Nanovecteurslipidiques bimodaux pour l imagerie in vivo
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- Rachel Falardeau
- il y a 8 ans
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1 Nanovecteurslipidiques bimodaux pour l imagerie in vivo Aurélie Jacquart 1, I. Texier-Nogues 1, F. Mittler 1, F. Navarro 1, R. Boisgard 2, F. Ponce 3, D. Camporese 4, J. Boutet 5 1 CEA-LETI, Minatec-Campus, DTBS/SBSC/LCMI, F Grenoble, France 2 CEA/DSV/I2BM/SHFJ/U1023, 4, place du Général Leclerc, Orsay Cedex, France 3 VetAgro Sup, 1 avenue Bourgelat, Marcyl'Etoile, France 4 Advanced Accelerator Applications, 20 rue Diesel, Saint GenisPouilly, France 5 CEA-LETI, Minatec-Campus, DTBS/STD/LISA, F Grenoble, France
2 Bimodalité: concepts et objectifs Nanoparticules bimodales: NP lipidique: accumulation dans les tumeurs solides par effet EPR Dopage par fluorophore proche infra-rouge pour l imagerie optique Radiotraceur greffé à la surface pour l imagerie TEP Pour l imagerie médicale: Mode pré-operatoire: identification et quantification de tumeurs(pet+optique) Mode per-opératoire: guider le chirurgien pendant l opération 18 F 18 O + e + Lipidot NIR-Dye Fluoptics Radio traceur Nouvelles méthodologies en imagerie du vivant - GDRs IV-Lyon Aurélie Jacquart 12/12/2012 2
3 Formulation des nanovecteurs lipidiques bimodaux Dopage: fluorophore proche infra-rouge Greffage: fonctionnalisation de la surface par des surfactants PEG fonctionnalisés Nouvelles méthodologies en imagerie du vivant - GDRs IV-Lyon Aurélie Jacquart 12/12/2012 3
4 Formulation des nanovecteurs lipidiques bimodaux Dopage: fluorophore proche infra-rouge Greffage: fonctionnalisation de la surface par des surfactants PEG fonctionnalisés Nanoparticule prête pour une post-fonctionalisation Nouvelles méthodologies en imagerie du vivant - GDRs IV-Lyon Aurélie Jacquart 12/12/2012 4
5 Greffage du groupe prostétique 19 F Réaction de greffage: Fonctionnalisation de la surface par des fonction amine Groupe prostétiquepour imagerie TEP 19 F O -NH2 Sultone N O F O -sultone -NH 2 ph 7-9 -sultone -sultone LNP-Sultone-X% Purification par cartouche SEC Nouvelles méthodologies en imagerie du vivant - GDRs IV-Lyon Aurélie Jacquart 12/12/2012 5
6 Caractérisations Propriétés optiques Propriétés Colloidales Abs. Em. Norm. Intensité % Av sultone 12 Ap sultone Diamètre hydrodynamique / nm Spectre d'absorption et d'émission de particule bimodale froide longueur d'onde / nm HD = 60 nm (in NaCl15 mm) PotentielZeta (in NaCl0.15 mm): «capping»= -18 mv -NH2 = mv Activité optique dans le proche infra-rouge λ max (abs)= 793 nm λ max (em)= 815 nm φ f = 0.08 Stabilité des propriétés colloidales et optique sur 3 mois min. Nouvelles méthodologies en imagerie du vivant - GDRs IV-Lyon Aurélie Jacquart 12/12/2012 6
7 Détermination du nombre de groupes prostétiquesàla surface des nanoparticules Réaction de dosage -NH2 ph 7-9 Détermination du taux de couverture par les fonctions amine -NH 2 Fluoresceine-NHS ph 7-9 -fluorescéine Avant sultone Après sultone -sultone Détermination par différentiel % Sultone= % NH2 (avant sultone) -% NH2 (après sultone) Fluoresceine-NHS ph % 100% 69% -sultone -fluorescéine Nouvelles méthodologies en imagerie du vivant - GDRs IV-Lyon Aurélie Jacquart 12/12/2012 7
8 in vitro& in vivo NH 2 -neutralisée Nouvelles méthodologies en imagerie du vivant - GDRs IV-Lyon Aurélie Jacquart 12/12/2012 8
9 Cytotoxicitédes particules pro-bimodales Cytotoxicity of pro-bimodal NPs doped with new NIR Dyes Test WST-1, incubation 24h «Amine» NH2 / capping «standard» «standard» «amine+fluo1» IR780stéaryl-NH2 / capping «amine +fluo2» IR780oléyl-NH2 / capping IC 50 > 1 mg/ml(0.1 %) LNP dopées> LNP vide IC 50 F. Navarro F. Mittler Nouvelles méthodologies en imagerie du vivant - GDRs IV-Lyon Aurélie Jacquart 12/12/2012 9
10 Biodistribution souris saine FVB Fluorophore Libre Lipidot-Fluorophore 2 x 3 souris Raphaël Boisgard Nouvelles méthodologies en imagerie du vivant - GDRs IV-Lyon Aurélie Jacquart 12/12/
11 Biodistribution-chien Goutte de sang 100 µl prélevéavant injection, et àt=1h, 4h, 8h, 24h et 31h après injection T0 T1 T4 T8 T24 T31 CN1 Signal prolongédans le sang Biodistribitionsimilaire àla souris (foie, absence dans rate) Pas d élimination rénale Excrétion hépatobiliaire Frédérique Ponce Nouvelles méthodologies en imagerie du vivant - GDRs IV-Lyon Aurélie Jacquart 12/12/
12 Conclusions et perspectives Particules bimodales «froides» Bon contraste optique et bonne stabilité Pas de toxicité(3t3 IC50>1 mg/ml) des particules Greffage et quantification du groupe prostétique 19 F encore en développement Transfert vers les particules bimodales «chaudes» Etudes In vivo Souris: Bon contraste de fluorescence, la dose peut être diminuée Biodistribution relativement uniforme (sauf foie pour la métabolisation des lipides) Test sur tumeur Chien: 3 injections chez le Beagle (1 mâle, 2 femelles) : Très bon contraste de fluorescence Temps de circulation dans le sang long >30 h Rémanence de fluorescence au-delà de 30 heures dose encore trop importante Réglage de la dose àinjecter en cours : deux chiens sont encore prévus Nouvelles méthodologies en imagerie du vivant - GDRs IV-Lyon Aurélie Jacquart 12/12/
13 Remerciements Frédérique Ponce Isabelle Texier-Nogues Fabrice Navarro Frédérique Mittler Jérôme Boutet Davide Camporese Raphaël Boisgard Financement: Projet Nano-Eno Nouvelles méthodologies en imagerie du vivant - GDRs IV-Lyon Aurélie Jacquart 12/12/
14 Merci de votre attention
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