samples were obtained from a cardiac puncture using syrin-ge. Blood samples were put immediately into silicon disposable glass tubes with EDTA as an anticoagu-lant and centrifuged at 4000g for 15 min at 4 C. Plasma samples were stored at 20 C in aliquots until analysis. Plasma levels of PRT, CHL, BIL, HGB and GLY were estimated spectrophotometrically using manual commercial reagent kits (refs , 20111, 20101, 30041, 20121, respectively, Biomaghreb Diagnostics, Ariana, Tunisia). The results were expressed as the means ± standard deviation. All data were analyzed with SPSS 11.0 for Windows. The results were analyzed using ANOVA One-Way. Statistical significance was set at p< Main Results After 2 months, oral administration of DCA and TCA caused damage on liver biomarker. Table 1 shows that both TCA and DCA induced significant (p<0.05) increase in the plasma BIL (1.30 ± 0.05 and 1.20 ± 0.04 mg/dl, respectively) whereas decrease in PRT (7.25 ± 0.22 and 7.27 ± 0.23 g/dl, respectively) and CHL (79.00 ± 2.64 and ± 1.32 mg/dl, respectively) levels in comparison to those of control (1.09 ± 0.04 mg/dl, 7.93 ± 0.53 g/dl and ± 2.28 mg/dl, respectively). Furthermore, these two haloacetates produced significant (p<0.05) decrease in HGB (12.01 ± 0.32 and ± 0.23 g/dl, respectively) and GLY (98.82 ± 1.98 and ± 1.84 mg/dl, respectively) levels in comparison to those of control (14.83 ± 0.26 g/dl and ± 1.12 mg/dl, respectively). However, pretreatment with ADE showed significant (p<0.05) hepatoprotection by reducing the bilirubin plasma concentration and ameliorate the CHL, PRT, HGB and GLY levels. This study suggests that dichloro and trichloroacetic acids induced liver damage in rats can be ameliorated by administration of extract of date flesh. Table 1: Effect of aqueous date extract on biochemical parameters in dichloro and trichloroacetic acids induced hepatotoxicity Bilirubine (mg/dl) Proteins (g/dl) Cholesterol (mg/dl) Hemoglobin (g/dl) Glycemie (mg/dl) Control 1.09 ± 0.04a 7.93 ± 0.53ab ± 2.28b ± 0.26bc ± 1.12d ADE A 1.08 ± 0.09a 8.12 ± 0.41b ± 3.07b ± 0.23bc ± 0.88d TCA B 1.30 ±0.05b* 7.25 ± 0.22a* ± 2.64a* ±0.32a* ± 1.98b* DCA C 1.20 ±0.04b* 7.27 ± 0.23a* ± 1.32a* ±0.23a* ± 1.84a* AED +TCA 1.12 ± 0.04a 8.15 ± 0.35b ± 2.10b ± 0.35b ± 1.67d AED +DCA 1.08 ± 0.04a 8.04 ± 0.15ab ± 1.85b ± 0.26b ±1.37c* Each value represents the Mean ± SD. Values not sharing a common letter (a d) differ significantly at p<0.05 by Duncan test. *Significantly different from control rat at p<0.05 by Duncan test. A Aqueous date extract, B Trichloroacetic acid, C Dichloroactic acid References [1] EL Arem A., Flamini G., Saafi E.B., Issaoui M., Ferchichi A., Hammami M., & Achour L. 2011, Chemical and aroma volatile compositions of date palm (Phoenix dactylifera L.) fruit at three edible maturation stages, Food Chem., 127, pp [2] Saafi E.B., El Arem A., Issaoui M., Hammami M., & Achour, L. 2009, Phenolic content and antioxidant activity of four date palm (Phoenix dactylifera L.) fruit varieties grown in Tunisia, Int. J. Food Sci. Technol., 44 pp [3] El-Sohaimy S.A. & Hafez E.E. 2010, Biochemical and Nutritional Characterizations of Date Palm fruits (Phoenix dactylifera L.), J. Appl. Sci. Res, 6, pp , [4] Vayalil P.K., 2012, Date Fruits (Phoenix dactylifera Linn): An Emerging Medicinal Food, Crit. Rev. Food Sci. Nutr., 52, pp [5] Celik I., Temur A., 2009, Determination hematotoxic and hepatotoxic effects of trichloro-acetic acid at sublethal dosage in rats, Food Chem. Toxicol., 47 pp

45 P.19. Pipistrellus kuhlii du Parc National de Bou Hedma : Suivi annuel et terrains de chasse Ridha Dalhoumi 1, Amor Hadfi 1, Patricia Aîssa 1 & Stéphane Aulagnier 2 1 Laboratoire de biosurveillance de l Environnement, Faculté des Sciences de Bizerte, 7021 Zarzouna Tunisie 2 Comportement et Ecologie de la Faune Sauvage, I.N.R.A., B. P , Castanet Tolosan cedex France Résumé Un suivi annuel de la population de la Pipistrelle de Kuhl a été réalisé par capture au filet et écoute avec un détecteur d ultrasons dans les principaux habitats du Parc National de Bou Hedma. La Pipistrelle de Kuhl, active durant toute l année dans le parc, n a été capturée qu au niveau des points d eaux. Elle a été même piégée en période hivernale. Les effectifs les plus importants ont été observés en fin du printemps et en début d automne. Les cris d écholocation de P. kuhlii ont été détectés dans les différents habitats du parc. Les écorces décollées d acacias constituent un site de maternité privilégié pour cette espèce. Mots clefs: Pipistrellus kuhlii, Parc National de Bou Hedma, bassin, Acacia tortilis raddiana 1 Introduction La Pipistrelle de kuhl (Pipistrellus kuhlii) est sans doute l espèce de chiroptère la plus commune sur le territoire tunisien [1]. Malgré la multiplicité des publications antérieures sur les chiroptères tunisiens [2-3], aucun travail n a intéressé l étude des territoires de chasse de cette espèce en Tunisie. Ainsi, un projet a été réalisé dans la pseudo-savane d Acacia tortilis raddiana du Parc National du Bou Hedma dont l objectif principal consiste à suivre de près la population du P. kuhlii afin de déterminer ses principaux territoires de chasse dans le parc et l importance de la forêt d Acacia pour cette espèce. 2 Méthode Le suivi mensuel de l activité du P. kuhlii a été réalisé dans 6 principaux habitats (Bassin du bordj, Oued Bou Hedma, Bassin de Nouh, Steppe de Stipa tenacissima, Forêt claire d Acacia tortilis raddiana et Forêt claire d Acacia tortilis raddiana) du Parc National de Bou Hedma durant un cycle complet. Chaque séance a commencé 15 minutes après le coucher du soleil et se poursuit durant 3 heures. Deux techniques ont été employées : a- capture : les chauves-souris ont été capturées par un filet japonais. Elles ont été identifiées en se basant sur les guides d identification appropriés [4,5], pesés et mesurés. b- détection : Les cris d'écholocation de la Pipistrelle de kuhl ont été détectés, enregistrés temporairement en utilisant un détecteur Pettersson D 240x et stockés à l'aide d'un enregistreur EDIROL R-09 RH. Ces signaux ont été analysés en utilisant «Batsound» (édition par Pettersson Elektronik AB). 3 Résultats La Pipistrelle de Kuhl, n a été piégée qu au niveau d Oued Bou Hedma, Bassin du Nouh et Bassin du Bordj. Au niveau de ce bassin, elle a été capturée dans les différentes saisons. Sachant que, les effectifs les plus importants ont été observés en mai, juin, juillet et septembre (Fig.1) L analyse des cris d écholocation a montré que P. kuhlii utilise des signaux à fréquence modulée aplanie avec une fréquence terminale de 37 à 40 khz. Les échos de cette espèce ont été détectés dans les différents habitats du parc mais les nombres de contacts ont été très variables entre les saisons et les sites. 45

46 Effectif Bassin du Bordj Bassin Nouh Oued Bou Hedma juin-10 juil-10 août-10 sept-10 oct-10 nov-10 déc-10 janv-11 févr-11 mars-11 avr-11 mai-11 juin-11 Mois Fig.1: suivi mensuel de l effectif du P. kuhlii dans la Parc National de Bou Hedma En début d été et d automne les contacts étaient plus nombreux au niveau des points d eaux et particulièrement au niveau du bassin du Bordj (Tab.1). Les cris sociaux du P. kuhlii n ont été enregistrés qu en période hivernale Tab.1 : Nombre de contacts du P. kuhlii détecté dans le Parc de Bou Hedma (06/ /2011. Site B. Bordj B. Nouh O. Bou Hedma Forêt claire d Acacia Forêt dense d Acacia Steppe L activité de chasse du P. kuhlii commence juste après le coucher du soleil et atteint son maximum une heure plus tard, elle faiblit nettement 3 à 4 heures après la tombée de la nuit. En été, certains individus démarrent leur activité même avant le coucher du soleil. De plus, la forêt claire d Acacia tortilis raddiana constitue le terrain de chasse préféré par certains spécimens en été et notamment en période de floraison des acacias. De même, Trois colonies de reproduction de P. kuhlii ont été observées sous des écorces décollées d Acacia. Références [1] Dalhoumi, R., Aissa, P., and Aulagnier, S., Taxonomie et répartition des chiroptères de Tunisie. Rev. Suisse Zool. 118(2), pp [2]Deleuil, R. & Labbe, A Sur la variabilité de la Pipistrelle de Kuhl (Pipistrellus kuhli). Bul. Soc. Sc. Nat. de Tunisie 8, pp [3] Aellen, V. & Strinati, P Liste des Chiroptères de la Tunisie. Rev. Suisse de Zool. 76, pp [4]Dietz C. & Helversen O. von, Illustrated identification key to the bats of Europe. Electronic publication: [5] Aulagnier S., Haffner P., Mitchell-Jones T., Moutou F. & Zima J., Guide des Mammifères d Europe, d Afrique du Nord et du Proche Orient. Delachaux & Niestlé, Paris. pp

47 P.20. Role of flaxseed oil in reducing inflammation in an experimental model of lung fibrosis induced by bleomycin in rats 1 Anouar Abidi, 1 Raja Beji, 2 Nadia Kourda, 3 Moncef Feki & 1 Saloua Ben Khamsa 1 Research Unit 03/UR/08-05, Pulmonary Fibrosis: Prevention and Treatment, Faculty of Medicine of Tunis. Tunisia. 2 Department of Anatomy and Pathology, Charles Nicole Hospital, Tunis. Tunisia. 3 Departement of Biochemistry, Hospital La Rabta Tunis. Tunisia. Abstract The purpose of the study was to investigate the effect of flaxseed oil (FO), known by its benefic and therapeutic effects for various diseases on experimental bleomycin (BLM) induced pulmonary fibrosis (PF) in rats. FO was administrated by daily gavage at a dose of 2ml/kg bw during 60 days to rats which underwent fibrosis induction by intratracheal injection of BLM. This treatment decrease inflammation and fibrosis score in the treated group. Also, the profiles of fatty acids composition in the lungs showed an increased rate of Mono Unsatured Fatty Acids (MUFAs) coupled with a decrease of the Poly Unsatured Fatty Acids (PUFAs) in the treated group compared to control one. In red cells, the treatment induced a decrease in SFAS coupled with a high level of PUFAs in the treated group. Key worlds: flaxseed oil, lung fibrosis, Inflammation, Fatty acids, Lipid mediators, rats. 1 Introduction Our study aims to investigate whether Flaxseed (Linum usitatissimum) Oil (FO), used as a preventive treatment, can inhibit bleomycin induced lung fibrosis in rats. 2 Methodology Twenty Wistar rats, weighting g, were divided randomly into 2 groups: control group (G1, n = 10) and a treated group (G2, n = 10). All rats received a distilled water in G1 at dose of 2mL/kg bw and flaxseed oil in G2 at dose of 2mL/kg bw by daily gavages during 60 days. After this period of preventive treatment, pulmonary fibrosis was induced in all rats by bleomycin (4 mg/kg, single dose, intratracheally). Three days later, all rats were sacrificed and lungs were extracted for histological analysis (Inflammatory Index and Score Fibrosis) [1]. FO composition was analyzed by Gas Chromatography (GC). Total Polyunsaturated Fatty Acids (PUFAs) in the lungs and in the red cells (RC), into both groups, were measured also by GC. Data are presented as mean ±standard deviations (S.D), P 0.05 was considered to be significant. 3 Main results Lung sections showed a significant reduction of inflammation (G1 = 3,3±0,48, G2 = 1,9±0,87, P= 0,001) and fibrosis (G1= 3,7±0,948, G2= 2,2±1,39, P = 0,012). Analysis by GC revealed that more than 50% of Flaxseed oil was C18:3, a gamma-linolenic acid. PUFAs in red cells are (16,56%) in G1 and (26,12%) in G2 and on the lungs are (24,96%) in G1 and (18,91%) in G2. We noticed that Arachidonic acid was the major component in RC in G2 (14,14±5,04%), decreased almost half in lungs (8,41±3,33%) on the same group compared to control group (RC: 7,96±6,95%, in lungs: 14,03±3,63%) [2, 3]. Based on these results: increasing intake of gamma-linolenic acid leads to an increasing production of arachidonic acid, the major fatty acid precursor of ecosanoids, modulators of inflammatory response observed in the lung fibrosis airways. The results of our studies showed that FO acted on different levels of fibrotic process and may have an important activity in the treatment of pulmonary fibrosis. 47

48 Acknowledgements: Any acknowledgements can be included at the end of the main body of the extended abstract but before the references. References [1] Ashcroft T., Simpson J M.,& Timbrell V., Simple method of estimating severity of pulmonary fibrosis on a numerical scale. J. Clin. Pathol. 41, pp [2] Clark W F., Muir A D., Westcott N D., & Parbtani A., A novel treatment for Lupus nephritis: lignan precursor derived from flax. Lupus. 9, pp [3] Prasad K.., Reduction of serum cholesterol and hypercholesterolemic atherosclerosis in rabbits by secoisolariciresinol diglucoside isolated from flaxseed. Circulation. 99, pp

49 P.21. Exploration des effets toxiques de la deltamethrine sur la fonction rénale et évaluation de l effet protecteur de la vitamine C 1 Anouar Feriani, 2 Hichem Alimi 1 Sakhria Mbarki, 1 Sabah Dhibi, 1 Abdlfattah El Feki & 3 Mhd Salah Allagui 1 Laboratoire d Ecophysiologie Animale, Faculté des sciences, 3018 Sfax, TUNISIA. 2 Unité de recherche Matériaux Environnement et Energie 06/UR/12-01, Faculté des sciences, Gafsa, TUNISIA. 3 Département de Biologie, Faculté des sciences, Gafsa, TUNISIA. Résumé Dans nos conditions expérimentales, la deltamethrine induit une réduction du poids corporel, hypertrophie des reins, une augmentation du taux de la créatinine, de l urée et de l acide urique. De plus, une augmentation du taux de peroxydation des lipides et une diminution des activités des enzymes anti-oxydantes (Catalase, Superoxyde dismutase et Glutathion peroxydase) ont été observées sous l effet de l administration de la Deltamethrine. Toute fois, l association de la Deltamethrine avec la vitamine C a montré une amélioration de l ensemble de ces diverses paramètres. Keywords: Deltamethrine; Vitamine C; Stress oxydant; reins. 1 Introduction Les intoxications par les pesticides pyréthrinoides représentent une cause importante de mortalité et de morbidité dans le monde [1]. Le stress oxydatif est un déséquilibre entre la production des radicaux libres et la capacité de défense antioxydante. Ce stress peut être le meilleur diagnostic de telles intoxications, en effet diverses études ont montré que la Deltamethrine provoque une peroxydation lipidique [2] et une baisse d'activité des enzymes antioxydantes[3]. Certaines vitamines sont connues pour leurs propriétés antioxydantes et plus particulièrement pour leur capacité à piéger les radicaux libres. Dans ce cadre, les travaux décrits dans cette étude sont centrés sur la recherche du pouvoir protecteur de la vitamine C vis-à-vis de l action délétère de la deltamethrine administré durant 45 jours à la dose de 18.6 mg/kg à des rattes femelles de la souche «Wistar». 2 Matériels et Méthodes -Traitement des animaux: Les rattes ont été répartissent en trois groupes comme suit: * Lot 1 (Te) : Eau de boisson normale. * Lot 2 (Del) : Une dose de 18.6 mg/kg de la Deltamethrine dans l eau du boisson * Lot 3 (Del+V): 100mg/kg de Vitamine C mg/kg de la Deltamethrine. -Dosages biochimiques: * La créatinine, l urée et l acide urique sont mesurés selon les coffrets SPINREACT. * Le TBARS est mesuré par la méthode de Yagi, * Le catalase (CAT) est mesuré par la méthode d Aebi

50 * Le superoxyde dismutase (SOD) est mesuré par la méthode de Beauchamp et Fridovich * La glutathion peroxydase (GPx) est mesurée par la méthode de Flock et Gunzler (1984). 3 Résultats Table 1: Effet du Deltamethrine sur le poids corporel et le poids relatif des reins. Paramètres Te Deltamethrine Del + Vitamine C Poids corporel (g/rat) 201± ± ±18.21 reins (%) Table 2: Effet du Deltamethrine sur les paramètres biochimiques rénales. Paramètres Te Deltamethrine Del + Vitamine C créatinine sérique (µmol/l) 30± ± ±0.12 urée sérique (µmol/l) 5± ± ±0.13 Acide urique (µmol/l) 1.04± ± ±0.11 Table 3: Effet du Deltamethrine sur le statut oxydant. Paramètres Te Deltamethrine Del + Vitamine C TBARS 5± ± ±0.10 GPx 2.86± ± ±0.14 CAT 15± ± ±0.33 SOD 9.2± ± ±0.65 Remerciements: Cette recherche a été financée par le ministère de l éducation supérieur tunisien la recherche scientifique et la technologie à travers les deux Laboratoires d Ecophysiologie Animale, Faculté des Sciences de Sfax et Faculté des sciences de Gafsa. Références [1] Liu J.Y., Chen C.C., Wen H.W., Jeng D.H., Mon Y.Y., & Chau J.W., 2006, The protective effect of Hibiscus sabdariffa extract on CCl 4 -induced liver fibrosis in rats. Food Chem. Toxicol. 44, pp [2] Prasanthi, K., Muralidhara, R. and Rajini, PS Morphological and biochemical perturbations in rat erythrocytes following in vitro exposure to fenvalerate and its metabolite. Toxicology in Vitro 19, [3] Eraslan, G., Saygi, S., Essiz, D., Aksoy, A., Gul, H., Macit, E Evaluation of aspect of some oxidative stress parameters using vitamin E, proanthocyanidin and Nacetylcysteine against exposure to cyfluthrin in mice. Pesticide Biochemistryand Physiology., 88:

51 P.22. Evaluation d une agression chimique d une combinaison des solvants : toluène et xylène, administrées par gavage sur la reproduction masculine chez lapin mâle adulte Cuniculus lepus 1 Boucif Asma, Bendjeddou Mouna, & 1 Khelili kamel. 1 Département de Biologie, Faculté des Sciences, Université Badji Mokhtar Annaba, Laboratoire de Recherche d Ecophysiologie Animale El Hadjar BP 205 Annaba, ALGERIE. Résumé Ce travail s intéresse à étudier l impact nociceptif de deux solvants organiques : toluène et xylène sur quelques paramètres de la reproduction masculine chez le lapin cuniculus lepus. Les solvants ont été appliqués à raison de trois doses: 50ppm, 100ppm et 150ppm pour chaque produit, chaque jour, 6jours/semaines pendant 4 semaines successives, on a étudies quelques caractères biologiques des spermatozoïdes : concentration, mobilité, vitesse. Mots clés : EGME ; reprotoxicite ; spermatozoïdes. 1 Introduction On compte aujourd hui plus de 300 types, entre 50 et 100 composants organique volatiles (COV), peut être rencontrés dans des ambiances intérieures, comme le Toluène et le xylène qui sont largement utilisés comme des solvants dans les Peintures, les agents nettoyants et dégraissants (Lauwerys R, 1999). Pour cella Notre étude à pour but d évaluer l effet d une agression chimique à une combinaison des solvants aromatiques : toluène et xylène, sur la reproduction masculine 2 Méthodologie L expérimentation consiste à administrer aux lapins trois dose croissants de Toluène et Xylène : 50, 100, 150, de ce fait nous avons repartis les 20 lapins an 04 lots à raison de 05 lapins par lot (n=5) ; le toluène et xylène sont administré par gavage aux lapins (jour par jour), 1ml jour en moyenne de 06 jour par semaine, pendant 04 semaines (Fig.1). 20 lapins T DI DII DII 1 ml/jour d EGME, moyenne de 6j/semaine Sacrifice des lapins après 4 semaines successives de traitement Fig.1 Protocole de Travail. 51

52 3 Principaux Résultats Les résultats révèlent qu il y a une diminution très hautement significative dans la concentration, mobilité et la vitesse des spermatozoïdes des groupes traité par rapport aux spermatozoïdes de groupe témoin. Donc la somme de ces résultats montre clairement une toxicité d EGME sur la reproduction chez les lapins mâles. Référence (1) Lauwerys RR., (1982), Toxicologie industrielle et intoxication professionnelles Paris. 52

53 P.23. CARACTERISATION MICROBIOLOGIQUE DE LA PEAU DE CHEVRE UTILSEE DANS LA FABRICATION D UN FROMAGE TRADITIONNEL ALGERIEN Senoussi Asma, Saoudi Zineddine, Aissaoui zitoun Ouarda, Zidoune Mohamed Nasereddine asma_senoussi@yahoo.com Résumé Bouhezza est un fromage traditionnel affiné et consommé épicé connue dans la région est de l Algérie. Sa fabrication nécessite l utilisation exceptionnelle de la peau de chèvre traitée comme une outre «Chekoua» pour l égouttage et l affinage. Le but de ce travail est de s assurer de la sécurité sanitaire de l outre «Chekoua» par la méthode du BAX système et de caractériser sa flore microbienne par la technique de la PCR-TTGE (Polymerase Chain Reaction- Temporal Temperature Gel Electrophoresis). La méthode du système BAX a montré que la chekoua est dépourvue de la flore pathogène par l absence de Salmonella, de Listeria monocytogénes et d Escherichia coli. La PCR-TTGE a montré une faible charge microbienne dans l écosystème de la chekoua avec une dominance de Lactococcus lactis subsp. Cremoris qui a été déjà trouvé dans les deux échantillons, suivie de Lactobacillus plantarum et/ou Lactobacillus fermentum et/ou Leuconostoc cremoris et/ou Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus. Aussi, nous avons noté la présence de Lactobacillus delbrueckii subsp.lactis dans seulement un des deux échantillons de la chekoua. En conclusion, la chekoua ne présente pas de risque sanitaire sur le consommateur, d autre part les bactéries trouvées peuvent agirent dans l affinage du fromage Bouhezza au cours de sa fabrication. Mots clés : Peau de chèvre, Bouhezza, PCR-TTGE, Système BAX. 53

54 P.24. Activité antidiabétique in vivo de l astaxanthine extrait à partir des déchets de crevettes (Parapenaeus longirostris) 1 Assaâd Sila, 2 Zeineb Kamoun, 3 Mohamed Makni et 3 Ali Bougatef 1 Unité enzymes et bioconversion ENIS, Université de Sfax, TUNISIE 2 Faculté de Sciences de Sfax, Université de Sfax, TUNISIE 3 Institut Supérieur de Biotechnologie de Sfax, TUNISIE Résumé L objectif de ce présent travail consiste à étudier l activité antidiabétique in vivo de l astaxanthine, molécule extraite des déchets de crevettes. Pour cette étude expérimentale, nous avons utilisé 24 rats mâles adultes répartis en 4 groupes : un groupe témoin (T), un groupe diabétique (D), un groupe diabétique traité par l astaxantine (D-As) et le 4ème groupe (D-O) diabétique recevant de l huile d olive (D+O). Nos résultats ont montré une augmentation, au niveau plasmatique, du taux de MDA accompagnée d une diminution des activités d enzymes antioxydantes (SOD, CAT) et du taux de GSH. De même, il y a eu une élévation des activités des transaminases (AST, ALT), des biomarqueurs inflammatoires, impliqués directement dans l endommagement cellulaire. L administration de l astaxanthine réduit les taux de la péroxydation lipidique, de la glycémie et de l activité des transaminases et augmente celle des antioxydants. Ces modifications biochimiques sont corrélées avec l aspect histologique au niveau du pancréas. Mots clés: Astaxanthine, rats, activité antidiabétique, antioxydants, étude histologique. 1. Introduction Au cours de ces dernières décennies, plusieurs investigations concernant l origine des maladies métaboliques tels que la dyslipidémie, l hypercholestérolémie, le diabète, ont été élucidées. Ces pathologies ont été attribuées principalement à l alimentation [1]. Les océans constituent une richesse alimentaire très diversifiée (algues, crustacés, poissons). Les déchets issus de la production commerciale piscicole et de la transformation des produits de la mer sont, bien sûr, synonymes de problèmes, mais ils offrent également d excellentes possibilités d exploitation biotechnologiques [2]. L élimination de ces déchets a toujours été dispendieuse et a souvent eu un impact nuisible sur l environnement [3]. Grâce à l évolution des techniques et au développement des marchés, il est maintenant possible de transformer ce flux de déchets en produits utiles et commercialisables. Ces rejets sont caractérisés par une haute teneur en protéines et en minéraux et constituent un énorme potentiel pour la découverte de nouvelles molécules d activités enzymatiques [4]. L'astaxanthine est un pigment caroténoïde rouge synthétisé essentiellement par des microalgues. Cette molécule est responsable de la couleur rose orangé observée chez les crevettes (Parapenaeus longirostris). Comparable à la vitamine E, l'astaxanthine est considéré comme un antioxydant efficace [5]. Le présent travail consiste à mettre en évidence l activité antidiabétique, in vivo, de l astaxanthine extrait à partir des déchets des crevettes. 2. Matériel et Méthodes Nous avons utilisés des rats mâles répartis en quatre groupes : un groupe (T) témoin, un groupe diabétique (D) recevant par injection intrapéritoniale 120 mg d alloxan /Kg de poids corporel, un groupe (D-As) diabétique traité par l astaxantine et le 4ème groupe (D-O) diabétique recevant de l huile d olive. La période du traitement a duré 30 jours. L'alimentation et l'eau ont été fournies à volonté pendant toute la période du traitement. A la fin de la période d expérimentation, ces rats sont sacrifiés par décapitation afin d éviter le stress supplémentaire Prélèvements du sang Le sang est collecté dans des tubes héparinés, puis centrifugés pour récupérer le sérum. 2.2 Détermination des paramètres biochimiques : Le malondialdehyde (MDA) : le taux de MDA est déterminé selon la méthode de Draper et Hadley [6]. Les résultats sont exprimés en nanomole par gramme de tissu. 54

55 3. Résultats La superoxyde dismutase (SOD) : L activité de la SOD est mesurée en utilisant la technique de Beauchamp et Fridovich [7]. Elle est exprimée en unité par mg de protéines. La catalase (CAT) : Le dosage de l activité de la catalase a été effectué selon la technique décrite par Aeibi [8]. L activité est exprimée en µmoles de H 2 O 2 par minute et par mg de protéines. Le glutathion réduit : Le glutathion (GSH) est déterminé par la méthode décrite par Ellman [9] et modifiée par Jollow et al. [10]. Le taux de GSH totale est exprimé en μmole/g tissu. Dosage du glucose sanguin : La détermination de la glycémie a été réalisée par la méthode enzymatique à l aide d un Kit (Réf ) provenant de Biomaghreb, Tunisie. Dosage des transaminases : Les activités de l aspartate aminotransférase (AST) et de l alanine aminotransférase (ALT) sont déterminées par la méthode cinétique à l aide d un Kit (Réf ; Réf ) respectivement provenant de Biomaghreb, Tunisie Table 1: Taux de la glycémie, des transaminases, MDA, de glutathion et activités enzymatiques (SOD, CAT) au niveau plasmatique des rats des groupes témoins et traités. Paramètres Groupes MDA SOD CAT GSH Glycémie AST ALT Groupe T 4,15±0,17 20,33±0,51 5,67±0,64 9,13±0,35 109,5 ± 8,23 101,62±6,44 43,38±2 Groupe D 10,35±0,42 9,12±0,26 3,62±0,27 4,49±0, ± 33,95 228,3±8,12 88,88±1,25 Groupe (D-As) 6,03±0,19 20,42±0,51 4,94±0,19 8,03±0, ± 15,68 116,1±1,8 50,2±2,58 Groupe (D+O) 10,34±0,536 9,45±0,47 4,24±0,28 7,13±0,86 289,6 ± 20,62 216,5±1,8 76,59±3,83 Les résultats montrent une augmentation du taux de MDA, de glycémie et des activités des transaminases accompagnée d une diminution de celles des antioxydants (SOD, CAT) et de taux de GSH. 4. Références [1] OMS: Organisation Mondiale de la Santé. 2003, Obésité : prévention et prise en charge de l épidémie mondiale. Rapport d une consultation de l OMS, Genève, p 285. [2] FAO., 2010, Organisation des nations unies pour l alimentation et l agriculture, Département des pêches et de l aquaculture de la FAO, Rome. [3] Islam MS., Khan S., & Tanaka, M., 2004, Waste loading in shrimp and fish processing effluents: potential source of hazards to the coastal and nearshore environments, Mar. Pol. Bullet. 49, pp [4] Shahidi F., & Kamil JYVA., 2001, Enzymes from fish and aquatic invertebrates and their application in the food industry, Trends. Food Sci. Technol. 12, p [5] Hussein G, Sankawa U, Goto H, Matsumoto K., & Watanabe., H., 2006, Astaxanthin, a carotenoid with potential in human health and nutrition, J. Nat. Prod. 69, pp [6] Draper HH., Hadley M., 1990, Malondialdehyde determination as index of lipid peroxidation, Method. Enzymol. 86, pp [7] Beauchamp C., Fridovich I., 1971, Superoxide dismutase: improved assays and an assay applicable to acrylamide gel, Anal.Biochem. 44, pp [8] Aebi H., 1984, Catalase in vitro, Method.Enzymol 105, pp [9] Ellman GL., 1959, Sulphydryl groups, Arch. Biochem. Biophys. 82, pp [10] Jollow DJ., Mitchell JR., Zampaglione N., Gillete JR., Bromobenzene induced liver necrosis: protective role of glutathione and evidence for 3,4-bromobenzeneoxide as the hepatotoxic intermediate, Pharmacol. 11, pp

56 P.25. Effet protecteur de la vitamine C contre la néphrotoxicité induite par le méthomyl chez le rat de la souche wistar Assia Djeffal 1, 2, Lilia Kadeche 3, Amel Boumendjel 1, Mahfoud Messarah 1 1 Laboratoire de Biochimie et Toxicologie Environnementale, Faculté des Sciences, Université Badji Mokhtar, Sidi Amar BP 12, Annaba, Algérie. 2 Laboratoire de Biochimie et Microbiologie Appliquées, Faculté des Sciences, Université Badji Mokhtar, Sidi Amar BP 12, Annaba, Algérie. 3 Laboratoire d Ecophysiologie Animale, Faculté des Sciences, Université Badji Mokhtar, Sidi Amar BP 12, Annaba, Algérie. Résumé Le méthomyl (MET) est un insecticide appartenant à la famille des carbamates largement utilisés contre les insectes. Il est impliqué dans la perturbation de plusieurs processus physiologique et biochimique. Portant sur ces données, nous nous sommes proposé d évaluer les effets protecteurs de la vitamine C sur la cytotoxicité induite par le MET au niveau des reins chez les rats de la souche wistar. Nos résultats ont montré une diminution du poids corporel et une augmentation de poids absolu et relatif des reins chez les rats traités par le MET par rapport aux témoins. De plus, l'exposition au MET a conduit à une augmentation du taux de malondialdéhyde (MDA) et de l activité de la glutathion peroxydase (GPx) dans l homogénat des reins. Nous avons enregistré également une diminution de la concentration en glutathion réduit (GSH) et de l activité de la glutathion-stransférase (GST). Au contraire, ces effets ont été améliorés par l administration de la vitamine C. L ensemble de ces résultats montre que la vitamine C présente un rôle protecteur contre l exposition au méthomyl qui provoque la génération d un état de stress oxydant au niveau des reins. Mots clés : Méthomyl ; Vitamine C ; Stress oxydant ; Nephrotoxicité ; Rat. 1. Introduction Le Méthomyl (Lannate ), S-méthyl N-(méthylcarbamoyloxy) thioacétimidate, est un insecticide appartenant à la famille des carbamates et a été introduit par DuPont en 1966 avec des effets liés à l inhibition de l acétylcholinestérase largement utilisés contre les insectes [1]. Il est utilisé à travers le monde entier dans l agriculture et des programmes de santé. Cependant, l'exposition au méthomyl exerce des actions toxiques sur le système nerveux, le foie, le rein, le muscle et l'œil [2,3]. L'objectif de cette étude est de mesurer la capacité potentielle de la vitamine C de neutralisé les dommages oxydatifs induits par le méthomyl au niveau des reins du rat mâle wistar. 2. Méhodologie L'expérimentation a porté sur 24 rats mâles répartis en trois lots de huit rats chacun : un lot témoin (T), un lot traité par le méthomyl (MET) dans l eau de boisson et un lot traité par le MET et la vitamine C (VC) par injection intrapéritonéale pendant 3 semaines de traitement. À la fin de l'expérience, les rats témoins et traités ont été sacrifiés par décapitation, les reins ont été prélevés, pesés et stockés à -20 C pour la réalisation des dosages des paramètres de stress oxydatif a 56

57 savoir : le taux de la péroxydation lipidique (MDA) [4], la concentration en glutathion réduit [5,6], l'activité de glutathion peroxydase [7], et de glutathion S-transférase [8] et de déterminer la concentration des protéines totales [9]. 3. Résultats principals Nos résultats ont montré une diminution significative du poids corporel qui s accompagne par une augmentation des poids absolu et relatif des reins chez les rats traités par le MET par rapport aux témoins. L'exposition prolongée au méthomyl a conduit également à une augmentation significative du taux de la peroxydation lipidique (MDA) et de l activité de la glutathion peroxydase (GPx) dans l homogénat des reins. Nous avons enregistré aussi une diminution significative de la concentration en glutathion réduit (GSH) et de l activité de la glutathion-s transférase (GST). Au contraire, ces effets ont été améliorés par l administration de la vitamine C. Références [1] Sinhaseni P., Foongvidya S., & Tayaputch N., 1995, Exposure evaluation is a crucial step for quantitative risk assessment of methomyl, Arhivza Higijenu Radai Toksikologiju 46, pp [2] Aron C. K., & Howland M. A., 1998, Insecticides: Organophosphates and carbamates In: Goldfank Toxicology Emergencies. 6th ed. Appleton and Lange, New York, London, Sydney, Toronto, Tokyo, New Jersey. [3] Tsai MJ., Wu SN., Cheng HA., Wang SH., & Chiang HT., 2003, J. Toxicol. Clin. Toxicol. 41, pp [4] Buege JA., & Aust SD., 1984, Microsomal lipid peroxidation, Methods Enzymol. 105, pp [5] Ellman GL., 1959, Tissue sulfhydryl groups, Arch. Biochem. Biophys. 82, pp [6] Jollow DJ., Mitchell JR., Zamppaglione Z., & Gillette JR., 1974, Bromobenzene induced liver necrosis. Protective role of glutathione and evidence for 3, 4- bromobenzene oxide as the hepatotoxic metabolites, Pharmacol. 11, pp [7] Flohe L., & Gunzler WA., 1984, Analysis of glutathione peroxidase. Methods Enzymol. 105, pp [8] Habig WH., Pabst MJ., & Jakoby WB., 1974, Glutathione-S-transferase the first step in mercapturic acid formation, J. Biol. Chem. 249, pp [9] Bradford M., 1976, A rapid and sensitive method for the quantities of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein binding, Anal. Biochem. 72, pp

58 P.26. EFFECTS OF NATURAL LONG STORAGE DURATION ON SEED GERMINATION CHARACTERISTICS OF Periploca angustifolia Labill. 12 Aymen Souid, 1 Raoudha Abdellaoui, 2 Karim Ben Hamed, 2 Chedly Abdelly & 1 Mohamed Neffati 1 Laboratoire d Ecologie Pastorale, Institut des Régions Arides, 4119 Médenine, Tunisie 2 Laboratoire des Plantes Extrêmophiles, Centre de biotechnologie de Borj Cedria, BP 901 Hammam_Lif 2050 Tunis, Tunisie ABSTRACT This study was carried out to evaluate the effect of long-term natural aging on germinability and several biochemical characteristics regarding soluble sugars and polyphenol matter contents and radical scavenging activity of P. angustifolia Labill. (Asclepiadaceae) stored seeds for 1, 3, 7, 10, 11 and 15-years, dry storage compared to freshly collected seeds. The long-term aging caused an important decrease of germination percentage, seed vigor index, seeds viability, moisture content and seed vigor except for seeds stored for seven-years. The latter showed the highest percentages of germination and viability, seed vigor index and seed vigor under a 7.3% moisture content when compared to the oldest seeds (fifteen-years old) which presented the lowest moisture content. In our study, aged seeds showed the lowest radical scavenging activity percentage, and amounts of polyphenol keeping free radicals and peroxides at high levels causing thereby seeds deterioration. Periploca angustifolia seeds undergo a process of after-ripening under the storage conditions, possibly depending on the low, but steady water loss down to an optimal storage water content of approx. 7.3 %, thereafter undergoing some deterioration as indicated by reduced amounts of soluble sugars, by polyphenol contents and experimentally tested antioxidant activities, this paralleled by increased membrane leakages as indicated by increased electrical conductivities of solution from experimentally soaked seeds. Keywords: germination, polyphenol content; radical scavenging activity (DPPH); soluble sugars content and storage duration. 58

59 P.27. Electrochemical treatment of produced water generated by petrochemical industry 1 Boutheina Gargouri, 1 Olfa Dridi, Souhel Kallel, 1 Mohamed Bouaziz, & 1 Ridha Abdelhedi Laboratoire d' Electrochimie et Environnement, Ecole national d'ingénieur de Sfax, BP1173, Sfax, Université de Sfax, Tunisie. mohamed.bouaziz@fsg.rnu.tn Abstract This paper presents the results of the treatment of petroleum hydrocarbons compounds containing wastewater generated from Petrobras plant-tunisia by electrochemical method. Experiments were conducted at a fixed current density of 30 ma/dm 2 using the lead dioxide (PbO 2 ) and boron-doped diamond (BDD) anodes in an electrolytic batch cell. The electrolytic process was monitored by the chemical oxygen demand (COD), phenol and the residual total petroleum hydrocarbon [TPH] in order to know the feasibility of electrochemical treatment. Characterization and quantification of petroleum wastewater components were performed by gas chromatography mass spectrometry (GC/MS) spectroscopy. The DCO removal was approximately 85% and% 92% using PbO 2 and BDD respectively. Compared with PbO 2, the BDD anode showed a better performance to remove petroleum hydrocarbons compounds from produced water. It provided a higher oxidation rate, higher current efficiency and consumed lower energy than the galvanostatic electrolysis using the PbO 2 electrode. Keywords: Water treatment, Electrochemical oxidation, Petrochemical pollution. 1 Introduction Produced water (PW) is considered to be one of the largest waste streams in the petroleum, oil and gas industry. The drilling and extraction operations that are aimed to maximize the production of oil may be counterbalanced by huge production of contaminated with pollutants, such as heavy metals and organic compounds [1]. The main objective of the present study was to examine the feasibility of electro-oxidation process in treating petroleum produced water and to determine the optimal operating conditions to efficiently remove petroleum hydrocarbons. 2 Methodology 2.1. Produced water samples The waste analyzed in this study is produced continuously as a by-product during crude oil extraction in secondary extraction wells. Since there is no actual way for deposition of this waste, it is being disposed in closed reservoirs at a rate of m 3 per day per well. PW samples were supplied by Petrobras plant in Sfax sowthwest of tunisia. The oil is separated from the produced water in that terminal. Its ph is around 7.9 and electric conductivity around μs cm 1. It contains 4.38 g L 1 of total dissolved solids, 56 mg L 1 of phenol and mg L 1 of oils and greases. The COD values were determined by the dichromate method [2] Electrolysis The electrolysis of aqueous solutions containing PW was carried out in a two compartment Pyrex glass cell of 150 ml volume with the BDD or the PbO2 electrodes as anodes and a cylindrical polycrystalline platinum grid (f = 5 cm, l = 2.8 cm) as cathode. The PW solutions were electrolyzed in 59

60 galvanostatic mode by applying current densities of 30 ma/cm 2 by using a DC power supply (model ATTEN TPR C- LG Precision Co. Ltd, Korea). Fig. 1. Diagram of the two-compartment electrochemical cell used for studying anodic oxidation of petrochemical wastewater: C, counter, R, reference, and W, working electrodes, respectively; ph electrode; S, sample holder; and m, magnetic stirrer. 3 Main Results In order to find the best condition for the anodic treatment of the petrochemical wastewater (employing the PW samples as received from petrochemical industry), preliminary experiments were performed at 50 C and 70 C or studying the role of anode material (PbO 2 and BDD anodes) and applied current density (j= 30 macm 2 ). Table 1: Concentrations changes of physico- chemical parameters during electrochemical treatment process. Parameters ph COD (mg/l) Total phenol (mg/l) TPH (mg/l) PW after treatment ,22 Before treatment using PbO Before treatment using BDD This study showed that anodic oxidation can be used successfully to remove completely organic pollutants from petrochemical wastewaters. In the case of PW, the efficiency decontamination and time process depend on the operating conditions, such as current density, electrolyte, temperature and nature of material. The COD decay, as a function of time, during bulk electrolysis of PW wastewaters. References [1] Ahmaduna F.R., Pendashteh, A.L., Chuah Abdullah, Awang Biak, D.R., SiavashMadaeni, S., Zainal Abidin, Z., 2009, Review of technologies for oil and gas produced water treatment, J. Hazd. Mater. 170,pp [2] Kallel T.S., Belhadj T.N., Abdelhedi R., 2004, Electrochemical behavior of caffeic acid, Electrochim Acta, 49,

61 P.28. Antibiotic resistance patterns of Escherichia coli strains isolated from broiler chicken affected with colibacillosis in Algeria 1 Chafik Redha Messaï, 1 Djamel Khelef, 1 Karima Tamina Boukhors, 1 Mossadek Hamdi-Taha & 1 Rachid Coucem 1 High National Veterinary School of Algiers, BP 161 EL Harrach Algiers, Algeria. Abstract In Setif East Algeria, one hundred Eighty E. coli strains were isolated from broiler chickens with colibacillosis and examined for susceptibility to antimicrobials of veterinary significance, In vitro antibiotic activities of 12 antibiotic substances against the isolates were determined by disc diffusion test. Antibiogram revealed a high level of resistance to Enrofloxacin (72.2%), Neomycin (75%), Trimethoprim-sulfmethoxazole (82.2%), Ampicillin (84.5%) and Amoxicillin (87.8%), Nalidixic acid (96.7%), Doxycycline (98.3%).We observed moderate levels of resistance Chloramphenicol (45.6%) and streptomycin (66.1%). There were low levels of resistance to Nitrofurantoin (18.9%), Colistin (5.5) and Gentamicin (5.5%). All strains were multidrug resistant. Thus, 60 antibiotic resistance patterns in Escherichia Coli strains were isolated, of which 13 were present significantly. These findings suggest the need for the introduction of surveillance programs in Algeria to monitor antimicrobial resistance in pathogenic bacteria that could be potentially transmitted to humans from food animals. Key Words: Escherichia coli, antibioresistance, colibacillosis, Algeria, poultry 1 Introduction Avian colibacillosis is a bacterial disease caused by APEC strains (Avian Pathogenic Escherichia coli), [5,6]. Colibacillosis is an economically devastating disease in the poultry industry; it is the primary cause of morbidity, mortality, and condemnation of carcasses in Algeria and many parts of the world [1-3]. Resistance to two or more classes of antibiotics is now common place in veterinary medicine, and the choice of antibiotic for treatment remains quite arbitrary. Very little data though, is available in epidemiology about antimicrobial resistance of E. coli. Hence aim of this study is to get a better knowledge of the level of antibioresistance and to provide a baseline of antimicrobial resistance among these pathogens for future studies. The present study determines antimicrobial susceptibility among a collection of avian pathogenic E. coli recovered from diseased birds presenting diagnosed with colibacillosis in East Algeria (Setif). 2 Methodology Bacteriological analysis: The samples (livers of affected chicken) were processed immediately upon arrival using aseptic techniques. Briefly, isolation and identification of E. coli were performed according to the protocol recommended [4]. Shortly, the organs are flamed using a Bunsen burner and cut into small dice. The enrichment is done by seeding cubes in tubes of BHIB (Pasteur Institute of Algeria) and incubated aerobically at 37 C for 18 to 24 h. A drop of broth is inoculated with BHIB method of exhaustion on Mc Conkey medium (Bio Lab, Algeria) (selective medium for E. coli) and then incubated aerobically at 37 C for 18 to 24 h. Positive colonies have a diameter of 2-3 mm, light pink color (lactose +) and surrounded by an opaque halo due to the precipitation of bile salts. They were Gram negative, catalase positive, oxidase negative. These colonies were identified as E. coli using the API system (Bio Mérieux, France) for the identification of Enterobacteriaceae. Antimicrobial susceptibility Antibiotic sensitivity was determined by the disc diffusion method on solid Mueller-Hinton medium (Pasteur institute of Algeria) according to the guidelines[7]. E. coli ATCC 25922, was used as controls. Susceptibility is tested against the following antibiotics discs: Ampicillin (AM 10 µg), amoxicillin (AMX, 25 µg), chloramphenicol (C, 30 µg), colistin (CL, 50 µg), Streptomycin (S, 10 µg), Neomycin (N, 30 µg), Nalidixic acid (NA, 30 µg), Enrofloxacin (ENR, 5 µg), doxycycline (DO, 30 µg), nitrofurantoin (FT, µg), trimethoprim / sulfamethoxazole (CO, 25 µg), gentamycin (G, 10 µg).. The plates were incubated for 24 h at 37 C and the diameters of inhibition zones were interpreted by referring to the reading table of Enterobacteria [7]. 3 Main Results 61

62 One hundred eighty E. coli strains were collected From 200 samples of livers; the susceptibility of these strains to each antimicrobial agent tested is shown in Table 1: Table 1: Antibioresistance of E. coli strains isolated. Antibiotics Number of resistant strain % (n=180) Amoxicillin (AMX,25 µg) 158 (87,8) Ampicillin (AM, 10 µg) 152 (84,5) Doxycycline (DO, 30 µg) 177 (98,3) Nalidixic acid (NA, 30 µg) 174 (96,7) Enrofloxacin (ENR, 5 µg) 130 (72,2) Gentamycin (G, 10 µg) 10 (5,5) Streptomycin (S, 30 µg) 119 (66,1) Neomycin (N,30 µg) 135 (75) Colistin (CL, 50 µg) 10 (5,5) Nitrofurantoin (FT, 300 µg) 34 (18,9) Chloramphenicol (C, 30 µg) 82 (45,6) Trimethoprim-sulfmethoxazole (CO, 25 µg) 148 (82,2) All isolated E. coli showed multi-drug resistance to two or more antibiotics at least there are none that is resistant to only one or no antibiotic, so multi-drug resistance was observed in all of our isolates 100% of our strains were multi-drug. A total of 60 antibiotypes could be distinguished. The most frequent are those designated in Table 3 as, H, G, and D. A high level of multiresistance (24.4%) was observed for 9 antibiotics. Co-resistance to ampicillin, amoxicillin, doxycycline, nalidixic acid, trimethoprim / sulfamethoxazole and neomycin, was found in eleven of the thirteen most common multi-drug resistance patterns. Table 3: The most frequent antibiotic resistance patterns in E. coli strains Resistance Patterns Designation Number of strains (%) Do-Am-Amx A 4 (2.2) Am-Enr-Co-Amx-Na-Do B 8 (4.4) Am-Amx-Do-Na-Co-N-S D 18 (10) Am-Amx-Do-Na-Co-N-Enr C 5 (2.8) Am-Amx-Do-Na-Co-N-Enr-S E 13 (7.2) Am-Amx-Do-Na-Co-N-S-Ft F 3 (1.7) Am-Amx-Do-Na-Co-N-Enr-C G 18 (10) Am-Amx-Do-Na-Co-N-C-Enr-S H 35 (19.4) Am-Amx-Do-Na-Co-N-Ft-S-C-Enr I 10 (5.6) Am-Amx-Do-Na-Co-N-Enr-S-C-Ft-Cl- J 1 (0.6) Am-Amx-Do-Na-Co-N-Na- Enr-S-G-Ft-Cl K 1 (0.6) Am-Amx-Do-Na-Co-N-S-G-C-Ft-Cl L 1 (0.6) Am-Amx-Do-Na-Co-N-Enr-S-G-C-Ft-Cl M 2 (1.1) References [1] Dho-Moulin M., Fairbrother JM., 1999, Avian pathogenic Escherichia coli (APEC). Vet. Res., 30, pp [2] Ewers C., Janssen T., Wieler LH., 2003, Avian pathogenic Escherichia coli (APEC). Berl. Munch. Tierarztl. Wochenschr., 116, pp

63 P.29. La pollution particulaire dans le secteur sud de la ville de Sfax : Suivi, simulation et analyse Mbadra chaker, Bahloul Moez, Ben Abdallah Ferjani et Azri Chafai chakermbadra@gmail.com Résumé L étude de l évolution spatio-temporelle des retombées particulaires dans le secteur sud de la ville de Sfax(Figure 2) a montré l effet trop prononcé des sources industrielles proches auquel s ajoute l effet des caractéristiques d écoulement local de l air. Dans cette étude (de novembre 2010 jusqu à avril 2011), on a montré une variabilité spatio-temporelle très marquée des retombées particulaires où les dépôts secs varient entre 1,25 et 25,7 g/m²/15j. L effet des facteurs climatiques a été démontré prédominé par celui des sources proches. Au voisinage de ces dernières, l étude analytique a montré un enrichissement progressif des particules récoltées en ions à caractère acide (SO = 4 et PO 3-4 ) expliqué par l importance des retombées industrielles émanant essentiellement de la SIAPE. En s éloignant de cette source, l appauvrissement progressif des retombées particulaires en ces ions est compensé par un enrichissement marqué en ions à caractère alcalin (Ca 2+, k + ). Il a été expliqué par le remaniement routier. La simulation des retombées particulaires montre que les maxima apparaissent sous les conditions d instabilité atmosphérique, notamment sous les situations d enfumage et de panaches sinueux. 1 Introduction L atmosphère de la région de Sfax est depuis longtemps la cible de l accumulation de plusieurs types de polluants gazeux et particulaires. Toutes les études antérieures (Ben Abdallah, 1989 et Bousnina, 1990) ne donnent qu'une idée approximative du niveau de la qualité de l'air. Dans ce cadre s intéressent les études d Azri (2000) qui ont désigné l aspect qualitatif et quantitatif des aérosols dans la région de Sfax. En ce qui nous concerne, nous nous proposés de poursuivre et d approfondir ces études qualitatives et quantitatives des aérosols, notamment sédimentables tout en s appuyant sur des mesures de dépôts secs et des résultats de simulation des retombées particulaires au sol sous l axe des panaches industriels. 2. Matériel et méthodes Suivi spatio-temporel des retombées particulaires : Pour la collecte des retombées particulaires, on a utilisé les plaquettes DIEM (des plaquettes minces en aluminium recouvertes d'un film de corps gras qui est la vaseline,selon la norme AFNOR X ). Analyse des retombées particulaires : Les solutions des échantillons (après dissolution dans l eau désionisée) ont été analysées par absorption atomique (pour les composés Ca 2+ et K + ) et par chromatographie en phase liquide (pour les composés Cl -, SO 4 = et PO 4 3- ). Simulation des retombées particulaires : La simulation a été basée sur l emploi du modèle «panache», développé par O Connors en Résultats 1. Variation spatio-temporelle des retombées particulaires L évolution spatiale des flux de dépôts particulaires récoltés dans le secteur sud de la ville de Sfax (Figure 3) montre des allures très distinctes avec des amplitudes variables. Les flux maximum atteignent 25,7 g/m 2 /15j, ceux minimum sont voisins de 1,25 g/m 2 /15j. Les écarts marqués entre les allures pourraient témoigner de l effet accentué des sources proches et également des caractéristiques d écoulement de l air. L analyse de l évolution temporelle des dépôts particulaires, au dessus de la zone d étude, montre des fluctuations très importantes durant la période de mesure. (Figure 1). Les allures temporelles à tendance bimodale qui ne concordent pas aux effets antagonistes des vents demeurent sous la dépendance de l effet des sources proches. 2. Simulation des retombées particulaires Pour mieux cerner l effet local des principales sources industrielles, on a eu recours à une étude de simulation des panaches de la SIAPE (Société de fabrication d acide phosphorique et d engrais), la savonnerie SIOS- ZITEX et la Fonderie de plomb sous deux classes de stabilités atmosphériques (très stable et extrêmement instable). Cette simulation montre que les maxima des retombées particulaires apparaissent sous les conditions d instabilité atmosphérique (situations d enfumage et de panaches sinueux). En plus, on a constaté qu au cours de la période d étude que notre zone est menacée principalement par les émissions de la savonnerie SIOS- 63

64 SO4 2- (µg/m2/15j) PO4 3- (µg/m2/15j) Ca 2+ (µg/m2/15j) K + (µg/m2/15j) Teneur (µg/m 3 ) Dépôt (mg/m 2 /15j) Teneur (µg/m 3 ) Dépôt (mg/m²/15j) 19, 20, 21 et 22 décembre 2012 Hôtel EL Mouradi Douz - Tunisie ZETEX et de la fonderie de plomb. Sous le panache de la SIOS-ZETEX (Figure 6), la simulation montre des valeurs très élevées qui s étalent sur des distances considérables (3 km ; sous les conditions atmosphériques très stables et 9 km ; sous les conditions très instables). Alors pour le cas des retombées particulaires de la fonderie de plomb, la simulation montre des teneurs élevées jusqu'à 2 km par rapport à la source (Figure 5). La figure (4) montre, pour les deux cas de stabilités atmosphériques, les retombées particulaires émanant de la SIAPE ne dépassent pas la teneur standard évaluée à 110 µg/m 3 (Brice, 1990). 3. Analyse chimique des retombées particulaires L examen du ph des retombées particulaires récoltées (après leur mise en solution dans l eau désionisée) montre des valeurs légèrement alcalines en s éloignant du secteur industriel vers la zone résidentielle avec une allure à tendance croissante. La conductivité électrique des solutions préparées qui oscille entre 258 et 401 µs/cm (Figure C) montre une allure semblable à celle du ph. Ce résultat pourrait témoigner d un enrichissement accentué des retombées en minéraux à caractère alcalin. L accroissement des teneurs en (Ca 2+, K + et Cl - ) dans les retombées particulaires analysées pourrait ainsi en rendre compte (Figure 8). L absence de corrélation significative entre ces ions et les fréquences d exposition cumulée aux panaches industrielles pourrait être attribuée à l enrichissement localisé des dépôts en ces éléments par le remaniement routier. Ces éléments prédominent l effet des ions à caractère acide (PO 4 3- et SO 4 2- ). Les flux décroissants en ions SO 4 = et PO 4 3- (Figure 7) qui sont indépendants de la fréquence d exposition pourraient être expliqués par un enrichissement irrégulier des poussières à la source S1 S2 S3 S4 S5 2 0 C1 C2 C3 C4 C5 C6 C7 C8 C9 C10 Campagnes d'échantillonnage S1 S2 S3 S4 S5 Sites d'échantillonnage 3 C1 C2 C3 C4 C5 C6 C7 C8 C9 C SIAPE Standard Tr ès sta b Distance (m) 4 Fonderie de Pb SIOS-ZITEX 6 Très stable Distance (m) SO42- PO43- Station 1 Station 2 Station 3 Station 4 Station 5 Stations de collecte Ca 2+ k+ Station 1 Station 2 Station 3 Station 4 Station 5 Stations de collecte

65 MS (g) 19, 20, 21 et 22 décembre 2012 Hôtel EL Mouradi Douz - Tunisie P.30. Comportement des plantes d olivier sur des substrats contenant différentes proportions de phosphogypse Jomni Chiraz 1, Omar tarak 2, Ben Abdallah Ferjani 1 1 Département des sciences de la vie, Faculté des sciences, Université de Sfax, BP 1171 Sfax 3000, TUNISIE 2 Société d étude et d aménagement des côtes nord de la ville de Sfax chirazjomni@yahoo.fr Résumé Le phosphogypse (PG), appliqué à des doses bien déterminées, semble améliorer le rendement en biomasse des plantes d olivier. Une augmentation significative des teneurs en Ca a été observée chez tous les organes de la plante. Les teneurs en pigments chlorophylliens augmentent d autant plus que les proportions de PG sont importantes dans le sol. Ce sous-produit entraine une augmentation plus au moins importante du contenu foliaire et racinaire en métaux lourds : Pb 2+, Zn 2+, Cr 2+ et Ni 2+. Son effet sur le Cd est négligeable. Nos résultats révèlent toujours inférieures aux normes de toxicité des plantes. Mots clés : Phosphogypse; chlorophylle; proline; sucres solubles; métaux lourds. 1. Introduction Le phosphogypse (PG) est un sous-produit de la synthèse de l acide phosphorique suite à l attaque du phosphate brut par l acide sulfurique. Sa composition est très variable et dépend, dans une large mesure, de la composition du phosphate naturel brut à partir duquel il est obtenu [1]. Malgré sa réputation d être une source de pollution de l environnement, du fait qu il peut contenir des radionucléides, du fluor, des métaux lourds et des métalloïdes, ce sous-produit pourrait, selon plusieurs travaux, être utilisé comme fertilisant [2] pour plusieurs types de sols. 2. Méthodologie Des plantes d oliviers âgés d un an et ayant approximativement la même vigueur ont été cultivées dans des pots en polyéthylène, d une capacité de 10 litres, remplis de terre végétale, à texture limoneux-sableuse, et mélangée avec différentes proportions de phosphogypse : 0% (T : Témoin), 0,2% (PG 1 ), 0,5% (PG 2 ) et 1% (PG 3 ). Après six mois de culture, différents paramètres agronomiques et biochimiques ont été étudiés : le rendement en biomasse, la croissance en longueur, la surface foliaire, le diamètre du tronc, les teneurs en chlorophylle, en proline et en sucres solubles, le contenu en potassium (K) et en calcium (Ca) des différents organes de la plante et leur contenu en métaux lourds qui existent à des taux plus au moins important dans le PG (Cd, Pb, Zn, Cr, Ni). 3. Résultats et discussions L examen de la figure 1 montre une augmentation de la biomasse aussi bien des parties aériennes que racinaires avec l augmentation du taux de phosphogypse dans la terre végétale. L amélioration de la biomasse peut atteindre jusqu à 60% pour la partie aérienne et qui va dépasser 70% pour les racines (Fig.1). D autres travaux ont déjà rapporté que le PG Ceci a été confirmé d après d autres travaux qui montrent que le PG a un effet positif sur la croissance notamment des racines [3] A B T PG 1 PG 2 PG 3 T PG 1 PG 2 PG 3 Fig.1 Variation du rendement en matière sèche des parties aériennes (A) et des racines (B) de l olivier (Olea europaea L. cv.chemlali) en fonction des différentes proportions de PG ajoutées. Moyennes de 5 répétitions et intervalles de sécurité au seuil de 5%. 65

66 Chl. (mg. g -1 MF) 19, 20, 21 et 22 décembre 2012 Hôtel EL Mouradi Douz - Tunisie Dans nos conditions expérimentales, l amélioration de la biomasse a été associée avec une augmentation de la croissance en longueur, du diamètre du tronc et de la surface foliaire des plantes (Tableau 1). Tableau 1: Effet des différentes proportions de phosphogypse sur la croissance en longueur, le diamètre du tronc et la surface foliaire des plantes d olivier (Olea europaea L. cv.chemlali). PG T PG 1 PG 2 PG 3 Croissance en longueur (cm) 15,2 20,8 23,9 29 Diamètre du tronc (cm) 0,92 1,18 1,25 1,32 Surface foliaire (cm 2 ) 6,48 7, 2 7,85 8,12 Nos résultats montrent également une augmentation significative des teneurs en pigments chlorophylliens (Chla, Chlb et chl a+b) (Fig.2). 1,0 0,8 0,6 0,4 0,2 0 Chla Chla+b Chlb T PG 1 PG 2 PG 3 Fig.2 Effet des différentes proportions de phosphogypse sur les teneurs en chlorophylles a, b et (a+b) des plantes d olivier (Olea europaea L. cv.chemlali). Moyennes de 5 répétitions et intervalles de sécurité au seuil de 5%. L examen du tableau 2 fait apparaitre une augmentation des teneurs en Ca 2+ qui se fait parallèlement avec l augmentation du taux de phosphogypse dans la terre végétale. Cette augmentation peut atteindre 60% au niveau de la partie aérienne et 80% au niveau des racines. Ces résultats corroborent ceux de [4] qui ont rapporté que le phosphogypse peut être utilisé comme source de Ca, S et P pour l amendement des sols. Selon ces auteurs, ceci peut être attribué à son taux de dissolution relativement rapide et à sa capacité de fournir à la plante des nutriments solubles durant les phases critiques de son cycle de développement [4]. Aucune amélioration n a été cependant notée pour le cas du potassium. Nos résultats montrent également une légère augmentation des teneurs en Pb 2+, Zn 2+, Cr 2+ et Ni 2+ d autant plus importante que le taux de PG est important (Tab. 2). Les valeurs restent toutefois inférieures aux normes de toxicité des plantes [5]. L augmentation des teneurs en Cd demeure cependant non significative quel que soit le traitement. Tableau 2: Effet des différentes proportions de phosphogypse sur le contenu foliaire (F) et racinaire (R) en calcium, potassium, phosphore et métaux lourds. T PG 1 PG 2 PG 3 F R F R F R F R Ca 2+ (%) 0,8±0.1 0,78±0.11 1,2±0.11 0,91±0.17 1,46±0.18 0,98±0.18 1,51±0.18 1,41±0.19 K + (%) 0,81±0.41 0,67± 0.4 0,79± ,67± 0.4 0,77± ,72± 0.4 0,77± ,72± 0.41 Cd (ppm) 1,02± ,63± 0.4 1,08± ,69± ,06± ,59± ,01± , 61± 0.4 Pb (ppm) 0,87± ,81± 0.4 1,00± ,11± 0.7 1,67± ,51± ,1± ,73± 0.4 Zn (ppm) 69,85± ,21± ,19 ± ,5± ,1± ,26± ,1± ,1± 4.6 Cr (ppm) 0,098± ,23± ,109± ,237± ,112± ,32± ,166± ,36±0.011 Ni (ppm) 0,109± ,14± ,11 ± ,15± ,14± ,16± ,152± ,16± 0.01 Références [1] Rutherford P.M., Dudas M.J., Samek R.A., Environmental impacts of phosphogypsum. The Science of the Total Environment, 149, [2] Beretka J., The current state of utilization of phosphogypsum in Australia. In: Proceedings of the Third International Symposium on Phosphogypsum, Orlando, FL, FIPR Pub. No , Vol. 2, pp [3] Mathews B.W., Joost R.E., The effects of leaching surface-applied amendments on subsoil aluminum and alfalfa growth in a Louisiana Ultisol. Commun. Soil Sci. Plant Anal., 21, [4] Malavolta E., Vitti G.C., Rosolem C.A., Fageria N.K., Guimaraes P.T.G., Sulphur responses of Brasilian crops. J. Plant Nutr., 10, [5] Kabata-Pendias, A., Pendias, H., Trace elements in soils and plants. Third ed. CRC Press, Boca Raton, 66

67 P.32. Effects of oral administration of essential oils extracted from Rosmarinus officinalis and Artemisia herba alba on rumen fermentation in Barbarine sheep D. Aouadi and H. Ben Salem Institut National de la Recherche Agronomique de Tunisie (INRAT), Laboratoire des Productions Animales et Fourragères, Rue Hédi Karray, 2049 Ariana, Tunisia Abstract Recent studies showed that essential oils (Eos) extracted from range vegetation mainly woody species could be used as potential additives to manipulate rumen fermentation, thus to improve feed efficiency and nutrient utilization in ruminants. However, to our knowledge Tunisian shrubs and trees were not yet investigated for the potential of their Eos to improve sheep performances. Therefore, this study aimed to evaluate the effect of Rosmarinus officinalis (ROM) and Artemisia herba alba (ART) (Eos) administration in the diet of growing lambs on fermentation parameters ph, ammonia nitrogen, and protozoa count. Thirty-3 month old Barbarine male lambs were divided randomly into 5 groups. All animals received oaten hay ad libitum supplemented with 500 g of concentrate (barley (800 g/kg), soybean meal (175 g/kg) and commercial mineral and vitamin supplement (25 g/kg)). Each group was assigned at random to one of the following five treatments: Control, ROM 400, ROM 200, ART 200, and ART 400. The four groups ROM200, ROM 400, ART200, and ART 400 were drenched with 200 mg/kg or 400 mg/kg of DM intake of either ROM or ART Eos. Irrespective of the type and dose of Eos, administration of Eos had no effect on fermentation parameters including ph, ammonia nitrogen and protozoa count but the contrast without vs with Eos showed a trend toward an increase of NH 3 -N concentration (P = 0.09) after 2 h post feeding, and the number of protozoa (P = 0.07) before morning feeding. It is concluded that rumen fermentation was not sensitive to the presence of Eos extracted from either ROM or ART and administered at the level 200 or 400 mg/kg DMI. Keywords: Essential oil, lamb, ammonia, protozoa, ph 67

68 P.33. Determination of some plants purifying Stidia Lagoon (Mostaganem, Algeria) 1 EL-Attafia Benhamimed, 2 Fatiha Missoun 1 Department of Biology, Faculty of Natural Sciences and Life, University of Mostaganem, Algeria 2 Department of Biotechnology, Faculty of nature and life, University of Mostaganem, Algeria Abstract Several plant species are used as boindicatrices particularly sensitive to disturbances due to pollution, this boiindication results in the appearance of leaf necrosis and morphological changes. The present work is based on the study of the physico-chemical and biological water of the lagoon first and second identification of some plants purifying this site. We found that the water had a variability of physico-chemical and biological pollution reveals a fairly large site such as BOD DCOet in parallel palntes purifying four were identified as reeds, nettle, and marubium mallow. It appears that the arundo donax is a species bioaccumulatrice of certain heavy metals and is the most abundant species in this lagoon. Keywords: Lagoon, water, plants, lead biomonitoring 1. Introduction The pollution assessment using a living organism, or it is the use of responses at all levels of biological organization; an organization or group of organizations to provide and / or reveal an alteration of the environment and to monitor is one of the principles of biomonitoring [1,2]. Several plant species are used as boindicatrices particularly sensitive to disturbances due to pollution, this boiindication results in the appearance of leaf necrosis and morphological changes. These plants accumulate various pollutants present in the water, heavy metals, PAHs, PCBs, detergents, pesticides, etc.. Analyzes of these plants can obtain information on pollutants in water and the sanitary quality of water from their rate of accumulation in plants 2. Methodology The present work is based primarily on the study of the physico-chemical and biological water lagoon Stidia is a water reservoir covers nearly two acres, located in the northwest of Algeria ( Wilaya de Mostaganem), she receives daily wastewater from the city of Stidia, and second, the identification of some plants found in this lagoon by analyzing their chemical composition. 3. Results 68

69 During a period of study extending over one year, we found that water had a variability of physicochemical and biological pollution reveals a fairly large site such as COD and BOD in parallel three plants purifying were identified (malva sylvestris), (ricinus communis)and (Arundodonax). 4. Conclusion The study characteristic of water and vegetation in the lagoon, we were able to identify a diverse range of plant species that tolerate pollutants at this study site, Arundo donax which is a kind of bioaccumulatrice heavy metals and is the most abundant species in this lagoon. 5. References [1]. Diep Thi My Hanh Pham Thi Thanh Loan Nguyen Giang Son, Study of the absorption of lead by Lantana camara L. adding EDTA. Bioechnologie [2]. Lagadic L Caquet T Amiard JC. (1997). Biomarkers in Ecotoxicology: Principles and definitions. In: Lagadic L, T Caquet, JC and F Amiard Ramade. Biomarkers in ecotoxicology fundamentals. " 69

70 P.34. Hammada scoparia modulates GSK-3 β pathway in liver rat during ethanol-intoxication 1 Ezzeddine Bourogaa, 2 Raoudha Jarraya, 2 Mohamed Damak, & 1 Abdlfattah El Feki 1. Laboratoire d Ecophysiologie Animale. Faculté des Sciences de Sfax,University of Sfax, PB 1171, 3000 Sfax Tunisie. 2. Laboratoire de Chimie des Substances Naturelles. Faculté des Sciences de Sfax, University of Sfax, PB 1171, 3000 Sfax Tunisie. Abstract Hammada scoparia leaves aqueous extract (AE) was chemically characterized and its effects on glycogen synthase kinase pathway, were investigated in vivo in rat model. Wistar rats were treated daily with 35% ethanol solution (3 g/kg/day) during 4 weeks and fed basal diet or basal diet containing AE (200 mg /kg/day). Control rats were treated with saline solution and fed basal diet. The glycogen synthase kinase-3 β (GSK 3β) and Proline-rich tyrosine kinase 2 (Pyk2) was overexpressed after ethanol intoxication. However, AE decrease the expression of GSK 3β and Pyk 2. These results were consistent with histopathological observations suggesting marked hepatoprotective effect of AE which linked to protective effect in the liver. Our results strongly suggest that treatment with aqueous extract normalizes GSK3/Pyk 2 pathway and protects the liver against ethanol damage in rats. Keywords: H.scoparia; Liver. Ethanol; GSK 3β; Pyk Introduction Liver damage is a widespread pathology which in most cases involves oxidative stress and is characterised by a progressive evolution from steatosis to chronic hepatitis, fibrosis and cirrhosis. Various xenobiotics including ethanol are known to cause hepatotoxicity. Glycogen synthase kinase-3 is a ubiquitous serine/threonine kinase that regulates numerous cellular processes, ranging from glycogen metabolism to morphogenesis and cell proliferation. Dysregulation of GSK-3 activity has been implicated in several human diseases, including diabetes, alcohol liver disease, and cancer [1,2]. Highest expression of GSK-3 is observed in developing brain, where its expression correlates with the period of active neurite remodeling [3]. GSK-3 activity is increased by phosphorylation of a tyrosine residue, Tyr-216 in GSK-3β located in the kinase domain. This phosphotyrosine is important for activity because its dephosphorylation diminishes activity [4], but the mechanism responsible for tyrosine phosphorylation of GSK-3 remains unclear In mammalian cells, the tyrosine kinase Pyk2 has been implicated in phosphorylating GSK-3[5]. In fact, this study will discuss the association between GSK3β pathway and ethanol toxicity and protective effets of H. scoparia extract. 2. Methodology Air-dried leaves of H. scoparia were used for extraction. The aqueous extract was prepared by maceration of the leaves in water (500g/2.5l) and allowing the mixture to stand for 48 h at room temperature. The preliminary phytochemical screening was performed according to the Harborne methods and determination of total polyphenolic content (TPC) in the extract of H. scoparia leaves expressed in terms of gallic acid equivalent. Albino male Wistar rats (aged 7 weeks; weighing g) were divided into three groups of 6 animals each. The first group (Control) (i.p.) injection of 9 (w/v) NaCl. The second group (EtOH) injected by 35% ethanol solution (3g/kg). The last group (EtOH+AE) was given the same dose of ethanol but allowed basal diet supplemented with aqueous extract. At the end of the experimental period (four weeks), the rats were sacrificed by decapitation. Livers were removed and weighed. A portion of the liver, from autopsied animals, was processed by routine histology procedure. For Western blot analysis, liver tissues were reduced in Laemmli sample buffer, sonicated, and boiled for 3 min. Antibodies used were anti-gsk3β (BD Transduction Laboratories) and anti-pyk2(biosource International). 70

71 3. Main Results Results of the preliminary phytochemical screening performed according to the Harborne method are illustrated in Table 1. In fact, the chemical tests performed for sterols, triterpenoids, carotenoids, tropolons, quinons, were negative. However, chemical tests performed for flavonoids and alkaloids were positive in (AE). Analysis showed that H. scoparia leaves extract contains ±0.078 mg Gallic acid equivalent/g of extract. Table 1: Chemical groups present in the Aqueous Extract (AE) from the leaves of Hammada scoparia. Sterols/ Carotenoids/ Tropolons Quinons Flavonoids Alkaloids triterpenoids triterpenoids AE + + Immunoblot analysis was used to examine the consequences of chronic ethanol consumption on total GSK-3β in liver homogenate. The data presented in Fig. 1 shows that GSK-3β and Pyk2 were overexpressed after ethanol treatment. However, ethanol was not able to induce such effect in rats receiving aqueous extracts. Liver GSK-3β Liver Pyk2 47 kd 116 kd AU EtOH Plant ext EtOH Plant ext Figure 1: Hepatic immunoblot analysis of GSK-3 β, and Pyk2. References [1] Bourogaa E., Nciri R., Mezghani-Jarraya R., Racaud-Sultan C., Damak M., & El Feki A., 2012, Antioxidant activity and hepatoprotective potential of Hammada scoparia against ethanol-induced liver injury in rats. J Physiol Biochem. DOI /s [2] Bourogaa E., Mezghani-Jarraya R., Nciri R., Racaud-Sultan C., Damak M., & El Feki A., 2012, Protective effects of aqueous extract of Hammada scoparia against hepatotoxicity induced by ethanol in the rat. Toxicol. Ind. Health. DOI: / [3] Leroy K,. & Brion, J.P., 1999, Developmental expression and localization of glycogen synthase kinase-3beta in rat brain. J. Chem. Neuroanat. 16, pp [4] Wang Q.M., Fiol, C.J., De Paoli-Roach A.A., & Roach P.J., 1994, Glycogen synthase kinase-3 beta is a dual specificity kinase differentially regulated by tyrosine and serine/threonine phosphorylation. J. Biol. Chem. 269, pp [5]Hartigan J.A., Xiong W.C., and Johnson G.V., 2001, Glycogen synthase kinase 3beta is tyrosine phosphorylated by PYK2. Biochem. Biophys. Res. Commun. 284, pp

72 P.35. Ecologie de la Reproduction de l Érismature à tête blanche Oxyura Leucocephala dans le lac Tonga (nord-est algérien) 1 Farah Chettibi, 1 Meriem Aberkane, 1 Badis bakhouche, 1 khalil Draidi, 1 Hassiba Zediri, 1 Zihed Bouslama & 1 Mousa Houhamdi 1 Laboratoire des écosystèmes terrestres et aquatiques Université Badji Mokhtar, Annaba BP23000, Algérie. Résumé L Érismature à tête blanche Oxyura Leucocephala est une espèce classé dans la liste rouge de l UICN comme menacée, elle est également protégée par la législation algérienne en tant qu espèce menacée de disparition. Notre travail cherche à actualiser l état de cette population dans le lac Tonga, site de nidification le plus important de l espèce dans la rive sud de la méditerranée afin d élaborer un plan d action national pour sa sauvegarde.il est basé sur l étude de certains paramètres importants pour l étude de la reproduction (des recensements bimensuels,l installation des nids, l éclosion des nids, la mensuration des œufs, la grandeur de ponte, la taille de ponte, les causes d échecs de l éclosion, les caractéristiques des nids). Plus de 17 nids ont été suivis dès la première ponte jusqu à l éclosion, le premier nid a été observé le 10/05/2012et le dernier le 26/06/2012, Les femelles pondent entre 04 et 22 œufs, les œufs pèsent entre 80 et110g avec une moyenne de 94,5±8,23g ; avec une longueur moyenne de 68mm et une largueur moyenne de 50mm. La période d incubation varie entre 23 et 26 jours. Mots clés: Érismature à tête blanche, Oxyura Leucocephala, Reproduction, Tonga, Algérie. 1 Introduction L Érismature à tête blanche Oxyura leucocephala, espèce considérée comme globalement menacée (Birdlife International, 2004), paraît avoir été très commune il y a plus d un siècle (Heim de Balsac & Mayaud, 1962). L espèce forme globalement quatre populations par le monde (Wetlands International, 2002 ; Hughes et al., 2006). Deux d entre elles sont en déclin : (a) la population migratrice d Asie centrale; (b) la population hivernante du Pakistan. La troisième est stable (résidente en Afrique du Nord, représentée en Algérie et Tunisie par individus) ; la dernière est en croissance (population espagnole, avec environ 2500 individus). L espèce est présente régulièrement dans 26 pays et accidentellement dans 22 autres. Neuf pays détiennent les effectifs nicheurs les plus importants : l Algérie, l Iran, le Kazakhstan, la Mongolie, la Russie, l Espagne, la Tunisie, la Turquie et l Ouzbékistan, (Hughes et al., 2006). 2 Méthodologie de travail Afin d estimer les populations de l Érismature à tête blanche (Oxyura leucocephala) dansle lac Tonga, des comptages bimensuels ont été organisés de a avec la cartographie de chaque observation. Les dénombrements ont été réalisés avec une longue vue ornithologique selon deux méthodes : (1) - par comptage de tous les individus quand le groupe est proche du point d observation et compte moins de 200 individus ; ou(2)-par estimation visuelle si l effectif est très élevé et les oiseaux se trouvent à une distance importante (Lamote& Bourrelière 1969, Blondel 1975). 72

73 Pour étudier et caractériser la reproduction certains paramètres importants décrits par la littérature scientifique (SchÖmwetter,1967 in Cramp et Simmons, 1982 ; Cadbury et Olney 1978, Ardamatskaia, 1982 ; Géroudet, 1982 ; Ardet, 1981 ; Ardet et Bouche, 1986 ; Ardet et al. 1978, Boukhalfa, 1999) ont été pris en considération : l installation des nids, l éclosion des nids, les causes de l échec des éclosions (prédation ou abandon), les caractéristiques des nids (composition, diamètre interne, diamètre externe, profondeur et surélévation), les mesures des distances nid-nid le plus proche, Profondeur d eau, la mensuration des œufs, la grandeur de ponte, la taille de ponte. Les données ont été recueillies entre le mois de mai et le mois de juillet à raison de 2 sorties par semaines. Les nids trouvés ont été marqués dès la première ponte pour un meilleur suivi. 3 Résultats 17 nids ont été suivi dès la première ponte jusqu à l éclosion, le premier nid a été observé le 10/05/2012et le dernier le 26/06/2012, les femelle pondent entre 04 et 22 œufs, les œufs pèsent entre 80 et110 avec une moyenne de 94,5±8,23 ; avec une longueur moyenne 68 est une largueur moyenne 50. La période d incubation varie entre 23 et 26 œufs. Le sucé de la reproduction est de, les causes principales de l échec sont la prédation et l abandon à cause du dérangement. 73

74 P.36. Les odonates un model de biosurveillence de la qualité des écosystèmes humides au niveau de l Atlas Blidéen Bounaceur F 1 Djemai I 2 Senouci H 1 Rezzoug W 1 et Samraoui B 3 1. Faculté des Sciences de la Nature et de la Vie. Université Ibn Khaldoun Tiaret Algérie 2. Facult2 Agro-Vétérinaire. université Saad Dahleb Blida Algérie 3. Laboratoire de recherches sur les zones Humides. Université de Guelma Résumé L évaluation de la biodiversité est élément nécessaire de la plupart des recherches sur l écologie des milieux dulcicoles et benthiques. Pourtant, la mesure dans laquelle la biodiversité d un habitat particulier reflète la biodiversité globale n a pas à ce jour, fait l objet de beaucoup d études. En Juin jusqu à Septembre, une étude a été réalisée dans plusieurs sites humides de l Atlas blidéen, afin de déterminer la diversité des odonates en fonction des différents sites prospectés. Les résultats ont montrés une diversité riche au niveau des sites éloignés indemne des pollutions induites aux eaux. En revanche cette diversité semble très influencée par les eaux impropres, essentiellement touchées par la pollution anthropiques nomment la pollution organique Mots clés : Diversité, Odonates, Biosurveillence, Qualité des eaux, Atlas Blidéen 74

75 P.37. Acanthamoeba T4 genotype associated with keratitis infections in Tunisia 1 Faten Dendana, 1 Hayet Sellami, 1 Houaida Trabelsi & 1 Ali Ayadi 1 Laboratory of Fungal and Parasitic Molecular Biology,School of Medicine Sfax, Sfax University,Sfax, Tunisia. Abstract Acanthamoeba keratitis (AK) is a sight-threatening infection.we report five cases of AK diagnosed from 2005 to 2009 in the Laboratory of Parasitology-Mycology at Habib Bourguiba Sfax Hospital, Tunisia. All were associated with improper care of contact lenses (rinsing of contact lenses with tap water and inappropriate cleaning) and lens storage. The patients displayed different clinical presentations: corneal inflammation, corneal ulceration, and corneal abscess. The diagnosis was made after direct examination, culture, and polymerase chain reaction amplification with specific primers. The genotype classification was based on the highly variable DF3 region in the 18S rrna gene. This is the first study characterizing Acanthamoeba genotype in Tunisia and North Africa. All Acanthamoeba isolates were associated to the T4 genotype. Three different DF3 sequence types were related to AK infections T4/10, T4/15, and T4/16. Keywords: Acanthamoeba sp, Acanthamoeba keratitis, genotyping, identification, 18SrRNA gene, Tunisia 1 Introduction Acanthamoeba are ubiquitous organisms found in a variety of environments including soil, water, air, food items, humidifiers, dialysis, and dental units [1, 2, 3, 4]. The genus Acanthamoeba is the causative agent of granulomatous amebic encephalitis which occurs in immunocompromised patients, while keratitis is reported in healthy individuals [5]. In recent years, Acanthamoeba keratitis (AK) have increased, and the main risk factor is the wear of contact lenses (CL) which represent 85 to 90 % of the AK cases [6]. Recent advances in the taxonomy of Acanthamoeba have led to the identification of the pathogenic subgroups and epidemiological relationships. The genus Acanthamoeba has been classified into 17 different genotypes (T1 T17) based on rrna gene sequencing [7, 8]. To date, only isolates belonging to the T2, T3, T4, T5, T6, T11, and T15 genotypes have been associated with AK [9, 10], and a large number of studies have identified T4 as the predominant keratitis-causing genotype. The aim of this study was to characterize the Rns genotypes responsible for AK infections in Tunisia at molecular level by sequencing a portion of the 18S rrna gene (Rns) and to analyze the degree of genetic variation at intra-genotype level by sequencing the DF3 highly variable region. 2 Methodology Five cases of AK infections have been diagnosed in the Laboratory of Parasitology- Mycology at Habib Bourguiba Sfax Hospital, Tunisia. Samples were inoculated on non-nutrient agar plates seeded with heat-killed suspension of Escherichia coli. Axenic cultures were obtained by transferring a piece of agar containing some amoeba to liquid culture medium peptone yeast-extract glucose (PYG) slightly modified. The DNA extraction was performed with Wizard Genomic DNA purification kit. To confirm the identity of Acanthamoeba, polymerase chain reaction (PCR) reactions were performed using genus-specific primers as previously described. The Acan F / Acan R PCR was done in 35 cycles with denaturation (94 C; 30 s), annealing (57 C; 1 min) and primer extension (72 C; 1.5 min). Final extension was continued for 5 min at 72 C. Amplification products from all PCRs were analyzed by electrophoresis through a 1.5 % agarose gel The PCR products were purified using a Wizard SV Gel and PCR Clean-Up System (Promega and directly sequenced with the conserved primer 892C. 75

76 3 Main Results Five patients had Acanthamoeba-positive culture samples. All cases of AK in this study were associated with improper care of CL (rinsing of CL with tap water in one case, and inappropriate cleaning in three cases) and lens storage in one case. The patients have displayed different clinical presentations: corneal inflammation (one case), corneal ulceration (one case), and three cases had corneal abscess (Table 1). The Rns genotype classification results demonstrated that all our isolates were Rns T4 genotype (Fig. 1). The DF3 regions of the Rns genes of the five specimens from patients with AK were amplified and sequenced. Of the five sequence types obtained, three were unique (60 %). Sequences of the various regions of DF3 in this study are presented in Fig. 2. Table 1: Clinical and genotypic characteristic of Acanthamoeba isolates. Isolate Clinical presentation Contact lens wearer GenBankTM accession number Rns genotype/df3 sequence types K_TN1 Corneal abscess Yes JX T4/16 AK_TN2 Corneal ulceration Yes JX T4/10 AK_TN3 Corneal abscess Yes JX T4/10 AK_TN4 Corneal inflammation Yes JX T4/15 AK_TN5 Corneal abscess Yes JX T4/10 AK_TN1 -GGTGCGGTC GTCCTTGGC--GTCGG T-TTCGGCCGG--C GCGGGGGCGG CTTAGCCCG GTGGCACCGG TGAA- T4/16 AK_TN2 GGTTGCGGTC GTCCTTGGCGTCTCGG T-TTCGGCCGGGGC GCGGGGACGC TTTAGCCCG GTGGGACCGG TGAA- T4/10 AK_TN5 GGTTGCGGTC GTCCTTGGCGTCTCGG T-TTCGGCCGGGGC GCGGGGACGC TTTAGCCCG GTGGGACCGG TGAA- T4/10 AK_TN3 GGTTGCGGTC GTCCTTGGCGTCTCGG T-TTCGGCCGGGGC GCGGGGACGC TTTAGCCCG GTGGGACCGG TGAA- T4/10 AK_TN4 GGTTGCGGTC GTCCTTGGCGTCTCGG T-TTCGGCCGGGG- GCGGGGACGG TTTACCCCG GTGGCACCGG TGAA- T4/15 * ******* ********* **** * ********* ****** ** *** **** **** ***** **** Figure 2 Primary sequence alignment of a variable region of DF3 (stem 29-1 of the 18S rrna gene) of isolates from Acanthamoeba keratitis patients by CLUSTAL 2.0. The alignment shown is a subset of DF3 that contains the highly variable and informative section of this fragment. Sequences are aligned by similarity. Asterisks denote variable positions; gaps are represented as dashes References [1] Khan, N.A., Pathogenesis of Acanthamoeba infections. Microb Pathog, (6): p [2] Schuster, F.L. and G.S. Visvesvara, Free-living amoebae as opportunistic and non-opportunistic pathogens of humans and animals. Int J Parasitol, (9): p [3] Dendana, F., et al., Free-living amoebae (FLA): detection, morphological and molecular identification of Acanthamoeba genus in the hydraulic system of an haemodialysis unit in Tunisia. Parasite, (2): p [4] Trabelsi, H., et al., Free-living Amoebae (FLA): morphological and molecular identification of Acanthamoeba in dental unit water. Parasite, (1): p [5] Marciano-Cabral, F., R. Puffenbarger, and G.A. Cabral, The increasing importance of Acanthamoeba infections. J Eukaryot Microbiol, (1): p [6] Patel, A. and K. Hammersmith, Contact lens-related microbial keratitis: recent outbreaks. Curr Opin Ophthalmol, (4): p [7] Stothard, D.R., et al., The evolutionary history of the genus Acanthamoeba and the identification of eight new 18S rrna gene sequence types. J Eukaryot Microbiol, (1): p [8] Nuprasert, W., et al., Identification of a novel t17 genotype of acanthamoeba from environmental isolates and t10 genotype causing keratitis in Thailand. J Clin Microbiol, (12): p [9] De Jonckheere, J.F., Epidemiological typing of Acanthamoeba strains isolated from keratitis cases in Belgium. Bull Soc Belge Ophtalmol, 2003(287): p [10] Ledee, D.R., et al., Molecular identification of t4 and t5 genotypes in isolates from acanthamoeba keratitis patients. J Clin Microbiol, (5): p

77 P.38. Anticancer activity of gallic acid purified from a halophyte Limonium densiflorum on human adenocarcenome colorectal cell line (DLD1) 1 Faten Medini, 1 Samia Oeuslati, 2 Serge Lavoie, 2 Jean Legault & 1 Riadh Ksouri 1 Laboratoire des Plantes Extremophyles, Centre de Biotechnologie de Borj Cedria, CP 9003, Hammam- Lif Tunis. 2 LASEVE, Université du Québec à Chicoutimi, 555, Boulevard de l Université, Chicoutimi, Québec, Canada G7H 2B1 Abstract Gallic acid is widely disturbed in plants, fruits and foods with a range of biological activities. In the present study, this bioactive molecule was purified from a halophyte Limonium densiflorum. The possible anticancer property was explored on DLD1, a human adenocarcinome colorectal cell line. Principal results showed that this phenolic compound inhibited significantly the DLD1cell growth and decreased cell viability monitored in 72h. In fact, this cytotoxic activity displayed an important IC 50 values (59µg/ml) which was more interesting than the Etoposide (positive control, IC 50 =80µg/ml). Keywords: Limonium densiflorum, gallic acid, anticancer activity, DLD1 cell carcinoma. 1. Introduction Worldwide, adenocarcinome colorectal is the most common cancer in terms of both occurrence and mortality [1]. Recently, multiple new chemotherapeutic agents have been developed and some are in clinical trials [2]. Although some of them have produced promising results, their therapeutic spectrum is narrow along with toxicity. This toxicity problem at therapeutic concentration induced scientists to search for anticancer compounds derived from natural sources such as phytochemicals. The aim of the present study was to explore the anticancer power of gallic acid (GA; 3,4 5-triphydroxyl-benzoic acid), a natural phytochemical purified from the halophyte Limonium densiflorum on DLD1 human colon cancer cell lines. Several biological activities have been described for this group of molecules, mainly anticancer, antibacterial and antifungal properties [3]. But, there are not data for the anticancer activity of this compound on human adenocarcinome colorectal. 2. Methodology 2.1 Purification and identification of gallic acid Limonium densiflorum plant was harvested from salt flat (sebkha) from Kairouan city (semi arid climate). Shoots were rinsed with distilled water, left at room temperature for 7 days in the dark, and then plant was ground. Fig 1. Purification and characterization of gallic acid Process. 2.2 Evaluation of cytotoxic activity 77

78 The cytotoxic activity of galic acid was evaluated against colon adenocarcinoma DLD-1 cell lines and human skin fibroblaste WS-1. Exponentially growing cells were plated at a density of cells per well in 96-well microplates and were allowed to adhere for 16 h before treatment. 100µl of increasing concentrations of extracts in DMSO were then added. The cytotoxicity was assessed using the resazurin reduction test as described by O Brien [4]. Measurements of fluorescence were carried out after 48 continuous hours of contact between compounds and cells on an automated 96-well Fluoroskan Ascent Fl plate reader using an excitation wavelength of 530 nm and an emission wavelength of 590 nm. Results are expressed as the concentration inhibiting 50% of the cell growth (IC 50 ). Known for its activity against A-549, and dld1, Etoposide was used as a positive control in this experimentation. 3. Results After, extraction, fractionation of ethanolic Limonium extract, The pure molecule was recuperated by HPLC preparative and characterized with RMN. It was identified as gallic acid (Figs. 1 and 2), it's yield was equal to % of dried biomass. Fig 2. C 13 and H 1 Spectrums of Gallic acid The cytotoxicity of gallic acid was evaluated against colon carcinoma cell lines DLD-1 and human skin fibroblast cell lines WS1. The IC 50 values obtained are shown in table 1. Results displayed that gallic acid depicted an interesting cytotoxicity against DLD1 with an IC 50 value equal to 59 ± 2µg/ml. In addition, this molecule was not found to be significantly cytotoxic against healthy human skin fibroblast cell lines WS1. Compared to the positive control Etoposide (IC 50 = 85µg/ml), gallic acid has a strong activity against colon carcinoma. DlD1 WS1 Gallic acid 59µg/ml >100µg/ml Etoposid 85µg/ml 50µg/ml Table1. Anticancer activity of gallic acid and the positive control (Etoposide) 4. References [1] Aye A.T., Yanyuan W., Jane L., dhruva K.M., hedher G., Philip K., & Jaydoud V.D., Role of Caspases in 5-FU and Selenium-induced Growth Inhibition of Colorectal Cancer Cells. Anticancer. Res. 28 pp, [2]. Lynch TJ., Adjei AA. & Bunn PA., 2004 Novel agents in the treatment of lung cancer..conference summary statement. Clin Cancer Res. 10pp, 4199 S4204. [3]. Fujita K. & Kubo I., Antifungal activity of actyl gallate. Int. J. Food Microbiol., 79 pp, [4]. O Brien J., Wilson I., Orton T., & Pognan F., Investigation of the Alamar Blue (resazurin) fluorescent dye for the assessment of mammalian cell cytotoxicity. Europ. J. Biochem. 267pp,

79 P.39. Effet de la colchicine et du stade de développement sur les potentialités antifongiques de Trigonella foenum-graecum L. 1 Faten Omezzine, 3 Mejda Daami-Remadi, 1 Afef Ladhari & 2 Rabiaa Haouala 1 Département de Biologie, Faculté des Sciences de Bizerte, Tunisia. (UR03AGR04). 2 Département de Biologie et de Protection des Plantes. Institut Supérieur Agronomique de Chott-Mariem. Université de Sousse, Chott-Mariem 4042, Tunisia. (UR03AGR04) 3 Laboratoire de Phytopathologie, Centre Régional des Recherches en Horticulture et Agriculture Biologique, Université de Sousse, Chott-Mariem, 4042 Tunisia. Résumé La polyploïdie joue un rôle important dans l'évolution des plantes et constitue un mécanisme important de diversification. Les extraits aqueux des parties aériennes de fenugrec de plantes diploïdes mixoploïdes à trois stades de développement (végétative, floraison et fructification) ont été testés sur la croissance mycélienne de Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici (FOL) à différentes concentrations (2 ;4 ;6 et 8%). Les résultats ont révélé un potentiel antifongique hautement significatif entre les différentes concentrations et les trois stades de développement. Cette toxicité a été plus importante au niveau des parties aériennes de plantes mixoploïdes comparées aux diploïdes. La souche FOL a subi une inhibition totale en présence de l extrait des plantes mixoploïdes récoltées au stade végétatif à 8%. Pour les autres extraits, l inhibition de la croissance mycélienne a varié entre 53 et 77%, à la plus forte concentration. Ces résultats ont montré que T. foenumgraecum est riche en substances naturelles inhibitrices de la croissance de FOL et que cette inhibition a été renforcée sous l effet de la colchicine. Mots clés: Potentiel antifongique, colchicine; fenugrec; FOL; stade de développement. 1 Introduction Les produits naturels sont de plus en plus recherchés pour une agriculture durable. Cependant, ces molécules à intérêt, sont dans la plus part des cas, produites en de très faibles quantités. Par ailleurs, il est rapporté que les espèces polyploïdes, provenant de formes diploïdes connues, sont généralement plus vigoureuses et plus productives. Ce qui a conduit certains travaux à induire la polyploïdisation pour une meilleure qualité/productivité des plantes. La colchicine est l un des moyens utilisés pour l obtention de plantes polyploïdes. Nos optons dans la présente étude d investiguer l effet de cette substance sur la production de substances antifongiques par Trigonella foenum graecum L. 2 Matériel et méthodes 2.1. Matériel végétal Le présent travail a été effectué sur deux types de plantes de Trigonella foenum-graecum L. les unes diploïdes obtenues à partir de graines achetées sur le marché, les autres mixoploïdes obtenues après traitement des graines à la colchicine. Les deux plantes ont été récoltées à trois stades de développement : végétatif, floraison et fructification Préparation des extraits Les extraits aqueux ont été préparés par trempage de 15 g de poudre végétale dans 100 ml d eau distillée pendant 24h. L extrait a été filtré à travers un papier filtre (Whatman N 1) puis à travers un microfiltre de 0.22 µm pour éliminer les bactéries. Les filtrats ont été conservés à 4 C Bioessais antifongiques Le champignon testé dans notre travail est : Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici (FOL) qui infecte la tomate. Le milieu PDA a été préparé et auto-clavé à 150 C pendant 30 min. Des quantités appropriées des extraits aqueux (3, 6, 10 et 15 ml) ont été ajoutées au milieu PDA (40 ml), refroidi à 79

80 45 à 50 C, pour obtenir les concentrations 2, 4, 6 et 8% (w/v). Les extraits de plantes ont été soigneusement mélangés avec le milieu. Dix ml de chaque milieu ont été versés dans chaque boîte de Pétri de 9 cm. Après solidification, trois disques mycéliens de 5 mm de diamètre et de 5 à 7 jours de culture de chaque champignon à tester, ont été pris avec une pipette Pasteur et ont été placés dans chaque boîte de Pétri. Chaque traitement a été répété trois fois. La croissance fongique a été évaluée par la mesure des deux diamètres de chaque colonie. L inhibition de la croissance des colonies de champignons, exprimée en pourcent, a été calculée en appliquant la formule suivante [1]: Croissance/inhibition (%) = [(Témoin - Extrait) / Témoin] * Résultats Les différents extraits aqueux (à 2, 4, 6, et 8%) ont été testés sur la souche Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici (FOL) (Fig. 1). Les résultats ont montré une forte inhibition de la croissance mycélienne et ce pour les extraits des plantes diploïdes et mixoploïdes et les trois stades de récolte. Notons que, globalement, les extraits des plantes mixoploïdes ont été plus néfastes que ceux des plantes diploïdes. Ainsi, le pourcentage d inhibition de la croissance mycélienne de FOL a été de 100%, en présence de l extrait des plantes mixoploïdes à 8%, ce pourcentage n a été que de 77% en présence de celui des plantes diploïdes. L extrait aqueux du matériel récolté au stade floraison a induit une réduction qui a varié entre 4% et 63% en présence de l extrait des plantes diploïdes et entre 35% et 74% en présence de celui des plantes mixoploïdes. De même, l inhibition a été de 30% de plus en présence des extraits des plantes mixoploïdes récoltées au stade fructification comparées aux plantes diploïdes (Fig. 1). L effet spécifique des extraits de fenugrec est largement rapporté dans la littérature, ainsi Haouala et al. [2], ont montré que Pythium aphanidermatum était l espèce la plus résistante (34,5% d'inhibition) tandis que Fusarium graminearum, Alternaria sp. et Rhizoctinia solani étaient les espèces les plus sensibles, et ont montré un comportement similaire avec une inhibition moyenne de 63,5%. Figure 1: Pourcentage d inhibition de la croissance mycélienne de souche fongique (Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici (FOL)) en présence des extraits aqueux (à différentes concentrations) des parties aériennes de T. foenum graecum diploïde et mixoploïde récoltées aux stades végétatif, floraison et fructification. Les différentes lettres sur les colonnes indiquent des différences significatives entre les fractions organiques à p<0.05 (LSD test). Références [1] Khanh, T.D., Hong, N.H., Xuan, T.D. & Chung, I.M., Paddy weeds control by medicinal and leguminous plants from Southeast Asia. Crop Prot 24, pp [2] Haouala, R., Hawala, S., El-Ayeb, A., Khanfir, R. & Boughanmi, N, 2008, Aqueous and organic extracts of Trigonella foenum-graecum L. inhibit the mycelia growth of fungi, Journal of Environmental Sciences China 20, pp

81 P.40. Bioethanol production from microalgae isolated from slaughterhouse wastewater Faten Saïdane Bchir, Anouar El Falleh, Emna Ghabbarou, Hamdi Moktar Laboratory of Microbial Ecology and Technology. Department of Biological and Chemical Engineering. National Institute of Applied Sciences and Technology. B. P 676, 1080 Tunis, Tunisia. Abstract The present study consists of an essay about the bioethanol production from microalgae. The strain of microalgae used in this research has been isolated from slaughterhouse wastewater. Morphological characterization and molecular biology has helped to determine that new chrysophyceae specie is at hand. The study starts by applying five methods (thermic shock, grinding, acid treatment, basic treatment, and enzyme hydrolyzing) to disrupt cell wall. Total sugar and reducing sugar analysis demonstrate that the maximum has been obtained for the enzymatic, basic and acid methods. Sugar fermentation with yeast has permitted to obtain bioethanol in all of the samples analyzed showing maximum concentration for the basic method. Keywords: microalgae, chrysophyceae, bioethanol, sugars. 1. Introduction The current problem of pollution caused by the burning of fossil fuels as well as their declining reserves is driving research into the development of bio-fuels. Bioethanol, which is one of the biofuels of interest, is produced by fermenting available sugars from biomass in the presence of microorganisms mostly yeast [1]. Recently, microalgae have received much attention regarding the shortage of energy and mitigation of carbon dioxide, since the photoautotrophic reaction converts atmospheric carbon dioxide into hydro-carbonate [2, 3]. In this study, cell walls of microalgae were destroyed for the production of sugar. Disruptions were effected by different methods. 2. Methodology The first step consists of disrupting microalgae cell wall to extract the maximum of sugars that are to be the fermentation reaction substrate. Five methods have been used: thermic shock, grinding, acid treatment, basic treatment, and enzyme hydrolyzing as described in table 1. Table 1: Description of the five methods used for cell wall disruption. Method Thermal shock Grinding Acid Basic Enz. hydrolysis Reagents - - H 2SO 4 1% NaOH 0.75% % enz. AP2 Description Thermic treatment then immersion in ice Grinding in a mortar Incubation at 120 c during 20min Incubation at 120 c during 20min Incubation at 65 c during 4h. After treatment and centrifugation, the obtained supernatants are analyzed while dosing the level of proteins (Bradford), starch (I 2 /KI), reduced sugars (DNS) and total sugars (phenolic method). TLC and HPLC analysis permit the estimation of the obtained sugars nature. 81

82 The fermentation is applied on the recovered supernatant after ph setting (7±0.1). The microorganism used is the commercialized yeast Saccharomyces cereviseae. The fermentation is performed at 28 c for 48h in anaerobic conditions. The detection of produced bioethanol is achieved by two different methods: HPLC and GC. 3. Results As a first step, genomic DNA extraction and DNAr 18s amplification has been performed. After sequencing, this strain has been identified as a new specie belonging to chrysophyceae reign. After different treatments, the supernatants analysis show that amylose, amylopectin and proteins contents are of a low rate, whatever is the method used. However, there are differences in total and reducing sugars contents. It is through the basic treatment that reducing sugars maximal concentration (0.7g/L) has been obtained. The latter represents more than 32% relative to dry matter. The maximum of 1.78 g/l for total sugar content has been obtained after enzymatic hydrolysis with a yield of 82.2% relative to dry matter. TLC analysis (figure1) and HPLC show that the obtained sugar nature is different from a method to another except for grinding and thermic shock within which no reagent has been used. Fig.1 : TLC profile of supernatants before fermentation. Fig.2:Total sugar content before and after fermentation. The fermentation has been achieved by Saccharomyces cereviseae in discontinued and anaerobic conditions for 48h. The analysis of residual concentration of total sugars displays a decrease in all samples (fig.2). This confirms that the yeast is behind the consumption of these sugars. GC and HPLC analysis ensures the presence of bioethanol in all samples with a maximum of production in basic and enzymatic methods. Similar assays have been performed by R.Harun et al [1, 4], in which different techniques have been applied to optimize bioethanol production. The obtained results in this study show the possibility of producing bioethanol out of microalgae used for its richness of carbohydrates. Such a process represents an alternative for the production of bioenergy of high added value from cheap raw material. Acknowledgement: First, the authors wish to thank Meriem Bchir for her help in translation. Then, our thanks also go to Ines Maalej for her precious help. References [1] Razif Harun, W.S.Y. Jason, Tamara Cherrington, Michael K. Danquah., 2011,Exploring alkaline pre-treatment of microalgal biomass for bioethanol production, Applied Energy 88, [2] Chisti, Y., 2007,Biodiesel from microalgae, Biotechnology Advances 25, [3] Hsieh, C.-H., Wu, W.-T., 2009, Cultivation of microalgae for oil production with a cultivation strategy of urea limitation, Bioresource Technology 100, [4] Razif Harun, Michael K. Danquah., 2011, Influence of acid pre-treatment on microalgal biomass for bioethanol production, Process Biochemistry, Volume 46, Issue 1, Pages

83 P.41. Effet des substituants sur l activité antioxydante des anilides Fatiha Malki 1, Abdelkader Touati 1, Kahina Hamza 1 Laboratoire de recherche sur les produits bioactifs et valorisation de la biomasse, Ecole Normale Supérieure, BP 92, Kouba, Alger, Algérie Résumé L activité antioxydante de certains dérivés d amides et l étude de l effet des substituants tels que le cycle aromatique, la chaine carbonée et le groupement hydroxyle sur les propriétés antioxydantes de ces composés a été étudié et évalué in vitro. La méthode appliquée est celle du piégeage des radicaux libres à l'aide du radical 2,2-diphényl-1-pycrylhydrazyl (DDPH). L activité antioxydante a été mesurée par la cinétique de réduction et mises en évidence par la concentration efficace EC50. Les résultats obtenus ont montré que les anilides comportant un groupement hydroxyle possèdent uneactivité anti-radicalaires plus importante que celle des anilides à chaine aliphatique et à cycle aromatique. Mots clés : Anilides, activité antioxydante, DPPH, cinétique de réduction. 1. Introduction Les antioxydants sont des composés réducteurs capables de piéger des radicaux libres et ainsi d aider le corps à prévenir l oxydation. L activité antioxydante d un composé correspond à sa capacité à résister à l oxydation. De nombreuses méthodes se sont développées permettant d évaluer les capacités antioxydantes de composés naturels ou bien issus de la synthèse chimique [1-3]. L un d entre elle, couramment utilisée, fait appel à l utilisation d un radical libre stable, le 2,2-DiPhényl-1-Picryl- Hydrazyl (DPPH). La stabilité de ce radical résulte de la délocalisation importante de l électron célibataire sur la totalité de la molécule cette délocalisation est à l origine de la coloration violette en solution éthanolique ou méthanolique caractérisée par une bande d absorption dans le visible à 517 nm. Les dérivés des amides font l objet de nombreux travaux dans le domaine industriel et biologique [[4-6. Dans ce cadre, notre étude s est intéressée à l évaluation de l activité antioxydante de certains anilides et l influence de certains groupements sur l efficacité antioxydante. 2. Methodologie Activité anti-radicalaire par le test au DPPH : L activité anti-radicalaire des différents composés a été évaluée in vitro par le test au DPPH. Pour cela, une solution éthanolique de DPPH est additionnée à une solution éthanolique contenant un composé potentiellement antioxydant et pouvant céder un atome d hydrogène entraînant une diminution de la coloration violette caractéristique de l apparition de la forme réduite du DPPH. Ceci permet de suivre la cinétique de décoloration à 517 nm à des intervalles de temps réguliers [2], et de déterminer pour chaque produit, la EC50 définie comme étant la concentration en substrat entraînant une diminution de 50 % de la coloration violette, donc de l absorption. A cette concentration 50 % du DPPH est passé sous forme réduite. Ce paramètre a été introduit par Brand-Williams et al. [7]. Les résultats obtenus pour chaque composé testé sont exprimés par rapport à ceux obtenus pour des antioxydants synthétiques (BHT, BHA) pris comme référence. Les mesures ont été réalisées sur un spectromètre UV-Visible. 83

84 Structure des dérivés d amides étudiés : R-CO-NH-R 3. Résultats 1 R=CH 3, R =C 6 H 5 2 R= C 6 H 5, R =C 6 H 5 3 R= C 6 H 5, R =C 6 H 4 OH Le test au DPPH est réalisé en présence des différents dérivés d amides, pour différentes concentrations. L ensemble des résultats obtenus à la concentration de 100µg/ml en composé est rassemblé dans le tableau 1. Les EC50 respectives ont été déterminées graphiquement à partir des courbes représentant les pourcentages d inhibition en fonction des concentrations. Les résultats obtenus sont reportés dans le tableau 2. Tableau 1: Concentrations inhibitrices 50 % des dérivés d amides Composé BHT BHA EC50 (µg/ml) 7 8,75 5 3, En conclusion de cette étude in vitro, les différents résultats montrent, d une part, une grande efficacité des dérivés d amides comparativement aux antioxydants standards testés dans les mêmes conditions. D autre part, il semble que le dérivé comportant le groupement OH.sur le cycle aromatique est plus efficace que ceux des dérivés de la même famille puisque l inhibition est plus rapide que pour les autres composés. References [1]. Sharma Om P., Bhat T.K, 2009, Food chemistry,, 113 (4), [2] Cristina P., Ilonka S., Bartek T., 2009, Revue de génie industriel, 4, [3] Blois M.S, Antioxidants determination by the use of stable free radical. Nature, 181, [3] Bistline R.G., E Maurer. W., Smith F. D and Linfield W. M., 1980, J. Am. Oil Chemist Society (JAOCS),, No. 2, Vol [5] Narang1 R., Narasimhan B., Judge1 V., Ohlan S.and. Ohlan R, 2009, Acta Pharmaceutica Sciencia, Vol. 51, [6], Malk.F i, Touati A., 2011, Third International Congress on Green Process Engineering "GPE 2011 Congress, Kuala Lumpur, Malaysia - December 6-8. [7] Brand-Williams W., Cuvelier M.E., Berset C., Use of free radical method to evaluate antioxidant activity. Food Science and Technology, 28,

85 P.43. Evaluation de la contamination par les aflatoxines de certains fruits secs: (Sorgho, Pistaches, Amandes et Arachides) Fatima Oukerro-Haouari, Jihène Khouja & Mustapha Haouari Ecole Supérieure des Sciences et Techniques de la Santé de Tunis Résumé Dans ce travail, nous avons évalué la fréquence de contamination des échantillons de fruits secs par les différentes aflatoxines. La purification des aflatoxines est faite sur colonnes d immuno-affinités et leur quantification est réalisée par HPLC. Nos résultats montrent que 24,2% des échantillons sont contaminés par les différentes aflatoxines. Le sorgho est le plus contaminé (42%), avec une fréquence plus élevée pour la forme moulue (52,6%). Quant aux pistaches, arachides et amandes, Ils ont montré une contamination plus faible avec respectivement 32%, 11,33% et 7,62%. Parmi les quatre types d aflatoxines, 60% des échantillons sont contaminés par l AFB 1 avec des niveaux dépassants la VMR (2 µg/kg). Ces niveaux de contamination sont détectés dans les différents échantillons, arachides, pistaches, sorgho et d'amandes avec les pourcentages respectifs suivants : 82%, 78%, 50 et 25%. Cette contamination touche les différentes formes de ces fruits secs, cependant, la forme moulue semble la plus contaminée. 1. Introduction La contamination des denrées alimentaires par les moisissures est inévitable. En effet, la présence de moisissures et de leurs mycotoxines dans les aliments est devenue un sujet de préoccupation pour les professionnels de la santé ainsi que pour le commerce mondial. Parmi les mycotoxines qui contaminent les aliments, les aflatoxines (AFB 1, AFB 2, AFG 1 et AFG 2 ) hautement toxiques, cancérogènes et tératogènes [1,2]. Dans ce travail, nous avons estimé important d évaluer la fréquence de contamination, par les aflatoxines, de 666 échantillons de fruits secs analysés au le laboratoire central d'analyses et d'essai (LCAE) de Tunis. 2. Méthodologie Les échantillons sont répartis comme suit : 247 échantillons d arachides, 214 de sorgho, 105 d amandes et 100 de pistaches. Ces échantillons sont présentés au laboratoire pour être analysés sous différentes formes. Après extraction et filtration des échantillons broyés, la purification des aflatoxines se fait sur des colonnes d immuno-affinités et leur quantification est réalisée par chromatographie liquide haute performance HPLC. La valeur limite détectable (VLD) par cette technique est 0,1 µg /kg (ppb). 3. Résultats Parmi les 666 échantillons testés, 161 (24,17%) sont contaminés par les différentes aflatoxines (AFs), à un taux qui dépasse la VLD. Les résultats obtenus montrent que le sorgho a la fréquence de contamination par les AFs la plus élevée, avec 42% contre 32 %, 11,33% et 7,62% pour les échantillons de pistaches, d arachides et d amandes respectivement Fig1. 85

86 . Fig1 : Fréquence de contamination en fonction de la matrice alimentaire Les formes moulues du sorgho et des amandes sont les plus contaminés avec une fréquence de 52,6% et 28% respectivement contre 35% et 2,8% pour les formes grains. Les taux de contamination des échantillons, des différentes formes d arachides (décortiquée, en coque et blanchie), présentent une légère différence avec respectivement 11,7%; 9,7 % et 8,6%. Parmi les quatre types d aflatoxines, l AFB 1 est le principal contaminant de nos échantillons, soit 60% des échantillons contaminés avec des niveaux de contamination en AFB 1 qui dépassent largement la valeur maximale réglementée (VMR) par la CE et qui est limitée à 2 µg/kg pour l AFB 1. Ces niveaux de contamination élevés par l'afb 1 sont détectés dans plus que 82% d échantillons d arachides et 78% des pistaches contaminées, comparés à ceux du sorgho et d'amandes ayant des pourcentages respectifs de 50 et 25%. Conclusion Les fruits secs testés sont contaminés par les différentes aflatoxines, mais à des fréquences et des teneurs variables. La contamination touche toutes les formes des denrées analysées, néanmoins, celle de la forme moulue est toujours la plus élevée, avec des teneurs dépassant largement la VMR. Ces échantillons représentent un danger réel pour le consommateur. De ce fait, il est essentiel de faire un suivi périodique et systématique de ces denrées et d empêcher la mise en vente de ces produits alimentaires très contaminés. Références [1] Hussein s H & Brasel J.M., 2001, toxicity, metabolism and impact of mycotoxins on humans and animals. Toxicology, 167, [2] Massey T.E., Stewart R.K., Daniel J.M, & Ling L., 1995, Biochemical and molecular aspects of mammalian susceptibility to aflatoxin B 1 carcinogenicity. Proceeding of the Society for Experimental Biology and Medicine, 208,

87 P.45. Environmental distribution and characterization of Cryptococcus neoformans in the Sfax region Tunisia 1 Mseddi Fatma, 1 Jarboui Mohammed Ali, Sellami Hayet & 1 Ayadi Ali 1 fungal and parasitic molecular biology laboratory, school of medicine, University of Sfax, TUNISIA. Abstract Cryptococcus neoformans is an opportunistic fungal pathogen that could cause infection in patients with immunodeficiency and healthy patients. Attempts to determine the ecological conditions (micro- and macroclimatic) possibly related to their habitat were also undertaken. For the isolation and identification of the yeast, conventional phenotypic methods were used and serotyping was determined by PCR-REA. Nine hundred and fifty samples were collected from soil around trunk bases, and detritus inside hollows of trees in 11 municipalities during a 4 years period, as well as 250 avian droppings samples from different places obtained in Sfax region, Tunisia. We have isolated 31 C. neoformans species complex (27 serotype A and 4 serotype B). Of these 26 corresponded to pigeon droppings (Columba livia), 3 from Eucalyptus detritus (Eucalyptus camaldulensis and related species) and 2from almond trees detritus (Prunus dulcis). C. neoformans was present with higher frequency in the rainy season than in the dry season; we found that slightly higher temperature and humidity values of the microhabitat, as compared to those of the environment, favored fungal occurrence. Keywords: Cryptococcus neoformans, environment, distribution 1 Introduction Cryptococcus neoformans is an opportunistic fungal pathogen that could cause infection in patients with immunodeficiency and healthy patients. Based on capsular antigenic, The C. neoformans complex is composed of two species (gattii and neoformans) and five serotypes (A, B, C, D and AD) [1]. The species differ in geographical distribution and habitat. C. neoformans has worldwide distribution and preference for soil contaminated with bird droppings, especially pigeons (Columba livia) [2]. C. gattii is associated with different Eucalyptus species and with almond trees [3]. Attempts to determine the ecological conditions (micro- and macroclimatic) possibly related to their habitat were also undertaken. 2 Methodology Nine hundred and fifty samples were collected from leaves, flowers, fruits, soil containing organic detritus and wood of trees in 11 municipalities during a 4 years period, as well as 250 avian droppings samples from different localities in Sfax region, Tunisia. During collection periods relative humidity and temperature (microclimatic variables) was reported by National Hydrology Meteorology Institute were taken into account for the analysis (macroclimatic variables). Conventional phenotypic methods were used and serotyping was determined by PCR-REA (enzymatic restriction analysis) as described by previous studies [4]. 3 Main Results 87

88 From 950 samples, 31 strains C. neoformans species complex (2.85 %) were isolated in environment: 27 strains of C. neoformans and 4 strains of C. gattii. The 27 strains of C. neoformans var. grubii (serotype A) were isolated from pigeon droppings (10.4%) and from Eucalyptus tree (0.2%). No strains isolated from almond trees. We isolated 4 strains of C. gattii serotype B (0.42%) from environment (Tab. 1). The C. gattii strains were isolated from 27.3% of the studied municipalities (N=3/11) in both transects and the thermal floor: warn, temperate and cold. The results indicated that the greater frequency of positive isolations came from the last thermal floor. The 4 isolates of C. gattii (100%) were isolated under a temperature of C. The majority of C. neoformans isolates (92.5%) was isolated under a temperature of C. In conclusion, C. neoformans prevails in the three habitats studied but it showed a predilection for the cold thermal floor. Table 1: Distribution of C. neoformans and C. gattii in environment. Samples N C. neoformans Municipalities C. gattii Municipalities Pigeon droppings (10.4%) Sfax el medina 0 - Eucalyptus (0.2%) Mahres 2 (0.4%) Mahres, Sfax el Medina Almond trees (1%) Hancha Total (2.84%) N=2 4 (0.42%) N=3 (27.3%) References [1]. Franzot SP, Salkin IF, Casadevall A, 1999, Cryptococcus neoformans var. grubii: separate varietal status for Cryptococcus neoformans serotype A isolates. J Clin Microbiol 37: [2]. Kwon-Chung KJ, Bennett JE,1978, Distribution of alpha and alpha mating types of Cryptococcus neoformans among natural and clinical isolates. Am J Epidemiol 108: [3]. Callejas A, Ordonez N, Rodriguez MC, Castaneda E, 1998, First isolation of Cryptococcus neoformans var. gattii, serotype C, from the environment in Colombia. Med Mycol 36: [4]. Enache-Angoulvant A, Chandenier J, Symoens F, Lacube P, Bolognini J, Douchet C, Poirot JL, Hennequin C (2007) Molecular identification of Cryptococcus neoformans serotypes. J Clin Microbiol 45:

89 P.46. THE IMPORTANCE OF SOME BIOMOLECULES OF MALLOW 1 Sabri Fatima Zohra, 1 Belarbi Meriem, 1 Beghdad Chokri, 2 Sabri Samira. 1 Laboratory of natural products, synthesis and biological activity (LAPRONA), Department of Molecular and Cellular Biology, PO Box 119 Imama. University Abou Bekr Belkaid. Tlemcen, ALGERIA 2Laboratory of Research "Ecology and management of natural ecosystems", Department of Ecology and Environment, PO Box 119 Imama. University Abou Bekr Belkaid. Tlemcen, ALGERIA sab_fati@yahoo.fr Abstract Vegetables take a prominent place in our diet; some species are very popular in the Mediterranean. And because it is consumed by the population of Algeria and the Mediterranean, our choice was the spontaneous plant (Mallow) Malva sylvestris L. This work is devoted to the study of bimolecular composition of this plant. This species is characterized by a high nutritional density which is actually rich in crude protein and in total sugars. Total mineral matter and crude fibre represent the rate comparable. On the other hand, we find that it is low in fat content. In light of these results, we can explain how that mallow have been widely consumed and used in traditional medicine. Keywords: Malva sylvestris L., bimolecular composition, crude protein, total sugars, total mineral matter. 1 Introduction One too often reduces the originality of the Mediterranean mode to this high content in cereals and the presence of olive oil. Actually, the place of vegetables is particularly significant there. Vegetables with sheets: Mallow...are omnipresent in the menus. Because it is consumed by the population of Algeria and the Mediterranean, our choice was the medicinal plant Mallow. This work is devoted to the study of chemical composition to enhance its nutritional quality. 2 Methodology The determination of crude protein is produced by [1] and the determination of fat is carried out in a Soxhlet-type extractor with a solvent [2] followed by analysis and identification of fatty acids. The assessment of the amount of total sugars was made by the method of [3], and the determination of ash according [4]. Finally, the determination of crude fibre is to treat the sample to be analyzed successively with sulfuric acid and potash [5]. 3 Main Results This species is characterized by a high nutritional density which is actually rich in crude protein and in total sugars. Total mineral matter and crude fibre represent the rate comparable. On the other hand, we find that it is low in fat content. To conclude, we will post so that Malva sylvestris L. can be considered as a source of protein and therefore it can be used as a complement protein and emollient and softening plant as facilitating the digestive tract. 89

90 References [1] -Kjeldahl J., Meue methode Zur bestimmung des sticktoffs in organishem Kőrpen.Z. Anal. Chem., 22, pp [2] -Lecoq (1965). Manuel d analyse alimentaires et d expertises usuelles. [3] -Dubois M.K.A., Gilli Y. K., & Hamilton P. A.,1956. Colometric method for determination of sugars and related substance. Anal. And Chem. Jour., 28, pp [4] -Audigie Cl., & Dupont G., Principe des méthodes d analyses biochimiques, pp [5] -Bruneton J., Pharmacognosie-Phytochimie, Plantes médicinales. Technique et documentation.3éme Ed. Lavoisie, Paris. 90

91 P.48. Impact of chronic toxicity of lead on the endocrine system in pubescent male rats. 1 Abidi Fethia, 2 Ben Rayana Chiheb, 3 Benlasfar Zakaria, 1 Ben Salah Faiçal 1- Laboratoire de Toxicologie, d Ergonomie et d Environnement Professionnel, Faculté de Médecine de Tunis, 15 rue Jebel Lakhdhar, 1007 Bab Saâdoun. Tunis, Tunisie. 2- Laboratoire de Biologie Clinique, Institut de Nutrition, 15 rue Jebel Lakhdhar, 1007 Bab Saâdoun Tunis, Tunisie. 3- Unité des Services Animalières- Institut Pasteur de Tunis. 13, Place Pasteur, B.P. 74, 1002 Tunis, Belvédère. Tunisie. Abstract In recent years, there is growing interest in the possible health threat posed by endocrine-disrupting chemicals, which may disrupt the endocrine system and cause deleterious effects. Lead, like other endocrine disruptors, is a metal highly toxic to humans and other mammals. The current study evaluates the impact of low or moderate levels of lead acetate (PbAc) on gonadotropins: Plasma luteinizing hormone (LH), follicle-stimulating hormone (FSH) and testosterone. Adult albino wistar male rats were allocated to three groups and given 0%, 0.1% and 0.3% PbAc in distilled drinking water for 12 weeks. The levels of LH and FSH were not significantly affected after lead treatment and significant increase in serum testosterone level was noted (p<0.05). In conclusion, our results reveal no obvious alteration of hypothalamic pituitary function. The increase of testosterone level observed suggests that lead may target testicular function. Keywords: Rat; Lead acetate; FSH; LH; Testosterone 1. Introduction The environmental contamination with heavy metals has increased due to anthropogenic activities, such as electroplating, tanneries, leather industries, sugar mills, fertilizer industries, textiles, mining and metallurgical processing [1,4]. Release of these metals are of major concern since they are a serious threat to the health and well-being of humans and animals [2,5]. Metals constitute an important gamut of pollutants because of their bio-accumulative, immutable, and non-degradable properties. Lead (Pb) is a nonessential, highly toxic heavy metal, which is released into the environment by several routes, but principally by industrial, mining and hunting activities [3]. In the present study, Adult albino wistar male rats were allocated to three groups and given 0%, 0.1% and 0.3% PbAc in distilled drinking water for 12 weeks. Serum FSH, LH and testosterone levels were measured after lead exposure. 2. Materials and Methods 2.1.Animals and Experimental design Healthy Pubescent Male albinos Wistar rats were purchased from Pasteur Institute (Tunis, Tunisia). They were housed in opaque polystyrene cages with two animals per cage. The animals were maintained under standard conditions of temperature (22±3 C) with a relative humidity of 60% and on a 12 h light-dark cycle and ventilation system. In the experimental period, animals had access to food (ACN Society, Sliman, Tunisia) and water ad libitum. A total of 24 animals weighing between 180 and 220 g were randomly divided into three groups of 8 rats per group for each of the 90-day exposure studies. 91

92 Rats were allowed to acclimate to their new environment for 2 weeks prior to initiation of lead treatment. The control and experimental groups are as follows: 1- Control group (G1, n= 8) : rats were given distilled water 2- Experimental group (n=16): rats were given distilled water enriched with lead acetate either 1 (G2; n=8) or 3 mg ml -1 (G3; n=8). 2.2.Sacrifices: At the end of experience, groups of control and lead treated animals were weighed and sacrified after a light anaesthesia with diethyl ether. Blood was collected via cardiac puncture until FSH, LH and testosterone dosages Hormonal assay: Serums levels of LH, FSH and testosterone were determined using commercially available radioimmunoassay kits (MP Biomedicals Germany GmbH), using an Automatic Gamma Counter (Perkin Elmer, USA). All RIA procedures were carried out according to the manufacture s instructions; The assay was done strictly according to the procedure given along with the kit. Serums levels of LH, FSH and testosterone were expressed as ng/ml. 2.4.Statistic analysis : The statistical significance of the differences between the experimental and control groups was determined by Student s t-test or Mann-Whitney U-test when the variances were not homogenous. Differences at p 0.05 were considered statistically significant. All the values are presented as mean ± S.D 3. Results Table 1: Effect of lead acetate treatment on testosterone, LH ( luteinizing hormone) and FSH (follicle-stimulating hormone) serum level Control PbAc 1g/l Pb Ac 3g/l LH (ng/ml) 1,086±0,254 1,433±0,599 0,921 ±0,160 FSH (ng/ml) 17,993±6,878 16,741±15,362 15,403 ±6,800 Testosterone (ng/ml) 0,115±0,122 0,451±0,484* 1,369±1,444* 4. References: Data represent the mean±s.d of eight determinations per group. *p<0.05 compared to controls (Student s t-test). [1] Amoroso, M.J et al.,1998, Screening of heavy metal-tolerant actinomycetes isolated from the Sali River. J. Gen. Appl. Microbiol. 44, pp [2] Bressa, G.,Cima,L.,Costa,P.,1988, Bioaccumulation of Hg in the mushroom Pleurotus ostreatus. Ecotoxicol.Environ.Saf.16, pp [3] Fisher, I.J., Pain, D.J., Thomas, V.G., A review of lead poisoning from ammunition sources in terrestrial birds. Biol. Conserv. 131, pp [4] Kaewsarn, P.,Yu,Q.,2001. Cadmium(II) removal from aqueous solutions by pre-treated biomass of marine alga Padina sp. Environ.Pollut.112, [5] Selvin, J., Shanmugha Priya, S., Seghal Kiran, G., Thangavelu, T., Sapna Bai, N., Sponge-associated marine bacteria as indicators of heavy metal pollution. Microbiol. Res. 164,

93 P.49. EFFECT OF CITRULLUS COLOCYNTHIS EXTRACTED OIL ON CADMIUM- INDUCED NEPHROTOXICITY IN RATS Amamou Fouzia, Bouafia Miloud, Meziane Radjaa, Didi Amel, Yazit Sidi Mohamed, Chabane Sari Daoudi. Laboratory of natural products, University Abou Bekr Belkaid, Faculty of SNV-STU, Department of biology Tlemcen, BP 119 Imama Tlemcen Algeria. Abstract This study aims at investigating the effect of treatment with Citrullus colocynthis oil (medicinal plant known for their various healing properties), on cadmium-induced renal toxicity and confirming possible mechanisms by which colocynth oil reduce/restore cadmium induces nephrotoxicity. Twenty male Wistar rats were used. They were divided into four groups (n = 5) and subjected to an experiment of two months: the first two groups were received diets containing 4% sunflower oil and 4% C. colocynthis oil respectively were not treated with Cd. Groups III and IV were given the same regimens and received Cd via drinking water (50mg/l Cd as CdCl2). At the end of the experiment, rats were sacrificed and blood was collected from the abdominal aorta. The kidneys were also excised. Changes in body and kidney weights were determined. Renal weight index, 24 h urine volume and renal clearance were also determined. Our results showed a significant (P < 0.05) decrease in body weight gain of rats in groups II, III and IV compared with control rats (group I). Renal clearance and 24 h urine volume were reduced in group III when compared to all groups. In parallel, the incorporation of C. colocynthis oil in the dietary regimen of rats treated with Cd ameliorate decreasing in urine volume and renal clearance induced by Cd. In conclusion the integration of colocynth oil in the dietary regimen of rats provides mild reduction in Cdinduced nephrotoxicity in rats. Keywords: colocynth, oil, cadmium, kidneys, rats 93

94 P.50. Inventaire des zooplanctons du lac Sidi M hamed Ben Ali et impacte de la pollution sur ses espèces Allaili Hadjar, Meziane Khadidja, Kerfouf Ahmed Laboratoire d éco développement des espaces, Département des sciences de l environnement, Faculté des sciences, Université DjillaliLiabès, BP 89, Sidi Bel Abbès , Algérie. ' hallaili@yahoo.com hotdogsdevil@yahoo.fr kerfoufahmed@yahoo.fr Résume Le lac Sidi M hamed Ben Ali est parmi les écosystèmes aquatiques les plus importants existants dans notre région la région de Sidi Bel Abbes ; Algérie Occidental-Puisque les zooplanctons sont les constituants le plus essentiel dans tout les écosystèmes en particulier les lacs, nombreux entre eux jouent le rôle des filtreurs et chacun à sa façon. Notre étude constitue a inventorie et déterminé les espèces zoo-planctoniques existantes dans notre site d étude durant une période de l'années on déterminant l impacte de la pollution sur ces espaces. Sachant que notre site est le bassin versant de l Oued Makerra. Mots clé : Ecosystème aquatique, lac Sidi M hamed Ben Ali, zooplancton, analyses physico-chimiques, pollution, Oued Makerra. 1-Introduction: Le système aquatique est le milieu dans lequel l'eau joue par sa présence le rôle majeur de support de la vie (CAUJOUR, J. 1984), le lac Sidi M'hamed Ben Ali est parmi ces écosystèmes artificiels de l'ouest Algérien. Ces écosystèmes constituent une richesse naturelle. Le zooplancton, la proie des consommateurs du deuxième ordre, considère comme un élément essentiel dans une chaîne trophique. Ils sont bien répondus dans notre site d'étude, selon les travaux de: Younes et all. 2009, Derras et all. 2009, Hamza et all Matériel et Méthode: 2-1- Choix des stations: Dans ce travail, on a choisit 3 stations: la première a l'est du lac elle l'amène des eaux en provenance de l'oued Mekkera, avec une sol est rocheux et des eaux très pollués. La seconde situé au Sud, avec un sol cailloux, graveleux et des eaux semble peu pollués et la dernière a l'ouest prés de l'estran d'évacuation du trop plein du lac avec un sol vaseux en raison de sa proximité des champs agricoles et de l'érosion Méthode de prélèvement: Notre étude consiste à faire un suivie dans le temps et dans l'espace du zooplancton vivant dans le secteur Sidi M'hamed Ben Ali. Et ce prélèvement se fait à une profondeur de 30cm, le filet est traîné horizontalement dans le sens d'aller-retour. L'eau prélevée est récupéré dans les flacons en vu d'un identification. (Dussart, B. 1969) 3- Résultats et discutions Durant la période de travail, des milliers d'espèces ont été récolté de 4 familles différentes Cladocères, Copépodes, Rotifères, Ostracodes. 94

95 Parmi c'est famille les Copépodes sont en première position avec 59,88% suivis par les Cladocères avec 26,05% ensuite les Rotifères par 14,05% et enfin les Ostracodes avec 0,009% et la figure 02 représente cette richesse spécifique. Copépodes Cladocères Rotifères Ostracodes nembre d'espèces st1 sta2 sta3 Cladocères Copépodes Rotifères Ostracodes. Figure 02: Richesse spécifique des zooplancton récolté Figure 03: nombre d'espèces zoo-planctoniques par station d'échantillonnage. Le nombre d'espèce zoo-planctonique est présenté dans la figure Conclusion: Sur le plan écologique, le peuplement zoo-planctonique est dominé par les Copépodes pendant toute l'année du prélèvement, les ostracodes sont très peut représenté pour cela en dit que le développement et la répartition de ces espèces est en relation avec la pollution. En conclusion, le lac Sidi M'hamed Ben Ali nécessite une préservation, en tant qu'un écosystème très important, et une protection contre toute les formes de pollutions. Références : Boudiffa H., Etude comparative du zooplancton de deux lacs de la région de Sidi bel Abbes ( Lac Sidi M'hamed ben ali et Barrage Sarno). CAUJOUR, J La pollution aquatique, Edition MASSON. Paris. Derraz A. et all Fluctuation spacio-temporelles du zooplancton de l'ouest du lac Sidi Mohamed Ben Ali. Dussart, B Les copépodes des eaux continentales d'europe continentale. Hamza Z. et all Etude physico-chimique et zooplanctoniques du lac Sidi M'hamed Ben Ali Wilaya Sidi Bel Abbes. Mahamat Seid, Contribution a l'étude écologique et environnementale du lac Sidi M'hamed Ben Ali Paul Bougis, Ecologie du plancton marin, le Zooplancton. Paris Edition MASSON. Younes H. et all l'étude physico-chimique et zooplanctoniques de côte sud du lac Sidi M'hamed Ben Ali Wilaya Sidi Bel Abbes. 95

96 P.52. Antioxidant and antimicrobial activities of natural phenolic extracts from Rhanterium adpressum flowers 1 Hadjer Boussoussa & 1 Mohamed Yousfi 1 Laboratoire des sciences fondamentales, Université Ammar Thelidji, BP 37G Laghouat Algérie. Abstract Since recent times, there is a growing interest in natural products from plant materials for their usefulness to humankind, and this continues to the present day. Phenolic compounds are bioactive molecules exhibiting a lot of scientific attention due to their multiple biological activities. In this study we are interested in phenolic extracts of Rhanterium adpressum flowers and in vitro study of their antioxidant and antimicrobial activities. Keywords: phenolic extracts, flavonoids, antioxidant activity, antimicrobial activity 1 Introduction Phenolic compounds are naturally occurring compounds found largely in plants and possessing an impressive array of pharmacological activities. Recently, the interest in medicinal plants and natural phenolic extracts has grown for their antioxidant potential and their importance in the prevention of some diseases [1].Therefore, the main purpose of the present study was to determine the antioxidant and antimicrobial activities of natural phenolic extracts from Algerian desert plant; Rhanterium adpressum and to determine total phenolics and flavonoids contents. 2 Methodology Preparation and Analysis of phenolic compound The air dried plant material was extracted using to solvent systems (methanol-water: 8/2) and (acetone-water: 7/3). The collected crude extracts were then concentrated on a rotary evaporator at 40 C and fractionated successively with (hexane, ethyl acetate and butanol) in order to fractionate compounds in the crude materials according to their polarity. The amount of total phenolics is determined by the Singelton method [2]. Gallic acid was used as the standard for calibration curve. The content of phenolic compounds (mg/g of dry weight of plant) was obtained from the calibration curve and expressed in gallic acid equivalent. The Flavonoïds content in extracts is determined spectrophotometrically according to Lamaison and Carnat [3], using aluminum chloride as reagent. Rutin was used to make the calibration curve. The flavonoids content is expressed in mg per g of rutin equivalent (RE). Evaluation of antioxidant activity The antioxidant activity of extracts was measured using three different in vitro assays; including the 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radical scavenging activity, ABTS 2, 2-azinobis-(3- ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) power reducing method and phosphosmolybdenum assay [4-5]. Evaluation of antimicrobial activity The antimicrobial activity of extracts was evaluated on the basis of the inhibition zones (IZ) using agar hole diffusion method, the minimal inhibition concentration (MIC) and the minimal microbicidal concentration (MMC) by the macrodilution method [6]. 96

97 2 Main Results 19, 20, 21 et 22 décembre 2012 Hôtel EL Mouradi Douz - Tunisie Table 1: Amount of plant phenolic compounds, flavonoids and their antioxidant activity values Plant extracts (MeOH/water) (Acetone/water) Ac-Et BuOH Ac-Et BuOH Total phenolics(mg AGE/g dw) 8,91 ± 0,03 7,06 ± 0,02 12,66 ± 0,10 6,21 ± 0,04 Total flavonoid s (mg RE/g dw) 5,64 ± 0,01 4,95 ± 0,05 7,65 ± 0,06 5,80 ± 0,03 IC 50 (µg/ml) DPPH 11,81 ± 0,49 10,94 ± 0,02 12,73 ± 0,07 11,43 ± 0,06 EC 50 (µg/ml) ABTS 1,23 ± 0,02 1,61 ± 0,42 1,77 ± 0,03 1,48 ± 0,10 VCEAC Phophomol -ybdenum 1,08 ±0,29 1,20 ±0,27 1,08 ±0,36 1,10 ±0,15 Table 2: Minimal inhibition concentration (MIC) and the minimal microbicidal concentration (MMC) values of phenolic extracts. (MeOH/water) (Acetone/water) Tested strains Ac-Et BuOH Ac-Et BuOH MIC «μg/ml» MMC «μg/ml» MIC «μg/ml» MMC «μg/ml» MIC «μg/ml» MMC «μg/ml» MIC «μg/ml» MMC «μg/ml» Bacillus cereus Enterococcus faecalis Pseudomonas aeruginosa Klebsiella pneumoniae Escherichia coli Salmonella typhi 368, ,68 421,05 842,10 368,42 736,84 631, ,68 368, ,68 631, ,15 368,42 736,84 631, ,15 736, ,68 631, ,15 736, ,68 631, , ,57 > 1263, , , , , , ,68 631,57 >1263,15 368, ,68 631,57 > 1263,15 References [1] López A., Rico M., Rivero A & Suárez de Tangil M., 2011, The effects of solvents on the phenolic contents and antioxidant activity of Stypocaulon scoparium algae extracts, Food Chemistry, pp [2] Lister, E &Wilson, P., 2001, Crop Research Institute, Lincoln, New Zealand. [3] Quettier - Deleu C & al. (2000) Journal of Ethnopharmacology. 72, pp [4] Brand-william W, Cuvetier ME & Berset C., 1995, Food science and technology. 28, pp [5] Saleh E and Hameed A., Total phenolics contents and free radical scavenging activity of certain Egyptian Ficus species leaf samples, Food Chemistry, (114); pp. [6] J.Rauha., S. Remes., M. Heinonen., A. Hopia., M. Kahkonen., T.Kujala., K. Pihlaja., H. Vuorela & P. Vuorela., 2000, Antimicrobial effects of Finnish plant extracts containing flavonoïds and other phenolic compounds, International Journal of Food Microbiology. 56, pp

98 P.53. Effects of valorization of olive mill wastewaters by spreading on soils and co-composting with industrial organic wastes in semiarid Mediterranean soil 1 Hafedh RIGANE & 2 Khaled MEDHIOUB 1 Faculty of Sciences of Sfax, Sfax University, P.B. 1171, 3000, Sfax, TUNISIA 2 Preparatory Institute of Engineering Studies of Sfax, Sfax, TUNISIA Abstract In Mediterranean countries, large amounts of olive mill wastewaters (OMW) are produced by traditional and industrial olive mills at a limited time period (from October to December). OMW contains a high organic load, substantial amounts of plant nutrients and may represent a low cost source of water. Many ways of valorization of this substrate such as spreading on soils, co-composting with industrial organic wastes. The use of OMW for soil fertigation is a valuable option for its disposal, provided that its impact on soil chemical and physical properties is established. Investigations were performed on the influence of OMW after five years of application on chemical and physical soil properties from a semi-arid Mediterranean region (Tunisia). The application of OMW caused a decrease in the saturated hydraulic conductivity of soil. Suspended solids including organic matter in OMW may have filled up some of the soil voids causing a decrease in soil hydraulic conductivity. The use of OMW for composting was studied by the addition of this liquid waste to a mixture of industrial wastes. The composting process was compared with another pile of similar composition, but without OMW. The OMW addition produced compost with higher organic matter concentrations and higher electrical conductivity, and a stabilized and humified organic matter lower than the compos without OMW. Keywords: spreading, composting, organic matter, potassium, porosity, infiltration 1 Introduction The olive oil extraction industry is a very important economical activity in Mediterranean countries, with Spain is the leader country in the world, followed by Italy, Greece, Tunisia, Turkey and Syria. These seven countries alone account for 90% of world production. The annual OMW production in Mediterranean olive-growing countries is estimated to more than m 3. This industrial wastewater is heavy loaded, with chemical oxygen demand (COD) values ranged from 60 to 185 g.l -1. The high toxicity of OMW is attributed to phenolic compounds although the phenolic fraction represents a relatively low effluent in COD value. OMW is also an acidic effluent (ph=5.3). Therefore, there is a need for guidelines to manage this by-product using technologies minimizing its environmental damage and leading to a sustainable use of this available bioresource. Different disposal processes based on evaporation ponds [1], physical and chemical treatments [2] and biotechnological transformations (by microbiological treatments, composting [3] and anaerobic digestion [4], as well as direct application in agricultural soils as organic fertilizers have been investigated [5]. The aim of the present study was to investigate the effects of successive yearly OMW application on several chemical and physical properties reflecting soil and the application of OMW compost to improve soil fertility and stability. 2 Methodology The field was divided into four plots (24 m x 24 m within a hectare). Three experimental plots T1, T2 and T3 were amended in February 2004 with 50, 100 and 200 m 3 ha -1 of OMW, respectively in one application, with control plot (TC) not irrigated and not amended. OMW was applied one time/year. OMW was spread at different doses with a pneumatic liquid manure spreader towed by a tractor. For composting process, two piles were prepared by mixing olive husks with poultry manure: a pile with OMW and another without this substrate. The two composts are applied on soils which are compared to manure. 3 Main Results After spreading of OMW, we note an increase in organic matter content following irrigation with OMW particularly with high doses has been observed previously and may have a beneficial effect on soil fertility and yield. 98

99 Ks (10-3 m/s) 19, 20, 21 et 22 décembre 2012 Hôtel EL Mouradi Douz - Tunisie Application of OMW caused a decrease of ph essentially in treated plot with 200 m 3.ha -1 in second horizon from 7.9 in control soil (TC) to 7.4, whereas no important significant changes occurred with the 50 and 100 m 3 ha -1 of OMW (Fig.1). In addition, application of OMW caused a decrease in the saturated hydraulic conductivity (Ks) at depths of 0 20, and cm. Suspended solids including organic matter in OMW may have filled up some of the soil voids causing a decrease in soil hydraulic conductivity (Fig. 2). 8,2 8 7,8 7,6 7,4 7,2 7 ph TC T1 T2 T3 TC T1 T2 T3 TC T1 T2 T TC T1 T2 T3 TC T1 T2 T3 TC T1 T2 T cm cm cm 0-20 cm cm cm Fig. 1- ph in the treated plots after 5 years Fig. 2 Saturated hydraulic conductivity The composting process permit to produce two composts with and without OMW and show difference between two composts which can be attributed to the higher content of easily degradable organic compounds provided by OMW [6]. Organic matter decomposition bring about an increase in ph and electrical conductivity in the piles, as recorded by [7], which was explained as a consequence of the degradation of acid-type compounds, such as carboxylic and phenolic groups, the mineralisation of compounds, such as proteins, amino acids and peptides, to ammonia and the relative increased concentration of ions, due to the loss of pile weight (Fig. 3). This fact was observed in the higher ph and electrical conductivity of both composts in comparison to manure. References Organic matter (%) Pile 2 Pile Composting time (days) Fig. 2. Organic matter during composting of pile 1 (with OMW) and pile 2 (without OMW) [6] [1] Hytiris, N., Kapellakis, I.E., de La Roij, R. and Tsagarakis, K.P., 2004, The potential use of olive mill sludge in solidification process. Resources, Conservation and Recycling, 40, [2] García-Gómez, A., Roig, A. and Bernal, M.P., 2003, Composting of the solid fraction of olive mill wastewater with olive leaves: organic matter degradation and biological activity. Bioresource Technology, 86, [3] Hachicha, R., Hachicha, S., Trabelsi, I., Woodward, S. and Mechichi, T., 2009, Evolution of the fatty fraction during co-composting of olive oil industry wastes with animal manure: Maturity assessment of the end product. Chemosphere 75, [4] Marques, I.P., Anaerobic digestion treatment of olive mill wastewater for effluent re-use in irrigation. Desalination, 137, [5] Mahmoud M, Janssen M., Haboub N., Nassour A. and Lennartz B., 2010, The impact of olive mill wastewater application on flow and transport properties in soils [Electronic version]. Soil Tillage Res., doi: /j.still [6] Rigane H. and Medhioub, K. 2011, Co-composting of olive mill wastewaters with manure and agro-industrial wastes. Agricultural valorisation of composts obtained (Tunisia, Northern Africa). Compost Science and utilization. Vol. 19, N 2, [7] Paredes, C., Cegarra, J., Bernal, M.P. and Roig A., 2005, Influence of olive mill wastewater in composting and impact of the compost on a Swiss chard crop and soil properties. Environment International, 31, ig. 99

100 A 19, 20, 21 et 22 décembre 2012 Hôtel EL Mouradi Douz - Tunisie P.54. Elimination of 4-nitrophenol by using TiO 2 semiconductor under solar radiation 1 Hafida Gaffour & 1 Malika Mokhtari 1 Laboratoire de Chimie Inorganique et Environnement, Département de Chimie, Faculté des sciences, Université Abou Bakr Belkaid, Tlemcen, Algérie. gaffourhafida@yahoo.fr, mokhtarimalika@yahoo.fr Abstract The degradation of 4-nitrophenol (4-NP) as model pollutant by UV/TiO 2 process was studied to investigate the role of ph, concentrations of pollutant [4-NP] and Titanium dioxide [TiO 2 ], and form of used titanium dioxide. Results showed that the maximum extent of degradation (93%) has been observed at medium ph however the lowest (16%) has been obtained at ph=10. The increase of [4-NP] concentration involve the increase of destruction yield to reach a limit value of [4-NP] = 20mg/L. A good mineralization efficiency of 4-NP (93%) has been achieved in the presence of 1g/L of anatase Titanium dioxide. It should be also noted that the highest yield has been obtained (93%) using the anatase form of TiO 2 compared with P25 form of TiO 2 (25%). Keywords: TiO 2, Advanced oxidation, Semiconductor photocatalysis, 4-nitrophenol. 1 Introduction Many factories, such as coal conversion, petroleum refining, iron and steel, textiles, dyes, resins, plastics and agrochemicals, discharge wastewater containing phenolic compounds. [1] These compounds are harmful to human health, and suspected to be carcinogens. Many techniques including physical adsorption, electrochemical oxidation, biodegradation, advanced oxidation processes have been adopted for the removal of phenolic pollutants as 4-nitrophenol. AOPs main disadvantage is their high cost associated with energy production and reactants consumption, which can be substantially reduced if solar-driven AOPs are used. Heterogeneous photocatalysis is an advanced oxidation process to eliminate organic pollutants from water. In the last two decades, there have been a number of studies on this process, and it has recently been reviewed. It is based on the combined use of low energy UV-A light and semiconductor photocatalysts as TiO 2. In the present work, the effect of different parameters as ph, concentrations of pollutant [4-NP] and Titanium dioxide [TiO 2 ], and form of used Titanium dioxide were investigated for the degradation of 4-nitrophenol by heterogeneous photocatalysis process.[2] 2 Methodology The reactor was filled with 300 ml of aqueous solution of 4-nitrophenol. These experiments (with UV/TiO 2 process) were based on the use of TiO 2 powder. The catalytic oxidation was carried out for 120 min. Analysis of the samples was done using OPTIZEN POP UV-Vis spectrophotometer at = 320 nm (fig.1). Concentration of 4-nitrophenol was calculated by measuring the absorbance of 4- nitrophenol. 2,5 2 1,5 1 0, λ (nm) Fig.1 Absorption spectrum of the 4-nitrophenol in an aqueous solution. 100

101 3 Main Results Results showed that the maximum extent of degradation (93%) has been observed at medium ph however the lowest (16%) has been obtained at ph=10 (Fig. 2). [3] The Tab.1 shows that the increase of [4-NP] concentration involves the increase of destruction yield to reach a limit value of [4- NP] = 20mg/L. A good mineralization efficiency of 4-NP has been achieved in the excess of TiO 2 (1g/L) (Tab.2). It should be also noted in table that the highest yield has been obtained (93%) using the Anatase form of TiO 2 compared with P25 form (25%). Table 1: Effect of [4-NP] on removal efficiency of 4-Nitrophenol by UV/TiO 2 process; ph= medium ph, [TiO 2 ] =1g/L, V= 300mL, T = 20 C. [4-NP] (mg/l) Yields of degradation 10 54% 20 93% 30 69% Table 2: Effect of [TiO 2 ] on removal efficiency of 4-Nitrophenol by UV/TiO 2 process; [4-NP] =20mg/L, ph= medium ph, V= 300mL, T = 20 C. [TiO 2 ] (g/l) Yields of degradation 0,025 17% 0,25 67% 0,5 76% 0,75 81% 1 93% References [1] Zhang S., Zhao X., Niu H., Shi Y, Cai Y, Jiang G, & El Feki A., 2009, Superparamagnetic Fe3O4 nanoparticles as catalysts for the catalytic oxidation of phenolic and aniline compounds, Journal of Hazardous Materials 167, pp [2] Muruganandham M., & Swaminathan M., 2006, TiO2 UV photocatalytic oxidation of reactive Yellow 1 Effect of operational parameters, Journal of Hazardous Materials B135, pp [3] Zhao B., Mele G, Pio I., Li J, Palmisano L & Vasapollo G., 2010, Degradation of 4-nitrohenol (4-NP) using Fe-TiO2 as a heterogeneous photo-fenton catalyst, Journal of Hazardous Materials 176, pp

102 P.55. Innovative itineraries minimizing hormones to synchronize and induce oestrus and ovulation in goats Ben Othman, H 1., Rekik, M 2., Lassoued, N Institut National Agronomique de Tunisie, Avenue Charles Nicolle, Tunis Belvèdére 2. Ecole Nationale de Médecine Vétérinaire, 2041 Sidi Thabet, Ariana 3. Institut National de Recherche Agronomique de Tunisie, Avenue Hédi Karray, Tunis Abstract Standard protocol (S) to synchronise oestrus and ovulation in goats uses progestagens in association with prostaglandins and gonadotropin. Such protocol has major drawbacks altering ovulation, mobility and viability of sperm and leaves residues in milk. This study aims to develop, for local Tunisian goats, alternative synchronizing protocols during anoestrus and transition to breeding season. In late May, 40 goats were assigned to either the S protocol or to a protocol where oestrus and ovulation were induced by the buck effect in a single injection-progesterone treated-goats and provoking early luteolysis using a prostaglandin 9 days after exposure to bucks (B). Continuous data were analysed using linear models of the SAS software while discrete variables were analysed using χ2 test. During the 72 hours after the treatments ended, 15 and 5 goats expressed oestrus in the S and B protocols (P<0.001). Mean time to oestrus was 24.6±2.54 h for S goats, much shorter (P<0.0 5) than 40.4±4.39 h for B goats. Ovulation rate averaged 2.07±0.22 and 1.60±0.35 for respectively S and B goats (P>0.05). During transition to breeding season (mid September), 60 goats of which 46% were cycling based on plasma progesterone, were assigned to either S treatment, PG treatment where estrus and ovulation were synchronized using two injections of prostaglandins 11 days apart or to GnRH treatment where the goats had their estrus and ovulation synchronized with a GnRH (day 0)-prostaglandin (day 6)- GnRH (day 9) sequence. Significantly more S goats were detected in oestrus over the 84 h-period after the end of the treatments (89, 74 and 55% in S, PG and GnRH treatments respectively; P<0.05). One goat in the PG and 4 in the GnRH groups had silent ovulations. Mean ovulation rates were 2.3±0.27, 1.33±0.27 and 1.33±0.27 for respectively S, PG and GnRH goats (P<0.001). Prostaglandin and GnRH based treatments resulted in clean estrus and their efficiency should be tested in mid breeding season. 102

103 P.56. Structural investigation of a gel forming exopolysaccharide substituted with a lactyl ether group produced by Pseudomonas stutzeri AS22 1 Hana Maalej, 1 Noomen Hmidet, 2 Alain Heyraud & 1 Moncef Nasri 1 Laboratoire de Génie Enzymatique et de Microbiologie, Université de Sfax-Ecole Nationale d Ingénieurs de Sfax, BP 1173 Sfax 3038, TUNISIA. 2 Centre de Recherches sur les Macromolécules Végétales, C.N.R.S., and Université Joseph Fourier, BP 53 Grenoble cedex , FRANCE. Abstract Pseudomonas stutzeri AS22 produces a high-molecular-mass and gel forming exopolysaccharide (EPS). The structure of this EPS was determined using a combination approach including monosaccharide composition (HPAEC PAD and GLC), determination of glycosylation sites (GLC) and 1D/2D NMR ( 1 H, 13 C) and ESIMS (MS/MS) studies of oligosaccharides obtained from mild acid hydrolysis. The EPS was found to be an acidic tetrasaccharide with a repeating unit composed of glucose, mannose and streptose in a molar ratio of (1:2:1). Keywords: Pseudomonas stutzeri AS22; exopolysaccharide; structure. 1 Introduction The ability to produce exopolysaccharides (EPSs) with greatly varying composition and properties is a well-known biological phenomenon among bacteria [1]. On the basis of monosaccharide composition in their backbone, bacterial EPSs have been classified into homopolysaccharides and heteropolysaccharides [2]. While homopolysaccharides are made up of a single type of monosaccharide, heteropolysaccharides, which make up the majority of bacterial EPSs, are made up of several types of monosaccharide as well as non sugar components leading therefore to a great structural diversity. Increasing attention is being paid to such molecules because of their physical properties such as gelling, stabilizing, thickening and emulsifying which have numerous commercial applications in food industries and their bioactive role such as anti-tumor, immuno-stimulating, anticoagulant, hypoglycemic and antioxidant activities exhibiting therefore large applications in biomedical, biopharmaceutical and cosmetic industries. 2 Methodology P. stutzeri AS22 was grown in starch-containing medium and the incubation was performed during 24 h at 30 C on a 200 rpm rotary shaker. The EPS was purified from the culture broth by means of centrifugation, filtration and then ultrafiltration using a 300 kda cut-off cellulose membrane. The average molecular weight was estimated by high-performance size-exclusion chromatography (SEC). The monomer composition of the EPS was determined after total acid hydrolysis (2N trifluoroacetic acid (TFA), 100 C for 4 h) by high performance anion exchange chromatography with pulsed amperometric detection (HPAEC-PAD) and confirmed by analysis of monomers alditol acetates derivatives using Gas-liquid chromatography (GLC). For linkage analysis, the EPS was methylated using the method of Hakomori (1964), hydrolyzed and released monomers were converted into their alditol acetates before GLC analysis. For carboxyethyl streptose isolation, 1N TFA hydrolysate of the P. stutzeri EPS was fractionated on a Bio-Gel P-2 column and the purified sugar 103

104 was identified by mass spectrometry and NMR spectroscopy. The EPS was fully characterized using 1D ( 1 H, 13 C) and 2D (COSY, HMQC) NMR spectroscopy recorded on a Bruker Avance 400 spectrometer. NMR spectra were recorded for EPS samples (2-30 mg.ml -1 ) that were dissolved directly in D 2 O. 3 Main Results The exopolysaccharide (EPS) was isolated from a 24 h liquid culture of Pseudomonas stutzeri by centrifugation and filtration. It was successively purified by ultrafiltration (using a 300 kda cut-off membrane), dialysis against distilled water, and lyophilized. Under these conditions, a 1.3 g/l yield of purified EPS was achieved. HPAEC-PAD analysis of the trifluoroacetic acid (TFA) hydrolysate revealed the presence of three neutral sugars (Fig.1), identified as mannose (Man), glucose (Glc) in a molar ratio of 2:1 and an unknown unstable compound (X), which was isolated from 5 min TFA hydrolysate by gel-filtration chromatography on a Bio-Gel P-2 column and identified by 1 H NMR spectroscopy and mass spectrum as carboxyethyl streptose. The presence of glucose and mannose was confirmed by GLC analysis of the alditol acetates derivatives obtained from the TFA hydrolysate. Fig.1 Bio-Gel P-2 elution profile of the TFA hydrolysate The 1 H-1D NMR spectrum of the native EPS exhibited in the low-field region (δ ) the presence four signals at δ 5.35, 5.05, 4.8 and However, the HMQC spectrum shows an additional anomeric resonance at δ 5.05, which correspond to two different protons (labelled A and A ), one with a 13 C signal at δ and one at δ 97.88, corresponding therefore to two anomeric protons with α configuration. In addition, we note the presence of two other anomeric protons with β configuration at δ 4.8 (labelled B) and 4.55 (labelled C) corresponding to 13 C signals at δ and , respectively. Whereas, the lowest field signal at δ 5.35 corresponding to a 13 C signal at δ 70.6 was not attributed to an anomeric proton. Therefore, the four anomeric protons (A, A, B and C) that appear in the anomeric region of the 1 H NMR spectrum, confirms a tetrasaccharide repeating unit. In the highfield region of the 1 H NMR spectrum, the signal at δ 2.21 was attributed to the CH 3 of an acetyl group, whereas the signals at δ 1.35 and 1.4 corresponded to the CH 3 of the carboxyethyl (lactyl ether) group and a deoxy sugar previously identified as a streptose residue. References [1] Singha T.K., 2012, Microbial Extracellular Polymeric Substances: Production, Isolation and Applications, IOSR Journal of Pharmacy. 2, pp [2] Donot F., Fontana A., Baccou J.C., & Schorr-Galindo S., 2012, Microbial Exopolysaccharides: Main examples of synthesis, excretion, genetics and extraction, Carbohydrate Polymers., 87, pp

105 P.57. Detection and production of mixture of fengycin and surfactin by Bacillus mojavensis A21 1 Hanen Ben Ayed, 1 Noomen Hmidet, 2 Philippe Jacques, 2 Valérie Leclère, 2 Max Béchet, 2 & 1 Moncef Nasri 1 Laboratory of Enzymatic Engineering and Microbiology, National School of Engineers of Sfax, University of Sfax, BP 1171 Sfax Laboratory ProBioGem, Polytech Lille, University Lille 1- Sciences and Technology, Villeneuve d Ascq, France BP 59655, Abstract The increasing drug resistance among bacterial pathogens such as Staphylococcus aureus has created a need for the development of new antimicrobial agents with novel mechanism of action. Lipopepides produced by Bacillus strains are known for antimicrobial activities. In a previous work, during a screening program on protease-producing strains, which have potential industrial applications, Bacillus mojavensis A21 was isolated from sea water. This strain was found to produce promising yield of surfactin and fengycin in mineral salts medium. MALDI-TOF MS has been applied to characterize lipopeptide biomarkers. It has been demonstrated that this strain produce non ribosomal lipopeptides that can be grouped into two families: Surfactins and fengycins. These results were confirmed by a polymerase chain reaction screening approach by using degenerated primers Amplified DNA sequences were cloned and sequenced. The sequenced displayed high homology to the sequence encoding surfactin and fengycin synthetase of B. subtilis strain. Optimum environmental conditions for high lipopeptide production on the shake flask level were found to be a slightly acidic initial ph (6, 5 7.0), an incubation temperature of 30 C, and a 90% volumetric aeration percentage. For media components, it was found that the optimum carbon source was glucose (20-40g/l), whereas the optimum nitrogen source was a combinaison of glutamic acid + (NH 4 ) 2 SO 4.The use of immobilized bacteria seemed a promising method for improving lipopeptide productivity. A mixture of surfactin and fengycin at 78 % of purity was purified from the culture. Keywords: Bacillus, nrps, lipopeptide, sequencing, purification 1 Introduction The actuel level of knowledge on the biosynthesis of lipopeptide from Bacillus strain such as allows developing techniques to overproduction the main compounds and to reach yield that are compatible with industrial development of these bioactive surfactants. Surfactin and fengycin are cyclic lipopeptides composed of, respectively, 7 or 10 amino acid residues linked to one β- hydroxyl fatty acid. The length of the fatty acid chain varies from C13 to C16 for surfactin and from C14 to C18 in the case of fengycin. These lipopeptides are effective biosurfactants: Surfactin is known for its high foaming capacity while fengycin is less tensioactive and haemolytic than surfactin but shows a strong antifungal activity[1]. The lipopeptide production is strongly influenced by environmental conditions and medium component. The aim of this work was to use molecular approaches in order to characterize the lipopeptide biosynthesis potential of B.mojavensis A21 Then, MALDI-ToF-MS typing of whole cells was performed to detect the presence of the surfactin and fengycin produced,. The study aimed at improving lipopeptide production this was accomplished through optimizing the environmental and nutritional production conditions and also lipopeptide purification. 105

106 2 Methodology PCR analysis: The primer pair (Af2-F/Tf1-R, As1-F /Ts2-R and Abl1-F/ Tbl1-R) was used for amplification. The PCR thermal cycling protocol was performed as described by Tapi et al (2010)[2] PCR products were cloned into pgem-t Easy Vector. Cloned products were sequenced. MALDI-TOF- MS: Lipopeptide produced by strain A21 were characterized through MALDI-TOF- MS with recording provided by Bruker reflex instrument using 337nm nitrogen laser for desorption and ionization. The matrix was α-cyano-4-hydroxycinnamic acid Optimum conditions for lipopeptide production: carbon source, nitrogen source, temperature, ph, and aeration in the production medium (Landy medium) were optimized for maximum production of lipopeptide by B. mojavensis.a21. Lipopeptide purification: The supernatant was ultrafiltered through a regenerated cellulose 10-kDa membrane then washed four times by diafiltration. 3 Main Results Detection of lipopeptide potential biosynthesis PCR analysis: allowed detecting the presence of fengycin and surfactin gene in B. mojavensis A21 and then Mass spectrometry analyses confirmed the identity of the produced lipopeptides as surfactin and fengycin isoform Fig.1 MALDI-TOF Spectra Lipopeptide production: Environmental conditions for high lipopeptide production were found to be a slightly acidic initial ph (6, 5 7.0), temperature of 30 C, and a 90% volumetric aeration percentage. For media components, the optimum carbon source was glucose (20-40 g/l), whereas the optimum nitrogen source was a combinaison of glutamic acid + (NH 4 ) 2 SO 4 Lipopeptide purification: From a lipopeptide solution with a purity of about 32% we obtained a solution at 78 % of purity. Losses caused by the different step of this purification amounted to 30% and lipopeptide go mainly during the first and the second stages of diafiltrations. References [1] Ongena M., Jacques P., Bacillus lipopeptides: versatile weapons for plant disease biocontrol. Trends in Microbiology 16, [2]Tapi A., Chollet-Imbert M., Scherens B., Jacques P New approach for the detection of non ribosomal peptide synthetase genes in Bacillus strains by polymerase chain reaction. Appl Microbiol Biotechnol 85:

107 P.58. Antioxidant activities and phenolic content of Rhus tripartitum L. Hanène Ben Miled 1-2, Riadh Ksouri 1, Olfa Tebourbi 2 (1) Laboratoire des Plantes Extrêmophiles (LPE), Centre de Biotechnologie, Technopôle de Borj-Cédria (CBBC), BP 901, 2050, Hammam-Lif, Tunisia. (2) Laboratoire de Physiologie Intégrée, Faculté des sciences de Bizerte, 7021 Jarzouna, Tunisia Abstract Rhus tripartitum is a Mediterranean species that has been used for a long time in Tunisian traditional medicine as an anti- ulcer plant. In this study, we investigated antioxidant activities (using 3 antioxidants tests) and phenolic contents (total polyphenols and condensed tannins) of methanolic extracts obtained from Rhus tripartitum stem, leaf and fruit. The highest polyphenolic amounts were found in stems and leaves (395.07±1.18 and183.11±25.78mg GAE g 1 DW, respectively). Rhus organs also showed a high antioxidant activity with maximal efficiency for stems followed by leaves and then fruit. For instance, IC 50 values of DPPH test were 10.66, and 70 respectively. These findings demonstrate the remarkable potentiality of this plant as valuable source of antioxidants that could be used as health products for food and pharmaceutical industries. Keys word: Rhus tripartitum, polyphenols, antioxidant activity. 1 Introduction Foods from plant origin provide our diet with large amounts of antioxidants, mostly phenolic compounds such as proanthocyanidins,flavonoids and phenolic acids [1]. The food industry interest is increasing on the crude extract of cereals, fruits, herbs and other plants material because they retard oxidative degradation of lipids and thereby improve the quality and nutritive value of food [2]. Plants containing tannins have anti-inflammatory [3], antibacterial, anti-carcinogenic effects and react as excellent free-radical scavengers [4]. The aim of the present work was to quantify phenolic compounds of Rhus tripartitum and to evaluate the antioxidant capacity of methanolic extracts from leaf, stem and fruit tissues of this plant. 2 Methodology 2.1. Plant materials and sampling Rhus tripartitum plants were harvested from Hadjeb Laayoun locality. The collected plants were separated into leaf, stem and fruits tissues. All samples were rinsed with distilled water, dried and grinded to fine powder. Extracts were obtained by magnetic stirring of 2.5 g dry powder in 25 ml of solvent mixture (chloroform/methanol/water) (12/5/3). Two fractions (polar: aqueous and apolar: chloroformic) were separated after water addition and decantation. Dry powder was weighed and removed in pure methanol. The two fractions were then stored at 4 C until analysis. In our study, only the polar fraction was analysed Phenolic content analysis Total phenolic content of the extracts was determined using Folin Ciocalteu reagent and gallic acid as a standard. Total phenolic content was expressed as mg gallic acid equivalents per gram of dry weight (mg GAE g 1 DW). Total condensed tannin content was determined by a spectrophotometer method and result was expressed as mg catechin equivalents per gram dry weight (mg CE g 1 DW) Assessment of antioxidant activities Global antioxidant activity of Rhus tripartitum was expressed as the number of gallic acid equivalents. The phosphomolybdenum method was based on the reduction of Mo (VI) to Mo (V) by the antioxidant compound and the formation of a green phosphate/mo(v) complex. The DPPH quenching activity was based on the hydrogen atoms or electrons donation ability of the corresponding extracts which was measured from the bleaching of purple colored methanol solution of 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH). The antiradical activity was expressed as IC 50 (µg ml 1 ). A lower IC 50 value corresponds to a higher antioxidant activity. The reducing power was determined through the transformation of Fe 3+ to Fe 2+ induced by plant extracts. Higher absorbance of the reaction mixture indicates greater reducing power. The EC 50 value (μg ml -1 ) for the reducing power is the extract concentration at which the absorbance was 0.5, and ascorbic acid was used as a positive control. 107

108 2.4. Statistical analysis Data were analyzed using Statistica for Windows version 5.0 Software. The results were expressed as means±standard errors of the mean (SEM). Differences between means were evaluated by one-way analysis of variance (ANOVA) followed by Tukey s multiple comparison as the post hoc test. All statistical tests were two tailed and a p value of 0.05 or less was considered significant. 3 Main Results Total phenolic and condensed tannin contents are shown in Table 1. Results showed that total phenolic content varied significantly between plant organs and ranged from 44,98 to mg GAE g 1 DW. It was significantly higher in stems followed by leaves and fruits. Moreover, total tannin contents presented similar trends to that of total polyphenols. Accordingly, stems exhibited the highest tannin content ( mg GAE g 1 DW), and the lowest level was found in fruits (4.04 mg GAE g 1 DW) Table 1.Total phenolic and tannin contents of Rhus tripartitum leaf, stem and fruit extracts. Organ Polyphenol content (mg of GAE/g DW) Tannin content (mg of GAE/g DW) Stem ± 1.18 a ± 1.02 a Leaf ± 1.53 b ±1.14 b Fruit ± 1.53 c 4.04 ± 0.53 c Values (means±standard errors of the mean (SEM), n=6) with different superscripts are significantly different (p 0.05) in Tukey s multiple comparison post hoc test. Moreover, total antioxidant and antiradical capacities differed greatly between organs and these antioxidant activities were significantly higher in stem as compared to leaf and fruit (Table 2). Table 2. Total antioxidant capacity and antioxidant properties (DPPH quenching activity and iron reducing power) of methanolic extracts of Rhus tripartitum organs. Organ Total antioxidant DPPH scavenging Iron reducing power Capacity (mg GAE activity (EC 50 = μg/ml) (IC 50 = μg/ml) g -1 DW) Stem ± a ± 0.66 a ± 1.45 a Leaf ±7.27 b ± 0.33 a ± 1.15 b Fruit ± 7.27 c ± 5.77 b ± 3.33 c Values (means±standard errors of the mean (SEM), n=6) with different superscripts are significantly different (p 0.05) in Tukey s multiple comparison post hoc test. These results suggest that Rhus tripartitum might be a novel source of antioxidants with numerous health benefits that should be considered in the fields of functional foods or nutraceuticals in food industry. References [1] Ksouri R., Ksouri Megdiche W., Jallali I., Debez A., Magné C., Hiroko I., & Abdelly C., 2011, Medicinal halophytes: potent source of health promoting biomolecules with medical, nutraceutical and food applications, Informa Health care.pp [2] Mathew S., Abraham TE.,. 2006, In vitro antioxidant activity and scavenging effects of Cinnamomum verum leaf extract assayed by different methodologies. Food Chem Toxicol. 44(2), pp [3] Kakegawa H.,Matsumoto H., Endo K., Satoh T., Nonaka GI & Nishioka I., 1985, Inhibitory effects of tannins on hyaluronidase activation and the dgranulation from rat mesentery mast cells. Chem. Pharm. Bull, 33, [4] Oueslati S., Ksouri R., Falleh H., Pichette A., Abdelly C., Legault J, 2012, Phenolic content, antioxidant, anti-inflammatory and anticancer activities of the edible halophyte Suaeda fruticosa Forssk. Food Chem, 132,

109 P.60. Valeur thérapeutique de biomolécules extraits du pistachier de l atlas Algérien Djenidi H. 1, Bentchicou M 2., Bacha S. 1 et Bengharaichi F 1. 1 Département de sciences de la nature et de la vie, Université Mohamed kheider. Biskra. Algérie. 2 Département de sciences de la nature et de la vie, Université Mentouri, Constantine. Algérie. Résumé Le but ce travail est de valoriser une plante relique en voie de disparition; le pistachier de l Atlas (Pistacia atlantica Desf.) d'une région de sud Algérien (Biskra), par l'extraction et le dosage des flavonoïdes existants dans les feuilles; puis l évaluation de leur activité antimicrobienne. L extraction des flavonoïdes a été effectuée par le méthanol, l éthanol et l acétate d éthyle. L activité antimicrobienne à été testée in vitro sur sept souches bactériennes (Staphylococcus aureus ATCC 29213, Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Klebseilla pneumoneae, Staphylococcus aureus, Escherichia coli et Pseudomonas aeruginosa). Le dosage colorimétrique des flavonoïdes a mis en évidence une richesse de Pistacia atlantica Desf. en ces composés. L effet antimicrobien a montré une forte activité antimicrobienne vis-à-vis des souches microbiennes testées. Mots-clés : Pistacia atlantica Desf., flavonoïdes, activité antimicrobienne. 1. Introduction Depuis les temps les plus reculés, l'homme a utilisé les plantes pour se nourrir et se soigner. De l aspirine à la quinine extraites de l écorce de saule et de quinquinas, 60 à 70 % des produits pharmaceutiques proviennent plus ou moins directement de substances naturelles végétales Les propriétés thérapeutiques des plantes étaient connues empiriquement depuis l antiquité, la valorisation de ces plantes devrait être une priorité des autorités administratives et scientifiques de notre pays. Le pistachier de l Atlas (Pistacia atlantica Desf.), espèce ligneuse arborescente, l exploitation de cette plante dans la région aura une grande incidence socio- économique en raison de son intérêt agrosylvo-pastoral. Il faut ajouter à cela, les possibilités d extraction de certains composés naturels présentant un intérêt pharmacologique. L objectif de notre étude est de valoriser cette plante par l extraction des flavonoïdes contenus dans les feuilles et l'évaluation de l activité antimicrobienne de ces extraits. 2. Matériel et méthodes 2.1. Extraction des flavonoïdes Les feuilles de Pistacia atlantica furent nettoyées, séchées à l abri de la lumière, et puis finement broyées et récupérées dans des sachets. L extraction des composés phénoliques est réalisée selon la méthode décrite par Djeridane et al. (2006) Dosage des phénols totaux Le dosage des polyphénols totaux a été effectué par une méthode adaptée par Singleton et Ross (en 1965) avec le réactif de Folin -Ciocalteu (Marian et Fereidoon, 2004) Dosage des flavonoïdes La quantification des flavonoïdes a été effectuée par la méthode de trichlorure d aluminium citée par (Djeridane et al., 2006) Activité antimicrobienne On a utilisé la méthode de diffusion sur milieu gélosé (méthode de disques) qui permet la mise en évidence de l activité antimicrobienne Traitement statistique Le traitement statistique des résultats de l activité antimicrobienne a été réalisé par Microsoft Office Excel Toutes les expériences ont été réalisées en triple, Les résultats sont exprimés en moyenne ± SD (standards de déviation). 109

110 3. Résultats 3.1. Teneur en phénols totaux La teneur en composés phénoliques de chaque extrait a été calculée à partir de la droite d étalonnage d acide gallique et exprimée en microgramme d équivalent d acide gallique par milligramme d extrait. Les résultats obtenus sont présentés dans le Tableau 1. Tableau 1: Teneur en phénols totaux des extraits de Pistacia atlantica Desf. (Moyenne de 3 répétitions) Extrait Teneur en phénols totaux (µg EAG/mg d extrait) EBr 1 85 ± 0.25 EAcOEt ± 0.14 EBr ± 0.38 EAcOEt ± Teneur en flavonoïdes Le dosage des flavonoïdes a été réalisé selon la méthode d AlCl3 en utilisant comme standard la quercétine et exprimée en μg EQ/mg d extrait. Les résultats sont présentés dans le Tableau 2. Tableau 2: Teneur en flavonoïdes des extraits de Pistacia atlantica Desf. (Moyenne de 3 répétitions) Extrait Teneur en flavonoïdes (μg EQ/mg d extrait) EBr ± 0.02 EAcOEt ± 0.03 EBr ± 0.03 EAcOEt ± Activité antimicrobienne Les zones d inhibitions des différentes souches avec les différents extraits sont présentées dans le Tableau 3. Tableau 3: Diamètre de la zone d inhibition des différents extraits. Diamètre de la zone d inhibition (mm) EBr 1 EAcOEt 1 EBr 2 EAcOEt 2 Staphylococcus aureus 17 ± ± ± ± 0.57 Staphylococcus aureus ATCC ± ± ± ±0.57 Escherichia coli 19.66± ± ± ± 0.57 Escherichia coli ATCC ± ± ± ±0.57 Pseudomonas aeruginosa 23 ± ± ± ± 1.00 Pseudomonas aeruginosa ATCC ± ± ± ± 0.57 Klebseilla pneumoneae 14.33± ± ± ± References Djeridane A., Yousfi M., Nadjemi B., Boutassouna D., Stocker P. and Vidal N., (2006). Antioxidant activity of some Algerian medicinal plants extracts containing phenolic compounds. Food Chemistry, 97(4): Marian N. and Fereidoon S., (2004). Extraction and analysis of phenolics in food. Journal of Chromatography, 1054:

111 P.61. Research and characterization of Legionella spp in different aquatic environment of Marrakesh Morocco 1 El Moussouli Hind and Imziln Boujamâa. 1 University Cadi Ayyad, Faculty of Sciences Semlalia Marrakech, Laboratory of Biology and Biotechnology for Microorganisms Abstract This study demonstrated that in marrakech region legionella is found mainly in the wells especially legionella pneumophila serogroup 1 and So, protozoa have a potential role in the abundance of Legionella. which need a larger study to assess the infectious risk associated with this pathogen via the water environment health. This is important because contamination within these settings has been clearly linked to outbreaks of Legionnaires disease. Keywords: Legionella, isolation, Marrakesh, Aquatic environment Introduction Legionellae are Gram-negative bacteria ubiquitously present in freshwater environments. It has been recognized as causative agent of Legionnaires disease (legionellosis) a severe form of pneumonia, Legionella pneumophila has been detected worldwide as a relatively common pulmonary pathogen. Infections by Legionella occur mainly by inhalation of aerosols generated from water sources containing Legionella such as water distribution systems, communal baths, and cooling towers. This work aims to isolate Legionella strains from different natural and artificial Moroccan aquatic environment in order to assess the risk of this bacteria on human health and to understand the allelopathic relationship between this bacteria and its ecosystem 2 Methodology To reach our objective eighty samples were collected from twenty aquatic sites located around Marrakesh region (dams, wells, steam, waste water, fountains, lakes and basin). The physicochemical and microbiological characterizations of these samples were carried out To understand the evolution of Legionella s behavior towards protozoa and to determine the potential role of amoebae in the transmission of Legionella, a count of protozoa was done in all studied stations. 3 Main Results Six from the twenty studied sites revealed the presence of Legionella. From eighty tested water samples coming from these sites, Legionella was found in fifty three water samples which had been collected from wells. For all isolated strains of Legionella, identification showed that 45% of the species are Legionella pnemeuphila serogroup 1 and 55% of the species are Legionella pneumophila serogroup 2-14 Determination of protozoa abundance (table 1) showed that stations harboring Legionella are characterized by a high concentration of protozoa. Thus the presence of Legionella decreases while the 111

112 concentration of amoeba decreases; this can be explained by the protective role that represents amoebae for Legionella. As a whole, this study demonstrates presence of Legionella in Marrakesh water and the importance of assessing water quality when evaluating environmental risk factors and selecting the most appropriate preventions and control measures public water systems. This is important because contamination within these sites has been clearly linked to outbreaks of Legionnaire s diseases Table1: Relationship between the presence of legionella and protozoa abundance Sites Cell number per Liter (Protozoa) Presence of Legionella Well Cell /L +++ Well Cell /L ++ Well Cell /L ++ Well Cell /L +++ Well Cell /L ++ Well Cell /L + Well Cell /L - Well 8 234Cell /L - Well 9 312Cell /L - Stream 1 250Cell /L - Stream Cell /L - Basin 435Cell /L - Fountain 1 200Cell /L - Fountain 2 400Cell /L - 112

113 P.63. Aqueous leaves extract of Artemisia campestris inhibition of the scorpion venom induced hypertension. 1 Hmed ben Nasr, 2 Riadh Badraoui, 1 Lobna Mahmoudi, 1 Hammami Serria & 1 Khaled Z ghal 1 Laboratory of Pharmacology and 2 Laboratory of Histology-Embryology, at the Medicine Faculty of Sfax, University of Sfax, 3029 Sfax-, TUNISIA. Abstact The boiled leaves of Artemisia campestris (Asteraceae) was used as a folk-medicine against ophidian and scorpion envenoming in rural and nomad populations, but its bona fide mechanisms are still unknown. In this report, the effect of the aqueous dry leaves extract of this plant on hemodynamic variations induced by Buthus occitanus tunetanus venom was assayed in pregnant and non pregnant rats. Our results showed that the hypertensive phase induced by the venom was significantly prolonged in pregnant rats than in cycling ones. When injected alone, the aqueous leaves extract of Artemisia campestris induced a progressive significant diminishing of the mean arterial pressure both in and out of pregnancy. This effect did completely abolish the venom induced hypertensive shock. It was concluded that aqueous extract of Artemisia campestris leaves prevents the induced hypertensive phase induced by the scorpion venom, probably through adrenergic pathway] Keywords: Artemisia campestris scorpion venom hypertension 1 Introduction The boiled leaves extract of Artemisia campestris was used to treat ophidian and scorpion envenomation, however its real effects was not fully studied. Hence this work aimed to investigate the effect of this extract of the scorpion venom induced hypertension. in addition to normal rats, our model did include pregnant rats which is considered as critical case by clinicians. 2 Methodology After animals anesthesia, the right carotid artery was catheterized using a heparinated polyvinyl catheter attached to a pressure transducer (Pression/calculator; Goldinstrument). Records of the systemic mean arterial pressure (MAP) were carried out using a thermal array corder WR700 (Graphtec- Ankersmit) on polygraph paper. Three different groups of either pregnant or cycling rats had received one of the following treatments. (i) EXT: Intraperitoneal injection of 0,5ml /kg of the Artemisia campestris exract (20g/100ml). the extract was twice filtered used a 0,02 µ Millipore paper. (ii) Bot: intraperitoneal injection of 1mg/Kg of crude venom of Buthus occitanus tunetanus. (iii) EXT+BOT: a simultaneous injection with the extract and the venom. the Artemisia campestris extract was obtained by boiling 20 g of dried leaves into 100 ml of bidistelled water. The aqueous fraction was then twice filtered using a 0,02 µ Millipore filter. The data was analyzed using a univariate generalized linear model (SPSS for Windows). 3 Main Results Our results showed that the hypertensive phase induced by the scorpion venom was more ample and appeared earlier in pregnant rats than in cycling ones (Fig.1). The water- boiled leaves extracts of 113

114 Artemisia campestris induced a significant decrease of the mean arterial hypertension in both pregnant and cycling rats as expected by the spearman correlations (P < 0,01) for all groups, in exception of which of cycling rats treated receiving the two solutions. This hypotensive effect completely abolished the hypertension induced by the venom (Fig. 2). Fig.1: caracterization of the hypertensive phase induced by the scorpion venom in pregnant and cycling rats. Fig. 2: the mean arterial pressure variations following Artemisia campestris extract (EXT) and Buthus occitanus tunetanus venom (Bot); alone or in combination (EXT+BOT). 114

115 P. 65. Chemical composition, antioxidant and antibacterial activities of Thymus vulgaris essential oil 1,2 Khadidja Houda Benabed, 2 Nadhir Gourine, 1 Mohamed Ouinten & 2 Mohamed Yousfi 1 Laboratoire de génie des procédés, Université Amar Télidji, Laghouat 2 Laboratoire des sciences fondamentales, Université Amar Télidji, Laghouat Abstract This work aims to study the chemical composition, the antioxidant and antimicrobial activities of the essential oil of Thymus vulgaris, a species that belongs to the Lamiaceae family ; this family is largely distributed in the Mediterranean area and known by its aromatic plants that are used in many fields of life, especially in traditional medicine. Keywords: Thymus vulgaris, essential oil, antioxidant activity, antimicrobial activity. 1 Introduction Plants have always been the basic system of traditional medicine for thousands of years and continue to provide us with new medicines [1]. Recently, the introduction of traditional medicine as an alternative form, as well as the development of microbial resistance to antibiotics has led researchers to investigate the antimicrobial activity of medicinal plants [2]. On the other hand, the various synthetic antioxidants used in food were suspected of having negative effects on health. It is for this reason that the interest for the study of natural products such as antioxidants is more important. Thus, various sources of antioxidants of plant origin have been studied in recent years [3]. 2 Methodology - The plant material was collected in June 2010, in Djelfa (Algeria). - The extraction of the essential oil of Thymus vulgaris was performed by hydrodistillation using a Clevenger apparatus. - The essential oil was then analyzed using gas chromatography coupled with mass spectroscopy (GC/MS). - The antioxidant activity of the essential oil was evaluated by using the DPPH test (scavenging of the free radical 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) [4]. - Antibacterial tests were performed by using two methods : agar diffusion test [5] and a macrodilution technique allowing the determination of the MIC (the lowest concentration of the extract that inhibits more than 99% of the bacterial population[6]), and afterward the MBC (minimal bactericidal concentration) for each bacterial strain. 3 Main Results - The extraction of the essential oil of Thymus vulgaris by hydrodistillation had yielded 1.34% (m/m). - The analysis of the essential oil by gas chromatography coupled with mass spectroscopy (GC/MS) allowed us to identify 32 compounds, with proportions of monoterpene hydrocarbons and oxygenated monoterpenes equal to 52.98% and 39.14%, respectively. The 115

116 major component of this oil was the γ-terpinene (25.7%) followed by thymol (20.83%) and p- cymene wich occupied 20.04% of the total essential oil. Other oxygenated compounds are also present but in smaller amounts than the previous: thymol methyl ether (7.82%), linalool (4.76%) and borneol (2.54%). The β-caryophyllene (2.28%) is the major sesquiterpene for this essential oil. - The evaluation of the antioxidant activity using the DPPH test, allowed us to calculate the EC 50 (the concentration required of the substrate, in this case of essential oil, to trap 50% of the free radical DPPH [4]). For Thymus vulgaris essential oil we obtained an EC 50 equal to 2.29 ±0.03mg/ml. This result is comparable with that of Tepe et al. [7] who determined an EC50 equal to 2.67 mg / ml for the essential oil of Thymus Sipylus subs. Sipylus var. Sipylus. - For the antibacterial activity, the essential oil showed a strong activity. The results are shown in table 1. Table 1: Antibacterial activity of Thymus vulgaris essential oil. Inhibition zone diameter (mm ± DS) MIC (mg/ml) MBC (mg/ml) Escherichia coli ± Klebsiella pneumoniae ± Bacillus cereus ± Staphylococcus aureus ± References [1] Gurib-Fakim A., 2006, Medicinal plants: traditions of yesterday and drugs of tomorrow, Molecular aspects of medicine, 27, pp [2] Nostro A., Germano M. P., D'Angelo V., Marino A., Cannatelli M. A., 2000, Extraction methods and bioautography for evaluation of medicinal plant microbial activity, Letters in applied microbiology 30, pp [3] Kulisik T., Radonic A., Katalinic V., Milos M., 2004, Use of different methods for testing antioxidative activity of oregano essential oil, Food chemistry 85, pp [4] Molyneux P., 2004, The use of the stable free radical diphenylpicrylhydrazyl (DPPH) for estimating antioxidant activity ; Songklanakarin J. Sci. Technol., 26 (2), pp [5] De Billerbeck V.-G., 2007, Huiles essentielles et bactéries résistantes aux antibiotiques, Phytothérapie 5, pp [6] Mativandlela S.P.N., Lall N., Meyer J.J.M., 2006, Antibacterial, antifungal and antitubercular activity of (the roots of) Pelargonium reniforme (CURT) and Pelargonium sidoides (DC)(Geraniaceae) root extracts, South African Journal of Botany 72, pp [7] Tepe B., Sokmen M., Akpulat H. A., Daferera D., Polissiou, Sokmen A., 2005, Antioxydative activity of the essential oils of Thymus sipyleus subs. sipyleus var. sipyleus and Thymus sipyleus subs. sipyleus var. rosulans, Journal of food engeneering 66, pp

117 P.67. Contribution of plasmin activity and somatic cell count in proteolysis of camel and cow milk 1 Houda Hamed, 1 Abdelfattah El Feki & 1 Ahmed Gargouri 1 Life Sciences Department, Science Faculty of Sfax, University of Sfax, BP 1171 Sfax 3000, TUNISIA. Abstract In the present study, the relationship between milk somatic cell counts (SCC), plasmin activity and proteolysis in dromedary and cow milks were compared. The proteolysis index (Cn/TP) was positively correlated with PL activity for both species (r = to 0.528; P<0.05). Thus, variations in PL activity accounted for 17 to 27% of the variations in the proteolysis index of dromedary and cow milks, respectively. For both species, PL was therefore not the only enzyme that degraded caseins in milk samples. Our result showed a negative correlation between SCC and the proportion of Cn/TP. In dromedary milk, unlike in cow milk, there is no a direct relationship between proteolysis and SCC. Our results suggest that the SCC does not a reliable index of the extent of protein deterioration in dromedary milk. Keywords: proteolysis, CCS, plasmin, camel milk 1 Introduction The quality attributes of milk are affected not only by genetic, physiological or dietary factors, but also by the hygienic and health related conditions during milking and further handling of the raw material. Somatic cell count (SCC) is a quantitative index of mastitis condition of rumi-nants. The increase of SCC in milk has also been associated with changes in bovine milk components. Several studies have reported decreases in casein content in milk [1,2], increases in proteolysis levels [3,4], changes in the protein fraction distribution [5]. Plasmin is the main native proteolytic enzyme in milk and is part of a complex protease protease inhibitor system in milk. In milk, PL, PLG, and PLG activators are associated with the casein (Cn) micelles [6,4]. In this study, the proportion of Cn/TP was used as an index of proteolysis. As known, proteolysis in milk causes a decrease in cheese yield and bitterness in processed dairy products, such as cheese, pasteurized and UHT-treated milks. Yet camel milk is an important source of protein for the people living in the arid areas of the world. In spite of that, there has been little published information on the interrelationships between somatic cells, plasmin activity and proteolysis in dromedary milk. This work was undertaken to study the relationships between these parameters, and the results were compared with those obtained in cow milk. 2 Methodology Somatic cell counts Somatic cells were counted using a Fossomatic 5000 (FossElectric, Hillerod, Denmark) according to International Dairy Federation Standard [7]. Determination of plasmin activity Sample preparation to determine plasmin (PL) activity was performed according to the method described by [8], with minor changes. Plasmin and plasminogen activities were measured using a version of the colorimetric method described by [9], using a microplate assay. Separation of milk nitrogen and protein fractions Total protein (TP) was determined in triplicate by the Dumas method [10]. Casein (Cn) was calculated according to [11]. 117

118 3 Main Results The proteolysis index was positively correlated with PL activity for both species (r = and 0.528; P < 0.05)(Tab 1 and 2). Thus, variations in PL activity accounted for 17 to 27% of the variations in the proteolysis index of dromedary and cow milks, respectively. For both species, PL was therefore not the only enzyme that degraded caseins in milk samples. In dromedary milk, unlike in cow milk, there is no a direct relationship between proteolysis and SCC. The only relationship can be established via TP when SCC enhanced protein content. Thus, the correlations between SCC and variables related to proteolysis were not strong enough to make the SCC a reliable index of the extent of protein deterioration in dromedary milk. The weak correlation between SCC and proteolysis in dromedary milk obtained in our study (r = 0.026) might support this conclusion. Table 1: Correlation coefficients (r) for relationships between studied parameters in camel milk. SCC TP Cn PL SCC TP Cn PL Cn/TP Values noted in bold are significant at P < SCC, somatic cell counts; TP, total protein; Cn, casein; PL, plasmin activity. Table 2: Correlation coefficients (r) for relationships between studied parameters in cow milk SCC TP Cn PL SCC TP Cn PL Cn/TP Values noted in bold are significant at P < SCC, somatic cell counts; TP, total protein; Cn, casein; PL, plasmin activity. References [1] Harmon R.J., 1994, Physiology of mastitis and factors affecting somatic cell counts, J. Dairy Sci. 77, pp [2] Kelly A.L., Tiernan D., O Sullivan C., &Joyce P., 2000, Correlation between bovine milk somatic cell count H and polymorphonuclear leukocyte level for samples of bulk milk and milk from individual cows, J. Dairy Sci. 83, pp [3] Santos M.V., Ma Y., & Barbano D.M., 2003, Effect of somatic cell count on proteolysis and lipolysis in pasteurized fluid milk during shelf-life storage, J. Dairy Sci. 86, pp [4] Somers J.M., O Brien B., Meaney W.J., & Kelly A.L., 2003, Heterogeneity of proteolytic enzyme activities in milk samples of different somatic cell count, J. Dairy Res. D 70, pp [5] Raynal-Ljutovac K., Gaborit, P., & Lauret A., 2005 The relationship between quality criteria of goat milk, its technological properties D and the qual-ity H of the final products, Small Rumin. Res. 60,pp [6] Politis I., 1996, Plasminogen activator system: implications for mammary cell growth and involution, J. Dairy Sci. 79, pp [7] IDF., 1995, Enumeration of somatic cells. FIL-IDF Standard No. 148A. In:International Dairy Federation, Brussels, Belgium. [8] Richardson B., &Pearce K.., 198, The determination of plasmin in dairy products, Nz. J. Dairy. Sci. Technol. 16,pp [9] Baldi A., Savoini G., Cheli F., Fantuz F., Senatore E., Bertocchi L., & Politis I., 1996, Changes in plasminplasminogen-plasminogen activator in milk from Italian Friesian herds, Int. Dairy J. 6,pp [10] IDF., 2002, Determination of nitrogen content. Routine method using combustion according to the Dumas principle. IDF Standard No 185. In: International Dairy Federation, Brussels, Belgium. 118

119 P.68A. Gobius niger as a relevant bioindicator for lagoons biominoring: A case study of the Bizerta lagoon (Tunisia) 1,2,3 Ibtissem Louiz, 2 Sélim Aït-Aïssa, 3 Mossadok Ben-Attia, 2 Olivier Palluel & 1 Oum Kalthoum Ben- Hassine 1 Unité de Recherche de Biologie Intégrative et Ecologie Evolutive et Fonctionnelle des Milieux Aquatiques, Faculté des Sciences de Tunis, Université Tunis-El-Manar, 2092 El Manar, Tunisie. 2 Unité d Ecotoxicologie, Institut National de l Environnement Industriel et des Risques (INERIS), f Verneuil-en- Halatte, France 3 Laboratoire de Biosurveillance de l Environnement, Faculté des Sciences de Bizerte, Université de Carthage, 7021 Zarzouna, Tunisie Abstract This work presents a multi-parametric study based on the combined use of in-vitro cell-based bioassays, physicochemical analysis; morphological and histological anomalies in Gobius niger collected from several field sites in Bizerta lagoon, in addition to a survey on biochemical biomarkers. The results showed the re relevance of Gobius niger as a sentinel species. Keywords: Gobius niger Bizerta lagoon - multi-parametric approach bioindicator. 1 Introduction The aquatic environment is affected by different types of chemicals toxic to biota that originate from anthropogenic sources. Consequently, data collected in field studies may be much harder to interpret than data from controlled laboratory experiments. To address this problem it may be better to study patterns of biomarker responses as opposed to examining each biomarker singly. Gobies have, as well, an ecological importance and they are suitable models in the ecotoxicology field. Indeed, they are benthic and sedentary fish, exposed to waterborne chemicals. In this study we focused on Gobius niger (Linnaeus, 1758) because of its abundance and wide distribution in the lagoon, which would allow the comparison between the different prospected sites. The aim is to evaluate the potential of this fish species as a bioindicator for pollution biomonitoring in the context of Bizerta lagoon. 2 Methodology In this study, we will focus on the male. Fish were sampled monthly since january to december 2006 from six stations with various pollution types and rates. A reference station was chosen in the seawards entrance of Ghar El Melh lagoon Fig. 1. Incidences of vertebral deformities (Def%) and testicular histological alterations frequency (Syn %) were recorded. Additionally, physiological parameters including gonadosomatic index (GSI), condition factor and liver somatic index, biotransformation enzymes such as 7-ethoxyresorufin-O-deethylase (EROD) and glutathione-stransferase (GST), antioxidant enzymes, total glutathione (GSH tot ) content and lipoperoxidation level (as revealed by TBARS) were surveyed in the fish to discuss its potential as a sentinel species. Occurrence of dioxin-like compounds in organic extracts of sediments was assessed by means of an in vitro cell-based bioassays in fish PLHC-1 cell line and toxic equivalents factor (BEQs) were evaluated. The overall resulting data were subjected to multivariate principal component analysis (PCA) in order to examine the relationships between the biological responses and multiple contaminants (organochlorine compounds "PCBs", polycyclic aromatic hydrocarbons "PAHs", DDT and organotine) stressors. Fig. 1 Map of study area and localisation of sampling sites in Bizerta and Ghar El Melh lagoons 119

120 3 Main Results Results revealed that on the first principal axis F1, that vertebral deformity, testicular histopathology and biotransformation biomarkers (e.g. EROD and GST) were strongly enhanced in the more contaminated area by PCBs, PAHs and organotine (Fig. 2a). Whereas, on the second axis F2, oxydant stress biomarkers are correlated with DTT contamination (Fig. 2a). The disposition of physicochemical parameters on the PCA axes (Fig. 2b) showed their contribution to the spatial variability of biological parameters. Fig. 2: Graphical representation of biochemical and chemical descriptors (a) and physicochemical parameters (b) : Canal, : Njila, : Menzel Bourguiba, : Maghrawa, : Menzel Jemil, : Menzel Abderrahemen, : Ghar el Melh Fig. 3: Graphical representation of sampling sites in the first two planes of the PCA The results also indicated a pollution gradient, suggesting that gobies from Menzel Bourguiba station were largely affected by pollution (Fig. 3). It is probable that this distribution is primarily the result of anthropogenic disturbance but it is possible that the site position and its hydrodynamics have an impact on the degree of dilution of contaminants and physicochemical parameters such as temperature, salinity and dissolved oxygen. Then, the use of a battery of biomarkers is prominent because each positive response adds on the weight of evidence in identifying a poor quality ecosystem [1]. This study argues for a multi-parametric approach of lagoon monitoring, based on association between chemical, biochemical and histo-morphological endpoint and underscore the relevance of Gobius niger as a sentinel species. Reference [1] Stegeman J., Brouwer M., DiGiulio R., Förlin L., Fowler B., Sanders B. & Van Veld P., Molecular responses to environmental contamination: enzyme and protein systems as indicators of chemical exposure and effect in R. Huggett RK, P. Mehrle and Bergman, H. (Ed), Biomarkers: biochemical, physiological and histological markers of anthropogenic stress, Lewis, pp

121 P.68B. Factors influencing antioxydant biomarkers, TBARS and GSH tot activity, in Gobius niger (Gobiidae) from Bizerta lagoon, Tunisia. 1,2,3 Ibtissem Louiz, 2 Olivier Palluel, 2 Sélim Aït-Aïssa, 3 Mossadok Ben-Attia & 1 Oum Kalthoum Ben- Hassine 1 Unité de Recherche de Biologie Intégrative et Ecologie Evolutive et Fonctionnelle des Milieux Aquatiques, Faculté des Sciences de Tunis, Université Tunis-El-Manar, 2092 El Manar, Tunisie 2 Unité d Ecotoxicologie, Institut National de l Environnement Industriel et des Risques (INERIS), f Verneuil-en- Halatte, France 4 Laboratoire de Biosurveillance de l Environnement, Faculté des Sciences de Bizerte, Université de Carthage, 7021 Zarzouna, Tunisie Abstract This study examines the seasonal variation of two antioxidant enzymes, GSH tot activity and TBARS, in Gobius niger (Linnaeus, 1758) collected from several field sites in Bizerta lagoon. Results shows that sex has no significant influence on the oxidant stress biomarkers response. However those biomarkers are influenced by abiotic parameters. The spatio-temporal study show that lipid peroxidation is higher than the GSHtot activity. Keywords: Gobius niger Bizerta lagoon - antioxydant biomarker environnemental factors. 1 Introduction The aquatic environments are particularly at risk from anthropogenic pollution. It is always too difficult to obtain information about their significance upon animal health from only contamination body burden data. Therefore, techniques for measuring biological effects are critical for any pollution monitoring program. However, to use the biomarkers correctly we should know the limitations of their natural variability in the populations of surveyed species [1]. Oxidative stress parameters could be used as accurate indicators of cellular injury due to xenobiotic exposure in fishs [2]..However, there are no reports on abiotic and biotic factors influencing those biomarkers in Gobiidea. Indeed, in this study, the levels of oxidative stress in Gobius niger, caused by environmental parameters and pollution have been studied in terms of antioxidant defense systems. Gobies have, an ecological importance and they are suitable models in the ecotoxicology field and have an ecological importance. In this study we focused on Gobius niger (Linnaeus, 1758) because of its abundance and wide distribution in the lagoon, which would allow the comparison between the different prospected sites. The aim is to evaluate factors interfering in oxidants stress responses in Gobius niger from Bizerta lagoon. 2 Methodology A total of 514 adult gobies composed of 406 males and 108 females were collected at 0.5 to 4 m depth by using a small benthic trawl. Fish were sampled monthly since january to december 2006 from six stations with various pollution types and rates : Menzel Bourguiba (MB); the Channel (CA), Menzel Abderrahmen (ML), Njila (NJ), Maghrawa (MR) and Menzel Jemil (MJ). A reference station was chosen in the seawards entrance of Ghar El Melh lagoon Fig. 1. Antioxidant enzymes, total glutathione (GSH) content and lipoperoxidation level (as revealed by TBARS) were surveyed in the fish. the values of the main physico-chemical parameters (T, ph, salinity and dissolved O2) were recorded. Fig. 1 Map of study area and location of sampling sites in Bizerta and Ghar El Melh lagoons 121

122 3 Main Results Three-factor analysis of variance (sex, site and season) (Tab. 1) shows that sex has no significant influence on the antioxidant biomarkers response. However, the interaction "Site*Season" presents a significant contribution to the observed variations. Analysis of covariance showed that these two biomarkers are influenced by abiotic parameters of the environment. Further, there were no relationship found between the antioxidant response and the degree and the type of contamination in sediments. In fact, the response of TBARS and GSH tot are non specific to a kind of contaminants [3].Also, abiotic parameters may mask the true impact of the probable environmental pollution on wildlife. Then in any case, using a single biomarker can assess health status of a community and / or organism. Tab.1 : Analysis of variance and covariance with three factors of GSH tot and TBARS log-transformed data. GSH tot TBARS Source SCE ddl D Sig. T 0,5 1 7,2 0,01* Oxy 0, ,00** Sexe 0,17 1 2,56 0,11 Site 0,69 5 2,05 0,07 Saison 0,31 3 1,55 0,2 Sexe * Site 0,04 5 0,13 0,99 Sexe * Saison 0,16 3 0,77 0,51 Site * Saison 2, ,33 0,00** Sexe*Site*Saison 0, ,91 0,54 Sal 0,2 1 7,1 0,01* Phot 0,8 1 28,7 0,00** ph 0,6 1 22,1 0,00** Cond 0,1 1 4,2 0,04* Sexe 0,07 1 2,34 0,13 Site 0,09 5 0,64 0,67 Saison 2, ,29 0,00** Sexe * Site 0,2 5 1,37 0,24 Sexe * Saison 0,07 3 0,76 0,52 Site * Saison 2, ,04 0,00** Sexe*Site*Saison 0,67 9 2,61 0,01* The comparison of site data for a same prospection season with the reference site (Fig. 2) showed that responses of the two biomarkers are not similar. Indeed, the cytotoxic risk resulting in lipid peroxidation, is higher than the activity of the antioxidant biomarker, GSH tot activity. This finding is similar to that previously reported by Cossu and al., 2000 [4]. Moreover, the high TBARS concentrations and the low antioxidant activities leaves, suggesting that the lipoperoxidation and the GSH tot could be biomarkers for toxicity [4]. a b Fig. 2 : Monitoring of GSHtot (a) and TBARS (b) activity. X GH : annual average of reference station In conclusion, antioxydant biomarkers should not be applied alone, but integrated into ecotoxicological research programmes including the chemical analyses of contaminants, physiological studies of animal condition and the quality of the ecosystem. References [1] Sheehan D., & Power A., 1999, Effects of Seasonality on Xenobiotic and Antioxidant Defense Mechanisms of Bivalve Mollusks, Comp. Biochem. Physiol., Ser. C, 123, pp [2] Pavlović, SZ; Borković SS., Kovačević TB., Ognjanović BI., Žikić RV., Štajn A.Š., & Saičić ZS., 2008, Antioxidant defense enzyme activities in the liver of red mullet (Mullus barbatus L) from the Adriatic Sea: The effects of locality and season, Fresen. Environ. Bull., 17, pp [3] Wilhelm Filho D., Giulivi C., & Boveris A., 1993, Antioxidant defenses in marine fish I. Teleosts. Comp. Biochem. Physiol. C, 106,

123 P. 69. Évaluation de l activité antioxydante et étude du pouvoir d inhibition des extraits phénoliques naturels sur l α - glucosidase et l α - amylase Ihcen Khacheba 1, Amar Djeridane 1, Mohamed Yousfi 1 1 Laboratoire des Sciences Fondamentales, Université Amar Telidji Laghouat, Algérie ihcbio@yahoo.fr Résumé Notre étude rentre dans le cadre d'une contribution à la mise en valeur du règne végétal de la région de Laghouat comme source de substances bioactives naturelles. Dans ce contexte nous nous sommes intéressés à cinq plantes locales ; compte tenu de la nouveauté de leur étude, leur valorisation s'impose. La première démarche dans cette étude, consistait en une extraction et une quantification des composés phénoliques. Dans un second temps nous avons contribué à l'étude de leurs effets sur les cinétiques catalysés par deux enzymes de la classe des hydrolases (l'α-amylase et l'α-glucosidase) responsables de la digestion des sucres, et pour finir, nous avons évalué le potentiel antiradicalaire de nos extraits. Les résultats d'analyses des extraits montrent clairement des teneurs faibles en composés phénoliques dans les plantes investiguées. Le contenu en phénols totaux est compris entre 0,275 et 3,026 mg en équivalent d'acide gallique /g de la matière sèche. Tandis que le contenu en flavonoïdes exprimé en équivalent de la rutine est compris entre 0,204 et 2,566 mg/g. Les résultats de l'étude cinétique des réactions enzymatiques montrent que les extraits phénoliques ont des effets inhibiteurs sur les deux enzymes, avec des valeurs de K i qui varient de 18,19 µg/ml à 72,14 µg/ml pour l' α-amylase et de 52,26 µg/ml à 203,90 µg/ml pour l' α-glucosidase dont la meilleure inhibition a été enregistré inscrit pour la plante Helianthemum kahiricum (K i = 18,19 µg/ml). Le test d'activité antioxydante montre que nos extraits phénoliques présentent un bon pouvoir antioxydant comparativement aux antioxydants pris comme référence. Nous avons également remarqué des corrélations positives entre les deux tests, d'inhibition et antiradicalaire, ce qui suggère que les deux activités antioxydante et inhibitrice soient en grande partie dues à la présence et la quantité en composés phénoliques. Un des résultats le plus important, c'est que nos extraits phénoliques découvrent partiellement des activités inhibitrices compétitives très intéressantes, ce qui nous encourage d'investir dans ce domaine afin de caractériser les molécules responsables de cette activité. Ce travail a fourni de nouvelles connaissances ethnopharmacologiques et phytochimiques au sujet des plantes locales de la région de Laghouat et constitue une contribution à l'étude du rôle des polyphénols naturels dans la régulation du stress oxydatif et la normalisation des troubles glycémiques. MOTS-CLÉS : Phenolic extracts, inhibition effect, α - amylase, α - glucosidase, antioxidant activity. 123

124 P.70. Etude de l immunité humorale locale en cas de Candidose Vulvovaginale Amouri I. 1, Abbes S. 1, Hadrich I. 1, Karray M 1, Sellami H. 1, A. Ayadi Laboratoire de biologie moléculaire parasitaire et fongique, Faculté de médecine. Université de Sfax, Sfax Tunisie. Résumé La candidose vulvo-vaginale récidivante (CVVR) constitue un problème majeur chez les femmes en âge de procréer. Il est actuellement admis que les femmes ayant une CVVR présentent un déficit immunitaire local. L objectif de notre étude a été d évaluer la sécrétion différentielle des anticorps de type IgG et IgA anti-c. albicans par Elisa indirecte, au niveau des sécrétions vaginales, chez les patientes atteintes de CVV, CVVR et les femmes asymptomatiques. L analyse de l ensemble des surnageants a révélé une différence significative entre la prévalence des IgA (73%) et celle des IgG (33%). La prévalence des IgA et des IgG chez les patientes ayant une CVV (75% et 37.5%) et CVVR (86% et 42,86%) a été supérieure à celle observée chez les femmes témoins (61% et 18%, respectivement). En conclusion, l étude de l immunité humorale au niveau des secrétions vaginales a révélé que la CVVR ne peut pas être attribuée uniquement à la déficience de l immunité humorale locale et d'autres investigations protéomiques complémentaires seront nécessaires. Keywords: Immunoglobulines, IgA, IgG, Candidose vulvo-vaginale 1 Introduction La candidose vulvo-vaginale récidivante (CVVR), caractérisée par la survenue de quatre épisodes ou plus par an, est responsable d un inconfort important chez les patientes et pose un problème sérieux aux cliniciens et biologistes. Plusieurs hypothèses ont été évoquées pour comprendre les mécanismes de l immunité anti-candida impliqués dans la protection et/ ou susceptibilité de la CVV. Il est actuellement admis que les femmes ayant une CVVR présentent un déficit immunitaire local [1]. En effet, les anticorps représentent la première barrière immune contre les antigènes ayant franchit la muqueuse. Ces anticorps sont des immunoglobulines de type IgA and IgG [2]. Les immunoglobulines de type IgA sécrétoires (IgAs) semblent être l'élément le plus constant et le plus important présent dans les sécrétions [3]. Les IgA peuvent inhiber l adhésion des levures aux cellules épithéliales de la muqueuse vaginale, qui seront par suite emportés par le mucus cervical [4]. L'objectif de cette étude a été de détecter les anticorps, de type IgG et IgA, impliqués dans la réaction humorale anti-c. albicans au niveau de la muqueuse vaginale et évaluer leur sécrétion différentielle chez les patientes atteintes de CVV, CVVR et les femmes asymptomatiques. 2 Méthodologie Patientes et Prélèvement : L étude de l immunité humorale locale a été menée sur des sécrétions vaginales prélevés chez 3 groupes de patientes (i) 14 patientes ayant une CVVR, (ii) 8 patientes ayant une CVV et (iii) 17 patientes témoins (ne présentant aucun signe de vaginite), qui ont été recrutées au cours d une étude prospective durant 2 ans [5]. Détection des IgA et IgG anti C. albicans par Elisa indirecte: La première étape a consisté en une sensibilisation de la plaque par 100µl/ puits de l antigène C. albicans (souche de référence CA 3153, lyophilisée) dilué dans le tampon bicarbonate (0.05 M, ph= 9.6) à raison de 20 µg/µl. Les plaques ont été incubées à 4 C pendant une nuit. Les puits ont été ensuite lavés pour éliminer les antigènes en excès avec du tampon de lavage PBS/ Tween 20 (0.1%). 124

125 La deuxième étape a consisté en une fixation de l anticorps à doser à raison de 100µl/ puits. Les surnageants ont été déposés sans dilution et dilués au 1/50 dans du PBS/ T/ BSA (1%) pour la détection des IgA et IgG, respectivement. Les standards positifs IgA et IgG anti-c. albicans et le blanc (PBS/ T/ BSA (1%)) ont été inclus dans chaque série d échantillons à analyser. La réaction a été incubée à 37 C pendant une heure. Les anticorps en excès ont été éliminés par 3 lavages successifs avec du PBS/ Tween 20 (0.1%). Un volume de 100 µl/ puits a été appliqué pour les anticorps anti-iga et anti-igg humains conjugués à la peroxydase (Sigma-Aldrich) ont été dilués respectivement au 1/8000 et 1/1000. La réaction a été incubée à 37 C pendant une heure. L excès de l anticorps conjugué a été éliminé par 3 lavages successifs de la plaque ELISA. La révélation de la réaction anticorps antigène a été réalisée en ajoutant le substrat tetramethylbenzidine (TMB) à raison de 100µl/ puits. Après incubation de la plaque à température ambiante pendant 15 min, la réaction enzymatique a été stoppée avec 50µl d acide sulfurique (H2SO4, 5%). Les densités optiques (DO) ont été lues à l'aide d'un spectrophotomètre en utilisant un filtre de 450nm. 3 Résultats La recherche des immunoglobulines anti-c. albicans au niveau des secrétions vaginales a révélé une détection des IgA significativement prononcée (p<< 0.001) (73%) par rapport à celle des IgG (33%) en considérant tous les surnageants analysés. Cependant, la prévalence de détection des IgA ou des IgG ne montre aucune différence significative entre les groupes CVV, CVVR et témoins. Toutefois, nos résultats ont montré que la prévalence de détection des IgA et des IgG chez les patientes est supérieure à celle chez les femmes témoins (Figure 1). Les IgA anti-c. albicans ont été détecté dans 86 et 75% des surnageants prélevés chez les patientes ayant une CVVR et une CVV (moyenne de DO respective égale à et 0.294), versus 61% (P= et , respectivement) des surnageants prélevés chez les témoins (moyenne DO= 0.17). 33% 73% 18% 61% 37.50% 75% IgG IgA Témoins CVV CVVR Figure 1: Fréquence de détection des IgA et des IgG dans les sécrétions vaginaux La fréquence des IgG anti-c. albicans détectés a été plus importante chez les patientes ayant une CVVR (42.86%) et celles ayant une CVV (37.5%) par rapport aux femmes témoins (18%) (P< 0.001). La moyenne de DO obtenue a été nettement différente et supérieure chez le groupe CVVR par rapport à celle des CVV et des témoins (DO= 0.45 vs et 0.07, respectivement). Références 1. Sobel JD. 2007, Vulvovaginal candidosis. Lancet 369, pp de Carvalho RJ, Cunha CM, Silva DA, Sopelete MC, Urzedo J E, Moreira T A, et al. 2003, IgA, IgE and IgG subclasses to Candida albicans in serum and vaginal fluid from patients with vulvovaginal candidiasis. Rev Assoc Med Bras 49, pp Kerr MA. 1990, The structure and function of human IgA. Biochem J 271, pp Bouvet JP, Belec L, Pires R, Pillot J. 1994, Immunoglobulin G antibodies in human vaginal secretions after parenteral vaccination. Infect Immun 62, pp Amouri I, Sellami H, Borji N, Abbes S, Sellami A, Cheikhrouhou F et al. 2011, Epidemiological survey of vulvovaginal candidosis in Sfax, Tunisia. Mycoses 54, pp

126 P.72. Palm residues composting for soil amendment in Chenini Oasis (Gabes Region, Tunisian Southeast) 1 Imen Ben Mahmoud, 2 Bouhaouach Habib, 3 Emna Ammar, 4 Khaled Medhioub 1 Earth Sciences Department, Science Faculty of Sfax, University of Sfax, BP 1171, Sfax, 3000, TUNISIA 2 National Engineering School of Sfax, Sfax, TUNISIA 3 Département des Sciences et Technologie de l'environnement, Unité Science du Sol. Faculté Gembloux AgroBio Tech/Université de Liège - Belgique 4 Preparatory Institute of Engineering Studies of Sfax, Sfax, TUNISIA. Abstract Chenini oasis located in Gabes governorate of in the Southeast of Tunisia, produces yearly an enormous quantity of palm residues. The management of these palm residues is crucial for the preservation of the environment and the organic matter contents valorization is possible through composting. Soil amendment by such compost is a way to improve soil fertility and plant growth as a sustainable development. After composting process of mixture (66 % crushed palm residues and 33% caprine ovine manure) during 120 days, the compost reached maturity with C/N ratio below 12 and windrow temperature around the ambient temperature. Keywords: palm residues, compost, soil fertility, plant yield 1 Introduction The Chenini oasis situated in Gabes governorate in the Southeast of Tunisia, produces yearly a high quantity of palm residues. In fact, more than tons of organic wastes are lost annually [1]. On the other hand, the soil organic matter content in the oasis is very low (<0.5%) and consequently the soil fertility in this area [2]. The management of theses palm residues is crucial for the preservation of the environment and the valorization of their organic matter contents may be an issue for sustainable development. The use of compost is an economical solution to solve agronomic problems and its application on the soil is an acceptable way to improve soil fertility and plant growth, mainly by affecting its physical and chemical properties [3,4]. The co-composting of palm residues with manure was previously studied by bouhaouach et al [5] and he noticed that the compost produced can be used as an organic fertilizer for agriculture soils, without any phytotoxic effect. Composting is a biological process used for treatment for organic wastes to obtain organic soil fertilisers [6]. During this process, the organic waste such as palm residues is biodegraded mainly through exothermic aerobic reactions which produce carbon dioxide, water, mineral salts, and a stable and humified organic material. In the present study, the palm residues were crashed and dipped into the water for one week to decrease C/N ratio and to facilitate biodegradation [5]. The crushed palm produced was mixed with manure (caprine ovine) and composted in windrow. The aim of this work was to study the effects of compost on plant yield and soil properties. 2 Methodology A pile (L x l x H=10 x 1.5 x 1.3 m 3 ) was prepared by mixing the crushed palm residue (66%) with caprine ovine manure (33%), and watered by recycling water produced after soaking the crushed wastes. During the composting process, moisture content was adjusted to around 45-60%.The windrow was stirred mechanically for aeration when the internal temperature (measured by a mercury thermometer), reached or exceeded 55 C. The windrow temperature was measured at different depths: 0.25, 0.50 and 0.90 m daily. The average value was used to represent the temperature profile during composting. Samples were collected during the mechanical stirring. These were taken by mixing six sub-samples from six sites of the pile, spanning the whole profile (from the top to the bottom), according to ISO 8633 (1992). Each sample was divided into two parts, one of which was dried and then passed through at 0.2mm sieve and used for analysis. The other was stored at 4 C and analysed within 24 h. 3 Main Results 126

127 Temperature ( C) 19, 20, 21 et 22 décembre 2012 Hôtel EL Mouradi Douz - Tunisie The characterization of initial material used in composting experiment is presented in Table 1. Table1. Physical and chemical characteristics of raw materials Parameters Crushed palm residues Caprine ovine Manure ph Elecrical conductivity (ms cm -1 ) Humidity (%) ,35 Organic matter (%dry matter) ,9 Total Organic Carbon (%) Total Nitrogen KjeldahlK (%) C/N Lignin (%) Cellulose (%) K + (ppm) Ca 2+ (ppm) Mg 2+ (ppm) ,5 Compost maturity As shown in table 2, the compost is alkaline at the end of process and had a high content of minerals. Table2. Physical and chemical properties of stabilized compost Parameters Dry matter (%) ph EC (ms/cm) OM (%) C/N P 2O 5 (%) K 2O (%) MgO (%) CaO (%) Fe (mg/kg) Mn (ppm) Cu (ppm) Zn (ppm) Compost The percentage of organic matter in compost is statistically higher than that of manure while no significant difference was observed in the C/N ratio. The compost has a C/N ratio less than 20 reflecting a satisfactory degree of compost maturity. However, [6] considers that a value below 12 indicates a high degree of maturity. As shown in figure1, temperature in windrow increased rapidly, to reach 70 C within 40 days. The themophilic phase lasted for more than 2 months. Then temperature decrease and was recorded ambient temperature Ambiant Temperature Windrow temperature Composting time (days) Fig.1: Temperature profile during composting Acknowledgements: This work was supported by the Association de sauvegarde de l oasis de Chenini. We are grateful to this staff. References [1]Kouki, 2009: Etude de l oasis traditionnelle Chenini Gabès dans le sud Est de la Tunisie. Tropicultura Vol 27. P [2]Gherairi R., Said A. (1998). Contrôle du niveau de salure de la nappe superficielle de l oasis de Gabès. Rapport d étude du terrain, 42p. [3]Senesi, N., Miano, T.M., Brunetti, G., Humic-like substances in organic amendments and effects on native soil humic substances. In: Piccolo, A. (Ed.), Humic substances in Terrestrial Ecosystems. Elsevier, Amsterdam, pp (chapter 14). [4]Larchevêque, M., Ballini, C., Korboulewsky, N., Montès, N., The use of compost in afforestation of Mediterranean areas: effects on soil properties and young tree seedlings. Sci. Total Env. 369, [5]Bouhaouach H. (2007). Compostage des sous produits oasiens et leurs valorizations dans des cultures de carotte et de laitue. Mastère de recherché à l Institut National Agronomique de Tunis, 2007, 121p. 127

128 P.74. Effect of treated and untreated domestic wastewater on seed germination, seedling growth and amylase and lipase activities in Avena sativa L. Imen Fendri 1, Rania Ben Saad 2, Bassem Khemakhem 3, Nihed Ben Halima 4, Radhouane Gdoura 1 and Slim Abdelkafi 4 1 Unit e de Recherche Toxicologie Microbiologie Environnementale et Santé, Faculté des Sciences de Sfax, Université de Sfax, Sfax, Tunisia 2 Centre de Biotechnologie de Sfax, Université de Sfax, BP 1117, 3018, Sfax, Tunisia 3 Laboratoire de Biotechnologie des Plantes, Faculté des Sciences de Sfax, Universit e de Sfax, Sfax, Tunisia 4 Département de Génie Biologique, Ecole Nationale d Ingénieurs de Sfax, Université de Sfax, BP 1171, 3000, Sfax, Tunisia Abstract BACKGROUND: Oats (Avena sativa L.) are a potential economically viable source of lipids and starch for use in foods. The aim of this study was to determine the effect of treated and untreated urban wastewater on seed germination, growth parameters and lipase and amylase activities in A. sativa. RESULTS: Untreated wastewater was highly toxic in nature and had an inhibitory effect on seed germination and seedling growth. However, after bacterial treatment, its toxicity was significantly reduced and it showed improved seed germination. It was observed that treated wastewater had no inhibitory effect on seedling growth parameters. However, A. sativa seeds treated with untreated effluent showed reduced lipase and amylase activities. CONCLUSION: Treated wastewater could be used for irrigation purposes provided that it satisfies other conditions fixed by legislation. Keywords: Avena sativa L.; lipase activity; amylase activity; urban wastewater; seedling growth Introduction In many Mediterranean countries, wastewater is not always adequately treated, leading to the deterioration of existing freshwater resources and the Mediterranean Sea. The Mediterranean region is one of the areas in the world most affected by water shortage. Moreover, the demand for water is expanding owing to population growth, increasing economic activities and expanding areas of irrigated agriculture. In addition, political, economic and social boundary conditions have changed during the last years following new environmental regulations. Conventional wastewater treatment processes have long been known to effectively remove many of the chemical and microbial contaminants constituting a risk to public health and the environment. The recycling of processed domestic wastewater has become a necessity, especially in arid and semi-arid areas. In Tunisia, recycled domestic wastewater should account for 60% of water requirements within a few years. After biological treatment, a suitable toxicity/risk assessment test should be done with approved aquatic and terrestrial test models prior to its use in agriculture. For this reason, we have chosen the oat plant as a model to test the impact of treated and untreated domestic wastewater. This study deals with the toxicity evaluation of urban wastewater before and after treatment when used on A.sativa L. seeds in terms of seed germination, seedling growth and amylase activity for environmental safety. Results and Discussion Physicochemical characteristics of urban wastewater before and after treatment The physicochemical analysis of urban wastewater before treatment revealed that it was a slightly alkaline, dark-coloured wastewater with very high BOD, COD, total solids and nitrogen and low 128

129 concentrations of various heavy metals (Cu, Cd and Pb). However, after pretreatment and bacterial treatment, it was biotransformed into a pale-coloured wastewater. The developed aerobic bacterial consortium was effective in decolourising the wastewater, with considerable reductions in BOD, COD, suspended solids and nitrogen of up to 89, 88, 91 and 76% respectively. The physicochemical characteristics of treated wastewater were in general satisfactory (NT , NT ). Concentrations of the heavy metals Cu (0.1mgL 1), Zn (1.14mg L 1), Pb (0.08mg L 1) and Cd (0.03mg L 1) were below the permissible limits (NT ). Effect of treated and untreated wastewater on seed germination and seedling growth The exposure of UTW (untreated water) and TW (treated water) on seed germination and other plant growth parameters are depicted in Fig. 1. The physico-chemical analysis has revealed that untreated wastewater was highly toxic in nature and has inhibitory effect on seed germination and seedling growth. But, after bacterial treatment its toxicity was reduced significantly and has shown improved seed germination compared to untreated wastewater. The seeds of Avena sativa L. were irrigated with water, TW or UTW, kept under observation for a period of 20 consecutive days to record percent germination, seedling growth (i.e. leaf length and root length) and amylase activity, which is an indicator of gibberlic acid level in germinating seeds. Figure 1. Photographs showing morphological effect of UTW and TW on root (left) and shoot (right) growth of Avena sativa under greenhouse conditions after 20 days versus control (H2O). In present study, the optimum amylase activity (10.3 U) was recorded in seeds pre-soaking with water (control) after 12 days (Fig. 5). However, the seeds pre-soaked with untreated water have shown low amylase activity (4 U) than the control seeds. Moreover, the seeds pre-soaking with treated water have shown the similar amylase activity (8 U) of seeds pre-soaking with water (Fig. 5) indicating that the toxicity of the untreated water is reduced significantly after treatment. The reduction in amylase activity of seeds pre-soaking with untreated water might be due to the high salt load and metals content affecting various physiological and biochemical process of seed germination. Results indicated that the concentration of α -amylase enzyme decreases gradually as the concentration of untreated water increased in the seeds. In fact, the seeds soaked in presence of untreated water showed 40 % of original activity, in contrast, the treated water allow the recovery of 80% of original activity. These results were in accordance with the percentage of germination. In fact, when the seeds were presoaked with untreated effluents for 20 days, the percentage of germination was reduced to 50%. These results confirmed these obtained by Bharagava and Chandra 18 which showed that the Phaseolus seeds treated with 60 and 80% untreated PMDE (post-methanated distillery effluent) showed reduced amylase activity and no amylase activity was observed in seeds treated with 100% untreated PMDE. 129

130 P.75. Exploration de quelques activités antioxydantes d une espèce spontanée: Pergularia tomentosa Lahmer Imen 1, Belghith Karima 1 et Ben abdallah Ferjani 1 1 Département des Sciences de la vie, Faculté des Sciences, Université de Sfax, BP 1171 Sfax 3000, TUNISIE imen.lahmer@yahoo.fr Résumé Des feuilles et des racines d une espèce spontanée Pergularia tomentosa (Famille : Asclepiadaceae) ont été utilisées pour le dosage des polyphénols et l exploration de son pouvoir antioxydant. L analyse des différents extraits, foliaires et racines, issus du fractionnement par des solvants à polarité croissante semble révéler que les feuilles sont plus riches en composés phénoliques (58.61±1.05 g GAE/100g MS) et en flavonoïdes (33.53±0.66 g QE/100g MS) que les racines. En comparaison avec les témoins positifs, les tests «in vitro» de l activité antioxydante ont également révélé, chez l extrait méthanoïque des feuilles, à la fois un remarquable pouvoir de piégeage des radicaux libres (IC 50 = ±1.72 µg/ml) associé à une potentielle réduction des chlorures de fer (IC 50 = 18.71±0.63µg/mL). Mots clés : composés phénoliques, flavonoïdes, activité antioxydante. 1 Introduction Par leurs nombreux effets bénéfiques (inhibition des enzymes responsables de la formation des radicaux libres, chélation des ions métalliques etc.), les polyphénols ne cessent de susciter l attention des chercheurs. En effet, les substances antioxydants naturelles contribuent à la protection des jeunes tissus contre le vieillissement et diminuent, par conséquent, le taux de mortalité. Etant donné les multiples utilisations de Pergularia tomentosa dans la médecine traditionnelle [1], ses activités antioxydantes sont de plus en plus sollicitées. 2 Matériels et méthodes Les feuilles et les racines collectées sont séchées à l ombre puis broyées finement. Les extraits éthanoïques sont fractionnés par des solvants à polarité croissante. Le dosage des polyphénols est basé sur le fait que le réactif Ciocalteu agit avec les groupements oxydables [2]. Les valeurs sont exprimées en g équivalent d acide gallique/100 g de matière sèche. Les teneurs en flavonoïdes sont estimées par la méthode colorimétrique au chlorure d aluminium [3] et exprimées en g équivalent de quercétine/100 g de matière sèche. Les extraits méthanoïques sont utilisés lors de la détermination des activités antioxydantes. L activité antiradicalaire est mesurée selon la méthode de DPPH modifiée [4]. Le pouvoir réducteur est basé sur le changement de couleur mesurée à 700 nm [5]. 3 Résultats et discussions L examen de la figure 1 montre, pour les deux organes, des teneurs importantes aussi bien en composés phénoliques qu en flavonoïdes. Les pourcentages les plus importants ont été enregistrés avec l extrait au chloroforme. Les feuilles semblent les plus riches en composés phénoliques (58.61±1.05 g Eq GAE/100g MS) ainsi qu en flavonoïdes (33.53±0.66 g Eq QE/100g MS). A l exception de l extrait-hexane des feuilles, le butanol s est avéré le solvant le moins puissant à extraire les polyphénols. Ces résultats mettent en évidence le rôle du solvant dans l extraction [6]. La variation des teneurs, d un organe à un autre, semble liée au climat et au biotope de la plante. 130

131 Teneurs en composés phénoliques (g Eq GAE/100g) et en flavonoides (g Eq QE/100g) 19, 20, 21 et 22 décembre 2012 Hôtel EL Mouradi Douz - Tunisie Composés phénoliques Flavonoides 0 Hexane Chloroforme Acétate d'éthyle Racines Butanol Hexane Chloroforme Acétate d'éthyle Feuilles Butanol Figure 1 : Teneurs des composés phénoliques et des flavonoïdes au niveau des racines et des feuilles Moyennes de trois répétitions et intervalles de sécurité au seuil de 5%. Le pouvoir antioxydant des extraits méthanoïques est testé à différentes concentrations croissantes en extraits (Tableau 1). Ces activités sont évaluées par la détermination des IC 50, correspondant à la concentration de l extrait capable d inhiber 50% de l activité initiale. Tableau 1 : Activité antioxydante et pouvoir réducteur des extraits méthanoïques IC 50 (µg/ml) DPPH IC 50 (µg/ml) PR Racines ± ±1.4 Feuilles ± ±0.63 BHT 64.57± ±0.8 α-tocopherol 4.19± IC 50 : concentration inhibitrice à 50% ; PR : pouvoir réducteur Les activités des extraits testés dépendant de la concentration, sont comparées à celles de BHT et α- tocopherol utilisés comme témoins positifs. L extrait issu des feuilles montre une IC 50 faible ce qui témoigne d un pouvoir de piégeage des radicaux libres plus important que celui des racines. La teneur appréciable en composés phénoliques totaux explique la capacité de réduire le 2,2-diphényl-1- picrylhydrazyl à la diphenylpicrylhydrazine. En fait, il existe une corrélation directe entre ce pouvoir antioxydant et la réduction du ferricyanide de potassium. Ces résultats montrent clairement que le pouvoir réducteur des racines est plus faible que celui des feuilles. Ces dernières sont dotées d un pouvoir antioxydant plus fort; ils convertissent plus les ions Fe 3+ en Fe 2+ et leur IC 50 est proche de celle du BHT (puissant antioxydant). Références [1] Lahmer I., Etude exploratrice des propriétés biologiques et écophysiologiques d une asclepiadaceae pérenne : Pergularia tomentosa L [2] Singleton V.L., Orthofer R., Lamuela-Raventos R.M., Analysis of total phenols and other oxidation substrates and antioxidants by means of Folin-Ciocalteau reagent. Methods Enzymol. 299: [3] Lamaison J.L., Carnat A., Teneurs en principaux flavonoïdes des fleurs et des feuilles de Crataegus monogyna Jacq. et de Crataegus laevigata (Poiret) DC., en fonction de la végétation. Plants Med. Phytother, 25: [4] Brand-Williams W., Cuvelier M.E., Berset C., Use of free radical method to evaluate antioxidant activity. LWT-Food Science and Technology. 28(1): [5] Oyaizu M., Studies on products of browning reaction prepared from glucosamine. Jap. J. Nut

132 P.78. Effect of geographical variation on chemical composition, antioxidant and antibacterial activities of the Tunisian edible halophyte Inula crithmoїdes essential oil 1 Ines Jallali, 2 Yosr Zaouali, 1 Riadh Ksouri & 1 Chedly Abdelly 1 Laboratoire des plantes extrêmophiles, Centre de Biotechnologie à la Technopole de Borj-Cédria (CBBC), BP 901, 2050 Hammam-lif, Tunisie. 2 Institut National des Sciences Appliquées et de Technologie, Tunisie Abstract Inula crithmoïdes (Asteraceae) is a spontaneous halophyte thriving on waterlogged zones, harnessing edible, medicinal, aromatic and economic potentialities. In this study, we tried to inspect the effect of geographical variation on essential oil yields and related antioxidant and antibacterial activities. Aerial parts were sampled from two different locations. Essential oils were extracted by the Clevenger apparatus, analyzed by GC-MS, and investigated for their antioxidant (DPPH test, FRAP and BCBT) and antibacterial activities (by the disc diffusion method) against four human pathogenic bacteria. Results revealed that amounts of these phytochemicals are significantly variable within the provenance. Besides I. crithmoïdes essential oils exhibited moderate antioxidant activities. However, they displayed a very high antibacterial effect on Gram + selected strains when they failed, for the most part, to inhibit the growth of Gram - ones. These finding suggest that I. crithmoïdes is an interesting source of bioactive compounds for food, pharmaceutical, and cosmetic industry. Keywords: I. crithmoїdes, essential oil, GC-MS, antioxidant activities, antibacterial activities. 1 Introduction I. crithmoїdes is a food halophyte naturally thriving on salt depressions and costs. It has been previously investigated for its flavonoids, essential oils, terpene derivatives and butyl glycosides [1]. The aim of this work is to investigate the effect of geographical variation on the essential oil composition and its antioxidant and antibacterial activities. 2 Methodology I. crithmoїdes aerial parts were collected from Soliman estuary (Upper semi-arid) and El Kalbia marsh (upper arid) then air dried. Essential oils were extracted using a Clevenger apparatus then analyzed using GC-MS. Antioxidant potential of these secondary was investigated by the DPPH test [2], FRAP assay [3], and β-carotene bleaching test [4]. The antibacterial activity was determined through the agar disc diffusion method [5]. 3 Main Results Essential oil content and antioxidant activities: Oils obtained from I. crithmoїdes shoots have intense yellow color and overpowering odor. Geographical variation have a significant effect on these bimolecules since El Kalbia provenance enclose lower yield than Soliman one, however, its oil express higher antioxidant activities for all the investigated tests (Table 1). Table 1: I. crithmoïdes essential oils yield and antioxidant activities. Soliman El Kalbia Essential oil yield (% of DW) 0.15 ± a 0.07 ± b DPPH test (IC 50 mg/ml) 4.3 ± a 3.5 ± b FRAP test (EC 50 mg/ml) 3.3 ± a 3.9 ± 47.1 b BCBT (IC 50 mg/ml) 4.6 ± a 1.3 ± b IC 50: Inhibiting concentration of 50% of the synthetic radical; EC 50: Effective concentration at the optic density

133 Antibacterial activity of I. crithmoïdes essential oil: Antibacterial test revealed a specificity of action of the investigated essential oils components. In fact, both Soliman and El Kalbia provenances have pronounced effect on Gram + bacteria when they failed, for the most part, to inhibit the growth of Gram - ones (Table 2). In general, El Kalbia oil has higher antibacterial activity exceeding, in the case of S. aureus, that of the used positive control (Gentamicine). Table 2: Antibacterial activity of I. crithmoides essential oils. GRAM - GRAM + E.coli P.aeruginosa S. aureus B.cereus Soliman na na 15 ±2 15±0,4 El Kalbia 10±0 na 21 ±1,3 13 ±0 Gentamicine Inhibition zone was calculated in diameter around the disc (mm ± SD); na: not active Chemical composition of I. crithmoides essential oil: I. crithmoides essential oils contain a complex mixture dominated by monoterpene hydrocarbons and oxygenated monoterpenes. P-cymene and carvacrol methyle ether are major components in Soliman provenance, while p-cymene and α- limonene represente the highest proportions of El Kalbia one (Table 3). Table 3: Chemical composition of I. crithmoides aerial parts essential oils. N Identified compounds % Soliman El Kalbia 1 α-pinene 6,93 1,1 2 α-phellandrene 8,33 9,9 3 p-cymene 23,1 27,28 4 α- limonene 3,17 24,02 5 Thymol methyle ether 8,33 2,66 6 Carvacrol methyle ether 18,07 3,78 7 Bornyle acetate 0,49 3, ,11-dimethylbicyclo [6.3.0]1(8)-en-9-one 5,9 Tr 9 Dillapiol Tr 3,75 Total identified 94,31 96,032 Monoterpene hydrocarbons 45,05 66,13 Oxygenated monoterpenes 38,06 25,05 Sesquiterpene Hydrocarbons 5,44 4,17 Phenylpropanoides 5,9 - Conclusion: Results obtained in this work lead to the conclusion that I. crithmoides is a promising halophyte that can be a source of several bioactive compounds having pharmaceutical and industrial interests. Taking advantages of this plant bioactive molecules entails consideration of not only their amount, but also the extra- and intrinsic factors that have a great effects essentially on their chemical composition, and consequently, on their biological activities. References [1] Abdel-Wahhab M.A., Abdel-Azim S.H., & El-Nekeety A.A., 2008, Inula crithmoides Extract Protects Against Ochratoxin A- induced Oxidative Stress, Clastogenic and Mutagenic Alterations in Male Rats, Toxicon. 52, pp [2] Hanato T., Kagawa H., Yasuhara T., & Okuda T., 1988, Two New Flavonoids and Other Constituents in Licorice Root: Their Relative Astringency and Radical Scavenging Effects, Chem. Pharm. Bull. 36, pp [3] Oyaizu M., 1986, Studies On Products of Browning Reaction: Antioxidative Activity of Products of Browning Reaction, Jpn. J. Nutr. 44, pp [4] Koleva I.I., Teris A.B., Jozef P.H., Linssen A.G., & Lyuba N.E., 2002, Screening of Plant Extracts for Antioxidant Activity: a Comparative Study on Three Testing Methods, Phytochem. Anal. 13, pp [5] Sacchetti G., Maietti S., Muzzoli M., Scaglianti M., Manfredini S., Radice M., & Bruni R., 2005, Comparative Evaluation of 11 Essential Oils of Different Origin as Functional Antioxidants, Antiradicals and Antimicrobials in Food, Food Chem. 91, pp

134 P.79. Characteristics, chemical composition and biological activity of olea europaea extracts 1 Ines Khlif, 2 Karim Jellali, 3 Mohamed Ayedi & 1 Noureddine Allouche (1) Laboratoire de Chimie des Substances Naturelles, Faculté des Sciences de Sfax, 3000, BP 1171, Sfax, Tunisie (2) Centre de Biotechnologique de Sfax, 3018 BP 1177, Sfax. (3) Institut de l Olivier, Route de l'aéroport - Km , Sfax Corresponding Author: Dr Allouche, Noureddine, Adress Faculté des Sciences de Sfax, 3000, BP 1171, Sfax, Tunisie, University of Sfax noureddineallouche@yahoo.fr Abstract 10 Extracts related to different parts of Olea europaea (Leaves, steams, seeds) were prepared using hexane, ethyl acetate and methanol as solvents. These extracts were investigated for their total phenolics and flavonoids contents as well as for their antioxidant and antimicrobial activities. Keywords: Olea europaea, antioxidant, antimicrobial 1 Introduction Olea europaea L (Oleaceae) represents one of the most important corps in the Mediterranean countries. It contains a wide variety of compounds that play an important role in its chemical, organoleptic and nutritional properties [1]. This paper deals with the determination of some biological activities of olea europaea extracts. 2 Methodology The different extracts of Olea europaea were investigated for their in vitro antioxidant properties using the DPPH, ferric reducing antioxidant capacity (FRAP), oxygen reducing antioxidant capacity (ORAC) and β-carotene-linoleic acid assays while antimicrobial activity was evaluated by micro-dilution assay. The phytochemical screening was performed using a standard method. 3 Main Results All the obtained methanolic extracts presented highest total phenolics and flavoinoids contents. Furthermore, they exhibited the powerful antioxidant and antimicrobial activities compared with the other extracts. Phytochemical screening revealed that the prepared Olea europaea extracts contained triterpenoids, quinones and troplones. On the other hand, physicochemical characteristics and fatty acid composition of the oil extracted from olea europaea seeds were determined. The free fatty acid percentage as well as, the peroxide, the saponification and the iodine values were 1,08 %, 26 mequiv. O 2 /kg of oil, (mg KOH/g) and (g/100 g of oil), respectively. Oleic acid (C18:1, %), Linoleic acid (C18:2, %), palmitic acid (C16:0, 8.44 %) and Stearic acid (C18:0, 3 %) were the dominant fatty acids in the Olea europaea seed oil. 134

135 Acknowledgements: We are grateful to Prof. Mohamed Dammak for his assistance and helpful instructions. References [1] Khlif I., Hamden k., Damak M & Allouche N., 2011, New triterpene from olea europea stem with antidiabetic activity, Chem Nat Compd. in press. 135

136 P.80. Xylanase application for biological production of xylitol from wheat bran hydrolysate Ines Maalej-Achouri; Ines Belhadj-Ben Romdhan, Mouna Chelligue and Hafedh Belghith Laboratoire de valorisation de la biomasse et production de protéines chez les eucaryotes. Centre de biotechnologie de Sfax. Tunisie. ABSTRACT Xylitol is a sugar alcohol simple five carbons. It has several properties comparable to those of sucrose: even sweeter, non-cariogenic, used in some dietary foods for diabetics with insulin-independent power and some pharmaceuticals. Xylitol production through biological gained momentum in recent years compared to the chemical complex and expensive. Degradation of the wall of the plant material rich in hemicelluloses requises a chemical pretreatment followed by an enzymatic hydrolysis of xylan to xylose and thereafter the processing by fermentation or enzymatically in the xylitol. In order to produce xylitol we used the juice and the xylanase pure from T. thermophilus stolk to produce xylose at first, then we converted to xylitol by enzymatic using xylose reductase extracted from the fungus T. thermophilus. 1. Introduction Xylitol, a five carbon sugar alcohol, is rich of several attractive characteristics such as high sweetening power, anti-cariogenic properties and possibility for uses in diabetic food products [1,2].for all the advantages, xylitol is generally produced by chemical, biotechnological routes from D-xylose recovered from lignocellulosic materials [3,4]. An advantage of the biotechnological process over the chemical one is the cost reduction associated with the nonnecessity of xylose purification [5]. In xylose-fermenting yeast, xylose is metabolized through an inducible pathway, where it is first reduced by a cytoplasmic NAD(P)H-dependent xylose reductase (XR) into xylitol [6], xylitol is then oxidized by an NAD+-dependent xylitol dehydrogenase into xylulose, which enters the pentose phosphate pathway (ppp). In this work, we report on xylanases production by a thermophilic fungus Talaromycesthermophilus and its use for hydrolysis of the chemical pretreated wheat bran. Produced xylose was transformed to xylitol at a yield of 23% in 24 hours, by a xylose reductase extracted from the same fungus. 2. Material and Methods a. Strain: The fungus identified as Talaromyces thermophiles stolk by CBS (Central bureau voorschimel culturen) and was isolated from Elhamma thermal station in the south of Tunisia. b. Enzyme production: The medium used for the enzyme production was a modified Mandels medium [7]. The culture was incubated at 50 C and shaken for 5 days. c. Enzyme assay and sugar analysis: D-xylanase activity was determined by mixing the suitable diluted enzyme with 0.5 ml of substrate (1% xylan in phosphate buffer 50 mm, ph7.0) in a final volume of 1 ml and incubating the mixture at 50 C for 30 min. the reducing sugars released were determined by the dinitrosalicylic were determined by HPLC. d. Xylose reductase extraction and xylitol production: Talaromyces thermophiles was cultivated in Mandels medium containing different carbon sources (glucose 2%, sucrose 2%, xylose 2%) at 50 C during 4 days. The recovered mycelium was crushed by adding w/w alumina in 5 ml of phosphates buffer 50 mm ph 7.0 using a mortar. The supernateant which contains xylose reductase activity was recovered and used for xylitol production. 3. Results and Discussion 1. Xylanase production bytalaromycesthermophilus The production of xylanase by T. thermophiles was studied in shake flask cultures at 50 cand 160 rev.min-1 using Oat Spelt xylan: OX 2%; Wheat bran: WB 2%; Rabbit food 2%; Xylose 2%; Lactose 2% as carbon sources (Fig. 1). 136

137 Sucres réducteurs (mg/ml) 19, 20, 21 et 22 décembre 2012 Hôtel EL Mouradi Douz - Tunisie Fig.1. Production of xylanase by Talaromyces thermophilus using lignocelluloses materials as carbon sources: oat spelt xylan OX 2%; Wheat bran WB3%; Rabbit food 3%; Xylose 2%; Lactose 2%. Shake culture at 50 C and 160 rev min -1. The highest titer of xylanase (5.5 IU.ml -1 ) was obtained on Oat spelt xylan after 5 days of culture Fig.1, whereas, the highest β xylosidase activity in the culture filtrate 0.25 IU.ml -1 was obtained on Wheat bran 2% (data not shown). The xylanase and β-xylosidase of Talaromyces thermophiles are inducible enzymes as they are much more produced in the presence of xylan or Wheat bran. 2. Xylane hydrolysis and transformation of xylose to xylitol Oat Spelt xylan at 2% was hydrolysed by xylanase produced on the different carbone sources. Samples wen taken at different time and analysed for reducing sugar (fig. 2A) or for xylose production (fig. 2B) and transformation of xylose to xylitol (fig. 2C) by HPLC. A son de blé PX xylane Enzyme pure B Temps (h) C Fig.2. A: Xylan hydrolysis by enzymes produced on different carbon sources; B : transformation of xylose to xylitol; C : HPLC analysis of xylitol obtained by enzyme reaction. The hydrolysis of xylan by the enzyme obtained on wheat bran permits the release of the most significant quantity of xylose. Fig. 2A.The outputs of the hydrolysis are relatively weak and can be increaszd by chemical pre-treatment (data not shown). The xylitol reaches 23% in 24h. Fig. 2B.which proves that the xylose reductase is intracellular and able to transform xylose to xylitol. References [1] Hyvpnen L., Koiistoinen P., Voirol F., 1982, food technologies evaluation of xylitol, Adv Food Res, 28 pp [2] Pepper T., Olinger P.M.,1988, Xylitol in sugar-free confections, Food Technol.10 pp [3] Hahn-Hagerdal B., Jeppson H., Prior BA., 1994, Biochemistry and Physiology of xylose fermentation by yeast. Enzym Microb Technol; 16pp [4] Winkelhausen E., Kuzmanova S., 1998, Microbial conversion of D-xylose to xylitol, J ferment Bioeng; 86(1) pp1-14. [5] Parajo JC., Dominguez H., Dominguez JM. Biotechnological production of xylitol.part 1.Interest of xylitol and fundamentals of its application. [6] Rizzi M.,Erlemann P., Bu-Thanh NA., Dellweg H.,1988, Xylosereductase from Pichia Stipitis, Appl. Microbiol. Biotechnol; 29 pp [7] MandelsM., Weber J., 1969,The production of cellulose; [In:] cellulose and their applications. Eds. GJ Hajny and ET Reese, Adv. Chem. Ser., 95, pp

138 P.81. Investigation de la contamination par les hydrocarbures aliphatiques et polycycliques et leurs origines possibles dans l environnement Zrafi Ines 1 ; Bakhrouf Amina 2 ; Saidane-Mosbahi Dalila 2 1) Centre de Recherches et des Technologies des Eaux (CERTE), Technopôle Borj Cédria, BP 273, 8020 Soliman, Tunis, Tunisie 2) Laboratoire d Analyse, Traitement et Valorisation des Polluants de l Environnement et des Produits, Faculté de Pharmacie de Monastir, Tunisie Résumé De nos jours, le développement industriel, la croissance économique, l'essor de l'agriculture et l'explosion démographique ont engendré l'apparition et la dispersion de nombreuses nouvelles molécules chimiques polluantes dont les hydrocarbures pétroliers. La Méditerranée est soumise, spécialement, à ce problème de déversement de produits pétroliers. Elle est considérée comme une des surfaces marines les plus affectées par la contamination pétrolière dont les effets sont nuisibles sur la productivité des écosystèmes la santé humaine. L objectif de cette étude est le suivi et l analyse des charges en hydrocarbures totaux, aliphatiques et polycycliques (HAP) dans différentes régions côtières tunisiennes. Ce travail consiste à l évaluation et la détermination de l origine des hydrocarbures en se basant sur des marqueurs géochimiques. L étude quantitative a montré des charges en hydrocarbures totaux arrivant à 76 mg/l. Les teneurs en hydrocarbures aliphatiques et aromatiques atteignent respectivement 1386,03µg/L et mg/l. Alors que l évaluation de la Σ18HAP montre que ces derniers atteignent 857,57ng/L. Les marqueurs de pollution utilisés dans ce travail ont permis la discrimination entre source autochtone et anthropogénique pour les hydrocarbures totaux et entre pétrogénique et pyrolytique pour les HAP dans les différents sites étudiés. Mots Clés: Environment; Marqueurs de pollution; HNA, HAPs 138

139 P.82. Répartition des phytohormones chez Atriplex Halimus traitée par le Cd Insaf Bankaji 1, Noomene Sleimi 1, Rosa P. Clemente 2, Aurelio G. Cadenas 2 1. UR: Matériaux et Ecosystèmes, Faculté des sciences de Bizerte, 7021 Jarzouna, Bizerte; Tunisie. 2. Laboratoire d écophysiologie et biotechnologie, Université JAUME I, Castellon, Espagne. insafbanc@yahoo.fr, Noomene.Sleimi@fsb.rnu.tn Résumé La contamination par les métaux lourds est l un des problèmes environnementaux les plus graves qui limitent la productivité des plantes et menace la santé humaine. Parmi ces métaux, on cite le cadmium qui est l un des métaux lourds les plus toxiques, sa présence dans le milieu cause des dégâts considérables au niveau de la plante tels que l inhibition de la croissance, la perturbation du statut hydrique et l apparition de nécrose. Atriplex Halimus est connu par sa tolérance à de nombreuses conditions sévères de l environnement et par conséquent elle a été choisie comme matériel végétal pour étudier l action du stress métallique, induit par le Cd, sur la répartition des phytohormones qui sont des messagers chimiques synthétisés par la plante. Dans le cadre de cette approche, une culture d Atriplex Halimus, halophyte autochtone de la Tunisie, a été réalisée dans la serre vitrée de la Faculté des Sciences de Bizerte. Les plantules, issues de bouturage, sont irriguées par la solution nutritive de Long Ashton additionnée du Cd (0, 400 µm) en présence et/ou en absence de NaCl (200 mm). Au terme d un mois de traitement, les teneurs en phytohormones ont été mesurées au niveau des feuilles et des racines. Les analyses ont portés sur l acide abscissique, l acide salicylique, l acide jasmonique et l acide indole acétique. Les résultats obtenus ont permis de dégager les faits suivants: (i) Au niveau des racines, le cadmium augmente les teneurs en acide salicylique et en acide indole acétique et diminue les teneurs en acide jasmonique et en acide abscissique. (ii) Les feuilles d Atriplex Halimus ne présentent pas de variations significatives des teneurs en hormones végétales. Nos résultats suggèrent l implication des phytohormones notamment l acide salicylique et l acide indole acétique dans le déclenchement des réponses physiologiques des racines d Atriplex Halimus au stress métallique induit par le Cd. En effet, l augmentation de l AIA dans les racines est probablement liée à l induction et à la croissance de nouvelles racines qui pourraient contribuer à la tolérance des plantes au stress. D autre part, la diminution de l ABA et de l AJ dans les racines peut être due à la demande en oxygène des enzymes responsables de la biosynthèse de l ABA et de l AJ. Ces phytohormones jouent un rôle de médiateur entre la perception du stress et l induction des réponses physiologiques. 139

140 P.83. Role of salicylic acid in regulating cadmium induced oxidative stress in bean (Phaseolus vulgarus) roots Issam Saidi 1, Yassine Chtourou 2, Marwa Ayouni 1, Amina Dhieb 2, Wided Chaïbi 1, & Wahbi Djebali 1. 1 Unité de Recherche de Biologie et Physiologie Cellulaires Végétales, Faculté des Sciences de Tunis, Campus Universitaire, 1060 Tunis, Tunisie. 2 Laboratoire de Biotechnologie, Faculté des Sciences de Sfax, Route Sokra, B.P. 1171, 3000 Sfax, Tunisie. Dr. Issam Saidi issambenahmed@yahoo.fr, Mob.:(+216 ) , Faculté des Sciences de Tunis, Campus Universitaire, 1060 Tunis, Tunisie. Abstract To investigate the protective role of salicylic acid (SA) on cadmium (Cd) toxicity, Phaseolus vulgaris seedlings pretreated with SA were exposed to 20 µm Cd during 3 days. Cadmium treatment inhibited biomass production, and significantly increased accumulation of Cd in roots. SA pretreatment decreased the uptake of Cd and alleviated Cd-induced inhibition of growth rate. SA application increased APX and CAT activities and lowered that of SOD and POX. These results illustrate the ameliorating effect of SA under Cd stress conditions and reveal the potentiating effect of salicylic acid in regulating cadmium induced oxidative stress in Phaseolus vulgaris roots. Keywords: Cadmium, Salicylic acid, oxidative stress, Phaseolus vulgaris. 1 Introduction Cadmium (Cd) is a toxic trace pollutant for humans, animals and plants which enters to the environment mainly from anthropogenic processes and then is transferred to the food chain. It is easily taken up by roots and transported to other parts of the plant, being toxic to living cells at very low concentrations. To survive against Cd toxicity, the plants have evolved several protective mechanisms. One of them is the response of antioxidant enzymatic system, which involves the sequential and simultaneous action of a number of enzymes such as SOD, CAT, POD, APX which are responsible for scavenging excessively accumulated reactive oxygen species (ROS) in plants under stress conditions. SA applied simultaneously with Cd suppressed the toxic effect of Cd in a concentration dependent manner. Apparently, SA has broad but divergent effects on stress acclimation and damage development of plants. Therefore the present study was undertaken to determine the physiological and biochemical changes in bean plant roots pretreated with SA during Cd-induced stress and to investigate the possible mediatory role of SA in protecting plants from Cd-induced oxidative stress. 2 Methodology 2.1. Plant material and growth conditions Bean seeds were germinated and grown as described by Smeets et al. (2005). After an initial growth period in different SA concentrations plant were treated by addition of CdCl2 on the nutrient solution Determination of Cd concentrations Dry plant material was powdered and wet-digested in acid mixture (HNO3:HClO4, 3:1, v/v) at 100 C. Cd concentrations were estimated by atomic absorption spectrophotometry Determination of antioxidative enzyme activities SOD and CAT activities were determined as described by Aebi [1], guaiacol peroxidase and APX were assayed, respectively, according to Nakano and Asada [2]. 3 Results 3.1. Effect of SA on growth response and Cd accumulation 140

141 APX (U/mg protein) POD (U/mg protein) SOD (U/mg protein) CAT (µmol H2O2 / min/ mg protein) Root fresh weight (gplant -1 ) Cd (mg.g -1 DW) 19, 20, 21 et 22 décembre 2012 Hôtel EL Mouradi Douz - Tunisie In bean plants, the supply of Cd (20 µm) in nutrient solution affects negatively root growth. Fresh weight was reduced by 5O%, in Cd-treated roots compared to the control (Fig. 1A). Pretreatment with 100 µm SA significantly mitigated the growth inhibition by Cd stress (increase by about 35% compared with Cd treatment alone). Results presented in Fig. 1B showed that about µg Cd were detected in roots exposed to 20 µm Cd, while application of 10, 50 and 100 µm SA decreased Cd concentration by about 47%, 44% and 50%, respectively and alleviated subsequently Cd accumulation in the roots. 1,6 1,4 1,2 1 0,8 0,6 0,4 0,2 0 a a a b b AS (µm) 0 µm Cd 20 µm Cd b Fig 1. Effects of SA pretreatment on root fresh weight (A) and Cd concentrations (B) in 14-d old bean plants submitted to CdCl Effects of SA and Cd on antioxidant enzymatic activity SOD activity in roots exposed to Cd was observed to be high significantly when compared with the control (Fig. 3A). Pretreatment of plants with 100 µm SA decreased SOD activity by about 28% upon Cd exposure. In contrast, CAT and APX activity were suppressed after exposure to Cd, their activity was dropped more than 2-fold (Fig.3B, 3C). Pretreatment of plants with 100 µm SA alleviated the inhibitory effect of Cd on APX and CAT activity. POD activity (Fig.3D) was increased by 60% in roots of bean plants treated with Cd compared to control. Pretreatment with SA (50 and 100µM) reduced the activity of POD upon Cd exposure. No significant modification was observed in antioxidant enzyme activities of plants treated with SA only a b a b a bc a c a c a b 3,5 3 2,5 2 1,5 1 0,5 0 a b a b a b SA (mm) a c c d a 0 a10 SA (µm) 50 a100 0 µm Cd a 20 µm Cd b c c b b SA (µm) 0 µm Cd 20 µm Cd Fig 3. Effects of SA on activity of SOD (A), CAT (B), APX (C), and POD (D) in roots of bean seedlings. References [1] Aebi H (1984) Catalase in vitro. Methods Enzymol 105: [2] Nakano Y, Asada K (1981) Hydrogen peroxide is scavenged by ascorbate-specific peroxidase in spinach chloroplasts. Plant Cell Physiol 22: c 0 10 c 50 c 100 SA (µm) b 0 µm Cd 20 µm Cd a a a d d SA (µm) 0 µm Cd 20 µm Cd 141

142 P.84. Influence des matériaux et de la température de distribution de l eau chaude sur la formation de biofilm par Legionella pneumophila Jalila Tai 1,2, Mostafa Mliji 1, Mohamed Nabil Benchekroun 2, Mly Mustapha Ennaji 3, Mariam Mekkour 1,4, Hayat Ennaji 1, Nozha Cohen 1, 1 Division de Microbiologie et d Hygiène des Produits et de l Environnement, Institut Pasteur du Maroc, Casablanca, 20360, Maroc 2 Laboratoire de Biotechnologie, de l Environnement et de la Santé, Faculté des Sciences et Techniques, Université Hassan II-Mohammedia, 146, Maroc 3 Laboratoire de Virologie, Hygiène et Microbiologie, Faculté des Sciences et Techniques Université Hassan II- Mohammedia, 146, Maroc 4 Laboratoire Diversité et Conservation des Systèmes Biologiques, Faculté des Sciences, Université Abdelmalek Essaadi-Tétouan, , Maroc Corresponding Author: Dr Nozha Cohen, Institut Pasteur du Maroc Casablanca, 20360, Maroc nozha.cohen@pasteur.ma Résumé L. pneumophila, l'agent responsable de 90% des cas de légionellose, peut survivre dans une structure appelée biofilm au niveau des réseaux d eau. Le matériau du système de distribution d'eau fait varier la capacité de développement du biofilm et la croissance de L. pneumophila. Notre travail constitue une contribution à la compréhension des mécanismes impliqués dans le processus de la cinétique d adhésion et la formation de biofilm par L. pneumophila sérogroupe aux canalisations d eau chaude à travers une évaluation des matériaux (acier galvanisé, cuivre et polyéthylène) et de la température. L. pneumophila sérogroupe 2-15 révèle une grande capacité à adhérer et à former le biofilm sur l'acier galvanisé et le polyéthylène à 37 et 20 C par rapport L. pneumophila sérogroupe 1. En revanche, l adhérence et la formation de biofilm par les deux sérogroupes sont inhibées à la température de 44 C et le cuivre ne permet pas le développement du biofilm L. pneumophila quelque soit le sérogroupe et la température utilisés. Mots clés : biofilm ; Legionella pneumophila ; légionellose ; matériau ; températures. 1 Introduction Au siècle dernier, les mesures d hygiène et les progrès dans les domaines scientifiques, technologiques et médicaux ont permis à l homme de diminuer de manière spectaculaire le nombre d épidémies meurtrières. Cependant, il a simultanément créé des conditions favorables au développement de nouveaux types d infections. L émergence de Legionella spp. comme problème de santé publique est un exemple d intervention humaine, dont les conséquences néfastes sont aujourd hui reconnues et doivent être maîtrisées [1]. La bactérie L. pneumophila est de loin la plus répandue et l agent le plus fréquemment responsable de la maladie du légionnaire, la forme la plus grave de légionellose [2,3,4]. La colonisation par cette bactérie des réseaux d eau chaude sanitaire a donc fait l objet d une surveillance spécifique du fait de son impact sanitaire. Les objectifs de cette étude sont de déterminer la cinétique et la capacité de deux souches de L. pneumophila sérogroupes Lp 1 et Lp2-15 à adhérer et former un biofilm sur trois surfaces différentes (acier galvanisé, cuivre et polyéthylène) couramment utilisés dans la 142

143 distribution d'eau chaude au Maroc. Cette capacité de formation de biofilm est également mesurée selon les températures de croissance 20, 37 et 44 C. 2 Méthodologie La formation de biofilm de L. pneumophila a été contrôlée en utilisant des microplaques des 96 puits en polystyrene selon trois procédures distinctes : la cinétique de l adherence, test d adhésion et test de croissance de biofilm de L. pneumophila; Les bactéries cultivées sur le milieu BCYEα à 37 C et 2,5% CO2 pendant 3 à 4 jours; Des microplaques à 96 puits ont été inoculés respectivement avec les sérogroupes 1 et 2-15 de L. pneumophila puis incubées à 20, 37 ou 44 C pendant 3, 6, 9, et 12 jours pour chaque temperature selon la procédure décrite par O'Toole et Kolter [5]. L adhésion et la formation du biofilm ont été révélées par la coloration au cristal violet à A 550 nm. Après, le test de croissance de biofilm sur trois matériaux de canalisations (acier galvanisé, cuivre (Cu) et le polyéthylène (PE)) a été étudié à 20, 37 ou 44 C. Finalement, l observation des matériaux a été faite au Microscope Electronique à Balayage Environnemental. 3 Résultats L. pneumophila sérogroupe 2-15 révèle une grande capacité à adhérer et à former le biofilm sur l'acier galvanisé et le polyéthylène par rapport L. pneumophila sérogroupe 1 à 37 et 20 C. En revanche, l adhérence et la formation de biofilm des deux sérogroupes sont inhibées à la température de 44 C. Le cuivre ne permet pas le développement du biofilm L. pneumophila quel que soit le sérogroupe ou la température utilisée. Les résultats montrent que le choix du cuivre comme matériau de distribution et l application d une température supérieure à 44 C dans le circuit d eau chaude sanitaire, empêchent le développement du biofilm associé à L. pneumophila et diminuent le risque de la maladie des légionnaires. Acknowledgements: Nous remercions les personnels du Centre Universitaire Régional de l'interface à ville de Fès Maroc pour leur collaboration à l utilisation du Microscope Electronique à Balayage Environnemental. Références [1] Office fédéral de la santé publique 2009, Legionella et légionellose. Module 1 Introduction. pp [2] Molmeret M, Horn M, Wagner M, Santic M & Abu Kwaik Y. 2005, Amoeba as training grounds for intracellular bacterial pathogens. Applied and Environmental Microbiology. 71, pp [3] Diederen BMW. 2008, Legionella spp. and legionnaires' disease. Journal of Infection. 56 ; pp [4] Joseph CA, Ricketts KD & EWGLI 2010, Legionnaires' disease in Europe Euro Surveillance. 15, pp [5] O Toole G A & Kolter R. 1998, Initiation of biofilm formation in Pseudomonas fluorescens WCS365 proceeds via multiple, convergent signalling pathways: a genetic analysis. Mol. Microbiol. 28, pp

144 P. 85. Immunotoxicity of Zearalenone counteracted by Raphanus sativus extract and Tunisian Montmorillonite composite 1 Jalila Ben Salah-Abbès, Samir Abbès & 1 Ridha Oueslati 1 Unit of Immunology, Environmental Microbiology and Cancerology, Faculty of Sciences of Bizerte, University of Carthage, TUNISIA Abstract The present study focuses on the amelioration of fusarotoxicosis in balb/c mice by feeding Tunisian Montmorillonite (MT) and radish extract (RE). The extract at 15 mg/kg bw and MT 2mg/kgbw, were evaluated to reduce the deleterious effects in immunological parameters of high sub-chronic doses of 40 mg of ZEN/kg bw on modulation of lipopolysaccharide (LPS). ZEN consuming mice showed a dose-related decrease in weight gain and in the immune relative weights organs. Moreover, Atrophy and lymphoid depletion were seen in the histopathology of spleen. Ingestion of ZEN at either level had a significant effect on total red blood cell numbers and on their relative number of lymphocytes. Likewise, ZEN alters the production of regulatory cytokines and antibody of LPS stimulated mice. By contrast, the additions of radish extract and TM in co-treatment with ZEN moderately decreased the affected mice and/or the severity of lesions, and all tested parameters were normal or at least near normal levels. In addition, the radish extract alone did not produce any significant changes in all tested parameters compared with the controls. In conclusion, both RE and TM are safe by themselves and their composite succeeded to exert a potential prevention by counteracting ZEN-immunotoxicity and can be implicated in the biotechnology of ZEN removal in human food and animal feed. Keywords: Radish extract; Tunisian montmorillonite; Immunotoxicity; prevention 1 Introduction Zearalenone (ZEN) is toxic metabolite produced by Fusarium species, widespread contaminants of foods and feeds. Their high toxicity to both animals and humans makes ZEN among the most dangerous known mycotoxins. Raphanus sativus, an endemic species of central of Tunisia, is useful for treating various inflammatory disorders and cancers. The secondary metabolites that mediate the pharmacological effect of this species are mainly flavonoids and isothiocyanates [1]. In our previous study, we demonstrated that Tunisian Montmorillonite (TM) is able to removing AFs from contaminated food and foodstuffs and able to counteract its immunotoxicity [2]. In this study we interested to evaluate the composite of TM+RE in the prevention of ZEN-immunotoxicity. 2 Methodology Plant Material and Preparation of Radish Extract: Freshly harvested roots and aerial parts of radish (Raphanus sativus, Brassicaceae) were crushed, and the juice was purified and characterised. 144

145 Animals and Experimental Design: Six week old, female Balb/c mice were randomly assigned to one of the seven treatments: control group; 40 mg ZEN/kg bw feed group; 15 mg/kg bw of RE; 2 mg/kg bw of TM; 40 mg ZEN/kg bw feed group; 40 mg ZEN/kg bw feed group + 15 mg/kg bw of radish extract and + 2 mg/kg bw of MT. The respective treatments were given by orally route for 28 days. Body weight, organs and Blood Sample Collection: mice from each treatment were selected at random for collect of spleen, thymus, liver and kidney organs for histological study. Blood were aseptically collected from the retro-orbital venous plexus for haematological and biochemical study, and antibodies as well as cytokines measurements. 3 Main Results [14pt Times Bold] The mice treated with ZEN failed to gain weight, caused biochemical and haematological toxicities. Whereas, animals treated with RE or MT alone were comparable to the controls regarding the cited parameters. Treatment with RE+MT in combination with ZEN increased the body weight gain and counteracted the biochemical and haematological toxicities observed in mice compared with mice treated with ZEN alone. Microscopically, in mice in the ZEN-fed group the spleens showed diffuse, moderate-to-marked hydropic degeneration. This degeneration was more pronounced in centrilobular areas. However, the histological study of spleen tissues of mice treated with two tested doses of RE and MT alone, or ZEN plus RE and MT, showed a normal histological picture. An increase in the antibody production and cytokines release was observed in the immunized control mice as well as in the RE and MT + ZEN separately or in co-treated mice. Nevertheless, ingestion of ZEN decreased the immune response; antibody and cytokines levels against LPS. Acknowledgements: The work was supported by Tunisian Ministry of Higher Education and Scientific Research (Unit of Immunology, Environmental Microbiology, and Cancerology). Faculty of Sciences Bizerte. References [14pt Times Bold] [1] Ben Salah-Abbès J, Abbès S, Houas Z, Abdel-Wahhab MA, Oueslati R. Zearalenone induces immunotoxicity in mice: possible protective effects of Radish Extract (Raphanus Sativus). Journal of Pharmacy and Pharmacology. 2008b;60:1-10. [2] Abbès S, Ben Salah-Abbès J, Hetta M M., Ibrahim M, Abdel-Wahhab MA., Bacha H, Oueslati R. Efficacy of Tunisian montmorillonite for in vitro aflatoxin binding and in vivo amelioration of physiological alterations Applied Clay Science 2008;42:

146 P. 86. Investigation de la composition chimique de l huile essentielle et des extraits organiques de Pinus halepensis poussant en Tunisie 1 Jamel Mejri, 1 Nesrine Zakhama, & 1 Safouane Ben Sik Ali 1 Département Génie des Procédés, Institut Supérieur des Etudes Technologiques (ISET) de Bizerte, campus universitaire Menzel Abderrahmen 7035, Bizerte, TUNISIA. Résumé L écorce de Pinus halepensis a été collectée de la région Rimel de Bizerte (zone côtière). L extraction de l huile essentielle a été réalisée par hydrodistillation. D autres extraits ont été également mis en ouvre en utilisant divers solvants organiques. La composition chimique de l huile essentielle ainsi que la teneur en phénols totaux des extraits organiques a été déterminée. ɤ-terpinène constitue le composé majeur de l huile essentielle (29,91%). L extrait méthanolique est le plus riche en phénols totaux (632,25 µg/mg EAG). Mots clés: Pinus halepensis, huile essentielle, phénols totaux, ɤ-terpinène. 1. Introduction Le Pinus halepensis est une espèce rustique caractéristique de l étage bioclimatique méditerranéen semi-aride appartenant à la famille des pinacées. Les grains sont récoltés chaque année soit pour l ensemencement de la forêt, soit pour la pâtisserie traditionnelle telle que «l assida» à base de «zgougou». Les huiles essentielles et les extraits organiques des espèces végétales font l objet de plusieurs recherches en raison de leurs vertus thérapeutiques, pharmaceutiques, cosmétique en parfumerie et en agroalimentaire. L objectif de ce travail consiste en l extraction et la caractérisation des différents extraits de l écorce de Pinus halepensis. 2. Matériels et méthodes La cueillette des échantillons a été réalisée au mois de septembre et d octobre. Les échantillons ont été nettoyés et lavés afin d éliminer les moisissures, ensuite ils ont été séchés à température ambiante et enfin broyé pour faciliter l extraction. Un montage d hydrodistillation a servi pour l extraction de l huile essentielle : 35 g du matériel végétale sont introduit dans un ballon et additionnés de 300 ml d eau distillée. Le mélange est porté à ébullition. La vapeur produite est condensée et séparée par simple décantation. Les extraits organiques ont été conduits en mélangeant 300 g de matériel végétal dans 500 ml de solvant (eau, méthanol, éthanol, acétone et hexane). Les mélanges ont été macérés pendant 48 h à 30 C. Ensuite, on récupère la phase liquide par simple filtration suivie d une centrifugation pendant 5 minutes. Le surnageant est ainsi évaporé à l aide d un évaporateur rotatif pour donner l extrait organique. La composition chimique de l huile essentielle a été réalisée au moyen d un chromatographe en phase gazeuse de type Agilent HP 6840, équipé d une colonne capillaire de type HP- Innowax (30m x 0,25 mm x 0,25 µm) ayant une phase stationnaire en polyéthylène glycol et équipé d un détecteur à ionisation à flamme (FID). 146

147 Le dosage des phénols totaux a été réalisé selon la méthode de Folin Ciocalteux. Les teneurs ont été exprimés en équivalent acide gallique (EAG) par volume d extrait. 3. Résultats L analyse chromatographique de l huile essentielle de Pinus halepensis a permis d identifier 22 composés. Le composé majeur est ɤ-terpinène (29,91%), suivi de nanol (16,32%). La plupart des composés identifiés appartiennent à la famille des monotèrpènes (67%) suivi par les aldéhydes (30%) (Figure 1). La composition chimique de l huile essentielle extraite a été comparée à celles d autres pays, à savoir, l Algérie, le Maroc, l Italie et la Grèce. 0,80% 1,95% 0,25% Monoterpènes 30% Aldéhydes 67% Sesquiterpènes Monoterpènes oxygénés Esters Figure 1 : Classes chimiques des composés de l huile essentielle de l écorce du Pinus halepensis. Les résultats relatifs au dosage des phénols totaux sont représentés dans le Tableau 1. Tableau 1 : Teneur en phénols totaux des différents extraits Extrait EAG (µg/mg) Extrait à l eau 8,08 Extrait au méthanol 532,25 Extrait à l éthanol 56,41 Extrait à l acétone 203,91 Extrait à l hexane 121,41 D après le tableau 1, on constate que l extrait méthanolique est le plus riche en composés phénolique. Ceci est expliqué par la forte polarité du méthanol. Malgré que l eau soit le solvant le plus polaire, sa teneur en phénols étant la plus faible vue l insolubilité de ces derniers dans l eau. 147

148 P.87. Composition phénolique et activités antioxydantes de l espèce Polygonum equisetiforme Jamila Bettaib, Mariem Saada, Mohamed Baaka, Abderrazak Smaoui, Chedly Abdelly et Riadh Ksouri Laboratoire des plantes extrêmophiles, Centre de Biotechnologie à la Technopole de Borj-Cédria (CBBC), BP 901, 2050 Hammam-lif, Tunisie Résumé Polygonum equisetiforme (Polygonaceae) est une halophyte vivace et glabre, très répondue dans le bassin méditerranéen. Dans ce travail, les effets de deux facteurs différents : l effet intrinsèque (la provenance) et l effet extrinsèque (celui du solvant) ont été étudiés. Pour ce faire, cinq provenances de P. equisetiforme ont été collectées dans le même stade biologique (stade floraison). Le pouvoir extractant de trois solvants différents et séparément utilisés a été testé pour les cinq échantillons. Cette étude est basée sur deux paramètres : les polyphénols totaux et l activité anti-radicalaire contre le DPPH.. Les principaux résultats ont montré une variabilité significative dans les teneurs en polyphénols totaux aussi bien que pour les CI 50. La provenance qui pourrait être retenue est celle de la région de Douiret en se basant sur son extrait méthanolique (156,03 mg EAG/g MS et CI 50 = 1 µg/ml). Cette espèce peut constituer alors un des remèdes naturels dans le domaine de la santé et qui serait très important pour avoir des effets secondaires minimes. Mots clés : Polygonum equisetiforme, polyphénols, activité anti-radicalaire, facteur intrinsèque, facteur extrinsèque. 1 Introduction Les raisons de la dégradation et de la perte de biodiversité sont en mutation. Aujourd'hui, les principaux problèmes rencontrés par la faune et la flore se résument dans la destruction des habitats. De nos jours, 43 espèces végétales et plusieurs habitats (oueds, steppes, ) sont considérés menacés d extinction et Polygonum equisetiforme en fait partie [1]. Le genre Polygonum a été utilisé pour nourrir les humains et les animaux dans différentes régions dans le monde [2]. L objectif de cette étude est de déterminer la provenance la plus prometteuse et le solvant ayant le pouvoir extractant le plus important sur la base de deux variables: la provenance et le solvant. 2 Méthodologie Cinq provenances de P. equisetiforme : Borj Cédria (nord de la Tunisie), Dhouibet et Oued zéroud (centre de la Tunisie), Akarit et Douiret (sud de la Tunisie) ont été collectées pour subir des macérations séparées dans 3 solvants différents : (a) éthanol (EtOH) à 80 %, (b) méthanol (MeOH) à 80 % et (c) le mélange méthanol (MeOH)/acétone (Me2CO)/H2O (7/7/3 v/v/v) contenant 0,2% v/v d acide acétique (AcOH). Les teneurs en polyphénols totaux (mg EAG/g MS) ont été déterminées et l activité anti-radicalaire contre le DPPH. a été mesurée en terme de CI 50 (µg/ml). 148

149 3 Principaux Résultats Tableau 1: Teneurs en polyphénols totaux (PPT en mg EAG/g MS) et activité anti-dpph. (CI 50 en µg/ml) de P.equisetiforme Borj Cédria Dhouibet Oued Zéroud Akarit Douiret PPT CI 50 PPT CI 50 PPT CI 50 PPT CI 50 PPT CI 50 (a) 36,77 4,2 54, , , ,84 2 (b) 90, , , , ,03 1 (c) 94,4 8 58, ,3 2,8 13, ,8 2 Le tableau 1 montre les teneurs en Teneurs en polyphénols totaux (PPT en mg EAG/g MS) et l activité anti-dpph. (CI 50 en µg/ml) de P.equisetiforme. Les résultats ont montré une variabilité significative régie à la fois par la provenance et le solvant. En effet, les teneurs en polyphénols totaux varient entre 13,33 et 156,03 mg EAG/g MS (Douiret). Outre, les CI 50 sont comprises entre 1 µg/ml (Akarit et Douiret) et 8 µg/ml (Borj Cédria). Les cinq provenances ont exhibé des teneurs en polyphénols totaux et des CI 50 différentes selon le solvant utilisé. Pour la provenance Douiret, le taux des polyphénols a atteint un optimum de l ordre de 156,03 mg EAG/g MS en présence du MeOH à 80 %. Les CI 50 les plus intéressantes ont été obtenues dans les provenances Akarit et Douiret notamment en utilisant le MeOH à 80 %. L effet de la provenance peut être du à la contrainte imposée par l aridité de leur climat. La polarité du MeOH pourra expliquer son pouvoir extractant et ainsi les teneurs obtenues en polyphénols. A la lumière de ces résultats la provenance qui peut être retenue est celle de la région de Douiret. De point de vue biotechnologique, l optimisation de l extraction des composés phénoliques à partir de cette espèce peut se baser sur le solvant méthanol à 80 %. Compte tenus de ces résultats préliminaires, il serait intéressant d approfondir ces travaux en étudiant d autres activités antioxydantes, anti-radicalaires et biologiques. De même l identification des composés phénoliques de l extrait retenu par la technique LC/MS sera indispensable en vue de développer le domaine de thérapies basées sur les produits naturels. Références [1] A. Ferchichi, Rangelands biodiversity in presaharian Tunisia, CIHEAM-Options méditerranéennes, Institut des Régions Arides 4119, Médenine, Tunisia : [2] Laila M.M. Bidak, Mohamed S. Abd El-Razik and EmanT.El-Kenany, Phenotypic plasticity among ecological poulations of Polygonum equisetiforme Sm. in the northren geographical areas, Egypt). International Journal of Botany 3 (2) (2007):

150 P.89. Malformations morphologiques du pied chez la praire Venus verrucosa prélevée au nord de la Tunisie Jihen Maâtoug Béjaoui, Tahani Ayari, Ferdaous Jaafar Kefi et Najoua Trigui El Menif Faculté des Sciences de Bizerte, Laboratoire de Biosurveillance de l Environnement, Bizerte, Tunisie. jihen.maatoug@yahoo.com, elmunif2004@yahoo.fr Résumé La praire Venus verrucosa est un bivalve d intérêt économique important, présent en abondance dans certains sites du littoral tunisien, l exploitation de ce vénéridé est occasionnelle selon les demandes. Des prélèvements mensuels ont été effectués de juillet 2008 à juillet 2009, de l ordre de 100 à 150 spécimens par mois de différentes classes de taille par plongée dans une station située dans le canal de Bizerte séparant la lagune et la mer méditerranée à une profondeur de 11m. Les échantillons ont servi à l étude de la biologie chez ce bivalve, mais lors de l examen de la partie molle, on a pu détecter des malformations touchant la morphologie du pied à différents endroits. Ce constat nous a incités, d une part, à suivre dans le temps et dans l espace l évolution du taux de spécimens touchés par cette malformation afin de les classer selon l intensité de l anomalie. Le pied des bivalves endogés est un organe essentiel servant à l enfouissement de l animal dans le sédiment. La malformation consiste, d une part, en la différenciation d une gouttière évoluant dans le sens antéro-postérieur ou bien dans le sens perpendiculaire et d autre part, en la fissuration du pied dans le sens antéro-postérieur donnant, à un stade avancé et chez certaines espèces, soit deux pieds séparés ventralement ou bien séparés complètement. Le bivalve se trouve ainsi avec un autre pied surnuméraire. Par ailleurs, un autre type de malformation consiste en une bifurcation qui se manifeste soit au bout antérieur ou postérieur du pied. Le taux de cette anomalie étant élevé de l ordre de 11,34%. Le suivi spatio-temporel de cette malformation et les paramètres abiotiques durant tout un cycle biologique ainsi qu une étude génétique sont en cours de réalisation, études qui nous permet de mettre en évidence les causes de cette anomalie morphologique. Mots clés : Bivalves, Venus verrucosa, Malformation, Pied, Canal de Bizerte. 150

151 P.90. Evaluation des teneurs métalliques et minérales dans des sols amendés par les boues résiduaires chez végétaux Zekri j, Lehout A, Souilah N. Faculté des sciences de la nature et de la vie- El Hadj Lakhder Batna, Algérie. Résumé Le présent travail a pour but d étudier les possibilités d améliorer le choix des substrats de culture à base de boues en vue de rendre meilleure la nutrition en éléments minéraux et oligoéléments des plants afin d évaluer le taux de contamination par les métaux lourds (plomb, cuivre, ). Les paramètres biochimiques ont été effectués sur quatre substrats selon la concentration de la boue, de 0% jusqu'à 65%. Les teneurs élevées en métaux lourds induisent une grande pollution de sol qui pourrait servir de bioindicateur de la toxicité, témoignant de la sensibilité de l espèce. Les résultats obtenus révèlent des teneurs en NPK plus au moins élevées au niveau des quatre substrats, mais qui ne présentent pas des effets néfastes sur le développement selon la norme. Les semis du chêne liège en substrats à base de boues à savoir les substrats S1 et S2 (<25% de boues) présentent des teneurs en métaux lourds conformes à la norme Osol, donc on peut recommander ces substrats, par contre les substrats S3 (45% de boues) et S4 (65% de boues) présentent des teneurs élevées surtout en plomb et en cuivre affectant ainsi les paramètres de croissance. On peut donc dire que ces derniers sont des substrats défavorables à la croissance et que l espèce est sensible vis-à-vis des concentrations élevées en boues. Enfin les boues résiduaires présentent des qualités et des caractéristiques idéales pour une valorisation en milieu forestier mais qui nécessite une bonne étude pour le devenir de ces métaux lourds dans les tissus des végétaux et dans l écosystème. Mots clés : toxicité métallique, substrats de culture, Chêne liège, boues résiduaires,. 151

152 P.91. Extraction and characterization of chitin and chitosan from Tunisian marine sources Sawssen Hajji, Islem Younes, Olfa Ghorbel, Moncef Nasri & Kemel Jellouli Laboratory of Enzyme Engineering and Microbiology, National School of Engineering of Sfax; University of Sfax, BP 1171 Sfax 3000, TUNISIA. Abstract Chitin, in the and the forms, has been extracted from different local sources in Tunisia: -chitin from shrimp and crab shells and -chitin from cuttlefish pens. The contents of the various exoskeletons have been analyzed and the percent of the inorganic salt (including the various elements present), protein and the chitin was determined. The extraction of chitin was conducted by chemical demineralization. The demineralized shells were then deproteinized with Bacillus mojavensis A21 crude protease to obtain chitin which was converted to chitosan by deacetylation. Chitosan s physicochemical characteristics were found to be highly influenced by chitin s source. The FTIR spectra showed that -chitin have a higher degree of acetylation than -chitin. XRD analysis showed that chitosan has lower crystallinity than its corresponding chitin. Antibacterial activity investigation of different chitosans, dissolved at 50 mg/ml, showed their efficiency to inhibit the growth of most Gramnegative and Gram-positive bacteria tested. Keywords: Chitin, chitosan, enzymatic deproteinization, antibacterial activity, FTIR 1 Introduction Chitin is the second most abundant polysaccharide in biomass after cellulose. This polymer consists of a linear chain of linked 2-acetoamido-2-deoxy- -D-glucopyranose units. It can be found in the arthropods exoskeleton, fungus walls, and in some algae [1]. Chitin can be extracted by chemical, enzymatic or microbiological methods [2, 3]. The most common chitin derivative is the chitosan obtained by deacetylation. These polymers have antimicrobial activity, besides being biocompatible and biodegradable. The positive charge of chitosan confers to this polymer numerous and unique physiological and biological properties with great potential in a wide range of industries such as cosmetology, biotechnology, pharmacology, medicine and agriculture [4]. The aim of this work was to extract chitins from different sources (shrimp, crab shells and cuttlefish pens) using the same protocol then to compare its physicochemical characteristics using a Fourrier transform infrared spectroscopy (FTIR) and X-Ray diffraction (XRD) analysis. Degrees of acetylation and crystallinity of each chitosan were then examined. The antibacterial activities of derivates chitosans were also investigated. 2 Methodology Preparation of raw material Shrimp shells (Penaeus kerathurus), crab shells (Carcinus mediterraneus) and cuttlefish pens (Sepia officinalis) were obtained in fresh conditions without any treatment coming from Tunisian seaside. Raw material was washed thoroughly with tap water, desiccated at room temperature and was milling (sieved from 2 to 5 mm). When dry, it was kept at room temperature as long as wanted. Extraction of chitins and chitosans The demineralization was carried out at 25 C using 0.55 M hydrochloric acid baths. The demineralized shells were then deproteinized with Bacillus mojavensis A21 crude protease with different E/S ratio with the optimum of conditions: ph 9.0, 50 C during 3h. Deproteinization was expressed as percentage and computed by the following equation cited by Rao et al., (2000) [5]. Chitosan samples were prepared using NaOH (15 g/l) in 1:10 (w/v) chitin ratio at 140 C for 4 h. Physicochemical characterization of chitins and chitosans Chitin and chitosan structural analysis was carried out by FTIR under dry air at room temperature and KBr pellets. Degree of acetylation (DA) of chitins and chitosans were determined by the method of Moore and Roberts (1978) [6] using Infrared spectroscopy. 152

153 The relative crystallinity of the polymers was calculated by dividing the area of the crystalline peaks by the total area under the curve using XRD spectroscopy [7]. Antimicrobial activity of chitosan Antibacterial activity assays were performed according to the method described by Berghe and Vlietinck (1991) [8] against four Gram-positive and three Gram-negative bacteria. Chitosans were dissolved at 50 mg/ml in 0.1% acetic acid (ph 4.68). 3 Main Results To extract the chitin from various studied raw materials, we were inspired by the process of Tolaimate et al., (2003) [9] with slight modifications. The experimental conditions of demineralization step of shells waste is affected by reduction of the time of each acidic bath from 1 h to 15 min for each bath. The crude enzyme of B. mojavensis A21 was used for the deproteinization. Different E/S ratios, from 0 to 10 U/mg protein, were used to compare the deproteinization efficiency. The percentage of protein removal increased with increasing E/S ratio and reached about 89%, 95% and 70% with an E/S ratio of 10 U/mg for the shells of shrimp, crab and cuttlefish pens, respectively. No significant increase in the deproteinization rate was observed beyond a ratio of 10. Chitins extracted in this work present content of minerals at around of 1%. FTIR spectroscopy was performed and showed the purity of the chitin and chitosan samples. The DA depends on the raw materials and the method of preparation. Acetylated chitin with a rate of 70 88% and low protein content is considered as a good final product, the best one being that with the higher degree of acetylation (Tab.1). The XRD profile of the -chitin exhibits well-resolved and intense peaks, while a broad diffuse scattering and less intense peaks are found for the -chitin at 9.36 and This indicates that - chitins extracted from shrimp and crab shells are more crystalline polymorph than -chitin from cuttlefish pens because of their antiparallel compact structure. Table 1: Influence of source on the characteristics of chitins and chitosans Sample Shrimp Crab Cuttlefish Degree of acetylation Chitin (%) Chitosan Crystallinity (%) Chitin Chitosan The low degree of acetylation of chitosans from shrimp and crab shells (25%) showed the efficacity of the used method. Chitosans showed higher antibacterial activities than the commercial reference. This inhibition is more important against Gram-negative than Gram-positive bacteria. Acknowledgements: This work was funded by the Ministry of Higher Education and Scientific Research-Tunisia. References [1] Muzzarelli R. A. A., 1977, Chitin. New York, Pergamon Press. [2] Younes I., Ghorbel-Belaaj O., Nasri R., Chaabouni M., Rinaudo M. & Nasri M., 2012, Chitin and chitosan preparation from shrimp shells using optimized enzymatic deproteinization, Process biochemistry (In press). [3] Ghorbel-Bellaaj O., Younes I., Maalej H., Hajji S. & Nasri M., 2012, Chitin extraction from shrimp shell waste using Bacillus bacteria, Intern. J. of Bio Macromol. (In press). [4] Ngo D., Lee S., Kim M. & Kim S., 2009, Production of chitin oligosaccharides with different molecular weights and their antioxidant effect in RAW cells, J. Funct. Foods. 1, pp [5] Rao MS., Munoz J. & Stevens WF., 2000, Critical factors in chitin production by fermentation of shrimp biowaste, Appl. Microbiol. Biotechnol. 54, pp [6] Moore G.K. & Roberts G.A.F. (eds) in Muzzarelli R.A.A. & Pariser E.R., 1978, Proceedings of the first International Conference on chitin/chitosan. MIT Sea Grant Report, 78-7, pp 421. [7] Focher B., Naggi A., Torri, G., Terbojevich M. & Cosan A. Carbohydr. Polym. 18, pp. 43. [8] Berghe DVA. & Vlietinck AJ., 1991, Screening methods for antibacterial and antiviral agents from higher plants. In: Dey PM, Harborne JB, editors. Methods in plant biochemistry. London: Academic Press, pp [9] Tolaimate A., Desbrieres J., Rhazi M. & Alagui A., 2003, Contribution to the preparation of chitinsand chitosans with controlled physico-chemical properties, J. Polym. 44, pp

154 P.92. Bio-surveillance de la pollution atmosphérique de la ville de Sidi Bel Abbés (Nord Ouest Algérien) par le biais des bio-indicateurs lichéniques. 1 Bouterfas Karim, 1 Zoheir Mehdadi, 2 Bachir Bouidjra Sallah Edine & 1 Benchiha Walid 1 Laboratoire de biodiversité végétale : conservation et valorisation, Faculté des sciences, Université Djillali Liabès, Sidi Bel Abbés 22000, ALGÉRIE. Courriels : bouterfas_karim@yahoo.fr 2 Laboratoire d'écodéveloppement des espaces, Université Djillali Liabès, BP 89, Haï Larbi Ben M'Hidi, Sidi Bel Abbés 22000, ALGÉRIE. Résumé Notre étude consiste à évaluer la qualité de l air de la ville de Sidi Bel Abbés par le biais des bioindicateurs lichéniques. Cinq espèces de lichens indicatrices de la pollution de l air (Xanthoria polycarpa, Xanthoria parientina, Parmelia soredians, Parmelia caperata et Evernia prunastri) sont recensées ce qui conclu l importante diversité lichénique qu abrite notre site d étude. Le calcul des indices de pollution a permis de comptabilisé un indice moyen de 25,96, ce dernier place notre zone d étude dans une classe de pollution «moyenne». Keywords: Pollution atmosphérique, Lichens, Bioindicateurs, Sidi Bel Abbés 1 Introduction L évaluation de la qualité de l air à l aide des appareils de mesure tels que les analyseurs conventionnels et les spectromètres, dont leur coût très élevé, ne permettra jamais de couvrir l'ensemble du territoire. À cet effet, l'utilisation d'organismes vivants comme les bioindicateurs lichéniques, doit être un outil à privilégier. Dans le présent travail, nous nous sommes intéréssés d une part à identfier la flore lichénique et d autre part à l évaluation de la qualité de l air. 2 Méthodologie La méthode utilisée dans le présent travail est celle de Kirschbaum et Wirth [1] dite la méthode des Ingénieurs Ecologues Allemands. Cette méthode a été utilisée dans la cartographie dans différentes villes en Europe et principalement en Allemagne et en France. Nous pouvons citer les travaux réalisés par l association Française de lichénologie «Arnica Montana» pour cartographier la ville de Briançon [2] et dans les agglomérations de GAP [3]. Les relevés lichéniques sont fait en utilisant une grille de comptage (50 cm x 20 cm) fabriqué par un ruban mètre (Fig. 1). Fig.1 Grille de comptage 154

155 3 Résultats Les indices de la qualité de l air (Tab. I) varient entre 17,99 (faculté des sciences) et 38,99 (lac de sidi Mohamed Benali) donnant à notre zone d étude un indice moyen de 25,96. Cet indice est reporté sur l échelle de l évaluation des classes de la qualité de l air donnant à notre zone d étude une classe «moyenne» de pollution. Finalement, l utilisation de la cartographie à permis d une part d avoir une carte de diversité lichénique (Fig. 2), et d autre part d avoir une idée globale sur la pollution atmosphérique (Fig. 3) au sein de notre zone d étude. Les indices de la qualité de l air prennent un sens centripète (du centre de la ville vers la périphérie. Tableau 1 : Indices de pollution des dix stations choisies Stations Indices locaux Station 1: faculté des sciences 17,99 Station 2: jardin public 25,7 Station 3: l ITMA 26,27 Station 4: route de Boukhanifis 26,27 Station 5: la zone industrielle 12,28 Station 6: village Américain 28,57 Station 7: route d Oran 30 Station 8: lac de sidi Mohamed Benali 38,99 Station 9: haï Béni Amer 26,71 Station 10: parc d attraction 27,42 Indice moyen 25,96 Figure 2 Carte de diversité lichénique Figure 3 Cartographie des indices de la qualité de l air Références [1] Hawksworth, F. Rose F., 1990, "Qualitative scale for estimating sulphur dioxide air pollution in England and Wales using lichens", Nature, Vol. 227, pp [2] Nimis P.L., Castello M., Perotti M. 1990, "Lichens as biomonitors of sulphur dioxide pollution in La Spezia (Northern Italy)", Lichenologist, Vol. 22, pp [3] Van Herk C.M., Aptroot A., Van Dobben H.F., 2002, "Long-term monitoring in the Netherlands suggests that lichens respond to global warming", Lichenologist, Vol. 32, p

156 P.93. Effects assessment of Rimon only, and combined with calcium on aquatic eukaryotic model 1 Khadija Bazouzi, & 1 Rachid Rouabhi 1 Nature and life sciences Department, University of Tébessa, 12000, ALGERIA. Corresponding author: BAZOUZI, Khadija, University of Tébessa. ALGERIA. b.k20091@yahoo.fr Abstract This study has a purpose to evaluate the harmfulness of Rimon, a bio rational insecticide integrated in the PMI (Integrated Pest Management) towards a unicellular cilia Paramecium sp. We infer that Rimon has inhibitor effect on the kinetic growth of Paramecia, with perforated cell walls, he slows down the speed of moving of paramecia cells with irregular path of swimming, moreover a lack of Glutathione supply was detected in cells treated only with Rimon insecticide. In the other side this paper looks for the consecutive effects of adding calcium to Rimon during the exposure of Paramecium sp., where we find that calcium reduce the inhibitor effect of Rimon on kinetic growth, with preserving cell walls, and a high moving speed but in the reversal path of swimming explained by exocytosis mechanism. Keywords: Rimon, Calcium, Paramecium sp., cytoxicity, exocytosis 1 Introduction Rimon belongs to the chitin synthesis inhibitors (CSIs), which inhibit the formation of chitin in larval stages of multiple insects [1], in this paper we evaluated the effects of Rimon on Paramecium sp. protozoa cells used as bioindicators of chemical pollution, especially in aqueous environment [2]. We tested also variations noticed in Paramecia behavior, biochemical and physiological parameters, during adding calcium to the Rimon treatment. 2 Methodology 2-1-Mesure of growth kinetic We estimated the optical density on 600 nm wave length on aliquots of 2,5 ml of culture, and we used distilled water as a blank. 2-2-Coloration with neutral red technic The effects of Rimon and calcium on the integrity of the membrane in Paramecia, were estimated by the method of Fournier, 1993 [3], modified for protozoa by Rouabhi et al. (2006) [4], by calculating the time of coloration of the first digestive vacuole, after 3 minutes we take photos for control and treated cells. 2-3-Speed of moving With the use of graduate ocular we estimated the speed with which the cellule can cross a number of the ocular graduations (distance), the chronometer allow us to calculate the run of time when moving, the measure of the speed is done on magnifying power ( 100). 2-4-Glutathione rate We performed the measuring of glutathione in accordance of the protocol of (Weckbecker and cory, 1988) [5]. 156

157 Coloration time (minutes) Speed (mm/s) 19, 20, 21 et 22 décembre 2012 Hôtel EL Mouradi Douz - Tunisie 3 Main Results a Fig. 1 Effects of Rimon only and combined With calcium on Paramecia growth 20 Effects of Rimon only and combined with calcium on the moving speed of Paramecia b time (days) Control Rimon 20µg/ml Rimon/Calcium 20µg/ml Fig. 2 Effects of Rimon only and combined With calcium on Paramecia moving Speed 4,5 4 3,5 3 2,5 2 1,5 1 0,5 0 Coloration time by neutral red technic Control Rimon 20µg/ml Rimon/Calcium 20µg/ml 5th day 7th day 9th day 11th day Fig 4. Paramecia cells appearance treated by neutral red under. 4. photonic microscope ( 100) a : Control, b : Rimon c : Rimon/Calcium c Fig. 3 Coloration by neutral red technic time variation References [1] Tomlin C.D.S., 1997, Novaluron, Ed Bristish crop protection council, pp : [2] Miyoshi, N., Kawano, T., Tanaka, M., Kadono, T., Kosaka, T., Kunimoto, M., Takahashi, T., Hosoya, H., 2003, Use of paramecium species in bioassays for environmental risk management: determination of IC50 values for water pollutants, J. Health Sci. 49: [3] Fournier E., 1993, Toxicologie, Ed. Ellipses, pp: [4] Rouabhi R., Berrebbah H., Djebar M.R., 2006, Toxicity evaluation of fucycloxuron and diflubenzuron on the cellular model Paramecium sp, African Journal of Biotechnology. 5(1): [5] Weckbecker G., and Cory J., 1988, Ribonucleotide reductase activity and growth of glutathione-depleted mouse leukemia L1210 cells in vitro, Cancer letters, 44:

158 P.94. INVENTAIRE ET ANALYSE ECOLOGIQUE DES MOLLUSQUES DE LA ZONE INTERTIDALE DE LA COTE OUEST ALGERIENNE MEZIANE KHADIDJA 1, ALLAILI HADJER 1, KERFOUF AHMED 1 khadidja.ecolo@yahoo.fr nahla22000@hotmail.fr kerfoufahmed@yahoo.fr 1 Laboratoire d éco développement des espaces, Département des sciences de l environnement, Faculté des sciences, Université Djillali Liabès, BP 89, Sidi Bel Abbès, 22000, Algérie. Résumé La biocénose de la zone intertidale, là où la terre et la mer s interpénètrent, est d une surprenante diversité, malgré qu elle vit dans l un des milieux les plus hostiles et subit des bouleversements constants, contrairement aux hôtes des profondeurs, mais, en compensation, elle trouve en abondance les éléments nécessaires à la vie : la lumière, l eau, l oxygène et les sels minéraux. Le phylum des mollusques est considéré comme l un des plus vastes parmi les groupes des invertébrés. Il est très mal connu de façon générale en Méditerranée sud, notamment en Algérie, et plus particulièrement sur la côte ouest algérienne, et ignorés dans les études de milieux malgré certaines adaptabilités spectaculaires remarquées en interaction avec leur environnement tant physique que biologique. Dans le présent travail on a inventorié les mollusques de la zone de balancement des marées et apporté des remarques écologiques sur ce phylum et l écosystème dont il fait partie. Mots clé : Intertidale, diversité, mollusques, côte ouest algérienne, écosystème. 1 Introduction Le présent travail représente une contribution à la connaissance de la malacofaune des côtes ouest algériennes, il a ainsi comme objectif de favoriser l intégration des mollusques marins en tant qu outils dans les différentes études environnementales fondamentales ou appliquées, vu que les mollusques marins sont généralement considérés comme de bons indicateurs pour la surveillance biologique du littoral (Viarengo et Canesi, 1991) [1]. L inventaire et l analyse écologique des espèces critiques seront nécessaires pour que les efforts de conservation soient soigneusement focalisés et les ressources disponibles limitées soient distribuées réellement et d une manière efficace. 2 Materiel et méthodes 16 stations ont étés choisies au hasard sur la zone rocheuses de la côte ouest algérienne. Nous avons adopté pour cette étude un échantillonnage aléatoire simple, apparemment aisés est assez souvent utilisé (Mariani & Ravera 1977 [2], Bishop 1981 [3], Savage & Gazey 1987 [4], Millar & Waite 1999 [5], Watson & Ormerod 2004 [6]) Un échantillonnage additionnel du couvert végétal a, également, été effectué en quelques points afin d affiner l inventaire en relation avec le milieu de vie. Chaque mollusque et végétale a été identifiée par observation directe et sous loupe binoculaire. La systématique a été établie en se basant sur les travaux de Norsieck, (1982) [7], et de Fisher et al. (1987) [8]. Les publications suivantes ont été utilisés pour la détermination des différentes espèces collectées : Bucquoy., et al 1887 [9], Perrier, 1936 [10] et Riedl, 1991 [11] Fig.1 Carte de stations échantillonnées 158

159 3 Résultats et discussions 19, 20, 21 et 22 décembre 2012 Hôtel EL Mouradi Douz - Tunisie Ce travail nous a permis répertorier 14 gastéropodes, 7 bivalves et 1 polyplacophore, soit au total 22 espèces de mollusques repartis inégalement sur les 16 stations choisies. Les espèces de mollusques récoltées se repartissent en 10 familles : Trochidé (04 espèces), turbinidés (01 espèce), patellidés (04 espèces), muricidés (01espèce), buccinidés (04 espèces), mytilidés(03 espèces), péctinidés (02 espèces), arcidés (01 espèce), calliostomatidés (01 espèce) et chitonidés (01 espèce) Parmi les espèces récoltées, les gastéropodes figurent en première position (63.63%), suivis par les lamellibranches (31.81%), puis les polyplacophores (4.54%). La figure 2 exprime cette richesse spécifique,.tant dis que le nombre des espèces malacologiques est représenté dans la figure 3.. Fig.2 : Richesse spécifique des classes de mollusques récoltés Fig.3 Nombre d espèces malacologiques dans les 16 stations. 3 algues vertes, 6 algues rouges et 3 algues brunes, soit un total de 12 espèces végétales sont associées à la malacocénose récoltée. 4 Conclusion La côte ouest algérienne est riche en faune malacologique, qui se repartit inégalement sur les 16 stations prospectées. Lors de cette étude, on a récolté 22 espèces de mollusques qui se repartissent en 3 classes : Gastéropodes, lamellibranches et polyplacophores, et 10 familles. Les zones non, ou peu, perturbées abritent une faune malacologique d une surprenante variété, citons ainsi la station 8, qui peut être prise comme un site témoin vu qu elle est éloigné des perturbations et les actions anthropiques. Malheureusement il parait que cette richesse malacologiques est soumise à des pressions multiples qu on peut résumer dans la perte et transformation d'habitats et la modification du fonctionnement hydrologique et/ou de la qualité des eaux (pollution par les rejets urbains, ménagers et industriels). References [1] Viarengo, A., Canesi, L., Mussels as biological indicators of pollution. Aquaculture. Vol. 94 : [2] Mariani, M. & Ravera, O Quantitative and qualitative difference among mollusc population of two bassins (Agno and Lugano) of lake lugano, northern Italy, Mallacologi, 16 (1): [3] Bishop, M. J Quantitative studies on some living british wetland mollusk faunas Biological Journal Of the Linnean Society, 15: [4] Savage, A.A. & Gazey, G. M Realationship of physical and chimical conditions to species diversity and density of gastropods in English lakes. Biological conservation, 42: [5] Millar, A.G. & Waite, S Molluscs in coppice woodland. Journal of conchology, 36 (5): [6] Watson, A. L. & Ormerod, S. J The distribution of three uncommon fresh water gastropods in the drainage ditches of british grazing maeshes. Biological conservation 118: [7] Norsieck F., Die europäischen Meers-Gehäuseschnecken (Prosobranchia). Gustav Fischer Verlag Stuttgart. New York : 539 p. [8] Fischer W., M.L. Bauchot et Schneider M. (rédacteurs), Fiches FAO d'identification des espèces pour les besoins de la pêche. (Révision 1) Méditerranée et mer Noire. Zone de pêche 37. I, végétaux et invertébrés. FAO, Rome : 760 p. 159

160 P.95. Hepatotoxicité et stress oxydatif chez les rats induits par la toxicité des organes de la saupe 1 Khaled Bellassoud, 2 Jos Van Pet, & 1 Abdelfattah Elfeki 1 Life Sciences Department, Science Faculty of Sfax, University of Sfax, BP 1171 Sfax 3000, TUNISIA. 2 Laboratoire Hépatologie, Université Catholique, Louvain, Belgique Corresponding Author: Dr Khaled Bellassoued, Adresse Université de sfax khaledbra3@gmail.com Abstract Notre étude a été réalisée pour évaluer le risque d intoxication due à la consommation de Sarpa salpa. Des rats de souche wistar ont été injectés par voie intrapéritonéale, pendant 7 jours, avec des extraits de chair, de cerveau, de foie et des viscères de Sarpa salpa. Les rats témoins ont reçu des injections de NaCl (0,9%). Aucune mortalité et aucun signe évident de diarrhée ont été enregistrés chez les rats traités. (1) Une diminution significative du poids corporel et de foie des rats traités par les extraits des organes de la saupe (2) Aucune variation significative du taux des diènes conjugués chez le quatre groupe des rats traités par les extraits de chair, de cerveau, de foie et des viscères, le stress oxydatif a été mis en évidence par une augmentation de la peroxydation lipidique (TBARS) dans les groupes traités par les extraits de foie et des viscères et aucune augmentation significative dans les groupes des rats traité par les extraits de chair et de cerveau. (3) les taux plasmatiques en (ALT) et (ALP) ont été trouvés inhibés dans les groupes des animaux traités par les extraits de foie et des viscères par rapport à ceux des animaux témoins. Keywords: Sarpa salpa; statut antioxydant; rats ; hepatotoxicité 1 Introduction Les micro-algues sont préférentiellement consommées par des organismes filtreurs et les poissons phytophages. Certaines d entre elles sont capables de synthétiser des métabolites secondaires toxiques qui sont alors libérés et accumulés chez le consommateur primaire. Ce consommateur primaire va lui-même servir de proie à un consommateur secondaire et ainsi de suite, permettant aux métabolites de s accumuler dans les différents maillons de la chaîne alimentaire [1]. Du fait que les effets toxiques de la consommation de la saupe sont plus importants en automne, en relation avec le régime alimentaire de ce poisson et de la présence de phytoplanctons toxiques [2], ceci nous a insisté à explorer l hypothèse de la présence des biotoxines marines au niveau des organes de la saupe. Nous avons administré les extraits de chair, de cerveau, de foie et des viscères de Sarpa salpa chez les rats par injection intrapéritonéale en vue d une étude physiopathologique. 2 Methodology Des rats de souche wistar ont été injectés par voie intrapéritonéale, pendant 7 jours, avec des extraits de chair, de cerveau, de foie et des viscères de Sarpa salpa. Les rats témoins ont reçu des injections de Na Cl (0,9%). Dosage des protéines hépatiques selon [3] Dosage des diènes conjugués au niveau hépatique selon Kurien et Scifield [4]. La mesure du niveau de la péroxydation lipidique (TBARS) au niveau hépatique a été évaluée par la mesure des substances réagissant avec l acide thiobarbiturique (TBARS) comprenant des aldéhydes (dont le MDA) et les lipides hydroperoxydés selon [5]. Les activités de l alanine aminotransférase plasmatique (ALT) et phosphatase alcaline (ALP), ont été déterminés en utilisant des kits enzymatiques (ALT/TGP A03020 et AP A03000, France). 160

161 3 Main Results 1. Croissance générale Après 7 jours de traitement, le poids corporel des rats et de foie des animaux traités par les extraits de foie et des viscères de Sarpa salpa ont montré une diminution significative par rapport aux animaux témoins (tableau.1).inversement, dans les groupes des animaux traités par les extraits de chair et de cerveau de Sarpa salpa, aucune variation significative (P>0,05) du poids des organes n a été observée, seulement le poids total a été réduit par rapport au groupe témoin. Tableau 1: Effet des extraits de tissus de chair, de cerveau, de foie, et de viscères de Sarpa salpa (0,3 ml/100g, v/p) sur le poids corporel aussi sur les poids de foie des animaux après 7 jours de traitements. Paramètres Témoins ECH ECR EF EVI Poids corporel(g) ± ±3.06* ±1.88* ±6.95* ±6.39*/# Poids de foie (g) 8.68± ± ± ±0.54* 5.70±0.36*/# 2. Les activités de l alanine aminotransférase (ALT) et la phosphatase alcaline (ALP) au niveau sanguin Dans nos conditions expérimentales, les taux plasmatiques en (ALT) et (ALP) ont été trouvés inhibés dans les groupes des animaux traités (P<0,05) par les extraits de foie et des viscères par rapport à ceux des animaux témoins. Inversement, les animaux traités par les extraits de chair et de cerveau ont montré une augmentation significative (P<0,05) par rapport aux animaux témoins. 3. Le statut oxydant au niveau hépatique des rats injectés par les extraits d organes de la saupe 3.1. Variation du taux des diènes conjugués Les résultats n ont montré aucune variation significative (P>0,05) en comparaison avec le groupe témoin (Figure.1) au niveau du foie chez les quatre groupes des rats traités par les extraits de chair, de cerveau, de foie et des viscères de la saupe Variation du taux des TBARS Le taux de TBARS a significativement augmenté (P<0,05) au niveau du foie chez les deux groupes des rats traités par l extrait de foie et des viscères de la saupe Sarpa salpa collecté en automne à l île de Kerkennah (Figure.2). Par contre aucune variation significative (P>0,05) n a été observée chez les groupes des rats traités par les extraits de chair et de cerveau de la saupe. Figure.1. Effet des extraits de chair, de cerveau, de foie et des viscères de Sarpa salpa (0,3 ml/100g, v/p) au niveau hépatique sur le taux des Figure.2. Effet des extraits de chair, de cerveau, de foie et des viscères de Sarpa salpa (0,3 ml/100g, v/p) au niveau hépatique sur le diènes conjugués des rats traités par rapport le groupe des rats témoins. taux des TBARS des rats traités par rapport le groupe des rats References [1] Jiang TJ., Niu T., & Xu, Y.X., 2006, Transfer and metabolism of paralytic shellfish poisoning from scallop (Chlamys nobilis) to spiny lobster (Panulirus stimpsoni). Toxicon. 48, [2] Bellassoued K., Hamza A., Abdelmouleh A., Pelt J.V., & Elfeki A., Antioxidant response of a common herbivorous fish species (Sarpa salpa): Seasonal variation. Ciencias Marinas. 38 (1A), [3] Lowry OH., Rosebrough NJ., Farr AL., & Randall R.J., Protein measurement with Folin phenol reagent. J. Biol. Chem. 193, [4] Kurien BT., & Scofield RH., Protein blotting: a review. J. Immunol. Methods. 274, 115. [5] Esterbauer H., Cytotoxicity and genotoxicity of lipidoxidation products. American Journal of Clinical Nutrition, 57,

162 P.96. Antioxidative response in leaves and roots of Phragmites australis treated with cadmium 1,2 Khaled Bouchama, 1,2 Rachid Rouabhi, 1,2 khadija Bazouzi. 1 Departement of Biology, Tebessa University, Tebessa 12000, Algeria. 2 Cellular Toxicology laboratory, Annaba University, Annaba 2300, Algeria. Corresponding Author: Bouchama et al, University of TEBESSA, ALGERIA khaled.bouchama@yahoo.fr Abstract This study aimed to evaluate the antioxidative response of Phragmites australis exposed to the cadmium chloride (CdCl 2 ) Plants of Phragmites australis previously grown in a basic nutrient solution during the 30 days undergoing treatment with CdCl 2 with three concentrations (50μML μML μML -1 ). After that, we measured the enzymatic activity of Guaïcol peroxidase (GPOX) and Glutahtione peroxidas (GST) in the leaves, and roots of the plants. The determination of the enzymatic activity (GPOX and GST) of Phragmites australis revealed a varying result depending on the organ of the plant. Our results, showed an increased activity of Guaïcol peroxidase and Glutahtione peroxides in roots from reliable doses. However in the leaves we found a decreased activity of guaiacol peroxidase, the contrary for Glutahtione peroxides activity we registered a stimulation compared to the results of control plants no treated. This Increased activity of antioxidant enzyme especially in roots probably explains the ability of Phragmites australis to tolerate a high concentration of cadmium chloride and Nickel chloride. Keywords: Heavy Metals, Phytoremédiation, Enzymatic Activity, Cadmium Chloride, Nickel Chloride. 1. Introduction The ability of some plants to tolerate or even to accumulate metals has opened new avenues of research on the treatment of soils and waters whose purpose is phytoremédiation [4],[5]. Phytoremédiation is the direct use of green plants to stabilize or reduce contamination in soils, surface water, or ground water. Phragmites australis is a plant widely used for treatment of waste water containing heavy metals. 2. Methodology The method used to obtain the enzymatic extract of Phragmites australis (leaves, roots) is of Loggini et al. (1999). [3] 2.1. Assay of Guaïcol-peroxidase activity (GPOX) The activity (GPOX) is determined using the technique of Fielding and Hall (1978) by measuring the absorbance at 470 nm [1] Assay of Glutathione-S-transferase activity (GST) Measuring the activity of Glutathione-S-transferase (GST) is determined by the method of Habig et al. (1974) [2]. 3. Main Results 162

163 3.1. Antioxidative response in Leaves Table1. Antioxidant enzyme activities measured in leaves of Phragmites australis grown hydroponically under controlled conditions and exposed for 30 days to (50 μml μml μML -1 ) of CdCl 2 (Data represent the mean of three independent experiments ± ES). Treatments Control CdCl 2 Dose (0) 50 µm/l 100 µm/l 300 µm/l GPOX 12,1 ±0,89 5,73 ± 0,65 *** 4,88 ± 0,33 *** 4,0 ±0,17 *** GST 0,169 ±0,01 0,34 ±0,025 *** 0,43 ±0,038 *** 0,57 ± 0,02 *** (NS non significant differences, *** very highly significant P 0.05 according to Dunnett s test) 3.2. Antioxidative response in roots Table 2. Antioxidant enzyme activities measured in roots of Phragmites australis grown hydroponically under controlled conditions and exposed for 30 days to (50 μml μml -1 - Treatments Control CdCl 2 Dose (0) 100 µm/l 300 µm/l 500 µm/l GPOX 18,74±0,85 20,13±1,18 NS 38,1 ± 1,21*** 41,06 ±0,81*** GST 0,15 ± 0,02 0,27 ± 0,07*** 0,44±0,055*** 0,48 ±0,035*** 300μML -1 ) of CdCl 2 (Data represent the mean of three independent experiments ± ES). (NS non significant differences, *** very highly significant P 0.05 according to Dunnett s test) References [1] Fielding JL.,Hall JL. 1978, A biochemical and cytochemical study of peroxidase activity in roots of Pisum sativum: A comparison of dab-peroxidase and guaiacol-peroxidase with particulare mphasis on the properties of cell wall activity. J Exp Bot;29: [2] Habig W. H., Pabst M. J., Jakoby W. B. 1974, Glutathione-S-Transferase :The first enzymatic step in mercapturic acid formation.j.biol.chem.249, [3] Loggini et al., 1999 in Youbi M. 2005, Effets de deux fongicides Artea et Punch nouvellenment introduits en Algérie sur la physilogie et le métabolisme respiratoire du blé dur (Triticum durum Desf).Thèse de Magister de l Université Badji Mokhtar de Annaba. [4] Raskin I., Kumar N.P.B.A., Dushenkov S., Salt D.E. 1994, Bioconcentration of heavy metal by plants. Current Opinion in Biotechnology, (5): [5] Salt D.E., Blaylock M., Kumar N.P.B.A., Dushenkov V., Ensley B.D., Chet I., Raskin I., 1995, Phytoremediation : a novel strategy for the removal of toxic metals from the environment using plants. Biotechnology,(13):

164 P.97. Composition chimique de l huile essentielle d Ajuga iva L. Et détermination de l activité antibactérienne Boutemak. K 1, Medjdoub. R, Tedjini. A, Laribi.H 1 Laboratoire d Analyse Fonctionnelle des Procédés Chimiques, Université Saad Dahlab, Route de Soumaa, Blida, 09000, Algerie. E.mail : Résumé La partie aérienne d Ajuga iva L cueillie dans la région de Médéa localisée à 80 km du sudouest d Alger, a été soumise à l hydrodistillation. La composition chimique de l huile essentielle obtenue a été analysée par CG/SM. Plus de 90% de composés sont détectés. Les principaux composés sont : 1-octéne-3-ol (6,89%), Linalol (4,17%), 2-methoxy-4-vinylphénol (4,33%), butylhydroxytoluéne (5,85%), acide n-hexadécanoique (9,08%), 9,12, 15- octadécatrien-1-ol (9,53%), Erucylamide (12,36%) et nonacosane (5,21%). Le pouvoir antibactérien de l huile essentielle d Ajuga iva L. contre les germes-cibles a été mis en évidence par la méthode de disque «diffusion sur gélose». Cette technique a démontré que les cinq germes : Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Protus mirabillis, Protus vulagaris et Staphylococcus aureus sont sensibles à l action inhibitrice de cette huile essentielle. Mots clés : Ajuga iva L. huile essentielle, chromatographie en phase gazeuse- spectre de masse, composition chimique, activité antibactérienne. 164

165 P.98. Implication of the enzymatic mechanism in the emergence and dissemination of multiresistant strain of Pseudomonas aeruginosa 1 Ayari Khaoula, 1 Mahrouki Sihem, 1 Bourouis Ame 1, 1 Chihi Hela, 2 Ben Moussa Mohamed & 1 Belhadj Omrane 1 Laboratory of biochemistry and biotechnology, department of biology, Faculty of sciences of Tunis, Campus universitaire, 2092 EL Manar II, Tunis, Tunisia 2 Laboratory of microbiology, department of biology, Military hospital of Tunis, Tunis, Tunisia Abstract A clinical isolate of Pseudomonas aeruginosa 338 showing a multidrug resistance phenotype including resistance to β-lactams and quinolones is the subject of this study. This strain was isolated from a patient at the intensive care unit of a military hospital (hôpital Militaire de Tunis).This strain was found to have a high level resistance to broad-spectrum β-lactams. No synergy was detected by the doubledisk synergy test. Cell sonicate of these isolates were very active against penicillin and cephalosporines. Isoelectrofocusing methods revealed the production of β-lactamases with different pi. Keywords: β-lactams, β-lactamases, Pseudomonas aeruginosa, Resistance. 1 Introduction Pseudomonas aeruginosa is an opportunistic pathogen that is notably resistant to many antibiotics, including β-lactam antibiotics. Resistance to these agents arises by various mechanisms including reduced permeability of the outer membrane, overexpression of multidrug efflux systems, target alterations or production of β-lactamases [4].A major mechanism of resistance of P. aeruginosa to extended spectrum cephalosporins is the overproduction of its chromosomal céphalosporinase that belongs to Bush s group 1 [1]. Resistance to these antibiotics may also result from the production of extended spectrum β- lactamases. In the present study, we investigated the implication of enzymatic mechanism and the characterization of ESBL among clinical isolates of P. aeruginosa from the military hospital of Tunis. 2 Methodology One isolate of P.aeruginosa 338 is included in this study. The antibiotics susceptibilities of the P.aeruginosa 338 strain were determined on Mueller-Hinton agar by the standard disk diffusion procedure. Minimal inhibitory concentrations (MICs) of antibiotics were determined in Mueller-Hinton broth inoculated with bacteria and containing twofold dilutions of the drug. Results were interpreted according to the recommendations of the antibiogram committee of the French society for microbiology (ACFSM) [3].The ESBL detection was based on the double-disk synergy test(ddst) [2] β-lactamase activities were performed spectrophotometrically against freshly β-lactamase extracts prepared from induced or uninduced cells grown[6]. The decrease in absorbance of the antibiotics at an appropriate concentration and wavelength was measured in a temperature controlled spectrophotometer (Varian R CARY 50 Bio UVvisible) at 37 C [7]. Enzymatic extracts were focused in ampholine-polyacrylamide gel (3/10 Ampholyte, BioRad) using a mini-ief Cell 111 (BioRad). Focusing was carried out at 100 to 300 volts for 180 min at 10 C and β-lactamases were revealed by the starch-iodine method [5]. 3 Main Results 165

166 Table 1: MIC values (µg/ml) of the P.aeruginosa 338 strain, transconjugant and E. coli recipient. Antibiotic P.aeruginosa 4050 E. coli HB101x P.aeruginosa 4050 E. coli HB 101 Ceftazidime <1 Cefotaxime > Ceftreaxone <1 Streptomycin >256 Ciproflaxacin <2 <2 2 Ticarcillin Nalidixic acid >512 >512 1 Ampicillin >512 >512 4 Aztreonam < Cefoxitim >512 >512 2 Cloramphénicol <1 Tetracyclin >512 >512 2 Imipinem This strain is also resistant to others antibiotic, in addition to the β- lactams which exceed 512μg/ml. Nevertheless, it remains sensitive to imipinem, Ciproflaxacin and aztreonam (Table I). The specific activity shows that the strain has high hydrolytic activities to the penicillins and cephalosporins (cephalothin). These activities extend to third-generation cephalosporins (cefotaxime).uninduced specific activities are not detectable, this applies to all substrates except cephalothin. The P.aeruginosa 338 and its transconjugant produce the same β- lactamases activities with a different pi (about 8,2 ;7,8 ;5,8) (Figure 1&2) Figure 1. Activity β-lactamase detection of the P.aeruginisa 338 strain with and without inducers after native electrophoresis 7.5% in the presence of 1mM benzylpenicillin Lane 1, Markers; Lane 2, Benzylpenicillin- induced isolate; Lane3, cefoxitin-induced isolate; Lane 4, Ticarcillin- induced isolate; Lane 5, uninduced isolate Figure2. Isoelectric focusing of.p.aeruginisa 338 x E.coli HB 101 Lane 1, Markers; lane 2, P.aeruginisa 338 x E.coli HB 101. References [1] Bush K., Jacoby G.A., Medeiros A.A., A functional classification scheme for â-lactamases and its correlation with molecular structure, Antimicrob. Agents Chemother. 39 (1995) [2]Ben AN, Choucheni C, Bouhawala N, Amor A, Belhadj O (2007). Clinical strain of Proteus mirabilis able to produce a plasmid mediated ceftazidimase. Pathol. Biol. 42: [3]Cavallo JD, Chardon H, Chidiac C, Choutet P, Courvalin P, Dabernat H Drugeon, L. Dubreuil, F. Goldestein,B. Guery, V. Jarlier, T. Lambert, R. Leclercq, M.H. Nicolas-Chanoine, Quentin C, Rouveix B, Soussy CJ, Varon E (2007). Comité de l antibiogramme de la Société Française de Microbiologie communiqué [4] Chen H.Y., Yuan M., Livermore D.M., Mechanisms of resistance to β-lactam antibiotics amongst Pseudomonas aeruginosa isolates collected in the UK in1993, J. Med. Microbiol. 43 (1995), [5] Perret C.J., Iodometric assay of penicillinase, Nature 154 (1954) [6]Réjiba S, Limam F, Belhadj C, Belhadj O, Ben-Mahrez K (2002). Biochemical characterization of a novel extended-spectrum β-lactamase from Pseudomonas aeroginosa. Microb. Drug Resist. 8: [7]Ross GW, O callagham CH, Hash H (1975). In editor β-lactamases asseys. Methods in enzymology. New York: Academic Press. 13:

167 P.99. NaCl impact on growth, photosynthetic activity and osmolytes synthesis of Tunisian chili pepper cultivars (Capsicum frutescens L.) Kaouther Zhani and Hannachi Cherif Department of Horticulture and Landscape, Higher Institute of Agronomy, University of Sousse, BP , Chott Mariem, Tunisia Abstract In order to evaluate the impact of NaCl (0, 2, 4, 6, 8, 10 and 12 g/l) on five Tunisian chili pepper (Capsicum frutescens L.) cv: Tebourba (Tb), Somaa (Sm), Korba (Kb), Awald Haffouzz (Aw) and Souk jedid (Sj), an experiment was carried out under greenhouse at Higher Institute of Agronomy, Chott Meriem, Tunisia. Results showed that increasing salinity stress, for all cv, had a negative impact on roots (length, fresh and dry weights) and leaves (number and area). Also, chlorophyll (a and b) amount and quantium yield (Fv/Fm) decreased significantly. However, biosynthesis of proline, soluble sugar and soluble protein in leaves is activated. Aw and Kb cv succefully tolerated highest salinity level by accumulating more solutes in leaves and maintaining usually higher values in all parameters in opposition to Sj cv. Key words: pepper, NaCl, growth, photosynthetic activity, osmolyte 1. Introduction Salinity is a major environmental factor determining plant productivity and plant distribution; it affects more than 10 % of arable land and is declining average yield for most major crop plants by more than 50% [1]. Salinity adversely affects germination, growth, physiology and productivity by reducing the ability of plants to take up water causing imbalance in osmotic potential; ionic equilibrium and nutrient uptake [2]. In addition, it impairs a wide range of cellular metabolism including photosynthesis, protein synthesis and lipid metabolism [3]. Lichtenthaler et al. [4] found that salt stress was responsible for decreased biosynthesis of chlorophyll and inefficiency of photosynthesis [5] all of which ultimately leading to lowered economic productivity. To perceive the incoming stresses and rapidly regulate their physiology and metabolism, plants evolved mechanisms that allow them to cope with them [6] by synthesis and accumulation of a number of compatible solutes called osmolytes. These osmolytes include proteins, carbohydrates, amino acids and quaternary ammonium compounds [7] which are accumulated in plants at high concentrations to alleviate enzyme inactivity or loss of membrane integrity due to water deficiency [8]. Pepper is one of the most widely grown vegetable in the world and in Tunisia it is widely grown in all regions and occupies the fourth largest area planted by gardening. However in the harvest season, it is exposed to many biotic and abiotic conditions especially salinity which had negative effect on growth [9], yield and fruit quality [10] since pepper is a sensitive salt-tolerant crop (2 g/l). Hence the present study was initiated to evaluate the effect of NaCl treatment in five accessions of chili pepper on growth, chlorophyll content, fluorescence and osmolytes synthesis in order to better understand their differences on salt stress tolerance and select tolerant accession. 2. Methodology Seeds of five cv: Tebourba (Tb), Somaa (Sm), Korba (Kb), Awald Haffouzz (Aw) and Souk jedid (Sj) were sterilized for 20 mn in sodium hypochloride solution (5%) and then rinsed 3 times with distilled water. Ten seeds for each cv were sown on February 15 th 2012 in plastic pot filled with peat, sand and topsoil. Pots were left in greenhouse on bricks. Once the seeds have germinated, we kept a single plant on which the trial continues. For two 167

168 months, plants were watered with saline water at 7 levels of NaCl (0, 2, 4, 6, 8, 10 and 12g/l). During culture, plants were not fertilized but were processed by Talastar (80cc/hl) against aphids. Salinity stress effect on growth was studied by measuring root length, fresh and dry weights of roots, number of leaves and leaf area. Chlorophyll (a and b) content was determined by Arnon method [11]. Ratio (Fv/Fm) was measured using portable fluometer. Proline content is estimated by Bates et al. [12] method. Total soluble protein content and soluble sugar was measured respectively according to Bradford [13] and Dubois et al. [14] method. 3. Results Results showed that NaCl decreased root length, fresh and dry weights of roots. This reduction becomes more pronounced at 12 g/l (92 % in root length, 82 % in root fresh weight and 85 % for dry weight of root (Sj cv). This impact on roots is more illustrated in Fig.1. Also, number of leaves and leaf area are significantly affected by salt stress (P<0.05); 86 (Tb cv) and 91% (Sj cv) respectively compared to control. Chlorophyll content (a and b) is also touched and we noticed a respective decrease of 97 (Sj cv) and 85% (Aw cv) in chl a and chl b at 12g/l of NaCl resulting in chlorosis (Fig.2). For chlorophyll fluorescence, salt application affected negatively maximal efficiency of PSII photochemistry (Fv/Fm) of the five cv studied. However, synthesis of the different osmolytes in leaves (proline, soluble sugar and protein) is enhanced significantly (p<0.001) with the increase of salt concentration especially at 12 g/l NaCl where the five cv displayed very high values. For exemple, we noticed 7.15 times proline amount more to the level found in controlled plants (Kb cv). Fig.1. Effect of NaCl on roots of Tunisian chili pepper, Kb cv: reduction in length and biomass Fig.2. Effect of NaCl on leaves of Tunisian chili pepper, Aw cv: reduction in leaf area and appearance of chlorosis References [1]Bray E., Bailey-Serres A., and Weretilnyk E., 2000, American Society of Plant Physiology, pp [2] Niu X., Bressan R.A., Hasegwa P.M., and Pardo J.M.,1995, Plant Physiol., 109, pp [3]Ashraf M.,1994, Biol. Plant, 36,pp [4] Lichtenthaler H.K., Langsdorf G., Lenk S., and Bushmann C., 2005, Phtosynthetica., 43,pp [5] Munns R., 2002, Plant Cell. Environ., 25,pp [6] Zhang J., Jia W., Yang J., and Ismail A.M., 2006,. Field Crop Research, 97, pp [7] Ashraf M., 2004, Flora, 199,pp [8] Schwab K.B., and Gaff D.F., 1990, J Plant Physiol, 137,pp [9] Ibn Maaouia Houimli S., Denden M., and Ben El Hadj S.,2008, EurAsia J BioSci., 2,pp ] Ibn Maaouia Houimli S., Denden M., Dridi-Mouhandes B., and Ben Mansour-gueddes S.,2011, Tropicultura, 2011, 29, 2,pp [11] Arnon D.I., 1949, Plant Physiol., 124, pp [12] Bates L.S., Waldren R.P., and Teare I.D., 1973, Plant Soil., 39,pp [13] Bradford M.M., 1976, Analytical Biochemistry, 72, pp [14] Dubois M., Gilles K.A., Hamilton J.K., Rebers P.A., and Smith F., 1956, Anal. Chem., 28, pp

169 P.100. Étude éco-physiologique du caroubier (Ceratonia siliqua L.) et valorisation de ces co-produits 1 M elle Chabane Kheira, 1 Mr. Benhassaini Hachemi, 1 M elle Benhamiche Samia Laboratoire de Biodiversité Végétale : conservation et valorisation Université Djilali Liabès Sidi bel abbés, faculté des sciences, département des sciences de l environnement (Algérie) Corresponding Author: M elle Chabane, Kheira, Adress: Cité 150 Logts N 49 Belloualadi Sidi Bel Abbes Université Djilali Liabès Sidi bel abbés(algérie). chabane-k@hotmail.fr Résumé Le caroubier (Ceratonia siliqua L.) est un arbre typiquement méditerranéen, utilisé en agroforesterie pour la réhabilitation des terres marginales actuellement délaissé dans les prises de décision dans la politique de reboisement. Dans le cadre de valorisation de cette espèce hermaphrodite, nous nous sommes intéressés d une part au volet morphométrique du fruit et d autre part à la physiologie de la germination de l espèce et à la valorisation de ses co-produits. Les résultats obtenus montrent une corrélation positive entre la longueur, largeur et épaisseur des gousses et des graines. L'essai de germination à révéler des pourcentages probant allant de 99%, 92% et 39% pour les graines traitées respectivement par de l'acide sulfurique, l'eau bouillante et par l eau à 40 C. L'analyse biochimique des graines et des gousses montre la composition suivante : graines (humidité 11%, cendre 2,46%, lipide 28,2%, protéine 22,34%, phénols totaux 0,28%), gousses (humidité 12,26%, cendre 2,6%, lipide 23,3%, protéine 33,79%, phénols totaux 0,8%). Au vue des résultats obtenus sur la valorisation biochimique du fruit, une perspective s ouvre quant à son utilisation comme arbre de reboisement qui sera source d'aliments pour le bétail. Mots-clefs : Ceratonia siliqua L., morphométrie, physiologie, composition biochimique, fruits. 1 Introduction Le caroubier est une espèce essentiellement méditerranéenne d importance écologique, et économique [1, 2]. Vu sa capacité de développer des stratégies d adaptation morphologique, physiologique et biochimique, le caroubier s installe favorablement dans les zones côtières, semi-arides et arides, d où l importance de son utilisation dans les programmes de reforestation et de reboisement [1, 3]. Par ailleurs, cet arbre est d'une importance économique considérable ; ses gousses, sont utilisées en industrie alimentaire et pharmacologique [4]. Dans un but de mise en valeur de cette espèce, notre travail s articule sur la morphométrie, la physiologie et la biochimie de la gousse et la graine du caroubier (Ceratonia siliqua L.). 2 Méthodologie Le matériel végétal constitué de gousses de Ceratonia siliqua L. a été collecté sur un sujet hermaphrodite au niveau de la faculté des sciences (SIDI BEL ABBES) durant le mois de novembre Les gousses sont mises à séchées à l ombre durant 3 mois. Nous avons opté pour trois étapes qui ont guidé notre méthodologie de travail : La première repose sur l analyse morphométrique des gousses et des graines du caroubier. Sur cent gousses prises d une manière aléatoire, quatre paramètres ont été mesurés à savoir : la longueur, la largeur, l épaisseur et le poids. La seconde est consacrée à la physiologie des graines de Ceratonia siliqua L. La conduite de la germination lancée le 22 mars a été faite sur 320 graines dans des bacs en verre, couvert de plastique transparent. (Conditions de laboratoire) à température ambiante (21,06 C).Trois prétraitements ont été utilisés pour lever la dormance tégumentaire (Traitement à l'acide sulfurique, à l'eau bouillante et à l'eau à 40 C). La dernière basée sur l analyse biochimique des gousses et des graines de Ceratonia siliqua L. Pour cela différents dosages ont été menés selon les méthodes standards (teneur en eau, cendres, lipides, protéines, sucres, cellulose brute, phénols totaux, tannins condensés, tannins hydrolysables). 169

170 3 Résultats La gousse du caroubier est de 12 à 18,5 cm de longueur et 1,8 à 3,1 cm de largeur. La gousse est séparée à l intérieur par des cloisons pulpeuses et renferme 10 à 15graines, dont la longueur et la largeur sont respectivement est variée entre de 0,95 à 1,22 cm et de 0,65 à 0,80 cm (Tb.1). Tableau 1 : Caractéristiques morphométriques des gousses et des graines Gousse Graine Ceratonia siliqua L. M DS M DS Longueur (cm) 14,90 ± 1,51 0,91 ± 0,053 Largeur (cm) 2,11 ± 0,167 0,64 ± 0,031 Epaisseur (cm) 0,36 ± 0,058 0,37 ± 0,0317 Nombre de graine /gousse / 12,5 ± 0,54 Poids (g) / 0,17 ± 0,0021 M: valeur moyenne de différents variables mesurés (n=100), en DS: déviation standard Les graines de Ceratonia siliqua L. présentent une dormance tégumentaire du fait que les résultats obtenus montrent des taux de germination nuls pour le lot témoin. Par ailleurs, un taux de réussite de la germination avoisine les 39 % pour les graines traitées à l eau (40 C), 92% pour ceux traités à l eau bouillante. Un taux de germination optimal de 99% a été enregistré pour l ensemble des graines traitées avec de l acide sulfurique concentré. Toutefois, le traitement par l acide sulfurique a été plus efficace par rapport aux autres méthodes [5]. Tableau 2: La composition chimique des gousses et des graines de Ceratonia siliqua L. par rapport à la matière telle qu elle Ceratonia siliqua L. Gousse (%) Graine (%) Teneur en eau 12,27±0,173 11,00±0,115 Matière sèche 87,73±0,173 89±0,114 Cendre (matière minérale) 2,70±0,080 4,8±2,368 Lipide 23,27±1,938 28,20±1,977 Protéine 32,81±0,439 18,375±1,749 Sucre 61,583±1,01 42,416±5,067 Cellulose brute 14,948±0,398 18,911±3,014 Phénols totaux 0,184±0,056 0,313±0,023 Tannins condensés ± ± Tannins hydrolysables 1,0495±0,156 0,3265±0,025 DS : déviation standard de la moyenne Les gousses et les graines de Ceratonia siliqua L. sont très riches en matière sèche. L évaluation de la composition chimique des gousses et des graines par rapport à la matière telle quelle, montre que les sucres sont les constituants les plus abondants avec un pourcentage très élevé estimé à 61% et 42% respectivement. La teneur en protéines est évaluée à 32% pour les gousses, cette teneur est moins faible pour les graines (18%). Toutefois, ces dernières marquent une proportion élevée en lipides (28%) par rapport aux gousses (23%). Le pourcentage de la cellulose brute avec 14% pour les gousses et 18 %pour les graines. Le fruit de Ceratonia siliqua L. contient également des composées phénoliques (phénols totaux, tannins condensés et tannins hydrolysables) à des faibles pourcentages (Tab.2). Références [1] Batlle & Tous, Carob tree (Ceratonia siliqua L.), Promoting the conservation and use of underutilized and neglected crops. 17. Institute of Plant Genetics and Crop Plant Research, Gatersleben/International Plant Genetic Resources Institute, Rome, [2] Gharnit N., Et Mtili N., Ennabili A. T. and Ennabili A., Social characterization and exploitation of carob tree (Ceratonia siliqua L.) from Mokrisset and Bab Taza (NW of Morocco). Sci. Lett. 3 n 2. [3] Rejeb M. N., Le caroubier en Tunisie: Situations et perspectives d'amélioration. Dans: Quel avenir pour l'amélioration des plantes? Edit. AUPELF-UREF. John Libbey Eurotext. Paris. pp: [4] NAS. (1979). -Tropical legumes: resources for the future, pp National Academy of Sciences, Washington DC. USA. [5] Frutos D., Efecto de los ácido sulfúrico y giberelico (GA3) en la germinación del galgarrobo (Ceratonia siliqu L.). pp in Proceeding of the II International Carob Symposium (P. Fito and A. Mulet, eds.). Valencia, Spain. 170

171 P Chemical screening of bioactive extracts of Limoniastrum feei ( Plombagenaveae) 1 L. Ziane, 2 N. Hamidi, 3 A. Belabesse, & 4 M. Abdelbari 1 Sciences Department, Science Faculty of Bechar, University of bechar, BP 417 Bechar 08000, Algeria l.ziane@yahoo.fr Abstract Limoniastrum feei (plombagenaceae) is a plant traditionally used to treat gastric infection in the southeast of algeria ( saoura region of bechar ) northern africa. [1-2] Leaves, stem and twig of this plant were screened for the principal classes of secondary metabolites, such as anthraquinones, terpenes, saponins, alkaloids, coumarins, flavonoids and tannins. Key words: limoniastrun feei, bioactive extract, phytochemical screening. Introduction Present and future of medicinal plants, both as potential antimicrobial crude drugs as well as source for naturel compounds that act as new antimicrobial agents. It is intersting to note that local people believe that the medical effects of wild plants are better than those of cultivated species. The aim of this studies is to evaluate the bioactives extracts of Limoniastrum feei plant of the Southeast of Algeria ( saoura region of bechar ) northern Africa [1-2]by phytochemical screening. In earlier work we have reported the antimicrobial activity of aerial part crude extracts from Limoniastrum feei (Belboukhari et al 2005). In continuation of our studies on medicinal plants, we isolate tow flavonoids from methanolic extract of Limoniastrum feei. [3-4] Plant materials and Extraction Aerial parts of Limoniastrum feei were collected in March May 2005 from Boukais (region in Bechar) south-western Algeria. A voucher spercimen (CA99/14) (Belboukhari et al 2005) is deposited at the herbarium of phytochemistry and organic laboratory of university of Bechar. All parts of limoniastrum feei ( leaves, stem and twig) were individually ground to a fine powder.extraction using soxhlet apparatus; reflux for 3 hours was performed. The residue was evaporated in vacuo apparatus, and according to the operative fashions of chemical screening one determines the present natural product in bioactive extract [5-6]. Botanical description Limoniastrum feei is a tree belong to Plumbagenaceae family. It grows to a height of ft, it's possess long leaves and flowering palms witout leaves, it's flower is entoured by a brickly bracts with a purplish red color. [2-7] Limoniastrum feei is common plant known under the name vernacular "Melefet Khadem" and used as a common herbal drug in the south-western Algeria (Ozenda, 1983, Cheriti et al 2004). Ethnopharmacology screening According to the results of ethnopharmacology study to several medical plants that are used in Bechar (Southeast of Algeria) in traditional medicine, it carries out by laboratory LPSO (1998). We are interested to deepen the investiguation of this specie. Phytochemical screening According to the results of biological screening of several extracts of three parts of Limoniastrum feei (leaves, stem and twig) [3-4].The methanolic and heptan extracts of these parts of Limoniastrum feei were selected ( table1 ) and were carried out a phytochelical screening on the active extracts for this plants. Results and discussion 171

172 Table 1: Extracts selected Parts Use Escherichia coli pseudomonas aeruginosa enterococcus facalis klebsiella pneumoniae Staphylococu aureus candida albicans Saccharomyces cereviceae leaves MeOH MeOH MeOH MeOH MeOH MeOH MeOH twig MeOH MeOH MeOH MeOH MeOH MeOH MeOH stem MeOH MeOH / Heptan MeOH Heptan / The crude of metenolic and heptane extracts of three parts of Limoniastrum feei were screened for the presence of saponins, flavonoids, tannins. Table 2 : Results of chemical screening of the aerial part of Limoniastrum feei Natural products leaves twig stem Extracts MeOH Water MeOH Water MeOH Water Heptan Alcaloïds Saponins Terpens Tanins Flavonoïds Free Flavonoïds Heterosids flavonoïds Steroids cardenolids : existence - : not detected Qualitative phytochemical screening of the water; methanolic and heptane extract of three parts of Limoniastrum feei revealed the presence of saponins, tannins, Flavonoïds, free Flavonoïds and Heterosids flavonoïds. However, Alcaloïds were absent Conclusion Limoniastrum feei (plombagenaceae) is a plant traditionally used to treat gastric disorders, prepared by decoction in water, took one cup of tea for each day. The phytochemical screening of the active extracts have noted the flavonoids, saponins and tannins existence in the methanolic, aqueous and heptan extracts of three parts the Limoniastrum feei. For that we have realized a correlation essay between the existing substances in plant extracts and both antibacterial and anti fungel activity, which permit us to concluted that: the bioactive extracts contain Flavonoïds, saponins and tannins. REFERENCES. [1] A. Cheriti, Rapport CRSTRA, plantes médicinales de la région de Bechar, sud ouest Algérie (Ethnopharmacological studies ) Bechar, Algeria [2] P. Ozenda, Flore du Sahara, Pat, 1967 : 270. [3] Belboukhari N; Cheriti A, 2005, antimicrobial activity of aerial part of limoniastrum feei, Asian Journal of plant sciences, 4(5), [4] Belboukhari N; Cheriti A, 2007, flavonoid of limoniastrum feei, Research journal of phytochemistry, [5] B. King, Theodore Reginald Bott, Extraction of Natural Products Using Near-Critical Solvents, Edt Springer. [6] Jan Rydberg, Solvent Extraction Principles and Practice, Edt CRC Press. [7] R. Maire,Flore de L'Afrique du Nord : ( Maroc, Algerie,Tunisie,Tripolitaine,Cyrenaïque et Sahara) (5 v.), París : Paul Lechevaller,

173 P.103A. Evaluation of the anti-inflammatory activity of chloroformic extracts of brown seaweed from the Mediterranean Tunisian coasts of the genus Cystoseira 1 Lamia Mhadhebi, 2 Amel Mhadhebi, 1 Abderrahmene Bouraoui 1 Unité URSAM. Laboratoire de Pharmacologie. Faculté de Pharmacie.- Avenue Avicenne 5000 Monastir-Tunisie 2 Unité de recherche des électrolytes. Faculté des Sciences- Avenue de l'environnement 5019 Monastir -Tunisie Abstract The search for pharmacological properties from natural products has led to the discovery of pharmacologically active substances, with important applications both in the experimental field and identification of active principles with therapeutic interest. As part of our search of new anti-inflammatory drug, chloroformic extracts of marine algae collected from Mediterranean Tunisia coasts were evaluated for their anti-inflammatory activity using the followed test of carrageenan induced rat paw oedema. We established that the chloroformic extracts from three brown algae of Cystoseira crinita, Cystoseira compressa and Cystoseira sedoides tested at different doses (25 and 50 mg/ kg) using the carrageenan paw edema test in male albino s wistar rats ( g) and in comparison to references drugs: Dexamethasone (1 mg/ kg) and Acetylsalicylate of Lysine (300 mg/ kg) exhibited in a dose dependent manner. a significant inhibitory effect of the rat paw edema. The percentages of inhibition of edema 3h after carrageenan injection are ranged from 69%, 73%, to 81%; respectively for Cystoseira compressa.cystoseira sedoides and Cystoseira crinita; whereas the reference drug (Acetylsalicylate of Lysine) produced 73% of inhibition. The dexamethasone (1mg/ kg) inhibited oedema formation by 57%. Key words: Anti-inflammatory activity, chloroformic extract, brown algae, rat paw oedema. 1 Introduction Recently, macroalgae have been used as a novel food with potential nutritional benefits in industry and medicine for various purposes. Furthermore, macroalgae have shown to provide a rich source of natural bioactive compounds with antiviral, antifungal, antibacterial, antioxidant, anti-inflammatory, hypercholesterolemia, hypolipidemic and antineoplasteic properties [1]. The objective of the present study was to evaluate the anti-inflammatory potency of three chloroformic extracts from three brown seaweeds, respectively Cystoseira sedoides, Cystoseira compressa and Cystoseira crinita. 2 Methodology 2.1 Anti-inflammatory activity Animals For anti-inflammatory evaluation of the chloroformic extracts of the three brown seaweeds from the genus Cystoseira, male adult Wistar rats weighing ( g) of both sexes were obtained from Pasteur institute (Tunis, Tunisia). They were housed in polypropylene cages and were left for 2 days for acclimatization to animal room maintained under controlled conditions: (a 12 h light dark cycle at 22 ± 2 C), on standard pellet diet and water ad libitum. Before the day of assay, wistar rats were fasted overnight with the free access to water. Housing conditions and in vivo experiments approved according to the guidelines established by the European Union on Animal Care (CFE Council (86/ 609)). Animals were divided into drug-treated test and saline-treated control groups of six animals per group Carrageenan induced rat paw oedema The anti-inflammatory activity of our extracts on carrageenan-induced paw oedema was determined according to the method of Winter et al. [2]. Oedema was induced by injecting 0.05 ml of 1% carrageenan subcutaneously into the sub-plantar region of the left hind paw. Wistar rats were divided into three groups of six animals. 173

174 Test group of chloroformic extracts from C. sedoides, C. compressa and C. crinita (25 or 50 mg /kg) were administered intraperitoneally (i.p.); and were dissolved in [1% DMSO and 99% saline water]. The reference group received acetylsalicylate of lysine (ASL. 300 mg/ kg; i.p).the standard group received the vehicle [DMSO 1% & Saline water 99%] (2.5 ml/ kg. i.p.)]. All drugs were administrated 30 min before the injection of carrageenan. Measurement of paw size was done by means of volume displacement technique, using plethysmometer immediately before carrageenan injection; and 1, 2, 3, 4 and 5 h after carrageenan injection. Fig.1 : Un Plethysmometer. (Model Ugo Basile. Italy) 3 Main Results Three chloroformic extracts of C. sedoides, C. compressa and C. crinita were investigated for their anti-inflammatory activity; using carrageenan induced hind paw oedema. The experimental results were listed in Table 1. There was a significant reduction (p < 0.001) in carrageenan-induced rat paw oedema at 50 mg/ kg dose of chloroform extract of C. crinita and at 300 mg/ kg dose of ASL over a period of 3 h. Treatment with the chloroform extract of C. crinita. C. sedoides and C. compressa (at the dose of 50 mg/ kg. i.p.) inhibited the formation of the oedema by 81.74%, 73.49% and 69.02%; respectively in the third hour of experimentation (Peak of oedema formation). These results are quite similar to the one observed for the group treated with ASL (300 mg/ kg), which inhibited oedema formation by 73.97%. Results are statistically significant compared to the control. Table 1: Anti-inflammatory effect of the intraperitoneal administration of chloroformic extracts from Cystoseira crinita, Cystoseira compressa, Cystoseira sedoides and both reference drug Acetylsalicylate of Lysine (ASL) and Dexamethasone (1 mg/kg), on carrageenan-induced rat paw oedema test. Doses Pourcentage d inhibition (%) 1h 3h 5h (mg/ kg) Control ( Vehicle) Dexamethasone (Reference 1) ASL (Reference 2) CHCl 3/ C. crinita CHCl 3/ C. sedoides CHCl 3 / C. compressa References [1] El-Baroty GS., Moussa MY., Shallan MA., Ali MA., Sabh AZ., & Shalaby EA Contribution to the Aroma. Biological Activities. Minerals. Protein. Pigments and Lipid Contents of the Red Alga: Asparagopsis taxiformis (Delile) Trevisan, J App Sci Res. 3, pp [2] Winter CA., Risley EA., & Nuss GW Carrageenan induced edema hind paw of the rat as an easy for anti-inflammatory drugs, Proc Soc Exp Biol Med. 3, pp

175 P.103B. Antioxidant activity of chloroformic extracts of some marine algae of the genus of Cystoseira collected from Tunisian coasts 1 Lamia Mhadhebi, 2 Amel Mhadhebi, 1 Abderrahmene Bouraoui 1 Unité URSAM, Laboratoire de Pharmacologie, Faculté de Pharmacie.- Avenue Avicenne 5000 Monastir-Tunisie 2 Unité de recherche des électrolytes, Faculté des Sciences- Avenue de l'environnement 5019 Monastir -Tunisie Abstract Marine natural products have been the focus of discovery for new products of chemical and pharmacological interest. In this purpose, chloroformic extracts of three brown seaweed of the genus Cystoseira were evaluated for their antioxidant properties using 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyle (DPPH) radical scavenging; and the total phenolic content (TPC) of each extract was measured using the Folin- Ciocalteu method. Algal species exhibited a DPPH radical scavenging activity (RSA) in comparison to the activity of powerful antioxidant standard, Trolox (IC 50 = 90 µg/ ml). Cystoseira crinita and Cystoseira compressa demonstrated the best RSA (IC 50 = 103 µg/ ml and 105 µg/ ml respectively). Whereas Cystoseira sedoides presented only an IC 50 = 120 µg/ ml). Moreover, chloroformic extracts of the most species exhibited ferric reducing activity as follow: Cystoseira compressa was found to have the highest TPC: 666 mg GAE/ g dried sample. Cystoseira sedoides had 550 mg GAE/ g dried sample while C. crinita had 402 mg GAE/ g dried sample. These results suggest that the brown algae from the Mediterranean Tunisia coastline have an antioxidant potential, which could be considered for future applications in seawater therapy or cosmetic industry. Further fractionation, purification and evaluation of different fraction are essential to isolate and identify the active compound involved in this antioxidant activity. Keywords: Antioxidant activity, Total polyphenol content, Cystoseira, Gallic acid equivalent (GAE). 1 Introduction Reactive oxygen species (ROS), such as superoxide radical and hydroxyl radical, are generated in many redox processes. ROS can easily react with other molecules, such as protein, Deoxyribonucleic acid (DNA) and lipids and induce oxidative damage to biomolecules [1]. This damage may cause ageing, heart disease, diabetes, cancer, inflammation and other many diseases [2]. In recent years, one of the areas which have attracted a great deal of attention is anti-oxidants in the control and prevention of those diseases, in which oxidative damage has been implicated. Therefore, new interest has been developed to search natural and safe anti-oxidative agents from marine sources. More recent reports revealed seaweeds to be a rich source of anti-oxidant compounds [3]. Therefore, the objective of this research was to evaluate the anti-oxidant activities in chloroformic extracts from Cystoseira crinita (CHCl 3 -Ccri), Cystoseira sedoides (CHCl 3 -Csed) and Cystoseira compressa (CHCl 3 -Ccom). 2 Methodology 2.1. Total phenolic content (TPC) The total phenolic contents of the three aqueous extracts of the genus Cystoseira (CHCl 3 - Ccri, CHCl 3 -Csed and CHCl 3 -Ccom) were estimated by the method of Taga et al [4]. Briefly, 100 µl aliquot of sample were mixed with 2.0 ml of 2% Na 2 CO 3 and allowed to stand for 2 min at room temperature. After incubation, 100 µl of 50% Folin- Ciocalteu s phenol reagents were added, and the reaction mixture was mixed thoroughly and allowed to stand for 30 min at room temperature in the dark. Absorbance of all sample solutions was measured at 720 nm using spectrophotometer (Jenway 6505 UV/Vis). A calibration curve of gallic acid (ranging from 0.05 to 1 mg/ ml) was prepared, and TPC was standardised against gallic acid and expressed as mg Gallic acid equivalent per gram of sample on a dry weight basis (DW). All determinations were performed in triplicate DPPH radical scavenging activity 175

176 DPPH is a chromogen-radical-containing compound that can directly react with anti-oxidants. DPPH has been used extensively as a free radical to evaluate reducing substances and is a useful reagent for investigating the free radical scavenging. When the DPPH radical is scavenged by anti-oxidants through the donation of hydrogen to form a stable DPPH-H molecule, the colour is changed from purple to yellow. DPPH radical scavenging activity of the three chloroformic extracts of the genus Cystoseira (CHCl 3 -Ccri, CHCl 3 -Csed and CHCl 3 - Ccom) was determined according to the method of [5]. Each sample stock solution (1mg/ ml) was diluted to final concentrations of 500, 250, 100, 50 and 10 (µg/ ml) in ethanol. A total of 0.5 ml of 30 mm DPPH ethanol solution was added to 0.5 ml of sample solution at different concentrations and allowed to react at room temperature. After 30 min, the absorbance (A) was measured at 520 nm. The ability to scavenge the DPPH radical was calculated using the following equation: Radical Scavenging capacity (RSC, %) = 1- [(A sample A sample blank) / A control ] x 100. Where the A control is the absorbance of the control (DPPH solution without sample), the A sample is the absorbance of the test sample (DPPH solution plus test sample), and the A sample blank is the absorbance of the sample only (sample without DPPH solution). Trolox was used as positive control. Concentration of the extract, which required reducing DPPH radicals by 50% (IC 50 ), was calculated by linear regression of plots, where the abscissa represented the concentration of tested marine algae extracts and the ordinate the average percent of scavenging capacity from three replicates. 3 Main Results Table 1 showed that the highest levels of the total phenolic contents were found in the CHCl 3 -C com extract with value 666 mg GAE/ g dried sample. Whereas, in the CHCl 3 -C sed and CHCl 3 -C cri extracts, TPC were with towards values 550 and 402 mg GAE/ g dried sample, respectively. The CHCl 3 -C cri and CHCl 3 -C com extracts exhibited excellent DPPH radical scavenging activity, with an IC 50 value of 103 µg/ ml and 105 µg/ ml, respectively. These scavenging activities were found significantly similar to Trolox (90 ± 0.2 µg/ ml), under the same experimental conditions. Table 1: Antioxidant activity and total pphenolic contents of three chloroformic extracts from Cystoseira crinita (CHCl 3 -Ccri), Cystoseira sedoides (CHCl 3 -Csed) and Cystoseira compressa (CHCl 3 -Ccom). Samples TPC (mg GAE/ g dried sample) Anti-oxidant Activity (AOA) DPPH IC 50 (µg/ ml) CHCl 3 -C cri 402 ± ± ± 0.4 CHCl 3 -C sed 550 ± ± 0.3 CHCl 3 -C com 666 ± 0.3 Trolox References [1] Klaunig JE., Xu Y., Bachowski S., & Jiang J., 1997, Free radical induced changes in chemical carcinogenesis. In K.B. Wallace (Ed.), Free radical toxicol Washington, DC, pp, [2] Aruoma OI., 1994, Nutrition and health aspects of free radicals and anti-oxidants, Food Chem Toxicol. 32 pp [3] Duan XJ., Zhang WW., Li XM., & Wang BG., 2006, Evaluation of anti-oxidant property of extract and fractions obtained from a red alga, Polysiphonia urceolata. Food Chem. 95, pp [4] Taga MS., Miller EE., & Pratt DE. 1984, Chia seeds as a source of natural lipid anti-oxidants, J Am Chem Soc. 61, pp [5] Kim JK., Noh JH., Lee S., Choi JS., Suh H, Chung HY., Song YO., & Choi WC., 2002, The first total synthesis of 2, 3, 6-tribromo-4,5- dihydroxybenzyl methyl ether (TDB) and its anti-oxidant activity, Bull Korean Chem Soc. 23, pp

177 P L effet de di-n-butyl phthalate (DBP) sur quelques paramètres de la reproduction chez le lapin male oryctolagus cuniculus. 1 Lamia Rihani*& 1 Kamel Khelili Laboratoire d écophysiologie animale, département de biologie, faculté des sciences, Université Badji Mokhtar, Annaba, 23000, Algérie. Résumé Cette étude a pour objectif l évaluation des effets toxiques du di-n-butyl phthalte (DBP) sur quelques paramètres de la reproduction masculine chez le lapin male oryctolagus cuniculus. Le di-n-butyl phthalte (DBP) a été appliqué a raison de trois doses: (250, 500,750 ppm) par gavage durant 4 semaines successives. Le poids testiculaire, quelques caractères biologiques des spermatozoïdes et le taux de testostérone ont été étudiés. Les résultats obtenus révèlent qu il ya une diminution dans le poids des testicules avec la dose la plus élevée et une diminution significative dans (la concentration, la mobilité, la vitesse et la vitalité) des spermatozoïdes chez les groupes traités par rapport aux spermatozoïdes de groupe témoin, ainsi que l administration du DBP provoque une diminution significative dans le taux de la testostérone chez les groupes traités comparés aux témoins. Mots-clés : DBP, toxicité, lapin, reproduction, spermatozoïdes. 1- Introduction: Les polluants environnementaux peuvent être présents sous différentes formes de nature très variée. Dans le cadre de ce travail, nous nous sommes focalisés sur une catégorie bien particulière, les phthalates. Ces composés sont en très grande majorité issus de l industrie du plastique, pour une production dépassant plusieurs millions de tonnes par an à l échelle mondiale [1]. Il s agit de substances principalement destinées à un usage industriel. Le Di-n-butyl phthalate (DBP) est parmi les substances les plus utilisé, qui est une substance synthétique, est largement utilisé par l homme, essentiellement comme plastifiant pour les matières plastiques et élastomères, en particulier les polymères de chlorure de vinyle, d acétate de vinyle et de cellulose. Son utilisation dans la vie courante est ubiquitaire comme en témoigne sa présence dans les emballages alimentaires et dans de nombreux cosmétiques[2]. Notre présent travail à pour but d étudier l effet de DBP sur les paramètres de la reproduction chez le lapin mâle cunuculus oructolagus. 2- Méthodologie: 177

178 Ce travail est réalisé sur 24 lapins males adultes domestiques oryctolagus cuniculus (âgés entre mois), poids corporel moyenne voisin 1800 ±130g provenant de la région d Annaba, l élevage a été réalisé dans l animalerie du département de biologie animal de faculté des sciences d Annaba, dans des conditions naturelles (température, photopériode et humidité). L expérimentation consiste à administrer aux lapins trois doses croissants de DBP à raison (250, 500, 750) ppm de ce fait nous avons répartis les 24 lapins en quatre lots à raison de 06 lapins par lots. Après sacrifice et décapitation, le sang est recueilli dans des tubes secs pour récupérer le sérum afin d estimer le taux de la testostérone. Après dissection, les testicules sont prélevés et pesés à l aide d une balance de précision. Afin d estimer l effet du DBP utilisé sur la fertilité des lapins à travers quelques paramètres de la reproduction (concentration, mobilité, vitesse et vitalité des spermatozoïdes), nous avons procédé au test du sperme selon la méthode de l OMS [3]. 3-résultats lots témoin Dose I Dose II Dose III poids des testicules (g) 3,325±0,336 2,864±0,377 2,6±0,354* 2,262±0,14** Concentration x10 6 /ml 405,1±29,2 289,4±88,2** 192±53,9*** 168±45,2*** 289, La vitesse (µm/sec) 47,06±7,38 34,45±5,52** 21,533±0,744*** 13,81±1,97*** La mobilité(%) 65±6,45 40,7±11*** 24,81±3,71*** 16,48±1,83*** La vitalité(%) 68,71±2,98 34,29±5,35*** 25±4,08*** 16,57±3,74*** Le taux de testostérone ( 7,638±0,411 5,776±0,749** 3,9±0,727*** 1,23±0,548*** ng /ml) 4 références: [1] muczynski.v, 2011 polluants environnementaux et développements du testicule fœtal humain : effets et mécanismes d action des phthalates.université paris-sud 11, faculté de médecine éd 419 bio-sign. [2]Koo, H. J. and Lee, B. M. Estimated exposure to phthalates in cosmetics and risk assessment. J Toxicol Environ Health A 2004;67, [3]OMS : organisation mondiale de la santé (1993).analyse du sperme humain et de l interaction des spermatozoïdes avec le mucus cervical.e D.INSERM

179 P.105. Pollution atmosphérique et succès reproducteur des passereaux dans les oasis de la région de Gabès 1 Leila Alaya, 1 Mohamed Ali Chokri & 1 Slaheddine SELMI 1 Département des Sciences de la Vie, Faculté des Sciences de Gabès Zrig, 6072, Gabès Tunisie Résumé L objectif de ce travail était d examiner la variation de la performance reproductive des passereaux nichant dans l habitat oasien de la région de Gabès en rapport avec la distance au complexe industriel de Gabès-Ghannouche, source de polluants atmosphériques. L approche d étude a consisté dans un premier temps à comparer les paramètres de reproduction de quatre espèces de passereaux nichant dans une oasis polluée proche du complexe industriel (l oasis de Ghannouche) et dans une autre oasis moins exposée à la pollution (l oasis de Kettana, à 20km du complexe industriel). Dans un deuxième temps, nous avons utilisé les données collectées dans l oasis de Ghannouche pour vérifier s il existait une corrélation entre les paramètres de reproduction et la distance au complexe industriel. Nos résultats montrent globalement une meilleure performance reproductive dans l oasis de Kettana par rapport à celle de Ghannouche. Toutefois, à l échelle de l oasis polluée, nos résultats ne montrent pas de corrélation négative entre la distance au complexe industriel et les paramètres de reproduction étudiés. Mots clés: Bioindicateur, oasis, passereaux, pollution atmosphérique, succès reproducteur. 1 Introduction La pollution atmosphérique induit des effets nocifs sur les êtres vivants terrestres, les oiseaux entre autres, à différents niveaux d organisation: des niveaux moléculaires et cellulaires jusqu aux niveaux des populations et des communautés [1]. Des études antérieures ont montré que la reproduction et l état de santé des oiseaux peuvent être profondément affectés par les polluants atmosphériques, tels que les métaux lourds, les SO x et les NO x [2]. Les petits passereaux peuvent fournir des bio-indicateurs appropriés de la pollution atmosphérique des écosystèmes terrestres en raison de leurs taux métaboliques élevés et leurs grandes sensibilités aux xénobiotiques [3]. Dans ce travail, nous avons étudié la relation entre la pollution atmosphérique et les performances de reproduction des passereaux qui nichent dans un habitat oasien proche de la ville de Gabès, dans le sud-est de la Tunisie. Notre objectif était donc de tester si la performance de reproduction des passereaux nichant dans l habitat oasien diminue à proximité du complexe industriel. L approche générale de notre étude a consisté dans un premier temps à comparer les paramètres de reproduction de quatre espèces de passereaux nichant dans une oasis polluée (oasis de Ghannouche) et dans une autre oasis moins affectée par la pollution atmosphérique (oasis de Kettana, située à 20km au sud du complexe industriel). Dans un deuxième temps, nous avons utilisé les données collectées dans l oasis de Ghannouche pour vérifier s il existait une corrélation entre les paramètres de reproduction et la distance au complexe industriel. 2 Méthodologie Sites et espèces d étude Les données utilisées dans ce travail ont été collectées dans deux oasis situées dans le sud-est de la Tunisie: (1) l oasis de Ghannouche (33 56'N, 10 03'E) qui s'étend de 600 à 4500 m au nord-ouest du complexe industriel de Gabès-Ghannouche et (2) l oasis de Kettena (33 45'N, 10 13'E) qui est située à 20 km au sud-est de la zone industrielle et qui est supposée moins 179

180 affectée par la pollution. Quatre espèces de passereaux insectivores nichant dans ces oasis ont été incluses dans cette étude : L Agrobate roux (Cercotrichas galactotes), le Merle noire (Turdus merula), la Fauvette orphée (Sylvia hortensis) et la Pie grièche à tête rousse (Lanius senator). Collecte des données La recherche des nids a été effectuée durant les printemps 2008 et 2009 dans les deux oasis d étude. Pour chaque nid trouvé, nous avons noté une série de paramètres: date de la découverte, stade de la reproduction à la découverte, le nombre d'œufs, la date d'éclosion, le nombre d'œufs éclos, la date d'envol et le nombre de poussins à l envol. Traitement statistique des données Une analyse en composante principale (ACP) a été effectuée pour résumer les descripteurs de la performance de la reproduction en un seul facteur fournissant une mesure composite de la performance de reproduction. Les données obtenues ont été utilisées pour étudier la variation de la performance de reproduction entre les espèces et entre les oasis moyennant une ANOVA à deux facteurs. En ce qui concerne les données collectées dans l oasis polluée, une régression logistique a été effectuée pour tester la relation entre la distance au complexe industriel et la probabilité de survie des nids. Nous avons également testé la corrélation entre la distance au complexe industriel et l indice de performance reproductive (issu de l ACP) moyennant un test de corrélation de rang. Tous ces tests et analyses statistiques ont été effectués à l aide du logiciel SAS [5]. 3 Principaux résultats Le taux de survie des nids n'a pas montré de différences significatives entre l'oasis polluée et l oasis témoin pour trois des quatre espèces étudiées: L Agrobate roux (Z = 0.65, P > 0.05), la Fauvette orphée (Z = 1.08, P > 0.05) et le Merle noir (Z = 0.94, P > 0.05). Cependant, la Piegrièche à tête rousse a montré un taux de survie des nids significativement plus élevé dans l'oasis témoin par rapport à l oasis polluée (Z = 1.76, P < 0.05). D autre part, les résultats de l ANOVA montrent, pour toutes les espèces étudiées, une augmentation significative de la performance de reproduction dans l'oasis témoin par rapport à l oasis polluée (l Agrobate roux: F1, 33 = 5,03, p = 0,0317; le Merle noire: F1, 27 = 6.04, P = 0,0207; la Fauvette orphée: F1, 13 = 13.08, P = 0,0031; la Pie grièche à tête rousse: F1, 17 = 7.20, P = 0,0157). A l échelle de l oasis polluée, les résultats trouvés à partir des régressions logistiques et du coefficient de corrélation de spearman montrent que la distance au complexe industriel n a aucun effet significatif sur les paramètres de reproduction des quatre espèces étudiées. Globalement, ces résultats plaident en faveur de l existence d un effet négatif de la pollution atmosphérique sur les passereaux nichant dans l habitat oasien de la région de Gabès. Toutefois, cet effet semble plus perceptible quand on compare une oasis proche de la source de pollution à une autre située à des dizaines de kilomètres plus loin, que quand on compare des sites situées quelques centaines de mètres autour de la zone industrielle. References [1] Eeva T., Tanhuanpää S., Råbergh C., Airaksinen S., Nikinmaa M & Lehikoinen E., 2000, Biomarkers and fluctuating asymmetry as indicators of pollution-induced stress in two hole nesting passerines, Funct. Ecol. 14, [2] Burger J & Gochfeld M., 1994, Behavioral impairments of lead injected young herring gulls in nature, Fund. Appl. Toxicol. 23, [3] Belskii E.A., Lugas kova N.V & Karfidova A.A., 2005, Reproductive parameters of adult birds and morphophysiological characteristics of chicks in the pied flycatcher (Ficedula hypoleuca Pall.) in technogenically polluted habitats, Russ. J. Ecol. 36, [4] Mayfield H.F., Suggestions for calculating nest success, Wilson Bull. 87, [5] SAS Statistical Institute, SAS/STAT User s Guide, Version 8. SAS Statistical Institute, Cary. 180

181 P.106. Dosage des métaux lourds au niveau des laitances de l oursin comestible Paracentrotus lividus (Lamarck, 1816) et l eau de mer dans la région de Mostaganem (la Salamandre et Sidi Lakhdar). 1 Leila Belkhedim 1 Karima Boukhalef & 1 Saliha Dermeche, 1 Zitouni Boutiba 1 Laboratoire Réseau de Surveillance Environnementale, Département de Biologie Faculté des Sciences Université d Oran halieu_6@yahoo.fr, belkhedillila@yahoo.fr. ABSTRAT La contribution que nous tentons d apporté sur la connaissance de l oursin commun Paracentrotus lividus (Lamarck, 1816) l étude de l évolution au cours d une année (novembre 2010 à octobre 2011) de la contamination métallique au niveau des laitances par le cadmium (cd), le fer (fe), le cuivre (cu), et le zinc (zn), vivant dans deux biotopes différents : l un rocheux et photophile (La Salamandre), et l autre riche en algues photophiles et présence de Posidonie (Sidi Lakhdar)., et de l eau de mer provenant des deux sites d étude, déterminés par Spectrophotométrie d Absorption Atomique à Flamme. Tous les polluants recherchés sont présents avec des concentrations très hétérogènes et que cette espèce marine accumule relativement d importantes quantités de ces métaux toxiques en proportion avec la biodisponibilité du polluant dans le milieu environnant. Mots clés : Paracentrotus lividus, métallique. littoral occidental, La Salamandre, Sidi Lakhdar, pollution 1Introduction L eau est un vecteur majeur des contaminants anthropiques et par conséquent les écosystèmes aquatiques sont particulièrement vulnérables. Les risques occasionnés par un polluant sur un écosystème revient à étudier d une part, l exposition à laquelle il est soumis (niveaux de concentrations) et d autre part, le danger de la substance par rapport aux organismes qui y évoluent et par voie de conséquence sur la santé publique (Setter, 1993 ; Meyer, 2003). Parmi ces organismes marins P. lividus est un élément fondamental des écosystèmes littoraux (Fernandez, 1996) ; modèle très utilisé pour la recherche [1]. L objectif de notre travail de recherche est une quantification du niveau de contamination métallique au niveau des laitances de P.lividus et de l eau de mer pour évaluer la qualité du milieu marin. 2 Methodology La collecte de 336 oursins effectuée de Novembre 2009 à Octobre 2010 à une profondeur de 3 m de deux sites de position géographique et de structure différentes, l un se situe à la Salamandre (de latitude ( N) et de longitude ( E) a substrat de nature rocheuse et photophiles, et l autre est Sidi Lakhdar (latitude est ( N) et de longitude ( E) riche en algues photophiles et présence de la phanérogame Posidonia oceanica [1]. 3 Main Results 14 individus ont servi à la quantification de la pollution métallique (sur les gonades mâles et femelles) au niveau des deux sites. Pour le traitement statistique, le test kh2 à été pris en considération, pour le traitement de la contamination métallique [1, 2, 3]. 181

182 Tableau 1 : Moyenne des métaux lourds (± écart type) (ppm PF) au niveau des gonades mâles et femelle de l oursin commun P. lividus de la Salamandre. (male) Cu Var Cd Var Fe Var Zn Var Automne 0,035 0,0000 0,008 5X10-5 1,475 0,11 0,682 0,006 (0,006) 4 (0,002) (0,33) (0,08) Hiver 0,031 0,0001 0,008 1X10-5 1,398 0,02 0,202 0,008 (0,01) (0,001) (0,132) (0,1) Printemps 0,014 3X10-4 0,005 1X10-4 1,283 0,366 0,286 0,024 (0,006) (0,003) (0,60) (0,155) Eté 0,016 7X10-5 0,0087 5X10-6 1,586 0,004 0,154 0,0003 (0,003) (0,0007) (0,063) (0,02) (femelle) Cu Var Cd Var Fe Var Zn Var Automne 0,04 1X10-6 0,0138 1X10-5 0,704 0,02 0,208 0,00004 (0,0004 (0,001) (0,132) (0,009) Hiver 0,026 2X10-4 0,007 2X10-4 0,59 0,06 0,321 1X10-4 (0,005) (0,005) (0,24) (0,004) Printemps 0,02 2X10-4 0,01 1X10-6 1,23 0,57 0,204 8X10-3 (0,004) (0,0004) (0,77) (0,03) Eté 0,006 (0,002) 2X10-5 0,007 (0,002) 4X10-5 1,19 (0,06) 0,004 0,12 (0,04) 0,002 Tableau 2 : Moyenne des métaux lourds (± écart type) (ppm PF) au niveau des gonades mâles et femelle de l oursin commun P. lividus de Sidi Lhakdar. male Cu Var Cd Var Fe Var Zn Var Automne 0,04 1X10-6 0,0138 1X10-5 0,704 0,02 0,208 0, ,0004 (0,001) (0,132) (0,009) Hiver 0,026 (0,005) 2X10-4 0,007 (0,005) 2X10-4 0,59 (0,24) 0,06 0,321 (0,004) 1X10-4 Printemps 0,02 2X10-4 0,01 1X10-6 1,23 0,57 0,204 8X10-3 (0,004) (0,0004) (0,77) (0,03) Eté 0,006 2X10-5 0,007 4X10-5 1,19 0,004 0,12 0,002 (0,002) (0,002) (0,06) (0,04) femelle Cu Var Cd Var Fe Var Zn Var Automne 0,04 (0,005) Hiver 0,04 (0,01) Printemps 0,03 (0,02) Eté 0,006 0,0004) Référence : 2X10-4 0,006 (0,003) 1X10-4 0,002 (0,0005) 0,0004 0,002 (0,0002) 3X10-6 0,005 (0,001) 9X10-5 0,97 (0,15) 3X10-6 0,78 (0,125) 6X10-7 0,98 (0,37) 1X10-5 1,07 (0,3) 0,02 1,02 (0,73) 0,015 1,15 (0,5) 0,14 1,11 (0,35) 0,07 1,25 (0,5) [1] Dermeche S ; 2010, Indices physiologiques, métaux lourds et bioessais chez l oursin commun Paracentrotus lividus (Lmck,1816) de la côte oranaise (Algérie Ouest). Doctora en pollution marin. Uni Oran. p [ 2] Semroud, R 1993, Contribution à la connaissance de l écosystème a Posidonia oceanica (L.) Delile dans la région d Alger (Algérie) : étude de quelques compartiments. These Doct.: U.S.T.H.B- Alger. 219p [3] Soualili, D.L., 2008, Les populations naturelles d oursins : un outil évaluateur de l état desanté de la d Alger.Thèse.Doct.Océan.Univ.U.S.T.H.B. pp 147+annexes. 0,53 0,24 0,12 0,21 182

183 P Phosphorus removal kinetics by bacteria isolated from a sludge system 1 Leyla Benammar, 2 Mokhtar Hamames, 3 Messaoud Benounis, & 4 Ammar Ayachi 1 Department of Natural Sciences and Life, University of Abbés Laghrour, Khenchela, 40004, Algéria 2 Department of Natural Sciences and Life, University of Abbés Laghrour, Khenchela, 40004, Algéria 3 Faculty of Science and Technologie, Université Abbès Laghrour, Khenchela, 40004, Algéria 4 Institute for Animal Science and Agronomy, Department of Animal Science, Université Hadj Lakhder, Batna, 05000, Algéria. Abstract This study comes within the framework of a PNR project for the development of new sensors applied to the control and analysis of chemical pollutants in water, allowed to evaluate kinetics of biological removal of phosphate by a mixed culture of activated sludge taken from the wastewater treatment plant in the city of Khenchela (Algeria), as well as the isolation and identification of dominant strains involved in the accumulation of phosphate. We are also interested in studying and comparing the ability of different isolates strains to remove phosphate. Keywords: Phosphate, wastewater, polyphosphate accumulation bacteria, activated sludge, batch culture. 1 Introduction Phosphorus is one of the major components of all living cells, however, its presence in ecosystems at high concentrations, affects the quality of water resources and can cause many problems; therefore a control of its quantity in effluent release has become an important key to improving the quality of these ecosystems. It is in this context that the biological phosphorus removal intervenes to remedy this problem. 2 Methodology Evaluation of phosphate removal is achieved by the determination of phosphate by colorimetric method with ascorbic acid. The isolation of dominant strains is performed on a minimal medium agar. Furthermore, the identification of bacterial strains was performed using the system API-20 NEbioMérieux. 3 Main Results This work shows the ability of the microbiota of activated sludge to remove phosphates, nearly 92.87% of the initial concentration of phosphate is removed after 80 hours, with an average speed of accumulation of 0,215 mg.l -1.h -1.We also find that the rate of phosphate removal by mixed culture is proportional to the initial concentration of carbon source (Fig. 1). The study of the influence of different carbon sources on biological phosphorus removal by mixed culture shows that the different carbon sources used to enrich the synthetic medium greatly influenced the growth and efficiency the phosphate removal (Fig.2, 3, 4). Indeed the four carbon sources used (acetate, glucose, lactose and lactate) allowed optimal growth of all mixed cultures tested. The largest growth is obtained by glucose, followed by acetate, then lactose, and finally lactate presented the lowest absorbance (D.O.). 183

184 On the rate of phosphate removal, among all carbon sources used acetate gave the best performance of phosphate removal with a rate of 92.87% followed by lactate 78.51%, and then glucose 71.22%, and finally lactose with a rate of 61.05%. According to our results, acetate and lactate allowed a good phosphate removal compared to other carbon sources used, demonstrating that the volatile fatty acids with short chain substrates are most favorable for biological phosphorus removal. Among all the carbon sources used, acetate only allowed to have a phosphate concentration after treatment of 0.13 mg L -1 concentrations relatively lower than 1 mg L -1. This reflects a satisfactory treatment since the phosphate concentration is known polluting beyond 1 mg.l -1. The identification of microbial groups involved in the process of biological phosphorus removal reveals the presence of eight bacterial strains able to accumulate phosphate as polyphosphates stored in volutines located in their cytoplasm. It is also proved that higher rate of phosphate removal were obtained by strains belonging to the Proteobacteria class. Fig. 1. Phosphate concentration and bacterial growth with a mixed culture of activated sludge Fig. 2. Influence of lactate on the elimination of phosphate and on growth Fig.3. Influence of lactose on the elimination of phosphate and on growth Fig.4. Influence of lactose on the elimination of phosphate and on growth 184

185 P.108. Stress oxydatif, histopthologie et apoptose induits par l endosulfan chez la ratte gestante Leila Bouhafs 1,, Mesbah Lahouel 1, Jean-Marie Exbrayat 2, Khemais Benrhouma 3 1 Laboratoire de Toxicologie Moléculaire Jijel, Université de Jijel, Algérie 2 Laboratoire de Biologie, Faculté des Sciences, Université catholique Lyon, France 3 Laboratoire de Physiologie intégrée, Faculté des Sciences de Bizerte, Tunisie Résumé L endosulfan est encore le pesticide le plus largement utilisé dans le contrôle des insectes dans de nombreux régions du monde, y compris l Algérie, malgré qu il est actuellement interdit ou sévèrement limité en usage dans certains pays. L endosulfan est un important agent hépatotoxique qui génère des radicaux libres de l oxygène dans le foie, cette étude s intéresse à l évaluation des dommages hépatiques induit chez la ratte gestante Wistar albinos à la suite d une exposition subaigüe à l endosulfan. L insecticide a été administré par gavage à raison de 4mg /Kg durant 19 jours, le traitement a révélé en comparaison avec le lot témoin, une augmentation significative des transaminases( ASAT et ALAT) ;une élévation significative(p<0,05) du taux de MDA,du gamma GT, de la SOD et de la CAT. Les coupes histologiques indiquent, une congestion périvasculaire, une désintégration cellulaire et une perte de cohésion ; la méthode TUNEL (TdT-mediated Dutp Nick End Labelling) et la technique Apostain montrent la présence des noyaux apoptotiques. Ainsi l endosulfan par sa toxicité a induit un stress oxydant au niveau du foie et une apoptose hépatocellulaire. Mots clés : Endosulfan ; hépatotoxicité ; histologie ; apoptose ; TUNEL 185

186 P.111. CARACTERISATION ET DYNAMIQUE DES PEUPLEMENTS DE PUCES DE LA FAUNE DOMESTIQUE : IMPACT SUR LA SANTE 1 Madoui Bachir El mouaz, Bouslama Zihad, Bouattour ali 1 Laboratoire d écologie des écosystèmes terrestres et aquatiques. Université Badji Mokhtar d Annaba Abstract L histoire d'associations biologiques peut être observée d une manière, telles des associations proie-prédateur, hôte-parasite, hôte-symbiote.etc Les systèmes hôte-parasite en particulier constituent l un des modèles d étude de l écologie évolutive exemplaires. Le parasitisme est un mode d interaction interspécifique, défini par l'exploitation du vivant par le vivant (Combes 2001). C est le plus commun des modes de vie sur cette planète, impliquant des représentants des principaux taxons, depuis les plus simples organismes unicellulaires à des vertébrés complexes. Chaque espèce est potentiellement victime de plusieurs parasites; en conséquence, le nombre d'espèces parasites excède grandement le nombre d'espèces «autonomes» (Morel 1974). Cependant nous nous sommes intéressés aux puces, plus précisément des animaux domestiques qui feront l objet d une étude plus détaillée. L objectif de ce travail est d identifier les espèces trouvées et de mettre en avant leurs rôle en tant que vecteurs d agents pathogènes, ainsi que de connaître l importance des maladies vectorielles qui leur sont associées dans notre région (détection des agents pathogènes par PCR). Keywords: Siphonaptères puces espèces Maladies vectorielles - PCR. 1 Introduction Environ 2500 espèces et sous-espèces avaient été décrites à la fin du XXe siècle (Lewis 1998) et plus de 200 genres dont la plupart se regroupent dans 17 familles et 2 super-familles: les Pulicoidea (deux familles: Tungidae et Pulicidae) et les Ceratophylloidea (15 familles).ce sont des ectoparasites de mammifères et plus rarement d oiseaux, les adultes mâles et femelles sont hématophages et ont la faculté de sauter. Le parasitisme des puces est obligatoire. Cependant, si leur situation en tant qu ectoparasite peut être permanente, elle n est le plus souvent qu occasionnelle (in Med Trop 2006). Cependant nous nous sommes intéressés aux puces, plus précisément des animaux domestiques qui feront l objet d une étude plus détaillée. L objectif de ce travail est d identifier les espèces trouvées et de mettre en avant leurs rôle en tant que vecteurs d agents pathogènes, ainsi que de connaître l importance des maladies vectorielles qui leur sont associées dans notre région (détection des agents pathogènes par PCR). 2 Methodology Pour la récolte des puces nous avons visé quatre modèles hôtes, séparé en deux hôtes Pour la collecte des puces sur chiens et chats, différentes habitations de différents endroits ont été ciblées, des pièges ont été installé tout le long de nos mois d étude qui s étalent sur une période d une année. 186

187 Fig.1 cycle evolutif de la puce 3 Main Results: Les maladies infectieuses sont un enjeu de société important puisqu elles sont aujourd hui responsables de 19 % de l ensemble de la mortalité humaine mondiale, et représentent même 53 % des décès en Afrique (WHO, 2004) References 1. SAVARY de BEAUREGARD B - Contribution à l étude épidémiologique des maladies vectorielles bactériennes observées chez le chat dans le Sud de la France Th Doctorat ; Raoult D, La Scola B, Enea M, Fournier PE, Roux V, Fenollar F, Galvao MAM,De Lamballerie X (2001) A flea-associated Rickettsia pathogenic for humans.emerg Infect Dis 7: Rolain JM, Franc M, Davoust B, Raoult D (2003) Molecular detection of Bartonella quintana, B. koehlerae, B. henselae, B. clarridgeiae, Rickettsia felisand Wolbachia pipientis in cat fleas, France. Emerg Infect Dis 9:

188 P.113. Down-regulation of SlARF4, an auxin-response-factor, in the tomato results in a pleiotropic phenotype including dark green and blotchy ripening Maha Sagar 3, Christian Chervin 1,2, Isabelle Mila 1,2, Mohamed Benichou 3, Yves Gibon 4,5, Benoît Biais 4,5, Mondher Bouzayen 1,2 and Mohamed Zouine 1,2 1 University of Toulouse, INPT, Laboratory of Genomics and Biotechnology of Fruit, Avenue de l'agrobiopole BP 32607, Castanet-Tolosan F-31326, France 2 INRA, UMR990 Génomique et Biotechnologie des Fruits, Chemin de Borde Rouge, Castanet-Tolosan, F-31326, France 3 Université Cadi Ayyad, faculté des sciences Semlalia, Laboratoire des Sciences des Aliments, Avenue Prince Moulay Abdellah, B.P Marrakech, Maroc 4 INRA, UMR 1332 Biologie du Fruit et Pathologie, F Villenave d Ornon, France 5 Univ. Bordeaux, UMR 1332 Biologie du Fruit et Pathologie, F Villenave d Ornon, France Abstract The phytohormone auxin is known to regulate various aspects of plant development, including apical dominance, tropisms, vascular patterning and fruit set. Auxin signaling is a linear transduction pathway leading to the activation of Auxin Response Factor (ARF) reported to promote the auxin-dependent gene transcription underlying plant responses to this hormone. The expression pattern of Sl-ARF4, a gene encoding an ARF in the tomato (Solanum lycopersicum), suggests its potential role in fruit development. Quantitative PCR analysis revealed increased Sl-ARF4 transcript levels in flowers and young fruit followed by a dramatic decline at the onset of fruit ripening. The functional significance of Sl-ARF4 was addressed by reverse genetics approach via its down-regulation in tomato transgenic plants. Phenotypes displayed by the SlARF4-suppressed lines include dark-green immature fruit, upward curling leaves and higher sugar content in mature fruit. This latter was associated to higher starch content in developing fruits. Ripening fruits of transgenic plants accumulated higher amounts of soluble sugars like glucose and fructose. The present data uncover new roles for ARFs during the development of fleshy fruits and hence, confirm that auxin also controls fruit ripening and overall fruit quality. Keywords: Auxin, Sl-ARF4, sugar metabolism, fruit development, Tomato (Solanum lycopersicum) Introduction Successful completion of fruit development program depends on the interplay between multiple phytohormones, yet, beside ethylene the impact of other hormones on fruit quality traits remains elusive. Previous study showed that down-regulation of Sl-ARF4, a member of the tomato (Solanum lycopersicum) Auxin Response Factor (ARF) gene family, results in dark green fruit phenotype with increased chloroplasts number [1]. To further address the link between auxin signaling and sugar metabolism, the present study carries out metabolic and transcriptomic analyses of antisense and cosuppressed transgenic lines for the Sl-ARF4 gene, showing that Sl-ARF4 controls chlorophyll and sugar accumulation specifically in the fruit. Methodology The biological function of the gene Sl-ARF4 was investigated initially by reverse genetic approaches "sense" and "antisense" to generate transgenic plants with under-expression or over-expression of the gene Sl-ARF4. Transgenic lines generated were subsequently characterized by morphological, physiological, and metabolomics analysis also by gene expression analysis using quantitative PCR and generation of transgenic lines expressing the GUS coding sequence driving by the promoter of Sl- ARF4 gene to further explore the biological function of this gene specifically during fruit development. 188

189 Main Results The Sl-ARF4 under-expressing lines accumulate more starch at early stages of fruit development and display enhanced chlorophyll content and photochemical efficiency, consistent with the idea that fruit photosynthetic activity accounts for the elevated starch levels. Sl-ARF4 expression is high in pericarp tissues of immature fruit and then undergoes a dramatic decline at the onset of ripening concomitant with the increase in sugar content. The higher starch content in developing fruits of Sl-ARF4 downregulated lines correlates with the up-regulation of genes and enzyme activity involved in starch biosynthesis suggesting their negative regulation by Sl-ARF4 References [1] Jones, B., Frasse, P., Olmos, E., Zegzouti, H., Li, Z. G., Latché, A., Pech, J. C. and Bouzayen, M. (2002). Down-regulation of DR12, an auxin-response-factor homolog, in the tomato results in a pleiotropic phenotype including dark green and blotchy ripening fruit. Plant J. 32,

190 P.114. Contamination of irrigation water by cyanotoxins (Microcystins): Effects on the potential symbiotic association between rhizobia and Vicia faba M. Lahrouni 1, K. Oufdou 1, F. El Khalloufi 1, B. Oudra 1 1 Department of Biology, Laboratory of Biology and Biotechnology of Microorganisms, Microbiology and Environmental Toxicology Unit, Faculty of Sciences Semlalia Marrakesh, Cadi Ayyad University, P.O. Box 2390, Marrakesh 40000, Morocco. s : lah.majida@yahoo.com Abstract The eutrophication of aquatic ecosystems has become a widespread phenomenon. This leads to excessive proliferation of cyanobacteria, most of which are known to be toxic or potentially toxic. In Morocco, specifically in Marrakesh region, "Lalla Takerkoust" Lake is subject to frequent appearances of toxic Microcystis aeruginosa blooms. A significant portion of this water is used for irrigation of crop with important agronomic interest. HPLC analysis of the bloom, harvested from the reservoir, showed a mixture of five variants of Microcystins (MCs) with a high amount of dissolved MC concentration. The aim of this study is to evaluate the effect of cyanotoxins such as microcystins MC-LR on germination growth and physiology of faba bean. Vicia faba is among the most food legumes grown in Tensift Marrakesh El Haouz (Morocco). The work evidences that irrigation with lake water contaminated with cyanotoxins MC-LR results on an inhibitory effect on dry matter, photosynthetic activity, nodules number as well as nitrogen assimilation and can lead to an increase of oxidative stress. Peroxidase (POD), Catalase (CAT), Polyphenoloxidase (PPO) and Phenylalanine amonialyase (PAL) activities were significantly increased in leaves, roots and nodules of faba bean plants exposed to cyanotoxins especially at 100 µg/l of MCs. All this investigations suggest that plant chronic exposure to MC could have a net repercussion on the life cycle of the plants. And cyanotoxin phytotoxicity strongly suggests a need for the surveillance of CyanoHAB and the monitoring of water irrigation quality as well as for drinking water. Keywords: Water contamination, Cyanobacteria, Microcystins, faba bean, growth, symbiosis. Acknowledgements: This work is funded by the International Foundation for Science (project no ifs F/2826-3F), Bilateral project CNRST-Morocco and FCT-Portugal and Bilateral project Morocco- Spain (AECI project). 190

191 P.115. Composition chimique et activités antioxydantes des huiles essentielles (Fleurs) de Pituranthos chloranthus Malika.Maamri 1,2, NadhirGourine 1, Mohammed Ouinten 2, Mohammed Yousfi 1 1 Laboratoire des Sciences Fondamentales, B.P. 37G Université Amar TELIDJI, de Laghouat, ALGERIE 2 Laboratoire de Génie des Procédés, B.P. 37G Université Amar TELIDJI, de Laghouat, ALGERIE Résumé Cette étude a été conçue pour examiner les activités antioxydantes des huiles essentielles extraites par hydrodistillation des fleures de Pituranthos chloranthus. La composition chimique a été étudiée en utilisant les techniques CPG et CPG/SM. δ-3-carène, β-pinène, myristicin et dill apiol sont respectivement, les composés majeurs de ces huiles. Le dosage des phénols totaux a montré que les huiles essentielles des fleurs de cette plante sont pauvres en composés phénoliques. De plus, l activité antioxydante évaluée par deux méthodes différentes, a montré que ces huiles ont un effet réducteur important qu antiradicalaire. Les mots clés : Pituranthos chloranthus, huiles essentielles, activité antioxydante, phénols totaux. 1) Introduction Pituranthos chloranthus (Benth & Hook) est une plante endémique de l Afrique du Nord (Apiaceae), connue sous le nom de «Guezzah», cette plante a été utilisée en médecine traditionnelle pour traiter la Diabète, l Hypertension artérielle, l Asthme, l Eczéma, et pour faciliter la digestion [1. Notre pays offre, grâce à sa situation géographique et son climat, des potentialités énormes du point de vue de la production végétale spontanée. Dans le cadre de la valorisation des produits naturels, nous nous sommes intéressés à l étude de la composition chimique des huiles essentielles des fleurs de Pituranthos chloranthus originaire de cinq régions en Algérie, leur contenu en composés phénoliques, ainsi que leur activité antioxydante d une part et de mettre en évidence leurs importances sur le plan pharmaceutique et phytopharmaceutique, d autre part. 2) Méthodologie Les huiles essentielles ont été extraites par la méthode d hydrodistillation (Clevenger), l analyse chromatographique ces huiles a été effectuée par chromatographie en phase gazeuse (CPG) et par chromatographie gazeuse couplée au spectromètre de masse (CG/SM). Les Tests biochimiques - Le dosage des phénols totaux dans les huiles essentielles a été effectué à l aide d un spectrophotomètre, selon la méthode d Emmerie- Engel [2. - Le pouvoir antioxydant a été évalué par deux méthodes : 1. Méthode de DPPH (2,2-diphényle-1-picrylhydrazyl) ; cette méthode basée sur la réduction du radical libre DPPH. DPPH. DPPHH Figure 1 : La réduction de DPPH en DPPHH [3. 191

192 2. Méthode de Molybdate-Phosphate : elle est basée sur la réduction du Molybdate (VI) en Molybdate (V), en présence des extraits et la formation d un complexe de Molybdatephosphate de couleur vert-bleu à PH acide [4. 3) Les principaux résultats Nos échantillons ont fournit des teneurs très élevés en huile essentielle comparés à ceux rapportés par des études faites en Tunisie. Les résultats de l analyse chromatographique ont montré ces huiles sont dominés par les hydrocarbures monoterpéniques. Les résultats de quantification des phénols dans les huiles essentielles des cinq régions sont représentés dans le tableau suivant : Tableau 1 : Les teneurs en composés phénoliques totaux dans les huiles essentielles. Les regions Teneur en poly phénols (µg/g d HE) *R1 0,90 ± 0,04 R2 0,86 ± 0,07 R3 1,44 ± 0,02 R 4 1,25 ± 0,04 R5 0,88 ± 0,08 *R : région (au sud de l Algérie) Les résultats du test de DPPH ont montré que les cinq échantillons des huiles essentielles étudiées ont une capacité antiradicalaire faible comparée à celle de l acide ascorbique, la Vitamine E et le Butyl hydroxyanisole. Par contre elles ont montré un pouvoir réducteur important par le test de Molybdate. 4) Références [1 - Neffati A., Skandarani I., Bouhlel I., Ben Sghaier M, Hadj Salem J., Ben CHibani J., Neffati M., Barillier D., Ghedira-Chekir L., Ghedira K., A comparative evaluation of mutagenic, antimutagenic and scavenging radicals activity of essential oil from Pituranthos chloranthus (Coss. et Dur). Revue des régions arides Vol 1, [2 - Emmerie A., Engel,1939. C., Rec. Trav. Chim, 58, [3 - Kouamé J., Gnoula C., Palé E., Bassolé H., Guissou I.P., Simporé J., Nikiéma J-B., Etude des propriétés cytotoxiques et anti-radicalaires d extraits de feuilles et de galles de Guiera senegalensis J. F. Gmel (Combretacae). Science et technique 32, [4 - Kaloustian J., Chevalier J., Mikail C., Martino M., Vergnes M-F., Etude de six huiles essentielles : composition chimique et activité antibactérienne. Pharmacognosie 6,

193 P.116. Essais préliminaires à la Biodépollution par Pleurotus ostreatus (Jacq : Fries) Kummer : Recherche d un support nutritif pour le transport du mycélium 1 Malika Mansour Benamar, 1 Samia Zaoui-Mebrek, 1 Karima Bachi 1, Hocine Zaabot, 1 Fraoucene Sadedine 1 &Nadia Ammar-Khodja*, Laboratoire de Production, Amélioration et Protection des Végétaux et des Denrées Stockées, Facultédes Sciences Biologiques et des Sciences Agronomiques. Université M. MAMMERI de Tizi-Ouzou. Algérie. Résumé Notre étude vise à vérifier les capacités des mycélia de deux souches de Pleurotus ostreatus (Jacq: Fr.) Kummer, une locale et une commerciale à se développer sur les carburants usuels en Algérie: le gasoil et l essence (normale, sans plomb, avec plomb), et comment transporter ces mycélia. Les mycélia ont d abord été fabriqués sur milieu gélosé et sur grain d orge (blanc de pleurote) puis mis en contact avec 2ml et 5 ml de carburant additionnés ou non de milieu gélosé dans des boite de Pétri en verre. L analyse statistique a révélé que les 2 souches de Pleurote ont même comportement et que le gasoil à 2ml parait moins toxique que l essence et que la forme blanc de champignon est plus indiquée Nous avons ensuite cherché à savoir si d autres substrats : millet, sciures des bois de chêne (zeen, afares et liège) seraient meilleurs que l orge et quelle est la dose létale de gasoil. Mots clés : Pleurotus local-pleurotus commercial- mycélium-carburants-croissance 1 Introduction Les hydrocarbures occupent une place particulière dans les préoccupations environnementales car ils sont produits en quantités importantes par les industries pétrolières [1].En effet, le devenir de certains hydrocarbures dans l environnement inquiète à cause de leurs caractères ubiquistes et leur génotoxicité. Les principales sources de pollution sont liées à des déversement accidentels, lors de manipulation de produits, de l évacuation de déchets, de la distribution de carburants ou de fuites non détectées, lors de stockage de déchets ou de voitures accidentées, à partir des réservoirs, de produits nuisibles pour l environnement (carburants, huile à moteurs, liquide de frein ) Actuellement, une batterie de procédés physico-chimiques est disponible pour traiter ces polluants. Mais leur coût est prohibitif. La nature doit être aidée à maintenir son équilibre en évitant de surcharger les écosystèmes et en activant les processus de dégradation. En effet la biodégradation des composés polluants par des micro-organismes constitue une solution avantageuse et présente un avenir prometteur [2]. Certains champignons de la pourriture blanche comme Pleurotus ostreatus (Jacq: Fries) Kummer ont un potentiel élevé de sécrétion d enzymes extracellulaires leur permettant de s attaquer à une très large gamme de composés naturels ou xénobiotiques[3,4]),ouvrant ainsi de nouvelles perspectives en matière de dépollution pour la réhabilitation des sols[5]. Par exemple P. ostreatus est capable de dégrader des polluants persistants dans les sols, comme les hydrocarbures grâce à leurs exoenzymes [6] 2 Matériel et méthodes Matériel : Souches de Pleurote : POC : P. ostreatus commercialisée par la Société Royal Champignon de France. POL : Pleurote ostreatus Locale, isolée à Oued Aissi (Tizi-Ouzou, Algérie) [7 ] Milieu de culture gélosé : Raper Complet (RC) [ 8] Substrats de Blanc de pleurote : Millet, Orge, sciures de bois de chêne afares, chêne liège et chêne zeen. 193

194 Carburants testés : Essence Normale, essence sans plomb, essence avec plomb et gasoil et pétrole brut. Méthodes : Préparation du milieu RC et du mélange RC-carburant Production et multiplication des mycelia de POC et de POL sur le milieu RC [8] Fabrication de blanc de POC et de POL selon la méthode décrite par Benamar et Chavant[9] 1 ères séries d essai : Préparation des boites en verre stérile avec 2 ml et 5 ml de carburant. Une partie a été ensemencée avec des rondelles de mycélium de 1 cm de diamètre découpées dans les cultures obtenues sur le milieu RC (1 implant/boite), l autre partie par les grains d orges enrobés de mycélium appelé blanc (5grains/boite) (10 répétitions /essai) 2 èmes séries d essai : Préparation des boites de Pétri stériles avec 2 ml à 9 ml de carburant (gasoil et les 3 essences) (7 répétions) et ensemencement avec 10g de blanc. Evaluation de la reprise d activité des mycelia en estimant la surface occupée par le mycélium nouvellement formé après 15 jours d incubation. La moitié des boites a été perforée pour permettre l aération l autre non. Vérification de l activité de dégradation du pétrole par l analyse FTIR 3 Principaux résultats - L essence est toxique pour le mycélium. L addition du milieu gélosé n a pas permis une grande croissance mycélienne de POC et de POL. Le gasoil semble moins toxique - Le blanc à base d orge résiste mieux que les rondelles d inoculum - Les deux souches ont un comportement significativement similaire- - Les résultats obtenus avec le millet sont significativement semblables à ceux obtenus avec l orge - Les sciures de chênes ont donné des résultats semblables mais médiocres - 9ml de gasoil constitue une dose létale -Le spectre FTIR a permis de mettre en évidence la disparition du groupement COO - et l apparition de 2 groupements C=O des fonctions amide et ester dans le pétrole après action du Pleurote References [1] Bernal-Martinez A., Elimination de des hydrocarbures aromatiques polycycliques présents dans les boues d épuration par couplage ozonation - digestion anaérobie. Thèse de doctorat de l université des Sciences et Techniques du Languedoc. Montpellier II. France, p 36. (14 septembre 2005). [2]Jerom J., Perry, James T, Staley, Microbiologie: Cours et questions de révisions. Edition Dunod. Paris. pp [3] Sayadi S., Ellouz R., Roles of lignin peroxydase and manganese peroxydase from Phanerocheate crysosporium in the decolorization of olive mill waste waters. APP. Micro. Biotech. 61, 3, pp [4] Coneza A., Vandnmondel C.M., Punt P.J., Studies of the production of fungi peroxidases in Aspergillus niger, APP. Microb. Biotech: pp [5] Bernnett J.W., Faison B.D., Use of fungi in biodegradation In Environmental Microbiology, ASM Press, Washington. [6] Martens R., Zadrazil F., Screening of white rot fungi for their ability to mineralize Polycyclic Aromatic Hydrocarbons. In International Symposium Proceeding Soil Decontamination Using Biological Process. Karlsruhe/D, 6-9 December, Schön and Wetzel GMbH, Frankfurt, pp [7] Mansour-Benamar M, Savoie J M, Chavant L, Lebsir R (2007). Valorisation du marc de café brut par la culture d une souche locale de champignon comestible, Pleurotus ostreatus. Sci. Technol. Dév. ANDRU 2: [8] Raper CA, Raper J & Miller R ( 1972). Genetic analysis of the life cycle of Agaricus bisporus. Mycologia 64 (5), [9] Benamar M & Chavant L (2010) Guide illustré de la culture d un champignon comestible: le pleurote en huître. Editions El Amel, Tizi-Ouzou 194

195 P.117. USE OF BASIL EXTRACT AS A POTENTIAL ALTERNATIVE TO SYNTHETIC ANTIOXIDANTS Manel Ben-Ali 1, Khalil Dhouib 1, Mohamed Damak 1, Noureddine Allouche 1 Laboratory of Chemistry of Natural Products, Faculty of Sciences of Sfax, University of Sfax, BP 1171 Sfax 3000, TUNISIA. Abstract The antioxidant efficacy of basil extracts was estimated in stabilization of sunflower oil. The basil essential oil was analyzed by gas chromatography mass spectrometry. Twenty two compounds were identified representing 93.74% of the total essential oil. Basil methanolic extract was thermally evaluated by heating at 185 C. At the 100 min heating time, the extract exhibited antioxidant activity higher than that of BHT. Different concentrations of methanolic extract were added to sunflower oil. Selected parameters (i.e. weight gain, induction period to primary oil oxidation, peroxide value, conjugated dienes and conjugated trienes) were considered for evaluating the effectiveness of basil in stabilization of sunflower oil. Basil methanolic extract showed good antioxidant activity according to synthetic antioxidants. Basil may be used as natural antioxidants to prevent vegetable oils oxidation. Keywords: Basil; Essential oil; Sunflower oil; Antioxidant activity; Thermal stability. 1 Introduction Lipid peroxidation is responsible for the stability problems of vegetable oils, fats and other food systems. Oil manufacturers aim at producing foods that maintain their shelf life and nutritional quality over a defined period. Thus, the use of synthetic antioxidants to minimize the oxidation of lipids in food materials is extensively practiced. But the use of these additives may be implicated in many health risks, including cancer and carcinogenesis [1]. In these circumstances, research of safer natural antioxidants is the goal of many laboratories [2]. Plant extracts provide phenolic antioxidants that might exhibit strong activity. Ocimum basilicum L., basil, was reported as a source of aroma compounds. It is well known that the high antioxidant capacity of basil extracts in medicine and food industry is attributed to the presence of a substantial concentration of rosmarinic acid [3, 4]. Other caffeic acid derivatives, such as chicoric acid, were also found in high concentrations [5]. The purpose of this work was to estimate the efficiency of basil extracts against oil oxidative deterioration. Refined, bleached and deodorized (RBD) sunflower oil was chosen to evaluate the antioxidant efficiency of basil extracts, because of its wide use among Tunisian population and due to its higher content of polyunsaturated fatty acids. 2 Methodology The extracts of basil leaves were obtained using maceration overnight at room temperature (25 C) with organic solvents of increasing polarity: hexane, ethyl acetate and methanol. Essential oil Extraction from the fresh aerial part of basil was carried out by hydro-distillation for 4 hours in a Clevenger-type apparatus giving greenish-yellow oil. 195

196 In the present work, the 1, 1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radical-scavenging assay and the ß- carotene bleaching inhibitory assay systems were successfully used for the evaluation of the antioxidant activity of crude extracts and essential oil [6]. Total soluble phenolic compounds in the extracts were measured according to the method of Singleton and Rossi [7] and expressed as gallic acid equivalent. Analysis of the essential oil was performed on a Gas chromatography mass spectrometry (GC MS). Methanolic extract, exhibiting the powerful antioxidant activity, was used for further studies: thermal stability, oxidative stability and Weight gain analysis of Sunflower oil samples. The sunflower oil oxidative rancidity evaluation was performed by Induction period (IP) and Peroxide value (PV) estimation. For further confirmation of these results, other oxidation parameters, i. e., conjugated dienes (CD) and conjugated trienes (CT) values were also measured [6]. 3 Main Results Basil Essential oil GC MS analysis resulted in the identification of 22 compounds representing 93.74% of the total essential oil. Methanolic extract exhibited the highest yield and radical scavenging activity compared with BHT. Therefore, this extract was used in the assay of sunflower oil stabilization. From the present investigation, it was clear that basil methanolic extract can stabilize sunflower oil very effectively. It inhibits thermal deterioration of oil by improving its hydrolytic stability and inhibiting double bond conjugation. Basil extract at concentration of ppm has stabilization efficiency comparable to conventional synthetic antioxidants, i.e. BHT at its legal limit. Therefore, on behalf of this study, basil methanolic extract may act as an alternative to synthetic antioxidants for use in the food industry, especially in the stabilization of vegetable oils. Acknowledgements: This research was supported by the Ministry of High Education and Scientific Research, Tunisia. References [1] Hou D.X., 2003, Potential mechanism of cancer chemoprevention by anthocyanin, Curr. Mol. Med. 3, pp [2] Allouche N., Fki I., Sayadi S., 2004, Toward a High Yield Recovery of Antioxidants and Purified Hydroxytyrosol from Olive Mill Wastewaters, J. Agric. Food. 52 (2), pp [3] Petersen M., Simmonds M.S.J., 2003, Rosmarinic acid, Phytochemistry. 62, pp [4] Javanmardi J., Khalighi A., Kashi A., Bais H.P., Vivanco J.M., 2002, Chemical characterization of basil (Ocimum basilicum L.) found in local accessions and used in traditional medicines in Iran, J. Agr. Food. Chem. 50, pp [5] Lee J., Scagel C.F., 2010, Chicoric acid levels in commercial basil (Ocimum basilicum) and Echinacea purpurea products, J. Funct. Foods. 2, pp [6] Ben-Ali M., Dhouib K., Damak M., Allouche N., 2012, stabilization of sunflower oil during accelerated storage: use of basil extract as a potential alternative to synthetic antioxidant, Int. J. Food. Prop. In press. [7] Singleton V.L., Rossi J.A.Jr., 1965, Colorimetry of total phenolics with phosphomolybdic phosphotungstic acid reagents, Am. J. Enol. Vit. 16, pp

197 P.119. Contribution à la conception d un bio-fertilisant composé de bactéries ayant la capacité de solubiliser le phosphate et fixer l azote atmosphérique Mohamed Ali Borgi, Issam Saidi, Ameni Mendil, Yosra Ayari, Khawla Ben jeddou Unité de Biochimie Macromoléculaire et de Génétique, Département des Sciences de la Vie, Faculté des Sciences de Gafsa, Route Zarroug 2112 Gafsa Résumé Le travail que nous avons réalisé constitue une contribution à la conception d un bio-fertilisant composé de germes bactériens, isolés du bassin minier de la région de Gafsa, capables de solubiliser le phosphate et fixer l azote atmosphérique. Pour se faire, nous avons suivi des cultures de féverole «Vicia faba» en absence et en présence des souches bactériennes en question. Ainsi, l étude des paramètres morphologiques (poids et longueurs des parties aériennes et des racines) et biochimiques (teneurs en phosphate et en azote des parties aériennes et des racines) met bien en évidence l importance de ces additifs bactériens dans l approvisionnement des plantules en phosphate soluble et en azote. Cette étude vise à minimiser aussi bien l emploi des fertilisants chimiques nuisibles à la santé et à l environnement que le coût des apports en éléments minéraux et en azote. Mots clés: Vicia faba, solubilisation, phosphate, azote, Bio-fertilisant 1 Introduction Les fertilisants chimiques constituent une source de nutriments qui assurent à la plante une croissance et une bonne résistance aux maladies et augmentent la production lorsqu ils sont appliqués au sol. Cependant, ce type de fertilisants s est montré nocif pour l environnement et la santé et ce, en polluant les nappes phréatiques par des concentrations élevées en nitrates et en phosphates. En plus, leur utilisation excessive pourrait aboutir à la dégradation des milieux aquatiques (phénomène d eutrophisation). Divers sols contiennent des pourcentages différents de phosphore de 0,4-1,2g/kg, [1] mais il se trouve sous forme insoluble c est-à-dire non disponible pour les plantes. C est pour cette raison il est appliqué au sol sous forme de fertilisants phosphoriques chimiques. Actuellement, une prise de conscience croissante des contraintes environnementales favorise le développement des nouvelles stratégies agricoles préservant la qualité des sols tout en maintenant une haute productivité. De ce fait, émerge la notion de biofertilisants, définis comme étant des produits contenant des microorganismes (bactéries, champignons) ayant la capacité de stimuler la croissance des plantes. L objectif des biofertilisants est de maintenir un sol vivant, capable de nourrir efficacement les plantes et accroitre leurs défenses interne contre les agressions extérieures. De nos jours les microorganismes du sol ayant une activité de solubilisation de phosphate ont attirés l attention des agriculteurs afin d améliorer la croissance des plantes et la production agricoles. Ces microorganismes sont considérés comme un outil biologique pour transformer le phosphate insoluble vers sa forme soluble facilement absorbée par les plantes. On note : Aspergillus Niger, Penicillium rugulosum, Penicillium radicum, Serratia marcescens, Bacilus lentus, Bacilus licheniformis et Pseudomonas putida [2-4. Certains de ces microorganismes produisent aussi des substances tels que les antibiotiques, des antifongiques protégeant les plantes contre différentes phytopathogènes. La fixation biologique de l azote atmosphérique semble offrir une possibilité pour résoudre en partie le problème de pollution en azote dans le cadre d un développement sain de l agriculture tout en réduisant les risques de perturbation de l environnement [5]. 2 Méthodologie Matériel biologique L expérimentation a porté sur la variété Bachar de féverole vicia faba l. La souche rhizobiale S16 et bactérienne proviennent de la région du bassin minier de Gafsa. Solution nutritive et milieux de culture : Elle est composée de macroéléments, de microéléments et du fer [6. Milieu YEM (Yeast Extract Mannitol) est utilisé pour la culture pour de la souche rhizobiale. 197

198 Poids frais (g) Poids frais (g) 19, 20, 21 et 22 décembre 2012 Hôtel EL Mouradi Douz - Tunisie La souche bactérienne a été cultivée dans le milieu LB. Après stérilisation du sable, les graines ont subi une germination puis repiquage dans plusieurs conditions différentes (en présence et en absence de germes bactériens). Après croissance, l azote total a été dosé par la méthode de Kjeldahl. Le principe de dosage du phosphate soluble est basé sur la méthode de Tandon et al. (1967) [7]. 3 Résultats Partie A aérienne Conditions B Racine Conditions Figure 1 : Variation des poids frais des parties aériennes en fonction des conditions de culture (A). Variation des poids frais des racines en fonction des conditions de culture (B). Condition 1 : Témoin : Sable uniquement, Condition 2 : Témoin avec roche phosphatée, Condition 3 : Témoin + S16 sans roche phosphatée, Condition 4 : Témoin + S16 avec roche phosphatée, Condition 5 : Témoin + BMG7 sans roche phosphatée, Condition 6 : Témoin + S16 + BMG7 sans roche phosphatée, Condition 7 : Témoin + BMG7 avec roche phosphatée, Condition 8 : Témoin + S16 + BMG7 avec l Hydrox apatite, Condition 9 : Témoin + S16 + BMG7 avec roche phosphatée. Tableau1 : Teneurs en azotes trouvées dans les différentes conditions Plante Condition1 Condition2 Condition3 Condition4 Condition5 Condition6 Condition7 Condition8 Condition9 Poids de racine volumeh2so4 Teneur d azote% Poids de PA volumeh2so4 Teneur d azote% 25,7mg 3 ml 1,63% 26 mg 4,7 ml 2,53 % 25,7mg 3,5 ml 1,90 % 28,7mg 4,4 ml 2,14 % 24,9mg 3, ml 1,68 % 26 mg 5,1 ml 2,74 % 26,4mg 3,8 ml 2,01 % 28,9mg 5,2 ml 2,51% 23,4mg 3,5 ml 2,09 % 25,3mg 4,7 ml 2,60 % 24,7mg 4,5 ml 2,55 % 26,2mg 5,7 ml 3,04 % 25,2mg 4,3 ml 2,38 % 25,5mg 5,1 ml 2,80 % 25,6mg 3,5 ml 1,91% 24,9mg 5,9 ml 3,31 % 26 mg 3,9 ml 2,10 % 26 mg 6,3 ml 3,39 % D après les résultats mentionnés dans la figure 1 et le tableau 1, on constate bien l effet bénéfique des germes bactériens aussi bien sur la croissance de la féverole que sur leurs teneurs en azote. Ces bactéries pourraient constituer de véritables candidats pour la conception de bio-fertilisants. Références [1] Hamdali.H, Bouizgarne.B, Hafidi.M, Lebrithi, Virolle.M.J, Ouhdouch.Y (2008) Screening for rock phosphate solubilizing Actinomycétes from Moroccan phosphate mines, Applied Soil Ecology 38:12-19 [2] Benferhat.M, Ferhat.A, Bejar.W, Kammoun.R (2009). Charaterization of the mineral solubilizing activity of Serratia marcesc CTM isolated from phosphate mine of Gafsa.Arch Microbial191: [3] Vassilev.N, Tolo.M, Azcon.R, Barea.M.J (1997). Rock phosphate solubilization by immobilized cells of Enterobacter sp in fermentation and soil conditions. Bioresource Technology.61:29-32 [4] Reyes. I, Bernier.L, Antoun.H (2002). Rock phosphate solubilizing and colonization of maize rhizosphére by wild and genetically modified strains of penicillium rugulosum. Microbiol Ecology: 44: [5] Long, S.R., Rhizobium genetics.annu.rev. Genet. 23: [6] Vincent J.M., Rhizobium: general microbiology. In: a treatise on Dinitrogen fixation III.Eds. R.W.F. Hardy and W.S.Silver, pp , New York, Wiley. [7] Tandon.H.L.S, Cescas.M.P, Tyner.E.H (1967). An acid-free vandate-molybdate reagent for the determination of total phosphorus in soils. Soil Science Society. 198

199 P.120. Hematological and Splenic Toxicity in Mercuric Chloride Treated Rats: Association with Oxidative Stress Mohamed Ali Boujbiha 1, Ghada Ben SALAH 2, Riadh Nciri 1, Ali Bouslama 3, Asma Omezzine 3, Hassen Kamoun 2, Faiza Fakhfakh 2 and Abdelfattah EL Feki 1,* 1. Laboratory of Animal Ecophysiology, Faculty of Sciences, University of Sfax, Tunisi 2. Laboratory of Human Molecular Genetics, Faculty of Medicine, University of Sfax, Tunisia 3. Laboratory of Biochemistry, CHU Sahloul, University of Sousse, Tunisia. Abstract We investigated the involvement of oxidative stress to induce deterioration of haematological functions in Hgtreated rats. Wistar male rats (n=114) were exposed to HgCl 2 at 0, 50 and 100 ppm during 90 days through oral administration. Mercury exposure for 90 days showed a significant dose-dependent decrease in the red blood cell number, total white blood cells, haemoglobin concentrations, and hematocrit in treated rats. A significant induction of red cell swelling and an increase in mean cell volume and mean cell hemoglobin was observed in treated rats. A dose-dependent increase was found in bilirubin levels in treated rats. An increase in absolute and relative wet weight of spleen was recorded in exposed group. Antioxidant enzymes perturbation and splenic lipid peroxidation was observed in treated rats. Our data suggest that an increase in free radical relative to a loss of antioxidant defence may affect the function of both erythrocyte and spleen. Keywords: Mercury; Erythrocyte; Spleen; Oxidative stress; Rats 1 Introduction Mercury in the form of mercuric chloride as used in this experiment is considered to be one of the pro-oxidants that induce oxidative stress [1]. Moreover, the induction of enzymatic antioxidant system is receiving much attention as a biomarker that indicates oxidative stress in the environment. Using this system, hematological parameters are indicators of the response of the animal to the environment and used as reliable indicators of health status to detect physiological changes following different stress conditions [2,3]. Hematological indices are important for toxicological research, environmental monitoring and as indicators of disease and stress [4,5]. Many studies have demonstrated changes in blood variables as a result of environmental conditions and presence of contaminants [4]. The present study aimed to elucidating the negative impacts of mercury compounds on hematological and splenic parameters of the wistar rat, and to assess whether oxidative mechanisms were involved in this defective process. We examined the dose and time-dependent effects of in vivo mercury exposure on hematological and oxidative stress parameters in erythrocytes and spleen as well as the spleen histopathology. 2 Methodology One hundred fourteen sexually mature male albino rats of Wistar strain (Rattus rattus), animals were divided into three groups of 38 rats and received mercury in the drinking water at concentrations of 0, 50 or 100 ppm through an exposure period of 90 days. At the end of each experimental stage (3, 7, 15, 30, 60 and 90 days), six rats from each group were decapitated under light ether anesthesia and fasting blood samples were collected from the killed animals into heparinzed tubes. Hgt concentrations were determined in whole blood. An automated hematology analyzer was used to examine blood parameters. Plasma total bilirubin was determined using commercial kit. Oxidative status in red cells and spleen tissues could be estimated from the concentrations of MDA and the activities of three representative anti-oxidant enzymes, SOD, CAT and GPx. Spleen Histology was also assessed. 199

200 3 Main Results The Hg treatment showed a concentration dose-dependent increase in blood. A significant dosedependent variation in the hematological parameters was found in Hg treated groups (p<0.05) and a significant dose-dependent increase was found in plasma bilirubin concentrations Hg-treated groups as compared with controls (p<0.01). A significant dose and time-dependent increase in thiobarbituric acid reactive substances levels (TBARS) was found in HG1 and HG2 groups compared with controls. A significant dose dependent-variation was also indicated in antioxidant enzyme activities in treated groups compared with controls. Histological sections of control rats showed normal spleen morphology. After 90 days of treatment, a spleen alteration was detected in both HG1 and HG2 groups Photomicrographs of paraffin-embedded H&E-stained rat spleen sections. (A) Spleen section from control animals. (B) Spleen section from mercury-treated animals (50 ppm for 90 days). (C) Spleen section from mercury-treated animals (100 ppm for 90 days). The sections were observed by microscopic magnification ( 100). References [1]Sener, G., Sehirli, O., Tozan, A., Velioglu-Ovunc, A., Gedik, N., Omurtag, G.Z., Ginkgo biloba extract protects against mercury (II)-induced oxidative tissue damage in rats. Food Chem. Toxicol. 45, [2] Fernandes, M.N., Mazon, A.F., Environmental Pollution and Fish Gill Morphology. Fish Adaptation Science Publishers, Enfield [3] Dimri, U., Ranjan, R., Kumar, N., Sharma, M.C., Swarup, D., Sharma, B., Kataria, M., Changes in oxidative stress indices, zinc and copper concentrations in blood in canine demodicosis. Vet. Par. 154, [4] Topashka-Ancheva, M., Metcheva, R., Teodorova, S., A comparative analysis of the heavy metal loading of small mammals in different regions of Bulgaria II: chromosomal aberrations and blood pathology. Ecotoxicol. Env. Safety. 54, [5] Mansour, S.A., Mossa, A.T.H., Lipid peroxidation and oxidative stress in rat erythrocytes induced by chlorpyrifos and the protective effect of zinc. Pest. Biochem. Physiol. 93,

201 P.121. Prévalence de l infection et de la colonisation par Pneumocystis jirovecii chez des patients infectés par le VIH et d autres présentant une BPCO 1 Mohamed Ali Jarboui, 1 Fatma Mseddi, 1 Hayet Sellami, 2 Ines Gargouri, 1 Amira Sellami, 2 Sami Kammoun & 1 Ali Ayadi 1 Laboratoire de Biologie Moléculaire Parasitaire et Fongique, Faculté de Médecine, Université de Sfax, rue de Magida Boulila, 3029 Sfax - Tunisie. 2 Service de Pneumo-allergologie, CHU Hédi Chaker, Sfax, Tunisia Résumé Pneumocystis jirovecii est un champignon opportuniste responsable d infection respiratoire chez les patients immunodéprimés, principalement ceux infectés par le virus d immunodéficience humaine (VIH). La colonisation asymptomatique par P. jirovecii a été aussi décrite chez les patients ayant une broncho-pneumopathie chronique obstructive (BPCO). L objectif de notre étude a été de déterminer la prévalence d infection et de colonisation asymptomatique par P. jirovecii chez les patients immunodéprimés et ceux ayant une BPCO en utilisant la PCR simple et nichée. Parmi 30 patients VIH positifs étudiés, 20 (66,7%) avaient une détection positive dont 17 par simple PCR et 3 seulement par nested-pcr. Concernant les patients BPCO, 9 (30%) avaient une détection positive dont 7 par simple PCR et deux par nested-pcr. Keywords: BPCO; Colonisation; PCR; Pneumocystis jirovecii 1 Introduction Pneumocystis jirovecii est un champignon opportuniste et cosmopolite responsable d infection respiratoire chez les patients immunodéprimés. Le développement de la technique de polymerase chain reaction (PCR) a permis d améliorer la sensibilité de détection de P. jirovecii aux niveaux des prélèvements respiratoires invasifs et non invasifs [1, 2]. L application de cette technique moléculaire a montré que Pneumocystis peut coloniser des patients souffrant de pathologies respiratoires sans présenter des signes de pneumocystose [3]. 2 Méthodologie Cette étude a été réalisée sur 30 patients VIH positifs et 30 patients ayant une BPCO non infectés par le VIH. L ADN a été extrait à l aide du kit Qiagen et un fragment du gène mtlsurrna de P. jirovecii a été amplifié (QIAamp DNA Minikit; Qiagen GmbH, Hilden, Germany). La réaction de PCR a été réalisée dans un volume réactionnel de 50µl contenant 2.5 mm MgCl2; 0.25 mm de dntps (datp, dttp, dctp et dgtp); 0.25 mm de chaque amorce; et 2.5U de Taq DNA polymerase (Go Taq). La réaction de PCR nichée a été réalisée dans le même mélange réactionnel auquel ont été ajoutés 2µl du produit de la première amplification. Nous avons utilisé deux paires d amorces permettant d amplifier un fragment du gène mtlsurrna [4]. Les produits d amplification par PCR simple et PCR nichée ont été migrés sur un gel d agarose 1.5% (Fig.1). 201

202 M T- T+ A B C D 346 pb Fig.1 Résultats de l amplification du gène mtlsurrna de P. jiroveci par PCR A, B et C: 3 LBA positifs, D: crachat positif; T- : témoin négatif, T+ : témoin positif, M: marqueur de taille 100 pb DNA ladder 3 Résultats Parmi les 30 patients VIH positifs étudiés, 20 (66,7%) avaient une détection positive dont 17 par simple PCR et 3 seulement par nested-pcr. Seize (53,3%) patients avaient une pneumocystose alors que quatre avaient une simple colonisation par P. jirovecii. Connaissant l impact de Pneumocystis sur les patients immunodéprimés, il était important, en termes de santé publique, de vérifier et d évaluer le niveau du «portage» de Pneumocystis au sein des individus atteints d une BPCO. En effet, 9 patients (30%) ayant une BPCO avaient une détection positive dont 7 par simple PCR et deux par nested-pcr.. En conclusion, l état d infection par P. jirovecii n a été observé que chez des patients VIH positifs. Sachant que Pneumocystis est un micro-champignon qui présente une spécificité d hôte très étroite et que la transmission s effectue par voie aérienne, les patients VIH positifs porteurs simples ainsi que ceux ayant une BPCO et colonisés par P. jirovecii pourraient représenter un réservoir pour ce champignon et risquent d être à l origine d infection nosocomiale Réferences [1] Stringer J.R., Beard C.B., Miller R.F & Wakefield A.E, 2002, A new name (Pneumocystis jiroveci) for Pneumocystis from humans, Emerg. Infect. Dis.8, [2] Maskell N.A., Waine D.J., Lindley A., Pepperell J.C., Wakefield A.E., Miller R.F., & al, 2003, Asymptomatic carriage of Pneumocystis jiroveci in subjects undergoing bronchoscopy: a prospective study, Thorax.58, [3] Calderón E., de la Horra C., Medrano F.J., Lopez-Suarez A., Montes-Cano M.A., Respaldiza N., & al, 2004, Pneumocystis jiroveci isolates with dihydropteroate synthase mutations in patients with chronic bronchitis, Eur J Clin. Microbiol. Infect. Dis.23, [4] Wakefield A.E., Pixley F.J., Banerji S., Sinclair K., Miller R.F., Moxon E.R., & al, Amplification of mitochondrial ribosomal RNA sequences from Pneumocystis carinii DNA of rat and human origin, 1990, Mol. Biochem. Parasitol. 43,

203 P.122. Antifungal and antibacterial activity of leaf and essential oil extracts of Ruta montana L. from Tunisia 1 Inès Hammami, 1 Mohamed Ali Triki, 1 Aymen Mseddi & 2 Radouane Gdoura 1 Unité de Recherche Protection des Plantes Cultivées et Environnement, Institut de l Olivier, Sfax BP1087, Tunisia 2 Laboratoire de Microbiologie, UR/08-73 Faculté des Science de Sfax, Université de Sfax, BP1171, 3000, Sfax, Tunisia Corresponding Author: Dr Inès Hammami, University of Sfax inesmellouli@yahooo.fr Abstract The aims of this study were to assess the antimicrobial efficacy of the leaf essential oil and the leaf extracts of R. montana against Botrytis cinerea, Fusarium oxysporum, Verticillium dahliae, Aspergillus oryzae and Fusarium solani.. The oil had a strong detrimental effect on spore germination of all the tested plant pathogens along with the concentration as well as time-dependent kinetic inhibition of Fusarium oxysporum. Also, the oil exhibited a potent in vivo antifungal effect against Botrytis cinerea on tomato plants. Experiments carried out in plant revealed that the essential oil was slightly effective in suppression of gall formation induced by Agrobacterium tumefaciens on bitter almond. The results of this study indicate that the oil and extracts of R. montana leaves could become natural alternatives to synthetic fungicides to control certain important plant microbial diseases. The GC MS analysis determined that 28 compounds, which represented 89.03% of total oil, were present in the oil containing mainly 1-butene, methylcyclopropane, 2-butene and caryophyllene oxide. Keywords : Ruta montana, Antimicrobial activity, Essential oil, Leaf extract, in vivo assay 1 Introduction Diseases caused by plant pathogenic bacteria and fungi significantly contribute to the overall loss in crop yield worldwide [1]. For many years, a variety of different synthetic chemicals have been extensively used as antifungal and antibacterial agents to inhibit the growth of plant pathogenic fungi and bacteria. However, there is a series of problems against the effective use of these chemicals in areas where bacteria and fungi have developed resistance [2]. Research focused on plant-derived fungicides and bactericides and their possible applications in agriculture are being intensified as these are having enormous potential to inspire and influence modern agro-chemical research [3]. There has been a growing interest in the research of the possible use of the plant-derived natural fungicides and bactericide such as essential oil and plant extracts, which can be relatively less damaging for pest and disease control in agriculture [4]. Also the plants have long been recognized as providing a potential source of chemical compounds or more commonly, products known as phytochemicals including essential oils and extracts [5]. Hence, efforts have been given to evaluate the potential role of the essential oil and the extracts from Ruta montana L. leaves as natural antimicrobial agents. In the present study, we assessed the in vitro and in vivo, the antimicrobial efficacy of the leaf essential oil and leaf extracts of R. montana L. against some important plant phytopathogenic bacteria and fungi causing severe destruction to crop, vegetable and ornamental plants and we examined the chemical compositions of the essential oil. 2 Methodology Isolation of the leaf Essential Oil The air-dried leaves of R. montana (200 g) were subjected to hydrodistillation for 3 h. The oil, with a yield of 0.26% (w/w), was dried over anhydrous Na 2 SO 4 and preserved in sealed vials at 4 C until further analysis. Preparation of leaf Extracts The air-dried leaves of R. montana were pulverized into a powdered form. The dried powder (50 g) was extracted with 70% methanol (MeOH), ethyl acetate (EtOAc), chloroform (CHCl 3 ) and hexane, separately at room temperature and the solvents from the combined extracts were evaporated by 203

204 vacuum rotary evaporator. The extraction process resulted in hexane (3.8 g), chloroform (4.5 g), ethyl acetate (6.3 g) and methanol (6.1 g) extracts with their respective yields of 7.5, 9.0, 13.6 and 12.2%. Antibacterial assay The determination of the antibacterial effect of the oil and extracts was tested according to the agar well diffusion assay. DMSO, hexane, chloroform, ethyl acetate and methanol were used as control. Antifungal Susceptibility Assay The in vitro susceptibility of plant pathogenic fungi was determined by the minimum inhibitory concentration determination method. The standard reference fungicide, benomyl, was used as the positive control for the plant pathogens tested. The minimum concentrations at which no visible growth was observed were defined as the MICs and were expressed in µg ml -1. Gas chromatography mass spectrometry (GC MS) analysis The GC MS analysis of the essential oil was performed using a SHIMADZU GC MS (GC-17A) equipped with a ZB-1 MS fused silica capillary column (30 m 0.25 m i.d., film thickness 0.25 µm). 3 Main Results The oil of R. montana obtained by hydrodistillation of the leaves contains monoterpene hydrocarbons and oxygen containing mono- and sesquiterpenes. This research work also describes the complex effect of the oil on fungal spore germination and exhibited a wide range of antifungal activity. During the kinetic study of F. oxysporum, it appeared that exposure time of the oil had a little effect on the fungicidal activity at lower concentration but at a concentration of 125 µg ml -1, the fungicidal action was very rapid and showed 100% spore germination inhibition of F. oxysporum. Also the results of the antifungal screening showed that leaf extracts of methanol, ethyl acetate and chloroform have strong antifungal activity against the tested plant pathogens. However, the hexane extract did not reveal significant results of antifungal activity. This might be attributable to the resistant behaviour of the test fungi against a low-polar extract. On the other hand, in the present study, the essential oil of R. montana showed potential in vivo antifungal effects against the tested plant pathogen of B. cinerea on tomato plants and reduction of crown gall incidence on bitter almond rootstocks. Thus, it can be concluded that the use R. montana mediated oil and extracts could be considered as an antimicrobial agent available for developing a novel type of natural fungicide and bactericide able to control several plant pathogenic fungi and bacteria causing severe diseases in food, crops and vegetables. Acknowledgements: This work was supported by the Ministry of Agriculture and Water Resources and the Ministry of Higher Education and Scientific Research, Tunisia. References [1] Montesinos E., 2007, Antimicrobial peptides and plant disease control. Microbiol. Lett. 270: [2] Brent KJ., & Hollomon DW., 1998, Fungicide resistance: the assessment of risk. FRAC, Global Crop Protection Federation, Brussels, pp 1 48 [3] Duke SO Natural pesticides from plants. In: Janick J, Simon JE (eds) Advances in new crops. Timber Press, Portland, pp [4] Costa TR., Fernandes FLF., Santos SC., Oliveria CMA., Liao LM., Sales BHN., & Silva MRR., 2000, Antifungal activity of volatile constituents of Eugenia dysenterica leaf oil. J. Ethnopharmacol. 72(2): [5] Negi PS., Chauhan AS., Sadia GA., Rohinishree YS., & Ramteke RS., 2005, Antioxidant and antibacterial activities of various seabuckthorn (Hippophae rhamnoides L.) seed extracts. Food. Chem. 92:

205 P.123. Surveillance de la prolifération des algues invasives sur le littoral algérien : cas de Caulerpa racemosa var. cylindracea (Forsskal 1809) 1 Mohammed El Amine Bentaallah, 1 Ahmed Kerfouf, 2 Y. Bentaallah-Zegrar, 3 Yacine Med Benzaoui, 1 Badreddine Benaoum & 4 Samir Boutkhil 1 Département des sciences de l environnement, Faculté des sciences, Université Djilali LIABES, Sidi Bel Abbes. 2 Département de chimie, Faculté des sciences, Université Djilali LIABES, Sidi Bel Abbes 22000, Algérie 3 Laboratoire réseau de surveillance environnementale, Université d Oran 31000, Algérie 4 Laboratoire de Biologie des Microorganismes et de Biotechnologie, Université d Oran 31000, Algérie Résumé Caulerpa racemosa est une macro algue verte de la famille des Caulerpacées, qui depuis 1990 a colonisé les côtes de 15 payés et une grande majorité des îles méditerranéennes. En Algérie la présence de la souche invasive Caulerpa racemosa var. cylindracea a récemment été signalée dans plusieurs localités sur la côte algéroise depuis 2006 et plus récemment dans le golfe d Arzew en Ce phénomène inquiétant de la prolifération de cette algue est pris en compte aussi bien par les organismes internationaux que nationaux. Nous nous intéressons dans cette étude à présenter un état des lieux global des études portant sur la présence de cette souche sur le littoral algérien. Il constituera ainsi une source d information sur sa répartition et son extension géographique. Mots clés: Prolifération, invasive, Caulerpa racemosa, répartition géographique, littoral algérien. 1 Introduction Caulerpa racemosa est une macrophyte originaire du sud-ouest de l Australie et dont l aire de répartition actuelle est préoccupante, vue sa présence dans les mers tropicales et tempérées chaudes. La forme Caulerpa racemosa considérée comme envahissante par de nombreux auteurs [1] est la variété cylindracea. Elle a été signalée pour la première fois au début des années 1990 dans le sud de la Méditerranée orientale, dans le port de Tripoli en Libye [2] et depuis, elle n a cessé d étendre son aire de répartition géographique, de la Libye aux îles Baléares. L objectif de la présente étude est de présenter un état des lieux global sur la présence de Caulerpa racemosa sur le littoral algérien. 2 Méthodologie Plusieurs bases de données ont été consultées sur internet en utilisant différents mots clés en rapport avec le sujet traité (algues invasives, macrophytes, Caulerpa, Algérie). Des documents bibliographiques (thèses de doctorat, mémoires de Magister et d ingéniorat) de différentes bibliothèques universitaires algériennes (Oran, Mostaganem et Alger en particulier), ont fait l objet de recherches minutieuses pour collecter des informations sur la présence de cette algue sur le littoral algérien. 3 Résultats et Discussion Les études portant sur les macroalgues invasives en général, et l espèce Caulerpa racemosa en particulier, sont rares et fragmentaires pour Algérie. Seuls les résultats de BACHIR BOUIDJRA [3] semblent être complets puisqu ils ont réussi à déterminer la surface et le linéaire côtier atteints par cette algue invasive, respectivement de m² et 700 m à Salamandre et m² et 200 m à 205

206 Stidia. Les autres auteurs n ont fait que mentionner sa présence et dans le meilleur des cas la nature du substrat qu elle occupe. Caulerpa racemosa a été observée pour la première fois en Algérie en 2005, sans pour autant être abondante [4]. C est essentiellement depuis 2006, que l ampleur de la propagation de Caulerpa racemosa a été mise en évidence [5]. L algue a été identifiée pour la première fois à Bou-Ismail en 2006 [5]. D autres travaux ont permis de mentionner sa présence à Bordj El Kiffan à l est d Alger [6] et dans différentes zones du littoral d Alger [7]. D autres études universitaires réalisées dans les régions du centre, ont permis de l observer à différentes profondeurs (au-delà de - 20 m), mais n ont pas fait l objet de publications [4]. Sur la côte ouest algérienne, BACHIR BOUIADJRA et ses collaborateurs déterminèrent la présence de plusieurs peuplements dans le golfe d Arzew à Stidia et à proximité du port de Salamandre à l Ouest de Mostaganem [3]. La compilation des résultats de notre recherche sur les travaux de recensement de Caulerpa racemosa en Algérie nous a permis d évaluer l extension de son aire de répartition actuelle (Tab. 1.) Table 1: Caractéristiques des colonisations de Caulerpa racemosa en Algérie. Région Centre Localisation Profondeur (m) Substrat Année de la 1 ère observation Référence Tamentfoust 22 Sablo-vaseux 2005 Sidi-Fredj 1-12 Vase, sable, herbier S. LAMOUTI et al., Rais Hamidou 1-17 Roche, herbier, galets 2011 Miramar 29 Roche, herbier, sable Bainem 6 Roche, herbier 2006 El Djamila 8 Roche, herbier Bou Ismail < 1 Roche Bou Ismail 0,5 N. OULD-AHMED Tamentfoust 0,5 - et A. MEINESZ, 2007 Sidi-Fredj 3 Bordj El Kiffan < H. SERIDI, 2007 Région Ouest Salamandre 0,5-0,8 Sable, roche Stidia 0,3-0,5 Sable, roche 2008 B. BACHIR BOUIADJRA et al., 2010a ; b Région Centre Bounettah 13 Sable 2009 S. LAMOUTI et al., 2011 Références [1] Verlaque M., Durand C., Huisman J.M., Boudouresque C.F. & Le Parco Y., 2003, On the identity and origin of the Mediterranean invasive Caulerpa racemosa (Caulerpales, Chlorophyta). Eur. J. Phyc., 38, pp [2] Nizamuddin M., 1991, The Green Marine Algae of Libya. Elga Publisher, Bern, 227p. [3] Bachir Bouiadjra B., Belbachir N., Benkada M.Y., Maarouf A. & Riadi H., 2010, Sur la présence de l algue marine Caulerpa racemosa (Forsskal) J, Agardh (Caulerpales, Chlorophyta) devant la côte Mostaganemoise (Ouest Algérie), Act. Bot. Malac., 35, pp [4] Seridi H. et Kabrane K., 2010, Progression de Caulerpa racemosa (caulerpales, Chlorophyta) sur le littoral algérien. In : Proceedings of the 4th Mediterranean Symposium on Marine Vegetation (Yasmine-Hammamet, 2-4 December 2010), EL ASMI S, LANGAR H. et BELGACEM W, edits., RAC/SPA publ., Tunis, pp [5] Ould Ahmed N. et Meinesz A., 2007, First record of the invasive alga Caulerpa racemosa on the coast of Algeria. Crypt. Algo., 28(3), pp [6] Seridi H., 2007, Étude de la flore algale de l Algérie, Étude phytosociologique des peuplements algaux photophiles de l infralittoral superficiel de substrat dur, Thèse Doctorat ès Sciences, USTHB, Alger, 174 p. [7] Lamouti S., Rebzani C. & Bachari N.E.I., 2011, Répartition de deux espèces introduites à caractère invasif dans la région centre de la côte algéroise : Caulerpa racemosa et Oculina patagonica. In : Conférence Méditerranéenne Côtière et Maritime, édition 2, Tanger, pp , Disponible en ligne sur 206

207 P.124. Carotenoid Extraction from Tomato Using a Green Solvent Resulting from Orange Processing Waste 1 Mohamed A. Ferhat, 2,3 Zoubida Chemat-Djenni, 4 Valérie Tomao & 4 Farid Chemat 1 Laboratoire de Recherche sur les Produits Bioactifs et la Valorisation de la Biomasse LPBVB, Ecole Normale Supérieure Vieux Kouba ENS BP 92 Kouba- Alger, Algeria. 2 Centre de Recherches en Analyses Physico - Chimiques (CRAPC), Alger, Algeria 3 Département de chimie industrielle, Faculté des Sciences de l Ingénieur,Université Saad Dahlab, Blida, Algeria 4 UMR408, Sécurité et Qualité des Produits d Origine Végétale, Université d Avignon et des Pays de Vaucluse, INRA, F Avignon, France Abstract: Here is described a useful and green method for the extraction of lycopene using d-limonene (bio-solvent) a substitute for dichloromethane (petroleum solvent). The described method was achieved in two steps: at first, limonene was obtained from the orange peel through a steam distillation procedure followed by a deterpenation process, in second step, lycopene was extracted using d-limonene as a solvent, instead of dichloromethane. Lycopene extracted from tomato fruit were compared with both conventional petroleum and bio-solvent in terms of qualitative and quantitative determination. No significant difference was obtained between each extracts allowing us to conclude that the proposed method is effective and valuable. Key Words: d-limonene, lycopene extraction, clean method. 1 Introduction Limonene is the major constituent of essential oil resulting from the citrus fruits skins. It is responsible for their characteristic odour. Limonene belongs to the family of terpenes. The latter do not have an important metabolic role in the plant. They play a part in the communication of the plants with other species as the insects which they attract, push back or paralyse. They exhale also a variety of tastes and odours; many are used in kitchen as savours and condiments or perfumery. d-limonene is a very versatile chemical which can be used in a wide variety of applications. The growing interest of limonene has emerged since its cleaner and degreaser qualities were recognised and taken into consideration [1]. d-limonene can be used either as a straight extractant solvent; d- Limonene can replace regular n-hexane[ 2-4]. Lycopene is the main carotenoid in tomato [5]. Used a long time like simple food dye, it is today the subject of many studies as for its positive effects on health. To avoid this shortcoming, a useful and green method for the extraction of lycopene with a new procedure using d-limonene (bio-solvent) a substitute for petroleum solvent has been proposed. d-limonene from the orange peel was extracted through a steam distillation procedure followed by a deterpenation process and combining this achievement by using it as a solvent for extracting lycopene from tomato fruit as a substitute of dichloromethane. 2 Methodology Lycopene extraction: Two solvents were used for comparison of extraction efficiency: (1) dichloromethane 100 % containing 0.05 % (w/v) butylated hydroxytoluene BHT, (2) d-limonene %, g weighted to the nearest 10 mg of the ground tomatoes without seeds was extracted using 10 ml of dichloromethane or limonene and 15 ml of distilled water by liquid-liquid extraction. The organic layer was then concentrated with a vacuum rotary evaporator. The lycopene residue was reconstituted with hexane before UV-visible spectrophotometer analyses and with dichloromethane 207

208 before infrared spectrophotometry analyses. The residue was dissolved in 2 ml of acetone, filtered through a 0.45 mm cellulose regenerated filter (Alltech Associates, Deerfield, IL) prior tohplc analysis. All the solutions were stored at 4 C and protected from light. 3 Main Results Lycopene content of fresh tomatoes was determined by high-performance liquid chromatography after extraction. Yields obtained for both extractions presented in Table 1 showed that yields of d- limonene s extracts were almost equivalent to those obtained using dichloromethane. However, it may be noted that the performance of the extraction obtained using d-limonene is slightly lower than that obtained by using dichloromethane. The proposed approach using a green solvent to perform extraction is useful and can be considered as a nice alternative to conventional petroleum solvent where toxicity for both operator and environment is reduced. Table 1: Lycopene content in fresh tomato. Solvant use a Lycopene (mg/100 g Wet Weight) b Dichloromethane 3.84± 0.18 d-limonene 2.44±0.18 a Solvent use for extraction b Each sample was extracted twice in triplicate analysis References [1] Toplisek, T., Gustafson, R. (1995). Cleaning with d-limonenes: a substitute for chlorinated solvents, Precision Cleaning, 3: [2] Liu, S.X., Mamidipally, P.K. (2005). Quality Comparison of Crude Rice Bran Oil Extracted with d- Limonene and Hexane, Cereal Chemistry 82: [3] Mamidipally, P.K., Liu, S.X. (2004). First approach on rice bran oil extraction using limonene, Eur. Journal of Lipid Science and Technology 106: [4] Virot, M., Tomao, V., Ginies, C., Visinoni, F., Chemat, F. (2008). Green procedure with a green solvent for fats and oils determination: Microwave-integrate Soxhlet using limonene followed by microwave Clevenger distillation, Journal of Chromatography A. 1196: [5] Clinton, S.K. (1998). Lycopene: chemistry, biology and implications for human health and disease. Nutrition Reviews. 56:

209 P.125. L'effet protecteur de la quercétine contre les crises épileptiques induites par la pilocarpine chez des rats adultes. Mohamed Barkallah 1, Yassine Chtourou 1, Hamadi Fetoui 1. 1 Unité de Recherche de Toxicologie-Microbiologie Environnementale et Santé (UR11ES70). Université de Sfax- Faculté des Sciences de Sfax. BP Sfax- Tunisie. Abstract L épilepsie est une atteinte cérébrale caractérisée par une prédisposition persistante à des crises épileptiques, ayant des conséquences neurologiques cognitives et psychologiques. Le traitement de l épilepsie est basé sur un groupe de substances antiépileptiques. Ces dernières pourraient avoir des effets secondaires. Vu la relation étroite entre les altérations neuro-degénratives et l implication du stress oxydatif, la génération des radicaux libres et la déficience du système de défense antioxydant sont les causes primordiales dans ce processus. Dans ce travail, on a été intéressé à l utilisation de la quercétine comme étant un nouveau neuroprotecteur vis-à-vis une épilepsie expérimentale induite chez des rats adultes par la pilocarpine. 1 Introduction Keywords: Epilepsie, Pilocarpine, hippocampe, neurones, quercétine. Il a été décrit que chez les patients souffrant d épilepsie, des déficiences dans l apprentissage, la mémoire et le comportement, qui sont dues au moins en partie par des changements dans le fonctionnement du système cholinergique(1). De nombreux travaux ont montré que l altération de la neurotransmission est impliquée dans la mise en place de l épilepsie. Un deuxième facteur important réside au fait que l hippocampe représente souvent le foyer principal d où émanent les crises épileptiques, qui se propagent ensuite à d autres parties du cerveau. De plus, les analyses histochimiques ont démontré que la plupart des neurotransmetteurs et des neurorécepteurs sont présents dans l hippocampe. L ensemble de ces particularités fait de l hippocampe la structure cérébrale la mieux étudiée dans le cadre de l épilepsie expérimentale réalisée sur un modèle animal par un traitement à la pilocarpine. Dans ce travail, nous nous sommes intéressés à étudier les effets de la quercétine au niveau de l hippocampe sur l activité des ATPases membranaires, l activité et l expression génique de l acétylcholinestérase, la formation de monoxyde d azote et d évaluer les propriétés neuroprotectrices de ce flavonoide vis-à-vis l endommagement hippocampique observé sur un modèle de crises épileptiques induites par la pilocarpine. 2 Méthodologie Des rats mâles de souches Wistar pesant environ 250 à 280 g, provenant d un élevage de la pharmacie centrale de Tunis (SIPHAT). Après une phase d acclimatation aux conditions de l animalerie, les rats ont été répartis en cinq groupes selon le traitement : Fig.1 Traitement des animaux. Le sacrifice des animaux des différents groupes étudiés est effectué à la même heure (9h du matin) pour éviter toutes variations dues au rythme circadien. Enfin, chaque cerveau est disséqué pour faire extraire l hippocampe. Des échantillons d hippocampe ont été prélevés, broyés à 4þC dans du tampon 209

210 phosphate (0,1 M, ph=7,4). Après centrifugation à 7500 g pendant 15 min à 4 C, le surnageant a été récupéré et conservé à -20 C pour des dosages ultérieurs (ATPases membranaires, activité et expression génique de l acétylcholinestérase, NO). D autres échantillons d hippocampes ont été fixés au formol 10% afin de faire des coupes histologiques. 3 Résultats Effets de la quercétine sur les pompes ioniques ATP (Na +, K + ATPase, Ca 2+ ATPase et Mg 2+ ATPase) : Groupes Témoins Table 1: Activité des ATPases membranaires Na +, K + ATPase Ca 2+ ATPase (µmol Pi/h/mg (µmol/h/mg Mg 2+ ATPase protéine) protein) Pilocarpine (P400) 0.19 * 0.22 *** 0.26 Quercétine+P * * ***+++ Quercétine P400, Qe+P400, Qe vs Témoins : * p<0.05 ; ** p<0.01 ; *** p<0.001 Qe+P400, Qe vs P400: + p<0.05 ; ++ p<0.01 ; +++ p<0.001 Effets de la quercétine sur l activité et l expression génique de l acétylcholinestérase : Les convulsions induites par la pilocarpine, observée dans notre étude, a diminué significativement l activité de l acétylcholinestérase de (-32 %, p<0.05) au niveau de l hippocampe et ceci comparativement aux témoins. Toutefois, un prétraitement à la quercétine maintient une activité normale de cette enzyme et ceci comparativement au groupe traités uniquement par la pilocarpine. Dans notre étude, l ensemble de nos résultats préliminaires n ont montré aucune variation du taux d expression génique de l AChE dans l hippocampe après traitement par la pilocarpine. Donc les crises induites par la pilocarpine pourraient agir directement sur l AChE et non sur son expression génique. Effets de la quercétine sur la formation de monoxyde d azote : Les convulsions induites par la pilocarpine, observées dans notre étude, a augmenté significativement la teneur en NO (+43 %, p<0.05) au niveau de l hippocampe et ceci comparativement aux témoins. Toutefois, l association de la quercetine avec la pilocarpine a diminué la teneur en monoxyde d azote et ceci comparativement au groupe traité uniquement par la pilocarpine. Du point de vue histologique : Chez les rats épileptiques des altérations ont été observées au niveau des régions CA3 et CA1 de l hippocampe suggérant l implication des radicaux libres générés lors de la phase aigue dans les modifications structurales observées. Un prétraitement à la quercétine protège partiellement la structure neuronale. Acknowledgements: J adresse tous mes sincères remerciements à Madame Tahia SELLAMI- BOUDAWARA, Professeur à la Faculté de Médecine de Sfax et Chef de service du laboratoire d Anatomie et de Cytologie Pathologique au CHU Habib Bourguiba de Sfax, d avoir accepté de juger ce travail. 4 Réferences (1)GIOVAGNOLI AR, and AVANZINI G (2006) Learning and memory impairment in patients with temporal lobe epilepsy: relation to the presence, type, and location of brain lesion. Epilepsia 40:

211 P.127. Contribution à l étude de l effet du Magnésium sur le métabolisme des rats Wistar mâles exposés au Nickel. 1 Mohamed Khiari, 1 Malika Hamdikhen, 1 Hicham Gouzi & 1 Zin Kechrid. 1 Laboratoire de Biochimie et de Microbiologie Appliquées, Département de Biochimie Université Badji Mokhtar, Annaba, Algérie. RESUME Ce travail a été réalisé pour étudier l influence de l élément nickel toxique sur quelques paramètres biochimiques, et l utilisation du magnésium dans la diminution du taux d intoxication chez les rats males Wistar adultes. Il s agit d une étude expérimentale menée au laboratoire sur 21 rats repartis en trois lots de sept (7) rats. Le premier group, des rats recevant le sérum salé sont utilisés comme témoins. Le deuxième group traités par le sulfate de nickel (2.0 mg/100 g b.wt.; intrapéritonéale, i.p.) et le troisième reçoit une injection intrapéritonéale du sulfate de nickel + le sulfate de magnésium (300 mg/kg b.wt.) simultanément chaque deux jours durant 21 jours. A l issue de notre étude, le poids corporel des rats a été affecté par le nickel. De plus, nous avons remarqué une augmentation de l activité enzymatique des transaminases (TGO et TGP) de la phosphatase alcaline (PAL) et de lactate déshydrogénase (LDH) et une diminution significative de la teneur hépatique en glutathion (GSH) et l activité enzymatique de la catalase (CAT) chez les rats traités au nickel comparativement aux témoins. Cependant, le traitement des rats par le nickel plus le magnésium mène vers l organisation et la régulation des éléments cités ci-dessus. Nous pouvons conclure qu il est possible d utiliser le magnésium dans le but de diminuer le taux d intoxication par le nickel. Mots clés: Nickel, Magnésium, Métabolisme, Toxicité, Rat. 1 Introduction Le rejet des substances d origine naturelle ou artificielle constitue l un des plus importants facteurs de dégradation de la biosphère par l homme [1]. Le nickel est un métal naturel existe dans plusieurs formes minérales et peut être trouvé partout dans l'environnement y compris rivières, les lacs, les océans, le sol, l air, l eau potable, les plantes et les animaux [2]. Le nickel est utilisé dans une large variété de processus métallurgiques tel que la galvanoplastie et la production d alliage aussi bien que dans les piles du nickel-cadmium. Comme la plupart des métaux, la toxicité de nickel varie selon l'itinéraire d'exposition et la solubilité du composé de nickel [3]. Le magnésium est connu comme un élément essentiel depuis longtemps, en réglant beaucoup d activités métaboliques [4]. La déficience magnésique peut rehausser les radicaux libres provoquent l'oxydation in vivo [5]. Elle réduit le taux de cytochrome P 450 hépatique et accroît la cytotoxicité [6]. Ainsi que les peroxydations lipidiques et protéiques interviennent dans la physiopathologie du déficit magnésique [7]. L objectif de cette étude est d apporter des éclaircissements quant à la toxicité du nickel sur certains aspects biochimiques, hématologiques et histologiques et l utilisation du magnésium qui se présente comme un stabilisateur cellulaire et subcellulaire majeur, nécessaire à la stabilité de la membrane plasmatique. 2 Matériel et Méthodes Dosages biochimiques 211

212 Gain du poids corporel (g) 19, 20, 21 et 22 décembre 2012 Hôtel EL Mouradi Douz - Tunisie Tous les tests sont réalisés des kits commercialisés. La concentration hépatique du GSH a été mesurée selon le procédé de Weckbeker et Cory [8] et l activité de Catalase par la méthode de Aebi [9]. Les résultats sont représentés sous forme de Moyenne ± SEM et ils ont été effectués à l aide du test «t» de Student. p 0,05 est considéré comme significatif. 3 Résultats jours -10 Témoin Ni Ni + Mg Figure 1 : Évaluation en fonction du temps (jours), de gain du poids corporel chez les rats témoins, les rats traités au nickel et les rats traités au nickel + magnésium. Tableau 1 : Variation de l activité enzymatique de TGO, TGP, PAL, LDH, la catalase la teneur hépatique en glutathion (GSH) chez les rats témoins, les traités au nickel et les rats traités au nickel + magnésium. Les lots Paramètres Témoin Ni (II) Ni + Mg TGO (U/L) 49, ,16 3,65* 54,64 2,96 TGP (U/L) 16,54 0,75 26,97 0,77*** 19,65 0,89* PAL (U/L) 107,76 5,59 143,90 9,38** 129,6 11,04 LDH (U/L) 930,51 54, ,1 53,24** 1002,56 52,9 Catalase (µmol/ min/ mg prot) 13,55 0,42 11,26 0,60** 13,00 0,57 GSH (nmol/mg prot) 20,35 1,25 13,75 1,12** 19,51 1,20 * Différence significative par rapport au témoin : p 0,05. ** Différence hautement significative par rapport au témoin : p 0,01. *** Différence très hautement significative par rapport au témoin : p 0,001. RÉFÉRENCES BIBLIOGRAPHIQUES [1] Lagadic L., Caquet T., Amiard JC & Renarde F., 1998, Utilisation de biomarqueurs pour la surveillance de l envirennement, Lavoisier. Tec. Doc.4e édition, pp [2] ATSDR (Agency for Toxic Substances and Disease Registry)., 1988, Toxicological Profile for Nickel, ATSDR/U.S. Public Health Service ATSDR. 19p. [3] Coogan TP., Latta DM., Snow ET & Costa M., 1989, Toxicity and carcinogenicity of nickel compounds, Crit. Rev. Toxicol.19, pp [4] Kruse HD., Orent ER & McCollum EV., 1931, Studies on magnesium deficiency in animals, Biol. Chem.96, pp [5] Stafford RE., Mak IT., Krame JH & Weglicki WB., 1993, Protein oxidation in magnesium deficient rat brains and kidneys, Biochem. Biophys. Res. Commun.196, pp [6] Gunther T., 1990, Magnesium deficiency generally enhances cytotoxicity, Mg-Bull.12, pp [7] Rayssiguier Y., Gueux E., Bussière L., Durlach J & Mazur A., 1993, Dietary magnesium affects susceptibility of lipoproteins and tissues to peroxydation in rat, Am.Coll. Nutr.12, pp [8] Weckbeker G & Cory JG., 1988, Ribonucleotide reductase activity and grouth of glutathione-depleted mouse leukaemia L 1210 cells in vitro. Canc. Letter.40, pp

213 P.128. Biodiversity and genetic resources of fig (Ficus carica L.) change from coastal to continental areas of Tunisia Mehdi Trad 1, Badii Gaaliche 1, Catherine M.G.C.Renard 2 & Messaoud Mars 1 1 U.R. Agrobiodiversity, High Agronomic Institute of Chott-mariem, 4042 Sousse, TUNISIA 2 INRA, Université d Avignon et des pays du Vaucluse, UMR408 SQPOV, F Avignon, FRANCE Abstract The fig specie (Ficus carica L.) is widely distributed and represents a natural wealth and diversity in all Tunisia. From the coast to continental regions, fig resources change and the tree behavior become different. Smyrna type figs bearing white colored fruit were predominant in the coast while San pedro type, bearing two generations of fruit, is more encountered in the continent. A large array of caprifig trees were counted in coastal Bekalta, while caprifigs are rare in Djebba and are mostly found in wild form. Biodiversity of fig specie was corroborated by analysis of the fruit. A wide range of size, shape and color was observed in fruit from the two areas. Fruits originated from continental zone were larger, heavier and sweeter than those picked from the coast ( Zidi cv.). Crossing the coastal semi-arid climate to the continental sub-humid, it becomes obvious that local ecotypes, plant enrollment and fruit characteristics are not the same. Keywords: Ficus carica, Smyrna, environment, agro-ecosystem, fruit characteristics. 1 Introduction Fig Ficus carica (2n = 26 chromosomes) belongs to the order of Urticales and the family of Moraceae, with over 1400 species classified into about 40 genera [1]. Fig tree is recognized in Tunisia as one of most adapted specie since long time ago [2]. The large diversity of cultivars allowed its presence in various bio-climatic zones of the country. Prospections undertaken in different regions contributed to identify and to describe numerous cultivars [3]. Nevertheless, a large discrepancy was observed between coastal and continental zones concerning existing ecotypes, growth and development of the plant and quality-bearing fruit of the tree. The present study was undertaken to detect differences between two contrasted areas ( Djebba a continental region and Bekalta a coastal zone) regarding cultivar diversity and fruit characteristics. 2 Methodology Prospections took place in two contrasting areas: continental region of Djebba (North-west, altitude: 700 m, latitude: 36þ40 N, longitude: 9þ0 E) with a sub-humid climate and coastal region of Bekalta (Central-east, altitude: 20 m, latitude: 35þ37 N, longitude: 11þ2 E) belonging to the semi-arid bioclimate stage. Several farmers and local inhabitants were questioned. Investigations were conducted over two cropping seasons (2009 and 2010). Main descriptors for fig fruit [4] were assessed for three cultivars from each region. 3 Main Results Cultivars diversity. Fig cultivars in Djebba are numerous. We counted 12 distinct ones of Smyrna botanical type for most of them (Table 1). Bouhouli (San pedro type) is the most frequent and represents 85.5% of total plants. This cultivar is very well adapted to local conditions. Zidi cultivar ranked second and represents 9.8%. This cultivar is much known and encountered in various Tunisian agro-ecosystems. In Bekalta, twenty cultivars were inventoried shared between Smyrna, San pedro and Caprifig type (Table 1). The main ones were Bidhi (25.3%), Bither Abiadh (24.6%) and Kahli (20%). Ficus carica wealth and diversity is noteworthy. However, when moving from the coast to the continental areas, size and development of the tree is not the same. Shoot growth and leaf area in Djebba are more important and confers much vigor to the tree. 213

214 Table 1: Biodiversity of fig Ficus carica in the two contrasting sites Region ecotype Botanical type Continental Djebba Coastal Bekalta Date of maturity Fruit colour Frequency Bouhouli San pedro June + august Abundant Purple green Zidi Smyrna August common Purple black Wahchi San pedro June + august common Yellow green Thgagli Smyrna August Little Yellow green Khartoumi Smyrna August Little Yellow green Soltani Smyrna August Little Yellow green Khenziri San pedro June + august Rare Green Temri Smyrna August Rare - Bouharrag Smyrna August Rare - Boukhobza Smyrna August Rare - Faouari Smyrna August Rare - Zergui Smyrna August Rare - Bidhi Smyrna July Abundant Yellow green Bither abiadh San pedro June + august Abundant Green Kahli Smyrna July Abundant Reddish black Zidi Smyrna July common Purple black Soltani Smyrna August common Yellow green Hemri Smyrna July common Greenish red Ghabri Smyrna August common Reddish green Goutti Smyrna July common Purple yellow green Khedri Smyrna July Little Yellow green Bithri Caprifig - Little - Assafri Caprifig - Abundant - Hemri Caprifig - Little - Jrani Caprifig - Abundant - Guerguenia Caprifig - Rare - Fruit characteristics. Analysis of the fruit exhibited additional marks of the diversity characterizing fig specie in the two areas. A large array of size, shape and fruit color could be observed between the various cultivars. The fruit can be oblate and oblong in continental region and round and oblong in coastal zone. Fruit color varied from yellow green to purple black in both regions. Fruit size can reach high values in Djebba and this reflects nutrient supply characterizing the soils of Djebba. Fruits from Zidi cultivars harvested from the two areas showed discrepancy in size, length and width. In coastal environment, figs are precocious and ripen earlier than in the continent even for the same cultivar as Zidi. This can be explained by climatic conditions particularly the variability between day and night temperatures. Environmental conditions play also an important role in the discordance between emerging wasps period and female fig receptivity. The fluctuant weather conditions in the continental zone are responsible in a large part of the lack of the fig wasps during the receptivity of female syconium which impede the pollination step and afterward development of the fruit. References [1] Watson L., & Dallwitz M.J., 2004, The Families of Flowering Plants: Description, Illustration, Identification, and Information Retrieval. (accessed June 2004). [2] Mars M., 1995, La culture du grenadier (Punica granatum L.) et du figuier (Ficus carica L.) en Tunisie, Cahiers Options Méditerranéennes 13, pp [3] Chatti K., Hannachi-Salhi A., Mars M., Marrakchi M., & Trifi M, 2004, Analyse de la diversité génétique de cultivars tunisiens de figuier (Ficus carica L.) à l aide de caractères morphologiques, Fruits 59, pp [4] IPGRI & CIHEAM, 2003, Descriptors for fig (Ficus carica L.). International Plant Genetic Resources Institute, Rome, Italy and International Centre for Advanced Mediterranean Agronomic Studies, Paris, France. ISBN

215 P.130. Mise en évidence de l activité antimicrobienne de souches de Bacillus isolées du sud algérien 1 Amziane Meriam, 1 Nateche Farida, 1 Abderrahmani Ahmed, 1 Djenane Zahia, 1 Yaici Lamia, 1 Selama Okba, 1 Madour Nawel, 2 Bechet Max, 2 Chollet Marlène et 2 Jacques Philippe 1) Laboratoire de Biologie Cellulaire et Moléculaire, Equipe de microbiologie, FSB -USTHB. BP 32. El alia Alger. Algérie. 2) Laboratoire Probiogem Polytech lille. Avenue Langevin. USTL1. Lille France. Abstract Un total de 85 souches de Bacillus isolées de 5 régions de sud algérien (Naama, Bishra, Adrar, Béchar et Tamanrasset). L investigation de l activité antibactérienne sur 4 bactéries pathogènes (Staphylococcus aureus ATCC25923 sensible à la méthiciline, Staphylococcus aureus ATCC34300 résistant à la méthiciline, Pseudomonas aeruginosa ATCC25853 et Escherichia coli ATCC25922) et de l activité antifongique vis-à-vis de 4 champignons pathogènes et/ou phytopathogènes (Monilia sp, Thielaviopsis sp, Colletotrichum sp et Fusarium sp) a mis la lumière sur 10 souches a potentiel élevé avec un large spectre d activité. Une corrélation des activités pour ces 10 souches a été démontrée avec la détection des gènes de synthétases par PCR pour la mycosubtiline et la surfactine. Nos résultats mettent en exergue des souches de Bacillus à intérêt industriel que l on puisse utiliser dans des procédés de biotechnologie. Mots clés: Bacillus, lipopeptides, activité antifongique, activité antibactérienne, biomolécules. 1 Introduction Le genre Bacillus est caractérisé par sa diversité et l aptitude de ses espèces à produire des molécules bioactives qui peuvent être utilisées dans différents domaines, en particulier ceux de l'agriculture, l'environnement et l industrie [3,5], Beaucoup de ces molécules sont des peptides produits en utilisant la voie de biosynthèse non ribosomiale impliquant des synthétases multi-modulaires. Ces composés sont produits par une grande variété de micro-organismes tels que les bactéries et les champignons [2]. 2 Méthodes L isolement des colonies a été effectué sur boites de Petri contenant de la gélose nutritive, après incubation 24 à 48h à 30 C. La sélection des souches s est faite sur la base de l observation microscopique de la spore. Activité antibactérienne : Un inoculum de 0,5 Mc Farland a été préparé à partir d une culture âgée de 18h de la bactérie teste, qu on a ensemencé sur milieu Muller Hinton par écouvillonnage. Des disques de GN de 4 mm préalablement coupés à partir des boites de Petri des souches de Bacillus sp à tester sont mis sur les boites tests. Après incubation à 30 C pendant 24 heures, les résultats sont évalués par la mesure du rayon d inhibition. Activité antifongique : Dans une boite de Petri contenant le milieu Mueller Hinton, on ensemence au centre le champignon test, puis la souche à tester par spot à une distance de 1,5 à 2 cm de celui-ci. L incubation se fait à 30þC pendant 72 heures avec des lectures quotidiennes [1]. Recherche de deux familles de lipopeptides : surfactine et mycosubtiline : Deux couples d amorces ont été utilisés, As1-F/Ts2-R pour la surfactine et Am1-F/Tm1-R pour la mycosubtiline [4]. 215

216 Mon Fus Col Thi SASM SARM Ps Ec 19, 20, 21 et 22 décembre 2012 Hôtel EL Mouradi Douz - Tunisie 3 Résultats Fig. 1 Résultats de l activité antimicrobienne vis-à-vis de : Monilia sp (1), Thielaviopsis sp (2), Staphylococcus aureus (SASM) (3), Staphylococcus aureus résistant à la méthicilline (SARM) (4), Pseudomonas aeruginosa (5). 100% porcentage de positivité % 0% Fig. 2 Histogramme représentant le taux de l activité antimicrobienne. Mon: Monilia sp, Thi : Thielaviopsis sp, Col : Colletotricum sp, Fus : Fusarium sp, SASM : Staphylococcus aureus, SARM : Staphylococcus aureus résistant à la méthicilline, Ps :Pseudomonas aeruginos, Ec : Escherichia coli Une corrélation des activités a été démontrée avec la détection des gènes de synthétases par PCR pour la surfactine et la mycosubtiline. Fig. 3 Gels d agarose des produits de PCR avec les amorces As1-F/Ts2-R et Am1-F/Tm1-R. Références [1] Abderrahmani A., Tapi A., Nateche F., Chollet M., Leclère V., Wathelet B., Hacene H, et Jacque P., 2011, Bioinformatics and molecular approaches to detect NRPS genes involved in the biosynthesis of kurstakin from Bacillus thuringiensis, Appl. Microbiol. Biotechnol. 92, pp [2] Caboche S., Pupin M., Leclere V., Fontaine A., Jacques Ph., Kucherov G., 2008, Norine: a database of nonribosomal peptides, Nucl. Acids. Res. 36, pp [3] Ongena M.et Jacques P., 2008, Bacillus lipopeptides: versatile weapons for plant disease biocontrol, Trends. Microbiol. 16, pp [4] Tapi A., Chollet-Imbert M., Scherens B. et Jacques P., 2010, New approach for the detection of non ribosomal peptide synthetase genes in Bacillus strains by polymerase chain reaction, Appl. Microbiol. Biotechnol. 85, pp [5] Schallmey M., Singh A. et Ward OP., 2004, Developments in the use of Bacillus species for industrial production, Can. J. Microbiol. 50, pp

217 P.131. Legionella pneumophila sérogroupe 1 dans le réseau d eau chaude sanitaire au Maroc: Caractérisation par électrophorèse en champs pulsé et Anticorps Monoclonaux Mekkour Mariam 1,2, Ben Driss El khalil 2, Jarraud Sophie 3,Squinazi Fabien 4, Tai Jalila 1,5, Cohen Nozha 1 * 1 Division de Microbiologie et Hygiène des Aliments et de l Environnement, l Institut Pasteur du Maroc -Casablanca, Maroc. 2 Laboratoire Diversité et Conservation des Systèmes Biologiques, Faculté des Sciences de Tétouan, Maroc. 3 Laboratoire de Microbiologie, Centre National de Référence de Legionelle hôpital Edouard-Herriot, Lyon, France. 4 Laboratoire d Hygiène de la Ville de Paris, France 5 Laboratoire de Biotechnologie, de l Environnement et de la Santé, Faculté des Sciences et Techniques, Université Hassan II- Mohammedia, Maroc Corresponding Author: Dr Nozha Cohen, Institut Pasteur du Maroc Casablanca, 20360, Maroc nozha.cohen@pasteur.ma Résumé Les légionelloses se présentent essentiellement comme des infections pulmonaires aiguës qui peuvent être nosocomiales ou communautaires causées par Legionella pneumophila et plus rarement par d autres espèces. Généralement l inhalation d aérosols générés par des sources d eau contaminées : douches, système de distribution, tours aéroréfrigérantes sont à l origine de ces infections. Notre étude porte sur le typage moléculaire par PFGE et Mab de 40 souches de L. pneumophila sérogroupe 1 isolées à partir de 200 échantillons d eaux chaude. La comparaison par PFGE des L. pneumophila sérogroupe 1 isolées montre six profils différents, dont certains sont présents au niveau de plusieurs établissements. Ces profils sont comparés à la banque de données du CNRL de Lyon, on a retrouvé des pulsotypes qui sont à 100 % de similitude avec la souche Paris. Par ailleurs, quatre sous-groupes ont été détectés par la technique des anticorps monoclonaux dont 32,5% appartiennent au sous-groupe France/Allentown, 27,5% à Benidorm, 27,5% à Olda et 12,5% Bellingham. Cette étude montre ainsi que 60% des isolats ont l'épitope de virulence qui est reconnu par MAB3/1. Mots clés : Anticorps monoclonaux, eau chaude sanitaire, électrophorèse en champs pulsé, pneumophila serogroups 1, Légionellose, typage moléculaire. Legionella 1 Introduction La légionellose est une forme de pneumopathie humaine grave et parfois mortelle, elle est provoquée par l inhalation d aérosols contaminés par la bactérie Legionella pneumophila qui est responsable de 90 % des cas de légionellose et près de 85 % des cas sont dus au sérogroupe 1 [1 2]. L. pneumophila, naturellement présente à faibles concentrations dans l environnement aquatique, peut coloniser les systèmes de distribution d eau et y proliférer (tours aéroréfrigérantes, réseaux de distribution d eau chaude sanitaire )[3-4]. Le risque lié à cette bactérie est néanmoins peu étudié au Maroc. Une étude multicentrique sur les systèmes d eaux chaudes desservant différentes structures d accueil de grand public (Hôtel, Hôpitaux, Hammam etc) a été menée par l Instituts Pasteur du Maroc dans l objectif de détecter la présence de Legionella pneumophila et d établir une base de données de l ensemble des sous-groupes et des profils de Legionella pneumophila serogroupe 1 par Mab et PFGE circulant au Maroc. 2 Méthodologie 217

218 40 souches de L. pneumophila sérogroupe 1 sont isolées durant la période à partir de 200 échantillons d eaux chaude. L ensemble de ces échantillons sont analysées selon la norme AFNOR T Analyse par PFGE Les profils génétiques sont obtenus par électrophorèse en champ pulsé après digestion par l enzyme de restriction SfiI. Les gels sont colorés avec du bromure d éthydium et pris en photo sous lampe UV. Les profils de restriction sont analysés par le logiciel «GELCOMPAR II» et les pourcentages de similitude calculés[4]. 2-2 Analyse par Mab Les souches de L. pneumophila sérogroupe 1 ont été remises en suspension dans une solution saline tamponnée et analysées par immunofluorescence indirecte en utilisant des anticorps monoclonaux de panneau de Dresden comme décrit précédemment[5]. 3 Résultats La comparaison par PFGE des L. pneumophila sérogroupe 1 isolées montre six profils différents, dont certains sont présents au niveau de plusieurs établissements. Ces profils sont comparés à la banque de données du Centre National de Référence des Legionella de Lyon, on a retrouvé des pulsotypes qui sont à 100 % de similitude avec la souche Paris. Par ailleurs, quatre sous-groupes ont été détectés par la technique des anticorps monoclonaux dont 32,5% appartiennent au sous-groupe France/Allentown, 27,5% à Benidorm, 27,5% à Olda et 12,5% Bellingham. Cette étude montre ainsi que 60% des isolats (n=40) ont l'épitope de virulence qui est reconnu par MAB3/1. Acknowledgements: Nous remercions le Réseau International des Instituts Pasteur (RIIP) pour le financement de ce travail. Références [1] Doleans A, Aurell H, Reyrolle M, Lina G, Freney J, Vandenesch. et al. 2004, Clinical and environmental distributions of Legionella strains in France are different. J Clin Microbiol; 42: [2] Yu VL, Plouffe JF, Pastoris MC, Stout JE, Schousboe M,Widmer A, et al. 2002, Distribution of Legionella species and serogroups isolated by culture in patients with sporadic community-acquired Legionellosis: an international collaborative survey. J Infect Dis; 186: [3] Mehiri-Zghal E, Essalah L, Ghariani A, Mahjoubi W, Reyrolle M, Meugnier H, Forey F, Jarraud S, Freney J, Etienne J, Slim-Saidi L. 2008, Molecular comparison of Legionella pneumophila serogroup 1 isolated in Tunisia. Pathologie Biologie, 56: [4] Mekkour M, Ben Driss E.K, TAI J, SQUINAZI F, FOREY F, JARRAUD S and COHEN N. 2012, Molecular typing of Legionella pneumophila strains isolated from environment in Morocco. Cellular and Molecular Biology, 58: [5] Helbig JH, et al. 2002, Pan-European study on culture-proven Legionnaires disease: distribution of Legionella pneumophila serogroups and monoclonal subgroups. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 21:

219 P.134. Activité anti-oxydante et propriétés inhibitrices de l alpha amylase de Centauria lippii Moez Rafrafi 1, Hichem Ben Salah 1, Kais Mnafgui 2, Abdelfattah Elfeki 2, Noureddine Allouche 1 1 Laboratory of Chemistry of Natural Products, Faculty of Sciences of Sfax, B.P. 1171, 3000 Sfax, Tunisia; 2 Laboratory of Animal Ecophysiology, Faculty of Sciences of Sfax, University of Sfax, P.O.Box 95, Sfax 3052, Tunisia; Abstract Le diabète est une maladie chronique largement répandue dans la population humaine. Notre présente étude a évalué in vitro l effet antidiabétique des fleurs de Centauria lipii ainsi que leur activité anti-oxydante. Les résultats obtenus ont montré que les fractions de butanol, d acétate d éthyle et d hexane possèdent un effet inhibiteur puissant de l alpha amylase comparé à celui de l acarbose. L activité inhibitrice de l alpha amylase est corrélée avec les teneurs en flavonoïdes et en polyphénols de chaque extrait de la plante. L activité anti-oxydante de chacun des extraits de la plante est exprimée en termes d activité de DPPH. Mots clés : Alpha-amylase, flavonoïdes, polyphénols, DPPH. 1. Introduction: Le diabète est une affection chronique due, soit à une insuffisance génétique ou acquise de la production d insuline par le pancréas, soit au fait que cette insuline n est pas assez active. Cette insuffisance provoque une augmentation de la glycémie qui conduit aux complications diabétiques. Une des approches thérapeutiques du diabète type 2 est l utilisation des inhibiteurs spécifiques de l alpha-amylase, enzymes clé de la digestion des carbohydrates [1]. Cependant, les inhibiteurs pharmaceutiques comme l acarbose et le miglitol possèdent des effets secondaires indésirables. Notre présente étude vise à tester les effets antioxydants et inhibiteurs de l alpha-amylase de différents extraits de Centauria lippii. 2. Methodology: Centaurea lippi a été recueillie de Sfax en mai Ses fleurs séchées et broyées ont été macérées à la température ambiante avec de l'éthanol à 80% pendant 24 h et sous agitation mécanique. La solution aqueuse restante a été fractionnée successivement avec l'hexane, l'acétate d'éthyle et le butanol pour obtenir les extraits correspondants. L activité de l alpha amylase in vitro est déterminée par un dosage spectrophotométrique en utilisant l'acarbose comme composé de référence. L'absorbance a été mesurée à 405 nm. La teneur en composés phénoliques totaux dans les extraits a été déterminée avec le réactif de Folin-Ciocalteau selon la méthode de Chen et al. [2]. Leur teneur en flavonoïdes a été mesurée en utilisant un mode opératoire décrit par Djeridane et al. [3]. L'activité anti-oxydante des différents extraits a été évaluée par la mesure de la capacité à piéger les radicaux libres en termes de donneur d'hydrogène H + et ce moyennant la méthode du DPPH (1,1-diphényl-2-picryl hydrazil). 219

220 3. Résultats : Activité inhibitrice de l alpha amylase «in vitro»: Les résultats ont montré que les fractions de butanol, d acétate d éthyle et d hexane possèdent un effet inhibiteur puissant de l alpha amylase avec des CI 50 respectivement de l ordre de 38, 59 et 46 µg/ml. Cependant, l acarbose pris comme référence possède un CI 50 de 60 µg/ml. Taux de polyphénols: Les résultats obtenus ont montré que les extraits d acétate d éthyle (859 mg GAE /g), de butanol (686,83 mg GAE /g) et de méthanol (564,02 mg GAE /g) sont riches en polyphénols et en flavonoïdes par contre l'extrait à l'hexane en contient des faibles quantités (357,95 mg GAE /g). Activité anti oxydante: L'activité anti-oxydante de tous les extraits a été évaluée par la méthode de DPPH. L'extrait d'acétate d'éthyle s est avéré extrêmement efficace en piégeant les radicaux de DPPH avec CI 50 = 20 µg/ml, suivi par l extrait butanolique ayant une CI 50 = 63 µg/ml. Ces activités ont été comparées à celles des antioxydants de références : la vitamine E (CI 50 = 28 µg/ml) et le BHT (CI 50 = 18 µg/ml). References [1] Shobana S., Sreerama Y. N., Malleshi N.G. : Composition and enzyme inhibitory properties of finger millet (Eleusine coracana L.) seed coat phenolics mode of inhibition of α-glucosidase and pancreatic amylase. Food Chem, 2009, 115: [2] Chen H.Y., Lin Y.C., Hsieh C.L. : Evaluation of antioxidant activity of aqueous extract of some selected nutraceutical herbs. Food Chem. 2007, 104 (4): [3] Djeridane A., Yousfi M., Nadjemi B., Boutassouna D., Stocker P., Vidal N. : Antioxidant activity of some Algerian medicinal plants extracts containing phenolic compounds. Food Chem 2006, 97:

221 P.135. Effet de l interaction nitrate /ammonium sur le comportement du Fenugrec (Trigonella foenum-graecum), vis-à-vis du sel. Mohamed Chebbi, Najoua Msilini, Thouraya Amdouni, Mokhtar Lachaal & Zeineb Ouerghi Unité de Physiologie et Biochimie de la Réponse des Plantes aux Contraintes Abiotiques. FST, Campus Universitaire, 2092, Tunis El Manar, Tunisie. Résumé En Tunisie, 10% de l ensemble du territoire, soit 25% des terres cultivées sont affectés par la salinité. En plus de la salinité, ces sols sont caractérisés par la faible disponibilité d azote minéral, ce qui limite d avantage la productivité des plantes. Dans ce travail, la réponse du fenugrec à l interaction des differentes concentrations en NH 4 + /NO 3 -, vis à vis du sel (100 mm du NaCl) a été étudiée. A l émergence de la première feuille, les plantules âgées de 5 jours sont transférées dans une chambre de culture en conditions contrôlées (température, humidité relative et lumière). Après une semaine d acclimatation sur le milieu nutritif de base, les plantules ont été transférées sur différents milieux, contenant des proportions différentes de nitrate et d ammonium. Après 14 jours de culture, un traitement salin a été appliqué (100mM NaCl), pendant 14 jours. Les résultats montrent une nécrose au niveau des feuilles des plantes du fenugrec, cultivées sur les milieux contenants de l ammonium, et ceci en l absence comme en présence du sel. De plus, quelle que soit la nature de l azote utilisé, la présence de NaCl dans le milieu de culture diminue la croissance des plantes. Ceci se manifeste par une réduction de la production des biomasses (fraîche et sèche) et de la teneur en eau, et par une perturbation du statut ionique. Les plantes cultivées sur les milieux ammoniacaux (NH 4 /NO 3 : 2,5 mm / 0mM et 1,25 mm /1,25 mm) sont les plus touchées. Par ailleurs, le traitement salin induit une stimulation de l activité anti-oxydante, en particulier de la catalase et des peroxydases, des teneurs en polyphénols, en tanins condensés et en flavonoïdes (au niveau des feuilles), surtout chez les plantes cultivées en présence de nitrate (NH 4 /NO 3 : 0mM/2,5mM). Ainsi, la présence du nitrate dans le milieu de culture améliore la croissance et le développement des plantes de fenugrec face au stress salin. 221

222 P.136. Anti-inflammatory and antioxidant activities of Mentha longifolia. 1 Mohamed Derbali, 1 Karama Zouari, 2 Mongi Saoudi 1 Mohamed Trigui, 2 Abdelfattah Feki & 1 Slim Tounsi. 1 Plants Protection and Ameloration s laboratory, Biotechnology Center of Sfax, BP 1177 Sfax 3018, TUNISIA. 2 Life Sciences Department, Science Faculty of Sfax, University of Sfax, BP 1171 Sfax 3000, TUNISIA. Abstract This study was designed to investigate anti-inflammatory and antioxidant activities of different extracts of Mentha longifolia. Investigation of antioxidant activity by DPPH assay (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) and beta-carotene bleaching assay showed a strong activity with ethyl acetate and depleted water extracts from Mentha plant. ethyl acetate and depleted water extracts were able to reduce free radical DPPH with an IC 50 of and µg/ml respectively, they were also effectively able to inhibit linoleic acid oxidation with an IC 50 of and µg/ml respectively. These same two extracts showed a protective anti-inflammatory and antioxidant potentials in vivo. Keywords: Anti-inflammatory activity; Antioxidant activity; Mentha longifolia. 1 Introduction M. longifolia has several biological activities, it possesses antimutagenic [1] and genotoxic potential [2]. It is a source of flavoring ingredients [3] as it has activities antipyretic and anti-nociceptive [4]. This study aim to investigate antioxidant and anti-inflammatory potentials of M. longifolia. 2 Methodology Determination of total polyphenols content : Assay of total polyphenols is performed according to the reagent colorimetric method using Folin- Ciocalteau phenol [5] and the results are expressed as mg gallic acid equivalent per gram of sample. Free radical DPPH assay : It is a colorimetric method based on the discoloration of DPPH radical (2.2 diphenylpicrylhydrazyl). This free radical, stable at room temperature, presents an intense violet coloration disappears during the saturation of the electron shells, that is to say, during the transition to a non-radical [6]. Beta-carotene bleaching assay : Trapping radicals formed during the autoxidation of linoleic acid by oxygen leads to fading or bleaching of β-carotene, and consequently to the decrease of its optical density. Discoloration of β- carotene can be slowed down in the presence of antioxidant that blocks the formation of free radicals. But in his absence, the free radical attack linoleic acid molecule of β-carotene which is fading fast [7]. Induction of paw edema by carrageenan : This model has been used to evaluate the inhibitory action of anti-inflammatory drugs on the preventive edema caused by injection of carrageenan in the plantar fascia of the hind leg of a mouse [8]. Lipid peroxidation assay : Lipid peroxidation was assessed by measuring the substances reacting with thiobarbituric acid (TBARS), which include aldehydes (including MDA) and lipid hydroperoxides [9]. 3 Main Results 222

223 Results shows an important antioxidant potential of different extracts of M.longifolia especially with ethyl acetate and depleted water extracts (tab 1). Ethyl acetate and depleted water extracts were investigated for their antioxidant and anti-inflammatory properties in vivo, in mouse model. These two extracts were able to inhibit paw edema and were very efficient against lipid peroxidation by keeping low level of TBARS (Thiobarbituric Acid Reactive Substances). Table 1: The total phenolic content, the evaluation of the IC 50 values in the DPPH free radical-scavenging and b- carotene bleaching assay of M. longifolia leaves fractions. Total phenolic content (mg GAE/g) DPPH IC 50 (µg/ml) b-carotene bleaching assay IC 50 (µg/ml) Ethyl acetate 85 ± 0,42 19,64 ± 0,43 34,75 ± 0,3 n-butanol 85,4 ± 1,41 39,57 ± 0,87 42,55 ± 1,5 Depleted water 99,2 ± 2,26 26,23 ± 0,31 27,35 ± 0,2 References Boiled water 75,2 ± 2,26 47,7 ± 0,73 56,31 ± 0,7 [1] Gulluce M., Orhan F., Adiguzel A., Bal T., Guvenalp Z., Dermirezer LO., 2012, Determination of antimutagenic properties of apigenin-7-o-rutinoside, a flavonoid isolated from Mentha longifolia (L.) Huds. ssp. Longifolia with yeast DEL assay, TOXICOL IND HEALTH. [2] Baris O., Karadayi M., Yanmis D., Guvenalp Z., Bal T., Gulluce M., 2011, Isolation of 3 flavonoids from Mentha longifolia (L.) Hudson subsp. Longifolia and determination of their genotoxic potentials by using the E. coli WP2 test system, J. Food Sci. 76, pp [3] Bertoli A., Leonardi M., Krzyzanowska J., Oleszek W., Pistelli L., 2011, Mentha longifolia in vitro cultures as safe source of flavouring ingredients. Acta Biochim. Pol. 58, pp [4] Amabeoku G.J., Erasmus S.J., Ojewole J.A., Mukinda J.T., 2009, Antipyretic and antinociceptive properties of Mentha longifolia Huds. (Lamiaceae) leaf aqueous extract in rats and mice. Methods Finds Exp. Clin. Pharmacol.. 31, pp [5] Lister E., & Wilson P., 2001, Measurement of total phenolics and ABTS assay for antioxidant activity, Crop Research Institute, Lincoln, New Zealand. [6] Nsimba R. Y., Kikuzaki H. & Konishi Y., 2008, Antioxidant activity of various extracts and fractions of Chenopodium quinoa and Amaranthus spp. Seeds, Food Chem, 106, pp [7] Kulisica T., Radonic A., Katalinic V., & Milos M., 2004, Use of different methods for testing antioxydant activity of oregano essential oil, Food Chem. 85, pp [8] Liao C. R., Kao C. P., Peng W. H., Chang Y. S., Lai S. C., & Ho Y. L., 2012, Analgesic and Anti- Inflammatory Activities of Methanol Extract of Ficus pumilal. in Mice, Evid. Based Complement. Alternat. Med. [9] Buege J.A., & Aust S.D., 1972, Microsomal lipid peroxidation, Mehtods Enzymol. 51, pp

224 P.137. Composition Chimique et activités biologiques des huiles essentielles de «Senecio gallicus» Mohamed Mihoubi 1, Wafa Mihoubi 2, Ali Gargouri 2, Mohamed Damak 1 et Raoudha Jarraya 1 1 Laboratoire de Chimie des Substances Naturelles, UR11/ES74, Faculté des Sciences de Sfax, BP 1171, 3000 Sfax, Tunisie. 2 Laboratoire de synthèse des protéines et de valorisation de la biomasse chez les eucaryotes au centre nationale de biotechnologie à Sfax (CBS). Abstract Cette étude a pour objectif de déterminer la composition chimique et d évaluer les activités biologiques des huiles essentielles de Senecio gallicus (les fleurs et la plante dépourvue de ses fleurs). L extraction des huiles essentielles a été réalisée par hydrodistillation de chaque partie à part. Leurs compositions ont été determinées par CPG couplée à la spectroscopie de masse. Ce qui a permis d identifier 24 composés terpéniques dont les principaux sont : la sabinene (entre 49,45% et 65,34%), le bétamyrcene (entre 9,47% et 9,88%), le beta- Cymene (entre 2,83 % et 15,98%). L étude du pouvoir antioxydant de ces huiles a été réalisée par la méthode du DPPH. Les résultats obtenus ont montré l existence d une activité antioxydante relativement faible de ces huiles essentielles. L étude des activités antifongiques et antibactériennes des deux huiles essentielles de Senecio gallicus ont montré des pouvoirs antifongiques intenses, contre les deux champignons Rut-C 30 et Aspergilus niger, et de bonnes activités antibactériennes contre les souches de bactéries Bacillus sp et Staphylococus. La zone d inhibition la plus prononcée a été obtenue pour l huile essentielle des fleurs. Keywords: Senecio Gallicus, activités anti-oxydantes, antifongiques et antibactériennes. 1 Introduction: Les plantes ont été employées pendant des siècles comme remède pour les maladies humaines car elles contiennent des composants de valeur thérapeutique. L intérêt progressif de l utilisation des plantes médicinales et aromatiques dans les pays développés tout comme dans les pays en développement, a exhorté les chercheurs à les étudier davantage et ce, dans le but de rechercher de nouvelles principes actifs. Ceci nous a amené à étudier la composition chimique et les activités antioxydante, antifongique et antibactérienne des huiles essentielles de Senecio gallicus. Ce sujet nous a semblé d autant plus intéressant que la flore Tunisienne est extrêmement riche en plantes aromatiques. Le choix de cette plante ne fut pas arbitraire ; il a été basé sur l importance de sa famille «Astéracées» qui est réputée riche en métabolites secondaires. 2 Méthodologies: Au cours de cette étude, nous avons commencé par diviser la plante de Senecio gallicus en deux parties (les fleurs et la plante dépourvue de ses fleurs) puis chacune a été hydrodistillée à part pour l extraction des huiles essentielles. Dans une deuxième étape et pour une bonne caractérisation des huiles essentielles obtenues, nous les avons analysées par GC-MS. Puis, nous avons testé leurs activités biologiques commençant par la quantification de l activité antiradicalaire où nous avons opté pour la méthode qui utilise le radical DPPH [1] afin de déterminer leurs pouvoirs d inhibition. Ensuite, nous avons étudié leurs pouvoirs antibactériens et antifongiques [2] selon la méthode des puitsqui consiste à étaler la souche sur boite puis faire des puits de diamètre de 12 mm dans le milieu et y introduire le produit à tester à une certaine concentration. La zone d inhibition correspondante à la couronne autour des puits est la différence entre le diamètre d inhibition et celui des puits. 224

225 3 Résultats : Les analyses par GC-MS des huiles essentielles ont montré que le Sabinene (terpène) est le composé le plus abondant dans les deux compartiments de la plante. Il représente 49,45% de l huile essentielle des fleurs et 65,34% dans celle de la plante dépourvue de fleurs. Ces analyses ont prouvé aussi l existence du bétamyrcene (entre 9,47% et 9,88%), le beta-cymene (entre 2,83 % et 15,98%). L évaluation de l activité antiradicalaire des huiles essentielles de Senecio Gallicus nous a permis de découvrir que les activités antiradicalaires de ces huiles essentielles sont faibles par comparaison avec celle de l α-tocophérol. Il est à noter que l activité antiradicalaire de l huile essentielle la plante dépourvue de ses fleurs est plus marquée que celle des fleurs. Pour l activité antibactérienne, nous avons remarqué que les deux huiles essentielles ont présenté des activités appréciables sur les souches de bactéries Bacillus sp et Staphylococus. De plus, les deux huiles essentielles obtenues se sont révélées actives contre les deux champignons Rut-C30 et Aspergilus niger. La zone d inhibition la plus prononcée a été obtenue pour l huile essentielle des fleurs. Références: [1] Salah N., Miller N.J., Paganga G., Tijburg L., Bolwell, G.P & Rice Evans C.A., 1995, polyphenolic flavanols as scavengers of aqueous phase radicals and as chain-breaking antioxidants.archives of biochemistry and biophysics pp [2] Bauer, H.W., Kirby, W.M.M., Slerris, J.C. & Truck, M.,1996, Antibiotic susceptibility testing by a standardized single disc method. American Journal of Clinical Pathology. (45) pp

226 P Hematologic Changes on alloxan- induced diabetes in rats: protective effects of Vitamins (C and E) and Melatonin hormone Allagui Mohamed Salah 1, Feriani Anouar1-2, Alimi Hichem2, Bourogaa Ezzedine1, Nciri Riadh1, El Feki Abdelfattah1 1.Laboratoire d Ecophysiologie Animale, Faculté des Sciences, 3018 Sfax, Tunisia. 2. Unité de recherche Matériaux Environnement et Energie 06/UR/12-01, Faculté des sciences, Gafsa, Tunisia. Abstract This work is proposed in order to examine the protective effects of vitamins C/E and melatonin on hematologic parameters in diabetic rats. Diabetes was induced in male wistar rats via intraperitoneal alloxan injection. The present study shows a significant hematologic disorders represented by reduction in RBC count (18%, p 0.01), Hb (36 %, p 0.01), Ht (18%, p 0.01), MCH (17%, p 0.01) and MCHC (16%, p 0.01). However, treatment with vitamins C/E and melatonin significantly ameliorated these parameters compared to diabetic group. Furthermore, a significant increase in TBARS concentration and a significant decrease of SOD, CAT and GPx activities were found in the blood plasma in diabetic rats compared to non diabetic animals. Conversely, no significant change was observed in the other groups (diabetic rats treated with vitamins C/E and/or melatonin) showing the protective effects of these natural molecules. Keywords: Diabetic rats, Hematologic parameters, Oxidative Stress, Vitamins C/E and Melatonin Hormone. 1. Introduction Diabetic mellitus is the most common metabolic disorders. It is characterised by a hyperglycemia results from β cell disorders or relative insulin deficiency. Diabetes is sometimes associated with many complications affecting the eyes, kidneys, heart and / or nerves [1, 2]. Diabetes causes variety functional and structural disorders in many hematologic parameters [3]. The mechanisms were sometimes unknown. Melatonin, N- acetyl - 5- methoxy- tryptamine, hormone product by the pineal gland, is a direct radical scavenger and indirect antioxidant. It can regulate mammalian circadian and seasonal rhythms for examples [4, 5]. Vitamin E is a lipid - soluble chain-breaking antioxidant which protects especially biological membrane from lipid peroxidation [6]. Vitamin C (ascorbic acid) is an essential micronutrient required for normal metabolic functioning of the body. Thus it must be obtained through the diet [7]. Many biochemical, clinical, and epidemiologic studies have indicate that vitamin C may be of benefit in chronic diseases such as cardiovascular disease, cancer and cataract, probably through antioxidant mechanisms [7]. The aim of this work was to investigate the protective effects of melatonin and/or vitamins C/E combination on diabetes- induced toxicity in some hematologic parameters. 2. Experimental procedure The rats were randomly divided into five experimental groups (n = 8). Group 1: normal rats; Group2: diabetic rats; Group 3: diabetic rats treated with vitamins C/E (150mg/150mg/ kgbw/day); Group 4: rats treated with melatonin (10mg/ kg BW/day); Group 5: diabetic rats treated with vitamins C/E and melatonin. After 2 months of treatment, the animals were sacrificed by decapitation, and the trunk blood collected. The serum was prepared by centrifugation (1500 g, 15min, 4 C) and the erythrocyte was removed; all these samples were stored at 30 C until used. 3. Analytical methods Lipid peroxidation in blood plasma of all treated animal groups was measured by the quantification of thiobarbituric acid-reactive substances (TBARS). Superoxide dismutase (SOD), glutathione peroxidise (GPx) and Catalase (CAT) activities were measured for a second time. Some hematologic variables were determined. 3. Statistics Data are presented as means ± S.D. The determinations were performed from 8 animals per group and the differences were examined by student test, and the significance was accepted at p < Results 4.1. Blood glucose levels As shown in figure 1, that blood glucose level was higher increased in alloxan-diabetes rats, as compared to non diabetic rats. Treatment of these diabetic rats with Vitamins C /E and/or melatonin significantly ameliorate this level. 226

227 Figure 1. Effects of Vitamins C/E and Melatonin treatments on plasma glucose levels (mmol/l) in normal and diabetic rats for 60 days.values are means S.D Diabetic effects on some hematologic parameters The present study showed in alloxan diabetic rats a significant hematologic disorders and developed anemia in alloxan experimental rats showed by reduction in RBC count (18%, p 0.01), Hb (36 %, p 0.01), Ht (18%, p 0.01), MCH (17%, p 0.01), and MCHC (16%, p 0.01) (table 1). However, results in diabetic rats treated with vitamins C/E and/or melatonin showed an amelioration of these parameters (RBC, Hb, Ht...), compared to diabetic group (table 1) Erythrocytes TBARS levels It is noted that TBARS concentration was significantly increased in diabetic rats (table 2, by 160%). Treatment with vitamins (C and E) and /or melatonin caused a significant decrease in red blood cells TBARS. Interestingly, this decreased being more important in the diabetic rats treated with Vitamins and melatonin molecules Erythrocytes SOD, CAT and GPX activities As shown in table 2, a significant decrease of SOD, CAT and GPx activities were found in erythrocytes in diabetic rats compared to control animals. However, no significant change was observed in all others group: diabetic rats treated with vitamins and/or melatonin showing the protective effects of these natural molecules. Table1. Effects of diabetes, vitamins (C and E) and melatonin treatments on some hematologic variables in rats. hematologic Parameters Control Diabetes Diabetes and Vit C/E Diabetes and Diabetes and Vit melatonin C/E and melatonin RBC (10 6 µl -1 ) 8, 1 ± 0,28 6, 68 ± 0,13** 7,74 ± 0,17 7, 64 ± 0,14 7,94 ± 0, 17 Hb (g/dl) 14, 7 ± 0,44 9, 46 ± 1,44** 11, 96 ± 2,02 12, 53 ± 1,52 12,55 ± 0,70 Htc (%) 52, 16 ± 1,71 42, 86 ± 3,04* 44, 13 ± 4,83 45,5 ± 2,81 47, 80 ± 2,71 MCV (fl) 60,92 ± 1,25 58,45 ± 2,30 60,30 ± 0,95 57,83 ± 1,27 58,77 ± 1,35 MCH (pg) 17,62 ± 0,49 14,67± 0,52** 16,85 ± 0,41 16,30 ± 1,05 17,53 ± 0,23 MCHC (g/dl) 27,85 ± 1,06 23,83 ± 0,28** 29,10 ± 0,26 28,16 ± 2,26 28, 65 ± 0,67 PLT (10-3 µl -1 ) 1073 ± ,34 ± 105,70* 940,67 ± 69,30 889,34 ± 86* 1060 ± 96,28 * P 0, 05, ** P 0,01 and *** P 0,001 between diabetic group and control one and between diabetic group vs diabetic treated with Vitamins C/E and/ or Melatonin. Table 2- Effects of Vitamins C/E and Melatonin on Oxidative stress parameters (TBARs, SOD, GPx, and CAT) in Erythrocytes diabetic rats. Oxidative stress parameters Control Diabetes Diabetes and Vit C/E Diabetes and Melatonin Erythrocytes studied Diabetes and Vit C/E and Melatonin TBARs level (nmoles/ml ) 0, 80 ± 0, 12 1, 40 ± 0, 13** 1, 08 ± 0, 17 0, 98 ± 0, 08 0, 68 ± 0, 09 SOD activity (U/mg protein) 1, 75 ± 0, 06 1, 15 ± 0, 07*** 1, 55 ± 0, 09 1, 65 ± 0, 06 1, 81± 0, 11 CAT activity (µmoles H 2O 2/ (min x mg protein) GPX activity (µmoles GSS/ (min x mg protein) 0, 67 ± 0, 15 0, 30 ± 0, 07** 0, 52 ± 0, 12 0, 58 ± 0, 06 0, 64 ± 0, 08 2, 11 ± 0, 22 1, 22 ± 0, 12* 1, 72 ± 0, 09 1, 77 ± 0, 15 1, 97 ± 0, 05 * P 0, 05, ** P 0, 01 and *** P 0, 001 between diabetic group and control one and between diabetic group vs diabetic treated with Vitamins C/E and/ or Melatonin. 5. References [1] Gispen, W.H., Biessels, G.J., Cognition and synaptic plasticity in diabetes mellitus. Trends neurosci. 23, [2]McCall, A.L., The impact of diabetes on the SNC. Diabetes, [3]Moukhtar, Y., Aluminium induced changes in hemato-biochemical parameters, lipid peroxidation and enzyme activites of male rabbits:protective role of ascorbic acid. Toxicology, 199, [4] Beckers-Andre, M., Wisenberg, I., Schaeren Wiemers, N. et al, Pienal gland hormone metalonin binds and activates an orphan of nucleur receptor super family. J. Biol. Chem. 269, [5] Brezezinski, A., Melatonin in humans. N. Engl. J. Med. 336, [6] Hong, J.H., Kim, M.J., Park, M. R. et al., Effects of vitamin E on oxidative stress and membrane fluidity in brain of sterptozotocin-induced diabetes rats. Clin. Chim. Acta 340, [7] Carr, A.C., Frei, B., Toward a new recommended dietary allowance for vitamin C based on antioxidant and health effects in humans. Am. J. Clin. Nutr. 69,

228 P.139. Antiproliferative effect of Arthrocnemum indicum extracts on the control of the cell cycle arrest in Caco-2 human colon cancer cells Mondher Boulaaba *1, Soninkhishig Tsolmon 2, Junkyu Han 2,3, Kiyokazu Kawada 2,3, Abderrazak Smaoui 1, Hiroko Isada 2,3, Riadh Ksouri 1 & Chedly Abdelly 1 1 Laboratoire des Plantes Extrêmophiles, Centre de Biotechnologie de Borj-Cédria, BP 901, 2050 Hammam-lif, Tunisie 2 Graduate School of Life and Environmental Sciences, University of Tsukuba, Tennodai 1-1-1, Tsukuba, Ibaraki , Japan 3 Alliance for Research on North Africa (ARENA), University of Tsukuba, Tennodai 1-1-1, Tsukuba, Ibaraki, , Japan * mondher_82@yahoo.fr Abstract Phenolic content and antioxidant activities of shoot methanolic extracts were evaluated on the halophyte Arthrocnemum indicum collected during the flowering stages. Moreover, the antiproliferative effect of extracts on Caco-2 cells and its mechanism of action were investigated. Results showed that shoot extracts exhibit higher phenolic contents and higher antioxidant activities. Moreover, after 72h of treatment, shoot extracts have an antiproliferative effect on Caco-2 cells in a dose-dependent manner. This effect is revealed by the DAPI staining test. More importantly, A. indicum extracts cause the blockage of cell division in G 2 /M phase. This cell cycle arrest is due to the nature of protein expressions of cyclin B1, p38, Erk1/2, Chk1 and Chk2. Keywords: Arthrocnemum indicum, Phenolic capacities, Caco-2 cells; Anticancer activity, Cell cycle 1 Introduction Cell cycle progress is controlled in part by the balance between the reactive oxygen species (ROS) accumulation and the antioxidant system [1]. In fact, the overproduction of ROS as results of oxidative stress is a deleterious process which can be an important mediator of cell structures damage and consequently initiation of serious diseases such as cancer [2]. Recently, analysis of cell cycle arrest is a novel approach for cancer eradication [3]. Cells recognize and respond to extracellular stimuli by engaging specific intracellular programs, such as the signalling cascade that leads to the activation of mitogen-activated protein kinases (MAPKs) [4]. The importance of MAPK pathways to cell proliferation and death is highlighted by the observation that deregulation of these kinase cascades can result in cell transformation and cancer [5]. In addition, and related to the capacity of adsorbing and neutralizing free radicals, phenolics play an important role as preventive agents against oxidative diseases, such as cancers [6]. The therapeutically effects of plants have been attributed to their richness in bioactive molecules as phenolic compounds. These metabolites are produced by plants to overcome oxidative stress generated by severe habitats conditions. In this work, Arthrocnemum indicum shoot extracts effect on the Caco-2 cells proliferation related to phenolic content and antioxidant capacities were assessed. 2 Methodology Shoots of Arthrocnemum indicum were collected during the flowering stage in the sebkha El Kelbia in Kairouan (Tunisia). After drying, phenolic compounds were extracted by soshlet method with 80% methanol. The total polyphenolic, flavonoïd and condensed tannin contents were measured and the antioxidant activities were evaluated by the DPPH test, total antioxidant and the reducing power 228

229 activities. Moreover, the antiproliferative effect of the shoot extracts on Caco-2 cells (colon cancer cell lines) was investigated using the MTT test. To confirm this data, the cell number was stained with the DAPI dye. On the other hand, the flux cytometrie was used to determine the cell cycle arrest of Caco-2 after 72h treatment and the protein expression related to this blockage, as MAP kinase proteins, was performed by western blot experiment. 3 Main Results Table 1. Phenolic content and antioxidant activities of A. indicum shoot extracts A. indicum shoots Total phenolic content (mg GAE/g DW) Flavonoïd content (mg CE/g DW) Condensed tannin content (mg CE/g DW) Total antioxidant activity (mg GAE/g DW) Antiradical activity (IC 50 values in µg/ml) Reducing power (EC 50 values in µg/ml) * Control Shoots Figure 1. The antiproliferative effect of A. indicum shoot extracts on Caco- 2 cells using MTT test. Control Shoots Actin Cyclin B1 ErK 1/2 Figure 2. DAPI staining of Caco-2 cells treated with A. indicum. Results showed that shoot extracts have an antiproliferative effect on Caco-2 cells in a dose-dependent manner illustrated by 55% of inhibition using 100 µg/ml of extracts (Fig 1). The decreased of DNA synthesis illustrated by the DAPI dye confirm this data (Fig 2). Moreover, results shoed some up and down regulation of MAP kinase proteins (Fig 3). Same tendency of variability was shown with the rest of MAP kinase expressions. All this biological activity and protein behaviour seem to be in relation with the higher amount of total polyphenolic content (19.08 mg GAE/g DW) associated to a higher antioxidant activities especially against the radical DPPH (40 µg/ml) (Table 1). perk 1/2 p38 pp38 Chk1 pchk1 Chk2 pchk2 Figure 3. Changes in protein expression related to the G2/M arrest Acknowledgements: This study partially was supported by the JICA-JST Science and Technology Research Partnership for Sustainable Development (SATREPS) Project: Valorization of Bioresources in Semi-Arid and Arid Land for Regional Development. References [1] Sarsour EH, Kumar MG, Chaudhuri L, Kalen AL, Goswami PC, 2009, Redox control of the cell cycle in health and disease. Antioxid Redox Signal 11, pp [2] Gülcin I, Uguz MT, Oktay M, Beydemir S, Küfrevioglu OI, 2004, Evaluation of the antioxidant and antimicrobial activities of Clary Sage (Salvia sclarea L.). Turk J Agric For 28, pp

230 P.141. ACTINOMYCETES ET ACTIVITE ANTIFONGIQUE. Ouargli Moufida (1,2)*, Kirane Gacemi D (1, 2), Mansouri R (3). (1) Université Badji Mokthar Annaba. (2) Laboratoire Amélioration génétique des plantes. (3) Université Badji Mokhtar Faculté de medecine Annaba. * ouargli-moufida@hotmail.fr Résumé L évolution constante de la résistance aux antifongiques et l émergence de nouvelles maladies infectieuses, ainsi que la similitude métabolique et structurale des mycètes pathogènes aux animaux supérieurs, justifient l urgence de disposer de nouvelles molécules antifongiques. Les actinomycètes, bactéries à Gram positif à majorité filamenteuses, représentent la principale source de métabolites anticellulaires. A ce titre, nous avons reçu des souches d actinomycètes isolées et purifiées a partir du lac Oubeira, un écosystème, appartenant à l étage bioclimatique sub-humide chaud, situé dans le parc national El Kala et protégé par la convention de Ramsar Une étude des caractères morphologiques des souches a été effectuée sur les milieux ISP1, ISP2, ISP3, ISP4, ISP5, caseine amidon, milieu au malt. La production du pigment mélanine a été testée sur les milieux ISP6 et ISP7. L utilisation des sucres et d acide aminé a été réalisée dans le milieu ISP9 additionnée de 1% de chaque composant testé. La sensibilité aux antibiotiques a été testée sur 19 antibiotiques en utilisant la technique des disques sur le milieu Bennett. La dégradation de la gélatine, l amidon, la chitine, Tween80, caséine, catalase a été vérifiée. Une tolérance à différentes concentration de NaCl, de phénol, sodium azide et à différent ph a aussi été testée. L activité antifongique a été testée sur Cryptococcus neoformans (souche cible) en utilisant la technique de cylindre d agar. A l issu des résultats, nous concluons alors que le lac Oubeira d EL KALA renferme des souches d actinomycètes qui ont une activité antifongiques importante et ont une grande diversité vis-à-vis les résultats des tests physiologiques réalisés. L utilisation éventuelle de ces souches dans différents domaines d application, dont le domaine environnementale, l industrie pharmaceutique et agroalimentaire, donne une grande importance à l origine de ces souches. Le lac Oubeira joue alors un rôle écologique et environnemental très important. Ce ci nous oblige a renforcer les règles de protection. Mots clé : actinomycètes, Oubéira, molécules bioactives, écologie, environnement. 230

231 P Analgesic and anti-inflammatory activities of the ethanolic and methanolic extracts of the Phoenix Dactylifera L. leaves. Mouna Chakroun 1, Mohammed Makni 2, and Bassem Khemakhem 3 Department of Life Sciences, Faculty of Sciences Sfax, Route Soukra BP: University of Sfax, 3000 Sfax, Tunisia. Abstract Phoenix dactylifera L. commonly known as the date palm plays an important role in Tunisian s social, economic and ecological sectors. The aim of this research is to study the analgesic and antiinflammatory activities of the ethanolic and methanolic extracts of the Phoenix Dactylifera L. leaves. The first step followed in this study was to evaluate the analgesic activity by using the acetic acid, which was induced in the abdominal writhing test in mice at 400mg/kg dose level for the two extracts of methanolic and alcoholic (PDLME and PDLMA) leaves. Secondly, an anti-inflammatory activity of PDLME and PDLAE was carried out by carrageenan test on mice with the same dose as the analgesic activity. Introduction: The use of herbal medicine has become increasingly popular worldwide. Plants are rich in macro and micro-nutriments as well as bioactive compounds and have been recognized as a major source of dietary antioxidants with potential therapeutic benefits (Prior and Cao.,2000). There are many ancient records of herbal medical plants among which we chose Phoenix dactylifera L. to test the analgesic and anti-inflammatory activities. Such choice was not haphazard. In fact, there have been no studies assessing the anti-inflammatory and analgesic effect of P. dactylifera leaves on mice. The present study evaluates the analgesic and anti-inflammatory effects of hydroalcoholic and methanolic extracts from P. dactylifera L. leaves (PDME and PDEE). Methodology: Preparation of the leaves extracts of Phoenix dactylifera L.: The leaves were dried and powdered by liquid nitrogen. The powder was macerated in 70% of ethanol and in methanol/h2o (4/1), (v/v) for 3 days with occasional shaking. The combined ethanolic and methanolic extracts were filtered and evaporated by rota-vap. The semi solid extracts were dissolved in distilled water to prepare the drug solution. Analgesic activity: Acetic acid induced abdominal writhing Mice were treated according to the method described by Garcia and al., The mice were divided into four groups (n=2): Group 1= vehicle as untreated (control). Group 2= treated with medicament Paracetamol 50 mg/kg. Group 3 = treated with methanolic extract of leaves of Phoenix dactylifera L. 400 mg/kg. Group 4 = treated with the ethanolic extract of leaves of Phoenix dactylifera L. 400 mg/kg. The mice of the groups 2, 3 and 4 were pretreated orally, 60min before administration of acetic acid (0.6%).The number of abdominal contractions were cumulatively counted over a period of 30min. The analgesic activities were expressed by measuring the writhes in numbers (mean) and in percentages. It was calculated using the below formula followed by the results, which are presented in Table 1: Formula: %inhibition= ((Wc-Wt/Wc ) * 100 Wc and Wt = number of writhes observed in vehicle control group and treatment group, respectively. Anti-inflammatory Activity: Carrageenan- induced mice hind paw edema The method is described by Xu and al., The mice were divided into four groups (n = 2) Group 1= vehicle as untreated (control). Group 2= treated with medicament Indometacin50 mg/kg. Group 3 = treated with methanolic extract of Phoenix dactylifera L. leaves 400 mg/kg. Group 4 = treated with ethanolic extract of Phoenix dactylifera L. leaves 400 mg/kg. 231

232 The hind paw edema was produced by injecting 0.1ml of carrageenan in the right hind paw of each mouse under the subplantar region. The mice were pretreated with orally administered extracts and medicament 1 hour before carrageenan injection. The mice s pedal volume up to the ankle joint was measured using plethysomometer at the 1 st, 2 nd and 3 rd hours after the carrageenan injection. The percent of the inhibition of edema volume between treated and control group was calculated as the following formula and the result is presented in figure 1: Formula: % Inhibition = (Vc-Vt/Vc) * 100 Vc and Vt represent mean increase in paw volume in control and treated groups, respectively. Main Results Table 1: The effect of leaves of methanolic and ethanolic extracts of Phoenix Dactylifera L.in acetic acid-induced writhing in mice. Numbre of abdominal constrictions Untreated Paracetamol Methanolic leave extract Ethanolic leave extract After 5min After 10min % Inhibition After 15min 0 75% 75% 81.25% Figure 1: The Effect of methanolic and ethanolic leave extracts of Phoenix Dactylifera L. on carrageenan-induced mice hind paw edema. ( ) ethanolic extract of leaves ( ) methanolic extract of leaves ( ) Indometacin ( ) Temoin References 1/ Cheng-Hao Yu, Wei-Zhong Tong, Tao Sun, Bin Liu, Min Li, Xiao-Fang Xie, Hong Zhang. Diuretic, antiinflammatory, and analgesic activities of the ethanol extract from Cynoglossum lunceolatum. Journal of Ethnopharmacology 139 (2012) / Garcia MD, Fermandez MA, Alvarez A, Saenz MT. Antinociceptive and anti-inflammatory effect of the aqueous extract from leaves of Pimenta racemosa var, azua (Mirtaceae). J Ethnopharmacol 2004;91: / Prior, R, L, & Cao, G. (2000). Antioxydants phytochemicals in fruits and vegetables: dietary and health implications. Hortcultural Science, 35, / Xu, S., Bian, R., Chen, X., Experimental Methodology of Pharmacology (3rd Version). Peoples Medical Publishing House, Beijing, pp , ,

233 P.143. Production of secondary metabolite from the endophytic strain isolated from date palm leaves affected by the disease of brittle leaves family Deglet Nour 1 Jrad mouna, 1 Kadri Ines, 1 Ben Bacha Abir and 1 Gharsallah Néji 1 Life Sciences Department, Science Faculty of Sfax,, Microbiology laboratory, Laboratory of Plant Biotechnology applied to plant breeding, University of Sfax, BP 1171 Sfax 3000, TUNISIA Abstract An antimicrobial substance produced by endophytic strain was partially purified and studied for its antibacterial characteristics using the wells technique. The cell-free culture filtrate showed antibacterial activity against several species of pathogens including Gram-positive bacteria: Bacillus subtilis, Bacillus thuriengiensis, Bacillus cereus, Staphylococcus aureus, Micrococcus luteus, Enterococcus faecalis and Gram-negative bacteria: Escherichia coli and Salmonella thyphimirium. A step of extracting bioactive compounds was performed followed by a purification test by applying the technique of bio autography in order to determine the compounds responsible for this activity. Results show that Actinomycete produce a fatty acid (98%) and a quinon (90%) pigment can be involved in the antibacterial activity. Key words: Endophytic, Antibacterial substance, Extraction, Partial purification, 1 Introduction Endophytes are an important source of compounds active against plant pathogens (1). In addition to study antagonism against pathogenic organisms, these bacteria can induce a form of systemic resistance in plants. This induction is usually due to lipopolysaccharide (LPS) of the outer membrane of Gram-negative bacteria, but other molecules such as siderophores and salicylic acid are also considered as candidate molecules. Actinomycetes bacteria have been isolated and characterized to produce aminoglycosides, anthracyclins, glycopeptides, β-lactams, macrolides, nucleosides, peptides, polyenes, polyester, polyketides, actinomycins and tetracyclines (2). 2 Methodology Antibacterial activity test by the method of agar agar This technique is described by Zerizer and al in 2005 among which seven Gram-positive; Bacillus subtilis, Bacillus cereus, Bacillus thuriengiensis, Staphylococcus aureus, Micrococcus luteus, Enterococcus faecalis and Pseudomonas aeroginosa and two Gram negative bacteria: Escherichia coli and Salmonella typhimirium. Medium for the production of antimicrobial activities and growth kinetics Production of metabolites has been undertaken on broth media. To determine the best three medium were tested: GLM (yeast extract 3 g / l, malt extract 3 g / l, peptone 5 g / l glucose and 10g / l), GYE (Yeast extract glucose) (yeast extract 3g / l, glucose 10 g / l) (4) and TSB medium (tryptone 17 g /l, soy peptone 3 g /l, sodium chloride 5 g / l, dipotassium phosphate hydrogen 2.5g /l and dextrose 2.5g /l added to 1 liter of distilled water, ph 7.2 and agar 18 g /l) and growth kinetics was followed on the best medium. Solvent extraction The following organic solvents were used to extracte biomolecules in the supernatant from the filtered culture medium: 40ml of N-hexane, N butanole or ethyl acetate. The compounds endocellular were extracted by methanol. Location of activities, revelations by bioautography chemical and analyze by GC/MS 233

234 Location of active spots was carried out by bioautograhie plates thin layer chromatography on silica gel (Fluka).This technique has been described by (Betina, 1973) (3), then actif fraction is subjected to analysis by gas chromatography coupled to mass spectrometry. 3 Main results 1. Antibacterial activity test by the method of agar agar Actinomycetes strain isolate presents activity against Bacillus thuriengiensis, Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus. 2. Medium used for the production of antimicrobial activities and growth kinetics Table 1: Choice of medium for the production of antimicrobial activities Strain GLM GYE TSB+ K 2 HPO 4 (1 mm) and MgSO 4, 7H 2 O (2 mm) Actinomycetes The growth kinetics has been performed on the TSB medium added of K 2 HPO 4 (1 mm) and MgSO 4 (2 mm). The strain produce secondary metabolite since the antibacterial activity appeared during the stationary phase of strain. 3. Location of activities, revelations by bioautography chemical and analyze by GC/MS Extraction of the active substances is carried out with N-butanol and the zones of inhibition were measured by the method of the wells. Revelation microbiological butanol extract allowed us to highlight a two spot on the three active solvent systems used. The bioactive portion is located at the beginning of migration, below the first task is low compared to other colored spots. The bioactive portion of the scraped silica plate undergoes analysis by GC / MS is lipid in nature ( compound rich in oleic acid, hexadecanoic acid and octadecanoic acid ) but mainly a pigment (containing function quinon) can be involved in this activity. References 1. Strobel G A. (2003). Microbes infect., 5, Okami Y,Hotta K (1988). Search and discovery of new antibiotics, actinomyces in biotechnology. London, Academic,pp Betina V., (1983).The chemistry and Biology of antibiotics. (Nanta WT., and Rekker RF., Eds.). Amsterdam: Elsevier, Badji B., Riba A., Mathieu A., Lebrihji A. and Sabaou N. (2005). Antifungal activity of a saharan Actinomadura strain against various pathogenic and toxinogenic fungi. Laboratoire de recherché sur les produits bioactifs et valorization de la biomasse, école normale supérieure de Kouba, BP 92, Vieux Kouba, Alger, Algérie. J. Mycology,

235 P In vitro -amylase inhibition activity of Zygophyllum Album extracts Kchaou Mouna 1, Hichem Ben Salah 1, Kais Mnafgui 2, Abdelfattah Elfeki 2, Noureddine Allouche 1 1 Laboratory of Chemistry of Natural Products, Faculty of Sciences of Sfax, B.P. 1171, 3000 Sfax, Tunisia; 2 Laboratory of Animal Ecophysiology, Faculty of Sciences of Sfax, University of Sfax, P.O.Box 95, Sfax 3052, Tunisia; Abstract This study evaluated the effect of Zygophyllum Album extracts on -amylase inhibition using an in vitro model. The ethanol extract was a better pancreatic α-amylase inhibitor than the other fractions with IC 50 = g/ml. However, Ethyl Acetate fraction exhibited no effective inhibitory action against α-amylase. The inhibitory activity of alpha amylase is correlated with the content of the total flavonoid and total phenolic of each plant extract. Keywords: Alpha-amylase, total flavonoid, total phenolic. 1.Introduction: Diabetes is a big health problem affecting major populations worldwide. It is a metabolic disorder caused by complete or relative insufficiency of insulin secretion [1] and is the main cause of numerous complications related to many diseases. Moreover, one of the therapeutic approaches for the treatment of diabetes is the inhibition of carbohydrate-digesting enzymes principally α-amylase [2]. Recently, traditional medicine was recommended for the diabetic treatment [3]. Zygophyllum album is one of several traditional remedies used for diabetes cure in southern Tunisia. 2. Methodology: Zygophyllum album was collected from Douz (South of Tunisian) in July Air-dried and powdered leaves and flowers (800g) of Zygophyllum album were macerated with 80% ethanol for 24 h three times at room temperature using a mechanical stirrer. The remaining aqueous solution was fractionated successively with hexane, dichloromethane, ethyl acetate and butanol to obtain the corresponding fractions. On the other hand, a second extraction of powdered leaves and flowers (450g) was performed in the same conditions with 99% ethanol to obtain the ethanol extract. The total phenolic content in extracts was determined with Folin Ciocalteau reagent using the method of Chen and al. [4].The total flavonoid content in extracts was determined according to Djeridane and al.[5].the in vitro -amylase inhibition activity of all extracts was determined based on the spectrophotometric assay using acarbose as the reference compound. The absorbance was measured at 405 nm. 3. Main Results: The level of flavonoid and phenolic compounds in different extracts of Zygophyllum album is shown in Table 1. Except the hexane extract, which contained low amounts of flavonoid and 235

236 polyphenol, the other extracts were found to be rich in these compounds. As shown in Table 1, the butanol extract showed the highest amount of phenolic compounds ( mg GAE/g) followed by ethyl acetate ( mg GAE/g), dichloromethane ( mg GAE/g) and ethanol ( mg GAE/g) extracts. Furthermore, table 1 results showed that each extract from the medicinal plant showed a moderately inhibition of α-amylase enzyme. Meanwhile, it was observed that pancreatic α-amylase inhibitory activities increased in the order of Hexane fraction > Butanol fraction> dichloromethane fraction > Ethanolic extract However, Ethyl Acetate fraction exhibited no effective inhibitory action against α-amylase. Table 1: Total phenolic content, total flavonoid content and -amylase inhibition assay of Zygophyllum Album extracts Sample TPC (mg/g) TFC(mg/g) -amylase inhibition IC50 ( g/ml) Hexane extract Dichloro extract Ethyl acetate extract _ Butanol extract Ethanol extract Acarbose References : [1] Henquin C., Debuyser A., Drews G., 1992, T.D. Plant Regulation of K+ permeability and membrane potential in insulin-secretory cells, in : P.R. Flatt (Ed.) Nutrient Regulation of insulin secretion, Porland, London. [2] Gholamhoseiniana A., Fallaha H., Sharififar F. : Inhibitory effect of methanol extract of Rosa damascena Mill. flowers on α-glucosidase activity and postprandial hyperglycemia in normal and diabetic rats. Phytomedicine 2009, 16: [3]. Leila Z., Eliandra S., Luisa H.C., Anildo C.J., Moacir G.P., Bruno S., Fátima R.S. : Effect of crude extract and fractions from Vitex megapotamica leaves on hyperglycemia in alloxan-diabetic rats. Journal of Ethnopharmacology 2007, 109: [4] Chen H.Y., Lin Y.C., Hsieh C.L. : Evaluation of antioxidant activity of aqueous extract of some selected nutraceutical herbs. Food Chem. 2007, 104 (4): [5] Djeridane A., Yousfi M., Nadjemi B., Boutassouna D., Stocker P., Vidal N. : Antioxidant activity of some Algerian medicinal plants extracts containing phenolic compounds. Food Chem 2006, 97:

237 P.145A. Evaluation de la contamination par les aflatoxines de certains fruits secs:(sorgho, Pistaches, Amandes et Arachides) Fatima Oukerro-Haouari, JihèneKhouja& Mustapha Haouari Ecole Supérieure des Sciences et Techniques de la Santé de Tunis Résumé Dans ce travail, nous avons évalué la fréquence de contamination des échantillons de fruits secs par les différentes aflatoxines. La purification des aflatoxines est faite sur colonnes d immuno-affinités et leur quantification est réalisée par HPLC. Nos résultats montrent que 24,2% des échantillons sont contaminés par les différentes aflatoxines. Le sorgho est le plus contaminé (42%), avec une fréquence plus élevée pour la forme moulue (52,6%). Quant aux pistaches, arachides et amandes, Ils ont montré une contamination plus faible avec respectivement 32%, 11,33% et 7,62%. Parmi les quatre types d aflatoxines, 60% des échantillons sont contaminés par l AFB 1 avec des niveaux dépassants la VMR (2 µg/kg). Ces niveaux de contamination sont détectés dans les différents échantillons, arachides, pistaches, sorgho et d'amandes avec les pourcentages respectifs suivants : 82%, 78%, 50 et 25%. Cette contamination touche les différentes formes de ces fruits secs, cependant, la forme moulue semble la plus contaminée. 1. Introduction La contamination des denrées alimentaires par les moisissures est inévitable. En effet, la présence de moisissures et de leurs mycotoxines dans les aliments est devenue un sujet de préoccupation pour les professionnels de la santé ainsi que pour le commerce mondial. Parmi les mycotoxines qui contaminent les aliments,les aflatoxines (AFB 1, AFB 2, AFG 1 et AFG 2 ) hautement toxiques, cancérogènes et tératogènes[1,2]. Dans ce travail, nous avons estimé important d évaluer la fréquence de contamination, par les aflatoxines, de 666 échantillons de fruits secs analysés au le laboratoire central d'analyses et d'essai (LCAE) de Tunis. 2. Méthodologie Les échantillons sont répartis comme suit : 247 échantillons d arachides, 214 de sorgho, 105 d amandes et 100 de pistaches. Ces échantillons sont présentés au laboratoire pour être analysés sous différentes formes. Après extraction et filtration des échantillons broyés, la purification des aflatoxines se fait sur des colonnes d immuno-affinités et leur quantification est réalisée par chromatographie liquide haute performance HPLC.La valeur limite détectable (VLD) par cette technique est 0,1 µg /kg (ppb). 3. Résultats Parmi les 666 échantillons testés, 161 (24,17%)sont contaminés par les différentes aflatoxines (AFs), à un taux qui dépasse la VLD. Les résultats obtenus montrent que le sorgho a la fréquence de contamination par les AFs la plus élevée, avec 42% contre 32 %, 11,33% et 7,62% pour les échantillons de pistaches,d arachides et d amandes respectivement Fig

238 Fig1 : Fréquence de contamination en fonction de la matrice alimentaire Les formes mouluesdu sorgho et des amandes sont les plus contaminés avec une fréquence de 52,6% et 28% respectivementcontre 35% et 2,8%pour les formesgrains. Les taux de contamination des échantillons, des différentes formes d arachides (décortiquée, en coque et blanchie), présentent une légère différence avec respectivement 11,7%; 9,7 % et 8,6%. Parmi les quatre types d aflatoxines, l AFB 1 est le principal contaminant de nos échantillons, soit 60% des échantillons contaminés avec des niveaux de contamination en AFB 1 qui dépassent largement la valeur maximale réglementée (VMR) par la CE et qui est limitée à 2 µg/kg pour l AFB 1. Ces niveaux de contamination élevés par l'afb 1 sont détectés dans plus que 82% d échantillons d arachides et 78% des pistaches contaminées, comparés à ceux du sorgho et d'amandes ayant des pourcentages respectifs de 50 et 25%. Conclusion : Les fruits secs testés sont contaminés par les différentes aflatoxines, mais à des fréquences et des teneurs variables.la contamination touche toutes les formes des denrées analysées,néanmoins, celle de la forme moulue est toujours la plus élevée, avec des teneurs dépassant largement la VMR. Ces échantillons représentent un danger réel pour le consommateur. De ce fait, il est essentiel de faire un suivi périodique et systématique de ces denrées et d empêcher la mise en vente de ces produits alimentaires très contaminés. Références [1] Hussein s H &Brasel J.M., 2001, toxicity, metabolism and impact of mycotoxins on humans and animals. Toxicology, 167, [2] Massey T.E., Stewart R.K., Daniel J.M, & Ling L., 1995, Biochemical and molecular aspects of mammalian susceptibility to aflatoxin B 1 carcinogenicity. Proceeding of the Society for Experimental Biology and Medicine, 208,

239 P.145B. Etude de l action protectrice de la sève du palmier dattier (Phoenix dactylifera) le «Legmi», sur la toxicité induite par l isoniazide «INH», chez le rat Amel Haouari, Yassine M rabet& Mustapha Haouari Ecole Supérieure des Sciences et Techniques de la Santé de Tunis Résumé La sève du palmier «Legmi»,est riche en molécules à actions anti-oxydantes.le but de cette étude est de chercher les éventuels bienfaits du «Legmi»chez le rat traité à l isoniazide «INH» connu par son hépatotoxicité. Le poids de certains organes et les valeurs plasmatiques des principaux déchets azotéssont déterminés chez trois groupes de 8 rats recevant par gavage durant un mois:(1)100mg d INH/kg, (2) l INH+ 5ml/kg de «Legmi»ou(3) 5ml/kg d eau. Les animaux sont décapités à jeun, le foie, le rein gauche et le quadricepssontprélevés. Les valeurs plasmatiques de la créatinine, de l acide urique et de l uréesontdéterminées.l INH induit chez le rat une baisse dans les poids du foie, du rein et du muscle et un accroissement de la créatinine et de l acide urique. Cependant, le«legmi» entraine une atténuation des ces effets de l INH. 1. Introduction La sève du palmier dattier (Phoenixdactylifera L.), communément appelée «Legmi» a une composition très nutritive, caractérisée par une richesse en sucres, en minéraux et molécules à actions antioxydantes. Cependant, l isoniazide «INH», médicament antituberculeux, très utilisé en pratique clinique en subaiguë, est responsable de nombreux cas d hépato et de neuro-toxicité. Le but de cette étude est de chercher chez le rat les éventuelles actions bénéfiques d une consommation régulière de cette sève durant un mois.dans ce cadre, nous avons étudié le poids frais de certains organeset les valeurs plasmatiques des principaux déchets azotés. 2. Méthodes Nous avons utilisé 3 groupes de 8 rats Wistar recevant par gavage (1) 100mg d INH/kg de poidscorporel«i», (2) 100mg d INH/kg de poids corporel + 5ml/kg de «Legmi» «IL», (3) 5ml d eau /kg de poids corporel«t». Après décapitation des rats à jeun le foie, le rein gauche et le quadriceps sont prélevés et pesés. Le plasma, obtenu à partir du sang total, permet la déterminationdes valeurs de la créatinine, de l acide urique et de l urée 3. Résultats Le traitement à l INH, durant un mois induit chez le rat une baisse dans les poids relatifs frais du foie (-17,8% ; p<0,01), du rein (-22,3% ; p<0,01) et du muscle quadriceps (-18,2% ; p<0,05), (Fig. 1). Cependant, la consommation du «Legmi» chez le groupe traité entraine une atténuation des effets de l INH au niveau du foie, du rein etdu quadriceps, aboutissant à des valeurs proches de celles des témoins. 239

240 Fig. 2 : Effet du Legmi sur les poids relatifs des 3 organes du rat traité à l INH. Concernant les valeurs plasmatiques des déchets azotés, la créatinine et l acide urique, l INH engendre une augmentation respective de 57% (p<0,05) et 58% (p<0,01), (Fig. 2). Ces variations sont significativement atténuées par la consommation du «Legmi» pour aboutir à des valeurs qui tendent vers celles des témoins. Fig.1 : Effet dulegmi sur les valeurs plasmatiques des déchets azotés, créatinine, acide urique et urée chez le rat traité à l INH. 4. Conclusion La sève du palmier semble exercer un effet bénéfique réduisant l intensité de la toxicité de l INH. Cette action pourrait être attribuée à la richesse du «Legmi» en minéraux, polyphénols et d autres molécules anti-oxydantes 240

241 P.146. La Valorisation Energétique du Lactosérum par Méthanisation Lahouel Nacera #1, kheroua Omar *2, Yahiaoui Fatiha #3, Benabbes Nabil. Unité de Recherche Appliquée en Energies Renouvlables Ghardaia - Algerie. Université d Oran Es- senia oran - Algerie. nacylahouel@hotmail.com omar_kheroua@hotmail.com Résumé Le lactosérum est un sous produit des industries de transformation laitière. Par sa composition biochimique (lactose, protéines, vitamines), le lactosérum devient un facteur de pollution redoutable du même, la production de biocarburant par la fermentation des rejets de l industrie laitière est très limitée donc il représente actuellement un excellent milieu valorisable. Cette étude permet de mettre au point des procédés qui proposent un ensemble des traitements physico-chimiques et biologique. Dans ce travail, nous nous sommes intéressés à la valorisation des rejets de l industrie laitière pour le but de diminuer les facteurs polluants qui l on résulte de même pour produire un biocarburant de second génération. Mots clés : lactosérum, industries laitière, fermentation, valorisation, biocarburant. 1 Introduction Le lactosérum est un des exemples le plus typique de la transformation d un sous produits du lait en matière première. Ceci est due d une part à une demande biochimique d oxygène (D.B.O.) considérable et d autre part, à sa teneur élevée en sucres]. Il contient également des protéines, des lipides. Cette richesse pourrait être utilisée en biotechnologie comme substrat de fermentation par pour la production d un biocarburant. Ajoutons que le lactosérum a déjà fait l objet d essais pour être exploitées en tant que matière première de fermentation pour la production de divers métabolites, tels que l acide citrique, l éthanol, la production d aliments pour animaux. I. COMPOSITION DU LACTOSERUM Le tableau ci-dessous présente les chiffres approximatifs de la composition des sous-produits issus de la fabrication du fromage. TABLE1 COMPOSITION MOYENNE DES SOUS-PROSUITS DE L INDUSTRIE FROMAGERE Constituent Lactosérum doux Lactosérum acid Matière sèche totale (%) Lactose (%) Protéine (%) Matière grasse (%) Minéraux (%) Les nutriments du lactosérum les plus abondants sont le lactose, les proteins soluble, et les sels minéraux. Les sels du lactosérum sont composes de NaCl et KCl (plus de 50%), sels de calcium (phosphate principalement) et autres minéraux, en plus faibles teneurs. Lelactosérum contient aussi d autre composants, tels que l accide lactique (0,05%) et citrique, des matières azotées non protéique (urée et acide urique), et des vitamine du groupe B (Gonzfiles Siso,1996 ;Mawson,1994 ;Shang et al. ; 1994). II. UTILISATION DU LACTOSERUM Les proteins du lactosérum sont utilises comme supplement dans l alimentation animale et exploitées pour leurrs proprieties fonctionnelles et nutritionnelles dans l industrie alimentaire (Sienkiewicz et al., 1992). 241

242 Le lactose est converti en d autres composés, lets que les acides organiques (acide acétique, propionique, lactique et succinique) ou en biocarburant ( bio-éthanol) obtenus par fermentation microbienne (Jorge et al., 2006 ; Tejayadi et al., 1995 ; Yang et al. ; 1992). 2 Methodologie Le but de ce travail est de produire un biocarburant par fermentation bactérienne à partir de lactosérum en utilisant Saccharomyces cerevisiae avec un haut rendement et une haute productivité et ceci par l optimisation des conditions de fermentation afin d optimiser l utilisation de lactosérum et d en réduire la charge sur l environnement. Dans un premier temps une étude expérimental a été réalisée sur un méthaniseur pilote adapté à ce substrat, elle a permis de déterminer les paramètres de fonctionnement optimaux ainsi que les performances du procédé.ainsi le rendement en biocarburrant atteint. Dans un deuxième temps la vérification du procédé, mais avant de vérifier si le procédé est efficace et permet de rejeter un effluent dans les normes, il est nécessaire de s'intéresser à la composition de celui-ci ainsi qu'à la législation précisant les teneurs maximales. 3 Resultats Il existe plusieurs indicateurs qui permettent d évaluer si un effluent peut être considéré comme polluant. On rencontre généralement les paramètres suivant : - Le ph : il s agit en fait du potentiel hydrogène qui permet d exprimer l acidité des différents rejets en fonction du type de transformations subies lors de la fabrication du fromage (lait caillé lactique, pâte pressée, etc ) et des lessives utilisées qui peuvent être soit acides, soit basiques. - La DCO (Demande Chimique en Oxygène) : Cette mesure permet de quantifier la teneur en matière organique présente dans l effluent. Etant donné que la pollution rencontrée dans le cas des effluents de fromagerie est essentiellement organique, cet indicateur est très important. - La DBO5 (Demande Biologique en Oxygène sur 5 jours) : Il s agit de la mesure de la fraction soluble de matière organique qui peut être dégradée en 5 jours par des bactéries, cela donne donc une mesure de la teneur en matière organique facilement biodégradable. Il existe aussi des mesures de DBO20 mais elles sont moins fréquemment utilisées. - Le rapport DCO/DBO5 : Ce rapport représente le critère de biodégradabilité de la matière organique. Ainsi, plus ce rapport est petit, plus le rejet sera facilement épuré par les bactéries. VALORISATION ENERGETIQUE DU LACTOSERUM PAR LA METHANISATION La digestion anaérobie ou méthanisation consiste à transformer les matières organiques (sucres, proteins et graisses) en l absance d oxygène pour produire d énergies. La transformation est réalisée par un ensemble de bactéries anaérobies. Outre l aspect énergétique, la méthanisation présente des avantages pour l épuration des effluents très chargés comme le lactosérum, avant leur rejet en station dépuration. Son intérêt est de plus en plus pertinent à l avenir car : Elle permet une reponse locale à une pollution souvent peu maitrisée. Elle permet une substitution d énergie toujours plus chère d année en année pour couvrir les besoins de procédés en eau chaude. Utilisation en chaudière Valorisation électrique et thermique par co-générationn. 4 CONCLUSION La valorisation de lactosérum par méthanisation sert, d une part, à limiter la pollution engendrée par ce sous-produit, d autre part, à synthétiser un nouveau produit qui trouve une grande gamme d application dans de plusieurs domaines. D après les résultats de l analyse physicochimique du lactosérum on a conclu que ce dernier présente une qualité. References [1] Hélène Fruteau de Laclos Yves Membrez Office fédéral de l énergie ; Programme de recherche énergétique Biomasse Energie à partir de petit-lait : comparaison des filières biogaz et bioéthanol. [2] Rhonalpénergie-Environnement MARS 2007.voyage d étude sur le biogaz agricole haute Autriche. [3] S. Gana et A. Touzi, Production et Valorisation Biomasse, (2001) Valorisation du Lactosérum par la Production de Levures Lactiques avec les Procédés de Fermentation Discontinue et Continue. [4] Cercle National Du Recyclage Décembre Le biogaz.-le traitement biologique des déchets organique. [5] Futura-Sciences, Le 8 octobre Comment utiliser la biomasse pour produire de l énergie, 242

243 P.147. Chemical compositions of essential oils of Anacyclus clavatus leaves and flowers Nacéra Tigrine-Kordjani a*, Hamza Aliboudhar a. a Laboratoire d Analyse Organique Fonctionnelle, Faculté de Chimie, Université des Sciences et de la Technologie Houari Boumediene, El Alia, BP 32, Bab Ezzouar, Algiers, Algeria tigkor12@yahoo.fr Abstract Several species of Anacyclus have been used in folk medicine, including: Anacyclus pyrethrum, A. Radiatus, A. Valentinus, A. Cyrtolepodioides and A. Clavatus. These herbal drugs have been known since antiquity for their medicinal properties, especially against fungal diseases, gastric pain, digestive disorders, dentistry and fevers, due to a big number of their secondary metabolites like flavonoïds. Many studies have been reported on these plants to elucidate the medicinal activities such as antiinflammatory, antibacterial powers and anti-insect effect, but it has been so far no report on the chemical composition of the essential oil of Anacyclus clavatus witch in the present work, we contribute to knowledge for the first time, its essential oil chemical compositions. The hydrodistillation technique has been used in the extraction of essential oils from aerial parts, leaves and flowers separately. The extracts have been analyzed by gas chromatography GC and gas chromatography coupled with mass spectrometry GC-MS on two capillary column HP5MS and Carbowax 20M. The leaves essential oil was principally composed of Germacrene D with a percentage of 16.84%, followed by δ-elemen (8.86%), α-caryophyllene (5.77%), 1,8-Cineole (4.94%), Bicyclo [3.1.1] hept-2-en-4-ol, 2,6,6-trimethyl,acetate (4.21%), Cedars-8-en-13-ol (3.78%), α-pinene (3.59%), Bicyclogermacrene (3, 54%), α-farnesene (2.25%) and β-myrcene (2.24%). The main compounds in the flower essential oil are β-thujone (11.16%), Bicyclo [3.1.1] hept-2-en-4-ol, 2,6,6- trimethyl-, acetate (6.72%), Ketone Artemisia (6.26%), β-pinene (5.19%), Myrtenal (4.88%), τ Elemen-(3, 69%), Myrtenol (3.42%), 1,8-Cineole (2, 35%), (+)-Cyclosativene (2.17%), 9-Isopropyl- 1-methyl-2-methylene-5-oxatricyclo [ (3,8)] undecane (2.16%). Key words: Essential oil; Medicinal plant; Anacyclus clavatus; Germacrene D; β-thujone; GC and GC-MS. 243

244 P.148. Isolement des composés antioxydants de l Artemisia herba-alba guidée par la détection on-line HPLC-DAD-DPPH Nacera Dahmani-Hamzaoui, * Sofía Salido, ý Pablo J. Linares-Palomino, ý Aoumeur Baalioumer, ** Joaquín Altarejos ý * Département de Chimie, Faculté des Sciences, Université Mouloud Mammeri, Tizi Ouzou, Algérie. ** Département de Chimie Organique, Faculté de Chimie, Université Houari Boumediene, B.P. 32, El-Alia, Bab-Ezzouar, Alger 16111, Algérie. Departamento de Química Inorgánica y Orgánica, Facultad de Ciencias Experimentales, Universidad de Jaén, Jaén, Espagne. hamzaouirayen2002@yahoo.fr Résumé Aujourd hui, l industrie porte un grand intérêt à la recherche de nouvelles sources d'antioxydants naturels. Bien que l'utilisation d'antioxydants synthétiques soit strictement réglementée, des préoccupations ont été exprimées au sujet de la sécurité de certains de ces derniers et leur utilisation a commencé à diminuer en raison de leur toxicité [1]. Les antioxydants naturels sont devenus une partie de l'alimentation humaine dans le but de diminuer le risque de maladies telles que les maladies coronariennes, le cancer et le diabète [2]. La présente étude traite de l'isolement et de l'identification des molécules anti-oxydantes présentes dans l Artemisia herba-alba de la région de M'sila (400 km au sud-est d'alger). Les structures des composés isolés par chromatographie sur colonne et HPLC préparative à partir de l extrait d'acétate d'éthyle ont été déterminées comme étant les dérivés d acide chlorogénique, 3-Ocaffeoylquinique acide, le 3,5-di-O-caffeoylquinique acide et 4,5-di-O-caffeoylquinique acide. Les structures de ces composés ont été déterminées par méthodes spectroscopiques telles que RMN 1 H, RMN 13 C, RMN 2D, UV, IR, LC MS [3]. L'activité anti-oxydante de l extrait et des composés purs a été déterminée par la mesure de l'activité anti-radicalaire utilisant le 2,2-diphényl-1-picrylhydrazyl radical (DPPH). Mots clé: Artemisia herba-alba, antioxydants, acides caffeoylquiniques, DPPH. Acide Chlorogènique 3,5-di-O-caffeoylquinique 4,5-di-O-caffeolquinique acides Références [1]. Gharavi N., Haggarty S., El-kadi A.O.S., 2007, Curr. Drug Metabol. 8, 1 7. [2]. Dimitrios B., 2006, Trends Food Sci. Technol. 17, [3]. Logendra S.et al. 2003, Phytochemistry. 67,

245 P.149. Caractérisation d un extrait coagulant le lait de Cynara cardunculus. 1 Khreisat Nadjoua, 1 Choukri Ali Laboratoire de chimie organique et valorisation des substances naturelles.université Ziane Achour Djelfa. Algérie. Résumé Des études assez récentes ont été consacrées à la fabrication artisanale des fromages qui s effectue depuis un siècle à l aide d un extrait coagulant à partir des fleurs de Cynara cardunculus. L objectif de ce travail est de caractériser l extrait en vue d optimiser les conditions de son utilisation. Keywords: coagulation du lait, présure végétale, chardon, Cynara cardunculus, électrophorèse PAGE-SDS. 1 Introduction:. A travers cette étude, nous avons tenté d apporter une meilleure connaissance sur l utilisation de Cynara cardunculus, comme agent coagulant le lait, nous avons ciblé la caractérisation de l extrait enzymatique obtenu par les fleurs, et l optimisation des conditions de coagulation, ensuite, nous avons essayé de faire une caractérisation électrophorétique de l extrait brut PAGE-SDS. 2 Méthodologies: D abord, une extraction est faite sur les fleurs de Cynara cardunculus selon la méthode de Tsouli (1974) [1] nous avons déterminé en comparaison avec la présure, l activité coagulante, la force coagulante, et nous avons ainsi étudié l effet de ph et de la température sur le substrat de Berridge[2]. Enfin une caractérisation électrophorétique (PAGE-SDS), suivant le protocole de Laemmli et Favre (1973) [3], de l extrait de fleurs est faite en présence de SDS et de 2-β-Mércaptoéthanol, et en utilisant trois concentrations de l extrait. 3 Résultats: Les résultats montrent que l extrait brut de la fleur a permis de donner à partir de 10 g de fleurs séchées 25 ml d extrait enzymatique, donnant un temps de floculation de 7,71 sec et une activité coagulante de 12,97 U.A.C /ml et donc une force égale à Pour obtenir un temps de floculation compris entre 12 et 15 min l extrait doit être dilué à raison de 1,5%. Tableau 1. La concentration en peptides solubles dans le TCA à 12% (PM 3000) augmente avec le prolongement du temps d incubation, il en ressort ainsi que l extrait de fleurs possède l activité protéolytique la plus élevée par rapport à la présure Figure 1. Dans la zone de ph étudié (5,2 7), l activité coagulante de notre extrait est maximale à ph 5,8, l activité est plus favorisée par l abaissement du ph du lait, elle n est pas complètement inhibée à ph 7.Figure 2. L extrait de fleur a montré une activité maximale à 55þC dans l intervalle de 35þC et 65þC, l augmentation de la température entraine une amélioration nette de l activité coagulante Figure 3. La caractérisation par électrophorèse sur gel de polyacrylamide en présence de SDS et β- mercaptoéthanol, de l extrait brut des fleurs comparé à la présure, a permis de donner une seule bande et que l ensemble des protéines a une taille moléculaire aux alentours du 40 kda, la migration des 245

246 échantillons moins concentré donne le même profil. La présure donne deux bandes dont l une est bien distincte, de taille moléculaire égale à 35 kda Figure 4. Tableau 1 : caractéristiques de l extrait enzymatique Cynara Cynara Présure Présure Extrait brut Dilution 1.5% Solution mère Dilution 2% Temps de floculation 7.71±0,6 810±29,4 12.8±0,43 830±22,7 Activité coagulante 12.97±0, ±0, ±0, ±0,002 Force coagulante ±28, ±0, ±12, ±7,4 Fig 1: L activité protéolytique Fig 2: Effet du ph Fig 3 : effet de la température Fig 4 : profil électrophorétique References [1] TSOULI, J., Étude comparée de l activité de trois variétés d artichauts du genre Cynara cardunculus sur la coagulation du lait. 537 : [2] BERRIDGE N. J., The purification and crystallization of rennin. Biochem.J., [3] LAEMMLI U. K. and FAVRE H Maturation of the head of bacteriophage T4. I. DNA packing events. Journal of molecular biology, 80,

247 P.150. Effect of Titanium Dioxide Nanoparticles (TiO 2 -NPs) on Hepatic Parameters in Rats Naima Rihane Ben Younes 1, Salem Amara 1, Imen Mrad 1, Imen Ben Slama 1, Wahid Khemissi 1, Mustapha Jeljeli 1, Jaber El Ghoul 2, Karim Omri 2, Lassaad EL Mir 2, Khémais Ben Rhouma 1, Hafedh Abdelmalek & Mohsen Sakly 1. 1 Laboratory of Integrated Physiology, Faculty of Science- Bizerte, 7021 Jarzouna, Tunisia. 2 Laboratory of physics of Materials and Nanomaterials applied to Environment, Faculty of Science - Gabes, Tunisia. Abstract Titanium dioxide nanoparticles (TiO2-NPs) have a wide range of applications in many fields. However, their effects on human body are still unclear. The aim of this study was to investigate the effects of subacute toxicity of TiO2-NPs on liver at various time points (1and 14 days). Rats were injected intraperitonealy with TiO2-NPs (20mg/kg body weight). The treatment has no effect on the health, behavior of the animals and liver weight, while it increased the titanium content of the liver. TiO2 induced a slight modulation of plasma biochemical parameters (AST, ALT and LDH). Histology showed little inflammation overall. However, these results provided strong evidence that the TiO2-NPs could induce liver pathological changes. Keywords: Tio2 nanoparticles, sub-acute toxicity, liver, Rats. 1 Introduction Nanosized titanium dioxide (TiO2) is used widely in various everyday products and can be applied to the medical field for diagnostic or therapeutic tools [1]. Recent studies have indicated that TiO2 NPs are toxic to human organs, and cause oxidative stress [1]. Other studies had shown that it produced pulmonary inflammation, cytotoxicity and histopathological changes by intratracheally instillation [2], intraperitoneal injection or oral administration. In this study, rats were injected i.p. with nanoparticles of TiO2. The study was focused on the long-term accumulation of TiO2-NPs and the liver histopatological changes. In addition, the effects of TiO2 on serum biochemical levels (alanine aminotransferase, aspartate aminotransferase and lactate dehydrogenase) were also determined. 2 Methodology Male Wistar rats were purchased from the Tunisian Company of Pharmaceutical Industries (SIPHAT). The animals were housed under controlled conditions of temperature (25 C) and light (12:12 light:dark). All animals were provided with water and food ad libitum. Rats were divided into four groups (n=6), two control and two experimental groups. Treated animals received 10 ip injections with moderate dose of TiO2 NPs (20 mg /Kg) every two days and control group received a dose of 9 sodium chloride. Half of the rats in each group were killed after 24 hours (1) and the remaining half were killed on day 14 (2) [3]. Animals were first weighed and blood samples were collected via the ocular vein. Then they were sacrificed. Serum was collected by centrifugation (3000 g for 15 min). Liver function was evaluated based on the serum levels of alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST), lactate dehydrogenase (LDH) and liver histology. These biochemical parameters were determined by an automated biochemical analyzer. The liver was excised and weighed. Fractions of liver were kept in 10% formalin (v/v) and processed using the classical histological methods for histopathological examination. About g of the liver were weighed, digested and analyzed for titanium content that was analyzed by ICP-AES. The detection limit of titanium was mgl

248 3 Main Results There were no significant changes of the body weight coefficients of liver. The i.p. injection of TiO2- NPs at 20mg/Kg of body weight to male rats, leads to a non-significant atrophy of the liver in the order of 1% just after the last 24h injection (4.67 ± 0.09 vs 4.62 ± 0.4) and reaches 5% after 14 days (4.03 ± 0.07 vs 3.81 ± 0.1). Table 1: Contents of Titanium in liver of rat one day and 14 days after (ip) injection Groupe Control Treated (1) Treated (2) Ti (mg/g) 0, , , The results indicated that the TiO2-NPs accumulated in liver could be retained for over 14 days in these tissues; there was a slight decrease in TiO2 levels from day 1 to days 14 (3,11 and 2,73 mg/g respectively). Table 2: Biochemical assay in serum of rats (mean ± SEM, n=6) 1 day later 14 days later Group AST (U/I) ALT (U/I) LDH (U/I) Control (1) 75,42 ± 3,73 30,45 ± 2,33 812,73 ± 75,18 Treated (1) 90,3 ± 5,63 18,9 ±1,84* 1017 ± 109,48 Control (2) 88,37 ± 4,55 30,97 ± 1,84 808,15 ± 47,77 Treated (2) 111,56 ± 8,89* 22,05 ± 2,89* 1138,15 ± 126,94* Sub-acute exposure to TiO 2 -NPs afforded by the i.p. route of administration could modulate the biochemical parameters measured in plasma samples (Table 2). These effects were related to changes in organ functions. Fig.1 Histopathological observation of liver (400 x) caused by intraperitoneal injection with TiO2-NPs, (A) Control group, (B) treated group showed vacuoles clear, intracytoplasmic Ti deposit. The section was stained with H&E and examined by light microscopy. Histopathological examinations showed that some TiO2 particles had entered the liver and this accumulation of titanium is consistent with the liver injury of rat and induce inflammatory response. References [1] Li N., Duan Y., Hong M., Zheng L., Fei M., Zhao Z., Wang J., Cui Y., Liu H., Cai J., Gong S., Wang H. & Fashui Hong, Spleen injury and apoptotic pathway in mice caused by titanium dioxide nanoparticules. Toxicology Letters. 165, pp [2] Warheit D.B., Thomas R. W., Kenneth L. R., Scott F. & Christie M. S., Pulmonary toxicity study in rats with three forms of ultrafine-tio2 particles: Differential responses related to surface properties. Toxicology. 23, pp [3] Chen J., Dong X., Zhao J. & Tang G, In vivo acute toxicity of titanium dioxide nanoparticles to mice after intraperitioneal injection. Applied Toxicology. 29, pp

249 P.151. L effet compétitif de Melanoides tuberculata sur Galba truncatula dans le sud-ouest Tunisien 1,2 Ghouaidia Najet, 1,3 & Hayet Hammami 1 Faculté des Sciences de Sfax, Département des Sciences de la Vie, Faculté des sciences de Sfax, TUNISIE 2 Laboratoire de Génétique Moléculaire Humaine (LGMH), Faculté de Médecine de Sfax. TUNISIE 3 Laboratoire de Biologie Moléculaire Parasitaire et Fongique, Faculté de Médecine de Sfax. TUNISIE Résumé Des sorties mensuelles ont été effectuées durant l année 2011/2012 dans l oasis de Ain Soltan (région de Gafsa, sud-ouest de la Tunisie). Pour étudier la densité et les générations de Gaba truncatula (la limnée tronquée), hôte intermédiaire de Fasciola hepatica, ainsi que celle de Melanoides tuberculata son éventuel compétiteur. Le dénombrement de ces deux mollusques a été effectué, sur des surfaces de 1 m² selon la méthode des quadras, dans deux gîtes différents : Un gîte témoin (G1) dans le quel vit la limnée toute seule et un deuxième gîte (G2) où vivent les deux espèces ensembles. La densité moyenne des limnées est égale à 1568 /m² (81,7%) dans le G1 et 352 /m² (18,3%) dans le G2. En effet les générations de G. truncatula sont de nombre de quatre lorsqu elle vit toute seule et de deux lorsqu elle est accompagnée de M. tuberculata. Ces résultats prouvent que ce dernier a un effet de compétition d ordre trophique contre l espèce vectrice de la distomatose. Mots clés: Melanoides tuberculata, Galba truncatula, distomatose, compétition, Tunisie. 1 Introduction Le mollusque Galba truncatula (Müller 1774) est connu depuis longtemps pour être l hôte intermédiaire de Fasciola hepatica (linnaeus 1758) [1], parasite responsable de la distomatose hepatique. La prévention de cette parasitose peut être assurée par la destruction de la limnée. Des travaux antérieurs vont dans ce sens en rapportant l élimination complète du pulmoné de ses habitats à l aide d un contrôle associant un traitement chimique préalable et l emploi de mollusques prédateurs [2] [3]. La généralisation d un contrôle biologique ne peut se faire sans une étude des mollusques accompagnants la limnée. Le présent travail complète ces essais de prévention en étudiant la densité et les générations de G. truncatula en présence et en absence de M. tuberculata, afin d explorer l effet de compétition entre ces deux mollusques. 2 Matériel et Méthodes Stations prospectées: Nous avons prospecté deux gîtes dans l oasis de Ain Soltan situé dans la région de Gafsa (sud-ouest de la Tunisie). G1 : gîte témoin, dans le quel la limnée vit toute seule, il s agit d un cours d eau de profondeur 5cm. L eau est courante, d épaisseur variable entre 0 et 3cm. G2 : où vivent les deux espèces ensemble; M. tuberculata et G. truncatula. Il s agit d un barrage cimenté pour le stockage de l eau. Ce gîte est de 55cm de profondeur avec une eau stagnante d épaisseur variant entre10 et 30cm. 249

250 Protocole d étude : Douze sorties mensuelles ont été effectuées de Juillet 2011 à Juin 2012 dans les deux gîtes de mollusques. Ces derniers ont été récoltés sur une surface de 1 m² selon la méthode des quadras, puis ils ont été comptés, mesurés à l aide d un papier millimétré et classés selon la taille en : -nouveaux nés : h 1mm -Juvéniles : 1 < h 2,5mm -Préadultes: 2, 5< h 4mm -Adultes: h 4mm 3 Résultats Tableau 1: La densité moyenne et les générations des limnées dans les deux gîtes prospectés Gîtes Densité moyenne des limnées % Nombre de generations (/m²) G ,7 4 G ,3 2 Total Remerciements: un grand remerciement s adresse à madame Hayet Hammami pour ses encouragements et ses aides appréciables le long de ce travail. Références [1] Graczyk T.K & Fried B., Development of Fasciola hepatica in the intermédiate host In: J.P. DALTON (ed.): Fasciolosis, CABI Publishing, Oxon, UK, [2] Rondelaud D., Le contrôle mixte et alterné de Lymnaea truncatula Müller par voie chimique et biologique. Premiers essais expérimentaux sur le terrain. Ann. Rech. Vet 17, [3] Rondelaud D., Le contrôle mixte et alterné de Lymnaea truncatula Müller. Etude comparative de trois techniques pour l'épandage du molluscicide. Ann, Rech, Vet., 19,

251 P.152. Inhibition of electron transfer from the quinone acceptor Q A - to Q B by iron deficiency 1 Najoua Msilini, 1 Thouraya Amdouni, 2 Robert Carpentier, 1 Zeineb Ouerghi. 1 Unité de Physiologie et de Biochimie de la Tolérance au Sel chez les Plantes, Faculté des Sciences de Tunis, Campus Universitaire, 2092 Tunis, Tunisia. 2 Groupe de Recherche en Biologie Végétale (GRBV), Université du Québec à Trois-Rivièrs, Trois-Rivières, Québec, G9A 5H7, Canada. Abstract The effect of iron deficiency on photosynthetic electron transport in Photosystem II (PS II) was studied in leaves and thylakoid membranes of lettuce (Latuca sativa, Romaine variety) plants. PS II electron transport was characterized chlorophyll fluorescence parameters. A decrease of maximal quantum yield of PS II and an increase of fluorescence intensity at step J and I of OJIP kinetics were also observed, indicating a slower rate of Q A - reoxidation. Keywords: Lettuce, Iron deficiency, Photosystem II, electron transfer. 1 Introduction Iron is an essential nutrient for all living organisms and has several roles in metabolic processes such as photosynthesis [1]. In thylakoid membranes, photosystem II electron transfer involves iron atoms located in cytochrome b-559 and a Fe 2+ strongly coupled to the primary quinone acceptor Q A at the reducing site. Despite its abundance in soils, iron is not readily available for plants use because most of iron is found as stable Fe(III) compounds with low solubility in calcareous soils. Consequently, iron deficiency is considered as a common problems affecting plants growth [2]. Fe deficiency has been shown to decrease Chl concentration and photochemical efficiency [3]. It was also reported that Fe deficiency caused a reduction in the relative amount of electron transfer complexes in thylakoid membranes [4]. In this study, we used isolated thylakoid membranes of Latuca sativa (lettuce), cultivated in the presence of different iron concentrations, to provide a further clarification of the inhibitory action of this stress in PSII. 2 Methodology Latuca sativa (Romaine variety) plants were grown in pots containing 1 L of Hoagland s nutrient for 21 days in the presence of 20µM FeIII-EDTA. Plants were then cultivated with different iron concentrations for 15 days. Thylakoid membranes were isolated from lettuce leaves according to Joly al. [5]. Chl fluorescence induction (FI) measurements were performed at room temperature using Plant Efficiency Analyser (Hansatech, King' Lynn, Norfolk, UK). 3 Main Results Fig. 1 shows the effect of declining iron concentrations on F v /F m thylakoid membranes after different days of treatment. These results demonstrate that, after 5 days, iron deficiency did not exert a significant effect on these parameters. Nevertheless, after 10 days, F v /F m started to decrease below 7.5 µm of Fe 2+ and this inhibition was accentuated at the end of treatment. The OJIP transients of thylakoids was analysed to gain more information on PSII photochemistry such as the electron transport in both donor and acceptor sides of PSII. The traces show the usual three main phases named O-J, J-I and I-P. Simulations based on this model showed that O-J corresponded to 251

252 the photochemical reduction of the first quinone electron acceptor of PSII (Q A ) while the secondary quinone acceptor (Q B ) redox state was proposed to be reflected during the J-I rise. The J-P phase was suggested to represent the reduction of the PQ pool (Boisvert 2006). Fig.1 Effect of various iron concentrations on F v /F m ratio and Fluorescence induction traces of isolated thylakoids After 15 days of treatment, fluorescence induction was declined compared to the control but the different phases of fluorescence curves remained distinguishable (Figure.1). This damping of fluorescence induction likely reflects the inhibition of oxygen evolution and inability to provide electrons to adequately reduce the acceptor side of PSII. The FI traces were decomposed to obtain the amplitude and half-times (t 1/2 ) of each phase. Table 1 shows that J-I amplitude decreased with iron concentration; however the numerical data demonstrated that this decrease was compensated by an increase in the O-J phase. We also observed that half-times increased for theses two steps, meaning that their kinetic are slower after iron deficiency conditions. Table 1: Quantitative analysis of FI in dark-adapted lettuce leaves. Phase O-J J-I I-P Paramètres A, % t 1/2, ms A, % t 1/2, ms A, % t 1/2, ms Fe, µm ±3a 49±2a 51±4ab 55±3b 63±4c 0.23±0.03a 0.27±0.01a 0.33±0.01b 0.37±0.02c 0.37±0.03c 37±2a 37±3a 35±2a 31±1b 24±1c 5.40±0.3a 8.35±0.6b 18.8±0.8c 26.2±2d 38.5±2e 16±2a 16±1a 14±1ab 14±2ab 13±2b 79.4±5a 83.5±4a 108.5±6b 120.0±5c 125.4±9c References [1]Briat JF., & Vert G., 2004, Acquisition et gestion du fer par les plantes, Cahiers Agricultures 13, pp [2]Marschner H., & Rômheld V., 1994, Strategies of plants for acquisition of iron, Plant. Soil 165, pp [3]Morales F., Abadía A., & Abadía J., 1991, Chlorophyll fluorescence and photon yield of oxygen evolution in iron-deficient sugar beet (Beta vulgaris L) leaves, Plant. Physiol 97, pp [4]Andaluz S., Millan AF., De las Rivas J., Aro EM., Abadía J., & Abadía A., 2006, Proteomic profiles of thylakoid membranes and changes in response to iron deficiency, Photosynth. Res. 89, pp [5]Joly D., Bigras C., Harnois J., Govindachary S., & Carpentier R., 2005, Kinetic analyses of the OJIP chlorophyll fluorescence rise in thylakoid membranes, Photosynth. Res. 84, pp [6]Boisvert S., Joly D., & Carpentier R., 2006, Quantitative analysis of the experimental O-J-I-P chlorophyll fluorescence induction kinetics apparent activation energy and origin of each kinetic step. FEBS. J. 273, pp

253 P.154. Heat or water stress? NeilaRassâa Landolsi 1, MyriamMajeri Gaïda 2 1 Crop Physiology laboratory, High School of Agriculture of Kef, TUNISIA. 2 Plant Ecologylaboratory, Faculté des Sciences de Tunis, TUNISIA. Abstract Drought can alter plant growth and organism temperature, too. It can then have an effect on the duration ofthe durum wheat development stages [1]. Are damages suffered on the plant due to only the effects of water stress or heat stress generated, too? A pot experiment was installed with different water treatments with careful monitoring of the internal temperature of plant organism and microclimatic conditions. Thermal responses of plants to water stress are tentatively analyzed as regards microclimate conditions. Organism temperature measurements showed that they are, probably,responsible on acceleration of apex development and consequently could be related to growth parameters. Keywords:Durum wheat, water stress, heat stress, development 1 Introduction The climate is one of the primary factors limiting yields. The random nature of rainfall affects crops, particularly if we consider that the agronomy is still for most part carried out without irrigation for 60% of them [2]. Thermaltime will be used to drive phenology.in order to measure the thermal response of plantsto drought (and to study itsreally effect on plant organism), three water treatments were applied at juvenilestages. Organism temperature and microclimatic conditionswere measured in this period. Other parameters,referred to plant growth and development, were measuredtoo. 2 Methodology The substrate used was perlite, siliceous volcanic sand, composed with granules of 1 to 5 mm diameter and 40 to 150 kg/m3 volume weight, 95.6% total porosity, 74.5% water retention capacity, between 6.5 and 7.5 ph and 1.4% buffer capacity.. Nutrients were given through a nutritive solution of Haogland.Three water treatments were applied and soil water content was maintained at 100% (T1), 50% (T2)and 30% (T3) of substrate water capacity. Pots have been weighed every 2 days in the morning, and water has been added until the initial weight of the pots was reached for each treatment. Treatments were applied when plants had between 2 3 and 6 leaves (48 days). During these stages, plants were kept on a moving char placed under shelter each evening or in case of rain, and exposed to the sun every morning. When water treatments have been applied, air temperature, humidity, wind speed and solar radiation weremeasured every 15 s and their average values wererecorded every 15 min on a data logger: air temperatureand humidity were measured by a HMP35A captor(vaisalaoy, Helsinki, Finland) placed under an aeratedshelter; solar radiation was measured with the aidof a pyranometer captor (LI-200, LICOR, Lincoln, Nebraska,USA) placed horizontally; wind speed was measuredby an anemometer placed on a char at 2-m height.captors were placed on the char behind plants day andnight, and connected to a data logger (Campbell scientific,ltd CR10 Wiring Panel, Shepshed, Leicester,UK).Internal organism temperature was measured, bythe same token, using thermocouples cupper/constantanof 0.2 mm inserted in apical shoot, and recorded at the same frequencyas air temperature. Other destructive measurements were done; theplants numbers of leaves and dry matter of aerial partswere measured; apex s stage and size were also measuredusing a scale of development stage inspired fromthe description by Kirby and Appleyard [3] on plantstaken at each leaf appearance, dissected and observedunder the binocular (five main stems of plants for 253

254 eachtreatment at least).anova, comparison test and some linear regressionswere made with statistical software GenStat. 3 Main Results For the bioclimatic layer(sub humid),microclimate conditions were relatively normal throughout the experiment.air temperature and diurnal radiation were included between 6.5 and 16 C, and between 1 and 224W/m2, respectively. Relative air humidity was on average 74% and finally wind velocity was also moderate for the season (2 m/s). Results are abstracted in diagram1. We observed increase in organism temperature compared to witness conditions. This upsurge is, in the beginning exceed air temperature, but it became lightly less than it in the end of experiment. Leaf growth was delayed in waterless conditions, as it observed in subsequent researches [4] but apical development was accelerated. Diagram 1 :Comparison of leaf growth and apical development Evolution with cumulative organism temperature in tow water conditions. Cereal development is dependent on temperature [5]. Then, when stage obtains its needing of degree days it achieves independently time will token and stage growth reached. It will, obviously, have consequence on leaf and biomass growth which will happen in fewer periods. Could the increase of organism temperature explain the development acceleration and then,poorplant growth? References [1] Rassaa N., Ben Haj Salah H. &LatiriK., 2008, Thermal responses of Durum wheat Triticum durum to early water stress, Consequence on leaf and flower development.c. R. Biologies 331, pp [2] Slama A, Ben Salem M, Ben Naceur M &ZidE, 2005, Les céréales en Tunisie: production, effet de la sécheresse et mécanismes de résistance. Sécheresse. 16(3)pp [3] KirbyE.J., AppleyardM.,1987, Cereal Development Guide, Arable Unit. [4] Brisson N. & Casals M.L., 2005, Leaf dynamics and crop water status throughout the growing cycle of durum wheat crops grown intwo contrasted water budget conditions, Agron. Sustain. Dev. 25, pp [5] Slafer G.A. & Rawson H.M., Sensitivity of wheat phases development to major environmental factors: A re-examination of some assumptions made by physiologists and modellers, Aust. J. Plant Physiol. 21, pp

255 P.155. Activités biologiques «in vitro» de l extrait aqueux du Frêne «Fraxinus excelsior» Nesrine Gdoura & Abdelfattah Elfeki Labo. Eco.physiologie Animale, Faculté des Sciences de Sfax, BP 802,3018 Tunisie ngdoura@yahoo.fr Résumé Au cours de ce travail nous nous sommes proposés de valoriser l effet phythotérapeutique du frêne, et ceci à travers une étude in vitro menée sur un extrait lyophilisé de frêne. Le protocole expérimental consiste à une étude in vitro en mesurant les différentes composantes actives dans l extrait aqueux lyophilisé et commercialisé du frêne telles que l activité antiradicalaire, antioxydante, les taux des polyphénols totaux, des chlorophylles et des caroténoïdes. Nos résultats découvrent une activité remarquable de l extrait du frêne lyophilisé.en conclusion, l extrait aqueux lyophilisé et commercialisé du frêne est doué d activités antioxydantes et antiradicalaires Il semble que ces effets bénéfiques sont liés à sa richesse en polyphénols, en caroténoides et en chlorophylle. Mots clés : activité antioxydante, activité antiradicalaire, extrait, frêne. 1. Introduction Le frêne (Fraxinus excelsior) est l'un des plantes médicinales les plus utilisées. Son écorce et ses feuilles ont des vertues diurétiques et anti-inflammatoires aussi utilisées contre la goutte et les rhumatismes. Ils sont appliqués aussi dans la médecine traditionnelle contre diverses maladies, y compris la cicatrisation des plaies, la diarrhée, la dysenterie. Il était aussi autrefois donné en fourrage aux animaux. Son écorce et ses feuilles ont des vertues diurétiques [1] et anti-inflammatoires [2] aussi utilisées contre la goutte et les rhumatismes [3]. 2. Méthodologie Le protocole expérimental consiste à une étude in vitro en dosant les différentes composantes actives dans l extrait aqueux lyophilisé du frêne notons : 2.1. Etude de l activite antiradicalaire (DPPH) :L activité antiradicalaire du frêne a été évaluée à l aide d une méthode colorimétrique en utilisant le radical 2,2-Diphényl-1-picrylhydrazyl (DPPH).La diminution de l intensité de la coloration rend, ainsi, compte du pouvoir piégeur de l extrait du frêne vis-à-vis du DPPH [4] Etude de l activite antioxydante (NBT) : Le test consiste à détecter l oxydation par l anion superoxyde O 2 -. La riboflavine agit comme transporteur d élèctrons. La molécule de nitroblue tetrazolium (NBT) réagit avec l anion superoxyde pour donner le NBT oxydé (tétrazoinyl) qui se transforme en formazan insoluble dans l eau et de couleur pourpre [5] Etude de l activite antioxydante totale :Les activités antioxydantes totales des extraits sont déterminées par la méthode décrite par Prieto [6]. La méthode est basée sur la réduction du Molybdate d ammonuim(vi) en Molybdate d ammonuim (V) par formation du complexe phosphate /Molybdate d ammonuim (V) de couleur verdâtre. L activité antioxydante totale est exprimée en acide ascorbique équivalent/mg d extrait de frêne Dosage des polyphenols totaux :Tout le contenu phénolique du frêne a été mesuré en suivant une méthode colorimétrique légèrement modifiée de Folin-Ciocalteu [7].Les résultats sont exprimés en équivalent acide gallique (EAG)/g d extrait de frêne aqueux Détermination de la teneur en carotènes et en chlorophylles :Les caroténoïdes sont les responsables de la couleur brun violacée du fruit, ils sont susceptibles de retarder la photo-oxydation 255

256 en désactivant l oxygène d où leurs effets protecteurs sur les végétaux. La chlorophylle est le principal pigment assimilateur des végétaux photosynthétiques. La méthode est décrite par Minguez [8]. 3. Résultats Nos résultats se regroupent dans le tableau I ci-dessous découvant une activité remarquable de l extrait du frêne lyophilisé. Tableau I : l activité anti-radicalaire,antioxydante,la teneur en polyphenols,en carotenoides et en chlorophylles dans l extrait aqueux de frêne lyophilisé. les résultats s expriment en moyen±esm,avec : n= nombre de mesures. Activité anti-radicalaire (test au DPPH) concentration d inhibition 50% (mg/ml) Frêne 1,26±0,32 Vit C 0,46±0,02 (n= 3) Activité anti-oxydante (test au NBT) Frêne 1,3±0,35 Vit C 0,6±0,05 (n= 3) concentration d inhibition 50% (mg/ml) Activite antioxydante totale Frêne 0,52±0,05 (n= 3) (mg de vit c/mg d extrait de frêne) Taux en polyphenols totaux Frêne 692,08±48,01 (n= 5) (mg d acide gallique/g d extrait aqueux de frêne lyophilisé) Concentration en carotenoides Frêne 267,24±40,46 (n= 9) (mg de luteine /kg d extrait aqueux de frêne lyophilisé) Concentration en chlorophylles Frêne 220,9±26,50 (n= 9) (mg de phéophytine /kg d extrait aqueux de frêne lyophilisé) Notre étude a montré que l extrait aqueux commercialisé de frêne est doué : d activité antiradicalaire et une activité antioxydante.elle a montré aussi la présence de polyphénols, caroténoïdes et des chlorophylles. Remerciement Je voudrais remercier mon encadreur Mr Abdelfattah EL FEKI, professeur à la faculté des sciences de Sfax de m avoir donné la possibilité de réaliser ce travail au sein de son laboratoire d eco.physiologie animale (fss), Références [1] CI.Wright., L. Van-Buren., CI. Kroner & MM.Koning.,2007. Herbal medicines as diuretics: A review of the scientific evidence. Journal of Ethnopharmacol.114,1-31. [2] D. Cappaert., DG. McCullough., TM.Poland & NW.Siegert.,2005. Emerald ash borer in North America: a research and regulatory challenge. American Entomologist.26, [3] H. Tsukamoto, S. Hisada & S. Nishibe.,1985.Gouty. Chemical and pharmaceutical bulletin.33, [4] S. Lee., HT. Shin., HJ.Hwang & JH.Kim.,2003. Antioxidant activity of extracts from Alpina kastumadai seed. Phytother. Res.17, [5] A.Yagi., A. kabash., NO. Okamura., H. Haraguchi., SM. Moustafa & TI. Khalifa.,2002. Antioxidant, free radical scavenging and anti-inflammatory effects of aloesin derivatives in Aloe vera. Planta Medica. 68, [6] M.Prieto & M,Aguilar.,1999.Spectrophometric quantitation of antioxydant capacity through the formation of a phosphomolybdenum complex:specific application to the determination of vitamin E. Analytical Biochemistry.269, [7] K.Wolfe, X.Wu & RH.Liu.,2003.Antioxidant activity of apple peals. J. Agr. Food Chemistry.51, [8] MI.Mínguez-mosquera., B.Gandul-rojas., A.Montaño-asquerino & Garridofernández J.,1991. Determination of chlorophylls and carotenoids by HPLC during olive lactic fermentation. Journal of Chromatography. 585,

257 P.156. Valorisation biotechnologique de l avoine (Avena sativa L.) Nihed Ben Halima 1, Imen Fendri 2, Mohamed-Ali Ayadi 3,Slim Abdelkafi 1 & Bassem Khamekhem 4 1 Département de Génie Biologique, Ecole Nationale d Ingénieurs de Sfax, Université de Sfax, Sfax-Tunisie 2 Unité de recherche Toxicologie - Microbiologie Environnementale et Santé (UR11ES70), Faculté des Sciences de Sfax, Université de Sfax-Tunisie. 3 Laboratoire d'analyses Alimentaires, Ecole Nationale d'ingénieurs de Sfax, Université de Sfax, Tunisie. 4 Département de sciences de la vie, Faculté de Science de Sfax, Université de Sfax, Tunisie Résumé Les amylases sont exploitées dans plusieurs processus de l industrie alimentaire. Dans le cadre de ce travail, nous avons pu optimiser les conditions d extraction d enzymes amylolytiques à partir de l avoine (Avena sativa) moyennant les outils statistiques. La caractérisation physico-chimique de l extrait montre que l activité amylolytique possède un optimum de ph de 5,6 et une température optimale de 55 C. Ces résultats sont prometteurs pour des applications ultérieures en industrie alimentaire. En effet, nous avons incorporé l extrait d avoine dans la formulation du cake. Par conséquent, les qualités texturale et organoleptique du cake ont été améliorées. Ceci, nous a amené à entreprendre la purification de cet extrait. La précipitation fractionnée au sulfate d ammonium montre que la fraction la plus active est obtenue à 60% de saturation. Dans une deuxième étape de purification, nous avons utilisé la chromatographie d exclusion. Ces étapes ont permis la purification de cette enzyme avec un facteur de 40 et une activité spécifique de 6880 U/mg. Mots clés : Enzymes amylolytiques, Avena sativa, optimisation, caractérisation physico-chimique, cake, texturomètrie, purification. 1. Introduction Les plantes produisent différents types d enzymes qui sont plus avantageux dans les applications alimentaires dont les enzymes amylolytiques qui sont produites essentiellement en grandes quantités lors de la germination des graines. L avoine (Avena sativa), une céréale de la famille des Poacées occupe une place importante dans la production mondiale des céréales [1] et elle est considérée comme un aliment pour bétail le plus utilisé en Tunisie [2]. Notre étude consiste à la production d'amylase par les graines germées d Avena sativa dans le but de l adapter à des applications dans le secteur industriel et de contribuer à l amélioration des connaissances actuelles sur les amylases et particulièrement celles d origine végétale. 2. Méthodologies Nous avons déterminé les conditions optimales d extraction de l activité amylolytique à partir des graines germées de l avoine par le biais de la méthodologie des surfaces de réponse en recourant au plan d expériences de type Box Behenken. Le dosage de l activité amylase est fait par la méthode DNS [3] basée sur le dosage des sucres réducteurs libérés. En outre, l activité de dextrinisation de l extrait d avoine est dosée par la méthode à l iodine. Les étapes de la purification d une amylase extraite lors de la germination des graines d avoine sont basées essentiellement sur la précipitation de l enzyme au sulfate d ammonium et sur les méthodes de séparation chromatographiques (échangeuses d ions et gel filtration). 3. Résultats Les résultats de l analyse de variance (ANOVA) du plan d expériences pour l optimisation des conditions d extraction de l activité amylase à partir de l avoine sont mentionnés dans le tableau 1 qui témoignent des ajustements bons entre les réponses expérimentales et les réponses estimées par le modèle. Ceci est confirmé par la valeur du coefficient de détermination R 2 =0,

258 Tableau 1 : Analyse de la variance (ANOVA) Les essaies de purification d une amylase à partir des graines germinées de l avoine ont aboutit à visualiser une seul bande à partir de l électrophorèse SDS-PAGE (Fig.1). Fig.1: Electrophorèse sur gel de polyacrylamide 12% dans les conditions dénaturantes. EB : extrait brut ; SA : fraction issue de la précipitation au sulfate d ammonium ; 1 et 2: sorties gel filtration Superdex 75pg. Références [1] Chawade, A., Sikora, P., Bräutigam, M., Larsson, M., Nakash, M.A., Chen, T., Olsson, O. (2010) Development and characterization of an oat TILLING-population and identification of mutations in lignin and β- glucan biosynthesis genes. BMC Plant Biol., doi: / [2] Hammami, I, Allagui, M.B., Chakroun, M., and El-Gazzeh, M. (2008). Agronomic Characterization of Tunisian Spontaneous Oat Accessions Resistant to Oat Crown Rust and Potential in Plant Breeding. Tunisian Journal of Plant Protection 3: 1-9. [3] Miller, G.L. (1959) Use of dinitrosalicylic acid reagent for determination of reducing sugars. Anal. Chem. 3,

259 P161. Evaluation et modélisation des impacts de l Entreprise Nationale des Produits ElectroChimiques Unité Affinage du Plomb ENPEC UAP - Sétif, Algérie. BOUCETTA Sabrine 1), ADJADJ Nadjah radia 2), ADJEL Nour el houda 2) 1) Département de Biologie marine, Université Badji-Mokhtar,Annaba, Algérie. 2) Département d écologie et Biologie végétale, Université Ferhat Abbas,Sétif,Algérie E.mail : sabrineboucetta@yahoo.fr Résumé En Algérie l étude d impact est aussi un instrument essentiel pour la réduction de la quantité de substances toxiques, consciente de l intérêt de cet outil, son volet réglementaire est omniprésent par : loi pour la protection de l environnement dans le cadre du développement durable, décret n déterminant le champ d application, le contenu et les modalités d approbation des études et des notices d impact sur l environnement, et le décret N définissant la réglementation applicable aux établissements classés. Le plomb est un métal lourd largement utilisé dans les activités métallurgiques dès l'antiquité et redécouvert au moment de la révolution Industrielle. Les intoxications massives aiguës et chroniques par le plomb ont été bien documentées en milieu professionnel. Le plomb est également un polluant environnemental, surtout dans les sols et l'atmosphère au voisinage de sites industriels (fonderies, usines de fabrication et/ou de recyclage de batteries. Le présent travail constitue une contribution à l étude d impact des effets du plomb et les différents déchets issus de l ENPEC UAP (Entreprise Nationale des Produits Electrochimiques Unité Affinage du Plomb,Sétif ; Algérie), qui a pour activité principale la récupération et le reconditionnement du plomb présent dans les batteries usagées avant son réemploi dans la fabrication de batteries neuves. Les résultats des dosages des metaux lourds eau et sédiment in situ l ENPEC UAP, l élaboration de la matrice des impacts, la pollution sonore nous a permis de réaliser la modélisation des impacts en utilisant le logiciel Simapro7.3.3 (version 2012) a permis d élaborer un diagnostic de son état environnemental. Mots clés : Biosurveillance, ETM, S.A.A ;logiciel Simapro7.3.3, ENPEC-UAP Sétif, Algérie. 259

260 P.164. Effet de l extrait à l acétate d éthyle de fenugrec sur le métabolisme lipidique chez le rat mâle soumis a un régime hypercholestérolémique 1 Olfa Belguith-Hadriche, 2 Mohamed Bouaziz, 3 Kamel Jamoussi, 1 Abdelfattah EL Feki, 3 Fatma Makni-Ayedi. 1. Laboratoire d Ecophysiologie Animale Faculté des Sciences de Sfax, BP, 802, 3018, Sfax, Tunisie 2. Laboratoire d Electrochimie et Environnement, Ecole national d ingénieur de Sfax, BP 1177, Université de Sfax. Tunisie. 3. Unité de recherche DGRST 02-08/20. Laboratoire de Biochimie. Faculté de Médecine de Sfax, Tunisie. Abstract Le fenugrec est une plante très utilisée en médecine traditionnelle surtout comme antidiabétique et anti-inflammatoire. Récemment, de nombreuses études ont montré l effet hypocholestérolémiant du fenugrec. Dans ce cadre nous nous sommes intéressés à étudier l effet de l extrait à l acétate d éthyle de fenugrec sur le métabolisme lipidique chez le rat soumis a un régime hypercholestérolémique. Nos principaux résultats montrent que l administration de l extrait à l acétate d éthyle de fenugrec chez les rats hypercholestérolémiques a permis de corriger l hypercholestérolémie et l hypertriglycéridémie induites et de rétablir le taux des HDL-C. L adjonction de l extrait de fenugrec a entraîné aussi une correction totale de la fraction LDL-C et partielle des (VLDL+IDL). L indice athérogénique a été également corrigé par l administration de l extrait de fenugrec. En conclusion, nos résultats semblent montrer que l extrait à l acétate d éthyle de fenugrec a un effet protecteur corrigeant les perturbations lipidiques induites par le régime hypercholestérolémique Keywords: fenugrec, régime hypercholestérolémique, fraction lipoprotéique, extrait de fenugrec 1. Introduction Le fenugrec est une plante très utilisée en médecine traditionnelle surtout comme antidiabétique et anti-inflammatoire. Récemment, de nombreuses études ont montré l effet hypocholestérolémiant du fenugrec [1,2]. Dans ce cadre nous nous sommes intéressés à étudier l effet de l extrait à l acétate d éthyle de fenugrec sur le métabolisme lipidique chez le rat male soumis a un régime hypercholestérolémique. 2. Methodology Nous avons utilisé des rats males réparties en trois groupes : un groupe recevant une alimentation normale (T), un deuxième groupe recevant un régime riche en cholestérol (Ch) et un troisième groupe recevant un régime riche en cholestérol et en extrait à l acétate d éthyle de fenugrec (Eacé) et ceci durant de 3 mois. A la fin du traitement, les animaux ont été sacrifiés, des prélèvements de sang ont été effectués à fin de réaliser une exploration lipidique approfondie comportant une séparation par ultracentrifugation des lipoprotéines plasmiques en trois fractions VLDL+IDL, LDL et HDL sur lesquelles nous avons déterminé leurs contenus en cholestérol et en triglycérides pour la fraction VLDL+IDL. 3. Main Results Nos principaux résultats montrent une augmentation significative des taux de cholestérol total et des triglycérides plasmatiques et une perturbation du profil lipoprotéique avec augmentation des fractions (VLDL+IDL)-C, (VLDL+IDL)-TG et LDL-C et diminution de la fraction HDL-C chez les rats recevant un régime hypercholestérolémique. Toutefois, l administration de l extrait à l acétate d éthyle de fenugrec chez les rats hypercholestérolémiques a permis de corriger l hypercholestérolémie et l hypertriglycéridémie induites et de rétablir le taux des HDL-C. L adjonction de l extrait de fenugrec 260

261 a entraîné aussi une correction totale de la fraction LDL-C et partielle des (VLDL+IDL). L indice athérogénique (AI) a été également corrigé par l administration de l extrait de fenugrec. En conclusion, nos résultats semblent montrer que l extrait à l acétate d éthyle de fenugrec a un effet protecteur corrigeant les perturbations lipidiques induites par le régime hypercholestérolémique. Table 1: Taux des différentes fractions lipoprotéiques chez des rats témoins et traités. T Ch Eacé CT 2,00 ±0,09 2,54± 0,11* 2,18 ± 0,15 + TG 1,24 ± 0,15 1,67 ± 0,10* 1,27 ± 0,13 + VLDL+IDL-C 0,25 ± 0,03 0,84 ± 0,07* 0,47 ± 0,06 + VLDL+IDL-TG 0,88 ± 0,05 1,00 ± 0,07* 0,69 ± 0,08 + LDL 0,27 ± 0,02 0,47 ± 0,05* 0,30 ± 0,03 + HDL 1,11 ± 0,09 0,74 ± 0,04* 1,00 ± 0,03 + LDL/HDL 0,24 ± 0,03 0,68 ± 0,05* 0,30 ± 0,01 + * p 0.05 : par comparaison avec les rats témoins. + p 0.05 : par comparaison avec les rats traités au cholestérol. References [1] Bordia A., Verna S.K., & Srivastava K.C., 1997, Effect of ginger (Zingiber officinale Rosc.) and fenugreek (Trigonella foenum-graecum L.) on blood lipids, blood sugar and platelet aggregation in patients with coronary artery disease. Prostag Leukotr Ess. 56 pp [2] Sowmya P., & Rajyalakshmi P., 1999, Hypercholesterolemic effect of germinated fenugreek seeds in human subjects. Plant Foods Hum Nutr. 53, pp

262 P Oxydation électrochimique de l acide syringique en milieu aqueux sur des électrodes d oxydes de plomb O. Dridi Gargouri 1, S. Kallel Trabelsi 1, R. Abdelhedi 1, E. Brillas 2 1 Laboratoire d Electrochimie et Environnement, Ecole Nationale d ingénieur de Sfax 3038 BP 1173 Sfax. Université de Sfax, Tunisie. mohamed.bouaziz@fsg.rnu.tn 2 Laboratori d ElectroquímicadelsMaterials i delmediambient, Departament de QuímicaFísica,Facultat de Química, Universitat de Barcelona, Martí i Franquès 1-11, Barcelona (Spain) Résumé Les eaux contaminées par l acide syringique (AS) sont traitées par électrolyses en régime intentiostatique sur une anode en dioxyde de plomb PbO2 pour diverses conditions opératoires définies par les valeurs de la densité de courant, la concentration initiale de l AS, et la température. Le suivi de ces électrolyses est assuré par la mesure de la DCO, la spectrophotométrie UV/Visible et par chromatographie Liquide Spectrophotometrie de masse LC/MS. Les résultats obtenus ont montré que l efficacité de la dégradation électrochimique de l AS augmente avec sa concentration initiale et la température et diminue en augmentant la densité du courant. L oxydation de l AS subit une oxydation rapide conduit à la formation du 3-O-methylgallic acid en tant que produit principal. Par ailleurs, l examen de la variation de la DCO en fonction de la concentration initiale de l AS au cours du temps d électrolyse, a montré que la dégradation électrochimique de l AS est de pseudo premier ordre. Ce résultat est confirmé par la valeur de l énergie d activation (Ea). Les résultats obtenus montrnt qu il est possible de dégrader quantitativement l AS en dioxyde de carbone (CO 2 ) sur PbO2. 1. Introduction Les composés phénoliques sont des composés bioréfractaires souvent rencontrés dans les eaux provenant de diverses activités industrielles telles que l extraction de l huile d olive [1]. Dans le présent travail, nous avons entrepris l étude du traitement des solutions aqueuses, acide syringique considéré comme molécule modèle pouvant représenter la composition phénoliques de la margine, par la mise en œuvre d une technique d oxydation avancée à savoir l oxydation anodique sur une anode d oxyde de plomb vu ses propriétés électro-catalytiques intéressantes vis à vis de la détoxification des matières organiques toxiques[2-3]. Nous présentons les résultats de l étude de la dégradation électrochimique de l acide syringique en fonction de différents paramètres expérimentaux (densité de courant appliqué, concentration initiale du polluant et température). 2. Méthode de travail La figure suivante représente le schéma de la cellule d électrolyses réalisées en régime intensiostatique (densité constant de courant anodique) en utilisant le PbO 2 et le carbone graphite comme anode et cathode respectivement. 262

263 Rondin en graphite (cathode) Bouchon Eau Rondin en Cellule thermostaté t e 2 Diaphragme en c éramique poreuse Eau Barreau aimant é Agitateur magn étiqu e Cellule d électrolyse utilisée pour l oxydation du polluant 3. Résultats Tableau1 : Taux d abattement du DCO en fonction des différents paramètres étudiés Densité du courant appliqué 15 ma cm -2 Concentration de l acide syringique mol L -1 Température 70 C Taux d abattement du DCO % L oxydation anodique sur PbO 2 de l acide syringique est regroupé dans le tableau ci-dessus. Dans ces conditions, le produit majoritaire obtenu est 3-O-methylgallic acid. References [1] S. Kallel Trabelsi, N. BelhadjTahar, R. Abdelhedi, Electrochemical behavior of caffeic acid, Electrochim Acta. 49 (2004) [2] Morched Hamza, Salah Ammar, Ridha Abdelhedi, Electrochemical oxidation of 1,3,5-trimethoxybenzene in aqueous solutions at gold oxide and lead dioxide electrodes Electrochimica Acta 56 (2011) [3] Emna Hmani, Youssef Samet, Ridha Abdelhédi Electrochemical degradation of auramine-o dye at borondoped diamond and lead dioxide electrodes Diamond & Related Materials 30 (2012)

264 P.166. Effect of Ulva lactuca polysaccharides on liver function and lipid homeostasis in diabetic rat 1 Sahla BelHadj, 2 Olfa Hentati, 1 Abdelfattah El feki, 2 Khaled Hamdène 11Laboratory of Animal Ecophysiology, Faculty of Sciences of Sfax, University of Sfax, 2High Institute of Biotechnology of Sfax (ISBS), University of Sfax. Abstract This study revealed that Ulva lactuca polysaccharides (ULPS) administration to surviving diabetic rats decreased the blood LDL-cholesterol and triglycerides levels, and increased the HDL-cholesterol level. Additively, ULPS significantly protected the liver functions, by decreasing aspartate transaminase (AST), alanine transaminase (ALT), lactate dehydrogenase (LDH) and gamma-glytamyl transpeptidase (GGT) activities in plasma. Overall, the results of this study indicate that ULPS can be used for the development of anti-diabetic and hypolipidemic foods. Keywords: Ulva lactuca, polysaccharides, diabetes, lipid profile, liver enzymes. 1 Introduction Diabetes mellitus is a major and growing public health problem throughout the world, with an estimated worldwide prevalence in 2008 more than of 347 million people and is a heterogeneous disorder with varying prevalence among different ethnic groups and it is reported to constitute the 16th leading cause of global mortality [1-3]. Many marine natural resources have been the focus of discovery for new bioactive compounds of chemical and pharmacological interest in order to develop new drugs and health foods. Marine algae have been identified as an underexploited plant resource and a source of functional food [4-6]. The isolated compounds showed a variety of biological activities such as antioxidant, anticoagulant, antihypertension, antibacterial, and antitumor activities [7-9]. Algal polysaccharides have been demonstrated to play an important role as free-radical scavengers in vitro and antioxidants for the prevention of oxidative damage in living organisms [10, 11]. This study attempts to investigate the effect action of ULPS on liver function and lipid homeostasis in alloxan induced diabetic rats. 2 Methodology The algal material, Ulva lactuca, was collected from Sfax province, White Sea coast, South east of Tunisia, in October After cleaning, the sulphated polysaccharides were extracted following a modified procedure of Hamden et al., (2010 b) [3]. The crude polysaccharide extract was stored at 4 C before use for animal experiments. Diabetes was induced in adult male Wistar rats, (212±19 g) by a single intraperitoneal injection of freshly prepared alloxan (Sigma-Aldrich) solution at a dose of 150 mg/kg body weight [4]. Four weeks later, blood glucose concentration was 3.25-fold higher than that in the control rats. The rats were divided into five groups of eight animals each as follows: Group 1: surviving diabetic rats were scarified and considered as referent diabetic rats at day 0 [Diab0]. Group 2: diabetic control rats at day 30 [Diab30]; Group 3: diabetic rats treated with ULPS by gastric gavage route food (180 mg/kg of body weight/day during 30 days) [4] and termed [Diab + ULPS]; Group 4: normal rats were used as controls, were scarified at day 30, considered as referent nondiabetic rats at day 30 [Con30]; Group 5: normal rats treated with ULPS by gastric gavage route food (50 mg/kg of body weight/day during 30 days) and termed [ULPS]. One month later, the rats were 264

265 weighed and sacrificed, and plasma blood samples were analyzed for hepatic function and lipid profile exploration. 3 Main Results Compared to non-diabetic rats, the diabetic rats undertook an increase in terms of the AST, ALT, LDH and GGT activities by 88, 83, 63 and 44% respectively in plasma (Table 1). A significant decrease in TCh, LDL-Ch and TG by 30, 51 and 33% respectively, and an increase of HDL-Ch by 48% were observed (Table 1). Interestingly, the administration of ULPS to surviving diabetic rats seems to have ameliorated all indices related to liver dysfunction induced by diabetes and to revert back the plasma TG level. Table 1: Effect of ULPS on liver dysfunction indices (AST, ALT and LDH activities in plasma) and metabolic disorders (T-Ch, TG and LDH-Ch in plasma) in diabetic rats. Statistical analyses as given in Fig. 1 legend Diab0 Con30 Diab30 Diab + ULPS ULPS Liver dysfunction indices AST (U/L) 160 ± 21 * ± ± 16 *# ± 8 #@ ± 14 ALT (U/L) 78.8 ± 9 * 47.8 ± ± 14 * 49.3 ± 7.3 #@ 41.8 ± 3.6 LDH (U/L) 1085 ± 78 * 876 ± ± 221 *# 942 ± 75 #@ 789 ± 54 GGT (U/L) 7.09 ± ± ± ± ± 0.67 Lipid profile T-Ch (g/l) 1.47 ± 0.09 * 1.23 ± ± 0.12 *# 1.61 ± 0.12 *@ 1.56 ± 0.09 HDL-Ch (g/l) 0.61 ± 0.06 * 0.68 ± ± 0.06 *# 0.73 ± 0.05 *#@ 0.95 ± 0.08 LDL-Ch (g/l) 0.86 ± 0.09 * 0.55 ± ± 0.12 *# 0.88 ± 0.61 ± 0.11 TG (g/l) 1.22 ± 0.19 * 0.91 ± ± 0.26 *# 1.04 ± 0.17 *#@ 0.87 ± 0.08 References [1] Hamden K., Keskes H., Belhaj S., Mnafgui K., El Feki A., Allouche N., 2011a, Inhibitorypotential of omega-3 fatty and fenugreek essential oil on key enzymes of carbohydratedigestion and hypertension in diabetes rats. Lipids Health Disease, [2] Hamden K., Jaouadi B., Salami T., Carreau S., Bejar S., El Feki A., 2010b, ModulatoryEffect of Fenugreek Saponins on the Activities of Intestinal and Hepatic Disaccharidase andglycogen and Liver Function of Diabetic Rats. Biotechnol. Biopro. Eng. 15, pp [3] Hamden K., Jaouadi B., Carreau S., Bejar S., El Feki A., 2010b, Inhibitory effect offenugreek galactomannan on digestive enzymes related to diabetes, hyperlipidemia and liverkidney dysfunctions. Biotechnol. Biopro. Eng. 15, pp [4] Liu M., Hansen P.E., Lin X., 2011, Bromophenols in marine algae and their bioactivities.mar. Drugs 9, pp [5] Liu M., Zhang W., Wei J., Lin X., 2011, Synthesis and α-glucosidase inhibitorymechanisms of Bis(2,3- dibromo-4,5-dihydroxybenzyl)ether, a potential marine Bromophenolα glucosidase inhibitor. Mar. Drugs 9, pp

266 P168. Potential ecotoxicity assessment of water and sediment of Reghaia lake: using plants bioassays (Trifolium alexandrinum) Khelif Leila, Djebbar Réda & Abrous-Belbachir Ouzna Laboratory of Organisms Biology and Physiology, Department of Biology. University of sciences and Technology Houari Boumedienne, Algiers, Algeria. oabrous@yahoo.fr Abstract The Reghaïa lake closes significant historical, economical and biological potentialities. The establishment of Reghaïa-Rouïba industrial park constitutes the major source of it contamination by heavy metals. To evaluate the ecotoxicity of water and sediment from crowds of El Biar river (lake upstream), bioassays with Trifolium alexandrinum were performed. Different parameters were measured after treatment with surface-water and lake sediment: survival, growth, protein and proline contents and antioxidant activity of catalase. Results showed that surface-water affected significantly root growth then sediment, which induced 100 % death of plants. In both surface water and sediment treatments, protein and proline contents and catalase activity showed a significant increase compared to the control. All bioassays revealed that sediment, although with a higher pollutants content, had a lower bioavailable fraction when compared to surface water, which was more toxic to plants. 1 Introduction In recent years, various methods of biotesting have been extensively used in studies of environmental pollution [1 2]. Bioassays with vascular plants are considered to be versatile tools to qualify and quantify the hazard of contaminants under standardized conditions [3], evaluating also the effects of mixtures, with combined effects that can be expressed as synergism, additivity, and antagonism [4]. Bioavailable contaminants can induce growth, reproductive and biochemical alterations in plants [5]. In this study plant bioassays are used to evaluate ecotoxicological effects of industrial wastewater discharged from Reghaïa-Rouïba industrial park into Reghaia lake. The aim of the study was to assess and compare the toxicity from surface-water and sediment collected from lake upstream in crowds of El Biar river, using ecotoxicological plant bioassay endpoints: growth and biochemical parameters. Keywords: Bioassays, water, sediment, Trifolium alexandrinum, proline. 2 Materials and methods Surface-water and sediment from industrial source were collected from El Biar river crowds (Fig. 1) that discharge into Reghaïa lake (located at 30 km in the east of Algiers). The two phases (liquid and solid) were tested using plant bioessays with Trifolium alexandrinum, adapting methodology from the standard protocol from ISO [6] and ISO [7]. A selection of T. alexandrinum was based on the species list presented in the ISO guideline. Different soil/sediment mixture concentrations and distilled-water/surface-water dilutions (0%, 20%, 60% and 100%) were tested. At the end of the bioassay (after 21 days) in a plant growth chamber, growth (shoot, length and survival) and Physiological parameters (protein, proline content and catalase activity) were measured. a Fig.1. Geographical situation of the Reghaïa Lake (a: El Biar river crowds). 266

267 3 Main Results Growth parameters in Trifolium alexandrinum bioassays The exposure of T. alexandrinum to different dilutions of surface-water produced significant effects on survival rate when compared to the same parameter in the control soil, while unmixed sediment (100%) improved death of all plants (Fig.2.A). (A) (B) (C) Fig.2 Surface-water and sediment effect on survival, root (B) and shoot length (C) of T. alexandrinum. A significant decrease in root growth was observed in both the surface water (reduction of %) and sediment (a decrease of 83.33% and % respectively at 20% and 60% treatments) compared to the control. conversely no significant differences on shoot length were obtained. Physiological Parameters For the two phases, an increase of protein content was observed (Fig. 2.D), from 20% and reaching the highest value in the 100% treatment. Proline content and catalase activity showed similar response by a significant increase in all treatments (Fig. 2.E, F) (D) (E) (F) Fig.3 Surface-water and sediment effect on protein, proline content and catalase activity of T. alexandrinum. These increases in catalase activity indicate an attempt to mitigate and repair the damage caused by ROS that were generated by exposure to surface-water and sediment pollutants [5]. Proline has been also reported to accumulate in response to stress conditions including heavy metals [8]. Conclusion Plant bioassays are good tools for the evaluation of surface-water and sediment quality. Biochemical parameters such as proline content and catalase activity are also well suited in field conditions, and may represent good biomarkers of heavy metal pollution. The high toxicity observed for the surface-water exposure might be explained by a high bioavailability of heavy metals present or by the presence of water soluble chemical compounds. References [1] Bedell J.P., Briant A., Delolme C & Perrodin Y., 2006, Impact of water draining from deposits on the development and physiological status of neighbouring plants at growth stage, Chemosphere. 62, pp [2] Fomchenkov V.M., Kholodenko V.P., Irkhina I.A., Petukhov V.N & Baidus O.A., 1996, Biological Testing of Integral Toxicity of Contaminated Water and Soil : NII Ekon. Med. Prom sti. [3] van Leeuwen C. J., Bro-Rasmussen F., Feijtel T. C. J & Calamari D, 1996, Risk assessment and management of new and existing chemicals. Environmental Toxicology and Pharmacology. 2, pp [4] Carter J.A., Mroz R.E., Tay K.L & Doe K.G, 1998, An evaluation of the use of soil and sediment bioassays in the assessment of three contaminated sites in atlantic Canada. Water Qual Res J Canada. 33, pp [5] Loureiro S., Santos C., Pinto G., Costa A., Monteiro M,. Nogueira A.J. A., Amadeu M & Soares M, 2006, Toxicity Assessment of Two Soils from Jales Mine (Portugal) Using Plants: Growth and Biochemical Parameters. Arch. Environ. Contam. Toxicol. 50, pp [6] ISO, 1995, Qualité du sol. Détermination des effets des polluants sur la flore du sol-partie 2. Effets des substances chimiques sur l émergence et la croissance des végétaux supérieurs. Norme

268 P.170. Etude de l'incidence et de l'étiologie des mammites dans les élevages bovins au centre de l Algérie 1 Radhwane Saidi, 2 Djamel Khelef & 3 Rachid Kaidi 1 Département de Biologie, Université Amar Telidji, BP 37G, route de Ghardaïa, Laghouat, Algérie. 2 Ecole Nationale Supérieure Vétérinaire, BP 161 Hacène Badi, El Harrach, Alger, Algérie. 3 Département des Sciences Vétérinaires, laboratoire des biotechnologies liées à la reproduction animale, Université Saad Dahleb, BP: 270, route de Soumaa, Blida, Algérie. Résumé L'objectif de cette étude était de déterminer l'incidence des mammites cliniques et subcliniques ainsi que les agents pathogènes impliqués dans un échantillon représentatif de troupeaux bovins laitiers de la région centre- de l Algérie. Pour ce faire, 15 exploitations laitières comprenant 100 vaches ont été sélectionnées. Cette étude rapporte une incidence moyenne des mammites subcliniques de 25 cas/100 vaches sur la base d un dépistage au moyen de test CMT (California Mastitis Test). Cette incidence passe à 24 cas/100 vaches sur la base des analyses bactériologiques. Staphylococcus aureus et Sreptococcus spp ont été les bactéries les plus fréquemment isolés lors de mammites subcliniques (52%). Le staphylocoque a été retrouvé dans 4 cas sur 10 de mammite subclinique (40%), tandis que les Pseudomonas, E.coli et Enterobacteries spp ont été les germes les moins fréquemment isolés lors de mammites subcliniques (4%). 1. Introduction La couverture des besoins en lait du consommateur algérien n est pas encore garantie par la production locale. En effet, l Algérie se place au troisième rang mondial en matière d importation de lait et de produits laitiers. En 2006, plus de 500 millions de dollars ont été dépensés pour l importation de lait en poudre 1. Ces importations sont justifiées pour rattraper le déficit de production. Cette faible production réside dans le fait que la majorité des éleveurs ne possèdent pas de terres ce qui fait augmenter les frais de l élevage bovin. L autre cause de cette faiblesse est liée au prix des aliments du bétail, en nette augmentation. Parallèlement, les superficies réservées aux cultures fourragères ont enregistré une nette réduction. Aussi, le vieillissement du cheptel réduit considérablement la production et prédisposant les animaux à contracter les maladies comme les mammites. La mammite ou inflammation de la glande mammaire est la maladie la plus fréquente et la plus couteuse qui inflige les vaches à travers le monde 2. Elle peut se manifester par des signes cliniques mais le plus souvent l infection passe inaperçue et les mammites sont dites subcliniques. Le but de notre étude qui s est déroulée dans le Centre algérien est de détecter précocement les mammites subcliniques pour estimer leur prévalence et les germes incriminés afin d agir avant leur dissémination et évolution vers des mammites cliniques et éviter ainsi les pertes économiques consécutives à la baisse de la production du lait, la faible qualité des produits laitiers ainsi que la répercussion sur la reproduction, la longévité des animaux et la santé de consommateur. 2 Méthodologie Dans chaque élevage visité, des prélèvements aseptiques de lait de quartier (si un seul quartier était positif au CMT) ou individuel (si plus d un quartier était touché) étaient sélectionnés sur la base d'un CMT avec un score supérieur à 0 (sur une échelle allant de 0 à 4). Dans le même temps, un questionnaire comprenant des informations utiles (informations sur le bâtiment d élevage, conduit de troupeau,...), a été rempli auprès de chaque éleveur. Les prélèvements étaient placés dans un conteneur isotherme et acheminés jusqu'au laboratoire où la détection et l'identification des germes en cause a été réalisée de façon standardisée. L'incidence de mammites subcliniques a été calculée à partir des résultats fournis par le test CMT. 268

269 3 Résultats 3.1. Résultats de test CMT L incidence des mammites subcliniques était de 25 cas/100 vaches testées ; lesquelles étaient présentes le jour de visite Résultats de la bactériologie Cette incidence était de 24 cas/100 vaches présentes sur la base des analyses bactériologiques effectuées au cours de l'étude. La répartition des germes isolés des 25 échantillons de mammites subcliniques est représentée en Tableau 1. Le staphylocoque a été retrouvé dans 4 cas sur 10 de mammite subclinique, tandis que les Pseudomonas, les E.coli et les entérobactéries ont été les germes les moins fréquemment isolés. A noter cependant que 76% des pathogènes isolés lors de mammites subcliniques étaient des bactéries à Gram positif. Ceci nous a conduits à préconiser l'utilisation d antibiotiques intramammaires à large spectre pour les vaches positives au CMT. Tableau 1. Résultats de la bactériologie des prélèvements positifs au CMT. Strpt. E. coli Pseudo. Infectio n mixte Prélèvemen t contaminé Prélèvemen t stérile Bactéries Staph. Nombre d'isolement Total % Discussion Les résultats de cette étude confirment une autre fois la présence des mammites subcliniques dans les élevages bovins de l Algérie (25 %), rejoignant l étude de Gabli en 2005 (50%). Le faible taux enregistré dans la présente étude comparativement à ceux des autres études, est lié, à notre avis, d une part, au nombre élevé d individus sains examinés et chez lesquels l incidence de la mammite est faiblement exprimée et d autre part, à notre démarche : un dépistage et non un diagnostic, ce qui minimise à notre avis les chances de tomber sur des cas positifs. Dans notre étude, les Staphylocoques sont les bactéries les plus fréquemment isolées lors de mammites subcliniques avec une fréquence élevée de 40 % ce qui confirme leur place dominante parmi les germes pathogènes majeurs, en accord avec les travaux de Bouchot et al. (1985) (39 %), Longo et al. (1994) (44,7%) en France. Cependant, des fréquences plus faibles sont rapportées par d autres auteurs : 12 % pour Lafi et al. (1994). Les résultats obtenus montrent une prédominance des germes à réservoir mammaire (Staphylocoques et Streptocoques) (52 %) par rapport aux germes d environnement (Escherichia coli et autres germes) (12%). Pour notre part, cette prédominance des germes à réservoir mammaire est imputée au fait que la majorité des élevages visités durant notre enquête ne pratiquent aucune mesures de contrôle des infections mammaires (traitement systématique au tarissement, trempage des trayons avant et ou après la traite, manque d hygiène des bâtiments d élevage et au cours de la traite) : mesures efficaces contre les Staphylocoques et Streptocoques. Conclusion Cette étude a mis en évidence une prévalence de 25 % de mammites subcliniques dans la région centre de l Algérie. Les germes responsables de mammites subcliniques sont principalement des bactéries pathogènes majeures à réservoir mammaire : les Staphylocoques (40 %) et Streptocoques (12 %) ont été les germes les plus fréquemment isolés dans notre étude et une prédominance des mammites de traite a été constatée. Références 1 Rahal K, Ameur A, Bouyoucef A et Kaidi R 2009, Epidémiologie des mammites chez les bovins laitiers, dans la région de la Mitidja, 7 éme JSV,18 et19 Avril,Algérie. ENSV- Alger-. 2 Traore A, Tamboura H H, Bayala B, Rouamba D W, Yameogo N et Sanou M 2004, Prévalence globale des pathologies majeures liées à la production laitière bovine en système d élevage intra-urbain 269

270 P.171. Perivascular sensory denervation by capsaicin reduces atherosclerosis in abdominal aorta of rats 1,2,3 Hachani Rafik, 1 Dab Houcine, 1 Mohsen Sakly, 2 Eric Vicaut, 3 Jacques Callebert, 2 Richard Sercombe & 1 Kamel Kacem 1 Integrated Physiology Unit. Laboratory of Vascular Pathologies. Faculty of Sciences of Bizerte Jarzouna,TUNISIA 2 Laboratory of Microcirculation Research (EA 3509), University Paris 7, FRANCE. 3 Biochemistry Laboratory,Lariboisière Hospital, Paris, FRANCE.. Abstract The effect of sensory denervation on the evolution of the atherosclerosis was investigated in atheromatous rats. Thus, sensory denervation was conducted by subcutaneous injections of capsaïcine (dissolved in Tween 80 and ethanol) witch is administered at 50 mg/kg per day for 3 days and then at 5, 7 and 14 days. Oil Red O (ORO) staining was used to reveal atherosclerosis in the arterial wall. Vimentin and the adult SMC markers (α-smc-actin and h-caldesmon) were analyzed in abdominal aorta by western blot. Our study shows that sensory denervation reduced the surface of the thickened intima. Concomitantly, vimentin expression decreased while α-sm actin and h-caldesmon were increased. This study reveals that sensory denervation protects against atherosclerosis and constitutes therefore a new target for preventing atherosclerosis formation in aorta. Keywords: Sensory denervation, aorta, atherosclerosis, immunoblotting, Oil-Red-O. 1. Introduction We have demonstrated before that perivascular sympathectomy induces intimal thickening witch is accompanied by a progressive expression of the vimentin and by the decrease of the adult VSMCs markers (α-smc-actin and h-caldesmon) [1]. However, the vascular wall receives also sensory fibers [2] witch have antagonist interaction with the sympathetic nerves in several tissues, including vessels. Therefore, we hypothesize that sensory denervation could protect against atherosclerosis and favours VSMCs differentiated phenotype (such a phenotype is less prone to migrate and induce atherosclerosis). 2 Methodology Wistar rats were rendered atheromatous by a method that we have developed in our laboratory, based on the practice of perivascular sympathectomy by subcutaneous injections of guanethidine (50 mg / kg, 5 days / week for two weeks) combined with hypercholesterolemic diet (1% cholesterol for three months) (Gua group). Sensory denervation was conducted in the atheromatous rats by subcutaneous injections of capsaïcine (dissolved in Tween 80 and ethanol) witch is administered at 50 mg/kg per day for 3 days and then at 5, 7 and 14 days. Oil Red O (ORO) staining was used to reveal atherosclerosis in the arterial wall. Vimentin and the adult SMC markers (α-smc-actin and h-caldesmon) were analyzed in abdominal aorta by western blot using specific antibodies. 3 Main Results 270

271 Our results show that sensory denervation reduces the surface of atherosclerosis by 62% (Cap+Gua group), while a thick intima is developed in the form of a streak in the Gua group (Fig.1). Fig.1 Cross-sections of abdominal aorta from atheromatous (Gua) and sensory denervated (Cap+Gua) groups stained with Red-Oil-O (red) and hematoxylin (blue). Lipids stained with ORO are limited to the thickened intima (NI) in the Gua and Cap+Gua groups. Elastic laminae coursing in the media are indicated by solid arrows. Asterisk indicates interrupted elastic laminae. Gua: atheromatous group, Gua+Cap: atheromatous and sensory denervated group. M: media, L: lumen. Compared to Gua group, vimentin expression was significantly decreased by 57% in the denervated rats. However, α-smc-actin and h-caldesmon expressions were increased by 46% and 69%, respectively (Fig.2). Fig.2 Western blot analysis of vimentin, h-caldesmon and α-smc-actin in Gua and Cap+Gua groups. The same quantity of extract total protein (50 μg) was used for analysis by Western blot using a specific antibody to vimentin, h-caldesmon and α-smc-actin. GAPDH was used as standard. Gua: atheromatous group; Cap+Gua atheromatous and sensory denervated group. The present study reveals that phenotypic modulation of vascular SMCs may be under the influence of sensory nerves and that sensory denervation combined with cholesterolsupplemented diet was able to protect against atherosclerosis. Acknowledgements: Rafik Hachani received a grant from the Ministry of Higher Education, Scientific Research and Technology (Tunisia) to work on this study. References [1] Hachani R, Dab H, Sakly M, Vicaut E, Callebert J, Sercombe R & Kacem K., Influence of antagonist sensory and sympathetic nerves on smooth muscle cell differentiation in hypercholesterolemic rat. Auton Neurosci Jun 24;155(1-2): Epub 2010 Feb 23. [2] Supowit SC, Ethridge RT, Zhao H, Katki KA, DiPette DJ, Calcitonin gene-related peptide and substance P contribute to reduced blood pressure in sympathectomized rats. Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. 289 (3), H1169 H1175 Sep. 271

272 P.172. Inventory of phytopathogenic soilborne fungi causing wilt and die-back disease olive tree in Tunisia Rahma Trabelsi, Mohamed Ali Triki, Yâakoub Gharbi, Ali Rhouma, Samira Krid, Ines Hammemi and Radouane Gdoura Institut de l Olivier, LR : Amélioration et Protection des Ressources Génétiques de l Olivier, BP1087, 3003 Sfax Faculté des Sciences de Sfax, Département science de la vie, Université de Sfax, BP 1171 Sfax Abstract Olive trees showing symptoms of partial or general wilting and dieback with browning leaves, were collected from several orchards and nurseries in Tunisia. These symptoms were generally associated with severe root rot and basal stem cankers of young herbaceous cutting in the nursery and in orchards. The most frequently isolated fungi from rotted roots and collar were Verticillium dahlia, Fusarium solani, Fusarium oxysporum, Rhizoctonia solani, Rhizoctonia bataticola, Cylindrocarpon.sp., Phytophthora spp and Pythium spp. Isolation frequency of different fungi varied among olive cultivars. Pathogenicity tests showed that Verticillium dahlia and Fusarium.sp were the most pathogenic on olive trees and reproduced symptoms of wilt and dieback. 1. Introduction Tunisia is the most important olive-growing country of the southern Mediterranean region; over 30% of its cultivated land is dedicated to olive growing (1.68 million ha). Excluding the European Union, it is the major world power in the olive oil sector. Olive plants are liable to attack by several soil borne pathogens, causing severe losses in yield and quality (Ghoneim et al 1996; Sanchez-Hernandez et all 1998 and 2001). Root rot disease of olive are primarily caused by the ubiquitous pathogens Verticillium dahlia, Fusarium.spp, Rhizoctonia solani, Phytophthora spp. and Pythium spp. (Teviotdale, 1994, Ghoneim et al 1996, Triki et al. 2006, 2009). These pathogens are capable of surviving in the soil in absence of their host plants, and when weather conditions are not favorable for disease initiation and development. Such pathogens, under favorable conditions, might become destructives. The objective of this study was to know the main causes that give rise to these pathogens fungi and induce the root rot diseases of olive trees to evaluate a control strategy in future research. 2. Material and methods Sampling of root rot pathogens In order to investigate the possible role of olive nurseries in supplying the farmers with infected plants, a survey of some olive nurseries was conducted during some growing seasons. Samples were originated from different nurseries and fields and others samples from several diseased olive trees located in the olive growing regions of Tunisia, were used to isolate potential fungal pathogens from collar and roots. Isolation was made as the same method used by Triki and al (2006). Morphologic identification and Pathogenicity tests Identifications of isolated fungus were based on culture morphology and microscopic characteristics of each fungus (mycelia and conidia aspect). The most frequent isolates were identified according to their morphology and growth characters using specific keys of 272

273 identification of Waterhouse (1968), Ribeiro (1978); Van der Plaats-Niterink (1981) and John F. Leslie (2006). Some pathogenic species of these isolated fungi were actually identified by molecular tools. For pathogenicity tests, young olive trees having two years-old cv. Chemlali were obtained from the nursery of the Olive Tree Institute of Tunisia. The inoculation of young olive trees cv. Chemlali and the notation of the severity of aerial symptoms were made according to the technique used by Triki et al. (2011). Main Results Several isolates were performed on PDA medium, from wood samples of crowns and roots of transplants of olives trees wilting. The results revealed the presence of the fungus V. dahliae, F. solani, F. oxysporum, R. solani, R. Bataticola, Cylindrocarpon sp., Phytophthora sp and Pythium sp. These soil borne pathogens are known by their high pathogenicity on other vegetable crop such as (potato, tomato, pepper ) generally intercropped with olive tree (Triki et al., 2006, 2009). The wilt and dieback observed in young inoculated olive tree are related to a serious physiological disorder characterized by the progressive drying out and usually leading to the death of the tree. Pathogenicity tests showed that all tested isolates caused varied degrees of wilt and dieback symptoms on inoculated young olive trees cv. Chemlali. The attacks manifested by V. dahliae are often more virulent due to its vascular incidence. The other funguses were also pathogenic to olive trees and reproduced symptoms of decline and die-back syndrome and proved that they are the causal agents of olive trees decline. The other fungal species associated with root rot of olive trees in the field or in the nurseries, including Gliocladium sp., Rhizopus sp.and Penicillium spp., were weakly or not pathogenic References: -Booth,C.,1971. The genus Fusarium. 253pp. CMI, Kew, Surrey, England. -Ghoneim,S.S; M.I. Abdel-Massih and F.F.A.Mohamed.,1996. Interraction between root-knot nematode and root rot on olive trees, Annals agric, Sci, Ain Shams univ. 41: Sanchez-Hernandez, M.E; A. Ruiz Davila, A.Perez Delgaba ; M.A.Balanco-Lopez and A. Trapero-Casas.,1998. Occurrence and itiology of death of young olive trees in southern Spain. Eur.J. Plant. Pathol. 104: Teviotdale, B.E., Diseases of olive. pp In: Olive Production Manual. University of California.CA, USA. - Triki M.A., Hassaïri A., Mahjoub M., Premières observations de Verticillium dahliae sur olivier en Tunisie. Bulletin OEPP/EPPO Bulletin 36: Triki M.A., Rhouma A., Khbou W., Boulila M., Ioos R., Recrudescence du dépérissement de l olivier causé par leschampignons telluriques en Tunisie. Pages In: Proceeding International Conference of Olive tree and Olive Products, Olivebioteq, Sfax, Tunisia: Triki MA., Krid S., Hsairi, H., Hammami I., Ioos R., Gdoura R., Rhouma A., Occurrence of Verticillium dahliae defoliating pathotypes on olive trees in Tunisia. Phytopathologia Mediterranea 50:

274 P.173. Involvement of the Nucleus Raphe Magnus in Diffuse Noxious Inhibitory Controls in the rat Raja Chebbi, Radhouane Dallel, Philippe Luccarini, Monia Dhidah. Laboratory of physiology, Faculty of dentistry 5000 Monastir INSEMU929, Laboratory of neurobiology of trigeminal pain, faculty of dentistry, Clermont ferrand Abstract Diffuse noxious inhibitory controls (DNICs) are supraspinal descending inhibitory controls of pain acting on the activity of convergent neurons. They are triggered by heterotopic noxious stimuli and imply the activation of supraspinal structures. The nucleus raphe magnus (NRM) is a key medullary relay for descending pain modulation. The aim of this study is to compare the DNIC potency before and after NRM blockade in the anesthetized rat. Using extracellular recording techniques, we recorded from convergent neurons in the spinal trigeminal nucleus of anaesthetized (halothane) rats. Neurons were characterized according to their responses to both mechanical and electrical stimulation of their receptive field. We tested the effect of microinjection of muscimol, a GABA-A receptor agonist, into the NRM on basal responses to a range of applied peripheral stimuli and DNIC. The stimulation protocol consisted of 105 repetitive (0.66 Hz) electrical stimuli applied to the cutaneous receptive field at 3 times threshold intensity for C-fibers activation. Between the 36 th and 60 th stimuli, either the left or right hindpaw was immersed in hot water (48 C). Such a protocol was repeated at 15 min intervals over a period of 115 min. DNIC was assessed by comparing post-stimulus histograms derived from responses with those from unconditioned responses Innocuous and noxious mechanical stimuli (10 sec duration) were also applied. Three main effects were observed. First, muscimol dose-dependently facilitated C-fiber evoked responses of convergent neurons: to 136±15% (p<0.05) and 176±31% (p<0.03) of baseline following 30ng and 90ng, respectively. Second, it also significantly increased responses to noxious and innoxious mechanical stimuli. Responses to 6g and 60g force Von Frey filaments application increased from 4±2 to 145±62 spikes and from 180±35 to 860± 214 spikes, respectively. Third, during immersion of the hindpaw, the inhibition (88 ±4%) of C-fiber-evoked responses, fell down to 51±6% (p<0.001) and 37±4% (p<0.001), after 30ng and 90ng, respectively. Thus NRM inactivation significantly reduced DCIN.As a control, microinjection of muscimol (30ng) outside the NRM neither enhanced C-fiber-evoked responses nor reduced DNIC. These results suggest that NRM inhibit trigeminal WDR neurons and is involved in the neuronal network underlying DNIC. 274

275 P.174. Expression of the AlSAP gene from the halophyte grass Aeluropus littoralis in rice confers broad tolerance to abiotic stresses through maintenance of photosynthesis 1 Rania Ben Saad, 2,3 Emmanuel Guiderdoni & 1,3 Afif Hassairi 1 University of Sfax, Centre of Biotechnology of Sfax (CBS); LPAP, PoBox Sfax, Tunisia. 2 CIRAD, UMR AGAP, Avenue Agropolis, Montpellier Cedex5 France. 3 King Saud University, Centre of excellence in Biotechnology research; college of Food and Agricultural sciences, PoBox 2460; Riyadh-Saudi Arabia Abstract Developing crop varieties with enhanced tolerance to abiotic stresses has become a very important challenge to both meet the desirable reduction of inputs in agriculture and face unstable climate conditions. In that quest, the Stress Associated Protein (SAP) gene family that includes genes encoding proteins having A20/AN1 zinc-finger domains has retained an increasing attention. Overexpression of AlSAP, under the control of CaMV-35S promoter, improved tolerance to continuous salt and drought stresses under greenhouse conditions in rice. The physiological dissection of the high level of tolerance of AlSAP rice to severe drought stress demonstrated that continuous growth under stress relies on maintenance of photosynthesis and allows a 60% seed harvest under stress while AlSAP gene expression imposes no yield penalty under control conditions. Analysis of the expression level of a pilot set of key stress-related genes in AlSAP rice has shown enhanced accumulation of their transcripts, both under control and stress conditions. Keywords: Aeluropus littoralis, AlSAP gene, abiotic stress, transgenic rice 1 Introduction Abiotic stresses imposed by drought, salinity and extreme temperatures pose serious threats to growth and productivity of crop plants worldwide. Climate change and increasing instability further aggravate these problems [1]. The Stress Associated Protein (SAP) gene family includes genes encoding proteins having A20/AN1 zinc finger domains, induced by one or more abiotic stresses and performing their functions in a stress-specific or tissue specific manner [2,3]. To date, though there is a long record of studies showing that the overexpression of stressrelated genes improves drought tolerance in rice to some extent [4], few have undergone detailed physiological analysis and have their potential confirmed under field conditions. The present study aims at evaluating the effect of the expression of the AlSAP gene, isolated from the halophytic grass A. littoralis, on abiotic stress responses of rice cv. Nipponbare, the reference model variety of japonica rice. The specific objectives were to study the comparative behaviour of transgenic AlSAP and wild-type (WT) rice plants exposed to chilling, drought and salt stresses under in vitro and greenhouse conditions, both in terms of physiological and morphological responses. Furthermore, a first insight on regulatory networks influenced by AlSAP gene expression in rice was provided by monitoring the expression of a pilot set of known stress-related genes. 2. Methodology To validate and dissect the physiological mechanisms of abiotic stress resistance conferred by AlSAP the CaMV35S promoter (Fig. 1a) was introduced into rice (O. sativa, subspecies japonica) cultivar Nipponbare. Integration of the T-DNA was confirmed by Southern blot analysis (Fig. 1b). Three lines, RN2, RN4 and RN5, that harboured one or three copies of the 275

276 T-DNA were selected. Constitutive accumulationof AlSAP transcripts was established by both Northern blot and semi-quantitative RT-PCR analyses in the selected lines and was higher in line RN5 than in lines RN2 and RN4 (Fig. 1c,d). The three transgenic lines (referred to as rice AlSAP lines) were fixed at a homozygous status for phenotypic and stress physiological assays. Fig 1. Analysis of transgenic rice lines overexpressing the AlSAP gene. (a) Schematic map of the T-DNA inserted in the binary vector pcambia2300:alsap used for rice transformation. (b) Southern blot analysis of transgenic and wild-type (WT) rice plants (RN2, RN4 and RN5) determining the T-DNA copy number. Genomic DNA was digested with HindIII (cuts once in the T-DNA), separated by electrophoresis on a 1% agarose gel and transferred onto a nylon membranethe transferred DNA was hybridized with the [a- P]dCTP labelled AlSAP full-length cdna probe. (c) Northern blot analysis of transgenic lines. RNA was transferred onto a nylon membrane and hybridized with the [a-32 P]dCTP labelled AlSAP full-length cdna probe. Equal loading in each lane was confirmed by ethidium bromide staining (lower panel). (d) Expression pattern of the AlSAP gene in three transgenic lines (RN2, RN5 and RN4) used for tolerance assays. RT-PCR analysis was performed with AlSAP specific primers using the RNA isolated from the three transgenic lines and WT plants. 3 Main Results The expression of AlSAP, in rice cv. Nipponbare, enhances plant tolerance to cold, drought and salt stresses. AlSAP lines showed 100% survival rate and set seeds while control plants did not recover from the cold treatment. Under a severe drought stress treatment (fraction of transpirable soil water down to 0.1), AlSAP lines exhibited enhanced Transpiration Efficiency (TE) and maintained a high A(Assimilation rate) value (22 mmol m -2 s -1 ) while these values dramatically decreased (A = 4 mmol m ) in control plants which were subsequently unable to recover from the stress. Of noteworthy is that AlSAP rice plants yielded a similar and a 60% seed set under control and stress conditions respectively, with regard to wild-type (WT) plants grown under control conditions. This indicates that AlSAP expression imposes no yield penalty and allows seed production even following a severe drought stress at the vegetative stage. Furthermore, AlSAP rice was shown to accumulate transcripts of a pilot set of eight stress related genes at a significantly higher level than WT plants, both under control and stressed conditions. The results suggest that AlSAP expression generates stress tolerance in plants through maintenance of the photosynthetic apparatus integrity and by stimulating an endogenous adaptive potential which is not effectively accomplished in WT plants. References [1] Ahuja I., De Vos RC., Bones AM., & Hall R.D., 2010, Plant molecular stress responses face climate change, Trends in Plant Science 15, [2] Ben Saad R., Zouari N., Ben Ramdhan W., Azaza J., Meynard D., Guiderdoni E., & Hassairi A., 2010, Improved drought and salt stress tolerance in transgenic tobacco overexpressing a novel A20/AN1 zinc-finger AlSAP gene isolated from the halophyte grass Aeluropus littoralis, Plant Molecular Biology 72, [3] Vij S., & Tyagi AK., 2006, Genome-wide analysis of the stress associated protein (SAP) gene family containing A20/AN1 zinc finger (s) in rice and their phylogenetic relationship with Arabidopsis, Molecular Genetics and Genomics 276, [4] Jin Y., Wang M., Fu J., Xuan N., Zhu Y., Lian Y., Jia Z., Zheng J., & Wang G., 2007, Phylogenetic and expression analysis of ZnFAN1 genes in plants, Genomics 90,

277 P.178. Arthrobacter arilaitensis Re117 Oxidant-stable Alkaline Metalloprotease: Purification and Biochemical Characterization Rayda Siala, Nahed Fakhfakh, Ibtissem Hamza-Mnif, Moncef Nasri, Tatiana Vallaeys, and Alya Sellami-Kamoun Laboratoire de Génie Enzymatique et de Microbiologie, Ecole Nationale d Ingénieurs de Sfax, B. P Sfax, Tunisia Abstract Arthrobacter arilaitensis Re117 protease described here is the first Arthrobacter alkaline metalloprotease studied. It was purified to homogeneity by Sephadex G-100 gel filtration, ultrafiltration, and Mono Q-Sepharose with 3.72-fold increase in specific activity and 28.22% recovery. The molecular mass of the purified enzyme was estimated at 50 kda. The N-terminal amino acid sequence QASTAYSQIDDF. The enzyme was highly active over a wide range of ph from 6.0 to 11.0, with an optimum activity at ph 9.0 and 40 C. The proteolytic activity was totally lost in the presence of Ethylene Diamine Tetraacetic Acid. Purified metalloprotease exhibited significant stability and compatibility with non-ionic surfactants (Tween 20, Tween 80, and Triton X-100), oxidizing agents (H2O2 and sodium perborate), and most of the tested commercial laundry detergents, demonstrating its feasibility for inclusion in detergent formulations. Keywords: Arthrobacter arilaitensis Re117, metalloprotease, purification, Oxidant-stable, detergent 1. Introduction Microbial proteases constitute approximately 40% of the world-wide production of enzymes [1]. They have diverse applications, such as detergents, food, pharmaceuticals, leather, silk, and for recovery of silver from used X-ray films, in a wide range of industries [2,3]. Of these, alkaline proteases are particularly important because they are both stable and active at high ph solutions and in the presence of surfactants and oxidizing agents [3,4]. The industrial demand for highly active preparations of proteolytic enzymes with appropriate specificity and stability in terms of ph, temperature, metal ions, and surfactants continues to stimulate the search for new enzyme sources. Many alkaline proteases have been purified and characterized [5-6]. Subtilisin Carlsberg produced by Bacillus licheniformis [7] and Subtilisin Novo of Bacillus amiloliquefaciens [8] have been the enzymes of choice in detergent formulations. This work deals with the purification and partial characterization of an extracellular alkaline metalloprotease produced by the newly isolated strain A. arilaitensis Re117 and its further use as a detergent additive. 2. Material and Methods Arthrobacter arilaitensis Re117 was isolated from red smear cheeses The proteolytic enzyme was produced on a medium based on sardinelle heads and viscera powder (SHVP) prepared in the laboratory. Protease activity was measured using casein as the substrate [9]. It was purified to homogeneity by Sephadex G-100 gel filtration, ultrafiltration, and Mono Q- Sepharose. The purified enzyme was transferred from the SDS-PAGE gel to a polyvinylidene difluoride membrane (PVDF). The effect of ph and temperature on protease activity and stability was analysed. 3. Results Table 1. Purification summary of Arthrobacter arilaitensis Re117 metalloprotease The protease from A. arilaitensis Re117 was purified by the four-step procedure describe in Table

278 The molecular mass of the purified enzyme was estimated by sodium dodecyl sulphatepolyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) at 50 kda. Figure 1. Figure 1: SDS-PAGE of the purified protease from A. arilaitensis The N-terminal amino acid sequence QASTA YSQIDDF, showed high homology with Pseudomonas metalloproteases. The enzyme was highly active over a wide range of ph from 6.0 to 11.0, with an optimum activity at ph 9.0 and 40 C. Figure 2 Figure 2: Effect of ph on the activity and stability the purified Arthrobacter metalloprotease. Table 2. Stability of the purified alkaline metalloprotease in the presence of oxidants, surfactants, and detergents Purified metalloprotease exhibited significant stability and compatibility with non-ionic surfactants (Tween 20, Tween 80, and Triton X-100), oxidizing agents (H2O2 and sodium perborate), and most of the tested commercial laundry detergents, demonstrating its feasibility for inclusion in detergent formulations Table 2. References [1]Horikoshi K., 1996, Alkalophiles-from an industrial point of view, FEMS Microbiol. Rev. 18,pp [2]Kumar G., and Takagi H.,1999, Microbial alkaline proteases from a bioindustrial view point. Biotechnol. Advances 17, pp [3] Gupta R., Beg Q., and Lorenz P., 2002, Bacterial alkaline proteases: Molecular approaches and industrial applications. Appl. Microbiol. Biotechnol. 59, pp [4]Gupta R., Gupta K., Saxena R. K., and Khan S., 1999, Bleachstable alkaline protease from Bacillus sp. Biotechnol. Lett. 21,pp [5]Haddar A., Agrebi R., Bougatef A., Hmidet N., Sellami-Kamoun A., and Nasri M., 2009, Two detergent stable alkaline serine-proteases from Bacillus mojavensis A21: Purification, characterization and potential application as a laundry detergent additive. Biores. Technol. 100,pp [6]Hajji M., Kanoun S., Nasri M., and Gharsallah N., 2007, Purification and characterization of an alkaline serineprotease produced by a new isolated Aspergillus clavatus ES1. Proc. Biochem. 72, pp [7]Jacobs M., Elkiasson M., Uhlen M., and Flock N.,1985, Cloning, sequencing and expression of Subtilisin Carlsberg from Bacillus licheniformis. Nucleic Acids Res. 13, pp [8] Wells J. A., Ferrari E., Henner D. J., Estell D. A., and Chen E. Y.,1983, Cloning, sequencing and secretion of Bacillus amyloliquefaciens subtilisin in Bacillus subtilis. Nucleic Acids Res., 11, pp [9]Kembhavi A. A., Kulkarni A., and Pant A. A., 1993, Salt-tolerant and thermostable alkaline protease from Bacillus subtilis NCIM No 64. Appl. Biochem. Biotechnol., 38, pp

279 P.180. Malignant Walker 256/B cells-induced tumor osteolysis in rats; effects of α-tocopherol supplementation 1,2 Riadh Badraoui, 3 Hmed Ben-Nasr, & 1 Tarek Rebai 1 Laboratory of Histo-Embryology, Medicine Faculty of Sfax, 3029 Sfax, TUNISIA. 2 Laboratory of Histology, MFT, 1017 Tunis, TUNISIA. 3 Laboratory of Pharmacology, MFS, 3029 Sfax, TUNISIA Abstract The aim of this work was to assess the effect of α tocopherol acetate (VE) on trabecular bone microarchitecture in a rat with skeletal metastases due to Walker 256/B cells. Cells were injected into the right femora of male rats. Animals were randomized into three groups: sham-operated; injected with Walker 256 cells ( ) in the medullar cavity (W256 group); and inoculated as above and treated with 45mg/kg BW of VE (W256VE group). After euthanized, the operated hindlimb were examined. Compared to the healthy sham-operated group, W256 and W256VE groups showed osteolytic damages with marked resorption of cortical and trabecular bone. W256VE animals presented marked less disturbance of Tb.Th and Tb.Sp associated with conversion of rods into pillers. These morphological modifications were confirmed with structure model index (SMI) and trabecular pattern factor (Tb.P f ) increases. VE modulated Walker 256 cells induced morphological changes on trabecular and cancellous bone. It could exert favorable effects on bone plate-rod distribution and morphology. Keywords: Tumor osteolysis, α-tocopherol, Walker 256/B, Bone microarchitecture 1. Introduction Breast cancer cells presented a high metastatic potential and induced predominantly osteolytic lesions. The trabecular bone microarchitecture was recognized as the first factor of bone quality [1]. Topology of trabecular bone structures and there distributions are one feature of bone quality that is known to affect bone strength, and there quantifications have become an important area of research. Moreover, the bone quality evaluation has recently sparked interest as tool for diagnosing bone disease with or without tumor process. Although there have been advances in radiotherapy, chemotherapy and surgery, the use of complementary therapies for many cancer diseases remains of key interest [2]. The protective role of certain vitamins, such as vitamin E (VE) in different stages of cancer diseases has been recognized. Nevertheless, effects on geometry and architecture of trabecular structure (rods- and plateslike) and 3D distribution need to be identified. The aim of this study was to extend the effects of VE on trabecular bone microarchitecture in a rat model of breast cancer skeletal diseases due to Walker 256/B cells. Changes in distribution and frequency of trabeculae were measured and compared between groups. 2. Methodology 2.1. Cell line and culture conditions Malignant Walker 256/B mammary carcinoma cells were grown in supplemented DMEM at 37 C. Cells with bone trophicity were obtained following 2 ascetic passages of 6 day each [3] Animals Experimental protocols were conducted in accordance with the local Ethical Committee for the care and use of laboratory animals. The bone metastases experiments in rats were conducted as previously described. 20 days after surgery, animals were euthanized. Rats were randomly divided into three groups: (i) 6 sham-operated, and served as control, (ii) 10 rats inoculated with Walker 256 cells ( ), (iii) 10 other rats inoculated as above and treated 6 days / week with VE(45 mg/kg BW). 279

280 2.3. Bone examination A Skyscan 1072 X-computed microtomograph (Skyscan, Kontich, Belgium) using a microfocus X-ray tube (80 kv/100 µa) was used. An interesting tool of the ANT software allows re-slicing of the 3D models across a plane positioned in a specified direction (vertical and parallel to the long axis of the bone). Bones were embedded undecalcified in methylmethacrylate. Sections were cut parallel to the axis of the bone core, and stained with a modified Goldner s trichrome and TRAcP Statistical analysis The analysis of variance (ANOVA) was used and followed by Newman-Keuls post-hoc test. Statistical significance difference was defined when p <0.05. Fig.1 X-ray microct 2D sections of samples from rat operated femur in Sham, W256, and W256VE. Note the considerable osteolytic lesions in Walker 256/B cells inoculated rats. 3. Main Results Compared to controls, W256 and W256VE groups exhibited osteolytic lesions with significantly increases in osteoclasts number and eroded surfaces associated severe injury in the trabecular network with tumor osteolytic lesions and cortical effractions. A clear tendency for net reduction in the number of eroded surfaces and osteoclasts was noted in W256VE (Fig. 1). This is in good agreement with the patho-physiology of bone metastasis [4]. W256VE group showed less bone damaged tissue with osteosclerotic areas. While mean degree of anisotropy (DA) remain unchanged, both Tb.P f and SMI levels were found to increase in W256 group, emphasizing trabecular disconnection and increase in rod-like at the expense of plate-like trabeculaed. In conclusion, VE mediates phenotype of Walker 256/B cells-induced of skeletal metastases in rats. These results support a possible osteosclerotic effect of VE on the breast cancer associated bone diseases. In extrapolation, mammary gland carcinoma cells may, therefore, induce effects in patient s trabecular bone and VE supplementation may interfere with the systemic effects of these cells. References [1] Delmas PD., Li Z., & Cooper C., 2004, Relationship between changes in bone mineral density and fracture risk reduction with antiresorptive drugs: some issues with meta-analyses. J. Bone Miner. Res. 19, pp [2] Kerba M., Wu JS., Duan Q., Hagen NA., & Bennett MI., 2010, Neuropathic pain features in patients with bone metastases referred for palliative radiotherapy. J. Clin. Oncol. 28, pp [3] Badraoui R., & Rebai T., 2012, Effect of malignant ascites on antioxidative potency of two tumoral cells-induced bone metastases: Walker 256/B and MatLyLu. Exp. Toxicol. Pathol. 64, pp [4] Bussard KM., Gay CV., & Mastro AM., 2008, The bone microenvironment in metastasis; what is special about bone? Cancer Metastasis Rev. 27, pp

281 P.181. Post-translational modification of GRP94 and HSP27 under chronic treatment with low lithium concentrations in SH-SY5Y neuronal cells Riadh Nciri 12, Mohamed Salah Allagui 12, Abdelfattah Elfeki 2, Christian Vincent 1, Françoise Croute 1 1 Laboratoire de Biologie Cellulaire, Faculté de Médecine Purpan, Universite Paul Sabatier Toulouse III, 37 Allées Jules Guesde, Toulouse, France 2 Laboratoire d écophysiologie, Faculté des Sciences, Sfax 3018, Tunisie. Abstract In this study, SH-SY5Y neuronal cells were submitted to long-term exposure (25-50 weeks) of therapeutic relevant lithium carbonate concentrations (0.5 mm). Stress proteins expression was studied in order to verify whether the cytoprotective effects of lithium, under our condition, could be, in part, attributed to a molecular protection conferred by stress proteins/ chaperones accumulation. Posttranslational modifications of GRP94 and HSP27 were analyzed in SH-SY5Y cells by western blot assay. Results showed an over-expression of two proteins; a 105 kda protein recognized by anti- GRP94 and anti-kdel named P105. This protein could be an hyper-phosphorylated isoform of GRP94. The second, of about 108 KDa and named P108, was detected by both the anti HSP27 and anti- phospho HSP27 antibodies. This protein could correspond to a phosphorylated tetrameric form of HSP27. These results suggested that neuroprotective effect of lithium could be related to posttranslational modifications of GRP94 and HSP27 stress proteins. Keywords: Lithium carbonate, SH-SY5Y cells, GRP94, HSP27 1. Introduction: Lithium neuroprotection is provided through multiple, intersecting mechanisms, although the interaction of lithium with these mechanisms is still under investigation [1]. It was demonstrated that lithium inhibition of GSK-3 is associated with activation of heat-shock factor-1 (HSF-1) [2] which suggests that lithium treatment may up-regulate heat-shock response as part of the neuroprotective mechanisms [3]. For that, we have studied the stress proteins expression in order to verify whether the cytoprotective effects of lithium, under our condition, could be, in part, attributed to a molecular protection conferred by stress proteins/ chaperones accumulation. 2. Methodology: GRP94 and HSP27 expression was assessed by western blot assay. 3 Main Results: The anti-grp94 and the anti-kdel recognized a protein band of 98 kda, corresponding to the apparent molecular mass of GRP94. This protein was not modified by the treatment. A protein band of about 105 KDa (P105), overexpressed in (Li) cells compared to (C), was also immunodetected by the same antibodies. This suggests that this protein could correspond to a post-translational modified form of GRP94 (Figure 1). The use of anti-phosphoserine antibody recognized also the same protein P105 which confirm that P105 was a serinephosphorylated form of GRP94. In addition to P105, the anti-phosphoserine antibody recognized another protein band of about 108 KDa. Figure 2 shows that the expression level of monomeric HSP27 was similar in (C) and (Li) cells. Moreover, the phosphorylated (ser78) monomeric form of HSP27 was not detected. At the same time, a P108 band was recognized by both the anti HSP27 and anti- phospho HSP27 antibodies. This protein was over-expressed in lithium treated cells. It could correspond to a 281

282 phosphorylated tetrameric form of HSP27. The simultaneous use of anti- phospho HSP27 and anti-phosphoserine antibodies recognized a protein band of about 108 kda confirming that P108 was a serine-phosphorylated tetrameric form of HSP27. Fig.1: Immunoblots showing stress protein expression (GRP94, GRP78, HSP72/73) in SHSY5Y cells from control (C) and treated (Li) cultured in presence of 0.5 mm lithium for 47 weeks. P1 08 Fig.2: Immunoblots showing expression changes of HSP27 and phospho-hsp27 (Ser 78) in SH-SY5Y cells from control (C) and treated (Li) exposed for long-term (47 weeks) to 0,5 mm lithium carbonate. References: [1] Rowe MK., Chuang DM., 2004, Lithium neuroprotection: molecular mechanisms and clinical implications, Expert. Rev. Mol. Med. 18, 6, [2] Bijur G N., Jope R S., 2000, Opposing actions of phosphatidylinositol 3-kinase and glycogen synthase kinase-3 in the regulation of HSF-1 activity, J. Neurochem. 75, [3] Chuang DM., 2005, The Antiapoptotic Actions of Mood Stabilizers: molecular Mechanisms and Therapeutic Potentials, Ann. N. Y. Acad. Sci. 1053,

283 P.182. Effet des micropolluants (Cadmium et Phénanthrène) sur quelques paramètres hémolymphatiques de la moule méditerranéenne (Mytilus galloprovincialis). 1 Ridha Ben Younès, 1 Hella Ellejmi, 1 Younès Bouallegui, & 1 Ridha Oueslati 1 Unité IMEC, Faculté des Sciences de Bizerte, 7021 Jarzouna, Bizerte, Tunisie Résumé En réponse aux perturbations environnementales, les fonctions biologiques et physiologiques fondamentales des organismes marins peuvent être modifiées, générant des situations regroupées dans la notion de stress. Ainsi, toute atteinte des fonctions de défense d'un hôte, toute diminution de l'immunocompétence, peut augmenter la sensibilité aux agressions d'origine parasitaire ou microbienne. L'étude réalisée au laboratoire sur la moule méditerranéenne Mytilus galloprovincialis a permis de mieux connaître l'origine des variations de paramètres hémolymphatiques. L'exposition des moules (Mytilus galloprovincialis) à des doses sub-létales de micropolluants (Cadmium, Phénanthrène) a induit d'une part une modification du pourcentage des différents types de cellules hémocytaires avec une diminution de leur viabilité et d'autre part une diminution remarquable du pourcentage de cytolyse à la dose de 200 µg/l (diminution de 31,4 % et de 28,91% après exposition au Cadmium et au Phénanthrène respectivement). Mots-clés: Cadmium, Phénanthrène, moule, cytolyse, Hémocytes. 1. Introduction Les polluants peuvent agir à des niveaux variés de la physiologie des animaux sauvages, et leurs comportements sont influencés par de nombreux facteurs de l environnement. Cependant, le risque écologique que représente une source de pollution peut être estimé en étudiant des fonctions primordiales à la survie des espèces animales, comme la reproduction ou l immunité. L objectif de cette étude est donc d évaluer l impact des polluants (Cadmium et Phénanthrène) sur quelques paramètres immunitaires de la moule méditerranéenne (Mytilus galloprovincialis). 2. Méthodes Le dénombrement des différents types de cellules hémocytaires est effectué à l aide d un microscope optique après la confection d un frottis et une coloration au May-Grünwald Giemsa. Le test de viabilité est réalisé après une coloration vitale (Bleu de trypan à 0.2%) et une numération sur une cellule Thoma. Les molécules cytolytiques de l hémolymphe montrent une activité vis-à-vis des érythrocytes humains de groupe sanguin A +. Brièvement, 500 µl d hémolymphe sont incubés avec le même volume d érythrocytes pendant 1h à 25 C. Après centrifugation, la lecture de la densité optique est effectuée à 541 nm [1]. 3. Résultats Le test de viabilité des cellules hémocytaires montre que l exposition des moules au cadmium ou au phénanthrène provoque une diminution du pourcentage des cellules vivantes surtout avec la dose de 50µg/L pour le cadmium (Fig. 1) [2] et de 100µg/L pour le phénanthrène (Fig. 2). 283

284 Cytolyse( %) Cytolyse (%) pourcentage des types d'hémocytes Poucentage des types d'hemocytes (%) Viabilié des Hémocytes Viabilité des Hémocytes 19, 20, 21 et 22 décembre 2012 Hôtel EL Mouradi Douz - Tunisie ,7 53,05 38,5 0 Cadmium µg/l ,67 38, Phénanthrène µg/ Fig. 1: Effet du cadmium sur la viabilité des Fig. 2: Effet du phénanthrène sur la viabilité des cellules hémocytaires. cellules hémocytaires. En suivant le pourcentage des différents types de cellules hémocytaires après traitement, on constate une variation de leur composition [3]. En effet, la dimunition du poucentage des granulocytes est compensée par une augmentation de celui des hyalinocytes (Fig. 3 et 4) H 20 G 0 H G Cadmium µg/l Phénanthrène µg/l Fig. 3: Effet du cadmium sur le pourcentage des différents types de cellules hémocytaires. H: Hyalinocytes acidophiles. G: Granulocytes.. Fig. 4: Effet du phénanthrène sur le pourcentage des différents types de cellules hémocytaires. H: Hyalinocytes acidophiles. G : Granulocytes ,2 70,1 67,4 41, ,81 25,15 7,8 6, Cadmium µg/l Phénanthrène µg/l Fig. 5: Effet du cadmium sur l activité cytolytique de l hémolymphe. Fig. 6: Effet du phénanthrène sur l activité cytolytique de l hémolymphe. Les résultats de l effet des contaminants sur le pourcentage d hémolyse montrent une diminution nette pour la dose maximale testée de 200µg/L (Fig. 3 et 4). Ceci montre que les molécules cytolytiques sont affectées par l exposition des moules aux contaminants [1]. Références [1] Malagoli D. & Ottaviani E., Cytotoxicity as a marker of mussel health status. Journal of The Marine Biology Association of the United Kingdom, 85, pp [2] Olabarrieta, I., L Azou, B., Yuric, S., Cambar, J. and Cajaraville, M.P., 2001.In vitro effects of cadmium on two different animal cell models. Toxicol. In Vitro,15, pp [3] Carballal, M. J., López, C., Azevedo, C. and Villalba, A Hemolymph cell types of the mussel Mytilus galloprovincialis. Dis. Aquat. Org. 29, pp

285 P.183. Pipistrellus kuhlii du Parc National de Bou Hedma : Suivi annuel et terrains de chasse Ridha Dalhoumi 1, Amor Hadfi 1, Patricia Aîssa 1 & Stéphane Aulagnier 2 1 Laboratoire de biosurveillance de l Environnement, Faculté des Sciences de Bizerte, 7021 Zarzouna Tunisie 2 Comportement et Ecologie de la Faune Sauvage, I.N.R.A., B. P , Castanet Tolosan cedex France Résumé Un suivi annuel de la population de la Pipistrelle de Kuhl a été réalisé par capture au filet et écoute avec un détecteur d ultrasons dans les principaux habitats du Parc National de Bou Hedma. La Pipistrelle de Kuhl, active durant toute l année dans le parc, n a été capturée qu au niveau des points d eaux. Elle a été même piégée en période hivernale. Les effectifs les plus importants ont été observés en fin du printemps et en début d automne. Les cris d écholocation de P. kuhlii ont été détectés dans les différents habitats du parc. Les écorces décollées d acacias constituent un site de maternité privilégié pour cette espèce. Mots clefs: Pipistrellus kuhlii, Parc National de Bou Hedma, bassin, Acacia tortilis raddiana 1. Introduction La Pipistrelle de kuhl (Pipistrellus kuhlii) est sans doute l espèce de chiroptère la plus commune sur le territoire tunisien [1]. Malgré la multiplicité des publications antérieures sur les chiroptères tunisiens [2-3], aucun travail n a intéressé l étude des territoires de chasse de cette espèce en Tunisie. Ainsi, un projet a été réalisé dans la pseudo-savane d Acacia tortilis raddiana du Parc National du Bou Hedma dont l objectif principal consiste à suivre de près la population du P. kuhlii afin de déterminer ses principaux territoires de chasse dans le parc et l importance de la forêt d Acacia pour cette espèce. 2. Méthodologie Le suivi mensuel de l activité du P. kuhlii a été réalisé dans 6 principaux habitats (Bassin du bordj, Oued Bou Hedma, Bassin de Nouh, Steppe de Stipa tenacissima, Forêt claire d Acacia tortilis raddiana et Forêt claire d Acacia tortilis raddiana) du Parc National de Bou Hedma durant un cycle complet. Chaque séance a commencé 15 minutes après le coucher du soleil et se poursuit durant 3 heures. Deux techniques ont été employées : a- capture : les chauves-souris ont été capturées par un filet japonais. Elles ont été identifiées en se basant sur les guides d identification appropriés [4,5], pesés et mesurés. b- détection : Les cris d'écholocation de la Pipistrelle de kuhl ont été détectés, enregistrés temporairement en utilisant un détecteur Pettersson D 240x et stockés à l'aide d'un enregistreur EDIROL R-09 RH. Ces signaux ont été analysés en utilisant «Batsound» (édition par Pettersson Elektronik AB). 3 Résultats La Pipistrelle de Kuhl, n a été piégée qu au niveau d Oued Bou Hedma, Bassin du Nouh et Bassin du Bordj. Au niveau de ce bassin, elle a été capturée dans les différentes saisons. Sachant que, les effectifs les plus importants ont été observés en mai, juin, juillet et septembre (Fig.1) L analyse des cris d écholocation a montré que P. kuhlii utilise des signaux à fréquence modulée aplanie avec une fréquence terminale de 37 à 40 khz. Les échos de cette espèce ont 285

286 été détectés dans les différents habitats du parc mais les nombres de contacts ont été très variables entre les saisons et les sites. Effectif Bassin du Bordj Bassin Nouh Oued Bou Hedma juin-10 juil-10 août-10 sept-10 oct-10 nov-10 déc-10 janv-11 févr-11 mars-11 avr-11 mai-11 juin-11 Mois Fig.1: suivi mensuel de l effectif du P. kuhlii dans la Parc National de Bou Hedma En début d été et d automne les contacts étaient plus nombreux au niveau des points d eaux et particulièrement au niveau du bassin du Bordj (Tab.1). Les cris sociaux du P. kuhlii n ont été enregistrés qu en période hivernale Tab.1 : Nombre de contacts du P. kuhlii détecté dans le Parc de Bou Hedma (06/ /2011. Site B. Bordj B. Nouh O. Bou Hedma Forêt claire d Acacia Forêt dense d Acacia Steppe L activité de chasse du P. kuhlii commence juste après le coucher du soleil et atteint son maximum une heure plus tard, elle faiblit nettement 3 à 4 heures après la tombée de la nuit. En été, certains individus démarrent leur activité même avant le coucher du soleil. De plus, la forêt claire d Acacia tortilis raddiana constitue le terrain de chasse préféré par certains spécimens en été et notamment en période de floraison des acacias. De même, Trois colonies de reproduction de P. kuhlii ont été observées sous des écorces décollées d Acacia. Références [1] Dalhoumi, R., Aissa, P., and Aulagnier, S., Taxonomie et répartition des chiroptères de Tunisie. Rev. Suisse Zool. 118(2), pp [2]Deleuil, R. & Labbe, A Sur la variabilité de la Pipistrelle de Kuhl (Pipistrellus kuhli). Bul. Soc. Sc. Nat. de Tunisie 8, pp [3] Aellen, V. & Strinati, P Liste des Chiroptères de la Tunisie. Rev. Suisse de Zool. 76, pp [4]Dietz C. & Helversen O. von, Illustrated identification key to the bats of Europe. Electronic publication: [5] Aulagnier S., Haffner P., Mitchell-Jones T., Moutou F. & Zima J., Guide des Mammifères d Europe, d Afrique du Nord et du Proche Orient. Delachaux & Niestlé, Paris. pp

287 P.185. Morphométrie florale et suivi de la floraison chez des cultivars locaux d amandier Prunus dulcis (Mill.) D.A.Webb 1 Rym Ouni, 2 Hassouna Gouta & 1 Messaoud Mars 1 Unité d agrobiodiversité, Institut Supérieur Agronomique de Chott Meriam, Université de Sousse BP 4042 Chott Meriam, Sousse, TUNISIE. 2 Institut de l olivier, Sousse, TUNISIE Résumé L amandier Prunus dulcis (Mill.) D.A.Webb est une espèce fruitière de culture très ancienne en Tunisie. Elle compte de nombreux cultivars et variétés ayant une diversité phénotypique et génétique importante. Toutefois, les recherches sur ses ressources génétiques restent peu nombreuses. Cette étude porte sur l évaluation de la diversité génétique chez l amandier sur la base des caractéristiques des fleurs et la qualité du pollen ainsi que la date et la durée de la floraison. En effet, le suivi de la floraison a été réalisé pour arranger les individus étudiés en se référant à la date et à la durée de la floraison et les classer selon la précocité de la floraison. Elloumi, Abdellaoui et Achak2 ont une floraison précoce par rapport aux autres cultivars, cependant Tlili 5 et Fagoussi ont une floraison tardive. La qualité du pollen a été étudiée afin de différencier les cultivars ayant le pollen le plus fertile et celui le plus viable. Les résultats obtenus laissent voir une grande diversité génétique intraspécifique. Les analyses et les observations ont permis d identifier certains écotypes particuliers considérés comme des cultivars distincts tels que Zahaf qui se distingue par les fleurs les plus grandes et le pollen le plus fertile et Fakhfekh qui présente le pollen le moins fertile (9,3% aprés 24 heures). Mots clés: Prunus dulcis, amandier, diversité, floraison, Tunisie. 1. Introduction Ce travail vise la caractérisation des cultivars locaux d amandier «Prunus dulcis» afin de mieux comprendre la phénologie de la plante à l échelle de la région du centre Tunisien (Sidi Bouzid). L étude porte sur la description morphométrique des fleurs, sur la caractérisation du pollen de point de vue viabilité et fertilité. De même, ce travail s intéresse au suivi de la floraison pour les différents cultivars. Les résultats attendus devraient permettre la mise en évidence des similarités et des différences entre les cultivars. Des cas probables de synonymie et d homonymie entre certains cultivars ont pu être détectés, comme pour le cas des cultivars Achak 1 et Achak 2 qui sont probablement des homonymes. Cette diversité est actuellement sujette à des menaces d érosion génétique surtout suite à l introduction des variétés étrangères autofertiles. Des mesures de sauvegarde et de valorisation sont indispensables. 2. Matériel et méthodes Au moment de la pleine floraison, des échantillons de 25 fleurs bien épanouies ont été prélevés de chaque arbre et ont servi pour des observations et des mesures au laboratoire. Après avoir observé la morphologie des pièces florales, quatorze paramètres ont été considérés (tab.1). Le suivi de la floraison s est basé sur la détermination des dates des principaux stades phénologiques. On détermine la date de début floraison (10% des fleurs épanouies), la date de pleine floraison (60% des fleurs épanouies) et la date de fin floraison (90% et plus des fleurs épanouies). Tableau 1: Paramètres mesurés sur fleurs N Paramètre Code Unité Nombre de pétales Longueur des pétales Largeur des pétales Couleur des pétales Nombre des étamines Longueur du filet Couleur du filet Nombre des pistils Longueur du pistil Couleur du pistil Position du pistil par rapport aux étamines Diamètre de la corolle Couleur du point d attache du pétale Rapport Longueur /largeur du pétale NP LP lp CP NE LF CF NPS LPS CPS PPE DCR CPATT LP/lP - mm mm - - mm - - mm - - mm

288 Lors de l examen des échantillons des fleurs, des anomalies florales peuvent être observées chez certains cultivars. Généralement, ces anomalies ont un impact négatif sur le rendement, vu que les fleurs affectées chutent fréquemment au cours de leur développement [1]. Parmi celles-ci on cite l absence de pistil ou l absence des étamines (fleur unisexuée), le pistil atrophié et le pistil double. Pour mieux caractériser le pollen des cultivars, on a fait des tests d estimation du taux de viabilité et des suivis de la germination. On a réalisé des tests colorimétriques en utilisant le carmin acétique, un colorant protoplasmique qui ne colore en rouge que les grains de pollen contenant du cytoplasme c'est-à-dire les grains de pollen viables et normaux [2]. Par cotre, les grains de pollen dépourvus de cytoplasme (grains non viables) ne seront pas colorés. Le comptage des grains colorés par rapport aux grains totaux doit être effectué immédiatement après la coloration et sous microscope. Taux de viabilité = (Nombre de grains viables / Nombre de grains totaux) x 100. Pour déterminer le taux de germination on a fait recours aux tests de germination in vitro donnant rapidement une bonne évaluation de la qualité de pollen [3]. La faculté germinative de pollen d amandier est le plus souvent estimée par la germination dans des boîtes de Pétri [4], sur un milieu artificiel contenant : 0,3 M de saccharose (C 12 H 22 O 11 ), 0,6 mm de nitrate de calcium (Ca(NO 3 ) 2, 4H 2 O), 1,6 mm d acide borique (H 3 BO 3 ) et 0,8 % d agar-agar [5]. 3. Résultats Les résultats de l analyse descriptive liée aux fleurs montrent une diversité très large au sein des cultivars étudiés pouvant avoir des conséquences importantes sur leur gestion et leur sélection ultérieure. Les dimensions des pétales (LP et lp) sont assez variables. Leurs moyennes générales sont de 15 mm pour (LP) et 12,2 mm pour (lp). Le nombre moyen de pistils par fleur (NPS) présente une moyenne générale de 1,1 avec un coefficient de variation de 27,13 %. La longueur de pistil (LPS) varie de 1 à 18 mm avec une moyenne générale de 10,5mm. Le nombre des étamines par fleur (NE) oscille entre 16 et 38 avec une moyenne de 26,1. La longueur des étamines (LE) varie considérablement entre les différents cultivars, on note une valeur minimale de 3 mm et une valeur maximale de 13 mm. L analyse en composantes principales (ACP) basée sur les caractéristiques des fleurs en ressort que les trois premiers axes absorbent 55,69% de l inertie totale. La représentation graphique de la projection de l ensemble des cultivars dans le plan P 1 défini par les deux premières composantes a révélé une hétérogénéité entre eux en montrant que des cultivars s isolent du reste comme Zahaf, Amara 6, Porto farina, Garn ghzel et Froncoli. D autres se rassemblent comme Achak1 et Mazzetto. Déjà sur le dendrogramme résultant de l analyse de groupes, Achak 1 et Mazzetto se rejoignent à une distance très faible. Le suivi de la floraison montre que la durée de floraison (DF) varie de 11 jours chez le cultivar Guarn ghzel jusqu à 20 jours chez les cultivars Elloumi et Achak 2. Sa moyenne générale est de 16 jours. Selon la date de floraison, le cultivar Elloumi a fleuri le premier (31 Décembre), suivi par Abdellaoui cinq jours après, puis Ras Bouma (08 Janvier). Achak 2 est parmi ce groupe de cultivars précoces, fleurissant vers le 12 Janvier. Ces cultivars présentent un étalement de la période de floraison, cependant les cultivars à floraison tardive ont une durée de floraison courte. Ces derniers peuvent être utilisés lors des programmes d amélioration génétiques afin d obtenir des variétés à floraison tardive évitant la gelée. Egalement ce suivi aiderait à proposer certaines associations variétales pour une meilleure pollinisation croisée. Quelques anomalies touchant la fleur sont observées, elles peuvent toucher les pièces protectrices de la fleur (sépales et pétales). Néanmoins, les plus dangereuses sont celles qui touchent les organes de reproduction (étamines et pistil) car elles vont diminuer le rendement. Généralement, le pistil est la pièce florale la plus couramment atteinte par ces anomalies. Certains cultivars sont apparus plus sensibles que d autres principalement Amara 6 avec le pourcentage le plus élevé (96%). D autres cultivars ne présentant pas d anomalies. Quant à l évaluation du pollen, les moyennes des cultivars relatives au taux de viabilité varient de 14,6% chez le cultivar Nabil Friji à 89 % chez le cultivar Forme en poire. Les taux de germination de pollen mesurés à des intervalles de temps donnés (après 2, 4, 6 et 24 heures) sont assez variables. Leurs moyennes générales sont de 10,1% pour la germination après 2 heures, 16,2% pour la germination après 4 heures, 24% pour la germination après 6 heures et 40,7 % pour la germination après 24 heures. Le cultivar Tlili 8 possède le pollen le plus fertile après 2, 4 et 6 heures d incubation. Alors qu après 24 heures, c est Zahaf qui a le taux de germination le plus élevé (75,7%). Références [1] Rodrigo J., Spring frosts in deciducous fruit trees- morphological damage and flower hardiness. Scientia Horticulurae.85, pp [2] Godini A., De Palma L., Palasciano M., Role of self-pollination and reciprocal stigma/anthers position on fruit set of eight self-compatible almonds. HortScience. 27, pp

289 P.186. Caractérisation d activités anti-thrombotiques et antihypertensives dans les hydrolysats protéiques du muscle de Gobie (HPMG) pour une valorisation dans le domaine pharmaceutique et nutraceutique. Identification de peptides bioactifs Rim NASRI 1, Ikram Ben Amor 2, Ali Bougatef 3, Naïma Nedjar-Arroume 4, Maha Karra- Chaâbouni 1, Pascal Dhulster 4, Jalel Gargouri 2 et Moncef Nasri 1 1. Laboratoire de Génie Enzymatique et de Microbiologie - Ecole Nationale d Ingénieurs de Sfax. B.P. W 3038 Sfax - Tunisie. 2. Centre Régional de Transfusion Sanguine, Route el-ain Km 0.5, CP 3003 Sfax, Tunisie 3. Institut Supérieur de Biotechnologie de Sfax 4. Laboratoire de Procédés Biologiques, Génie Enzymatique et Microbien, IUT A Lille I, BP 179, Villeneuve d Ascq Cedex, France Résumé Le présent travail porte sur la mise en évidence d activités antihypertensive et anticoagulante in vitro dans les hydrolysats protéiques du muscle de Gobie (HPMG) obtenus moyennant plusieurs activités protéolytiques bactériennes. Plusieurs peptides anticoagulants et hypotensifs ont été purifiés et identifiés. Mots clés : Goby, biopeptides, hydrolysats protéiques, anticoagulant, hypotensifs. 1. Introduction Les peptides, par leurs propriétés organoleptiques, fonctionnelles et biologiques sont amenés à jouer un rôle de plus en plus important dans les industries alimentaires, le secteur en forte expansion des aliments santé, ainsi que dans le domaine de la sécurité alimentaire, de la cosmétique et des biotechnologies en général. Ces peptides, à activité biologique, présents à l état latent dans la séquence des protéines, peuvent être libérés par hydrolyse au cours du processus physiologique de digestion (principalement par la trypsine et la chymotrypsine, deux enzymes impliquées lors de la digestion des protéines dans l organisme), dans la fermentation ou de protéolyse contrôlée en réacteur enzymatique. L hydrolyse des protéines animales ou végétales donne ainsi naissance à des peptides aux propriétés fonctionnelles et biologiques variées. Depuis une vingtaine d années, de nombreux peptides à activité biologique issus de protéines agroalimentaires d origine animale, et végétale ont été mis en évidence. Les principales activités biologiques caractérisées à ce jour sont de type immunomodulatrices, antithrombotiques, antimicrobiennes, antihypertensives, etc. Notre démarche scientifique consiste à produire des hydrolysats ou des fractions peptidiques enrichis en biopeptides à partir du muscle de Gobie, qui pourraient être utilisés en tant que «Supplement nutritionnel» dans le développement d aliments fonctionnels (aliment santé) pour la prévention contre plusieurs pathologies. Les activités biologiques recherchées sont : anticoagulante et antihypertensive. 2. Methodologie Dans le cadre de ce travail, la chair de Gobie est utilisée comme matière protéique pour l obtention d hydrolysats protéiques bioactifs. L obtention de peptides bioactifs repose en général sur l hydrolyse enzymatique (ou la protéolyse enzymatique) ménagée et contrôlée de protéines, suivie de méthodes systématiques de fractionnement, purification et de tests biologiques. Cette protéolyse enzymatique est généralement effectuée par ajout, 289

290 au produit à transformer, de protéases exogènes. Plusieurs préparations enzymatiques bactériennes du genre Bacillus ont été utilisées lors de la préparation d hydrolysats protéiques. 3. Résultats 3.1. Elaboration d hydrolysats protéiques du muscle de Gobie Plusieurs travaux ont montré que les activités biologiques des protéines peuvent être augmentées après digestion par certaines enzymes, et que certains peptides ou fractions peptidiques présentent des activités plus élevées que d autres. D autre, puisque les enzymes possèdent des sites spécifiques de clivage, plusieurs types d hydrolysats protéiques ont été préparés moyennant différentes préparations enzymatiques bactériennes. L utilisation de préparations protéolytiques, qui renferment plusieurs protéases, permet d obtenir des hydrolysats riches en peptides de petites tailles. De ce fait, la composition peptidique en acides aminés ainsi que la longueur des peptides libérés diffèrent d un hydrolysat à un autre, et par conséquent, ces hydrolysats n auront pas les mêmes propriétés fonctionnelles et biologiques. L hydrolyse du muscle de Gobie avec les protéases de B. mojavensis A21 produit un hydrolysat plus riche en peptides de petites tailles, vue qu il présente le DH le plus élevé de l ordre de 13,21 % après 6 h d hydrolyse. En effet plus le DH est élevé plus l hydrolysat est riche en peptides de petits tailles Mise en évidence de l activité inhibitrice de l ECA dans les HPMG L hypertension est le risque cardio-vasculaire le plus fréquent qui touche environ 20% d une population adulte de plusieurs pays. La pression artérielle est régulée par le système rénineangiotensine-aldostérone qui lui même est régulé par une enzyme clé l ECA (enzyme de conversion de l angiotensine). L activité antihypertensive des différents hydrolysats protéiques, à des concentrations comprises entre 0,5 et 2,5 mg/ml a été étudiée. Les résultats obtenus montrent que tous les hydrolysats protéiques manifestent une activité anti-eca, et que l inhibition de l enzyme est dose dépendante. L HPMG obtenu par les protéases de B. mojavensis A21 présente la meilleure activité inhibitrice de l ECA, qui est de l ordre de 67,9 % pour une concentration de 2,5 mg/ml. L hydrolysat a été fractionné par filtration sur gel de Sephadex G-25 puis par chromatographie liquide haute performance de phase inverse (RP-HPLC). 20 peptides présent dans les fractions les plus actives ont été identifiés, dont : Ala- Arg-Ser, Val-Val-Ala-Pro-Phe-Ala-His-Gly-Thr, Arg-Ser-Thr-Ala, Phe-Tyr-Pro-Pro, Arg-Cys-Ser- Ala-Gly-Val Mise en évidence de l activité anticoagulante dans les HPMG La thrombose ou la coagulation pathogène du sang est une cause principale des décès dans les sociétés occidentales. Les principaux traitements aux anticoagulants (anti-thrombotiques) utilisés en clinique, bien qu ils soient efficaces et largement utilisés, comportent des limites pratiques telles une faible spécificité, des complications liées aux saignements, etc. C est pourquoi de nouveaux agents antithrombotiques doivent être développés. Parmi les hydrolysats testés, celui obtenu par l action des protéases de Bacillus licheniformis NH1 exerce l activité anticoagulante la plus élevée. Le fractionnement de cet hydrolysat par filtration sur gel Sephadex G-25 génère cinq fractions. Le pool F2 présente le meilleur pouvoir d inhibition de la coagulation du sang. Ce dernier a été de nouveau fraction par RP-HPLC. La sous-fraction SF6 est la plus active. Quatre peptides ont été identifiés dans cette sous-fraction : Leu-Cys-Arg, His-Cys-Phe, Cys-Leu-Cys-Arg et Leu-Cys-Arg-Arg. Les résultas obtenus permettraient d envisager l utilisation des hydrolysats protéiques de Gobie, notamment dans le domaine pharmaceutique et de l alimentation fonctionnelle. 290

291 P.187. L effet protecteur d Eucalyptus globulus réduit les effets toxiques induits par l acétaminophéne chez le rat mâle au niveau des paramètres hématologiques Sabah Dhibi 1, Sakhria Mbarki 1, Abdlfattah El Feki 1 & Najla Hfaiedh 1 Laboratoire d Ecophysiologie Animale, Faculté des sciences, 3018 Sfax, TUNISIA. Résumé L objectif de notre étude expérimentale est d explorer les variations de la formule sanguine, considérée comme un crible pour le dépistage des désordres hématologiques sous l effet de l acétaminophéne et d explorer l effet protecteur d Eucalyptus globulus chez le rat mâle pubère. Mots clés : acétaminophéne, Eucalyptus globulus, formule sanguine 1. Introduction Les intoxications médicamenteuses représentent une cause importante de mortalité et de morbidité dans le monde. Parmi les médicaments connus par leurs profils de toxicité surtout à des doses suprathérapeutiques, on cite l acétaminophéne. Ce médicament est la dénomination commune de la substance active de plusieurs spécialités pharmaceutiques de la classe des antalgiques-antipyrétiques. Il est indiqué dans la plupart des cas de fièvres et dans le soulagement des douleurs d intensité faible ou modérée [1]. Les objectifs de notre travail sont de détecter les variations de la formule sanguine sous l effet d une dose toxique du paracétamol, l évaluation quantitatives et qualitatives des cellules sanguines et la détermination des valeurs du taux d hémoglobine et du volume globulaire moyen chez le rat pubère. 2. Matériel et Méthodes * Traitement des animaux: Les rats ont été répartis en 4 groupes comme suit: Un groupe témoin (Te), recevant une alimentation normale constituée de granulés énergétiquement équilibrés (SICO, Sfax). Un groupe traité par l acétaminophéne par injection intra péritonéale durant 4 jours à raison de 300 mg/kg de PC [2]. Un groupe (PE) prétraité par l Eucalyptus globulus dissout dans l eau de boisson à raison de 20 g/100 ml [3] puis injecté par le paracétamol (300 mg/kg de PC). Un groupe (E) prétraité par l Eucalyptus globulus dissout dans l eau de boisson. * Dosage des paramètres hématologiques: Globules rouges ; Plaquettes ; Leucocytes ; Hémoglobine ; Volume globulaire moyen. Les éléments cellulaires sont mesurés à par la méthode sysmex onyx 3. Résultats 291

292 Tableau1 : Effets de l acétaminophéne et l Eucalyptus globulus sur la formule sanguine. Paramètres Te P E PE Plaquette (10 3/ mm 3) ± ± ± ±96.03 Erythrocytes (10 6 /µl) 7.96± ± ± ±0.63 Leucocyte (10 3 / µl) 8.65± ± ± ±0.23 Hémogolbin (g/dl) 13.7± ± ± ±0.4 VGM (fontolitre) 55.1± ± ± ±0.71 Références [1] Clement.Y.N & Williams.A.F., Protection against paracetamol-induced hepatic injury by prazosin pre-treatment in CD-1 mice. Mutation Research. 579 (2005): ). [2] Mladenovic.D, Radosavljevic.T, Ninkovic.M, Vucevic.D, Vukicevic.R.J, Zhong.V.T, Bo.L, Yeli.C, Youhong.H, Guolin.Z., Complexation of resveratrol with cyclodextrins: Solubility and antioxidant activity. Food Chemistry. 113 (2009): [3] Soussi.A, Hamden.K, Marouane.W, Bezzine.S, Damak.M, Murat.J, El Feki.A., Oral administration of Eucalyptus globulus extract reduces the alloxan-induced oxidative stress in rats. Chemico-Biological Interactions. 181 (2009):

293 P.188. Effect of Cd, Pb and Hg found in tuna by-product on antioxidants enzymes expression in hepatic rat cell line FTO2B Saber Abdelkader Saïdi 1-3, Mohamed Salah Azaza 2, Petra Windmolders 3, Jos van Pelt 3, & Abdelfattah El-Feki 1 1. Life Sciences Department, Science Faculty of Sfax, University of Sfax, BP 1171 Sfax 3000, TUNISIA. 2.National Institute of Marine Sciences and Technologies, 28, Rue 2 mars 1934, 20 Salammbô, (Gabes, Sfax, Tunis), Tunisia. 3. Department of Hepatology; University Hospitals Leuven, Leuven, Belgium. Abstract Heavy metals can accumulate in an organism through a variety of pathways, including respiration, adsorption and ingestion. Most heavy metals are highly toxic to both humans and animals and accumulate in the liver. The general mechanism by which they act is through induction of oxidative and/or nitrosative stress. The aim of this study was to assess the effect of three heavy metals found in tuna by-product (TBM): cadmium (Cd), lead (Pb) and mercury (Hg) separately or in combination with oxidative stress on antioxidant enzymes CAT and SOD. We used the rat liver FTO2B cell line. Following 72 hours exposure to these metals at various concentrations, gene expression was determined by RT-PCR. Our results showed that exposure to cadmium or lead resulted in an increased expression of the antioxidant gene superoxide dismutase mrna. In conclusion, careful consideration should be given when using tuna by-product in animal diet. Keywords: tuna by-product meal; heavy metal; oxidative stress. 1. Introduction Large quantities of chemical pollutants enter the aquatic environment each year. These pollutants include some heavy metals (lead, cadmium, mercury, zinc and copper) that are known to be potentially cytotoxic to biota and indirectly could present a health threat to the public [1]. Secondly, predatory fish like Tuna have increased concentrations of these metals in their system due to bioaccumulation from their diet along the aquatic food chain [2]. Detailed studies in the past two decades have shown various mechanisms by which metals induce their toxic effects such as: oxidative stress, interference with essential metals and enzymes, and interactions with cellular macromolecules [3; 4; 5] 2. Methodology The rat liver cell line FTO2B (ATCC nr CRL-1548) was cultured in DMEM (Dulbecco s Modified Eagle s Medium) supplemented with 10% fetal calf serum, 2 mm l-glutamine, penicillin, streptomycin, fungizone. FTO2B cells were cultured in the presence of the different heavy metals (Cd: 3.04 µg/g; Pb:2.05µg/g; Hg:0.07µg/g) with or without H 2 O 2. Each condition was performed in 4-fold and after 72 hours exposure the cells were harvested and the total RNA was extracted using Trizol reagent (Invitrogen). Briefly, cells/25cm² TC flasks were lysed using 1 ml Trizol reagent. Two hundred microlitres of chloroform was added to the tubes and centrifuged at 12,000 rpm for 25 mn at 4 C. The aqueous phase was transferred to another tube and was precipitated with 1 volume of 70% ethanol. The RNA was pelleted by centrifugation at 10,000 rpm for 1 min with Rnase-free water. The RNA was then stored at 80 C. The RNA content was measured in triplicate at 260 nm. The purity of RNA preparation was assessed by the 260/280 nm ratio. Total RNA (2.5 μg) was reverse transcripted to cdna using reverse transcriptase Revertaid M-Mulv. The expression of glyceraldehyde-3- phosphate dehydrogenase (GAPDH), SOD, and CAT mrna was determined by PCR using primers. Briefly, 5 μl of the cdna was added to a final volume of 50 μl PCR reaction mixture 293

294 containing dntp (1 μl), first round sense and antisense primers (25 μm each) and 1 unit of Taq DNA polymerase (Promega). Negative controls were performed in the absence of cdna. 3. Main Results Fig. Effect of Cd, Hg, Pb and co-stimulation with H 2 O 2 on SOD and CAT gene expression. The program UN-Scan-it V5.1 (Silk Scientific, Orem, Utah, USA) was used to record and convert pictures on pixel value. The ratio of CAT/GAPDH and SOD/GAPDH was calculated.*= p 0.05 vs control. The enzymatic antioxidant system that includes SOD and CAT is enhanced as an adaptation or a compensatory reaction to ROS formation or toxic effects [6]. The induction of such an enzymatic antioxidant system is receiving much attention as a biomarker that indicates oxidative stress. We detected mrna by PCR and we found a significant increase in SOD gene expression with Cd and Pb incubation from cells under normal conditions (P 0.05). Cotreatment of Cd and Hg with H 2 O 2 show increase in SOD gene expression (P 0.05). CAT mrna was not significantly changed in the different conditions tested. The increasing trend in SOD mrna expression by exposure to Cd and Pb suggests that ROS were induced in FTO2B cell lines, and that the antioxidant system was enhanced to remove the ROS. Also involved seems the active intermediate hydrogen peroxide because co-treatment with H 2 O 2 further increases the cytotoxicity effect of Cd, Pb and Hg in different cell lines. Thus, a serious notification to the use of TBM in animal diet which can lead food chain contamination. References [1]Tan F., Wang M., Wang W., & Lu Y., 2008, Comparative evaluation of the cytotoxicity sensitivity of six fish cell lines to four heavy metals in vitro. Toxicology in Vitro 22, [2]Besada V., Gozales J.J., & Schultz F., 2006, Mercury, cadmium, lead, arsenic, copper and zinc concentration in albacore, yellowfin tuna and bigeye tuna from the Atlantic Ocean. Ciencias Marinas 32, [3]Ercal N., & R Neal, P. Treeratphan, P.M. Lutz, T.C. Hammond, P.A. Dennery and D.R. Spitz, A role for oxidative stress in suppressing serum immunoglobulin levels in lead exposed Fisher 344 rats. Arch. Environ. Contam. Toxicol., 39, [4]Kitchin K.T., 2001, Recent advances in arsenic carcinogenesis: Modes of action, animal model systems, and methylated arsenic metabolites. Toxicol. Appl. Pharmacol. 172, [5]Valko M., Morris H., Cronin M.T.D., 2005, Metals, toxicity and oxidative stress. Curr. Med. Chem. 12, [6]Livingstone M.B.E., Prentice A.M., Strain J.J., Coward W.A., Black A.E., Barker M.E., McKenna P.G., Whitehead R.G., 1990, Accuracy of weighed dietary records in studies of diet and health. Br. Med. J. 300,

295 P.189. Evaluation et modélisation des impacts de l Entreprise Nationale des Produits ElectroChimiques Unité Affinage du Plomb ENPEC UAP - Sétif, Algérie. Boucetta Sabrine 1), Adjadj Nadjah radia 2), Adjel Nour el houda 2) 1) Département de Biologie marine, Université Badji-Mokhtar,Annaba, Algérie. 2) Département d écologie et Biologie végétale, Université Ferhat Abbas,Sétif,Algérie E.mail : sabrineboucetta@yahoo.fr Résumé En Algérie l étude d impact est aussi un instrument essentiel pour la réduction de la quantité de substances toxiques, consciente de l intérêt de cet outil, son volet réglementaire est omniprésent par : loi pour la protection de l environnement dans le cadre du développement durable, décret n déterminant le champ d application, le contenu et les modalités d approbation des études et des notices d impact sur l environnement, et le décret N définissant la réglementation applicable aux établissements classés. Le plomb est un métal lourd largement utilisé dans les activités métallurgiques dès l'antiquité et redécouvert au moment de la révolution Industrielle. Les intoxications massives aiguës et chroniques par le plomb ont été bien documentées en milieu professionnel. Le plomb est également un polluant environnemental, surtout dans les sols et l'atmosphère au voisinage de sites industriels (fonderies, usines de fabrication et/ou de recyclage de batteries. Le présent travail constitue une contribution à l étude d impact des effets du plomb et les différents déchets issus de l ENPEC UAP (Entreprise Nationale des Produits Electrochimiques Unité Affinage du Plomb,Sétif ; Algérie), qui a pour activité principale la récupération et le reconditionnement du plomb présent dans les batteries usagées avant son réemploi dans la fabrication de batteries neuves. Les résultats des dosages des metaux lourds eau et sédiment in situ l ENPEC UAP, l élaboration de la matrice des impacts, la pollution sonore nous a permis de réaliser la modélisation des impacts en utilisant le logiciel Simapro7.3.3 (version 2012) a permis d élaborer un diagnostic de son état environnemental. Mots clés : Biosurveillance, ETM, S.A.A ;logiciel Simapro7.3.3, ENPEC-UAP Sétif, Algérie. 295

296 P.190.Antioxidant and antiproliferative properties of a brown marine seaweed collected from a Tunisian island 1 Sabrine Sellimi, 2 Donia Mili, 1 Mohamed Hajji, & 1 Moncef Nasri 1 Laboratory of Enzymatic Engineering and Microbiology, National School of Engineers of Sfax, University of Sfax, BP 1171 Sfax /UR/09-09 Unit, Molecular Mechanisms and Pathology, Faculty of Medicine of Monastir, Monastir Abstract The present study investigates the antioxidant and antiproliferative properties of the methanolic extract (ME) of a brown marine seaweed. The antioxidant activities were evaluated using various antioxidant assays including 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radical-scavenging activity, ferric-reducing capacity, ferrous ion-chelating activity, hydroxyl radical-scavenging activity and β-carotene-bleaching ability. The ME revealed a high antioxidant activity. The antitumoral activity of the algal extract against tumoral pulmonary cell lines A 549 was examined. The ME exhibited significant in vitro cytotoxic activity. The IC 50 value (concentration that causes a 50% cell kill) of the ME was 40 µg/ml. Gas chromatography mass spectrometry (GC MS) analysis of the ME was performed and showed a dominance of fatty acids and sterols. Keywords: Brown seaweed, antioxidant, antiproliferative, GC-MS 1 Introduction In the last years, the interest on the study of seaweeds as sources of bioactive compounds has increased. Different seaweed extracts have received attention, due to their potent pharmacological effects, particularly antioxidant [1] and antitumoral activities [2], which suggest their possible uses as nutraceuticals and/or phytodrugs. In the Mediterranean Sea, seaweeds provide a large amount of biomass. However, they have not been deeply investigated. The aim of this study was to evaluate the antioxidant and anticarcinogenic properties of the methanolic extract of a brown marine seaweed collected from Kerkennah island (Sfax, Tunisia). The total phenolics, tannins and flavonoids contents, and GC/MS analysis of the methanolic were also performed. 2 Methodology Biological material and preparation of extracts Fresh algal samples were collected from Kerkennah island (Sfax, Tunisia). The raw material was washed with tap water, then with distilled water and dried at room temperature for at least 2 weeks. The dried samples were ground to obtain a fine powder and then stored in hermetic glass bottles at room temperature. The methanolic extract was obtained by macerating the dried seaweed in cold methanol (24 h, 200 rpm). The extract was filtered through Whatman No.1 filter paper in a Buchner funnel. The filtrate was centrifuged (10000 g, 15 min), then evaporated to dryness under reduced pressure. The dried extract was kept in the dark at -20 C until further analyses. Phytochemical analysis The total phenolic and flavonoid contents of the methanolic extract were determined according to Slinkard & Singleton (1977) [3] and Zhishen et al. (1999) [4], respectively. The tannins content was determined by Folin Ciocalteu procedure according to Cicco et al. (2009) [5], after removal of tannins by their adsorption on insoluble PVPP matrix [6]. Antioxidant activity The antioxidant activities of the methanolic seaweed extract were assessed using various tests: DPPH radical-scavenging activity [7], ferric-reducing activity [8], ß-Carotene-linoleic acid assay [9], hydroxyl radical-scavenging activity [10] and ion-chelating activity [11]. Antiproliferative activity The MTT assay was used to measure the ability of extracts to inhibit human cancer cell proliferation [12]. Gas chromatography-mass spectrometry analysis 296

297 The trimethylsilyl derivatives of the different compounds in the methanolic extract were identified using Gas chromatography mass spectrometry (GC MS) methodology. 3 Main Results Brown algae are known as a source of biologically active compounds, particularly antioxidants and anticarcinogenic agents. Therefore, the amounts of total phenols, flavonoids and tannins in the algal extract were determined (Tab. 1). The results showed that the methanol released an appreciable yield of extraction (7%). The ME showed a high content of phenolics (19,6±0,71 mg GAE/g dry extract) which are mainly composed of tannins (8,81±0,83 mg GAE/g dry extract). Table 1 : Yield and total phenolic, tannins and flavonoid contents of the algal methanolic extract Yield (%) TPC TTC TFC Methanolic 7,00±2,82 19,6±0,71 8,81±0,83 5,31±0,25 extract Values are expressed as mean ± standard deviation of three independent determinations; TPC: Total phenolic content (mg gallic acid equivalent/g dry extract) ; TTC: Total tannin content (mg gallic acid equivalent/g dry extract); TFC : Total flavonoid content (mg quercetine/g dry extract). The algal extract exerted important antioxidant capacities and anticarcinogenic effects against carcinogenic pulmonary cell lines A549 (Tab. 2). Gas chromatography mass spectrometry (GC-MS) analysis of the ME was performed and showed that besides phenolic compounds, other co-extracted active compounds such as fatty acids and sterols may also contribute to the overall antioxidant and antiproliferative effects of the seaweed extract. Table 2 : Antioxidant and antiproliferative activities of the algal methanolic extract (IC 50 : µg/ml) Activity DPPHscavenging ß Caroteneinhibition Hydroxylscavenging Ionchelating Antiproliferative Methanolic extract BHA EDTA Mannitol : not determined ; IC50: concentration that causes 50% of inhibition ; BHA: Butylhydroxyanisole used as reference ; EDTA : Ethylenediaminetetraacetic acid used as excellent chelator for ferrous ions ; Mannitol used as efficient hydroxyl radical scavenger Acknowledgements: This work was funded by the Ministry of Higher Education and Scientific Research-Tunisia. References [1] Yuan, Y.V., & Walsh N.A., 2006, Antioxidant and antiproliferative activities of extracts from a variety of edible seaweeds, Food Chem. Toxicol. 44, pp [2] Lee, E.J., & Sung, M.K., 2003, Chemoprevention of azoxymethane induced rat colon carcinogenesis by seatangle, a fiber-rich seaweed, Plant Food Hum Nutr. 58, pp [3] Slinkard K., & Singleton V.L., 1977, Total phenol analyses: automation and comparison with manual methods, Am. J. Enol. Vitic. 28, pp [4] Zhishen, J., Mengcheng, T., & Jianming, W., 1999, The determination of flavonoid contents in mulberry and their scavenging effects on superoxide radicals, Food Chem. 64, pp [5] Cicco, N., Lanorte, M., Paraggio, M., & Viggiano M., A reproducible, rapid and inexpensive Folin-Ciocalteu micro-method in determining phenolics of plant methanol extracts, Microchem. J. 91, pp [6] Malencic, D., Maksimovic, Z., Popovic, M., & Miladinovic, J., 2008, Polyphenol contents and antioxidant activity of soybean seed extracts, Bioresour. Technol. 99, pp [7] Kirby, A.J., & Schmidt, R.J., 1997, The antioxidant activity of Chinese herbs for eczema and of placebo herbs, J. Ethnopharmacol. 56, pp [8] Yildirim, A., Mavi, A., & Kara A.A., 2001, Determination of antioxidant and antimicrobial activities of Rumex crispus extracts, J. Agric. Food. Chem. 49, pp [9] Koleva, I.I., Van Beek, T.A., Linssen, J. P. H., De Groot, A., & Evstatieva, L. N., 2002, Screening of plant extracts for antioxidant activity: A comparative study on three testing methods, Phytochem. Anal. 13, pp [10] Halliwell, B., Gutteridge, J. M. C., & Aruoma, O.I., 1987, The deoxyribose method: A simple test-tube assay for determination of rate constants for reactions of hydroxyl radicals, Anal. Biochem. 165, pp

298 P.191. Etude comparative du comportement des différentes huiles et graisses végétales raffinées vis-à-vis à la friture 1 Safouane Ben Sik Ali, 1 Jamel Mejri & Mouna Mhadhbi 2 1 Département Génie des Procédés, Institut Supérieur des Etudes Technologiques (ISET) de Bizerte, campus universitaire Menzel Abderrahmen 7035, Bizerte, TUNISIA. 2 Institut Supérieure des Sciences Biologiques Appliquées de Tunis Résumé Les comportements des huiles et des graisses végétales ont été comparés lors du procédé de la friture vis-à-vis de quelques propriétés physicochimiques. Nous avons suivi quelques paramètres physicochimiques de contrôle et d évaluation, à savoir le dosage de l acidité et de l indice de peroxyde et l évaluation de la couleur. Les résultats obtenus ont indiqué une prédilection pour l huile de Maïs dans la catégorie des huiles de graines et le Coprah dans la catégorie des graisses en se limitant à trois bains de friture. Nous avons pu recommander à la ménagère et aux restaurateurs l utilisation de l huile de Maïs pour la friture et de ne pas frire avec l huile de soja plus qu une fois. Mots clés: Huiles végétales, graisses végétales, raffinées, friture. 1. Introduction Les huiles sont des matières grasses qui jouent des rôles importants dans notre alimentation. Leurs qualités déterminent celles des préparations dans lesquelles elles interviennent. Leur nature ainsi que leur fraîcheur sont déterminantes dans la réussite des plats. Des graisses altérées peuvent gâcher un repas. Par ailleurs, un chauffage excessif lors de la friture ou encore un usage trop prolongé de la même matière grasse peut être à l'origine de produits toxiques. L objectif de notre projet, est de comparer le comportement de différentes matières grasses lors du procédé de la friture vis-à-vis de quelques propriétés physicochimiques. 2. Matériels et méthodes Les matières premières utilisées sont des huiles de graines et des graisses végétales produites par une raffinerie Tunisienne qui sont fraîchement conditionnées ou raffinées. Le dosage de l acidité et de l indice de peroxyde et l évaluation de la couleur ont été réalisés selon des méthodes normalisées. Une analyse de la composition des lipides en acides gras avant et après les bains de friture a été effectuée par Chromatographie en phase gazeuse. La friture a été réalisée selon un protocole expérimental qui simule celui qui s applique par la ménagère. 3. Résultats Les résultats obtenus ont indiqué une prédilection pour l huile de Maïs dans la catégorie des huiles de graines et le Coprah dans la catégorie des graisses en se limitant à trois bains de friture. 298

299 I P en méq d'o2/kg 19, 20, 21 et 22 décembre 2012 Hôtel EL Mouradi Douz - Tunisie En effet, nous pouvons recommander à la ménagère et aux restaurateurs l utilisation de l huile de Maïs pour la friture surtout qu elle est de plus en plus disponible dans le marché Tunisien. Egalement, nous recommandons de ne pas frire avec l huile de soja plus qu une fois. Le cas idéale c est, la substituée par l huile de Maïs ou l huile de Tournesol dans les bains de friture, surtout dans le cas des professionnels dont ils utilisent leurs huiles de friture durant un nombre excessif de bains. La figure 1 consiste à suivre l altération oxydative des matières grasses utilisées en déterminant leurs indices de peroxyde Huile de Maïs Huile de tournesol Huile de soja Huile de palme raffinée Avant friture Après 1friture Après 2 Après 3 fritures fritures Figure 1: Evolution de l'indice de peroxyde en fonction de nombre de fritures Huile de palme hydrogéné coprah coprah hydrogéné L allure des différentes courbes des huiles et graisses utilisées montre l augmentation continue de l indice de peroxyde en fonction du nombre de bains de friture à l exception de l huile de Palme qui a présenté une diminution de son indice de peroxyde lors de la 3 ème friture. Ce graphique montre que la famille des huiles de graines présente des cinétiques d oxydation rapides en augmentation continue même après la 3 ème friture ce qui n est pas le cas pour la famille des graisses, ceci est dû à la teneur élevée en acides gras polyinsaturés qui sont les molécules les plus concernées par l oxydation 299

300 P.192. Effects of Sardine oil administration on the variation of some renal plasmatic parameters and histological properties of the kidney of diabetic rats 1 Sahla Bel hadj, 2 Olfa Hentati, 2 Khaled Hamdène & 1 Abdelfattah El Feki 1 Laboratory of Animal Ecophysiology, Faculty of Sciences of Sfax, University of Sfax, 2 High Institute of Biotechnology of Sfax (ISBS), University of Sfax, Abstract In the present study aimed to evaluate the action of administration of sardine oil on renal function in diabetic rats. Results of this study showed a significant increase of plasma creatinine, urea and uric acid in the diabetic rats as compared to control group (by 44, 45 and 17% respectively). However, the administration of Sardine oil and acarbose to surviving diabetic rats significantly decreased the rate of plasma urea by 38.25% and 33.94%, respectively. The same treatments significantly restored the concentration of uric acid. In addition, a significant reduction of the creatinine level in diabetic rats after administration of Sardine oil and acarbose was observed. Above all, the protective action of kidney structure was approved by the histological study in treated batches of diabetic rats by Sardine oil and acarbose. Keywords: diabetes, sardine oil, renal parameters. 1. Introduction Diabetes mellitus is a metabolic disorder that continues to pose a major health problem worldwide. It is characterized by chronic hyperglycemia and disorders of the carbohydrates, lipids and proteins metabolisms related to either secretion or action deficiency of insulin, or both [1]. Despite appropriate therapeutic measures, the disease can lead to several complications including retinopathy and nephropathy [2]. Therefore, many studies have been conducted to find natural products to inhibit these enzymes and that do not show side effects [3]. Sardine oil has been identified as an underexplored functional food. That s why in this work we are interested to study the anti-diabetic activity of Sardine oil on induced diabetic rats by Alloxan. The effects of sardine oil administration on renal parameters in diabetic rats, were recorded, as well as histological modifications of the kidney were checked. 2 Methodology The great part of Sardine oil was extracted by the wet pressing method [4]. Diabetes was induced in Wistar rats (initial body weight 180 g) by intraperitoneal injection of a freshly prepared solution of Alloxan monohydrate at 120 mg/kg body weight [6]. After 2 weeks, the rats having a glycemia greater than 1.2 g/l were selected for the experiments. Rats were divided into four groups with 8 animals per group: Control group (C): rats who received standard diet and drinking tap water Diabetic group (D): induced diabetic rats by Alloxan Acarbose group (D+G): diabetic rats receiving acarbose, antidiabetic medication Sardine oil group (D+O): diabetic rats receiving Sardine oil. After 21 days of treatment, blood samples of sacrificed rats were analyzed for renal functional exploration. The results are confirmed by histological examination of the kidneys. 3 Main Results The biochemical assays showed that the plasmatic urea (Figure 1A) uric acid (Figure 1B) and creatinine (Figure 1C) rates were significantly (p=0.0004, p= and p=0.0001, respectively) 300

301 C D D+A D+O plasma urea Plasma uric Plasma T D+G 19, 20, 21 et 22 décembre 2012 Hôtel EL Mouradi Douz - Tunisie increased in the Diabetic group (D) compared to the Control group (C) (44.89%, 45.28% and 17.13% respectively) **#*# *# A 7 *# *# 100 * # # B 50 C C D+A 0 groups Groups Groups Figure1: Effect of administration of Sardine oil on renal function in diabetic rats *: significant variation compared to control rats #: significant variation compared to diabetic rats (p < 0.001) C: Control; D: Diabetes; D+A: Diabetes+Acarbose; D+O: Diabtes+Sardine Oil The administration of Sardine oil and Acarbose significantly decreased the rate of blood urea with an inhibition of 38.25% and 33.94% (Figure 1A), respectively. This suggests that these substances prevent the renal dysfunction and act on protein catabolism. A significant decrease of uric acid concentration (Figure 1B) was reached with these substances (p= and p=0.001, respectively). A significant and positive action of Sardine oil and Acarbose was observed on creatinine level (figure 1C). In batches of Diabetics treated with Sardine oil (D+O) and with Acarbose (D+A), we note that the biochemical parameters have undergone a regulation with no significant difference between the two lots. To confirm the biochemical results the structural integrity of the kidney tissues was checked by histological study of the renal cortex. The control rat batch showed the presence of uniform glomeruli (Figure 2A) with a uniform membrane well defined. The architecture of the renal cortex of diabetic rats was severely impaired where most of the glomeruli are damaged with an accumulation of lipids (Figure 2B). In the treated groups with Acarbose (Figure 2C) and Sardine Oil (Figure 2D), the glomeruli appear larger and rounded. The architecture of kidney cortex of treated rats with Acarbose and Sardine Oil remains intact as observed in Control lot. This suggests that the Sardine oil may have a protective action against the damage of kidney tissues in diabetic rats. Figure 2: Histology of kidney tissue (hematoxylin and eosin staining) of Control rats (A), diabetics (B), diabetics treated with Acarbose (C) and diabetics treated with Sardine oil (D). With GN: normal glomerulus, Gn: atrophied glomerulus and GD: Dilated Glomerulus Acknowledgements: My sincere thanks are directed to my supervisor "Dr Khaled Hamden" and my co-supervisor "Dr Olfa Hentati" lecturers at the High Institute of Biotechnology of Sfax, for their confidence in me. References [1] Grimaldi A., 2009, Traité de diabétologie, 2 ème édition, Ed. Médecine. Sciences, Flammarion. [2] Krentz A.J., Clough G., & Byren C.D., 2007, Interaction between microvascular and macrovascular disease in diabetes: pathophysiology and therapeutic implications. Diabetes Obes. Metab. 9, pp [3] Kim K.Y., Nam K.A., Kirihara H., & Kim S.M., 2008, Potent α-glucosidase inhibitors purified from the red alga Grateloupia elliptica. Phytochemistry, 69, pp [4] FAO, 1986,Tthe production of fish meal and oil - FAO fisheries technical paper ISBN Chapitre The Principal Method of Processing. [5] Hamden K., Jaouadi B., Carreau S., Aouidet A., El-Fazaa S., Gharbi N., & El Feki A., 2010a, Potential protective effect on key steroidogenesis and metabolic enzymes and sperm abnormalities by fenugreek steroids in testis and epididymis of surviving diabetic rats. Arch Physiol Biochem. 116(3), pp

302 P.193. L effet préventif du Chlorure de magnésium contre le stress oxydatif induit par le tétrachlorure de carbone sur la fonction hépatique 1 Sakhria Mbarki, 1 Sabah Dhibi, 1 Abdlfattah El Feki & 1 Najla Hfeidh 1 Laboratoire d Ecophysiologie Animale, Faculté des sciences, 3018 Sfax, TUNISIA. Résumé Dans cet article nous discutons l impact qu induisent les conditions expérimentales relatives au CCl 4 sur les variations: de poids corporel ; de poids relatif du foie ; de l hypoglycémie ; de taux de cholestérol total ; de taux de triglycérides ; de taux de bilirubine directe. Cette étude a permis d une part de constater que le CCl 4 induit des augmentations significatives : du taux des transaminases (ASAT, ALAT) sériques ; de l activité de la phosphatase alcaline (ALP) et du lactate déshydrogénase (LDH). D une autre part, nous avons mis en évidence l effet du CCl 4 sur l augmentation systématique du taux de peroxydation des lipides en même temps que la diminution des activités des enzymes anti-oxydantes (Catalase, Superoxyde dismutase et Glutathion peroxydase). Toutefois cette étude nous a éclairés sur l importance du traitement par le chlorure de magnésium dans la protection du foie contre les nuisances délétères du CCl 4. Keywords: Magnésium; Tétrachlorure de carbone; Stress oxydant; Foie. 1. Introduction En concentrations raisonnables, les radicaux libres qui sont produits par divers mécanismes physiologiques, présentent des avantages majeurs pour l organisme. Au contraire, lorsque leurs concentrations dépassent des seuils bien définis, il en résulte un stress oxydant. Notamment, les composés halogénés (tels que le tétrachlorure de carbone (CCl 4 )) constituent une classe de radicaux libres qui contribuent à l augmentation du stress oxydant. Bon nombre d études ont montré que ce composé provoque une peroxydation lipidique qui serait à l origine de la production de radicaux hydroxyles [1,2]. Notons que le tétrachlorure de carbone est un composé volatile et liposoluble d origine essentiellement anthropique. Inhalé, ce solvant diffuse de manière préférentielle dans les tissus adipeux. On le retrouve en concentrations abondantes notamment dans des organes vitaux tels que: la moelle osseuse ; le sang ; le cerveau ; le foie et les reins [3]. Pour contrecarrer les nuisances délétères dues au stress oxydant induit par les xénobiotiques, nous avons analysé dans cette étude l apport des antioxydants naturels. L objectif de cette étude expérimentale réalisé sur des rats mâles de souche «Wistar», est de mesurer et quantifier les effets oxydatifs et hépatotoxiques du CCl 4 afin de mettre en évidence les effets protecteurs du chlorure de magnésium. 2. Matériel et Méthodes -Traitement des animaux: Les rats ont été répartis en trois groupes comme suit: * Lot 1 (Te) : Des rats témoins. * Lot 2 (CCl 4 ) : Des rats traités par une dose de 5 ml/kg de tétrachlorure de carbone. 302

303 * Lot 3 (CCl 4 +Mg): Des rats traités par 200 mg/kg de chlorure de magnésium puis traités par le tétrachlorure de carbone (5 ml/kg). -Dosages biochimiques: * Le glucose, le cholestérol, les triglycérides, la bilirubine directe, l AST, l ALT, l ALP et le LDH sont mesurés selon les coffrets SPINREACT. * Le TBARS est mesuré par la méthode de Yagi, 1976 [4]. * Le catalase (CAT) est mesuré par la méthode d Aebi, 1984 [5]. * Le Superoxyde dismutase (SOD) est mesuré par la méthode de Beauchamp et Fridovich, 1971 [6]. * La glutathion peroxydase (GPx) est mesurée par la méthode de Flock et Gunzler, 1984 [7]. 3. Résultats Table 1: Effets du chlorure de magnésium sur le poids corporel et le poids relatif du foie. Paramètres Te CCl 4 CCl 4 +Mg Poids corporel (g/rat) ± ± ± Foie (%) 5.410± ± ±0.233 Table 2: Effets du chlorure de magnésium sur les paramètres biochimiques hépatiques. Paramètres Te CCl 4 CCl 4 +Mg Glucose, mmol/l 7.5± ± ±0.32 Cholestérol, mmol/l 1.25± ± ±0.14 Triglycérides, mmol/l 1.04± ± ±0.11 B. directe, µmol/l 1.25±0.16 3± ±0.29 ALP, U/l 510± ± ±65.2 AST, U/I ± ± ±10.25 ALT, U/I ± ± ±8.18 LDH, U/I ± ± ± Table 3: Effets du chlorure de magnésium sur le statut oxydant. Paramètres Te CCl 4 CCl 4 +Mg TBARS 0.65± ± ±0.12 GPx 2.86± ± ±0.14 CAT 7.27± ± ±0.65 SOD 3.15± ± ±0.65 Références [1] Liu J.Y., Chen C.C., Wen H.W., Jeng D.H., Mon Y.Y., & Chau J.W., 2006, The protective effect of Hibiscus sabdariffa extract on CCl 4 -induced liver fibrosis in rats. Food Chem. Toxicol. 44, pp [2] Jayakumara T., Sakthivel M., Thomas P.A., & Geraldine P., 2008, Pleurotus ostreatus, an oyster mushroom, decreases the oxidative stress induced by carbon tetrachloride in rat kidneys, heart and brain. Chem-Bio Interac. 176, pp [3] Clayton G.D., & Clayton F.E., 1981, Patty s industrial hygiene and toxicology, 3th ed.,vol. 28. New York: Wil Intersci. pp [4] Yagi K., 1976, A simple fluorometric assay for lipoperoxide in blood plasma. Biochem. Med. 15, pp [5] Aebi, H. 1984, Catalase in vitro. Methods Enzymol.(Bergneyer H.U.). 105, pp [6] Beauchamp C., & Fridovich I., 1971, Superoxyde dismutase: improved assays and an assay applicable to acrylamide gel. Anal. Biochem. 44, pp [7] Flock L., & Gunzler W.A., 1984, Assays of glutathione peroxydase. Methods Enzymol. 105, pp

304 P.194. Etude des impacts biologiques et physico-chimiques d un biomatériau apatitique sur la maturation de l os chez le rat male de souche «wistar» 1 Salha Boulila, 1 Mallek Kawthar, 1 Abdlfattah El Feki & 2 Hafedh El Feki 1 Department des sciences de la vie, Faculté des science de sfax,université de sfax, BP 1171 Sfax 3000, TUNISIE Abstract La recherche sur les biomatériaux de l appareil locomoteur doit réunir et mettre en évidence un ensemble de compétences thérapeutiques permettant de palier plusieurs problèmes sanitaires. Pour mettre l accent sur le suivi des implants orthopédiques nous nous proposons de tester et étudier les effets et les conséquences d un implant d hydroxyapatite (HA) comme modèle d un biomatériau synthétique à base d apatite chez les rats mâles blancs pubères. Cette étude nous montre comme résultat que l HA et les résines de scellements implantés n induisent pas un état de stress chez les différents lots de rats implantés, ceci est déduit à partir des taux normaux des métallothionéines hépatiques et des taux de MDA hépatiques et rénales. Nous avons poursuivi notre étude par une caractérisation physico-chimique : l analyse par diffraction des rayons X et la spectroscopie IR, ceci nous a amené à déterminer l environnement existant dans l os suite à l échange mutuel effectué entre ce dernier et l implant. Mots clés : Biomatériau, implant orthopédique, stress, physico-chimique. 1. Introduction : Le terme biomatériau désigne les matériaux fabriqués par l homme qui sont utilisés pour réaliser des prothèses ou autres dispositifs médicaux implantables dans le corps humain. Il existe de nombreuses définitions de ces matériaux, retenons celle qui a été proposée lors du Congrès de la société européenne des biomatériaux en 1986 à Chester [1]: «Biomatériaux : matériaux non vivants, utilisés dans un dispositif médical, et conçus à interagir avec les systèmes biologiques». Malgré l évolution rapide de ce champ d étude depuis un siècle, la définition des biomatériaux, établie en 1986 est encore vraie aujourd hui. Il est actuellement avancé que ces biomatériaux en particulier les biomatériaux synthétiques, sont de véritable matériaux résorbables vue la composition chimique comparable à celle de l os, de plus ces matériaux ont l aptitude, en fait, d être intégrés définitivement grâce à l ostéosynthèse et aux procédés biomimétiques [2]. Notre étude est basée sur les effets physiologiques (stress oxydant) d un implant orthopédique (H A) ainsi que la caractérisation physico-chimique à travers des analyses spectrales (diffraction des rayons X et infrarouge) de ce céramique qui est implanté chez des rats mâles blancs. 2.Methodologie : Nos rats implantés et témoins qui pèsent 100 g sont des mâles blancs de souche «Wistar» provenant de la pharmacie centrale de Tunisie. Ces animaux sont repartis en 5 groupes selon l implant et la nature de son collage sur l os (le péroné gauche) qui est suit par un caillot de sang du même animal suit par une résine de collage commercialisée. Ces cinq groupes sont donc: *1 er groupe : Témoins positifs (T + ) ou (S) (implanté : coagulum sanguin). *2 éme groupe : S + HA (implanté : coagulum + hydroxyapatite ) *3 éme groupe : R (implanté : résine : mélange d amigel et de métagel) *4 éme groupe : R + HA (implanté : résine + hydroxyapatite) *5 éme groupe : Témoin négatif (T - ) (sans implant) 304

305 Les animaux sacrifiés ont été ouverts ventralement pour prélever d une part certains organes tels que le foie et les reins pour les dosages de Metallothioneines [3] et des produits de LPO (M D A) [4], d autre part, des os implantés pour des analyses spectrales (diffraction des rayons X et Infrarouge). 3.Résulats Nos résultats ont montré que notre biomatériau n induit pas un déséquilibre de la balance oxydative ceci a été monté par la concentration stable des LPO hépatiques et rénaux et le taux constant des Metallothioneines hépatiques ce qui témoigne de la non toxicité de notre biomatériau ainsi que sa pureté de point de vue chimique des rats témoins et implantés. De plus, les produits de scellement n induisent ni modification du taux de LPO qui est voisin de celui des rats témoins ni augmentation du taux des Metallothioneines ce qui témoigne de l absence d un état de stress. Figure 1 : Variation de la concentration des LPO hépatiques et rénale chez les rats témoins et implanté. Figure 2 : Variation de concentration des métallothinéines chez les rats témoins et implantés En plus, Les résultats obtenus par différentes méthodes telles que la diffraction du rayon X et La spectroscopie IR montrent que l implantation de l HA fait appel à un mécanisme d échange ionique mutuel entre l implant et l os, ce qui témoigne l intégration de ces biomatériaux chez tous les rats implantés. Réferences [1] Gao L.,Hong S., Miyamoto S.,2000,"Journal of the European ceramic society", [2] Passuti N., 2001, Fixation des prothèses de hanches sans ciment [3] Viarengo, A., Ponzano, E., Dondero, F., Fabbari, R A simple spectrophotometric method for mettalthionein evaluation in marine organisms: an application to Mediterranean and Antartic mollusks. Mar. Envir. Res. 44: [4] Buege, J.A., Auct, S.D.,1978, Microsomal lipid peroxidation. Methods. Enzymol. 52:

306 P. 195.Syndrome métabolique et interactions de quelques paramètres biochimiques chez le sujet obèse et le patient diabétique type 2 Taleb Salima, Boulaba Kafila Faculté des sciences exacte et sciences de la nature et de la vie, Département des sciences de la nature et de la vie Université de Tébessa Algérie Résumé Le syndrome métabolique est incriminé dans diverses pathologies humaines dont l obésité androïde et le diabète de type 2 sont les plus évocateurs. Notre objectif est de rechercher des interactions entre obésité, diabète type 2 et quelques déterminants du syndrome métabolique. La présente étude a été menée sur une cohorte à Tébessa composée de 200 sujets. Les paramètres anthropométriques et métaboliques été déterminés par biométrie et spectrophotométrie. L analyse des données a mis en évidence une corrélation positive entre les TCA et le syndrome métabolique. L obésité abdominale, était retrouvée chez,84 % des personnes enquêtées avec un tour de taille moyen de 110,81cm±13,87 chez les femmes et de 117, 3 cm±9,49 chez les hommes. La prévalence des différents critères étudiés était plus élevée chez les diabétiques. Il est donc impératif de dépister et de prendre en charge précocement et efficacement l ensemble des critères constitutifs du syndromemétaboliques à tout âge afin de prévenir les complications cardiovasculaires Mots clés: Syndrome métabolique, Obésité, Diabète type 2, Paramèters biochimiques 1. Introduction Ces vingt dernières années, le syndrome métabolique a été incriminé dans diverses pathologies humaines dont l obésité androïde et le diabète de type 2 sont les plus évocateurs. Dans l obésité, l accroissement du poids corporel est fréquemment associé à une surconsommation alimentaire hypercalorique et une sédentarité. En Algérie, on constate de plus en plus de déviations dans les mœurs alimentaires, passant du type méditerranéen au type fast-food américain [1 koceir]. Le but de ce travail et de rechercher des interactions entre obésité, diabète type 2 et quelques déterminants du syndrome métabolique. 2. Methodology la présente étude a été menée sur une cohorte à Tébessa composée de 48 sujets obèses, 103 patients diabétiques de type 2 et 49 sujets témoins ( Ce groupe est compose de normaux et surpondéraux). Les troubles du comportement alimentaire (TCA) ont été évalués par des questions ouvertes sur quelques habitudes alimentaires. Les paramètres anthropométriques (tour de taille, IMC), métaboliques (glucose, triglycérides, HDL-C et LDL-C) et biochimiques (créatinine, acide urique) ont été déterminés par biométrie et spectrophotométrierespectivement. 3. Principaux résultats 3.1: Profil anthropométrique et métabolique 3.1.1: Variation des paramèters anthropométriques L obésité abdominal est présente chez tous les sujets enquêtés. Toutefois la moyenne du tour de taille est significativement plus élevée chez les obèses (Table 1) 306

307 Table 1: Les variations des paramètres du statut anthropométrique chez les diabétiques les obèses et les normaux. Paramètres Témoins (Normaux et surpondéraux) Diabétique obèses P Hommes Femmes hommes femmes Hommes Femmes Poids (kg) 75,4±14,3 69,49±9,15 84,67±16,38 79,84±18,65 117,83±20,01 93,00±12,45 <0,0001 IMC (kg/m 2 ) 25,46±2,84 25,30±2,74 28,394±4,222 29,756±6,443 36,69±4,29 35,40±3,91 <0,0001 Tour de taille (cm) 101,41±12,19 97,51±10,54 107,37±10,50 109,40±17,58 130,33 ±9,31 115,62±10,88 <0, : variation des paramèters métaboliques Les diabètiques sont plus touchés par les troubles métaboliques. Table2: Paramètres de l exploration du bilan biochimique en fonction des traitements antidiabétiques chez le patient diabétique type 2 versus l obèses le sujet en surpoids et le sujet normal Paramètres Normaux surpondéraux Obèses Met Met-Sul Ins Ins-Met Sul Glycémie 4,44± 0,62 5,10±0,65 5,42±1,52 8,09±2,35 7,58±2,11 9,03±3,83 9,78±4,29 9,64± 5,33 (mmol/l) Triglycérides 0,94±0,49 1,17±0,40 1,29±0,50 1,53±0,57 1,29±0,46 1,53±0,79 1,73±0,62 1,32±0,53 (mmol/l) Cholestérol 3,92±0,86 4,38±0,90 4,99±1,14 5,40±1,30 4,83±1,32 5,01±1,49 5,55±1,13 5,01±1,04 total (mmol/l) Cholestérol 1,80±0,36 1,80±0,39 1,91±0,50 1,88±0,61 1,55±0,36 1,72±0,54 2±0,65 1,37±0,26 HDL (mmol/l) Cholestérol 1,69±0,70 2,04±0,72 2,50±0,90 2,82±1,00 2,69±1,41 2,61±1,15 2,77±0,92 3,04±0,98 LDL (mmol/l) Créatinémie (mg/l) 9,10±2,04 9,11±2,06 9,99±2,42 11,15±2,42 11,33±4,39 10,89±2,81 10,62±3,21 10,39±3,23 Acide urique ( 41,71±10,24 46,00±13,76 42,10±9,69 40,02±13,06 42,14±18,52 43,53±14,92 38,75±15,82 43,03±15,71 mg/l Met : metformine ; Sul : sulfamides ; Ins : insuline. Les valeurs moyennes sont affectées de l erreur standard à la moyenne (X±ESM). Le degré de significativité est calculé pour un risque d erreur α = 5 % Divers travaux ont souligné l importance du tour de taille comme facteur de risque prédictif dans les affections cardiovasculaires,en particulier l insuffisance coronaire [2]. Conclusion. La prévalence du syndrome métabolique chez les adultes varie de 10 à 30 % dans les pays industrialisés. Elle est en progression constante en particulier chez la femme. Il est donc impératif de dépister et de prendre en charge précocement et efficacement l ensemble des critères constitutifs du syndrome métaboliques à tout âge afin de prévenir les complications cardiovasculaires. Remerciéments: Les auteurs de ce travail, remercient tous les sujets qui ont participé à cette étude. Références [1] Koceïr E.A., 1 Benbaïbeche H.,. Haffaf El M., Kacimi G., Oudjit B. Syndrome métabolique et interaction hormonale chez le sujet obèse et le patient diabétique de type 2 algérien Impact des troubles du comportement alimentaire. Ann Biol Clin 2009 ; 67 (3) : [2] Bernard A, Moulin D. Le syndrome obésité insulinorésistance : attitude diagnostique et thérapeutique. Concours Med 1999 ; 121 :

308 P.196. Production of Interesting Peptides Fractions by Enzymatic Hydrolysis of Tuna Dark Muscle By-product Using Alcalase 1,2 Sami Saidi, 2 Marie-Pierre Belleville, 2 André Deratani and 1 Raja Ben Amar 1 Laboratoire des Sciences de Matériaux et d Environnement, Faculté des Sciences de SFAX, Route de la Soukra Km 3,5, BP 1171, SFAX 3000, TUNISIA 2 IEM (Institut Européen des Membranes), UMR 5635 (CNRS-ENSCM-UM2), Université de Montpellier 2, Place E. Bataillon, F , Montpellier, France Abstract A protein hydrolysate was prepared from waste proteins of dark muscle of tuna. The hydrolysis conditions (time, temperature, ph and enzyme concentration) using Alcalase under optimal conditions (temperature 55 C, time 60 min, 1% enzyme concentration and ph 8.5) show that the hydrolysate produced has a height rate of the peptide fraction of molecular weight of 4-1 kda. The amino acid composition of the protein hydrolysate prepared proved to have the potential for application as an ingredient in balanced fish diets and as source of nitrogen in microbial growth media. Keywords: Alcalase; Tuna dark muscle; Protein hydrolysate; Peptides fractions; Amino Acide. 1 Introduction Each year, more than 132 million tons of fish are caught of which 29.5% are processed into fish meal [1]. Nearly more than 50% of remaining fish tissue are discarded without an attempt at recovery [2]. Recognizing the limited biological resources and increasing environmental pollution, there is a great need for better management and utilization of by-products of the fish industry. Enzymatic hydrolysis is an alternative approach to the biomass recovery of marine origin and produce fish protein hydrolysate (FPH) enriched in peptides and amino acids [3]. The objectives of this study are to optimize the hydrolysis reaction conditions in order to product a fish protein hydrolysate enriched in peptidic fraction of molecular weight of 1-4 KDa of hydrolysis of proteins from tuna by-product using a commercial alkaline protease and to evaluate the protein hydrolysate for its amino acid composition and molecular weight distribution of the obtained population of peptides. 2 Methodology The tuna dark muscle by-product was supplied by TUNA EL SULTON Foods Industry Ltd. (Sfax, Tunisia). The Protein hydrolysate was prepared by hydrolysis using Alcalase (PROLYVE 1000, provided by Lyven France). The molecular weight distribution of native hydrolysate fractions was obtained by size exclusion chromatography according to Guérard et al. [4]. The Amino acid composition of hydrolysate was determined using a Biochrom amino acid analyzer and the detection was realized at 570 nm and 440 nm. The chemical score of the protein hydrolysates was calculated using the following relation. Chemical score = EAA in test protein (g.100g-1)/eaa in standard protein (g.100g-1) 3 Results The study of the effect of time and enzyme concentration on the variation of the rate of interesting fraction during the hydrolysis reaction was shown that the rate of peptide fractions (4-1 kda) decreases with the increase of the enzyme concentration. The rate of peptide fractions was higher at the first hour of hydrolysis and then became constant. The variation of protein concentration shows that the rate of protein increased with increasing time during the 308

309 Protein concentration(mg/ml) Rate of fractions 4-1 Kda (%) 19, 20, 21 et 22 décembre 2012 Hôtel EL Mouradi Douz - Tunisie first 60 min. Thus, the best rate of interesting peptide fractions and protein concentration was obtained at 1% of enzyme concentration and at 60 min of duration of hydrolysis reaction A Time(min) B Time (min) Fig.1 Variation of the percentage of peptide fractions 4-1Kda (A) and the soluble protein concentration (B) in the hydrolysate with time and at different enzyme/substrate ratios; ( ) E/S = 4.5%; ( ) E/S = 3% ; ( ) E/S = 1.5%; ( ) E/S = 1%; ( ) E/S = 0.75%). The chemical scores were calculated show that despite low levels of certain essential amino acids, the protein hydrolysates of tuna by-products do not lose its nutritional value and therefore, this product can be considered as an ingredient in balanced fish feed can be for example used as nitrogen source in microbial growth media. Table 1:. Amino acid composition of the fish protein hydrolysate and its chemical score in comparison with FAO/WHO and NRC reference protein. Amino acid Quantity (g/100g) Chemical score TPH RP-1 a RP-2 b RP-1 RP-2 Threonine* Valine* Methionine* Isoleucine* Leucine* Tyrosine Phenylalanine* Histidine* Tryptophan Lysine* Arginine TPH: Tuna protein hydrolysate; RP-1: Chemical scores calculated with FAO/WHO reference protein as the base; RP-2: Chemical scores calculated with amino acid requirements as per NRC (1993); a Essential amino acids of reference protein according to FAO/WHO; b Essential amino acid requirements of common carp according to NRC (1993); Essential Amino Acids (EAA) 4. Conclusion Tuna protein hydrolysate produced, under optimum conditions (temperature of 55 C, ph of 8.5, enzyme concentration 1%, time of 60 min) using Alcalase, has a high proportion of peptides having various molecular weights from 7000 Da to free amino acids. The concentration of available hydrolysable bonds was the factor controlling the hydrolysis rate while the time of hydrolysis was the main factor controlling the molecular weight of peptide fractions and the characteristic of the fish protein hydrolysate. The hydrolysate prepared from tuna dark muscle has potential for applications in aquaculture diets and as source of nitrogen in microbial growth media. References [1] FAO, Year Book of Fishery Statistics., Rome, [2] Kristinsson, H.G., Rasco, B.A. Fish protein hydrolysates: production, biochemical, and functional properties, Critical Reviews in Food Science and Nutrition, 40 (2000) [3] Espe, M., Raa, J., Njaa, L.R., Nutritional value of stored fish silage as a protein source for young rats, Journal of the Science of Food and Agriculture, 49 (1989) [4] Guérard, F., Dufossé, L., De La Broise, D., Binet, A., Enzymatic hydrolysis of proteins from yellowfin tuna (Thunnus albacares) wastes using Alcalase, Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic, 11 (2001)

310 P.197. Etude préliminaire de la physiologie de germination du févier d Amérique (Gleditsia triacanthos L.) et perspectives de valorisation en Algérie 1 Melle Benhamiche Samia, 1 Melle Chabane Kheira, 1 Mr. Benhassaini Hachemi 1 Laboratoire de biodiversité végétale : conservation et valorisation, Université Djilali Liabes ; Faculté des sciences ; Sidi Bel Abbes ; Algérie Résumé Le févier d Amérique (Gleditsia triacanthos L.) est une légumineuse introduite qui s adapte parfaitement aux conditions écologiques de notre pays. Cette légumineuse pousse naturellement au nord américain et en Asie, elle est généralement utilisée comme arbre d ornement et brise-vent et reconnue depuis longtemps pour sa valeur fourragère. Comme la majorité des légumineuses les graines du févier d Amérique présentent une inhibition tégumentaire, et peuvent rester viable pendant de longues périodes de temps. Dans le cadre de valorisation de cette espèce jugée envahissante par les écologues. Nous avons réalisées une étude préliminaire du comportement physiologique des graines en utilisant différents prétraitements pour éliminer l inhibition tégumentaire, ainsi qu une étude de la composition biochimique des gousses et des graines de ce taxon. L'essai de germination à révéler les résultats suivant: 91% pour les graines traitées par scarification mécanique, 32% pour le traitement à l'eau bouillante, 1% pour le traitement à l'acide sulfurique concentré et 0% pour les graines traitées par l'eau à 40 C. L'analyse biochimique des graines et des gousses montre la composition suivante : graines (humidité 11,26%, cendre 3%, lipide 47,6%, protéine 13,39%, phénols totaux 0,45%), gousses (humidité 12,06%, cendre 4,4%, lipide 32,5%, protéine 6,83%, phénols totaux 0,006%). De part son profil biochimique et son adaptation écologique les résultats militent pour l'introduction de cette espèce dans les zones marginales. De plus l'usufruit contribue à alléger la facture exorbitante de l'importation des aliments de bétail. Mots clés Gleditsia triacanthos L, physiologie, composition biochimique, gousses, graines. 1 Introduction Le févier d'amérique (Gleditsia triacanthos L.) est un grand arbre épineux à feuilles caduques, parfois sans épines telle que la variété inermis, originaire de l est de l Amérique du nord, appartenant au genre Gleditsia et à la famille des Fabacées, ou Légumineuses (Sousfamille des Caesalpinioideae) [1]. L arbre a été introduit en Europe en 1700 où il est devenu courant dans les régions occidentale centrale et méridionale [2]. Il a été introduit en Algérie en 1949 [3] par les colons, mais n a jamais fait l objet de valorisation. Dans ce cadre là, nous avons opté à prospecter le volet physiologique et valorisation de ce taxon. 2 Méthodologie 2.1 Critères physiologiques La conduite de la germination lancée le 22 mars a été faite sur 420 graines dans des bacs en verre, couvert de plastique transparent. (Conditions de laboratoire) à température ambiante (21,06 C). Quatre prétraitements ont été utilisés pour lever la dormance tégumentaire : Traitement à l'eau à 40 C pendant 72 h. Traitement à l'acide sulfurique pendant 20 mn suivi d un trempage dans l eau à température ambiante pendant 48 heures ; Traitement à l'eau bouillante pendant 5mn ; Scarification mécanique Critères biochimiques 310

311 Taux de germination 19, 20, 21 et 22 décembre 2012 Hôtel EL Mouradi Douz - Tunisie La farine issue des graines et des gousses a été conservées dans des flacons en verre, à l abri de la lumière pour l utilisation ultérieure pour les différents dosages. La détermination de la composition chimique des graines et des gousses de Gleditsia triacanthos L. a été réalisée selon les méthodes suivantes : Dosage de la teneur en eau (Méthode AFNOR 1985) ; Dosage des cendres (Méthode AFNOR 1985, Norme Algérienne : 732/1990) ; Dosage des lipides (Méthode SOXHLET) ; Dosage des protéines (Méthode KJELDAHL 1983, Norme Algérienne : 1185/1990) ; Dosage des sucres (Méthode DUBOIS et al., 1956) ; Dosage de cellulose brute (Méthode WEENDE (Lecoq, 1965)) ; Dosage des phénols totaux (Méthode bleu de Prusse, Bate Smith, 1973) ; Dosage des tannins condensés (Méthode test de vanilline avec H 2 SO 4 ) ; Dosage des tannins hydrolysables (Méthode Bate Smith, 1972). 3 Résultats 3.1 Critères physiologiques témoin eau à 40 C pdt 72h eau bouillante acide sulfurique scarification mécanique Figure: Comparaison entre les taux de germination obtenus par différents traitements Critères biochimiques Tableau: Composition biochimique des gousses et des graines de Gleditsia triacanthos L. Gleditsia triacanthos L. Gousse (M ± DS) (%) Graine (M ± DS) (%) Teneur en eau 12,06 ± 0,13 11,26 ± 0,06 Matière sèche 87,94 ± 0,13 88,74 ± 0,06 Cendres (matière minérale) 4,40 ± 0,50 3,00 ± 0,00 Lipides 32,50 ± 5,53 47,73 ± 4,62 Protéines 6,65 ± 0,28 13,11 ± 1,42 Sucres 37,42 ± 8,42 24,87 ± 6,47 Cellulose brute 14,97 ± 2,08 21,55 ± 1,70 Phénols totaux 0,16 ± 0,06 0,44 ± 0,001 Tanins condensés 0,13 ± 0,001 0,03 ± 0,007 Tanins hydrolysables 0,78 ± 0,38 0,45 ± 0,14 M : moyenne. DS : déviation standard de la moyenne. Références [1] Spichiger R.E., Savolainen V., Figiat M. & Jean-Monod D. B., 2004, Botanique systématique des plantes à fleurs: une approche phylogénétique nouvelle des angiospermes des régions tempérées et tropicales, 3 ème édition, Presse polytechnique et universitaire romande, Lossane, 413 pp. [2] Lieutaghi P., 2004, Livre des arbres, arbustes et arbrisseaux Tome II, Edition Acte Sud, 1322 pp. [3] Putod R., 1982, Les arbres fourragers : étude spéciale du févier d Amérique J. Forêt méditerranéenne. 9 (1) :

312 P L impact de l agriculture sur la qualité des eaux souterraines dans le bassin versant de Foum El Gueiss (Wilaya de Khenchela- Algérie) 1 Somia Lakhdari, 2 Yamama Nedjar, 3 Hizia Smail & 4 Balgacem Houha 1. Institut des Sciences de la Nature et de la Vie, Université Abbés Laghrour, Khenchela, 40004, Algérie, 1. lakhdaris@gmail.com 2. yamamanedjar@gmail.com 3. kari-hiba28@hotmail.fr 4. bhouha@yahoo.fr Résumé L étude de la qualité des eaux souterraines du bassin versant de Foum El Gueiss est une nécessité pour pouvoir parler de la sédentarité des populations rurales et aussi pour encourager l investissement par la création des richesses et de l emploi tant que la matière première, qui est l eau, existe; en abondance et de bonne qualité. La salinité des eaux serait attribuée à la dissolution des sels contenus dans les différents couches géologiques que l eau à lessivé gouvernés par les échanges jusqu à l équilibre Eau-roche. Les eaux évoluent chimiquement dans le sens d écoulement suivant un faciès bicarbonaté calcique à magnésien en amont vers des eaux chlorurées sodiques en aval. La pollution agricole par l utilisation des intrants chimiques (engrais organiques et inorganiques) à sa part dans la minéralisation des eaux comme il a été démontré par l analyse en composantes principales. Les eaux sont d une qualité chimique acceptable que ce soit à un usage de potabilité ou d irrigation. Mots clés: eaux, salinité, pollution, qualité, hydrochimique. 1 Introduction Le climat algérien est un climat de transition. Il varie de type méditerranéen dans le nord au type désertique dans le Sahara [1]. L origine des pluies en Algérie est plutôt orographique [2].les conditions climatiques et la lithologie des zones arides sont contribuer dans la modification des propriétés physicochimique des eaux. L absence des études de la qualité des eaux de cette région, fait une nécessité pour la connaissance et la préservation des eaux. Dans cette étude en cherchons de déterminer la qualité physico chimique des eaux souterraines du bassin versant de Foum El Gueiss. 2 Méthodologie Pour évaluer la qualité physico-chimique des eaux du bassin de Foum El Gueiss, un certain nombre de points d eau (fig. 1) Des précautions doivent être présenté à trois niveaux : le matériel de prélèvement, le mode de prélèvement, le transport et la conservation des échantillons [5]. La mesure des paramètres physiques sont effectué à l aide d un multi paramètres de marque Consort c535 (ph, température, conductivité électrique), a l utilisation d un spectromètre d absorption atomique en va effectuer les analyses des différentes éléments chimique (calcium, magnésium, sodium, potassium, nitrates, chlorure, bicarbonates, sulfates) 312

313 Fig 1 : Carte du réseau des points d échantillonnage 3 Importants Résultats Les résultats de calcul de SAR permettent de classer tous les points d eau dans la catégorie des eaux admissible, la totalité des points d eau sont dans le classement C3S1, où les eaux présentent un pouvoir d alcalinité faible, cette classe dont une bonne qualité d eau Les valeurs propres nous a permis de choisir uniquement l axe factoriel 1 et 2 et 3 du fait qu ils représentent 77.96% de la variance totale, le reste des facteurs (F4, F5, F6 ) représentent seulement 22.04% de la variance totale. L étude statistique par l analyse en composants principales(acp) illustré sur le tableau de 09 variables de 25 observations. Le pourcentage de la variation est de 41,917% pour l axe F1 est de 24,756 pour l axe F2. Le facteur F1 est déterminé par tous les éléments chimiques : c est un axe de salinité ou de la minéralité des eaux Le facteur F2 qui représente 25 % de la variance totale est un axe de pollution ou il ya opposition entre des eaux polluées matérialisées par NO3, Cl et Na et les eaux riches en carbonates, ceci est confirmé par le diagramme des individus ou il ya opposition entre les points d eau diluées riches en calcite et les points d eau polluées contaminées par des composés azotés Tableau 1: Statistique descriptive Ca Mg Na K Cl SO 4 HCO 3 NO 3 C25 c Min Max Moy écartype CV% Références [1]. Houha B.; 2007, Etude du fonctionnement hydrogéochimique et salin d un bassin semiaride. Remila-Khenchela-. Thèse de doctorat d état. Université Badji Mokhtar Annaba.165p. [2]. Seltzer P., 1946, Les climats de l Algérie. trav. inst. météophysique de l Algérie, 219p. [3]. Lessard L., 1952, Elément de techno-géologie des barrages algériens et quelques ouvrages annexes, le barrage de Foum El Gueiss. Tome I. XIX congres géologique international. 258p. [4]. Zedam R., 1998, Etude gîtlogique du gisement barytine (Mizab).Ain Mimoun, Khenchela. Thèse de magistère.124p, université d Annaba, Algérie. [5]. Rejsek F.2002, Analyse Des Eaux ; Aspects Réglementaires Et Techniques. Sceren. Paris. 360p. 313

314 P Physiological and chemical responses to water deprivation in Barbarine ewes S. Khnissi*, N. Lassoued*, H. Ben Salem*, M. Rekik**, K. Krayem*** * INRA-Tunisie, 2049 Ariana, Tunisia ; ** ENMV, 2020 Sidi Thabet, Tunisia *** ISA-CM, 4042 Chott Mériem, Sousse Abstract The effect of water deprivation was assessed in Barbarine ewes raised under dry conditions: 30 adult ewes were divided into two groups balanced for age and weight. Control ewes (C) had free access to water while deprived ewes (D) were watered every 3 days during all the month of July. Venous blood was sampled every week of the trial on the 3 rd day of water deprivation, and subjected to electrolytes analysis. Rectal temperature, heart and respiration rates were measured before each blood sampling. In the other hand, body weight and body score were measured every week and feed and water intake were recorded daily for each animal. A decrease in body weight was recorded at the end of the experiment. However, the weight loss was significantly (P<0.01) greater in water deprived animals as compared to the control. Ewes under water deprivation had similar values as feed intake as compared to dailywatered animals. However rectal temperature, heart and respiration rates were significantly (P<0.01) affected by water deprivation treatment. Similarly, 3 days of water deprivation induced many changes in metabolism reactions which affected significantly (P<0.01) the level of the majority of electrolytes. Keywords: Water deprivation, ewes, electrolytes, physiology. 314

315 P.200. Assessment of antioxidant, anti-inflammatory and anticancer activities of new flavonol glycoside isolated from medicinal halophyte Suaeda fruticosa Oueslati Samia 1, Lavoie Serge 2, Legault Jean 2, Pichette André 2, Girard-Lalancette Karl 2, Chedly Abdelly 1, Ksouri Riadh 1 1 Laboratoire des Plantes Extrêmophiles, Centre de Biotechnologie de Borj-Cédria (CBBC), BP 901, 2050, Tunisie. 2 Laboratoire d Analyse et de Séparation des Essences Végétales, Université du Québec, 555, Boulevard de l Université, Chicoutimi, Québec, Canada G7H 2B1. Address Oueslati_Samia@yahoo.fr Abstract Number of new natural plant substances described in literature, including quercetin derivatives, is still increasing and research into the biological properties of the flavonoid derivatives has become popular. Flavonols may be among the most important flavonoids which exhibit potential protective effects. A new flavonol glycoside, namely 3-(αrhamnopyranosyl-(1 2)-[β-xylopyranosyl-(1 6)]-β-glucopyranosyloxy) isorhamnetin was obtained from methanol extracts of aerial parts. Structure was elucidated on the basis of extensive spectroscopic analysis, including HSQC, HMBC, 1 H 1 H COSY. In this study, in vitro and ex vivo antioxidant potentialities, anti-inflammatory and cytotoxic activities of this pure compound were evaluated. The estimation of antioxidant capacities using Oxygen Radical Absorbance Capacity (ORAC method) and a cell based-assay (WS1) showed that this new flavonol exhibit a higher antioxidant activity with an ORAC value of 5.0 ± 0.3 µmol Trolox/µmol and inhibited the tbh-induced oxidation of 2',7'- dichlorofluorescin (DCFH) with an IC 50 value of 4.9 ± 0.6 µm. In comparison, the IC 50 value of positive control (quercetin) was 3.0± 0.2 µm. Moreover, this new compound showed a low anti-inflammatory activity, inhibiting NO release, with a capacity not exceeding 15 % in lipopolysaccharide stimulated RAW macrophages. The isolated compound was found to be inactive against lung carcinoma cells (A549), colorectal adenocarcinoma cells (DLD-1) and normal cells (WS1) with IC 50 value > 200 µm. Key Words: Suaeda fruticosa, flavonol glycoside, antioxidant potential, anti-inflammatory activity, anticancer capacity. Acknowledgements. This work was supported by the Tunisian Ministry of Higher Education and Scientific Research (LR10CBBC02). 315

316 P.202. Valorisation d un résidu de culture de champignon comestible (Pleurotus ostreatus) sur grignon d olive dans l alimentation des lapines en reproduction 1 Samira Akkache, 1 Ourdia Slimani, 1 Malika Mansour & 1 Salem Aired 1 Laboratoire de production, amélioration et protection des végétaux et des denrées stockées- Faculté des sciences Biologiques et des sciences Agronomiques. Université Mouloud Mammeri Tizi-Ouzo, Algérie. ty, Résumé L étude a porté sur l incorporation d un résidu de la culture de champignon comestible (Pleurotus ostreatus) à base de grignon d olive avec un taux de 20% dans l aliment lapin (G) dans le but d évaluer les performances de reproduction. Les résultats obtenus montrent que la culture de champignon a permis l amélioration de la valeur nutritive du grignon d une part par la réduction du taux de cellulose brute de 53 à 39% et d autre part par l amélioration du taux protéique de ce dernier (2,8 à 7%). L analyse des résultats obtenus sur les performances de reproduction montre que les femelles alimentées avec l aliment G présentent de meilleures performances de celles alimentées avec l aliment T. En effet, le taux de réceptivité est de 64% pour les femelles du lot G contre seulement 52% pour les femelles du lot T et une meilleure fertilité (77,8 vs 73%). De même pour le nombre de nés vivants (6,7 vs 5,67). L incorporation du résidu de culture de champignon ne semble pas avoir d effet néfaste sur la reproduction des lapines. De ce fait, le grignon d olive constitue une alternative à la réduction de l utilisation des matières premières importées ; c est aussi un moyen de recycler le grignon afin d éviter son impact néfaste sur l environnement. Mots clé : Lapin, Champignon, Aliment lapin, Paramètre de reproduction 1 Introduction L Algérie est un pays Méditerranéen à vocation oléicole. Cette industrie laisse derrière elle des grandes quantités de résidu (grignon, margine) qui sont néfaste pour l environnement. Plusieurs travaux ont été réalisés dans le cadre de la valorisation de ces résidus dans l alimentation animale [1], [2], [3], mais sa richesse en composés ligno-cellulosiques et sa faible teneur en protéine limite cette utilisation. Pour notre part nous avons essayé d améliorer la valeur nutritive de grignon par la culture d un champignon comestible (Pleurotus ostreatus) sur ce dernier, de fait que le pleurote est un champignon qui a la faculté de synthétiser des enzymes extracellulaire de types, cellulases, hémicellulases et ligninases qui dégrade les parois cellulosiques [4] et [5]. 2 Méthodologie L expérimentation a été réalisée en deux étapes : - La culture de pleurote sur le grignon d olive ; - L incorporation de ce résidu dans l aliment du lapin. 316

317 Deux aliments ont fait l objet de cette étude, un aliment standard du commerce (T) et un aliment à base du résidu de la culture de champignon (G). La formulation de l aliment G a été faite après avoir déterminer la composition chimique du résidu. les analyses physicochimiques ont été aussi effectuer sur le grignon d olive avant et après la culture de pleurote. 40 lapines à l âge de reproduction ont été réparties en deux lots T et G sur les quelles plusieurs paramètres de reproduction ont été mesurés (Taux de réceptivité, fertilité et la taille de portée à la naissance. Les résultats obtenus ont fait l objet d une étude statistique. 3 Principaux résultats 1- Les résultats d analyse de la composition chimique des grignons avant et après culture montrent que le pleurote a permis de diminuer la teneur en cellulose brut de 53,6% à 39%, la teneur en ADF de 66,5 à 60% et la teneur en ADL (29,9 vs 22,5). Elle a permis d améliorer la teneur en protéine brute (2,8 vs 7%). 2- Les résultats des performances de reproduction des deux lots montrent que les femelles du lot G ont les meilleurs taux de réceptivité (64 vs 52%), de fertilité (77,8 vs 73,9%) ainsi que pour le nombre de nés totaux (7,75 vs 7,2) et le nombre de nés vivants (6,75 vs 5, 67). D après ces résultats, il semble que l incorporation de résidu de culture de pleurote à base de grignon d olive n a pas d effet néfaste sur les performances de reproduction des lapines. Ceci est en accord avec les résultats de [3] sur des brebis gestantes alimentées avec de grignon d olive. Références 1] Ben Rayana A., Bergaoui R. et Ben Hammouda M. Keyouli C., Incorporation du grignon d olive dans l alimentation des lapereaux. World Rabbit Science. 2(3), pp [2] Chaabane K. et Berguaoui M., Utilisation de différents types de grignon d olive dans l alimentation animal des lapereaux. World Rabbit Science 5(1), pp [3] Molina E., Aguilera J.F., Utilisation des sous produits de l olivier dans l alimentation des ovins. Opt. Med. Serie Sém., 16, pp [4] El Gammal A., Kamel Z., Abbed Z. et Mohamed H., Biodegradation of linocellulosic and production of sugars and lignin degradation intermediates by for selected microbial strains. Polymer degradation and stability. 61. PP [5] Raimbault M., Fermentation en milieu solide- croissance de champinons filamenteux sur substrat amylacés. Travaux et documents de l ofice de la recherche scientifique et technique Outre Mer (O.R.S.T.O.M) Ed Paris, pp

318 P.203. The Strontium-doped bioactive glass: a Bone Grafting Material without adverse effects on the mineral profile 1,2 Jebahi Samira, 1 Oudadesse Hassane, 3 Hafedh Elfekih, 4 Nacer Abdessalem 4 Tarek Rebai, 4 Hassib Keskes, 2 Abdlfattah El Feki 1University of Rennes 1, UMR CNRS 6226, Campus de Beaulieu, Rennes, France 2Animal Ecophysiology Laboratory, Sfax Faculty of Science, Department of Life Sciences, Sfax, Tunisia 3Science Materials and Environement laboratory, Sfax Faculty of Science, Sfax, Tunisia 4Histology, Orthopaedic and Traumatology laboratory Sfax Faculty of Medicine Sfax, Tunisia Abstract Low doses of strontium (Sr) were shown to increase bone formation and trabecular bone density in rodents. To assess whether strontium affects the mineral quality at doses known to increase bone density, we have introduced the percentage of 0.1 % wt of Sr in the 46S6 bioactive glass (BG-Sr). The results indicate that treatment with low Sr dose, increase the femoral bone volume and leading to the material osteointegration. The Sr/Ca ratio could clarify the Sr deposition in the newly-formed bone. The quantitative analysis demonstrated that 90-day post surgery (BV/TV%), were significantly higher in BG-Sr group than those of control treated rats. As conclusion, this study demonstrate that Sr doped bioactive glass does not have detectable adverse effects on the mineral profile. Keywords: Bone, Bone Grafting, Mineral profile, bioactive Glass, Mineralization. 1 Introduction Among materials, bioactive glass has been extensively used in biomaterials science applications [1]. As a naturally occurring trace element, Sr has recently been suggested as a new treatment for osteoporosis. Here, the evidence of the beneficial effects of Sr in bone growth motivated us to incorporate this chemical element with a trace amount in SiO2-CaO- Na2O-P2O5 system ceramics for skeletal tissue application 2 Methodology Female Wistar rats (16-19 weeks of age), obtained from the central pharmacy, Tunisia, and bred in the central animal house were used in this study. In vivo, BG-Sr was implanted in the femoral condyles of Wistar rats and compared to that of control groups. The element concentrations were detected using inductively coupled plasma optical emission spectrometry ICP-OES. The bone sections were stained with a modified Goldner trichrome. Bone/Tissue Volume (BV/TV, expressed in %), were measured by a point count method using a 25-point integrating filter [2] 3 Main Results The biological performance of doped Sr glasses was evaluated in vivo in a rat model. The Sr/Ca ratio could clarify the Sr deposition in the newly-formed bone as indicated in Tab. 1. Histological analysis showed that 90 days after surgery, there were no signs of inflammation or necrosis. Woven bone progressively transformed into mature bone. 318

319 Fig.1 Bone tissue implanted with Strontium-doped bioactive glass.(+miniralized bone,*implant and woven bone) In this study we noted the synchronization of bioactive glass degradation and the replacement by natural tissue produced by cells. The quantitative analysis demonstrated that 90-day post surgery BV/TV, were significantly higher in BG-Sr (47% ) group than those of control treated rats( 38% ).These findings suggest that BG-Sr can be used as a therapeutic material for bone remodeling by delivering strontium to stimulate new bone formation Table 1: The newly-formed bone of ovariectomised female Wistar rats implanted with -doped bioglass (BG-Sr) for 4, 7, 15, 30 and 60 days. Normal bone Sr/CaX References [1] Lusvardi, G., Malavasi, G., Menabue, L.et al Properties of zinc releasing surfaces for clinical applications, J. Appl. Biomed. 22, pp [2] Schenk, R.K., Merz, W.A., Müller, J.A Quantitative histological study on bone resorption in human cancellous bone, Acta. Anat: 74. pp: 44 53, 319

320 P.204. Susceptibility of an olive progeny (Picholine Meski) to olive leaf spot disease caused by Fusicladium oleagineum 1 Samira Krid, Ali Rhouma, Ajmi Larbi, Mongi Msallem. Houssem Baklouti, et Mohamed Ali Triki 1 Laboratoire d amélioration et Protection des Ressources Génétiques de l olivier Institut de l olivier, BP-1087, Sfax. Tunisia Abstract Forty five descendants from a crossing between olive cultivar Picholine de Languedoc and the local cultivar Meski were evaluated for their susceptibility to olive leaf spot (Fusicladium oleagineum) in field and laboratory studies. Disease incidence varied greatly among the descendants and was correlated with the severity of leaf symptoms. Based on field observations and laboratory tests, the hybrids were classified into five groups: 1) very susceptible to the disease: Meski and 17H, 2) susceptible to the disease : 20J, 8I, 11I, 21I, 14H, 16H, 23H, 6J, 8J and 23J, 3) moderately resistant to the disease : 15I, 16I, 22I, 23I, 8K, 13H, 18H, 22H, 9J, 10J, 11J, 12J, 14J, 16J, 18J, 4) resistant to the disease: 21J, 12I, 13I, 18I, 19I, 9K, 10K, 12H, 15H, 19H, 15J and 22J, and completely resistant to the disease : cultivar Picholine and hybrids 6I and 19I. The analysis of anatomical parameters showed that the cuticle thickness and the trichome density are very important physical parameters that can determine the degree of susceptibility of hybrids to the disease. The assessment method may be useful to screen olive cultivars and hybrids for Fusicladium resistance. Keywords: Fusicladium oleagineum, hybrid, Meski, Picholine, trichome 1 Introduction Tunisia has an inheritance rich of table olive cultivars with about 24 cultivars, of which 20 are Tunisian and the others introduced. Among the local cultivars, Meski is the most important table olive cultivar cultivated in the country. Moreover, this cultivar is very susceptible to olive leaf spot [1] caused by Fusicladium oleagineum. Infected trees show defoliation of leaves which result in poor twig growth and poor fruit set, and great damage to plantations. Application of copper-based fungicides is now the main method of olive leaf spot control in Tunisia and other olive growing countries. However, although there is a lower risk of pathogens developing resistance to copper based fungicides since they have multi-site activity. Use of resistant olive cultivars is the most effective, economically feasible and ecologically sustainable means of controlling olive leaf spot. In this context, a breeding program was initiated in 1993 in a project entitled olive breeding (supported by the International Olive Council) [2]. The cultivar Meski was crossed with the resistant cv. Picholine Languedoc and a collection of 45 hybrids are now being grown in the region of Oued Souhil (Nabeul). The aim of the present study was to evaluate the susceptibility of the 45 hybrids to olive leaf spot and to study the physical factors involved in the resistance to the fungal disease. 2 Methodology Evaluation of hybrid susceptibility in the field Leaf sampling: A total of 120 leaves were taken randomly from each hybrid with 20 leaves per branch on six branches selected in various directions. Visible infection: A total of 120 leaves were taken during spring (at the beginning of April). Samples of branches cm in length were taken from different parts of the olive tree. The severity of peacock spot was determined by leaf coverage with lesions, the number of lesions on each leaf, and the diameter of lesions. 320

321 Evaluation of hybrid susceptibility in the laboratory Inoculum preparation: Conidia of F. oleagineum used in the inoculation were obtained following the method of (López-Doncel et al. [3]. Leaf inoculation: Detached leaves of each cultivar were surface-disinfected with tissue paper moistened with ethanol for 30 s and were inoculated with 5 μl of a conidial suspension of F. oleagineum ( conidia ml 1) following the method of López-Doncel et al. [3] The incidence (% of infected leaves) and the severity (number of spots per leaf) were determined after 15 days. Histological studies Measurements of trichome density: Histological measurements of tissues were made on ten leaves obtained from each cultivar and hybrid. Cross-sections of fresh leaf material were prepared for microscopic examination. Trichome density (number per unit leaf area) and diameter were measured according to Larkin et al. [4]. Trichome density was calculated as the trichome number per disc area. Cuticle thickness: The leaves were cut transversally and were stained with carmine after a preliminary dipping in bleach. The cut pieces were subsequently washed with sterile distilled water. Then two to three drops of iodine green were deposited on the cut piece which was followed by washing with water. The histological structure of the cut surface was observed using a microscope. The total thickness of the leaf and the thickness of the cuticle were measured. 3 Main Results Evaluation of visible infection of hybrids in the field The cultivar Picholine and hybrid 6I were the most resistant to the disease. The. Hybrids 12I, 13I, 18I, 19I, 22I, 9K, 10K, 12H, 15H, 15J and 22J were less resistant. However, cv.meski and the hybrids 14I and 17H were very susceptible to the disease. Evaluation of susceptibility of hybrid leaves in the laboratory The typical symptoms of inoculated leaves started to appear on cv. Meski and the two highly susceptible hybrids 14 I and 17H. A positive and significant correlation was observed between the results obtained in the laboratory and the field. Trichome size and density Measurements of the size of trichomes showed that the parent cv.meski and the hybrids 17H, 15J, 22I had the smallest sizes of trichomes as compared to the other hybrids where the diameters were less than 90µm. The trichomes of cv. Picholine and hybrids 6I, 19I, 10K had the highest diameter, exceeding 125 μm. Hybrids 14I, 17H, 8J and parent cv. Meski had the lowest densities of trichome (10 trichomes/mm2); however, the resistant parent cv. Picholine and the resistant hybrids 6I, 12I, 13I, 15I, 18I, 19I, 9K, 12H and 22J had trichome densities that varied between 20 and 28 trichomes/mm2. The thickness of the cuticle measured for the studied hybrids varied between 5 and 10 μm. The very susceptible hybrids (17H, and 20J) and the parent cultivar cv. Meski had the thinnest cuticle (5 6 μm), whereas the resistant hybrids 6I, 22I, 23I, 9K, 10K, 19H, 22H, 9J, 14J, 15J, and cv. Picholine had thicker cuticles (>9 μm). Acknowledgements: This research was supported by funds of the project bilateral control Project of main foliar diseases of olive (A/018552/08) References [1] Graniti, A. (1993). Olive scab: a review. EPPO Bulletin, 23, [2] Fontanazza, G. & Baldoni, L. (1990). Proposta per un programma di miglioramento gentico dell' olivo. Olivae, 34, [3] López-Doncel, L. M., Viruega-Puente, J. R., & Trapero-Casas, A. (2000). Respuesta del olivo a la inoculacion con Spilocaea oleagina, agente del repilo. Boletin de Sanidad Vegetale Plagas, 26, [4] Larkin, J. C., Young, N., Prigge, M., & Marks, M. D. (1996). The control of trichome spacing and number in arabidiopsis. Development, 122,

322 P.205. Effets de l administration intrapéritonéale de l or sur la fonction endocrine et exocrine des testicules 1 Samira Maghraoui, 1 Ahlem Ayadi, 2 Abderraouf Jebali, 1 Tekaya Walid-Habib, 3 Ben Rayana Med-Chiheb et 1 Tekaya Leila 1- Laboratoire de Physiologie, Faculté de Médecine de Tunis, 15 rue Djebel Lakhdhar, 1007 Bab Saâdoun. Tunis, Tunisie. 2- Laboratoire d'analyse Elémentaire Inorganique, Institut National de Recherche et d Analyse Physico-chimique (INRAP). Pôle Technologique Sidi Thabet Laboratoire d Analyses Médicales, Institut National de Nutrition et de Technologie Alimentaire. 11, Rue Djebel Lakhdar, 1007 Bab Saadoun. Tunis, Tunisie. Abstract Plusieurs études ont montré que certains types de cellules vivantes ont la capacité de concentrer sélectivement de nombreux éléments minéraux au sein de leurs lysosomes sous une forme insoluble après leurs administrations parentérale par voie parentérale. Tel est le cas de l or qui se concentre au sein des lysosomes des cellules testiculaires de Leydig. Le but du présent travail est d étudier les conséquences de la présence de l or après son administration parentérale sur l organisme et plus particulièrement sur les fonctions endocrine et exocrine des testicules de rats mâles adultes Wistar, Nos résultats ont montré que l or induit une baisse de la fertilité des animaux traités en agissant à la fois sur la fonction exocrine et endocrine des testicules, ces constatations mettent l accent sur l effet toxique de l or, élément encore utilisé en médecine et en industrie. Keywords: Or, cellules testiculaires, lysosomes, paramètres de fertilité, testostérone. 1 Introduction Nos études antérieures ont montré que l or, un anti-inflammatoire administré chez les rhumatisants de façon chronique [1,2], est concentré au sein des lysosomes des cellules testiculaires de Leydig, sous frome de micro-aiguilles de sel de sulfate insoluble [3]. L objectif du présent travail a été de déterminer, d une part, les quantités d or au niveau du testicule, du foie, du cerveau ainsi qu au niveau des urines de 24h, suite à son administration par voie intrapéritoneale à des rats adultes mâles ; d autre part, évaluer l impact de la présence de cet élément sur les fonctions à la fois exocrine et endocrine du testicule des mêmes rats. 2 Methodologie Pour cela, deux groupes de rats mâles adultes albinos de souche wistar ont reçu une solution soluble d or ou de sérum physiologique par voie intrapéritonéale pendant 15 jours. 24 h avant le sacrifice des animaux, les urines des deux groupes d animaux ont été collectées. Au moment du sacrifice les testicules, le foie ainsi que le cerveau de tous les animaux ont été prélevés. 3 Resultats La technique de spectrométrie de masse à plasma induit (ICP-MS), a montré que l or existe sous de très fortes concentrations au niveau des testicules, du foie, du cerveau de même qu au niveau des urines de 24h des rats traités. Aucune trace d or n a été détectée au niveau des mêmes organes des rats témoins. 322

323 L étude des paramètres de fertilité à savoir la mobilité, la vitalité et la densité du sperme a permis de montrer que l or induit une diminution significative des deux premiers paramètres sans affecter le dernier. L évaluation des taux sériques de testostérone a montré que ce métal lourd diminue fortement la production de testostérone circulante comparativement aux rats témoins. Nos résultats montrent que suite à l administration intrapéritonéale d or, cet élément se concentre au sein de plusieurs organes à savoir les testicules, le foie, le cerveau et que son élimination est essentiellement urinaire, d une part, d autre part, la concentration de l or dans les testicules semble particulièrement toxique puisque cet élément diminue la mobilité, la vitalité des spermatozoïdes ainsi que les taux sériques de testostérone. References [1] Fleischner G. M., Moreck R., Hanaichi T., Hayashi H., Quintana N., and Sternlieb I., 1991, Lightand electron-microscopical study of a case of gold salt - induced hepatotoxicity, Hepatology. 14, pp [2] Soler J. M., Barroso E., Aranda F.I., Alonso S., and Romero S., 2003, Fatal, gold-induced pneumonitis, Rheumatol. Int. 23, pp [3] Manoubi L., Jaafoura M.H., Skhiri-Zhioura A., El Hili A., Berry J.P. and Galle P., 1994, Subcellular localization of gold in suprarenal testicle and thyroid glands after injection of allochrysine in rats, Cell. Mol. Biol. 40 (4), pp

324 P.206. Impact du sulfate de vanadium sur la fonction hépatique chez les rats normaux et diabétiques. Samira Missaoui, Mounira Tlili, Mohsen Sakly, Khémais Ben Rhouma & Olfa Tebourbi. Laboratoire de Physiologie Intégrée, Faculté des Sciences de Bizerte, 7021 jarzouna, Tunisie. Résumé Le Vanadium est un métal blanc de transition qui a un très grand intérêt dans le domaine de la toxicologie. Il provoque plusieurs changements dans divers systèmes biologiques. Globalement, la toxicité du vanadium augmente avec la valence du composé. Malgré son effet "insulin-like" l'utilisation de ce métal comme agent thérapeutique a été limitée par sa toxicité après une administration chronique. L objectif de ce présent travail est d évaluer l effet d un traitement sub-chronique au sulfate de vanadium (VOSO 4 ) sur la fonction hépatique chez des rats normaux et diabétiques. Nos résultats montrent que le VOSO 4 entraine une hépatotoxicité caractérisée par une hépatomégalie, une élévation de l activité des transaminases, de la phosphatase alcaline et de la lactate déshydrogénase chez les rats non diabétiques. Par contre, chez des rats diabétiques on observe un effet protecteur. Les changements biochimiques observés sont accompagnés par des altérations histologiques hépatiques confirmant l effet toxique du vanadium et ceci malgré son action anti-diabétique. Mots Clés: Vanadium, hépatotoxicité, diabète, histologie. 1. Introduction: Le vanadium est un métal blanc de transition qui ne se trouve pas à l état pur dans la nature. Il existe dans plusieurs aliments tels que le sarrasin, les grains de soja, l huile d olive, l huile de tournesol, les pommes, les œufs, le persil, les fruits de mer et les champignons (Urska & Judmila., 2004). Les rejets anthropiques du vanadium se trouvent dans l atmosphère et les eaux résiduaires. En effet, il est émis dans l environnement par le raffinage du pétrole et la combustion du charbon. Ce métal est connu aussi par son effet "insulin-like" surtout chez les diabétiques (Koyuturk et al., 2005). Plusieurs travaux de recherche ont montré que le vanadium peut induire des altérations des fonctions hépatiques (Crans et al., 2004). Cependant, il n y a pas d études qui ont comparé l effet de VOSO 4 sur la fonction hépatique entre des rats normaux et diabétiques après exposition sub-chronique au métal. Par conséquent, Au cours de ce travail nous tenterons d étudier les effets d un traitement de 30 jours au sulfate de vanadium sur la fonction hépatique des rats normaux et diabétiques. 2 Méthodologies: Le traitement par le sulfate de vanadium est effectué durant un mois par voie intra-péritonéale (ip.). Les rats mâles de souche Wistar âgés de 48 semaines, sont divisés en six lots : Lot1 : Les rats témoins reçoivent chaque jour une injection de NaCl à 9 équivalente à celle reçue par les rats traités par le VOSO 4. Lot 2 : Les rats reçoivent chaque jour une injection ip. de 5mg de VOSO 4 /Kg de poids corporel (PC). Lot 3 : Les rats reçoivent chaque jour une injection ip. de 10mg de VOSO 4 /Kg de PC. Lot 4 : Les rats diabétiques reçoivent chaque jour une injection de NaCl à 9 équivalente à celle reçu par les rats traités par le VOSO 4. Lot 5 : Les rats diabétiques reçoivent chaque jour une injection ip. de 5mg de VOSO 4 /Kg d PC. Lot 6 : Les rats diabétiques reçoivent chaque jour une injection ip. de 10mg de VOSO 4 /Kg de PC. Les rats sont rendus diabétiques par une injection unique de 65mg/Kg de PC de streptozotocine dissoute dans un tampon citrate à ph 6,4. Les rats sont sacrifiés par décapitation, le sang est récupéré, centrifugé dans des tubes héparinés puis aliquoté et conservé à 80 C jusqu'au jour du dosage. Les résultats sont analysés en utilisant le logiciel Statistica for Windows version 5.0 Software. Les résultats représentent les moyennes ± les erreurs standard de la moyenne (SEM). Les différences entre les moyennes sont évaluées en utilisant le test one-way ANOVA suivi du test de comparaison multiple de Tukey. 324

325 3. Principaux Résultats: Nos résultats montrent que le traitement des rats par le sulfate de vanadium durant 30 jours entraine une toxicité qui se manifeste par la diminution du gain pondéral accompagné d'une hépatomégalie chez les rats non diabétiques et ceci avec la dose de 10 mg de VOSO 4 /kg (tableau 1). Alors que le même traitement chez les rats diabétiques entraine une nette amélioration du gain pondéral. En effet, les rats diabétiques recevant la dose de 10 mg de VOSO 4, présentent un poids corporel comparables aux rats témoins non diabétiques. Sur le plan biochimique et dans le but de déterminer si le VOSO 4 induit ou non une lyse et une atteinte hépatique, nous avons déterminé l incidence de ce même traitement sur l activité sérique de certaines enzymes indicatrices de la fonction hépatique. Nos résultats indiqués sur le tableau 1 montrent que le VOSO 4 provoque une élévation significative et dose-dépendante de l activité de la phosphatase alcaline (PAL), de la lactate déshydrogénase (LDH) et de l activité des transaminases (AST et ALT) ce qui témoigne d une hépatotoxicité. De même, le diabète altère la fonction hépatique. Par contre, le traitement au VOSO 4, améliore nettement l activité des enzymes hépatiques surtout celle de l AST (Tableau 1). Ces effets protecteurs du vanadium chez les rats diabétiques seraient liés à son effet «insulin-like» et/ou à effet antioxydant. Tableau 1: Effet du sulfate de vanadium sur le poids corporel, le poids relatif du foie, l activité de la LDH, la PAL et les transaminases chez les rats diabétiques comparés aux normaux. Poids Corporel (g) Poids Relatif du foie (g/100g) PAL (U/L) AST (U/L) ALT (U/L) LDH (U/L) Témoin 182±8,29 a 4,191±0,168 a 89,75±3,75 a 88,08±2,26 a 75,273±2,43 a 241,461±15,76 a ND+5mg/kg 206±4,61 a 4,813±0,239 a 91,4±3,13 a 98,2±3,352 a 102,088±1,43 b 277,578±13,29 b ND+10mg/kg 170±4,25 b 5,346±0,04 b 98,121±5,76 b 112,878±3,35 b 134,1±1,19 b 312,513±10,19 c Diabétique 105,125±1,04 c 4,822±0,37 a 246,325±11,2 c 150,415±5,59 d 193,728±3,04 c 397,59±9,18 d D+5mg/kg of 129,625±1,98 c 5,705±0,34 b 168,778±2,74 d 129,183±3,37 b 154,118±3,27 b 320,563±21,16 c VOSO 4 D+10mg/kg 173±5,45 a 5,945±0,46 c 118,451±7,24 b 95,895±1,6 a 91,57±1,56 b 264,335±10,47 b of VOSO 4 Chaque valeur correspond à la moyenne de 8 déterminations ± SEM. Les lettres différentes indiquent une différence significative ( p 0.05) (test post hoc de tukey). References: [1] Urska R., & Judmila L.B., 2004, Determination of vanadium in dietary supplements, Acta. Chim. Slov, [2] Koyuturk M., Tunali S., Bolkent S., & Yanardag R., 2005, Effects of vanadyl sulfate on liver of streptozotocin-induced diabetic rats, Biol. Trace. Elem. Res, 104. pp [3] Crans D. C., Smee J. J., Gaidamauskas E., & Yang L., 2004, The chemistry and biochemistry of vanadium and the biological activities exerted by vanadium compounds, Chem. Rev pp

326 P.207. Extraction et quantification des composés phénoliques 1 Samira Nia, & 1 Mohamed Yousfi 1 Laboratoire des sciences fondamentales université amar télidji- BP 37G Laghouat-Algérie. 1 Résumé Les recherches menées autour de ce travail s intéressent particulièrement à l étude phytochimique de trois espèces ononis anguistissima, oudneya Africana et pulicaria crispa. Ce travail a été concentré à l extraction des composés phénoliques par différents mélanges de solvant, et leur quantification. D après les résultats nos plantes montrent des teneurs faibles en phénols totaux de 0.57jusqu à17.52 mg/g en équivalent d acide gallique, en parallèle, l analyse quantitative du contenu en flavonoïdes a exhibé des valeurs comprises entre 0,03 et 5,46 mg/g en équivalent de la quercitine; tandis que pour les tanins, on remarque des teneurs allant de 0,41 à mg/g en équivalent de la catéchine. Mots clés: plantes médicinales, composés phénoliques, flavonoïdes, tanins 1. Introduction L'importance des plantes doués à leur capacité à produire des substances ont des intérêts multiples; parmi ces composés on trouve dans un grand mesure d'un point de vue application "les métabolites secondaires" (alcaloïdes, terpènes, composés phénoliques, ) qui se sont surtout illustrés en thérapeutique les composés phénoliques s'ils n'occupent qu'une place quantitative modeste, ont de multiples propriétés qui ont de tout temps été recherchés par l'homme. 2. Méthodologie Dans la présente étude, la méthodologie d'extraction a été effectuée suivant la méthode décrite par Marie Josbphe Amiot, avec une légère modification. Après séchage à l ombre et à température ambiante la matière végétale est finement broyée et tamisée pour l'extraction. La macération est effectuée dans des différents mélanges de solvants: MeOH/H2O ; AC/ H2O ; MeOH/AC/H2O pendant 48 heures à l obscurité. Après filtration et évaporation du méthanol et acétone sous vide dans un rotavapeur à une température de 40 les phases aqueuses restantes de chaque extrait sont soumises à plusieurs extractions liquide-liquide par divers solvants organiques : éther de pétrole, dichlorométhane, acétate d éthyle et n-butanol Pour évaluer la quantité des phénols totaux, des flavonoïdes et des tanins condensés nous avons suivi respectivement les méthodes suivantes : la méthode de Singleton et Ross (1965) avec le réactif de Folin-Ciocalteu [1]. La méthode de Lamaison et Carnat utilisant le réactif de tri chlorure d aluminium [2] et la méthode de la vanilline décrite par Hagerman [3]. 3. Résultats Les valeurs des teneurs d'extraction des fractions de dichlorométhane sont comprises de 0,8% à 8,6%, de 1,4% à 5,8% pour les fractions d acétate d éthyle et de 5% à 10,8% pour les fractions butanoliques. Les teneurs en composés phénoliques, en flavonoïdes et en tanins condensés de chaque extrait des plantes ont été calculées à partir des courbes d étalonnage et exprimées en milligrammes équivalent en acide gallique par gramme de la matière sèche pour les phénols totaux, en milligrammes équivalent à la quercitine par gramme de la matière 326

327 sèche pour les flavonoïdes et en milligrammes équivalent à la catéchine par gramme de la matière sèche pour les tanins condensés. Les résultats obtenus sont illustrés dans le tableau 1. Tableau 1: Teneur en phénols totaux, en flavonoïdes et en tanins de différentes plantes étudiées exprimés en milligrammes par gramme de la matière sèche plante Systéme de solvants fractions Teneurs en phenols totaux Teneurs en flavonoids Teneurs en tanins dichlorométhane MeOH/H 2 O Acétate d éthyle Butanol Ononis anguistissima Oudneya africana Pulicaria crispa References Ac/H 2 O MeOH/Ac/H 2 O MeOH/H 2 O Ac/H 2 O MeOH/Ac/H 2 O MeOH/H 2 O Ac/H 2 O MeOH/Ac/H 2 O dichlorométhane Acétate d éthyle Butanol dichlorométhane Acétate d éthyle Butanol dichlorométhane Acétate d éthyle Butanol dichlorométhane Acétate d éthyle Butanol dichlorométhane Acétate d éthyle Butanol dichlorométhane Acétate d éthyle Butanol dichlorométhane Acétate d éthyle Butanol dichlorométhane Acétate d éthyle Butanol [1] Bahorun T., Substances naturelles actives: la flore mauricienne, une source d'approvisionnement potentielle. Food and Agricultural Research Council, Réduit, Mauritius, p [2]M. Abu Basma rajah., Z. Zuraini., S. Sasidharan., L. Yoga Latha and S. Amutha., Assessment of Euphorbia hirta L leaf, flower, stem and root extracts for their antibacterial and antifungal activity and brine shrimp lethality, Molecules; pp. [3] N. Krishnan., S. Ramanathan., S. Sasidharan., V. Murugaiyah and S M. mansor., Antimicrobial Activity Evaluation of Cassia spectabilis Leaf Extracts, International Journal of Pharmacology; pp. 327

328 P.208. Study of the effects of inflammation on the regulation of the expression of drebrin in primary cultures of neurons and glial cells Sana Banaceur 1,2,3, Marie Pierre Blanchard 1,2, Kevin Baranger 1,2, Eliane Charrat 1,2, Abdelmelek Hafedh 3, Sakly Mohsen 3, Michel Khrestchatisky 1,2 and Lotfi Ferhat 1,2 1 CNRS, UMR7259, Neurobiologie des Interactions Cellulaires et Neurophysiopathologie (NICN), Marseille, F , France 2 Aix Marseille Université, Faculté Médecine, Marseille, F-13284, France 3 Université Carthage, Unité de physiologie Intégré, Faculté des Sciences de Bizerte, Tunisie Abstract In neurons, drebrin, an F-actin binding protein, regulates dendritic spine plasticity and synaptic function, while in astrocytes drebrin is involved in the stabilization of the gap junctions. The levels of expression of this molecule is reduced in case of Alzheimer's disease, relatively common neurodegenerative disease in the elderly. In this context, we tested whether inflammation regulates the expression of drebrin in cultured neurons and astrocytes using various techniques: molecular biology, biochemistry, immunocytochemistry and imaging. Our data show clearly that LPS Lipopolysaccharide (LPS), an essential component of the outer membrane of Gram-negative bacteria, widely used to induce inflammation, diminishes the expression and localisation of drebrin in cultured neurons and astrocytes. Thus, our results indicate that the dowregulation of drebrin observed in pathological situations may be mediated by inflammation. Keywords: Drebrin, inflammation, Liposaccharide, neurons and Astrocytes 2. Methodology in cultured neurons and astrocytes using various techniques: molecular biology, biochemistry, immunocytochemistry and imaging. 3 Results 328

329 Analysis by RT-PCR of the expression of mrna encoding b- actin and drebrin in astrocyte cultures in the absence and presence of LPS Analysis by Western blot of the expression of proteins b-actin and drebrin in neuronal and astroglial cultures in the absence and presence of LPS Effects of inflammation on the expression and localization of drebrin and connexin 43 in cultured astrocytes in the absence of t présence de LPS 329

330 P.209. The risk of environmental contamination of lead on food chain from Marrakech area, Morroco S. El fadeli¹ˉ², R. Bouhouch², A. El abbassi 4, M. Chaik¹, A. Aboussad 3, N.Lekouch¹, R. F. Hurrell², M.B. Zimmermann ², A.Sedki¹. 1 Laboratoire d Hydrobiologie, Ecotoxicologie et Assainissement, Bd Moulay Abdellah BP Marrakech - Maroc. 2 Human Nutrition Laboratory, Institute of Food, Nutrition and Health, ETH Zurich, 3 Section Pediatric Pubic Health, Community Health and Epidemiology, Medical University Hospital Ibn Tofail, Marrakech, Morocco. 4 Food Sciences Laboratory, Department of Biology, Faculty of Sciences Semlalia, Bd Moulay Abdellah, P.O. Box 2390, Marrakech, Morocco. Abstract The aim of this study is to investigate lead contamination in food chain and evaluate the consequent health risks to local residents in three different sites. Samples were collected from three compartments: drinking water, soils and plants (edible part). The levels of lead contamination in these compartments were measured. Transfer factors of lead from soils to plants and the eventual health risk of this metal were calculated. The results showed that the concentration of lead in drinking water in all sites was below the safety limit in drinking water. However, soils and plants from mining site were heavily contaminated compared to the other sites. Consequently, the oral intakes of lead through plant pose a high health risk to local residents in mining and El Azzozia sites. Keywords: Lead contamination, Health risk, drinking water, soil, plant. 1. Introduction The undesirable health effects caused by low-level exposure to lead, particularly in children the most sensitive target group, have been extensively studied and documented [1, 2]. Environmental lead exposure can come from a wide variety of sources including air, water, food and housing. Lead contamination in the soil can usually be attributed to one of the three main processes: industrial activities such as mining and smelting processes, agricultural activities such as the use of insecticide and municipal sewage sludges, and finally, urban activities such as the combustion of gasoline containing the anti-knock additives tetraethyland tetramethyl-pb, and uncontrolled disposal of lead containing materials such as paints [3]. Furthermore, plants can take up lead from the soil and under certain conditions high levels can be accumulated in the leaves and other edible parts of the plant [4]. 2. Methodology The sampling sites were located in regions of Marrakech city. Three regions and a reference region were outlined. The monitoring regions were as follow: Medina region (RMd), an old water pipe site; El Azzozia region (RE), lands irrigated from untreated wastewaters; Drâa Lesfer region (RD), a mining site and finally a reference site (RR), far from any source of lead contamination. All sampling sites are shown in the Fig. 1. The water, soil and plant samples were collected during September 2009 and June

331 Fig.1: localisation of sampling site in Marrakech region. 3. Main results The results showed that the concentration of lead in water was below the limits and does not represent a health risk. However, concentrations of Pb in soils and plants especially in mining region were in most cases higher than those in El Azzozia region. Preliminary environmental risk assessment showed that the irrigation with urban wastewaters in El Azzozia region and contamination of soils and plants with mining wastes in mining region, could lead to the high health risk. Acknowledgements: The authors would like to thanks, Swiss National Science Foundation (# ), Bern and ETH Zürich, Switzerland for the Financial Support. References [1]: Li H.B., Yu S., Li G.L., Deng H., Luo X.S., Contamination and source differentiation of Pb in park soils along an urban rural gradient in Shanghai. Environmental Pollution, 159, [2]: Miller J.R., Villarroel L.F., Bolivia: Mining, River Contamination, and Human Health. Encyclopedia of Environmental Health [3]: Markus J., McBratney A.B., A review of the contamination of soil with lead II. Spatial distribution and risk assessment of soil lead. Environment International, 27, [4]: Yongsheng W., Qihui L., Qian T., Effect of Pb on growth, accumulation and quality component of tea plant. Procedia Engineering, 18,

332 P.210. Production des caroténoïdes et des flavonoïdes chez deux espèces du genre Solanum: Solanum nigrum L. et Solanum villosum L. sous contrainte saline 1,2 Saoussen Ben Abdallah, 2 Lisa Amilot, 1 Najoua Mssilini, 3 Hanen Falleh, 2 Abdelali Hannoufa, 1 Mokhtar Lachaâl & 1 Najoua Karray Bouraoui 1 Unité de Physiologie et de Biochimie de la Tolérance au Sel des Plantes, FST, Campus Universitaire, 2092, Tunis El Manar, Tunisie 2 Centre d'agriculuture et Agroalimentaire, Direction Générale de Science de la Technologie, Ontario- Canada 3 Laboratoire des Plantes extrémophiles, Centre de Biotechnologie à la Technopole de Borj Cédria (CBBC), BP 901, 2050, Hammam-Lif, Tunisie L'objectif de ce travail vise Abstract une étude de screening phytochimique quantitatif des métabolites secondaires(caroténoïdes et flavonoïdes) chez des plantes médicinales en présence de différentes concentrations de sel(0,50,100 et 150 mm NaCl). Le travail a porté sur deux plantes spontanées appartenant à la famille des solanacées, Solanum nigrum et Solanum villosum qui font partie des plantes médicinales de la flore Tunisienne. La quantification chromatographique des caroténoïdes a montré que S. nigrum présentent des teneurs de plus en plus réduites en présence de sel comparées avec celle du témoin. Cependant chez S.villosum,le traitement salin semble stimuler les teneurs en ces molécules. Pour les flavonoides, les pics le plus important de deux composés, la Quercétine et la Quercétine 3-β-D-Glucoside ont été détecté à la concentration 150 mm NaCl. Keywords :Caroténoïdes, Flavonoïdes, Contrainte saline,solanum nigrum, Solanum villosum 1. Introduction Parmi les grandes familles de métabolites secondaires des plantes douées d activité pharmacologiques, on trouve les composés phénoliques(les flavonoïdes) et les terpènes (la lutéine et la β-carotène) [1,2], dont les teneurs peuvent varier en fonction des facteurs de l'environnement tels que la salinité, la sécheresse, l excès de lumière, la température élevée [3]. Dans ce travail, nous proposons d'étudier l'effet du chlorure de sodium sur la production des caroténoïdes et des flavonoïdes dans les feuilles de deux plantes spontanées, Solanum nigrum et Solanum villosum. 2. Methodology Les cultures sont conduites en conditions contrôlées sur des plantules issues de semis et âgées de trois semaines. Au terme de 7 et de 21 jours de culture sur milieu additionné ou non de différentes concentrations de NaCl (0, 50,100 et 150 mm NaCl), une analyse quantitative des caroténoïdes et des flavonoïdes dans les feuilles de ces deux espèces a été déterminée par la chromatographie en phase liquide à haute performance (HPLC). 3. Main Results les teneurs en caroténoïdes (Lutéine et β-carotène) et en flavonoïdes ont été affectées par le sel. En effet, chez S. nigrum les teneurs en caroténoïdes sont diminuées en présence des différentes concentrations de NaCl, comparées à celles du témoin. Par contre Chez S.villosum, les teneurs en lutéine sont stimulées par la salinité (100mM) d'environ trois fois celle du témoin. De plus les analyses chromatographiques des extraits méthanoliques des feuilles de ces deux espèces ont montré que la salinité a augmenté la production de deux dérivés flavonoïques, la Quercétine et la Quercétine 3-β-D-Glucoside qui sont de très forts antioxydants. En effet, les feuilles de S. nigrum traitées avec 150 mm NaCl présentent les pics les plus importants en Quercétine 3-β-D-Glucoside. De même Chez S.villosum cette même concentration150 mm NaCl augmente la production du Quercétine. On peut conclure que chez les deux espèces la contrainte saline semble stimuler la production de molécules bioactives à fort pouvoir antioxydant. References [1] Ghasemzadeh A., & Ghasemzadeh N., 2011,Flavonoids and phenolic acids: Role and biochemical activity in plants and human, J. Med. Plant Res. 5, pp [2] Mayne ST.,1996, Beta-carotene, carotenoids and disease prevention in humans, FASEB J. 10, pp [3] Ramakrishna A., & Ravishankar GA., 2011, Influence of abiotic stress signals on secondary metabolites in plants, Plant Signal Behav. 6, pp

333 P.211. Alpha tocopherol and lipid profile in Tunisian Type 2 diabetic patients with and without cardiovascular diseases. Sarra Khlifi 1, Faouzi.Raoufi 2, Halima Ben Ahmed 1, Hajer Abaza 3, Houda Ben Jemaa 1, Abdelmajid Abid 4, Fethi Guemira 3, Ali Belhani 5, Abdallah Aouidet 1 1 School of Science and Technology of Health, Tunis, Tunisia 2 Medicines Control Laboratory, Tunis, Tunisia 3 Laboratory of clinic biochemistry, Institute of Salah Azaiez, Tunis, Tunisi a 4 Institute of Nutrition and Alimentary Technology, Tunis. Tunisia 5 Cardiology Service of Charles Nicolle hospital, Tunis. Tunisia Abstract Type 2 diabetes is characterized by glycemic disorders. These are considered as one of the main risk factors for cardiovascular disease which are associated with activation of oxidative stress. Many trials are demonstrated that cardiovascular complications related to atherosclerosis are mainly or partly dependent on hyperglycemia. Eighty patients with recent diabetes are recruited in this work: forty diabetic patients without cardiovascular diseases and the same number of diabetic patients with cardiovascular diseases. Twenty patients without nor diabetes neither cardiovascular diseases are served as controls. The decrease of vitamin E in diabetic patients with cardiovascular diseases compared with both diabetic patients without cardiovascular diseases reveal the relation of antioxidant molecules (Alpha Tocopherol or vitamin E) with the development of cardiovascular diseases in Tunisian newly diagnosed diabetes patients. Keywords: lipid profile; LDL/HDL; Alpha tocopherol; type 2 diabetes; cardiovascular diseases. 1. Introduction Vitamin E has been studied extensively in the prevention of atherosclerosis. The initial basic science studies suggested that vitamin E had beneficial effects on several different stages of the atherosclerotic process (1).for this reason we tried in this study to detect the level of Alpha Tocopherol in diabetic patients with cardiovascular diseases in comparison with diabetic patients without cardiovascular diseases. 2 Methodology 1-Patients: Forty Tunisian patients with newly diagnosed (some months<age of diabetes<5years) type 2 diabetes mellitus (20 men and 20 women) were recruited from the Institute of Nutrition and Alimentary Technology.Tunis. Forty diabetic patients with cardiovascular diseases (especially myocardial infracts and ischemic diseases) were also recruited from the cardiology service of Charles Nicolle hospital.tunis, are also implicated in this study. Another s twenty non diabetic healthy neither diabetes nor cardiovascular diseases) subjects (12 men and 8 women) served as controls. The diagnosis of diabetes was based on a previous history of diabetes on American Diabetes Association criteria (Expert Committee on the Diagnosis and classification of Diabetes Mellitus, 1997).The diabetic patients were treated by diet or antidiabetic drugs (i.e., biguanides and/or sulfonylurea). The following criteria were used for the recruitment of patients: age between years; body mass index (BMI); less than 30 Kg/m 2 and absence of kidney failure and liver or thyroid disease. Informed consent was obtained from all the patients before the study. 2-Laboratory procedures: 333

334 Blood samples were obtained after at least 8 h overnight fast and congealed at-80 until use. Plasma glucose concentration, total cholesterol, TG and HDL concentration were measured using enzymatic methods from Eli Tech. LDL cholesterol was calculated by the Friedwald formula (2).The Alpha tocopherol determination is determined by High Performance Liquid Chromatography (HPLC). All data are expressed by the mean ± S.D. To compare between s test was used. At P<.0.5, the test is means of two continuous variables the student considered significant. 3. Main Results Glycemic disorders were detected in diabetic patients with and without cardiovascular diseases. These disorders are associated with lipid abnormalities which are the hypertriglyceridemia and the decrease of HDL level accompanied with the increase of LDL level and revealed in the two groups of diabetes with and without cardiovascular diseases. The variation of Alpha tocopherol levels was noted in the diabetic patients with and without cardiovascular diseases. The HDL/LDL ratio decreases in the two diabetic with and without cardiovascular when compared with healthy patients. The LDL/HDL ratio increases in diabetic patients with and without CVD compared with controls. Different alpha tocopherol levels were revealed in men and women in diabetic patients without CVD. This difference is more pronounced in the two sexes in diabetic patients with CVD. When we interested with the LDL/HDL ratio, we found that this ratio is more important in diabetic men without CVD compared with diabetic women also without CVD. The same situation is also identified in diabetic men with CVD in comparison with diabetic women with CVD. Acknowledgements.Grateful thanks to all the personal working in School of Science and Technology of Health, the National Institute of Nutrition and Alimentary Technology; the Laboratory of Clinic Biochemistry of Salah Azaiez and the Cardiology Service of Charles Nicolle hospital for their help and collaboration 4. References 1 - Vitamin E and Atherosclerosis. Alvin C. Chan J. Nutr. October 1, 1998 vol. 128 no Estimation of the concentration of low-density lipoprotein cholesterol in plasma, without use of the preparative ultracentrifuge.friedwald, W.T., Levy, R.I., Fredrickson, D.S. (1972).. Clin. Chem. 18,

335 P.212. Outils de la gestion de la qualité et de la sécurité alimentaire : le HACCP méthodologie et impacts. 1 Lezzoum S; 1 Hamdi Tm; 2 Bendeddouche B. ( 1 ) laboratoire d'hygiène Alimentaire et Système Assurance Qualité (ENSV-Alger). ( 2 ) Ecole préparatoire science de la nature et de la vie (Alger). Résumé Pour assurer la prévention des dangers, le système HACCP est un des outils les plus efficaces. Depuis mars 2010, sa mise en place est devenue obligatoire en Algérie ; Cette dernière doit se faire suivant une méthodologie bien déterminée [4,5]. Notre étude a été réalisée dans une industrie de transformation des viandes. Nous avons effectué un audit d évaluation dans le but d estimer le niveau de conformité des infrastructures et du système qualité déjà mis en œuvre. Ensuite nous avons procédé à la mise en place du système HACCP [3].04 points critiques ont été identifié et ce en effectuant une analyse de dangers suivant 03 méthodes différentes [2]. La mise en place du système HACCP a permis l amélioration de l état d hygiène globale ainsi que l amélioration de la qualité hygiénique des produits. Mots clefs : sécurité alimentaire, HACCP, salubrité. 1. Introduction La sureté alimentaire est devenue une exigence mondiale ; en effet avec l internationalisation du commerce, le consommateur devient de plus en plus exigeant en matière de qualité et de sécurité, sa prise de conscience a augmenté, particulièrement suite aux différentes crises sanitaires qui ont secoué le monde. La mise en du système HACCP est considérée comme une des méthodes contribuant dans de gestion de la qualité et de la sécurité des aliments. 2. Méthodologie La réalisation de notre étude s est déroulée en deux étapes : - La première porte sur la réalisation d un audit initial d évaluation. - La deuxième porte sur la contribution à la mise en place du système HACCP suivant les recommandations du codex alimentarius, du décret exécutif n du 10 mars 2010 (JO N 17) et du guide d application Bonnes pratiques d hygiène et HACCP [2]. Audit initial. L audit initial a pour objectif d estimer le niveau de conformité des infrastructures et du système qualité déjà mis en œuvre. Il permet de faciliter la mise en place du système HACCP en relevant toutes les non conformités observées et en complétant les dossiers déjà existants. Un check liste a été établi conformément à la réglementation nationale et internationale. Dans le but d évaluer l état d hygiène au moment de l audit ainsi que le degré d application des bonnes pratiques, le check liste à été complété par [1]: - Des analyses de la qualité bactériologique de l air en utilisant un aéro-biocollecteur ; - Des analyses des surfaces, du matériel en contact avec le produit au cours de sa transformation et des mains des manipulateurs par ATPmètrie. Mise en place du système HACCP. Comme le préconise le codex alimentarius, la mise en place du système HACCP repose sur l application des 7 principes et 12 étapes [4,5]. 3. Résultats et discussion Les résultats de l audit ont révélés plusieurs non conformités relatives aux infrastructures et à l application des différentes procédures. L ensemble de ces non conformités à été pris en 335

336 charge en réalisant un plan de rénovation et en éditant, complétant et appliquant toutes les procédures manquantes et en cours d application. Nous avons procédé par la suite à la mise en place étape par étape du système HACCP comme le préconise la réglementation nationale et internationale. La mise en place du système HACCP avec l application des différentes procédures a permis l amélioration de l état d hygiène globale (surfaces, air et mains) ainsi que l amélioration de la qualité microbiologique du produit fini. Références [1] ASPEC., 2008 : La biocontamination - Salles propres, environnements maîtrisés et zones de confinement. Association pour la prévention et l étude de la contamination. Edition ASPEC, 266 pages. [2] BONNE R., WRIGHT N., CAMBEROU L., BACCAS F., DOODY J., 2010 : guide d application Bonnes pratiques d hygiène et HACCP lignes directrices HACCP, BPF et BPH-, 115 pages. [3] BORNERT G., 2000 : La place des analyses microbiologiques de denrées alimentaires dans le cadre d une démarche d assurance-sécurité. Revue Médecine Vétérinaire, pages : 151, 8-9, [4] CODEX ALIMENTARIUS., 2003 : code d usages international recommandé - principes généraux d hygiène alimentaire CAC/RCP , Rév. 4 (2003), 29 pages. [5] JORA., 2010 : décret exécutif n du 10 mars 2010 fixant les conditions et modalités d agrément sanitaire des établissements dont l activité est liée aux animaux, produits animaux et d origine animale ainsi que leurs transport. Journal Officiel de La République Algérienne N

337 P.213. Effet de la proline exogène sur le comportement morphologique et physiologique d une monocotylédone et d une dicotylédone sous contrainte hydrique Bekka S., Djebbar R. et Abrous-Belbachir O. Laboratoire de Biologie et Physiologie des Organismes (LBPO). Equipe de Physiologie Végétale. Faculté des Sciences Biologiques. USTHB. BP 32 El-Alia, Bab-Ezzouar, Alger. bekka.selma@live.fr Résumé Le déficit hydrique affecte tous les processus physiologiques et biochimiques de la plante tels que : la réduction du potentiel hydrique foliaire et de la conductance stomatique, l augmentation des espèces réactives d oxygène (ROS) et la perte de la stabilité membranaire. L accumulation de la proline représente une des réponses la mieux connue de la plante au stress hydrique L implication de cet acide aminé dans la tolérance des plantes aux stress a attiré l attention des chercheurs sur son utilisation afin de maintenir une bonne production végétale en conditions de stress. Dans ce cadre, nous nous sommes proposé d étudier l impact d un apport exogène de proline sur le comportement morpho-physiologique de deux espèces végétales cultivées, la lentille verte (Lens culinaris Medik.) et le blé tendre (Triticum aestivum Desf.) soumises à un stress hydrique simulé par du PEG Nous avons eu à déterminer les concentrations optimales de la proline exogène pour chacune des deux espèces et qui sont de 1mM pour le blé tendre et 2 mm pour la lentille verte. Nos résultats montrent que le déficit hydrique affecte l ensemble des fonctions physiologiques et métaboliques des deux espèces conduisant à une réduction de la croissance aussi bien de la partie aérienne que souterraine. L apport de la proline en conditions stressantes a réduit les effets délétères provoqués par ce stress sur les deux espèces étudiées. Ces effets positifs de la proline ont été observés sur la croissance (augmentation de l élongation de la tige des deux espèces, de celle des racines chez la lentille verte et augmentation de la masse de matière sèche des parties aériennes et souterraines), l intégrité membranaire, la teneur relative en eau et l activité catalase. Cette étude démontre bien l'importance de l application de la proline exogène dans la tolérance au stress osmotique et ouvre des voies quant à l utilisation de cet aminé dans l atténuation des effets négatifs du déficit hydrique sur la production végétale. Mots clés : stress osmotique, proline exogène, Triticum aestivum, Lens culinaris, résistance. 337

338 P.215. Electromagnetic field exposure and neural cells 1,2 Sihem Banasr, 1 Oualid Sbai, 1,2 Sana Banaceur, 2 Adlane Ould-yahoui, 2 Yatma Gueye 2, 2 Michel Khrestchatisky, 1 Mohsen Sakly and 1 Hafedh Abdelmelek 1 Laboratoire de Physiologie Intégrée, Faculté des Sciences de Bizerte 7021 Jarzouna, Tunisia. 2 Neurobiologie des Interactions Cellulaires et Neurophysiopathologie (NICN), UMR 6184 CNRS - Université de la Méditerranée, Faculté de Médecine, CS80011, Bd Pierre Dramard, Marseille Cedex 15, France Abstract This study investigated, morphology of neural cells and activity of metalloproteinase (MMPs 2 and 9), after radiofrequency (RF) (global system for mobile telecommunications (GSM) modulated 900MHz signal at a specific absorption rate of 0.8 W/kg and duration of 1 and 2 h) in primary cultured neurons and astrocytes. Cultures were exposed to cell phone for 1 and 2 hours. Our data showed that after 2 hours exposure, astrocytes oriented parallel to magnetic fields. The magnetic control of astrocytes alignment is useful in medical engineering applications. Additionally, radiofrequencies mediated a reduction in neurite length after exposure of 2 hours. Moreover, GSM exposure mediated changes in cytoskeleton reorganisation in cells. Further, neural cell cultures exposed to GSM RF fields showed no increase in production MMPs 2 or 9. Our results suggest that these proteinases use different pathways for trafficking and secretion which are not influenced by electromagnetic exposure. The results show that even relatively short-term exposure to cell phone up-regulate morphology and proliferation in cells. Keywords: : radiofrequencies, morphology, astrocytes, neurons, inhibition, 1 Introduction The development of telecommunication technology has led to a dramatic increase of electromagnetic fields (EMF) to which humans are exposed. In particular, the exponential increase in the use of mobile phones is raising major concerns on possible consequences of the interaction between radiofrequency (RF) and biological systems. Because of the proximity of mobile phones to the head and the electric activity of brain, nervous tissue may be a preferential target for the study of RF-EMF effects on biological substratesanother possible mechanism explaining the effects of exposure to 900MHz microwaves on chemical transmission, could involve the interference with intracellular enzymes such as kinases and phosphatases, and consequently, the alteration of phosphorylation status of neurotransmitters subunits [Moustafa et al., 2001]. Finally, the possibility that 900MHz GSM exposure could activate stress pathways in different cell types has also been suggested, with conflicting results [Leszczynski et al., 2002; Franzellitti et al., 2008; Huang et al., 2008]. 2 Methodology *Neuronal cultures *Astrocyte cultures *Exposure System The cell phone was manufactured by Nokia (model 2100; Ridgefield Park, NJ) (GSM signal; 900 MHz). *Immunofluorescence labelling *Gel zymography 338

339 3 Main Results 1- Gelatinase expression in supernatants mature cortical neurons after 2- Gelatinase expression in lysates l mature cortical neurons after exposure to GSM for 1 and 2 hours 5- Differential distribution of MMP-2/-9 relative to the myosin Va molecular motor protein in mouse cortical neurones 6- Differential distribution of MMP-2/-9 relative to the myosin Va molecular motor protein in astrocytes exposure to GSM for 1 and 2 hours Lysats supernatant MMP-2 MMP-2 Ctrl 1h EXP 1h Ctrl 1h 20 µm EXP 1h F-actin F-actin ctrol1 exp 1 ctrol2 exp 2 exp 1 ctrol2 exp 2 3- Gelatinase expression in lysates mouse astrocytes in culture after exposure to GSM radiofrequencies for 1 and 2 hours EXP 2h 20 µm EXP 2h Lysats supernatant Merge Merge ctrol1 exp 1 ctrol2 exp 2 ctrol1 exp 1 ctrol2 exp 2 DO MMP MMP T1 L EXP1 L T2 L EXP2 L T1 S EXP1 S T2 S EXP2 S Figure7 : Effects of 1 and 2 hours exposure to GSM (900 Mhz) on the level of MMPs 2 and MMP 9 in lysats and supernatants dans les lysats from mouse cortical neurones Série L T1 L EXP1 L T1 L EXP2 S T1 S EXP1 S T2 S EXP2 Figure 8: Effects of 1 and 2 hours exposure to GSM (900 Mhz) on the level of MMPs 2 In lysats and supernatants dans les lysats from astrocytes control 2 h gsm exposure Figure 9: Exposure to GSM 900 MHz (2 h) affects the morphology of cortical neural cell in comparison with the control group and indicated that GSM RF exposure for 2 h inhibit th e neuritis in neural cells (-43%) Acknowledgements: This study was supported by the Secretary of Scientific Research and Technology Tunisia and l.aboratoire de physiologie integrée and in the CNRS UMR 6184 Université de la Méditerranée - Institut Fédératif Jean Roche UFR de Médecine France. We thank Bechir Azib for his excellent technical assistance. References 1. Sbai O, Ferhat L, Bernard A, Gueye Y, Ould-Yahoui A, Thiolloy S, Charrat E, Charton G, Tremblay E, Risso J-J, Chauvin J-P, Arsanto J-P, Rivera S & Khrestchatisky M. Vesicular trafficking and secretion of matrix metaloproteinase-2, -9 and tissue inhibitor of metalloproteinases-1 in neuronal cells. Molecular and cellular Neuroscience 39: (2008). 339

340 P.216. Comparison of two methods for Enteroviruses detection in sludge samples 1 Sihem Jebri, 1 Fatma Hmaied, 2 Joan Jofre, 2 Francisco Lucena, 1 Insaf Barkallah, 1 Mouldi Saidi, & 3 Moktar Hamdi 1 Unité de Microbiologie et de Biologie Moléculaire, CNSTN, Technopôle de Sidi Thabet, 2020 Sidi Thabet, Tunisia. 2 Department of Microbiology, Barcelona University, Diagonal 645, Barcelona, Spain. 3 Laboratoire Ecologie Technologie Microbienne, Institut National Sciences Appliquées Technologie, BP 676, 1080 Tunis, Tunisia. Abstract The role of water in the transmission of infectious diseases is well defined; it may act as a reservoir of different types of pathogens. Enteric viruses can survive and persist for a long time in water and sludge, maintaining infectivity in many instances. This suggests the need to include virus detection in the evaluation of the microbiological quality of waters and sludge. In this study, genomes of enteroviruses were quantified by the quantitative real time PCR method (qrt-pcr) in sludge samples. Two methods were compared: a direct RNA extraction after elution, and after a further ultracentrifugation. Somatic coliphages were also enumerated as a viral indicator of enteric viruses. We found that the direct assay of RNA extraction virus elution from sludge yielded higher number of genomic copies of Enterovirus than after the ultracentrifugation assay; this can be explained by a concentration of inhibitors existing in the samples. Keywords: Sludge, Enterovirus, qrt-pcr, Viral concentration,somatic coliphages. 1. Introduction Wastewater Treatment Plants residues contain a large amount of microorganisms that are pathogenic for humans (viruses, bacteria and parasites). Enteroviruses presence in residues released directly from wastewater treatment plants in environment may affect human health after consumption of products contaminated by reclaimed water or sludge used in agricultural fields. There are a multitude of virus elution methods from sludge samples. In our study we compared two methods for viral recovery by using qrt-pcr. Somatic coliphages were also enumerated as they are viral indicator of Enteroviruses contamination in wastewater and sludge. 2. Methodology Sludge samples (100 g) eluted according to the United States Environmental Protection Agency standards [1], were analyzed for the quantification of genome copies of enteroviruses. Two different methods were applied for the genome copies detection after virus elution: Method 1: analyzing 1 ml of the eluate and following the complete process of quantification, including a second process of concentration by ultracentrifugation and RNA extraction for the analysis by qrt-pcr. Method 2: analyzing 140 ul of the eluate without any further concentration method and RNA extraction for the analysis by qrt-pcr.. Viruses in the eluates after coagulation-floculation were further concentrated and purified as described elsewhere [2,3]. A one-step quantitative real time RT-PCR method was performed 340

341 with a set of primers and Taqman probe targeting a 155 bp of the 5` untranscribed enteroviral genome region [4,5]. Standard curve is generated by transforming E. coli JM109 cells with a pgem-t Easy plasmid containing a 155 bp sequence of a single copy of enteroviral 5`UTR insert. 3. Main Results Table 1: Enteric viruses genomic copies (GC)and somatic coliphages (SOMPH)number in sludge samples. Sample Method CT GC /tube GC/ml GC/g dry weight SOMCPH/100ml E E E+04 A 1.00E E E E+04 B C D E F 1 UD UD UD UD E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E+04 1 UD UD UD UD E E E E E E E E+06 The second method (without ultracentrifugation) yielded higher genomic copies than the first one which is recommended by the USEPA. Somatic coliphages considered as indicators of viral contamination in water and sludge are also abundant in all samples. References [1] United States Environmental Protection Agency, USEPA, 2003, Environmental Regulations and Technology Control of Pathogens and Vector Attraction in Sewage Sludge.Appendix H. Method for the Recovery and Assay of Total Culturable Viruses from Sludge, pp [2] Hundesa, A., Maluquer de Motes, C., Albinana-Gimenez, N., Rodriguez-Manzano, J., Bofill-Mas, S., Su nen, E.& Girones, R., 2009, Development of a qpcr assay for the quantification of porcine adenoviruses as an MST tool for swine fecal contamination in the environment. J. Virol.Methods 158, pp [3] Puig, M., Jofre, J., Lucena, F., Allard, A., Wadell, G.& Girones, R., 1994, Detection of adenoviruses and enteroviruses in polluted waters by nested-pcr amplification. Appl. EnvironMicrobiol. 60, pp [4] Hwang, Y., Leong, O. M., Chen, W & Yates, M. V., 2007, Comparison of a Reporter Assayand Immunomagnetic Separation Real-Time Reverse Transcription-PCR for the Detection ofenteroviruses in Seeded Environmental Water Samples. Appl. Environ. Microbiol., 73, pp [5] Nijhuis, M., van Maarseveen, N., Schuurman, R., Verkuijlen, S., de Vos, M., Hendriksen K. & van Loon, A. M., 2002, Rapid and sensitive detection of all members of the genus enterovirus indifferent clinical specimens by real-time PCR. Journal of Clinical Microbiology. 40, pp

342 P.217. Etude comparative de la qualité et de la stabilité des huiles d olive obtenues par deux phases trois phases et repassage Sonda Ammar, Amir Ben Mansour, Ridha Abdelhedi, Mohamed Bouaziz* Laboratoire d Electrochimie et Environnement, Ecole Nationale d ingénieur de Sfax 3038 BP 1173 Sfax. Université de Sfax, Tunisie. mohamed.bouaziz@fsg.rnu.tn Résumé Le travail effectué dans cette étude entre dans le cadre de la recherche d indices analytiques permettant de bien définir une bonne méthode d extraction afin d obtenir des huiles ayant d excellente paramètres de qualités. Pour cela nous avons étudié l évolution des caractéristiques physico-chimique des huiles extraites de la variété Chemleli de Sfax pour trois systèmes : bi-phasique, tri-phasique et repassage. Dans cette étude nous avons suivie les critères de qualité, l analyse des pigments, analyse de pureté, la composition phénolique totale et individuelle et les analyses sensorielle des différentes huiles. L analyse de l extrait (eauméthanol) de la pates d olive de variété chemlali par LC-MS/MS en mode négatif, nous a permis d identifier pour la premier fois 15 composés phénoliques. 1. Introduction L huile d olive est le produit méditerranéen par excellence. On la retrouve à travers L histoire, depuis la civilisation grecque jusqu à nos jours. Elle est la principale source de matières grasses du régime crétois ou du régime méditerranéen [1]. Si l huile d olive est un produit intéressant d un point de vue nutritionnel c est tout d abord pour sa composition en acides gras. Outre cette composition particulière en acides gras, l huile d olive est surtout intéressante pour ses composés minoritaires tels que les polyphénols, Ces composés vont permettre une bonne conservation de l huile d olive dans le temps puisque ces molécules ainsi que le tocophérol vont prévenir son oxydation. 2. Méthode de travail Tous d abord nous avons commencé par l analyse physico-chimique de l huile d olive, puis nous avons réalisé l extraction des composés phénoliques à partir des trois échantillons d huiles d olive et de la pate d olive. Ensuite ont traite la composition chimique, et la mesure de l activité antioxydant par la méthode de DPPH ont été réalisés [2]. En fin un criblage chimique par LC-MS/MS des différents composés phénolique présente dans la pate d olive de la variété chemlali [3]. 3 Résultats Tableau1 : paramètres de qualité et de pureté des huiles obtenues par trois systèmes d extraction I.A K 23 2 K 270 I.P Chlorophy lle Carotè ne A.Olèiq ue A.Palmitiq ue A.Linoléiq ue Tocophér ols Classificati on Deux phases Vierge extra Trois phases Vierge extra Repassa ge Vierge courante Norme

343 A Partir des résultats présentés dans le tableau 1 on peut déduire que les principaux critères de qualité de l huile d olive tels que l acidité, les analyses des pigments et l indice de peroxyde sont fortement influencés par les changements des systèmes d extraction. En effet la teneur en acidité varie entre 0.2 pour l huile bi-phasique et 0.23 pour l huile tri-phasique qui sont classe dans la catégorie extra vierge alors que pour l huile de repassage cette teneur égal à 1.58 et calasse comme une huile vierge. Alors que d autre paramètres comme l extinction spécifique K 232 et K 270, la composition en tocophérols, la composition acidique particulièrement l acide Oléique, Palmitique et Linoléique ne présente pas de différences significatives. Pour les tocophérols la teneur varie de mg/kg pour les huiles triphasiques et pour bi-phasique. Nous pouvons ainsi déduire donc que le système de centrifugation à deux phases permet d obtenir des huiles plus riches en antioxydants à savoir les polyphénols et les carotènes. Le système de centrifugation à trois phases peut également donner des huiles de bonne qualité alors que le système de repassage permet d obtenir des huiles avec des caractères physico-chimiques qui dépasse la norme fixée par le COI. References [1] Bouaziz M., Feki I., Ayadi M., Jemai H., & Sayadi S., 2010, Stability of refined olive oil and olive-pomace oil added by phenolic compounds from olive leaves, European Journal of Lipid Science and Technology, pp [2] Bouaziz M., Jemai H., Khabou W., &Sayadi S., 2010, Oil content phenolic profiling and antioxidant potential of Tunisian olive drupes, Journal of the Science of Food and Agriculture, pp. 90(10), [3] Bouaziz M., Grayer RJ., Simmonds MSJ., Damak M., & Sayadi S., (2005b), Identification and antioxidant potential of flavonoids and low molecular weight phenols in olive cultivar Chemlali growing in Tunisia, J Agric Food Chem 53:

344 P.218. Etude de l ovogenèse et de l ultrastructure des gamètes d une Annélide Polychète : Perinereis macropus dans le golfe de Gabès 1 Zribi Soumaya & 1 Tekaya Saïda 1 Département de biologie, faculté des sciences de Tunis, campus universitaire, 2092 El Manar II Tunis, Tunisie. Abstract Perinereis macropus (Claparède, 1870) est une Annélide polychète présente dans le golfe de Gabès, mais dont la biologie de la reproduction en Tunisie n est pas encore connue. Des prélèvements mensuels ont été effectués entre août 2004 et juillet 2005 dans une station située au niveau de l embouchure de l oued Ferd. Des ponctions cœlomiques permettent de décrire l évolution des gamètes. Les résultats montrent que l ovogenèse est asynchrone, contrairement à ce qui est couramment admis. Par ailleurs, l étude biométrique de la croissance ovocytaire permet de préciser le cycle sexuel femelle. La maturité survient en avril, avec un diamètre moyen de l ordre de 250±32,67 μm, alors que la libération des gamètes ne s est produite qu en mai. Ainsi la période de reproduction s étendra de mars à juin dans le golfe de Gabès. L étude ultrastructurale montre plusieurs évènements caractéristiques. Mots clés: Polychètes, Perinereis, macropus, ovogenèse, ultrastructure. 1. Introduction Les Polychètes sont des Annélides gonochoriques qui ne présentent pas d organes génitaux bien différenciés. Cependant, ils possèdent des masses de cellules gamétiques, qui apparaissent comme des renflements du péritonium dans certains segments du corps [1]. À maturité, les produits génitaux sont libérés, tombent dans le coelome, puis sont évacués par les néphridies [2]. Certains auteurs considèrent ces structures, chez les femelles de la majorité des Polychètes, comme des ovaires [3,4]. L ovogenèse peut être conventionnellement divisée en deux phases : une phase de prolifération et une phase de développement. Par ailleurs, on peut rencontrer deux types fondamentaux d ovogenèse : ovogenèse extraovarienne et ovogenèse intraovarienne. Dans le premier cas, les cellules germinales quittent l ovaire précocement, au cours de la prévitellogenèse, et subissent l ovogenèse dans le coelome. Dans le cas de l ovogenèse intraovarienne, les ovocytes restent dans l ovaire, où se déroule la plus grande partie de la vitellogenèse. Ces derniers, une fois évacués dans le liquide coelomique, vont subir un accroissement et la différenciation [5]. L ovogenèse peut être synchrone, comme le cas de la plupart des Polychètes, telles que Nereis diversicolor et Perinereis cultrifera. En revanche, chez d autres espèces, telles que Hesiocaea methanicola [6], l ovogenèse présente une évolution asynchrone, où on rencontre chez le même individu des ovocytes de tailles différentes et appartenant à des stades différents de vitellogenèse. Afin d obtenir des informations supplémentaires quant à la biologie de reproduction des Nereidae, nous envisageons, dans ce travail, d étudier l ovogenèse de Perinereis macropus dans le golfe de Gabès. Pour cela, deux approches ont été utilisés : (1) le suivi du cycle de reproduction par ponction cœlomique et observation au microscope photonique ; (2) l étude ultrastructurale des gamètes. C est une espèce abondante durant toute l année, qui présente une prédisposition à l élevage au laboratoire. En outre, cette espèce n a fait l objet d aucune étude biologique 344

345 2. Matériel et méthode 19, 20, 21 et 22 décembre 2012 Hôtel EL Mouradi Douz - Tunisie Les spécimens de P. macropus ont été récoltés sur les bordures de l oued El Ferd du golfe du Gabès. Les prélèvements ont été effectués à marée basse. Le sexe, le stade de développement de chaque individu ainsi que l étape de la gamétogenèse ont été déterminés par l examen microscopique de la ponction du liquide coelomique. Pour les femelles, le diamètre d une trentaine d ovocytes est mesuré à l aide d un microscope photonique muni d un micromètre étalonné. L ultrastructure des gamètes est observée au microscope électronique à transmission. 3. Résultats L étude biométrique de l ovogenèse de la population de P. macropus permet de dégager des données précieuses sur le cycle biologique de cette espèce. En effet, si les produits génitaux libres dans le coelome sont présents pendant toute l année, des fluctuations de diamètre et de nombre sont observées en hiver et au printemps. Ceci suggère que la période de reproduction est concentrée pendant ces deux saisons de l année. D autre part, cette étude montre que la croissance ovocytaire est asynchrone, puisque nous avons rencontré chez le même individu des ovocytes présentant des diamètres différents. L ovogenèse est divisée en trois stades : la prévitellogenèse, la vitellogenèse ou croissance rapide et la maturité. Au cours du premier stade, les ovocytes de P. macropus présentent un diamètre ovocytaire compris entre 10 et 100 μm. Pendant le grand accroissement, le diamètre ovocytaire s accroît et atteint 180 μm. À maturité, les ovocytes atteignent leur diamètre maximal, qui oscille chez notre espèce entre 200 et 350 μm avec une moyenne de 250 μm. L ultrastructure des gamètes nous a permis de révéler quelques événements caractéristiques : - Une des caractéristiques cytologiques principales est une prolifération des mitochondries ainsi qu un développement du réticulum endoplasmique. - Au niveau du noyau, un matériel fibrogranulaire est formé, il s agit du nuage. Il est admis que le nuage d origine nucléaire correspond à des ribonucléoprotéines. - L apparition du complexe synaptoménal indiquant la prophase I de la méiose. - La formation rapide des microvillosités à la surface ovocytaire est stimulée par la libération des jeunes ovocytes dans le coelome. - La maturité des ovocytes est accompagnée par la formation d une membrane vitelline caractérisée par de nombreuses microvillosités. Ces dernières sont en contact direct avec l environnement externe. - Pendant la vitellogenèse, le volume de l ovocyte subit une augmentation considérable suite à l accumulation de structures dans l ooplasme appelées globules vitellins. Références [1] Barnes R.D.,1980, Invertebrate Zoology, Saunders College, Philadelphia, PA, États-Unis,. [2] Hauenschild C.,1966, Der hormonale Einfluss des Gehirns auf die sexuelle Entwicklung bei dem Polychaeten Platynereis dumerllin, Gen. Comp. Endocrinol. 6, pp [3] Clarck R.B.,& Olive P.J.W., 1973, Recent advances in polychaete endocrinology and reproductive biology, Oceanogr. Mar. Biol. Annu. Rev. 11, pp [4] Olive P.J.W.,1973, The regulation of ovary function in Cirratulus cirratus (Polychaeta), Gen. Comp. Endocrinol. 20, pp [5] Eckelbarger K.J., Young C.M., Ramirez Llodra E., 2001, Gametogenesis, spawning behavor, and early development in the iceworm Hesiocaeca methanicola (Polychaeta: Hesionidae) from methane hydrates in the Gulf of Mexico, Mar. Biol. 138, pp [6] Desbruyéres D., &Toulmoud A., 1998, A new species of hesionid worm, Hesiocaeca methanicola sp. nov. (Polychaeta: Hesionidae), living in ice-like methane hydrates in the deep Gulf of Mexico, Can. Biol. Mar. 39, pp

346 P.219. Lactobacillus rhomnosus GG prevents Zearalenone immunotoxicological effects in Balb/c mice 1 Takwa Bedhiafi, 1 Samir Abbès, 1 Jalila Ben Salah-Abbès 1 Ridha Ben Younes & 1 Ridha Oueslati 1 Unit of Immunology, Environmental Microbiology and Cancerology, Faculty of Sciences of Bizerte, University of Carthage, TUNISIA Abstract Zearalenone (ZEN) is a potent estrogenic metabolite produced by some Fusarium species. No treatment has been successfully employed to get rid of the ZEN contained in foods. This study was conducted to evaluate the ability of lactic acid bacteria Lactobacillus rhomnosus GG to protect Balb/c mice against immunotoxicity induced by ZEN. Lactobacillus rhomnosus GG was added alone or simultaneously with a toxic intragastric ZEN dose by orally route. The experimental approach consisted of 4 mice treatments. The first group received cfu/kg bw of bacterium. Two experimental groups received respectively ZEN alone (40 mg/kg) and ZEN with bacterium ( cfu/kg bw). The control groups received distilled water. 48 hours after treatment, blood samples were collected for haematological and serum biochemical parameters measurements. ZEN treatment significantly induced dramatically effects on the haematological and the most of biochemical serum parameters and induced degenerative changes in the hepatic and renal tissues; while, the mixture of Lactobacillus rhomnosus GG with ZEN induced a reestablishment of haematological parameters, levels of serum biochemical enzyme activities and histological pictures of both liver and kidney. Thus, our data strongly suggested that deleterious effects of ZEN could be overcome or, at least, significantly diminished by bacterium addition. Moreover, by itself did not show any toxic effects. Keywords: ZEN; immuntoxicity; Lactobacillus rhomnosus GG; detoxification 1. Introduction Zearalenone (ZEN) is a naturally occurring estrogenic substance produced by Fusarium fungi growing on grains, mainly corn and hay exposed to high moisture during storage. Several studies have reported high incidences of ZEN in several commodities frequently used in human and animal diets. It induces adverse liver lesions with subsequent development of hepatocarcinoma [1]. Recent studies have shown that the addition of lactic acid bacteria to the ZEN-contaminated diets greatly reduced the bioavailability of this toxin in the gastrointestinal tract due to the high adsorptive properties of these bacteria against mycotoxins [2]. In this study, Lactobacillus rhomnosus GG was evaluated regarding its prevention against immunotoxicological effects of ZEN. 2. Methodology Animals and Experimental design: Balb/c mice were randomly divided into four groups (6 mice/group) and treated orally with the respective treatment with Lactobacilus rhomnosus GG and ZEN separately or simultaneously. At the end of the treatment period, blood samples were collected from the retro-orbital venous plexus and lymphoid organs were collected for viability and histological studies. Haematological and Biochemical parameters determination: all haematological parameters were determined using a blood counter (Coulter STKS model, Coulter electronics, Ltd., Luton, UK). The biochemical parameters: aspartate amino-transferase (ASAT), alanine amino-transferase (ALAT), alkaline phosphatase (ALP), bilirubin conjugated (BILD), bilirubin total (BILT) and blood serum creatinine (CRE) were determined with the biochemical parameter counter (C 9 PRO. BECKMAN). 346

347 Histological study: All mice were sacrificed 48 hours after treatment. Liver and kidney were dissected out, fixed in bouin s fluid, embedded in paraffin and sectioned in pieces of 5 µm thickness and stained with haematoxylin and eosin (H&E) for microscopy examination. The slides were examined under 400 magnifications using an optical microscope (Carl Zeiss, Germany). Cell viability assessment: Lymphoid cells were isolated from spleen and thymus samples as described by Boyum, (1968) using Ficool-paque solution. Thymocytes and spleenocytes viability using trypan bleu were evaluated by a direct assessment in malaises slides. Life and dead cells were counted using an optic microscope (Nikon Eclipse E 400). 3. Main Results Results of haematological study indicated that treatment with L. rhomnosus GG alone did not cause significant changes in blood parameters (p<0.05). Treatment with ZEN alone caused a significant increase (p<0.005) in WBCs, HCT, HGB and MCVs, and a significant decrease in PLTs blood levels indicating haemostasis blood system damage. Results of serum biochemical analysis revealed that treatment with an orally dose of ZEN (40 mg/kg bw) significantly increased blood levels of ALAT, ASAT, PAL, BILD and BILT (p<0.05 to 0.005) indicating liver toxicity and decreased blood levels of CRE (p<0.05) showing that kidney function was affected. Treatment with of L. rhomnosus GG did not change blood levels of biochemical parameters, as compared to non-treated mice. The histological studies confirmed the above cited results. In fact, spleen, liver, kidney and thymus showed general toxicity by lymphoid infiltration and cells necrosis. Moreover, the cell viability was increased by Zen toxicity and corrected by the co-traitment with L. rhomnosus GG. Acknowledgements: The work was supported by Tunisian Ministry of Higher Education and Scientific Research (Unit of Immunology, Environmental Microbiology, and Cancerology). Faculty of Sciences Bizerte. References [1] Abbès S., Ben Salah-Abbès J., Sharafi H., Jebali R, Noghabi KA., & Oueslati R., Ability of Lactobacillus rhamnosus GAF01 to Remove AFM 1 in Vitro and to Counteract AFM 1 Immunotoxicity in Vivo. J. Immunotox. pp [2] Abbès S., Ben Salah-Abbès J., Sharafi H., Noghabi KA., & Oueslati R., Interaction of L. plantarum MON03 with Tunisian Montmorillonite clay and ability of the composite to immobilize Zearalenone in vitro and counteract immunotoxicity In vivo. I Immunoph. Immunotox. pp

348 P.220. Biosurveillance de la pollution organostannique par la bernique Patella caerulea utilisée comme espèce bioaccumulatrice 1 Tasnime Slama, 1 Sami Abidli, & 1 Najoua Trigui El Menif 1 Life Sciences Department, Science Faculty of Bizerte, University of Carthage, BP 7021 Zarzouna, Tunisia Résumé Les composés organostanniques (butylétains) ont été largement utilisés comme agents actifs dans les peintures antisalissure. Leur biosurveillance est surtout assurée par les gastéropodes touchés par l imposex (masculinisation du tractus génital externe chez la femelle) suite à l exposition chronique à ces composés. Dans ce travail, nous avons analysé le tributylétain et ces dérivés dans la bernique Patella caerulea à fin d évaluer la capacité accumulatrice de cette espèce. Des analyses ont été également réalisées dans le substrat sur lequel vit ce gastéropode. Quatre stations du littoral tunisien ont fait l objet de prélèvements durant le moi d octobre 2011 (Tabarka, Bizerte, Gabès et Zarat). La taille des spécimens à été prise en considération dans l analyse, deux classes ont été choisies (20-30mm) et (40-50mm). Les résultats montrent une accumulation différente en fonction des stations, de la classe de taille et du type d étain substitué (tri, di ou monosubstitué). La concentration des butylétains totaux dans la chair de l animal varie entre 21,1 ng/g de matière sèche (MS) à Zarat et 128,3 ng/g de MS à Bizerte. Dans le substrat, les concentrations trouvées sont plus basses allant de 11,3 à Gabès à 27,0 à Bizerte. La comparaison de ces résultats avec d autres études réalisées sur des gastéropodes connus par le développement de l imposex révèle que la patelle est plus accumulatrice. Ces observations nous ont permis de suggérer l utilisation de cette espèce comme indicatrice de pollution par le butylétain vue sa capacité importante de bioaccumulation, sa vaste distribution géographique et son abondance. Mots clé: Butylétain, Gastéropode, bioaccumulation, Tunisie 348

349 P Propriétés antibactériennes et antiprolifératives de plantes médicinales du Burkina Faso Ben Ajmia Wafa, Khannous Lamia, Traoré Al Ibrhim, Gdoura Radhouane Unité de Recherche Toxicologie-Microbiologie Environnementale et Santé ; Faculté des Sciences de Sfax- Université de Sfax-Tunisie. Résumé Nous avons évalué in vitro le pouvoir antimicrobien et anti proliférative des extraits hydro-alcooliques et aqueux de deux plantes utilisées en pharmacopée traditionnelle en Borkina Faso. La première partie de ce travail, a porté sur l extraction chimique des molécules bioactives. En second lieu nous avons réalisé un criblage sur milieu solide des extraits ayant une activité sur une souche de Salmonella multi résistante aux antibiotiques. Ce test est suivie d optimisation de la concentration minimale inhibitrice et celle bactéricide (CMI et CMB). Nous avons montré que les extraits de Ta et de Tm, en plus de leur activité antibactérienne, ont une activité antiproliférative sur des lignés cellulaires de cancer de poumon. Le test MTT est utilisé pour évaluer le nombre de cellules viables suite à l action des extraits préparés. Nos résultats revêtent une certaine importance dans le potentiel thérapeutique de ces maladies. Mots clés: Salmonella, activité antibactérienne, cancer du poumon, cytoxicité, plantes médicinales 1 Introduction L incidence des infections bactériennes et des tumeurs constituent un problème de santé publique à cause de leur fréquence et leur gravité [1]. La situation est d avantage plus pré occupante à cause de l apparition des microorganismes antibiorésistants et l indisponibilité à l heure actuelle des moyens de diagnostic qui permettent le dépistage précoce des tumeurs. Face à ces nombreux obstacles que présente l'utilisation des médicaments disponibles, il est indispensable de rechercher de nouvelles substances bioactives efficaces et à large spectre d'action. 2 Méthodes 2.1. Préparation des extraits végétaux Les extraits aqueux des feuilles de «Ta» et «Tm» ont été obtenu par décoction et ceux éthanoliques par macération [2] Etude de l activité antibactérienne L activité antibactérienne a été évaluée par la méthode de diffusion sur agar [2] suivie de la détermination de la Concentration Minimale Inhibitrice (CMI) et de la Concentration Minimale Bactéricide (CMB) [2] Etude de l activité antiproliférative Le traitement des cellules dure 24h, 48h et 72h avec des concentrations croissantes des extraits. L absorbance a été mesurée à 570 nm. 349

350 Fig.1 Principe de test MTT 3 Résultats Les résultants de test d activité antimicrobienne des extraits «Ta» et «Tm» sont représentées dans le tableau 1. Tableau 1: Diamètres d inhibition, Concentration Minimale Inhibitrice et Concentration Minimales Bactéricide (mg/ml) pour la souche A Echantillon Type Diamètre CMI CMB Interprétation d'extraction d inhibition (mg/ml) (mg/ml) Ta Aqueuse ,5 Bactéricide Alcoolique 18 37,5 25 Bactéricide Tm Alcoolique Bactéricide Les résultats du test MTT des extraits alcooliques des plantes «Ta» et «Tm» sont indiquées dans le tableau 2. Tableau 2: Viabilité cellulaire en fonction du temps Echantillon Concentration (µg/ml) Aprés 24h Aprés 72h Tm 40 43,051% 25,798% Ta 40 45,42 % 28,19 % Acknowledgements: Nous remercions tous les membres d Unité de Recherche Mécanismes Moléculaires et Pathologies à Faculté de Médecine de Monastir pour leur collaboration technique. References [1] OMS (Organisation Mondiale de la Santé), 2003, Directives OMS sur les bonnes pratiques agricoles et les bonnes pratiques de récolte (BPAR) relatives aux plantes médicinales. [2] Motamedi H., Safary A., Maleki S. & Seyyednejad S.M.,2009, Ziziphus spina-christi, a Native Plant from Khuzestan, Iran, as a Potential Source for Discovery New Antimicrobia Agents, Asian Journal of Plant Sciences. 350

351 P.223.Effect of sodium arsenite on plasma gonadotrophins, testosterone and intratesticular testicular fluids in rats 1 Wafa Kharroubi Nawa,² Monia Zaouali,ᶟ Fadwa Neffati, 1 Mohammed Hammami, 1 Rachid Sakly 1 Laboratory of Biochemistry, UR03/ ES-08 Human Nutrition and Metabolic Disorders, Faculty of Medicine Monastir 5019, Tunisia; ²Laboratory of physiology and functional explorations, faculty of Medicine Ibn Eljazzar, Sousse 4002, Tunisia, ᶟ Department of Biochemistry CHU Fattouma Bourguiba, Monastir 5019, Tunisia Abstract Despite the known toxic effects of Arsenic (As), it might have some therapeutic application in cancer treatment and some use like a food conservative, herbicide, insecticide. These dual roles of arsenic have attracted a renewed research in organ pathophysiology. The effect of chronic oral exposure to sodium arsenite (1mg/L, 10mg/L) via drinking water for 45 and 90days was evaluated in adult male rats. Changes in weight of body and paired testicular, circulatory concentrations of hormones (LH, FSH, Testosterone), were monitored in this study. Our data showed no significant variations are showed in the weight of the body and testis. A significant decrease in level of LH only at a dose of 10mg/L and for 90 days of exposure, while no variation was found in plasma FSH. A significant decrease was observed in plasma testosterone, seminiferous fluid and interstitial fluid at a high dose for 45 and 90 days. Keywords: sodium arsenite, gonadotropins, testosterone, rat 1. Introduction Arsenic is a widespread environmental contaminant with mutagenic and carcinogenic effects. Despite this effects arsenic is used as herbicides, rodenticides, insecticides, food conservative, and by product of used fossil fuel [1] and recent investigations, reported the therapeutic application of this metalloid in the treatment of lymphoid and hemopoietic neoplasmas such as acute promyelocytic leukemia [2]. Arsenic has been found to impair male reproductive function[3]. There are several possible mechanisms for the antigonadal activities of toxic chemicals. The aim of this study is to evaluate the effect of sodium arsenite on male gonads as well as the assessment of varied response of low and high arsenite doses on sex hormones. In addition this work is an opportunity to speculate the length of treatment. 2. Methodology 60 Male adult wistar rats weighing 104±4 g, were divided into 6 groups of 10 animals each, and given drinking tap water containing 0, 1, 10mg/l sodium arsenate for 45 and 90 days. According to the method of Turner et al. [4]seminiferous and interstitial fluids were extracted. LH and FSH are assayed by radio-immunoassay by specific kit. Plasmatic testosterone and intratesticular are evaluated by automat. 3. Main results No significant differences have observed in treated groups in body and testes weights (Table1). A significant decrease in serum level of testosterone was observed in groups exposed to 10mg/l (Table 2). 351

352 19, 20, 21 et 22 décembre 2012 Hôtel EL Mouradi Douz - Tunisie Table 1: Weight of body and relative testes in control and treated animals Initial body weight (g) Final body weight (g) Relative testes weight (g/100g body weight) T1 T1 D1 T1 D2 T2 T2 D1 T2 D2 102,6± ,2± ,1± ,88± ,15± ,78± ,44± ,4± ,6± ,28± ,29± ,73±5.68 1,07±0.18 1,10±0.12 1,11±0.17 1,07±0.17 1,05±0.11 1,08±0.07 A significant depletion in the seminiferous tubule fluid in groups exposed to 10mg/l of arsenite (table 2). A significant decline in the interstitial fluid was showed in the groups treated by 10mg/l and in the group exposed to 1mg/l of arsenite for 90days (Table 2). A reduction in LH concentration was reported at 10mg/l for 90days of arsenite exposure (Table 2). No significant variation in the FSH level was showed (Table 2). These value are the mean ±SE (n=10). T1: 45days of treatment, T2: 90days of treatment, D1: 1mg/L of arsenite, D2: 10mg/L testosterone STF IF T1 T1D1 T1D2 T2 T2D1 T2D ± ± ±0.98 ᵇ 5.15 ± ± ± ± ± ± ± ±17.39 ᵇ ±39.58 ᵇ LH 0.3 ± ± ±0.13 FSH References Table 2. plasmatique testosterone, FSH, LH and intratesticular testosterone concentrations ± ± ± ± ±0.05 ᵇ ± ± ± ±1.09 ᵇ 17 ±2.3 ᵇ 72 ± ± ±0.09 ᵇ 0.21 ±0.12 These value are the mean ±SE (n=10). T1: 45days of treatment, T2: 90days of treatment, D1: 1mg/L of arsenite, D2: 10mg/L Significance at p < Values on the same row with different letters are significantly different ±2.21 ᵇ [1] Flora S.J. Dube S.N., Arora U., Kannan G.M., Shukla M.K. & Malhotra P.R., 1995, Therapeutic potential of meso 2,3-dimercaptosuccinic acid or 2,3-dimercaptopropane 1-sulfonate in chronic arsenic intoxication in rats., Biometals. 8, pp [2] Soignet S. L., Maslak P., Wang ZG., Jhanwar S., Calleja E., Dardashti L. J., Corso D., DeBlasio A., Gabrilove J.,, Scheinberg D. A., Pandolfi P. P.& Warrell R. P.,1998, Complete Remission After Treatment Of Acute Promyelocytic Leukemia with Arsenic Trioxide, N. Engl. J. Med. 339, pp [3] Sarkar M., Chaudhuri G.R.,Chattopathyay A.& Biswas N.M., 2003, Effect of sodium arsenite on spermatogenesis, plasma gonadotrophins and testosterone in rats, Asian J. Androl.5, pp [4] Turner T.T., Jones C.E., Howards S.S., Ewing L. L., Zegeye B., Gunsalus G.L.,1984,On the androgen microenvironment of maturing spermatozoa, Endocrinology.115, pp

353 P.224. Protective effects of Malva sylvestris on carrageenan-induced inflammatory paw edema in rats 1, 2 Wafa Marouane, 2 Ahlem Soussi, 1 Rim Frikha, 1 Youssef Gargouri, 2 Abdelfattah El Feki & 1 Sofiane Bezzine 1 Biochemistry Deparment, National School of Engineers, University of Sfax, 3038, TUNISIA 2 Life Sciences Department, Science Faculty of Sfax, University of Sfax, BP 1171 Sfax 3000, TUNISIA. Abstract Carrageenan is widely used in the investigation of the physiopathology of acute local inflammations. Malva sylvestris was used in tropical application as a demulcent and anti-hemorrhoidal to skin. In this work, we studied the anti-inflammatory and antioxidant effect of Malva sylvestris on rats inflamed by carrageenan. For this reasons, water, Malva sylvestris decoction and hexane and ethanol extracts were administered to rats for 8 days. One hour after the last treatment, carrageenan was injected into the subcutaneous tissue of the right hind paw. Carrageenan administration induced the development of edema that contained many polymorphonuclear cells in paw tissue. Oral administration of Malva sylvestris decoction and extracts reduced inflammation. Furthermore, carrageenan induced a significant decrease in the activities of antiperoxidative enzymes. However, no changes were observed in carrageenaninduced rats receiving Malva sylvestris decoction and extracts. In conclusion, Malva sylvestris could be used as a valuable therapy in inflammed subjects. Keywords Carrageenan, inflammation, Malva sylvestris, oxidative stress, antioxidant enzymes, 1. Introduction At a primary interface between the body and the surrounding environment, the skin represents the first line of defense against broad injury and invasion by microbial pathogens and trauma [1]. The acute inflammatory reaction is characterized by the exudation of plasma proteins leading to a local edema formation [2], the development of cytokines and the release of cells from other chemical compounds [3]. High levels of inflammatory cytokines and reactive oxygen species were considered as contributors to the pathophysiological mechanisms associated with various inflammatory skin disorders [4]. Recent studies have indicated that oxidative stress may have pro-inflammatory effects [5]. Malva sylvestris, a traditional medicinal plant, was used in traditional phytotherapy and cosmetic treatments [6]. Extracts of Malva sylvestris flowers and leaves were used as a valuable remedy for cough and inflammatory diseases of mucous membranes [7]. In the present study, we attempted to search for the antiinflammatory and antioxidant effect of Malva sylvestris through carrageenan-induced assays in rats. 2. Methodology Animals Rats were randomly divided into control groups receiving either water (C) or Malva sylvestris decoction (DM), hexane (H) and ethanol (E) extracts and experimental groups receiving carrageenan plus water (I) or Malva sylvestris decoction (IDM), hexane (IH) or ethanol (IE) extracts. Indometacin was used as positive control. Histological examination Paw biopsies were taken 5 h after carrageenan-induced edema. Tissue slices were fixed in 10% neutralbuffered formaldehyde, embedded in paraffin and sectioned. Sections were stained with hematoxylin and eosin and analyzed with light microscopy. Antioxidant enzymes assay Superoxide Dismutase activity was evaluated by the photoreduction of Nitroblue tetrazolium (NBT). Catalase activity was measured by the method described by Aebi [8]. Glutathion Peroxidase activity was determined spectrophotometrically by the method described by Paglia and Valentine [9]. 3. Main Results Histological examination Paw edema sections in the control group (C) revealed normal epidermis and dermis layers of the skin (Figure 1.). Furthermore, carrageenan administration induced a detachment of dermal-epidermal 353

354 SOD activity (unit SOD/mg protein) CAT activity (µmol/min/mg protein) Gpx activity (nmol GSH reduced/mg protein/min) 19, 20, 21 et 22 décembre 2012 Hôtel EL Mouradi Douz - Tunisie junction and an accumulation of edema that containing a high amount of polymorphonuclear cells. Decoction and extracts of Malva sylvestris and indometacin appeared to prevent these histopathological damages. C D Ep I Edema Ep IM D Ep H IDM Ep, H IH D H IE D H D H D Ep H Ep Fig.1: Light micrographs of paw skin sections from controls and treated rats 5h after carrageenan injection. C: control rats; I: inflamed rats injected with carrageenan; IH: inflamed rats given hexane extract; IE: inflamed rats given ethanol extract; IDM: inflamed rats given Malva sylvestris decoction; IM: inflamed rats given medicament. Ep: epidermis; D: dermis; H: hypodermis. Antioxidant enzyme activities As compared to the control group, carrageenen-induced rats show a significant decrease in liver SOD, CAT and GPX activities (Figure 2). However, the antioxidant enzyme activities increased in rats previously treated with Malva sylvestris decoction or its extracts SOD * * C H E DM I IH IE IDM IM CAT * * C H E DM I IH IE IDM IM GPx * * c H E DM I IH IE IDM IM Fig. 2: SOD, CAT and GPX activities in liver of controls and treated rats C: control rats; DM: control rats receiving Malva sylvestris decoction; H: control rats receiving Malva sylvestris hexane extract; E: control rats receiving Malva sylvestris ethanol extract; I: inflamed rats injected with carrageenan; IH: inflamed rats given hexane extract; IE: inflamed rats given ethanol extract; IDM: inflamed rats given Malva sylvestris decoction; IM: inflamed rats given Indometacin References [1] Kupper TS. & Fuhlbrigge RC., 2004, Immune surveillance in the skin: mechanisms and clinical consequences, Nat. Rev. Immunol. 4, pp [2] Lazzarini R., Maiorka PC., Liu J., Papadopoulos V. & Palermo-Neto J., 2006, Diazepam effects on carrageenan-induced inflammatory paw edema in rats: Role of nitric oxide, Life. Sci. 78,pp [3] Silva FRF., Dore CMPG., Marques CT., Nascimento MS., Benevides NMB., Rocha HAO., Chavante SF. & Leite EL, 2010, Anticoagulant activity, paw edema and pleurisy induced carrageenan: Action of major types of commercial carrageenans, Carbohyd. Poly. 79, pp [4] Trouba KJ., Hamadeh HK., Amin RP. & Germolec DR, 2002, Oxidative stress and its role in skin disease, Antiox. Redox. Signal. 4, pp [5] Mogensen TH., Melchjorsen J., Hollsberg P. & Paludan SR, 2003, Activation of NF-kappaB in virus-infected macrophages is dependent on mitochondrial oxidative stress and intracellular calcium: downstream involvement of the kinases TGF-beta-activated kinase 1, mitogenactivated kinase/extracellular signal-regulated kinase kinase 1, and I kappab kinase, J. Immunol. 170, pp [6] Paufique JJ, 2003, Method for extracting an active principle based on Malva sylvestris, the active principle obtained, and cosmetic treatment using it, Patent. App. 2000, pp [7] Francesca C., D Abrosca B., DellaGreca M., Fiorentino A., Zarrelli A, 2006, Terpenoids and phenol derivatives from Malva silvestris, Phytochem. 67, pp [8] Aebi H, 1974,Catalase. In Methods of Enzymatic Analysis. Edited by: HU Bergmeyer. Academ Press.105, pp [9] Paglia DE. & Valentine WN, 1967, Studies on the quantitative and qualitative characterization of erythrocyte glutathione peroxidise, Lab. Clin. Med. 70, pp

355 P225.Arid environnments intunisia are they prone to desertification 1 Wahida Ghiloufi, 1 Mohamed Chaieb 1 Life Sciences Department, Science Faculty of Sfax, University of Sfax, BP 1171 Sfax 3000, TUNISIA. Abstract Arid and semi arid Mediterranean Environments are susceptible to deterioration due to environmental constraints and human activities. This investigation aims to show whether arid environments in central and southern Tunisia are susceptible to degradation. The width of bare areas increases relatively than vegetative zones providing a large flow area. These results show that these environments are prone to desertification. Keywords: Arid environments; Tunisia; desertification 1. Introduction Arid environments of the Mediterranean basin are prone to degradation. In general, the degradation begins with an alteration of vegetation, changes in floristic composition, and depletion and species extinction. The destruction rate is 1% per year [1]. Overgrazing is a major cause of degradation in these areas. It negatively influences the soil and vegetation, destroying the topsoil after trampling, and that by reducing vegetation cover, productivity and litter accumulation [2]. These processes increase the sensitivity of soil erosion and reduce soil fertility and the rate of water infiltration [3]. This investigation was conducted between September 2010 and March 2011 at 10 arid environments in central and southern Tunisia (Bou Hedma, Sidi Bouzid, Sbeïtla, Chambi, Matmata, Tataouine, El Gonna, Jbel Halfa, Haffouz and Gabès) and aims to show whether theses arid environments are susceptible to degradation. 2. Methodology This investigation was conducted at 10 arid environments in central and southern Tunisia (Bou Hedma, Sidi Bouzid, Sbeïtla, Chambi, Matmata, Tataouine, El Gonna, Jbel Halfa, Haffouz and Gabès) (figure 1). Figure 1: location of the study sites. Site number Site name 187 Bouhedma 188 Chaambi 189 Matmata 190 Sbeitla 191 Sidi Bouzid 192 Tataouine 193 El Gonna 194 Gabès 195 Haffouz 196 Jbel Halfa Table 1: Identification of studied sites In each study site, we established a plot 30 * 30 m from the top edge of the slope. Three transects of the same length will be added, each 8 m long. Along each transect, we located all the "patch" and "interpatch." Whenever a "patch" is found, we measure its dimensions perpendicular to the transect line (Figure 2). 355

356 Figure2: Schematic illustrations of the method of measuring the dimensions of a "patch" [4]. 3 Main Results We distinguish sharp transitions between areas bare and vegetated areas at different plots. In fact, the percentage cover of bare soil is higher than vegetated areas (Figure3) Jbel Halfa Haffouz Sbeitla Chaambi Sidi Bouzid Bou Hedma Sites El Gonna Gabès Matmata Tataouine couverture du sol nu ( ) couverture du "patch" ( ) Figure3: cover of bare soil and "patch" (%) in different plots. These results reflect the nature of the studied environments where vegetation forms a mosaic with two-phases discrete "patch" plants surrounded by a matrix of bare soil [5]. This pattern of vegetation is characteristic of most arid and semi-arid environments [6]. The width of bare areas increases relatively than vegetative zones providing a large flow area showing that these environments are prone to desertification. References [1] Le Houérou, H.N. (2001), Biogeography of the arid stepplands north of the Sahara. J. Arid Environ. 48 (2001), pp [2] Milchunas, D. J., Lauenroth, W. K., Quantitative Effects of Grazing on vegetation and soils over a Global Range of Environments. Ecol. Monogr, 63 pp [3] Lavado, R. S., Sierra, J.O., Hashimoto, P.N., Impact of grazing on soils nutrients in a Pampean grassland. J.Range Manag. 49 pp [4] Tongway, D.J. and Hindley, N. (1995). Manual for assessment of soil condition of tropical grasslands. CSIRO, Camberra, Australia. - [5] Maestre, F.T. and Puche, M. D. (2009), Indices based on surface indicators predict soil functioning in Mediterranean semi-arid steppes. Applied Soil Ecology 41(2009), pp [6] Valentin, C., d Herbes, J.M., Posen, J., Soil and water components of banded vegetation patterns. Catena 37,

357 P.226. Caractérisation phénolique des extraits floraux de palmier dattier (Phoenix dactylifera L.) CV Deglet Noor et contribution à l étude de leurs propriétés biologiques 1 Walid Kriaa, 2 Hamadi Fetoui et 1 Noureddine Drira 1 Laboratoire des Biotechnologies Végétales Appliquées à l Amélioration des Cultures. Faculté des Sciences de Sfax, Tunisie 2 Laboratoire de Physiologie Animale. Faculté des Sciences de Sfax, Tunis Résumé La multiplication végétative in vitro du palmier dattier à partir de fleurs femelles matures est fortement influencée par les exsudats phénoliques qui, une fois émis dans les milieux de culture s oxydent ce qui entravent la croissance des tissus. Dans ce travail, nous avons entrepris d étudier le pouvoir d émission des fleurs matures de dattier en composés phénoliques. Il s en dégage que les taux en polyphénols, flavonoides et proanthocyanides sont plus élevés dans l extrait méthanolique. L activité anti-radicalaire (test au DPPH) et le pouvoir réducteur des extraits de fleurs sont corrélés avec leur composition phénolique. Ces résultats ont aussi révélé que l extrait méthanolique présente une activité antioxydante et une richesse en composés phénoliques plus fortes comparativement à celles mesurées dans les autres extraits (E-MeOH > E-Acétate d Ethyle > E-Eau > E-Hexane). Cette approche nous a permis de moduler à temps la nature et la dose des additifs organiques à adjoindre aux milieux de culture pour un meilleur pilotage du système de régénération de plantes. Mots clés: palmier dattier, extrait de fleur, polyphénols, flavonoides et proanthocyanides 1 Introduction Le palmier dattier est d une grande importance écologique et socio-économique pour toutes les régions désertiques et chaudes du globe, d où les nombreux programmes de multiplication par culture in vitro à partir de tous les organes de la plante. Lors de la régénération de vitro-plants à partir des fleurs femelles matures, on note un effet génotype très net. Cet effet est subordonné, en partie, à la richesse des tissus en composés phénoliques qui, une fois émis et oxydés dans les milieux de culture, exercent un effet toxique et bloquent les processus de prolifération cellulaire.dans le présent travail, nous avons entrepris de déterminer la composition phénolique (polyphénols, flavonoides et proanthocyanides) et le pouvoir antioxydant d extraits de fleurs de la variété élite «Deglet Noor» présents dans les différents solvants utilisés (hexane, acétate d éthyle, méthanol et eau). 2 Matériel & Méthodes Des fleurs matures de palmier dattier cv Deglet Noor (DN) prélevées au moment de l ouverture de leur spathe sont congelées dans de l azote liquide puis lyophilisées. Elles sont ensuite réduites en poudre fine au moyen d un broyeur. Les composés phénoliques sont extraits du matériel végétal (10g) par macération par l'ajout de solvants de polarité croissante: hexane, acétate d'éthyle, méthanol et eau. La poudre a d'abord été soumise à une extraction par agitation dans 100 ml d'hexane à température ambiante pendant 24 h. L'extrait obtenu est filtré et le filtrat est concentré à sec par un évaporateur rotatif à 40 C. Les résidus restants sont successivement extraits à l aide de l'acétate d'éthyle, le méthanol et l'eau dans les mêmes conditions. Le dosage des phénols, des flavonoides et des prothocyanides totaux, le pouvoir réducteur et le DPPH sont effectués par les méthodes de Julkuen-Tito [1], Zhishen et al. [2], Oyaizu [3] et Shirwaikar et al. [4] respectivement. Enfin, la quantité de chaque type de polyphénols présents dans chaque échantillon est déterminée selon les équations suivantes : Les phénols : (Y = x ; R 2 =0.998) (mg d équivalents d acide caféique CA/g d extrait). 357

358 mg éq de CA / g d'extrait mg / g d'extrait mg/g d'extrait DO (700 nm) DO (700 nm) DPPH radicalscavenging activity (%) Etude qualitative 19, 20, 21 et 22 décembre 2012 Hôtel EL Mouradi Douz - Tunisie Les proanthocyanides: (Y = x ; R 2 =0.998)(mg d équivalents de Catechin CE/g d extrait). Les Flavonoides : (Y = x ; R 2 =0.997) ( mg d équivalents de Catechin CE/g d extrait). L activité anti-radicalaire est calculée en pourcentage de DPPH décoloré selon l équation : ((Absorbance contrôle Absorbance échantillon) / Absorbance contrôle ) x Résultats Pouvoir réducteur ( DN ) 2 1,8 1,6 1,4 1,2 1 0,8 0,6 0,4 0, Concentration ( mg/ml ) MeOH A,ethyl Hexane eau DPPH scavenging activity (%) DPPH ( DN ) Concentration (mg/ml) MeOH Water Acétate d'éthyle Hexane Etude quantitative Teneur en polyphénols Hexane Acétate d'éthyle MeOH Eau Teneur en flavonoides Hexane Acétate d'éthyle MeOH Eau Teneur en tannins Hexane Acétate d'éthyle MeOH Eau Pouvoir antibactérien Effet des extraits de fleurs sur la croissance des différentes espèces bactériennes (diamètre en mm) : Hexane Acétate d éthyle MeOH Eau Bacillus cereus Microccocus luteus Pseudomonas aeroginosa E coli Références [1] Julkunen-Titto R., 1985, Phenolic constituents in the l eaves of northern willows: Methods for t he 330 analysis of certain phenolics, J. Agr. Food. Chem. 33, [2] Zhishen J., Mengcheng T., & J ianming W.,1999, The determination of flavonoid contents in mulberry and their scavenging effects on superoxide radicals. Food Chem. 57, [3] Oyaizu M., 1986, Studies on products of browning reactions: Antioxidative activities of products of browning reaction prepared from glucosamine. Jpn. J. Nutr. 44, [4] Shirwaikar A., Rajendran K., & Punithaa I.S., 2006, In vitro antioxidant studies on the benzyl tetra isoquinoline alkaloid berberine. Biol. Pharmaceut. Bull. 29,

359 P. 229 L impact des rejets de la station d épuration de Khenchela sur la qualité des eaux souterraines du milieu récepteur région de Baghai wilaya de Khenchela Y. Nedjar* S. Lakhdari, M. Benounis, Institut des sciences de la nature et de vie Université Abbes Laghrour Khenchela *yamamanedjar@gmail.com Résumé Ce travail a pour objectif d évaluer le degré de contamination des eaux souterraines de la zone drainée par Oued Baghai (NE algérien) par les eaux usées traitées issues de la STEP à boue activée de la ville de Khenchela en matière des éléments physicochimiques ainsi que les éléments indicateurs de pollution. Dans une première étape, nous avons procédé à une analyse physicochimique sur des échantillons mensuels des eaux rejets de la STEP. La deuxième étape consiste à l analyse des eaux souterraines de 17 points d eaux répartis sur la région d étude dont deux sont choisi comme témoin pour raison de son éloignement de la zone drainée par les rejets. A la lumière des résultats obtenus, les eaux usées traitées, à l exception de la DBO 5 et les MES et la salinité qui présentent des teneurs importantes, sont aptes à la réutilisation en irrigation. La contamination des eaux usées traitées par les métaux lourds ne présente pas une menace importante, suite l accumulation de ces derniers dans les boues. Le diagnostic de la qualité des eaux usées traitées montre que les effluents sont d origine domestique Les résultats d analyses des eaux souterraines montrent clairement une accumulation non négligeable des chlorures, sulfates, calcium, potassium, nitrates, ammonium et en manganèse alors que le zinc, le cuivre et le fer enregistrent des valeurs qui ne dépassent pas les normes de potabilité. Les eaux souterraines connaissent une dégradation en termes de salinité et enregistre une pollution azotée. L étude statistique nous a permis de faire une distinction entre deux classes d eaux, la première est caractérisée par une faible salinité et exempte en éléments indésirables, alors que la deuxième est fortement minéralisée et riche en nitrates. Cela est dû aux apports de rejet de la STEP. Mot clés : Oued Baghai, Khenchela, STEP, eaux usées traitées, DBO5, salinité, métaux lourds, pollution azotée. 359

360 P.230. EFFET DE L HUILE DES GRAINES DE LA COLOQUINTE SUR LES PARAMÉTRES BIOCHIMIQUES CHEZ DES RATS MÂLE DE SOUCHE WISTAR REDNU OBÉSE PAR DES RÉGIME A BASE DE 40 MATIERE GRASSE. Yazit Sidi M 1., Bouafia M., Amamou F., Mezian R K., Didi A., Khmmar L., Chabane Sari D. Laboratoire des produits naturels (composition chimique des plantes et leurs propriétés nutritionnelles) Département de biologie, Faculté des sciences, Université de Tlemcen. e mail : y_med2011@hotmail.fr Résumé Dans le bute de la valorisation de l effets des huiles végétaux sur la correction des trouble métabolique engendrer par l obésité, nous nous somme intéressées à la coloquinte «Citrullus colocynthis», plantes de la famille des cucurbitacées originaire des soles arides, elle contient environ 17 d huile, contient des acides gras polyinsaturée indispensable douée des pouvoirs régulateur de certaines pathologie métabolique tel que l hypercholestérolémie. L objectif de notre travail est de tester l effet de l huile de coloquinte (HC) sur les paramètres biochimiques chez des rats wistar nourries par des régimes hypergras. Dans ce but, des rats mâle de souche wistar pesant 80±5g et sont repartis en quatre lots. Les rats reçoivent différentes régimes (R) alimentaires pendant 2 mois (R1 : 16 caséine+ 8 HT, R2 : 16 caséine+ 8 HC, R3 : 16 caséine+ 30 MG+ 8 HT, R4 : 16 caséine+ 30 MG+ 8 HC), Les poids des rats ainsi que la quantité d aliment ingérée sont pris quotidiennement, les bilans nutritionnels sont faits au cours de la première, quatrième, cinquième et huitième semaine de l expérimentation. L extraction d huile a partir de grains de la coloquinte à été faite par l appareil de soxhlet, et dosage de l azote a été faite par la méthode de Kjeldahl.L (1883). Les résultats montrent une baisse de taux de glycémie et cholestérolémie et lipidémie chez les rats nourrissaient par des régimes à base d huile de la coloquinte par rapport aux rats (témoins) consommaient les régimes à base d huile de tournesol. L huile de la coloquinte représenté un ressource régulateur et/ou protecteur de l obésité de ces complication, dont il implique sur des mécanismes cellulaires et métabolique. Mots clés : Citrullus colocynthis, obésité, huile de la coloquinte, bilan nutritionnels, huiles végétales. 360

361 P.231. L effet de la consommation du lait de soja sur certains paramètres de la fonction de reproduction mâle chez la souris Swiss Y. Bouferkas, I. Zeriouh, S. Addou, O. Kheroua, D. Saidi Laboratoire de Physiologie de la Nutrition et de la Sécurité Alimentaire (LPNSA), Département de Biologie, Faculté des Sciences, Université d Oran, Algérie youcef35@gmail.com Introduction et But de l étude. Le lait industriel à base de protéines de soja constitue la principale source de phyto-estrogènes chez l homme. Il est donc important d évaluer les niveaux d apports en phyto-estrogènes contenus dans les aliments à base de soja que peuvent consommer les nourrissons et les jeunes enfants à APLV (allergie aux protéines du lait de vache). L objectif de cette étude est de montrer l impact de la consommation du lait de soja sur le développement et la maturation des organes sexuels et sur la fertilité des souris mâles Swiss utilisés comme modèle expérimental. Matériel et Méthodes. Douze souris mâles sont réparties en deux groupes. Les souris sont âgées de 4 semaines et pèsent en moyenne 16,09 g (16,09 ± 0,39). Le lait de soja est administré dans l eau durant 90 jours comparé à un groupe témoin recevant un régime standard. La consommation est mesurée quotidiennement, et le poids corporel hebdomadairement. Les animaux et leurs organes ont été pesés dont vésicules séminales, testicules et épididymes, et la qualité du sperme a été analysée dont la mobilité, le comptage, la numération et la morphologie des spermatozoïdes). Résultats. Chez le groupe expérimental, on note une diminution très significative de la mobilité des spermatozoïdes, le nombre des spermatozoïdes au niveau du testicule et de l épididyme, par gramme de testicule et d épididyme. Les anomalies des spermatozoïdes sont très significativement augmentées chez le groupe expérimental. L étude histologique montre un changement structural des tubes séminifères, une hyperplasie des cellules de Leydig, avec une apparition des spermatides non indifférenciés au niveau de la lumière des tubes séminifères. Conclusion. En conclusion, les résultats obtenus indiquent que l ingestion du lait de soja provoque une altération de la fertilité masculine des souris Swiss. Mots clé : soja, fertilité, spermatozoïde,, appareil reproducteur mâle, toxicité, souris Swiss. 361

362 P.233. Impact du Cadmium ou Chysène sur l'expression des gènes MgBD3, Lysozyme, Catalase et SOD chez Mytilus galloprovincialis 1 Younes Bouallegui, 1 Ridha Ben Younes, & 1 Ridha Oueslati 1 unité d Immuno-Microbiologie Environnementale et Cancérogenèse. Faculté des Science de Bizerte, Université de Carthage, Zarzouna 7021, TUNISIA. Résumé Ce travail consiste à étudier au niveau moléculaire la réponse immunitaire des mollusques à deux types de contaminants (Cadmium et Chrysène), par l étude de l expression des gènes contrôlant certains biomarqueurs (MgBD3 (PAM), Lysozyme, Catalase et SOD) à l aide de la technique RT-PCR. Nous avons alors essayé de déchiffrer les mécanismes de résistance de la moule dans un environnement pollué en exposant des moules in vivo à des concentrations en contaminants proches de celles du milieu naturel. Les résultats obtenus montrent que ces contaminants influencent différemment les facteurs immunitaires en relation fonctionnelle ou de contrôle avec la génération des espèces réactives de l oxygène et que l intensité de la réponse varie avec le type du contaminant (métaux lourds et HAP). Mots clés: bivalves, Catalase, MgBD3, Lysozyme, RT-PCR 1 Introduction Afin d évaluer la contamination chimique (éléments métalliques, dérivés pétroliers ) des milieux aquatiques, des programmes de surveillance sont mis en œuvre. Dans cette optique Goldberg [1], a proposé de suivre, à l échelle internationale, les concentrations des contaminants dans les organismes vivants pour surveiller le milieu. Les moules sont ainsi largement utilisées dans divers programmes de surveillance visant à contrôler la contamination de l environnement côtier [2-6]. Chez ces invertébrés le système immunitaire repose sur les défenses innées [7], permettant de développer des mécanismes capables de reconnaître le soi du non soi et de rejeter tout agent exogène. Dans notre étude on s intéresse à évaluer l immunité innée se manifestant chez Mytilus galloprovincialis soumis à l action du Cadmium et du Chrysène par l expression des gènes MgBD3, Lysozyme, Catalase et SOD. Ainsi ce travail a pour objectif d étudier l impact des contaminants sur les facteurs immunitaires qui sont d intérêt considérable pour la compréhension des phénomènes écotoxicologiques afin d évaluer l effet des variations environnementales chimiques sur ces paramètres. 2 Méthodes Les moules de taille moyenne 7.5cm, apportées au laboratoire de chez une ferme aquacole dans la région de la lagune de Bizerte (Tunisie), sont maintenues dans des aquariums à 17.5 C avec aération, changement de l eau toutes les 48h et une alternance lumière/obscurité de 12H/12H pendant 7 jours d acclimatation. 20 moules par bacs de 5L sont exposés pendant 7 jours à différentes concentrations de Cadmium et de Chrysène (25, 50, 100 et 200µg/L) avec une répétition pour les concentrations 50 et 100µg/L. Les doses sont rajoutées après changement de l eau de mer chaque jour. Deux bacs Témoin et Témoin 0 sont réservés l un sans traitement et l autre pour mettre en évidence l effet du véhicule (acétone). L hémolymphe est prélevé avec une seringue stérile de 1 ml à partir du muscle adducteur postérieur d un lot de deux moules, l ARN est extrait des cellules hémocytaires de l hémolymphe pour le test RT-PCR par le Kit «RNeasy Mini Kit» (QIAGEN). Des paires d'amorces sont utilisées (tableau 1) pour obtenir pour chaque produit de gêne des amplicons spécifiques. Gène Tableau 1.Tableau des amorces Sequences sens Sequences antisens Genbank EF-1 5'-cctcccaccatcaagaccta-3' 5'- ggctggagcaaaggtaacaa-3' MgBD3 5'- ccgattctaggacgagttgtggca-3' 5'- ggcaactttccaagcgccatatgc-3' FR Lysozyme 5'- atgtggaatctgaaggacttgt-3' 5'- ccagtatccaatggtgttaggg-3' AF S.O.D 5 -gctagctccaggagaacacggtttcca-3 5 -ccaatgacaccacaagccagacg-3 FM Catalase 5 -tgaccgtggaacccctgatgga-3 5 -agcttgtctgcttgctcagcact-3 AY

363 Taux d'expression Taux d'expression 19, 20, 21 et 22 décembre 2012 Hôtel EL Mouradi Douz - Tunisie La réaction RT-PCR réalisée dans un thermocycleur (Applied Biosystems 2027) selon le protocole du kit «Transcriptor one step RT-PCR» (Roche), l analyse sur gel d électrophorèse 1.5%, la prise des photos de gel et la mesure de l intensité lumineuse des bandes (système Doc Print II, VILBER LOURMAT) sont réalisés pour la quantification de taux d expression dont la normalisation des valeurs se fait en se référant à l expression du gène de contrôle interne EF1 (T=Intensité de la bande/intensité de la bande EF1). Les graphes sont élaborés par le logiciel «Microsoft Excel 2007». 3Resultats Le traitement pendant 7 jours, avec 25µg/L de cadmium baisse l expression des biomarqueurs MgBD3 et Lysozyme par contre les doses 50,100 et 200 µg/l l augmentent par rapport au témoin. Aux concentrations 25 et 100 µg/l l expression de Catalase et SOD est augmentée alors qu aux doses 50 et 200 µg/l est abaissée (Figure1A). Avec les doses 25, 50 et 100µg/L de Chrysène l expression de MgBD3 diminue progressivement mais à la dose 200 µg/l augmente spectaculairement par rapport au témoin, inversement le lysozyme diminue spectaculairement d expression à 25µg/L, alors il augmente progressivement avec les doses 50, 100 et 200 µg/l. Donc le chrysène agit inversement pour MgBD3 et Lysozyme avec un léger effet véhicule pour les deux par rapport au témoin (Figure1B). Catalase et SOD répondent de la même manière pour les doses 25, 50, 100 et 200 µg/l. En effet leur expression montre une augmentation nette avec la dose 25 µg/l puis une diminution nette à la dose de 200µg/L, alors que pour les doses 50 et 100 µg/l varie très peu avec un léger effet de véhicule (Figure1B). A B 1,15 1,1 1,05 1 0,95 0,9 0,85 MgBD3 Lysozyme Catalase S.O.D 1,25 1,2 1,15 1,1 1,05 0,95 1 0,9 0,85 Mg BD 3 Figure 1. Effet d exposition des moules pendant 7 jours à différentes concentrations de Cadmium (A) ou de Chrysène (B) sur le taux d expression des gènes MgBD3, Lysozyme, Catalase et SOD Références [1] Goldberg, E. D.,1975, The Mussel Watch, Mar. Pollut. Bull. 6: [2] Phillips, D. J. H.,1976, The Common mussel Mytilus edulis as an indicator of pollution by zinc, cadmium, lead and copper I. Effects of environmental variables on uptake of metal, Mar. Biol 38: [3] Philips, D. J. H.,1977, The use of biological indicator organisms to monitor trace metal pollution in marine and estuarine environments - a review, Environ. Pollut 13: [4] Philips, D. J. H. & D. A. Segar,1986, Use of indicators in monitoring conservative contaminants, Mar. Pollut. Bull. 17: [5] Fisher, H.,1988, Mytilus edulis as a quantitative indicator of dissolved cadmium. Final study and synthesis, Mar. Ecol. Prog. Ser 48: [6] Cossa, D.,1989, Cadmium in Mytilus spp.: Worldwide Survey and Relationship between seawater and Mussel Content, Mar. Environ. Res 26: [7] Medzhitov, R. and Janeway, C., Jr.,2000, Innate immune recognition: mechanisms and pathways, Immunological Reviews 173,

364 P.234. Accumulation du Cuivre, Zinc et Cadmium chez le gastéropode marin Hexaplex trunculus collecté dans les côtes tunisiennes 1 Youssef Lahbib, 1 Anwar Meliki, 2 Ionan Marigomez et 1 Najoua Trigui El Menif 1Department of Biology, Laboratory of Environment Biomonitoring, Applied and Fundamental Malacology (MAF/LBE), University of Carthage, Faculty of Sciences of Bizerta, 7021 Tunisia 2Department of Zoology and Cell Biology, Laboratory of Cell Biology and Histology, University of the Basque Country, Faculty of Science and Technology, 644 P.K., E Bilbo, Spain. Résumé Le Cuivre, le zinc et le cadmium ont été analysés chez le gastéropode comestible Hexaplex trunculus collecté dans 7 stations le long du littoral tunisien. Les concentrations trouvées varient en fonction du sexe et du site de prélèvement. Les concentrations du Cu et du Zn varient respectivement de 47,70 à 343,64 µg. g -1 de poids sec (P.S) et 149,46 à 530,44 µg. g - 1 P.S et sont plus élevées chez les males dans la plupart des stations. Alors que la concentration du Cd varie de 0,22 à 18,95 µg.g -1 de P.S et est plus élevée chez les femelles. Généralement, les concentrations les plus élevées sont enregistrées pour les 3 métaux dans le port de pêche de Gabès. Les concentrations trouvées dans la partie mole des femelles ne sont pas corrélées au degré d imposex et la charge en butylétain. Ainsi, ces métaux ne semblent pas intervenir dans le développement de l imposex chez ce gastéropode. En plus, la comparaison des concentrations trouvées aux valeurs standards européennes de la FAO montre que celles-ci les dépassent dans plusieurs stations. Mots clé: Eléments traces, Hexaplex trunculus, Tunisie, Méditerranée sud 364

365 P.235. Criblage de l activité entomocide, antifongique et antibactérienne chez des souches de Bacillus isolées en Algérie. Djenane Zahia 1*, Amezian Meriem* 1, Yaici Lamia 1, Selama Okba 1, Darenfed Amel 1, Madour Nawel, Sadouk Zohra 1, Saidi Mahdia 1, Hamana Soukaina 1, Benayad Tahar 2, Ghozlane Najet 1, Abderrahmani Ahmed 1 et Nateche Farida 1. *dj.hanane@yahoo.fr 1) Laboratoire de Biologie Cellulaire et Moléculaire, équipe de microbiologie, FSB -USTHB. BP 32. El alia Alger. Algérie. 2) Laboratoire de police scientifique, château neuf, Alger. Résumé Les espèces appartenant au genre Bacillus sont connues par la synthèse d une large gamme de molécules bioactives présentant un intérêt potentiel dans les différents domaines de la biotechnologie (Zhao et al., 2008). Dans ce contexte, nous avons testé l activité entomocide, antifongique et antibactérienne des 119 souches de Bacillus isolées à partir de différentes niches écologiques du territoire national algérien. L espèce Bacillus thuringiensis est principalement identifiées par la présence d un ou plusieurs cristaux parasporaux visibles au microscope photonique (Delucca et al., 1982) et pouvant exercer une action entomocide à large spectre. Ainsi, 3 souches de Bacillus thuringiensis (GB3, GB11 et Tim14) ont été testées pour leur activité entomopathogène contre 3 espèces d acridiens (Anacridium aegyptium, Acrida turrita et Ailopus strepens) causant de sérieux ravage en agriculture algérienne et dans le monde. En effet, les coupes histologiques mettent en exergue une forte destruction de divers compartiments du tube digestif, d'ailleurs cette activité significative peut être liée à d'autres produits tels que la chitinase (Vipul et al., 2005). L antagonisme des souches de Bacillus vis-à-vis d un ensemble de mycètes pathogènes et/ou phytopathogènes (Fusarium sp, Monilia sp, Thielaviopsis sp, Colletotricum sp, Aspergilus niger, Aspergilus flavus) montre une activité potentiellement élevée avec des rapports d inhibition allant de 0,2 à 0,5. En effet, 88 souches de Bacillus ont montré un antagonisme vis-à-vis d au moins 4 mycètes tests. La recherche de l activité antibactérienne des 119 souches de Bacillus a révélée des résultats prometteurs pour les 4 bactéries pathogènes testées : Staphylococcus aureus sensible à la méthiciline (SASM) 19/119, Staphylococcus aureus résistant à la méthiciline (SARM) : 17/119, Pseudomonas aeruginosa 23/119 et Escherichia coli 9/119. En effet, 5 souches de Bacillus présentent un large spectre d activité antibactérienne sur les 4 bactéries testées. Notre étude nous a permis de démontrer que les souches autochtones de Bacillus possèdent un large éventail d activité biologique liée à une large gamme de métabolites. Ces molécules naturelles peuvent prendre l alternative des molécules chimiques qui montrent plusieurs effets indésirables aussi bien sur l environnement que sur la santé publique. En l occurrence, de nouvelles stratégies biotechnologiques peuvent êtres mises en place. Mots clés : Bacillus, corps parasporal, activité entmocide, activité antifongique, activité antibactérienne, application biotechnologique et protection de l environnement. Bibliographie : -Delucca, A. J., Palmgen, M. S. And Ciegler, A., Bacillus thuringiensis in gram elerator duots. Canadian J. Microbiol., 28 : Vipul Gohel., Anil Singh., Maisuria Vimal., Phadnis Ashwini and Chhatpar H.S., Bioprospecting and antifungal potential of chitinolytic microorganisms. African J. Microbiol. Biotechnol, Vol. 5 (2), pp Zhou, Y., Choi, Y. L., Sun, M, et Yu, Z. (2008). Novel roles of Bacillus thuringiensis to control plant dideases. Appl Mic Biotech 80: P

366 P Copper excess induced morphological, physiological and proteomic changes in germination and growth of fenugreek seeds Zayneb Chaâbene, Bassem Khemakhem, Amine Elleuch and Hafedh Mejdoub 1 Life Sciences Department, Science Faculty of Sfax, University of Sfax, BP 1171 Sfax 3000, TUNISIA Laboratoire des Biotechnologies Végétasle Appliqués à l Amélioration des Culture (LBVAAC) Abstract Copper is an essential micronutrient for plants. Present at a high concentration in soil, it s also regarded as a major toxicant to plant cells due to its potential inhibitory effects against many physiological processes. The interference of germination related proteins by heavy metals has not been well documented at the proteomic level. In the current study, amylase activity changes of germinating Trigonelle seeds were investigated under copper stress. Germination rate, root and shoot elongation, plant biomass, and tolerance index were decreased, whereas accumulation of H 2 O 2 and MDA content in plant were increased significantly with increasing copper concentrations from 1 mm to 10 Mm. Moreover, down-regulation of key metabolic enzymes like alpha-amylase revealed that the inhibition of seed germinations after exposure to excess copper results in failure in the reserve mobilization processes. 1 Introduction Nowadays, environmental pollution and exposure to heavy metals is a growing problem throughout the world. Soil contamination involves about 235 million hectares (Giordani et al., 2005) limiting plant productivity and threatening human health. Copper play an important role in maintaining plants natural metabolism, germination and growth, but in excess it is also a proven inhibitor of various physiological functions (Monnet et al., 2006). Seed germination is one of the most highly sensitive physiological processes in plants and is regulated by several hormonal interaction and environmental factors. In addition, a significant component of copper toxicity is oxidative stress, catalyzing the generation of harmful reactive oxygen species (ROS) such as hydrogen peroxide (H 2 O 2 ) which can damage biological molecules and membranes by inducing lipid peroxidation (Hall, 2002). To obviate copper toxicity, plants have evolved protective enzymatic mechanisms to scavenge ROS and alleviate their deleterious effects, such as ascorbate peroxidases (APX), superoxide dismutase (SOD) and catalase (CAT). In this work, we have, first, optimized then, studied the effect of Cu on germination and growth of fenugreek. Moreover, some biochemical parameters were evaluated. 2 Methodology 2.1. Plant matériel and germination assay : Mature fenugreek (Trigonella foenum graecum) seeds were surface-sterilized with 20 % (v/v) sodium hypochlorite for15 min followed by a thorough washing in distilled water. Seed germination was tested on moist filter paper (Whatman No. 1). In each Pertri dish (90 mm in diameter) 50 seeds were randomly placed on the filter paper, and 10 ml of the copper solution with a wide range of concentrations (0.005, 0.1, 1.0, 10 and 20 mm) were added. Controls were maintained by moistening the filter paper with 10 ml deionized water Biomass and tolerance index (TI): Plant biomass was determined by weighing the seedlings including the root and shoots. Prior to the fresh weight (FW) measurement, seedlings were taken out from the medium and dried for 72 h in a 60 C incubator, the dry weight (DW) was measured. The tolerance index (TI) of the germinating fenugreek seeds to different concentrations of copper solution was calculated according to the equation of Wang and Zhou (2005) Determination of hydrogen peroxide and MDA level: The total H 2 O 2 content was estimated with the method of Sagisaka. Lipid peroxidation was measured according to Heath and Packer (1968). 3 Main Results 3.1. Effect of copper on germination seeds : The germination rate of the fenugreek seeds significantly decreased with the increase of copper concentrations, ranging from 10 mm to 20 mm (figure 1 A). The radical growth of the germinating seeds was greatly inhibited at 1mM copper, and further decreased at higher copper concentrations (figure 1 B). 366

367 H 2 O 2 (μmol/g DW) MDA (nmol/ml) Amylase activity UI/g Germination rate % Radical lenght cm 19, 20, 21 et 22 décembre 2012 Hôtel EL Mouradi Douz - Tunisie days H2O Cu 5 μm Cu 100 μm Cu1 mm Cu 10 mm Cu 20 mm days H2O Cu 5 μm Cu 100 μm Cu 1 mm Cu 10 mm Cu 20 mm Figure 1: Germination rate (A) and radical length (B) of germinating fenugreek seeds under copper stress This inhibition of seeds germination was the result of alpha-amylase activity perturbation wich was harmfully decreased at 10 and 20 mm Cu (figure 2). 40 A B days H2O Cu 5 μm Cu 100 μm Cu1 mm Cu 10 mm Cu 20 mm Figure 2: Effect of excess copper on alph-amylase activity in fenugreek seeds 3.2. Effect of copper on plant growth Morphological effects: After 30 days Cu treatment, growth was severely retarded, and short browning roots were observed under 1; 5 and 10 mm Cu. In addition, a significant amelioration in shoot fresh weight was observed even at high copper concentration (table 1) Table 1: Excess copper effect in plant growth Specie Treatment SFW g SDW g TL cm RFW g RDW g RL cm TI % H2O 0,866 0,209 11,1 0,106 0,012 8,7 100 Cu 5 μm 0,912 0,385 11,6 0,149 0,02 8,1 93,1 Fenugrec Cu 100 μm 0,921 0,4 12 0,101 0,009 6,6 75,86 Cu 1 mm 1,062 0,561 13,6 0,084 0, ,47 Cu 5 mm 0,83 0, ,072 0,005 4,5 51,72 Cu 10 mm 0,769 0,093 10,2 0,028 0,001 3,2 36, Oxidative stress generation : It is well documented that excess levels of copper are harmful due to the production of reactive oxygen species (ROS) by autoxidation and Fenton reactions which can induced lipid peroxydation (Jonak et al., 2004). Therefore, we measured the cellular H 2 O 2 (figure 3 A) and MDA (figure 3 B) concentrations. In the present study, we showed that MDA content in T. foenum graecum increased significantly under copper treatments by increasing of H 2 O 2 level especially in shoots Root Shoot H2O Cu 100 μm Cu 1 mm Cu 10 mm A 1,2 1 0,8 0,6 0,4 0,2 0 Root Shoot H2O Cu 100 μm Cu 1 mm Cu 10 mm B Figure 3: H 2 O 2 level (A) and MDA content (B) in fenugreek plant treated with different copper concentration (p<0.05) References 1] Giordani C., Cecchi S., Zanchi C., 2005, Phytoremediation of soil polluted by nickel using agricultural crops. Environ. Manag. 36, pp ] Monnet F., Bordas F., Deluchat V., and Baudu M., 2006, Toxicity of copper excess on the lichen Dermatocarpon luridum: Antioxidant enzyme activities. Chemosphere 65, pp ] Hall J.L., 2002, Cellular mechanisms for heavy metal detoxification and tolerance. Journal of Experimental Botany 53, pp ] Wang M., Zhou Q., 2005, Single and joint toxicity of chloriuron-ethyl, cadmium, and copper acting on wheat Triticum aestivum. Ecotox. Environ. Safe. 60, pp

368 P.238. Does presence of birds influenced the direction of the interaction under arid bioclimate? A test from arid zone of Tunisia Zouhaier Noumi Life Sciences Department, Science Faculty of Sfax, University of Sfax, BP 1171 Sfax 3000, TUNISIA. Abstract The geographic distribution of Acacia tortilis (Forssk.) Hayne subsp. raddiana (Savi) Brenan in Tunisia is limited to the Bou-Hedma region (Bled Talah) where the National Park of Bou-Hedma, a UNESCO (1986) biosphere reserve, is located. We have tested the hypothesis that presence of birds influenced the direction of interaction. Here we quantifiedthe effects of the single-woody species Acacia on cereal yield and above-ground biomass in the growth stage. In parallel, the effects of Acacia species on soil properties were evaluated (soil water availability and nutrient enrichment). Results showed that A. tortilis trees improve soil water availability, the nutrient status of soil (organic matter, total nitrogen, extractable phosphorus), and has a positive effect on the understorey above-ground biomass of cereal. The presence of birds decreases significantly the yield of cereal. This suggests that presence of birds shift the direction of interaction. Keywords: Acacia tortilis, interaction, birds, cereal, biomass. 1 Introduction Acacia tortilis (Forsk.) Hayne ssp. raddiana (Savi) Brenan, is the most important woody species in presaharan zone of Tunisia [1]. It represents the only spontaneous forest tree persisting on the edge of the desert. A. tortilis forms an important traditional agroforestry system in the Bled Talah region, characterised by precarious climate [2]. In opposition to hypothesis that A. tortilis cover improves cereal productivity, we found in our previously published data [3] that the grain yield did not differ significantly between the canopied plots and the uncanopied ones. Furthermore, we showed that the net effects are not negative. Here, we hypothesized that positive effect of A. tortilis can be offset by the presence of birds since our later research are based on the determination of cereal yield (seeds are mature). To test this hypothesis, we wanted in this study to assess the dry matter (DM) of aboveground parts of cereal and the yield of cereal under Acacia tree with and without bird s presence. 2 Methodology Experiments were conducted during To study the effect of A. tortilis on aboveground biomass and yield of cereal, a total of 100 adult trees of A. tortilis of similar size were selected. Selection of trees is based on the presence or absence of colonies of Passer hispaniolensis. However, 50 of them are without colonies and 50 other occupied by colonies of Passer hispaniolensis were counted. About nests per tree were counted in each occupied tree. In our work, we selected hardwheat (Triticum aestivum). The selection of this species was made in accordance with the characteristics of the agroforestry system in the Bled Talah region. Three subhabitats were distinguished. The two subhabitats were located under A. tortilis canopy (with and without nests) and the third in the open area, between the tree canopies (uncanopied subhabitat = open area). In each subhabitat, a quadrat of 1m 1m was used to evaluate the different selected parameters. A total of 150 quadrats were monitored, with mean of 50 per subhabitat. Cereals were clippings during the growing season (tallage), and all fractions were dried at 60 C for 3 days and then weighed. In parallel to biomass, in June 2011, just near the same quadrat, grain of cereal was manually harvested. The grain of cereal were dried to constant weight at 60 C in the laboratory and weighted in order to estimate the grain yield. 3 Results Cereal density was appreciably constant in different studied subhabitats (Table 1). Statistical analyses of cereal aboveground biomass produced a significant difference between the canopies and uncanopied of Acacia tree. This parameter varied between 1300 and 1250 under canopy to Kg. ha-1 in uncanopied ones (Table 1). In our study, presence of birds influenced significantly yield of cereal. The highest mean of this parameter was recorded under canopy without bird s presence. Cereal yield 368

369 decrease significantly from canopy without bird colonies to canopy with bird colonies then to uncanopied one s (p < 0.01). Table 1. Variations of dry matter (kg. ha -1 ), yield (kg. ha -1 ) and density of cereal species (individuals. m -2 ) restricted to three patches (open or uncanopied subhabitat, canopied subhabitat with and without birds). Mean values which are not followed by the same letter are statistically significant (Tukey s HSD-test). Significance: * P < 0.05, ** P < 0.01, *** P < and NS = non-significant. 4 Discussion Overall, our results agree with our initial hypothesis. Our results, comparing the under and randomly selected open plots in terms of aboveground biomass, cereal yield and soil properties, show a positive effect of A. tortilis trees on these parameters. In the present study we showed that the presence of birds influenced the direction of interaction, since in our study we did not observed a negative effect of Acacia tree on aboveground biomass of cereal rather on density. The only differences were showed on cereal yield. In agreement with [4], fluctuations in abiotic conditions may be one cause of change in the net balance between facilitation and competition. Moreover, [5] found in the very dry conditions of the Ténéré desert (Niger) that most of the beneficial effects of a nurse grass on the foundation tree Acacia tortilis ssp. raddiana were indirect through a mitigation of the impact of domestic grazers. In the same way, among the variety of vertebrate pests, small passerine birds-present the greatest threat to increased production in most of the Sahelian countries. The agricultural floodplains in the semi-arid Sahel are within the range of redbilled quelea (Quelea quelea), considered as perhaps the most numerous and most serious avian crop pest in the world [6]. References [1] Noumi Z., Abdallah L., Touzard B., & Chaieb, M., 2012, Acacia tortilis (Forssk.) subsp. raddiana (Savi) Brenan as a foundation species: a test from the arid zone of Tunisia. Rangeland J. 34, pp [2] Noumi Z., Touzard B., Michalet R., & Chaieb M., 2010, The effects of browsing on the structure of Acacia tortilis (Forssk) Hayne subsp. raddiana (Savi) Brenan along a gradient of water availability in arid zones of Tunisia. J. Arid Environ. 74, pp [3] Noumi Z., Abdallah F., Torre F., Michalet R., Touzard B., & Chaieb M., 2011, Impact of Acacia tortilis ssp. raddiana tree on wheat and barley yield in the south of Tunisia. Acta Oecol. 37, pp [4] Bertness M.D., & Callaway R.M., 1994, Positive associations in communities. Trends Ecol. Evol. 9, pp [5] Anthelme F., & Michalet R., 2009, Grass-to-tree facilitation in an arid grazed environment (Aïr Mountains, Sahara). Basic Appl. Ecol. 10, pp [6] MagorJ., 1974, Quelling the quelea-bird plague of Africa. Spectrum 118, pp

370 P.239. Protective effect of Aloysia triphylla extract against manganese-induced oxidative damage in rats reproductive system Hichem Alimi 1, 2, Zouhour bouoni 1,2, Abdelfettah Elfeki 1, Mohamed Salah Allagui 1 1 Laboratory of Animal Ecophysiologie, Faculty of Science of Sfax, 3018 Sfax, Tunisia 2 Research unit of Macromolecular Biochemistry and Genetic, Faculty of Sciences of Gafsa, 2112 Gafsa, Tunisia Abstract The protective effect of the 70% methanol extract of Aloysia triphylla leaves (ATE) on (15mg/kg b.w) manganese-induced toxicity in rat s reproductive system with respect to epidydymis sperm count, sperm motility and testis lipid peroxidation and antioxidant status. Oral pre-treatment with ATE (250 and 500 mg/kg b.w) significantly prevented the Mn toxicity and maintained the rats at near normal status. Keywords: Aloysia triphylla; Manganese; Damage; Reproductive system. 1. Introduction Manganese (Mn) is a naturally occurring trace element commonly found in the environment. As constituent of important metalloenzymes Mn is essential for the regulation of numerous biochemical reactions [1]. However, exposure to excess amounts of Mn has long been known to lead oxidative stress and reproductive system testicular damage [2]. In this line, experiments were carried out in our laboratory to investigate putative protective effects of Aloysia triphylla extract paying attention on the Mn-induced damages in rat testis. Aloysia triphylla belongs to the Verbenaceae family. The leaves of these species have been used for the treatment of asthma, cold, and fever. Phytochemical studies of Aloysia triphylla have demonstrated the presence of polyphenolic, flavonoids compounds and essential oils [3]. Accordingly we hypothesized that gastric instillation of Aloysia triphylla extract (ATE) may prevent Mn-induced reproductive system toxicity in male Wistar rats. Thus, the testicular sperm counts, and sperm motility was evaluated. More so, testicular levels of lipid peroxidation (MDA) and antioxidant enzymes activities such as superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT) and glutathione peroxidase (GPx) were also analyzed. 2. Methodology Preparation of Aloysia triphylla extracts (ATE) Aloysia triphylla extract (ATE) were extracted from 100 g of ground dried leaves using 500 ml of 70% aqueous methanol. The extract was filtered through Whatman filter paper, centrifuged at 4500 g and lyophilized. The ATE yielded g of green residue was stored at 21 C until uses. Animal treatments After the adaptation period, the animals were divided into five groups (n = 8) and treated daily for 45days with two consecutive treatments according to the scheme described in Table 1. Table1. Scheme of drugs treatment Groups (n = 8) Treatments Gastric instillation injection Intra-peritoneal Group control (C) 10 ml/kg b.w of NaCl (0.9%) 10 ml/kg b.w of NaCl (0.9%) Group (Mn) 10 ml/kg b.w of NaCl (0.9%) Mn (15mg /kg b.w) Group (ATE1 + Mn) ATE1 (250mg/kg b.w) Mn (15mg /kg b.w) Group (ATE2 + Mn) ATE2 (500mg/kg b.w) Mn (15mg /kg b.w) Group (ATE) ATE (500mg/kg b.w) 10 ml/kg b.w of NaCl (0.9%) 370

371 Aloysia triphylla extract (ATE), Manganese chloride (MnCl 2 ), and NaCl are dissolved in distilled water. Samples and measurements At the end of the experimental period, all animals were sacrificed by cervical dislocation. Testis and epidydymis are used for the evaluation of sperm count, sperm motility, and antioxidant status. The sperm count and motility are evaluated according to the method of Klinefelter et al., [4]. In testis homogenate (1g/2 ml ice-cold lyses buffer, ph 7.4) the level of lipid peroxidation (MDA) was measured according to the method of Ohkawa et al., [5], SOD activity was estimated according to the method described by Misra and Fridovich, [6], CAT activity was determined according to the method of Aebi, [7], GSH-Px activity was assayed using the method of Flohe and Gunzler, [8] and Protein contents were determined according to Lowry s method [9]. 3.Results Chronic intoxication by Mn (15mg/kg b.w/day for 45 days) caused a significant toxic effect in rat s testis, evidenced by the increase of lipid peroxidation and a signification decrease of the epidydymis sperm motility and number. Activities of the antiperoxidative enzymes SOD, CAT and GSHdependent enzymes (GPx) significantly (p< 0.01) decreased in testis tissues after copious Mn exposure (Fig 1). Whereas oral pretreatment with ATE (250 and 500 mg/kg b.w) significantly prevented these adverse changes and maintained the rats at nearly normal status. The protective effect ATE is probably related to its ability to maintain near to the normal status the activities of free radical scavenging enzymes which protects reproductivesystem against oxidative damage, by decreasing lipid A B C D E F Fig.1: Effect of Aloysia triphylla extract (ATE) on (A) testis malondialdehyde (MDA) level, the activities of antioxidant enzymes, (B) superoxide dismutase (SOD), (C) catalase (CAT), (D) glutathione peroxidase (GPx) and (E) epidydymis sperm count and (F) sperm motility on rats chronically exposed to Mn intoxication. 3. References [1] Milatovic D., Gupta R.C., Yu Y, Zaja-Milatovic S., & Aschner M., 2011, Protective effects of antioxidants and anti- inflammatory agents against manganese-induced oxidative damage and neuronal injury, Toxicol. App. Pharmacol. 256, pp [2] Aschner M., Guilarte T.R., Schneider J.S., & Zheng W., 2007, Manganese: recent advances in understanding its transport and neurotoxicity, Toxicol. Appl. Pharmacol. 221, pp

372 P.241. Isolation, Screening, Characterization and Antagonism Assay of PGPR Isolates from Rhizosphere of oases soil from south of Tunisia Amel Elarbi 1, Mohamed ali triki 2, Noureddine Drira 1 &Gharsallah Neji 1 1 Laboratoire des biotechnologies végétales appliquées à l'amélioration des cultures des plantes, Life Sciences Department, Science Faculty of Sfax, University of Sfax, BP 1171 Sfax 3000, TUNISIA 2 Institut de l Olivier de Sfax, Soukra Km 1.5, 3003 Sfax, Tunisia Sfax Abstract An isolated study of PGPR (plant growth promoting rhizobacteria) was carried out in rhizosphere soil of date palm in south of Tunisia. Fourty five rhizobacteria were isolated, purified and their colony morphology was recorded. All of them were positive for catalase test, Gram positif, oxidase positif. Isolated were identified based on a great variety of morphological, cultural, physiological and molecular characteristics analysis of 16S rdna sequence analysis. Antagonists bacteria are strongly inhibited the growth of numerous several fungi phytopathogens in vitro, such as Rhizoctonia solani, Fusarium oxysporum, Fusarium solani, Alternaria alternata, Alternata solani and Rhizoctonia bataticola. Bacteria were screened for their plant growth promoting factors like production of indole -3-acetic acid IAA, phosphate solubilization production abilities and cell wall degrading enzyme activities such as proteolytic enzyme. Two isolates SPMIII2 and SPMIII4 were selected for an investigation of their growth promoting potential on date palm (Phoenix dactilefera L.) Key words: PGPR, P-solubilization, IAA, antimicrobial activity 1. Introduction: The interest for biological control of plant pathogens was increased over the past decade, especially because of using various chemical controls (fungicides). Consequently, the use of plant growth promoting rhizobacteria PGPR for biological control is considered as an alternative method and promotted approach. Their beneficial effect on plant such as production of phytohormon like indole -3-acetic acid IAA, phosphate solubilization [1] Indirect growth promotion occurs through the biological control of plant pathogens and deleterious microbes by the production of hydrogen cyanide [2], siderophores [3] and antimicrobial [4]. 2. Methodology: Soil sample: Soil samples were collected from the rhizosphere from several saharian ecosystems from oases called Nefta situated in south Tunisian area. The rhizospheric soil samples were collected at 20 cm depth. Samples from a group of three similar trees were mixed and carefully taken in plastic bags and stored at 4 C until analysis. 1. Screening of antibacterial activity by agar well diffusion method Antibacterial activity was assayed in duplicate by agar well diffusion method. Wells of 5 mm diameter were punched in MH (Mueller Henton) agar plates seeded with test bacterial organisms. Antibacterial activity was tested in vivo against pathogenic bacteria Staphylococcus aureus, Bacillus cereus, Listeria monocytogene and E. coli 2. Screening for antagonism 2.1 Dual-culture assay The in vitro antagonistic assay was performed according to the dual culture method on PDA medium. Phytopathogen fungi isolated from one day old culture was disposed at the 1/3 of Petri dishes and the bacterial strains were streaked in a square form around the agar disk at 3 cm distance. 2.2 Effect of culture filtrate on growth of phytopathogenic fungi 372

373 The isolated bacteria were inoculated into Tryptone soy broth and incubated for 18 h at 37 C. After required days of incubation ( 2, 4 and, 6 day ), the cell-free supernatant was obtained by centrifugation at 10,000 rpm for 20 min, followed by filtration through a 0.45 µm pore-size filter and added in to sterile PDA to obtain 10, 20, 40, and 60 % concentration. PDA without culture filtrate was used as control. The tested fungi were placed at the centre of the mixed PDA plate. The antifungal activities were calculated using the following equation: Growth inhibition (%) = [(mycelia length in the control plate mycelia length in the treated plate)/ mycelia length in the control plate 100]. 3. Characterisation of traits of PGPR: The screening of hydrogen cyanide production by bacterial isolates cultured in nutriment agar added with 4, 4 g/l glycine land streaking the isolates on this modified agar plates; awhatman no.1 filter paper soaked in a 2 % sodium carbonate in 0.5 % picric acid solution was placed onto plates and incubated at 30 C for 4 days after which development of orange or red color indicated HCN production by the isolates[5]. IAA production by the bacterial isolates was measured by the method of Wohler (1997) [6].Bacteria were grown over night on TSB broth and then collected by centrifugation at 10,000 rpm for 15 min and 2 ml supernatant of each tube was added by 2 ml of Salkowaski reagent (FECL3 HCLO4). Mixtures were incubated at room temperature for 25 min and observed for the development of pink color. Detection of phosphate solubilizing ability: Bacterial strains were tested by plate assay using Pikovskaya medium (PVK). The halo appearing around the colony after 7 days of incubation at 28 C indicates phosphate solubilization ability of strains. 4. DNA extraction, 16S rrna sequencing Genomic DNA purification with the CTAB phenol-chloroform-isoamylic alcool method Strains were grown and collected as described above. The sequence was compared for similarity with the reference species of bacteria contained in genomic database banks, using the NCBI BLAST available at 3.Main results: In the present study, two isolates of plant growth-promoting rhizobacteria SPMIII 2 and SPMIII4 were selected. Antagonist bacteria strains were tested in dual culture against AA, AS and RB with 50% inhibition but they has no effect on RS, FOS and PYT. Also, Two days old culture filtrates of SPMIII2 and SPMIII4 are completely inhibited the growth of Rhizoctonia bataticola at 60% concentration. Moreover, an inhibitory halo of isolate SPMIII2 was observed against Listeria monocytogene (21 mm) and Staphylococcus aureus (7 mm) with no inhibition against Bacillus cereus and E. coli. Similar results were observed with SPMIII4. Isolated has a proteolytic activity, HCN, IAA but haven't activity phosphate solubilization. References: [1] Freitas JR, Banerjee MR, Germida JJ Phosphate solubulizing bacteria enhance the growth and yield but not phosphorus uptake of canola (Brassica napus L). Biol. Fert. Soils, 24: [2] Owen A, Zlor R Effect of cyanogenic rhizobacteria on the growth of velvetleaf (Abutilon theophrasti) and Corn (Zea mays) in autoclaved soil and the influence of supplemented glycine. Soil Biochem., 33: [3] Pidello A 2003.The effect of Pseudomonas fluorescens strains varying in pyoverdine production on the soil redox status. Plant Soil. 253: [4] Chaiharn M, Chunhaleuchanon S, Kozo A, Lumyong S Screening of rhizobacteria for their plant growth promoting activities. J. KMITL Sci. Tech., 8: [5]Ahmad, F.,Ahmad,I.,Khan,M.S.,2008.Screening of free living rhizospheric bacteria for their multiple plant growth promoting activities.microbiologicalresearch 163,173e

374 P.242. Screening factors influencing the extraction of gelatin from the skin of cuttlefish (Sepia officinalis), characterization and application. 1 Mourad Jridi, 2 Amel Kammoun, 1 Imen Lassoued, 1 Nadhem Sayari, 2 Moncef chaâbouni & 1 Moncef Nasri a Laboratoire de Génie Enzymatique et de Microbiologie, Université de Sfax, Ecole Nationale d Ingénieurs de Sfax, B.P Sfax, Tunisia b Laboratoire de Chimie Industrielle, Université de Sfax, Ecole Nationale d'ingénieurs de Sfax, B.P Sfax, Tunisia Abstract Supersaturated design (SSD) was used for screening the parameters of gelatin extraction from cuttlefish (Sepia officinalis) skin. Results indicated that five factors, namely, alkali concentration, acid reagent, crude acid protease, thermal treatment temperature and centrifugation time, were influential factors. In order the optimal conditions of gelatin extraction were: pretreatment with NaOH for 1h 0.03 M, followed by treatment with smooth hound acid protease (SHAP) for 24 h at 4 C, and then extraction for 14 h at 40 C. The yield of gelatin extraction was 54.6%. The CSG showed stronger ability of apple juice clarification and the nutritional components of clarified apple juice were not changed. Composition, functional properties and in vitro antioxidant activities of gelatin hydrolysates prepared from skin of cuttlefish (Sepia officinalis) were investigated. Cuttlefish skin gelatin hydrolysates (CSGHs) were obtained by treatment with crude enzyme preparations from Bacillus licheniformis NH1, Bacillus mojavensis A21, Bacillus subtilis A26 and commercial Alcalase. Keywords: Gelatin, Cuttlefish skin, Functional properties, Apple juice clarification. 1 Introduction Gelatin is defined as a denatured protein derived from collagen by thermo hydrolysis and has a rheological property of thermo-reversible transformation between solution and gel. Gelatin has been widely utilized in food, pharmaceutical and photographic industries [1]. Generally, fish gelatin is produced by a mild acid treatment process (type A gelatin). To increase gelatin extraction, some proteases may be carefully employed. Pepsin has been reported to cleave peptides in the telopeptide region of native collagen, thus the yield of partially cleaved collagen can be increased [2]. In a previous study, Balti et al. [3] reported the extraction of gelatin from cuttlefish (Sepia officinalis) skin using a smouth hound acid protease-aided process. The main objective of this study was to test the robustness of process of cuttlefish skin gelatin extraction by screen factors using SSD method. Some functional properties as well as application in clarification of apple juice were also investigated. 2 Methodology 2.1 Gelatin extraction Gelatin was extracted from the skin of cuttlefish according to the procedure described by Nalinanon et al. [3] with a slight modification. 2.2 Gelatin characterization The moisture, ash and fat contents of cuttlefish skin and CSG powder were determined according to the AOAC methods. Gelatin solutions were analyzed by polyacrylamide gel electrophoresis. Then, some functional and textural properties were also investigated Clarification of apple juice To each 50 ml of apple juice, 1, 2, 3 and 4 ml of 10% (w/v) cuttlefish skin gelatin solution were added. The control flask contained only juice. At the same concentrations, similar experiments were conducted using bovin gelatin. 374

375 3 Main Results Proximate compositions of cuttlefish skin and CSG are shown in Table 2. Cuttlefish skin contained moisture as the major component (82.8%), followed by protein (14%). The fat content was less than 1.3%. Trace amount of ash (0.63%) was found. The electrophoretic (SDS-PAGE) profile of the cuttlefish gelatin is shown in Fig. 1. Calf skin collagen type I was used as marker for α-chains (α1, α2) and its polymer mainly β-component. The gel electrophoresis showed the presence of the three bands that correspond to gelatin; CSG contained one β chain with the higher molecular weight and α1- and α2-chains. The effect of bovine and cuttlefish gelatins on the clarification of apple juice is presented in Fig. 1. Different concentrations of gelatin solution were used to clarify apple juice. As shown in Fig. 1 CSG was more effective that BG in the clarification of apple juice and the optimal concentration resulting in the best clarification efficiency was used (10%; w/v). 1 2 HMW-a β α 1 α 2 A Fig. 1. The effect of cuttlefish (A) and bovine (B) gelatin on the clarification of apple juices. 0: without; 1: 1 ml: 2: 2 ml; 3: 3 ml; 4: 4 ml of gelatin water solution 10%. B Fig. 2. SDS-PAGE profiles of the cuttlefish-skin gelatin (1) and calf skin collagen type I (2). 1: 30 µg/ml; HMW-a, high molecular weightaggregates. Table 1: The proximate composition of cuttlefish skin and CSG Composition Cuttlefish skin CSG Moisture (%) 82.8 ± ± 0.14 Protein (%) ± ± 0.21 Fat (%) 1.3 ± ± 0.02 Ash (%) 0.6 ± ± ph (1%) Fig. 3. Degree of hydrolysis (DH) of CSGHs during hydrolysis with Alcalase, NH1 proteases, A21 and A26 proteases at 30 U enzyme/mg substrate. Crude enzyme preparations from B. mojavensis A21, B. subtilis A26 and B. licheniformis NH1, and Alcalase were used for the hydrolysis of cuttlefish skin gelatin in order to obtain peptides with different molecular weights and different amino acid sequences (fig.3). Cuttlefish skin gelatin hydrolysates (CSGHs) obtained with different alkaline proteases resulted in a product with an excellent solubility over a wide ph range. In addition, antioxidant activities of cuttlefish gelatin hydrolysates varied with crude enzymatic used. CSGHs could be used as an emulsifier and as a foaming agent with antioxidant activities. References [1] Karim A.A., & Bhat, R., 2009, Fish gelatin: properties, challenges, and prospects as an alternative to mammalian gelatins, Food Hydrocoll. 23, pp [2] Nalinanon S., Benjakul S., Visessanguan W., & Kishimura, H., 2008), Improvement of gelatin extraction from bigeye snapper skin using pepsin-aided process in combination with protease inhibitor, Food Hydrocoll. 22(4), pp [3] Balti R., Jridi M., Sila A., Souissi N., Nedjar-Arroume N., Guillochon D., & Nasri, M., 2011, Extraction and functional properties of gelatin from the skin of cuttlefish (Sepia officinalis) using smooth hound crude acid protease-aided process, Food Hydrocoll. 25, pp

376 P Extraction, caractérisation physicochimique et activité biologique des algues marines Ben Gara Amel 1, Hamden Khaled 2, Belghith Karima 1 et Feki Abdelfattah 2 1 Laboratoire des Biotechnologies Végétales Appliquées à l Amélioration des Cultures (LBVAAC). 2 Laboratoire d Ecophysiologie Animale, Faculté des Sciences, Université de Sfax, BP 1171 Sfax 3000, TUNISIE bengara_amel@yahoo.fr Résumé Des algues marines Gracilaria verrucosa, Hypnea musiformis, Cystoseira crinita et Ulva lactuca ont été utilisées pour le dosage des polyphénols et d investir in vitro les propriétés antioxydantes, antidiabétiques, anti-obésité et hypotensive. L analyse des différents extraits d algues issus du fractionnement par des solvants à polarité croissante semble que ces quatre genre d algues sont riches en composés phénoliques (19 ; ; 10,48 et 8.44g GAE/100g MS) respectivement chez Cystoseira, Ulva, Hypnea et Gracilaria, et en flavonoïdes et flavonols (22.44, 6.37, 5.68 et 3.45g QE/100g MS) ; (7.7 ; 1.35 ; 2.98 et 2.37g QE/100g MS) sont respectivement chez Ulva, Gracilaria, Cystoseira et Hypnea.En comparaison avec les témoins positifs, les tests «in vitro» de l activité inhibitrice de l alpha amylase ont également révélé, chez l extrait phénolique des algues, à la fois un remarquable inhibition (IC 50 =20.24 ; ; et µg/ml) sont respectivement chez Hypnea, Ulva, Gracilaria et Cystoseira, aussi les tests «in vitro» de l activité de la lipase ont un remarquable inhibition (IC 50 =33.48 ; ; ; µg/ml), sont respectivement chez Ulva, Hypnea, Gracilaria et Cystoseira. Mots clés : composés phénoliques, flavonoïdes, flavonols, activité alpha amylase, activité lipase 1 Introduction Le diabète sucré, maladie chronique par excellence est la majeure de diverses complications pathologiques y compris l hyperlipidémie, l obésité, les néphropathies et les maladies cardiovasculaires, Les bioresources marines jouent un rôle majeur dans l introduction de nouveaux agents thérapeutiques [1]. Par leurs nombreux effets bénéfiques antidiabétique, anti-obésité et hypotensive, les polyphénols, ces produits marins ne cessent de susciter l attention des chercheurs. 2 Matériels et méthodes Les algues marines collectées ont subit un lavage à grande eau, eau du robinet, suivi d un rinçage à l eau douce puis séchées à l ombre et broyées finement. Le dosage des polyphénols est basé sur le fait que le réactif Ciocalteu adaptée par Van Alstyne en 1995 agit avec les groupements oxydables [2]. Les valeurs sont exprimées en g équivalent d acide gallique/100 g de matière sèche. Les teneurs en flavonoïdes sont estimées par la méthode de Lamaison et Carnat (1991) [3], et les teneurs en flavonols ont été dosés par la méthode d Almaraz-Abarca et collaborateurs (2007) [4]. Ces derniers sont exprimées en g équivalent de quercétine/100 g de matière sèche. Les extraits phénoliques et polysaccharidiques sont utilisés lors de la détermination des activités inhibitrice de l alpha amylase et de la lipase. 3 Résultats et discussions L examen des figures 1 et 2 montrent, pour les quatre genres d algues, des teneurs importantes aussi bien en composés phénoliques qu en flavonoïdes et flavonols. La teneur en polyphénols est nettement supérieure chez le genre Cystoseira 19 g Eq GAE/100g MS que chez le genre Ulva g/100g MS. Cette teneur est de g/100g MS pour Hypnea. La plus faible teneur en composés phénoliques est obtenue pour l algue Gracilaria 8.44 g/100g MS. Nous avons remarqué qu il existe une différence entre les quatre espèces d algues pour les teneurs en flavonoïdes et en flavonols. L Ulva lactuca est plus riche en flavonoïdes (22.44 g Eq QE/100g MS) et en flavonols 7.7g/100g que Gracilaria dont les teneurs sont de l ordre de 6.37g/100g en flavonoïdes et 1.35 g/100g en flavonols. Pour Cystoseira crinita, les teneurs en flavonoïdes et en flavonols sont de 5.68 g/100g et 2.98 g/100g respectivement. Hypnea musciformis montre les plus faibles teneurs en flavonoïdes et en flavonols qui sont de 3.45 g/100g et 2.37 g/100g respectivement. La teneur en flavonoïdes de nos extraits est corrélée avec leur teneur en polyphénols. La variation des teneurs, d une algue à une autre, semble être liée au climat et au biotope de la plante. 376

377 Figure 1 : Teneurs des composés phénoliques algues marines Figure 2 : Teneurs en flavonoïdes et flavonols des d un groupe d algues marines L extrait phénoliques d algues présent un effet inhibiteur important sur l activité alpha-amylase (figure 3). Cette inhibition est proportionnelle à la concentration d extrait utilisé et on peut estimer une IC 50 de µg/ml pour Hypnea musciformis ; µg/ml pour Ulva lactuca ; µg/ml pour Gracilaria varrucosa ; µg/ml pour Cystoseira crinita et µg/ml pour l Acarbose (témoin positif). Cette inhibition peut atteindre une valeur maximale remarquable de 92.62% chez Ulva. Cette étude a porté sur le potentiel anti-diabétique par l activité de l extrait polyphénolique mettant l'accent sur l'effet inhibiteur sur α-amylase. Figure 3: Etude de l inhibition de l alpha amylase Figure 4: Etude de l inhibition de la lipase par des par des extraits polyphénoliques d algues marines. extraits polyphénoliques d algues marines. µg/ml pour Cystoseira crinita. Les extraits naturels offrent une opportunité excitante et prometteuse pour le développement de nouvelles approches thérapeutiques pour le traitement des l'obésité. Cette étude «in vitro» montre que l extrait polyphénolique présente un effet inhibiteur important sur l activité lipase (figure 4). Cette inhibition est proportionnelle à la concentration de l extrait. L IC 50 pour l Ulva est de µg/ml, elle est de µg/ml pour l Hypnea, de µg/ml pour Gracilaria et enfin elle est de µg/ml pour Cystoseira crinita. Les extraits naturels offrent une opportunité excitante et prometteuse pour le développement de nouvelles approches thérapeutiques pour le traitement des l'obésité Références [1] Kumar, A.S., A. Mazumder and V.S. Saravanan., Antihyperlipidemic activity of camellia sinensis leaves in triton Wr-1339 induced albino rats. Phcog. Mag., 4: [2] VAN ALSTYNE, K. L., Comparison of three methods for quantifying brown algal polyphenolic compounds. Journal of Chemical Ecology, Vol. 21, No 1,

378 P.244. Antifungal and antibacterial activity of leaf and essential oil extracts of Ruta montana L. from Tunisia 1 Inès Hammami, 1 Mohamed Ali Triki, 1 Aymen Mseddi & 2 Radouane Gdoura 1 Unité de Recherche Protection des Plantes Cultivées et Environnement, Institut de l Olivier, Sfax BP1087, Tunisia 2 Laboratoire de Microbiologie, UR/08-73 Faculté des Science de Sfax, Université de Sfax, BP1171, 3000, Sfax, Tunisia Abstract The aims of this study were to assess the antimicrobial efficacy of the leaf essential oil and the leaf extracts of R. montana against Botrytis cinerea, Fusarium oxysporum, Verticillium dahliae, Aspergillus oryzae and Fusarium solani.. The oil had a strong detrimental effect on spore germination of all the tested plant pathogens along with the concentration as well as time-dependent kinetic inhibition of Fusarium oxysporum. Also, the oil exhibited a potent in vivo antifungal effect against Botrytis cinerea on tomato plants. Experiments carried out in plant revealed that the essential oil was slightly effective in suppression of gall formation induced by Agrobacterium tumefaciens on bitter almond. The results of this study indicate that the oil and extracts of R. montana leaves could become natural alternatives to synthetic fungicides to control certain important plant microbial diseases. The GC MS analysis determined that 28 compounds, which represented 89.03% of total oil, were present in the oil containing mainly 1-butene, methylcyclopropane, 2-butene and caryophyllene oxide. Keywords : Ruta montana, Antimicrobial activity, Essential oil, Leaf extract, in vivo assay 1. Introduction Diseases caused by plant pathogenic bacteria and fungi significantly contribute to the overall loss in crop yield worldwide [1]. For many years, a variety of different synthetic chemicals have been extensively used as antifungal and antibacterial agents to inhibit the growth of plant pathogenic fungi and bacteria. However, there is a series of problems against the effective use of these chemicals in areas where bacteria and fungi have developed resistance [2]. Research focused on plant-derived fungicides and bactericides and their possible applications in agriculture are being intensified as these are having enormous potential to inspire and influence modern agro-chemical research [3]. There has been a growing interest in the research of the possible use of the plant-derived natural fungicides and bactericide such as essential oil and plant extracts, which can be relatively less damaging for pest and disease control in agriculture [4]. Also the plants have long been recognized as providing a potential source of chemical compounds or more commonly, products known as phytochemicals including essential oils and extracts [5]. Hence, efforts have been given to evaluate the potential role of the essential oil and the extracts from Ruta montana L. leaves as natural antimicrobial agents. In the present study, we assessed the in vitro and in vivo, the antimicrobial efficacy of the leaf essential oil and leaf extracts of R. montana L. against some important plant phytopathogenic bacteria and fungi causing severe destruction to crop, vegetable and ornamental plants and we examined the chemical compositions of the essential oil. 2. Methodology Isolation of the leaf Essential Oil The air-dried leaves of R. montana (200 g) were subjected to hydrodistillation for 3 h. The oil, with a yield of 0.26% (w/w), was dried over anhydrous Na 2 SO 4 and preserved in sealed vials at 4 C until further analysis. Preparation of leaf Extracts 378

379 The air-dried leaves of R. montana were pulverized into a powdered form. The dried powder (50 g) was extracted with 70% methanol (MeOH), ethyl acetate (EtOAc), chloroform (CHCl 3 ) and hexane, separately at room temperature and the solvents from the combined extracts were evaporated by vacuum rotary evaporator. The extraction process resulted in hexane (3.8 g), chloroform (4.5 g), ethyl acetate (6.3 g) and methanol (6.1 g) extracts with their respective yields of 7.5, 9.0, 13.6 and 12.2%. Antibacterial assay The determination of the antibacterial effect of the oil and extracts was tested according to the agar well diffusion assay. DMSO, hexane, chloroform, ethyl acetate and methanol were used as control. Antifungal Susceptibility Assay The in vitro susceptibility of plant pathogenic fungi was determined by the minimum inhibitory concentration determination method. The standard reference fungicide, benomyl, was used as the positive control for the plant pathogens tested. The minimum concentrations at which no visible growth was observed were defined as the MICs and were expressed in µg ml -1. Gas chromatography mass spectrometry (GC MS) analysis The GC MS analysis of the essential oil was performed using a SHIMADZU GC MS (GC-17A) equipped with a ZB-1 MS fused silica capillary column (30 m 0.25 m i.d., film thickness 0.25 µm). 3. Main Results The oil of R. montana obtained by hydrodistillation of the leaves contains monoterpene hydrocarbons and oxygen containing mono- and sesquiterpenes. This research work also describes the complex effect of the oil on fungal spore germination and exhibited a wide range of antifungal activity. During the kinetic study of F. oxysporum, it appeared that exposure time of the oil had a little effect on the fungicidal activity at lower concentration but at a concentration of 125 µg ml -1, the fungicidal action was very rapid and showed 100% spore germination inhibition of F. oxysporum. Also the results of the antifungal screening showed that leaf extracts of methanol, ethyl acetate and chloroform have strong antifungal activity against the tested plant pathogens. However, the hexane extract did not reveal significant results of antifungal activity. This might be attributable to the resistant behaviour of the test fungi against a low-polar extract. On the other hand, in the present study, the essential oil of R. montana showed potential in vivo antifungal effects against the tested plant pathogen of B. cinerea on tomato plants and reduction of crown gall incidence on bitter almond rootstocks. Thus, it can be concluded that the use R. montana mediated oil and extracts could be considered as an antimicrobial agent available for developing a novel type of natural fungicide and bactericide able to control several plant pathogenic fungi and bacteria causing severe diseases in food, crops and vegetables. Acknowledgements: This work was supported by the Ministry of Agriculture and Water Resources and the Ministry of Higher Education and Scientific Research, Tunisia. References [1] Montesinos E., 2007, Antimicrobial peptides and plant disease control. Microbiol. Lett. 270: [2] Brent KJ., & Hollomon DW., 1998, Fungicide resistance: the assessment of risk. FRAC, Global Crop Protection Federation, Brussels, pp 1 48 [3] Duke SO Natural pesticides from plants. In: Janick J, Simon JE (eds) Advances in new crops. Timber Press, Portland, pp [4] Costa TR., Fernandes FLF., Santos SC., Oliveria CMA., Liao LM., Sales BHN., & Silva MRR., 2000, Antifungal activity of volatile constituents of Eugenia dysenterica leaf oil. J. Ethnopharmacol. 72(2): [5] Negi PS., Chauhan AS., Sadia GA., Rohinishree YS., & Ramteke RS., 2005, Antioxidant and antibacterial activities of various seabuckthorn (Hippophae rhamnoides L.) seed extracts. Food. Chem. 92:

380 P.245. In vitro anti-diabetic, anti-obesity and antioxidant proprieties of Juniperus phoenicea L. leaves from Tunisia 1 Henda Keskes, 2 Kais Mnafgui, 2 Khaled Hamden, 1 Mohamed DAMAK, 2 Abdelfattah EL FEKI, & 1 Noureddine Allouche. 1 Laboratory of Chemistry of Natural Products, University of Sfax, Faculty of Sciences of Sfax, BP 1171, 3000, Sfax, TUNISIA. 2 Laboratory of Animal Ecophysiology, University of Sfax, Faculty of Sciences of Sfax, BP 1171, 3000, Sfax, TUNISIA. Abstract This study was designed to examine chemical composition and antioxidant activity as well as the in vitro α-amylase and pancreatic lipase inhibitory activities of the essential oil and various extracts of Juniperus phoenicea. GC-MS analyze of the essential oil resulted in the identification of 40 compounds, representing 96.98% of the oil. The IC 50 values of essential oil, hexane and methanolic extracts against α-amylase were 35.44, and μg/ml respectively, and those against pancreatic lipase were 66.15, 68,47 and μg/ml respectively, suggesting powerful anti-diabetic and anti-obesity effects. Antioxidant activity (IC 50 = 2 µg/ml) and total phenolics content (265 mg GAE/g extract) of the methanolic extract were found to be highest compared to the other extracts. Keywords: Chemical composition, α-amylase, lipase, essential oil, antioxidant activity. 1. Introduction Diabetes mellitus is a serious health problem that has adverse and long-lasting consequences for individuals, families, and communities. The magnitude of this problem has increased dramatically over the last three decades and estimated to reach 439 million among adult patients by 2030[1]. Juniperus phoenicea is considered as an important medicinal plant largely used in the Tunisian traditional medicine. Its leaves are used in the form of decoction to cure many diseases such as diarrhea, bronchitis, rheumatism and diabetes. Hence, this study sought to investigate the in vitro inhibitory ability of various extracts of Juniperus phonicea on α-amylase and lipase activities as well as to assess their antioxidant property. 2. Methodology The dried leaves powder of Juniperus phoenicea (130 g) was extracted sequentially by maceration in hexane, EtOAc and MeOH. The α-amylase and pancreatic lipase inhibitory activities for different extracts were determined based on spectrophotometric assays as described previously [2-3]. Total phenolics content was assayed using the Folin Ciocalteu reagent following Singleton s method and the total flavonoids content in the various extracts was determined according to Akrout and coworkers [4]. The antioxidant activity of juniperus phoenicea essential oil and various extracts was determined by the DPPH test [5] and the β-carotene bleaching method [6]. 3. Results 380

381 Table 1: Alpha-amylase and pancreatic lipase inhibitions assay of essential oil and various extracts of Juniperus phonicea Sample IC 50 (µg/ml) Alpha-amylase IC 50 (µg/ml) Pancreatic lipase Hexane Extract Methanolic Extract Essential Oil Ethyl Acetate Extract Negligible Negligible Table 2: Total phenolics and flavonoids contents of various extracts of Juniperus phoenicea leaves Extracts Total phenolics (mg GAE/g) Total flavonoids (mg QE/mg) Hexane Extract ± ± 0.48 Ethyl Acetate Extract ± ± 0.8 Methanolic Extract 264 ± ± 0.52 Fig. 1 Free radical-scavenging capacities of the Juniperus phonicea extracts measured in DPPH assay Fig. 2 Inhibition ratio of the linoleic acid oxidation by the Juniperus phonicea essential oil and extracts. Acknowledgements: This work was supported by the Ministry of High Education and Scientific Research. References [1] Shaw J E., Sicree R A., & Zimmet P Z., 2010, Global estimates of the prevalence of diabetes for 2010 and 2030, Diabetes Res Clin Pr. Vol. 87, pp [2] Gella F J., Gubern G., Vidal R., & Canalias F., 1997, Determination of total and pancreatic α- amylase in human serum with 2-chloro-4- nitrophenyl- -D-maltotrioside as substrate, Clin Chim Acta. Vol. 259, pp [3] Nakai M., Fukui Y., Asami S., Toyoda-Ono Y., Iwashita T., & Shibata H., 2005, Inhibitory effects of oolong tea polyphenols on pancreatic lipase in vitro. J. Agric Food Chem. Vol. 53, pp [4] Oktay M., Gulcin I., & Kufrevioglu O I., 2003, Determination of in vitro antioxidant activity of fennel (Foeniculum vulgare) seed extracts, Food Sci Technol. Vol. 36, pp [5] Akrout A., Alarcon G L., El Jani H., & Campra M P., 2011, Antioxidant and antitumor activities of Artemisia campestris and Thymelaea hirsuta from southern Tunisia J Food Chem Toxicol. Vol. 49, pp [6] Fki I., Allouche N., & Sayadi S., 2005, The use of polyphenolic extract, purified hydroxytyrosol and 3, 4-dihydroxypheny l acetic acid from olive mill wastewater for the stabilization of refined oils: a potential alternative to synthetic antioxidants, Food Chem. Vol. 93, pp [7] Allouche N., Sayadi S., & Damak M., 2004, Phenolics compounds with antioxidant activity from olive mill wastewaters, Journal de la Société Chimique detunisie. Vol. 6, pp

382 Inhibitory activities of Zygophyllum album a natural weight-lowering plant on key enzymes in high fat diet-fed rats Kais Mnafgui 1, Khaled Hamden 1, Mouna Kchaou 2, Hichem Ben Salah 2, Noureddine Allouche 2, Abdelfattah Elfeki 1 1 Laboratory of Animal Ecophysiology, Faculty of Sciences of Sfax, University of Sfax, P.O.Box 95, Sfax 3052, Tunisia; 2 Laboratory of Chemistry of Natural Products, Faculty of Sciences of Sfax, B.P. 1171, 3000 Sfax, Tunisia; Abstract Obesity is a serious health problem that increased risk for developing many medical complications. This study aimed to investigate the effect of Zygophyllum album extract (EZA) on key-enzymes related to obesity. The results showed that administration of EZA to high fat diet-fed rats lowered their body weight by 12%, reduced serum leptin level by 34% and inhibited lipase activity in serum of obese rats by 37% leading to notable decrease of T-Ch, TG and LDL-c levels accompanied with an increase in HDL-c concentration in serum and liver of EZA treated high fat diet fed-rats. In conclusion, this study provides the possible pharmacologic rationale to the medicinal use of Zygophyllum album in the development of anti-obesity drugs. Keywords: Zygophyllum album, body weight, leptin, lipase 1. Introduction: Obesity is a serious health problem worldwide [1,2]. The accumulation of abnormal or excessive amount of body fat could have several health complications associated with major risk factor for several serious chronic diseases, such as type 2 diabetes, cardiovascular disease, hypertension, stroke, asthma, and certain forms of cancer [3,4]. The synthetic pharmacological drugs prescribed against hyperlipidemia and overweight had adverse side effects [5]. Thus, there is a potent need to explore complementary alternative medicine particularly from medicinal plants. One therapeutic approach obesity and hyperlipidemia is to delay the digestion and absorption of fat via the use of safer lipase inhibitors from natural sources in order to reduce the postprandial hyperlipidemia. Zygophyllum album is a plant used in the Tunisian folk medicine as a drug active against rheumatism, gout and asthma. It is also used as diuretic, local anaesthetic, antihistaminic and anti-diabetic agent. Therefore, this investigation was aimed to report the therapeutic effect of Zygophyllum album against hyperlipidemia induced with a standardized high fat diet (HFD) in female rats along with possible mechanisms. 2. Methodology: The assays of the present study were conducted on adult female Wistar rats, weighting 140 ± 10 g, which were obtained from the local Central Pharmacy. The rats were randomly divided in four groups of eight animals each: Group I: (Control) normal female rats were fed with normal chow diet. Group II: (HFD) female rats received high fat diet for 6 weeks. Group III: (Fluv) female rats received HFD and fluvastatin (2mg / kg, body weight/ daily) for 6 weeks. Group IV: (EZA) female rats received HFD and treated with ethanolic extract of Zygophyllum album by gastric gavage route food (400 mg/ Kg of body weight/ daily) for 6 weeks. After the 6 weeks induction, the animals were sacrificed by decapitation in order to minimize the handling stress, and the trunk blood collected. The serum was prepared by centrifugation (1500 g, 15min, 4 C), frozen and stored at -20 C until analysis. 3. Results Effect of EZA on body weight of HFD -fed female rats By the end of the 6 weeks, administration of EZA or fluvastatin to HFD-fed rats reduced significantly the body weight in comparison with the corresponding HFD group by (12 and 10%) respectively, p< 0.05 (Fig.1). 382

383 Effect of EZA on serum Leptin level of experiment animals. In response to the fluvastatin and EZA, serum leptin levels in groups received high fat diet were significantly reduced by 35 and 34% respectively as compared to HFD-fed rats, P < 0.05 (Figure 2). Effect of EZA on lipase activity and lipids profile in serum and liver. Fig.3 indicated that the administration of EZA to the obese animals decreased the lipase activity in serum by 37%, which lowered the rate of TC, TG and LDL-c and increased HDL-c levels in serum and liver (Table 3). Moreover, fluvastatin supplementation to HFD-fed female rats was observed to improve their lipid profile. Fig.1: Effect of EZA on body weight control and HFD treated rats. Fig.2: Effect of EZA on serum leptin level of experiment of animals. Groups Cont HFD HFD+Fluv HFD+EZA Serum (mmol/l) TC 1.67 ± ± 0.14 * 1.77 ± 0.1 *# 1.74 ± 0.1 *# TG 0.96 ± ± 0.16 * 0.96 ± 0.07 *# 0.96 ± 0.04 *# LDL-c 0.47 ± ± 0.16 * 0.49 ± 0.15 *# 0.53 ± 0.03 *# HDL-c 1.02 ± ± 0.04 * 1.04 ± 0.07 # 1.05 ± 0.06 # Liver(mg/100mg WT) TC 1.08 ± ± 0.15 * 1.22 ± 0.02 *# 1.27 ± 0.05 *# Fig.3: Effect of EZA on serum lipase level of experiment animals. TG T a LDL-c b HDL-c l e 0.63 ± ± ± ± 0.11 * 1.78 ± 0.12 * 0.38 ± 0.01 * 0.72 ± 0.06 *# 0.45 ± 0.04 *# 0.49 ± 0.02 *# 0.77 ± 0.04 *# 0.48 ± 0.03 *# 0.51 ± 0.02 *# 1: Total cholesterol (T-Ch), LDL-cholesterol (LDL-c), HDL- cholesterol (HDL-c) and triglycerides (TG) in serum and liver of HFD-fed rats treated with EZA. WT: Wet Tissue. Values are given as mean ± SD for group of 8 animals each. Values are statistically presented as follows: *P< 0.05 significant differences compared to controls. #P < 0.05 significant differences compared to HFD rats. References [1] Formiguera X., & Canton A., 2004, Obesity: epidemiology and clinical aspects, Best Practice & Research Clinical Gastroenterology, vol. 18, pp [2] Haslam W., & James P., Obesity, Lancet, vol. 366, pp [3] Grundy S.M., 2004, Obesity, metabolic syndrome, and cardiovascular disease, Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism, vol. 89, pp [4] Singla P., Bardoloi A., & Parkash A.A., 2010, Metabolic effects of obesity, a review World Journal of Diabetes, vol. 1, no. 3, pp [5] Rahul B., Biraria R.B. & Bhutani K.K., 2007, Pancreatic lipase inhibitors from natural sources: unexplored potential, Drug Discovery Today, vol. 1219, pp

384 P.247. Antifibrosis effects of All-trans-Retinoic Acid in a rat model of bleomycin-induced pulmonary fibrosis 1 Raja Serairi Beji, 1 Anouar Abidi, Rihab Zemni & 1 Saloua Ben Khamsa 1 Unit Research 03/UR/08-05, Pulmonary Fibrosis: Prevention & Treatment, Faculty of Medicine, University of El Manar, La Rabta Bab Saâdoun, TUNISIA. Keywords: ATRA- pulmonary fibrosis-oxidative stress 1 Introduction All-trans-retinoic acid (ATRA), a physiologic metabolite of vitamin A, is known to affect cell differentiation, proliferation, and development. Pulmonary fibrosis is one of the most common chronic interstitial lung diseases with high mortality rate after diagnosis and limited successful treatment. 2 Methodology The present study was designed to assess the potential antifibrotic effect of ATRA and whether ATRA can attenuate the severity of oxidative stress and inflammatory response during bleomycin-induced pulmonary fibrosis in rats. Treatment groups included: (1) a single intratracheal (i.t.) instillation of bleomycin and weekly intraperitoneal (i.p.) injection of 3 mg/kg ATRA; (2) i.t. bleomycin and i.p. diluent (cottonseed oil); (3) i.t. saline and i.p. ATRA, 3 mg/kg weekly, (4) i.t. saline and i.p. diluent. Eight rats in each group were sacrificed on day 28 after intratracheal instillation. Fibrosis was assessed by measuring fibrosis score and inflammatory index. Levels of lipid peroxidation in lung were estimated by measuring the formation of thiobarbituric acid reactive substances (TBARS). Superoxidedismutase (SOD) activity was determined in lung homogenate using the method of Beyer and Fridovich. Catalase (CAT) activity was measured according to the method of Aebi and glutathione-peroxidase (GPX) activity was measured using the method of Flohe and Gunzler. 3 Main Results Both fibrosis score and inflammatory index are increased markedly in the bleomycin group 2 but and significantly reduced by concurrent treatment with ATRA (group 1). Furthermore, histopathological examination confirmed the antifibrotic effect of ATRA. The levels of TBARS and the GPX activities significantly increased in group 2 compared with the values obtained in group 1. ATRA administration to rats treated with bleomycin caused a significant decrease in TBARS production and GPX activities when compared to rats treated with bleomycin alone (respectively 2.85±0.38 vs 6.04±0.78 nmol/mg protein for TBARS and 1.47±0.27 vs 2.48 ±0.28 nmol GSH/min/mg protein for GPX). The levels of CAT and SOD activities were significantly decreased in the group 2 when compared to the values in the group 1 (respectively p<0.01 and p<0.001). Collectively these findings indicate that ATRA treatment significantly attenuated the increased pulmonary damage induced by bleomycin. This study supports the use of ATRA to prevent or ameliorate lung fibrosis. 384

385 P.248. RENAL PHYSIOPATHOLOGY IN RAT TREATED BY IMIDACLOPRIDE Leila Saadi 1 and Rafika Matallah 2 1 Département de biologie, Faculté des Sciences Agro-Vétérinaires et Biologiques, Université SAAD DAHLAB de Blida, ALGERIE 2 Laboratoire de d Ecobiologie Animale, Ecole Normale Supérieure de Kouba, ALGERIE. saadileila4@gmail.com ABSTRACT In favor to its low soil persistence and its high insecticidal activity, the imidacloprid, the most neonicotinoide insecticid, is used in the world to defend the harvests. The present work has for purpose to estimate the oral chronic toxicity of 1/25 DL50 (17.6 mg/kg/day) of imidacloprid during 60 days to rats adults females. A comparative study between controls (n = 15) and treated (n = 15) is made from biochemical assays of renal parameters and histological analysis of the renal parenchyma. Based on the results, a body weight gain (220g±22.63 compared with 183.8g ± 16.43) was observed with no mortality occurred during the treatment period. However, the renal activity is altered without significant change in absolute (1.511g± compared with 1.569g±0.313 in control) and relative (0.689g% ± compared with 0.741g% in control) kidney weights. The parenchyme shows a degeneration of some renal glomerule accompanied with the installation of a renal dysfunction translated by the increase in the plasma urea (0.8g/l ± 0.22 compared with 0.41g/l ± in control), of the creatinine (7mg/l ± 0 compared with 3.83mg/l ± in control) and acid uric (60mg/l ± 5.55 compared with mg/l ± 6.08 in control). In the stemming from these results, we can conclude that even with a low dose, the imidacloprid incites remarkable toxic effects to rat adult female. Key words: Imidacloprid; DL50; Toxicity; Female rat; Renal Physiopathology. 385

386 P.250. In silico screening of genes involved in flowering in Date palm (Phoenix dactylifera L.) Ben Fraj Nesrine, Elleuch Amine, Dhieb Amina and Noureddine Drira Laboratory of Plant Biotechnology, Department of Biology, Faculty of Sciences Sfax, Route Soukra BP: 1171, 3000 University of Sfax, Tunisia. Abstract Date palm (Phoenix dactylifera) is one of the most economically important woody crops cultivated in the Middle East and North Africa. Nonetheless, a dioecious mode and late initial reproductive age of 5 10 years are major practical constraints to genetic improvement. Since 2011, a sequencing project has made publicly available a substantial part of the genome of the best varieties of date palms cv Khalas. It is predicted to cover ~90% of genes and ~60% of the genome. In this study we are interested in screening some genes involved in flowering based on comparison with other different species mainly Arabidopsis thaliana by using BLASTn search. 66 contig have been identified in palm date of gene implicated in the different pathways of flowering process. The size of the fragment found in palm date varies between 22nt and 1172nt with more than 65% homology. Key Words: Date palm, Genes involved in flowering, Genetic control of flowering 1 Introduction In dioecious plants cultivated for fruit or seed, including date palm, it is often difficult to identify gender at an early stage so that farmer can cultivate in their orchards a sufficiently large number of productive female trees with only a minimal number of male ones. Moreover, it is important to select and identify superior males in terms of fertilization [1].Addressed for improvement of this species and increase productivity. It is necessary to acquire knowledge about the cellular and molecular bases that govern the sexual dimorphism in the date palm. For this reason, in this study we were concerned identifiying genes involved in flowering of Phoenix dactylifera in order to achieve the desired goal, the targeting of key genes of early determination of sex. As a preliminary study, it was resorting to use bioinformatics tools to identify genes that govern the process of flowering, genetic analyses and genes involved in flowering process have been identified mainly in A.thaliana. This process is controlled by complex genetic networks. The genetic and molecular analyses of Arabidopsis have revealed several interdependent genetic pathways for flowering, which enable plants to monitor both environmental and endogenous signals [2]. In A.thaliana, the initiation of flowering is carried out by four genetic pathways: gibberellin, autonomous, vernalization, and light-dependent pathways. These processes are integrated by the function of the genes FD, FE, FWA, PDF2, SOC1, and FT at the integration pathway. The integrated signal of the floral induction is transmitted to the floral meristem identity genes LFY and AP1, and floral morphogenesis is performed [3]. 2 Methodology Based on the sequenced (~ 60%) of the date palm genome available recently in GenBank databases, we tried to identify coding regions for genes involved in flowering process and that are already annotated in other plants like A.thaliana. To achieve this goal, we resorted to use bioinformatics tools for screening libraries. We used the BLAST software (Basic Local Alignment Search Tool), with option BLASTn WGS (Whole Genome Shotgun contigs). We introduced mrna sequences of genes already identified mainly in Arabidopsis thaliana and in other plant species involved in the process of flowering. The objective of this study is to find these sequences in Phoenix dactylifera and determine their degree of similarity. Fig.1: Basic BLAST programs and databases 386

387 3 Main Results In this study, firstly, we collected 66 sequences or "contig" of different genes involved in flowering mainly from A. thaliana The identified genes were classified according to the way in which they are involved in the flowering process. we have identified 2 genes of flowering repressors, 3 genes involved in the signaling pathway gibbérelliques acid, 8 genes for autonomous way, 8 genes for vernalization-dependent pathway, 16 genes in the pathdependent light and 29 gene involved in the pathway and inclusive identity of floral parts.threshold was set as 65% homology chosen as lower limit for homologies presented in this work. We have chosen to present here only the two most important genes in terms of size and percentage of homology. (a) Phytochrome B (PHYB) (b) Circadian clock-associated (FKF1) Fig.2: BLAST results of alignment PHYB and FKF1 contig respectively identified in A.thaliana and Glycine max with date palm genome Both gene PHYB and FKF1 are involved in light-dependent pathway, when PHY B encodes a protein of red light photoreceptor, identified in Arabidopsis thaliana and FKF1 involved in the regulation of photoperiod and rhythm circadian clock, identified in Glycine max. Position; size and percentage of homology with the date palm genome are presented in table 1. Gene and Accession number (Genbank) Espece size (bp) function Accession number of sequence (Genbank) size& percentage of homology Position homology Phytochrome B (PHYB) NM_ Arabidopsis thaliana 3996 Red/far-red photoreceptor involved in the regulation of gene expression in CONSTANS (CO). ACYX /816 (74%) 38/50 (76%) ACYX /1283 (68%) 577/815 (71%) ACYX /1050 (68%) 287/443 (65%) ACYX /20 (100%) ACYX /23 (96%) ACYX /20 (100%) ACYX /20 (100%) Circadian clockassociated (FKF1) NM_ Glycine max 2048 circadian clock-associated involved in the regulation of gene GIGANTEA(GI) and CONSTANS (CO) ACYX /1593 (72%) 82/110 (75%) ACYX /1208 (72%) 147/210 (70%) ACYX /1209 (71%) 170/235 (72%) ACYX /20 (100%) ACYX /20 (100%) ACYX /30 (93%) ACYX /21 (100%) References [1]S.A. Bekheet and M.S. Hanafy, Towards Sex Determination of Date Palm. S.M. Jain et al. (eds.), Date Palm Biotechnology, Pg [2] J. Moon, H. Lee, M. Kim and I. Lee, (2005).Analysis of Flowering Pathway Integrators inarabidopsis Plant Cell Physiol 46 (2): [3] Y. Komeda, Genetic regulation of time to flower in Arabidopsis thaliana Plant Biology Vol. 55: