TITRE : Utilisation des différents appareils POS 05-2010 AUTEUR(ES) : Marie-Ève Ouellette, biotechnologue. OBJECTIF : Ce POS a pour objectif de vous guider dans l utilisation des différents appareils présents dans les laboratoires. Il vous permettra de réagir de façon adéquate lors de bris, déversement biologique ou de contamination à l intérieur des appareillages. Vous serez aussi guidé dans l utilisation d équipement recommandé pour éviter les complications et les accidents de travail. NIVEAU DE CONFINEMENT : Niveau 1 et 2. REFERENCE : Lignes directrices en matière de biosécurité en laboratoire, 3 e édition, Agence de santé publique du Canada, 2004. L utilisation des appareils sera classée en fonction du niveau de confinement dans lequel il se trouve Aucun n appareil ne doit être manœuvré avec des gants contaminés 1. Appareils utilisés dans un niveau de confinement 1 Micropipette (10, 20, 100, 200 ou 1000 μl) Microscope (optique ou fluorescence) Bain-marie Centrifugeuse Lecteur de plaque Vortex Incubateur 1.1 Micropipette (10, 20, 100, 200, 1000 μl) Les pipettes doivent dans un premier temps être calibrées tous les mois (la date de calibration doit être inscrite sur la pipette, ainsi que les initiales du calibreur). S informer quant aux procédures d utilisation propres à chaque modèle. La pipette doit rester en tout temps à la verticale pour éviter toute contamination. Si le filtre de la pipette est contaminé, vous devez le retirer, le jeter dans le conteneur à déchets approprié (sac biorisque de préférence) et le changer par un nouveau filtre. 1.2 Microscope (optique ou fluorescence) Avant de travailler avec le microscope, assurez-vous d avoir lu la procédure d utilisation retrouvée dans le manuel de référence ou d avoir suivi une formation de base assurée par le technicien du laboratoire.
En tout temps, vous devrez tenir à jour le journal de bord de l appareil (date et heure Nettoyer celui-ci avant et après chaque utilisation en suivant la procédure adéquate. Si une anomalie survient, en informer le responsable du laboratoire sur le champ. Si un bris survient (lame brisée, lentille, etc.) en informer le responsable de laboratoire. En tout temps, lorsque qu un matériel biologique se retrouve sur l appareil, vous devez faire preuve de prudence. Si le matériel se brise et que l échantillon biologique n est plus contenu, vous devez nettoyer avec précaution à l aide de papier buvard et selon le cas : - Nettoyant à lentille avec papier à lentilles; - Sur une surface de plastique, utilisez un peu d éthanol 70 % sur du papier buvard. Si vous avez des doutes sur la procédure à suivre, référez-vous au manuel de référence du microscope qui se trouve tout près de celui-ci 1.3 Bain-marie Le bain-marie doit être lavé tous les mois avec un détergent prévu à cet effet. Vous pouvez utiliser de l eau de javel à 10 % et laisser tremper 30 minutes. Rincer à l eau au moins à trois reprises. Remplir avec de l eau distillée, préférablement autoclavée. L ajout de clear bath est fortement suggéré. Dans le cas d une contamination, vider et nettoyer comme mentionné ci-haut. 1.4 Centrifugeuse Les centrifugeuses sont toutes différentes, vous devez absolument connaître la procédure d utilisation décrite dans le manuel de référence de chacune d elle. Vérifier les caractéristiques des rotors ainsi que l utilisation des tubes spécifiques à chaque rotor. Vous devez avoir suivi une formation préalable avec un membre du laboratoire avant d utiliser une centrifugeuse pour la première fois. Lors d anomalie, vous devez en avertir le responsable de laboratoire. Si un déversement biologique survient (échantillon niveau 1), vous devez, avec vos gants, nettoyer la surface contaminée avec de l éthanol 70 % et laisser agir 5 minutes. Recommencer la procédure de nettoyage (BIS). Sortir le rotor, nettoyer au savon doux et rincer à l eau. Inscrire le déversement dans le journal de bord de l appareil. 1.5 Lecteur de plaque Le lecteur de plaque doit être utilisé seulement après avoir lu les procédures d utilisation de l appareil retrouvées dans le manuel de référence. Le couvercle de la plaque doit rester en tout temps sur celle-ci avant la lecture. Les procédures de nettoyage de l appareil doivent toujours être effectuées selon les directives du manuel de référence.
1.6 Vortex Le vortex doit être utilisé sur une surface bien plane. Tout matériel à vortexer doit être placé dans un contenant fermé hermétiquement. Si un déversement survient, nettoyer avec éthanol 70 % et laisser reposer 5 min. 1.7 Incubateur L incubateur doit être rempli avec de l eau distillée, préférablement autoclavée. Assurez-vous que le niveau d eau est suffisant. Tout matériel biologique qui y est placé doit être correctement identifié. Il doit être nettoyé une fois par mois avec un savon doux et rincé à l eau. Si une contamination survient, vous devez jeter le matériel contenu dans l incubateur. Nettoyer avec de l eau de javel 10 % et laisser agir 10 min. Rincer à l eau (x 3). 2. Appareil utilisés dans un niveau de confinement 2 Micropipette (10, 20, 100, 200, 1000 μl) Microscope (optique) Bain-marie Centrifugeuse Lecteur de plaque Vortex 2.1 Micropipette (10, 20, 100, 200, 1000 μl) Les pipettes doivent dans un premier temps être calibrées tous les mois (la date de calibration doit être inscrite sur la pipette, ainsi que les initiales du calibreur). S informer sur les procédures d utilisation propres à chaque modèle. La pipette doit rester en tout temps à la verticale pour éviter toute contamination. Si le filtre de la pipette est contaminé, vous devez le retirer, le jeter dans le conteneur à déchet approprié (sac biorisque de préférence) et le changer par un nouveau filtre. La pipette doit être décontaminée à l éthanol 70 % (x 2); laisser reposer 5 min. 2.2 Microscope (optique) Avant de travailler avec le microscope, assurez-vous d avoir lu la procédure d utilisation retrouvée dans le manuel de référence ou d avoir suivi une formation de base assurée par le technicien du laboratoire. Nettoyer celui-ci avant et après chaque utilisation en suivant la procédure adéquate. Si une anomalie survient, en informer le responsable du laboratoire sur le champ. Si un bris survient (lame brisée, lentille, etc.) en informer le responsable de laboratoire. En tout temps, lorsqu un matériel biologique se retrouve sur l appareil, vous devez faire preuve de prudence. Si le matériel se brise et que l échantillon biologique n est plus contenu, vous devez nettoyer avec précaution à l aide de papier buvard et selon le cas : - Le nettoyant à lentille avec le papier à lentille (5 min);
- Sur une surface de plastique, utiliser un peu d éthanol 70 % sur du papier buvard (x 2) et laisser reposer 5min entre chaque nettoyage. Si vous avez des doutes sur la procédure à suivre, référez-vous au manuel de référence du microscope qui se trouve tout près de celui-ci 2.3 Bain-marie Le bain-marie doit être lavé tous les mois avec un détergent prévu à cet effet. Nettoyer à l eau de javel à 10 % et laisser tremper 30 minutes. Rincer au moins à trois reprises à l eau. Remplir avec de l eau distillée et préférablement autoclavée. L ajout de clear bath est fortement suggéré. Dans le cas d une contamination, vider et nettoyer comme mentionné ci-haut. 2.4 Centrifugeuse Les centrifugeuses sont toutes différentes, vous devez absolument connaître la procédure d utilisation décrite dans le manuel de référence de chacune d entre elles. Vérifier les caractéristiques de chaque rotor ainsi que l utilisation des tubes spécifiques à chaque rotor. Vous devez avoir suivit une formation préalable avec un membre du laboratoire avant d utiliser la centrifugeuse pour une première fois. En tout temps, vous devez mettre les échantillons dans les récipients prévus à cet effet et ce, dans la salle de confinement niveau 2 et fermer le couvercle avant de quitter la salle. Changer vos gants (ou retirer la paire supplémentaire) avant de vous rendre à la centrifugeuse. Lors d anomalie, vous devez en avertir le responsable de laboratoire. Si un déversement biologique survient (échantillon niveau 2), vous devez, avec vos gants, nettoyer la surface contaminée avec de l éthanol 70 % et laisser agir 5 minutes. Recommencer la procédure de nettoyage (BIS). Sortir le rotor, nettoyer au savon doux et rincer à l eau. Inscrire le déversement dans le journal de bord de l appareil. 2.5 Lecteur de plaque Le lecteur de plaque doit être utilisé seulement après avoir lu les procédures d utilisation de l appareil retrouvées dans le manuel de référence. Le couvercle de la plaque doit rester en tout temps sur celle-ci avant la lecture. Les procédures de nettoyage de l appareil doivent toujours être effectuées selon les directives du manuel de référence. Vous devez nettoyer les surfaces de chaque plaque avec de l éthanol 70 % ainsi que le portoir de plaque avant et après chaque utilisation. Tous les déchets doivent être jetés dans le sac biorisque et être autoclavés.
2.6 Vortex Le vortex doit être utilisé sur une surface bien plane, de préférence à l intérieur de l ESB. Tout matériel à vortexer doit être placé dans un contenant fermé hermétiquement. Si un déversement survient, nettoyer avec de l éthanol 70 % et laisser reposer 5 min. 2.7 Incubateur L incubateur doit être rempli avec de l eau distillée, préférablement autoclavée. Assurez-vous que le niveau d eau est suffisant. Tout matériel biologique qui y est placé doit être correctement identifié. Il doit être nettoyé une fois par mois avec un savon doux et rincé à l eau. Si une contamination survient, vous devez jeter le matériel contenu dans l incubateur. Nettoyer avec de l eau de javel 10 % et laisser agir 10 min. Rincer à l eau (x 3). Le masculin est utilisé à titre d'épicène Dernière mise à jour du document : mai 2010