Ecole des Filles de Marie 5 ème année Assistants pharmaceutico-techniques Professeur : Vander Steichel Carine. Elèves : Aharchi Hakima, Bamba Nayadi, Boualkma Kaoutar, Bssissen Zakia, El Makhoukhi Mariem, El Ouafi Myriam, Lazam Sahila. Medhi Kaoutar, Oueld Ahmed Mariam, Sari Ahmet,Uzabakiliho Marie, Zegagh Adra. OPERATION CHERCHEURS D EAU PRINTEMPS DES SCIENCES Année scolaire 2002-2003 Travail réalisé dans le cadre du cours de sciences et technologies Parrain : Monsieur Devleeschouwer Responsable du Laboratoire de Microbiologie pharmaceutique et d hygiène Institut de pharmacie de l ULB.
Analyse de la qualité microbiologique d eaux pharmaceutiques. But : Analyser la qualité microbiologique d une eau utilisée dans une industrie qui fabrique des artères artificielles. Cette eau, qui est distribuée par la CIBE doit subir plusieurs étapes de purification. A : B : C : D : L eau d arrivée CIBE passe sur du charbon actif qui a pour effet de retenir les impuretés chimiques présentes dans l eau. Toutefois, l eau qui passe sur le charbon voit sa teneur en microorganismes augmenter rapidement par la présence de substances nutritives. Après passage sur le charbon, l eau passe sur une résine échangeuse d ions. Ce procédé permet d éliminer les ions présents dans l eau. L étape suivante consiste à faire passer l eau sous une lampe U.V. Celle ci a pour mission d éliminer les microorganismes. Enfin, l eau passe sur un filtre absolu de 0.22 µm qui élimine les derniers microorganismes indésirables. Nous avons analysé au laboratoire les échantillons suivants : - eau d arrivée CIBE (échantillon 1) - eau passée sur charbon (échantillon 2) - eau passée sur charbon et résine (échantillon 3) - eau passée sur charbon, résine et lampe UV (échantillon 4) Les quatre échantillons ont été filtrés sur un appareillage stérile. Le filtre (0.45 µm) a ensuite été placé sur une boite de gélose TSA et mis en incubation 4 jours à 32 C. Après ces 4 jours, nous avons dénombré les germes présents. Quels types de germes recherche-t-on? Germes indices de souillure fécale :
-germes totaux (mis en culture sur une gélose TSA) -coliformes fécaux (mis en culture sur une gélose MAC CONKEY ) Méthode de travail : Filtration des échantillons a) 100 ml filtre mis en culture sur gélose TSA b) 100 ml filtre mis en culture sur gélose Mac Conkey c) 10 ml filtre mis en culture sur gélose TSA Dénombrement sur boite a) 2 x 1 ml dans une gélose TSA b) 2 x 0,1 ml dans une gélose TSA Pourquoi filtrer différents volumes? Lorsque l on estime que l échantillon de 100 ml risque de contenir trop de germes et qu il sera difficile de les dénombrer. On dilue alors 10 fois puis 100 fois l échantillon. Incubation Les boites de géloses sont incubées 4 jours à 32 C (31.5 C 32.5 C ) Comptage. Il se fait de façon manuelle.
MATERIEL: -Erlenmeyer -Entonnoir à verre fritté -Pince pour le verre fritté -Filtre stérile (0.45um) -Pince pour le filtre -Pipette graduée (0,1ml,1ml,10ml) -Pompe à vide -Tuyau -Bec bunsen -4 boites de gélose vide -1 boite de gélose Mac Conkey -2 boites de gélose TSA PRODUITS: -Gélose TSA liquide -Echantillons d'eau GELOSES :! TSA : milieu utilisé pour cultiver des germes exigeants. Composition :Tryptone Peptone de soja Chlorure de sodium Agar Eau 1 1 1000g! MAC CONKEY : milieu sélectif pour la culture des bactéries gram - surtout les entérobactéries. Composition :peptone de caséine 17 g Peptone de viande 3g Lactose 10g Sels biliaires 1, Chlorure de sodium Agar 13, Rouge neutre 0,03g Violet cristallisé 0,001g Eau 1000 ml
Tableau de< résultats : Echantillon Dates Germes/ml Coliformes/100ml 04/02/03 12 < 1 1 18/02/03 10 < 1 25/02/03 15 < 1 04/02/03 320 < 1 2 18/02/03 240 < 1 25/02/03 930 < 1 04/02/03 50 < 1 3 18/02/03 30 < 1 25/02/03 74 < 1 04/02/03 1 < 1 4 18/02/03 85/100ml < 1 25/02/03 2 < 1 Intérprétation : Echantillon 1 : L eau CIBE contient très peu de germes et répond donc ainsi aux normes de potabilité. Echantillon 2 : L eau stagne un certain temps en passant sur le charbon. Ce qui permet aux germes présents de continuer à se multiplier. C est la raison pour laquelle on trouve dans cet échantillon un nombre important de bactéries. Echantillon 3 : Après passage sur résine, l eau contient déjà moins de germes. Echantillon 4 : La lampe UV est très efficace pour éliminer les germes présents. Les quelques germes qui persistent dans l eau après les trois premières étapes de purification seront éliminés par la dernière étape qui consiste à faire passer l eau sur un filtre absolu (0.22 µm). Nous n avons pu pour des raisons pratiques vérifier cette étape au laboratoire.