PULMOTESTS (Tests ELISA respiratoires antigéniques)

Dimension: px

Commencer à balayer dès la page:

Download "PULMOTESTS (Tests ELISA respiratoires antigéniques)"

Ghislaine Aurore Olivier
il y a 8 ans
Total affichages :

1 PULMOTESTS (Tests ELISA respiratoires antigéniques) BIO K 341/2-336/1-335/1-337/1-340/2-340/5 Mycoplasma bovis - BRSV - BoHV-1 - BVDV - TETRA Les affections respiratoires constituent chez les bovins un problème préoccupant étant donné leur fréquence et le nombre élevé d animaux qui en souffrent. Ces affections se rencontrent dans tous les pays qui pratiquent un système d élevage intensif impliquant le regroupement d un grand nombre d animaux dans des espaces limités. L étiologie de ces affections est multi-factorielle, ce qui en complique la pathogénie mais aussi le traitement. Des agents viraux et bactériens en association avec un état de stress provenant soit de déplacements dans des véhicules surpeuplés, soit de maintien des animaux dans des étables mal entretenues ou mal ventilées, jouent un rôle important dans le déclenchement d affections respiratoires aiguës. Ces affections touchent plus particulièrement les jeunes animaux bien qu elles puissent également affecter les adultes. Dans la plupart des cas, les animaux souffrant d affections respiratoires hébergent plusieurs agents pathogènes dont certains agissent en synergie. Ainsi, il est généralement reconnu que les virus sont les premiers agents à intervenir et que les bactéries agissant comme second envahisseur accentuent la pathologie. La fièvre des transports, «shipping fever», est un bel exemple de la synergie d action qui peut exister au niveau de l arbre respiratoire entre un virus, le PI3, et une bactérie comme Mannheimia haemolytica. Le Pulmotest respiratoire permet de poser un diagnostic à partir d un broyat de poumon prélevé sur le cadavre. Il est également possible d utiliser du liquide de lavage trachéobronchique ou à défaut du liquide nasal pour poser un diagnostic à l aide du test. La fiabilité du diagnostic est toutefois moindre que lorsqu on utilise un broyat pulmonaire. Protocole des tests Fiabilité des résultats. L utilisation d anticorps monoclonaux comme conjugués assure une excellente spécificité et l obtention de résultats très fiables. Facilité d utilisation Peu de manipulations sont nécessaires. Incubation à température ambiante. Résultats disponibles en maximum 140 minutes excepté pour Mycoplasma bovis (72 heures). Flexibilité Les résultats peuvent être lus visuellement ou à l aide d un spectrophotomètre. (BoHV1, BVDV, BRSV, Tetra) BIO K 335/1 - BIO K 337/1 - BIO K 336/1 - BIO K 340/2 /5 1- Les microplaques sont saturées avec des anticorps monoclonaux ou polyclonaux. 2- Ajouter les échantillons et le(s) contrôle(s) positif(s). 3- Ajouter le ou les conjugués. 4- Ajouter le chromogène (TMB). Attendre 10 minutes Ajouter la solution d arrêt. Lire à 450 nm

Ces affections se rencontrent dans tous les pays qui pratiquent un système d élevage intensif impliquant le regroupement d un grand nombre d animaux dans des espaces limités.

2 Protocole du test BIO K 341/2 - Mycoplasma bovis 1- La microplaque est saturée avec un anticorps polyclonal. 2- Ajouter les échantillons et le contrôle positif. Incuber 72 heures à 37 C+/-0,5 C. 3- Ajouter le conjugué. 4- Ajouter le chromogène (TMB). Attendre 10 minutes Ajouter la solution d arrêt. Lire à 450 nm Des échantillons pulmonaires ont été prélevés à la salle d autopsie sur des animaux décédés de troubles respiratoires. Ces échantillons ont été découpés en petits fragments dans la solution de lyse de la trousse à l aide d une paire de ciseaux. Ils ont ensuite été testés sur les trousses Pulmotest en suivant les protocoles. Ces échantillons ont également été testés en pour le BoHV1, en nested RT pour le BRSV et en RT pour le BVDV à l aide de protocoles internes développés par. Exemple de résultats BoHV1 Exemple de résultats BVDV ELISA BIO K 335/ Spécificité: 98,0 % Sensibilité: 100 % ELISA BIO K 337/ Spécificité: 98,0 % Sensibilité: 100 %

Lire à 450 nm Des échantillons pulmonaires ont été prélevés à la salle d autopsie sur des animaux décédés de troubles respiratoires.

3 ELISA BIO K 336/1 Exemple de résultats BRSV Spécificité: 98,7 % Sensibilité: 92,0 % Parainfluenza 3: 2 échantillons positifs 102 échantillons négatifs Mycoplasma bovis: 6 échantillons positifs 69 échantillons négatifs Pour Mycoplasma bovis, la trousse BIO K 341 a été utilisée. Les échantillons pulmonaires ont été découpés dans la solution lyse de la trousse. Les échantillons ont été dilués 4 fois (dilutions d ordre 9) en suivant le protocole du kit dans le milieu de Hayflick en présence d un mélange d antibiotiques et d antimycosiques puis incubés sur la plaque durant 72 heures à 37 C. Fréquences (résultats ELISA) BRSV 23,5 % Mycoplasma bovis 8 % BVDV 4,9 % BHV-1 4,0 % PI3 1,9 %

Les échantillons pulmonaires ont été découpés dans la solution lyse de la trousse.

4 Conclusions Les différentes trousses Pulmotest (trousses individuelles ou combinées) offrent une alternative intéressante pour les laboratoires qui ne sont pas équipés du matériel nécessaire à la réalisation de tests d immunofluorescence sur coupes d organes (cryostat, microscope équipé d un dispositif d épifluorescence). D autre part, les Pulmotests permettent d éviter de devoir recourir à des méthodes coûteuses et fastidieuses à mettre en oeuvre comme la et la culture cellulaire. Les comparaisons effectuées entre les ELISA Pulmotest et la ont montré que la spécificité des Pulmotests était adéquate. On peut considérer que la sensibilité du Pulmotest BRSV (BIO K 188) est suffisante dans la mesure ou la capacité d amplification de la est sans doute excessive avec comme conséquence un risque de détecter des quantités de particules virales insuffisantes pour expliquer la clinique du cas étudié. Les tests réalisés à l aide des Pulmotests ont permis de confirmer que le BRSV est l agent pathogène le plus souvent associé aux bronchopneumonies enzootiques graves. Mycoplasma bovis est également un agent pathogène important dont la mise en évidence est d autant plus importante qu il peut être combattu par l utilisation d antibiotiques adéquats. Le virus BVDV n est pas considéré comme un agent primaire responsable de bronchopneumonies enzootiques chez le bovin mais son action immunodéprimante sur le système immunitaire favorise l émergence d autres agents pathogènes. La faible fréquence de détection du virus BoHV-1 trouve sans doute son origine dans la politique de lutte active que mène actuellement la Belgique contre ce virus. Le rôle joué par le virus Adeno 3 dans les bronchopneumonies enzootiques des bovins fait toujours l objet de discussions. Composition des trousses BIO K335/1 - BIO K 336/1 - BIO K 337/1 Microplaque 1-12 strips (48 tests) Solution de lavage 1 X 100 ml (20 X) Solution de lyse 1 X 100 ml (1 X) Conjugué 1 X 12 ml (1 X) Contrôle positif 1 X 2 ml (1 X) TMB mono-composant 1 X 12 ml (1 X) Solution d arrêt 1 X 6 ml (1 X) Stabilité : Un an entre +2 C et +8 C

D autre part, les Pulmotests permettent d éviter de devoir recourir à des méthodes coûteuses et fastidieuses à mettre en oeuvre comme la et la culture cellulaire.

5 PULMOTEST TETRA BIO K 340/2 BIO K 340/5 Microplaques 2 (24 tests) 5 (60 tests) Solution de lavage 1 X 100 ml (20 X) 1 X 250 ml (20 X) Solution de lyse 1 X 50 ml (5 X) 1 X 125 ml (5 X) Conjugués 4 X 6 ml (1 X) 4 X 15 ml (1 X) Contrôle positif 1 X 4 ml (1 X) 1 X 10 ml (1 X) TMB mono-composant 1 X 25 ml (1 X) 1 X 55 ml (1 X) Solution d arrêt 1 X 15 ml (1 X) 1 X 30 ml (1 X) BIO K 341/2 - PULMOTEST Mycoplasma bovis Microplaques 2-12 strips (24 tests) Solution de lavage 1 X 100 ml (20 X) Conjugué 1 X 25 ml (1 X) Antigène de contrôle 2 X 0.5 ml (1 X) TMB mono-composant 1 X 25 ml (1 X) Solution d arrêt 1 X 15 ml (1 X) Milieu de Hayflick 1 X 30 ml Antibiotique - antimycotique 2 Stabilité : Un an entre +2 C et +8 C

1 X 30 ml (1 X) BIO K 341/2 - PULMOTEST Mycoplasma bovis Microplaques 2-12 strips (24 tests) Solution de lavage 1 X 100 ml (20 X) Conjugué 1 X 25 ml (1 X) Antigène de contrôle 2

Documents pareils

TEST ELISA (ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT ASSEY)

TEST ELISA (ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT ASSEY) Lise Vézina, technicienne de laboratoire Michel Lacroix, agronome-phytopathologiste Direction de l innovation scientifique et technologique Au Laboratoire