Les tests cellulaires dans l exploration biologique de l allergie alimentaire : intérêts et limites

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1 Les tests cellulaires dans l exploration biologique de l allergie alimentaire : intérêts et limites S Viel Laboratoire d Immunologie Pr J Bienvenu Centre Hospitalier Lyon Sud 24 Avril 2015

2 Conflits d intérêt ü Intérêts financiers : néant ü Liens durables ou permanents : néant ü Interventions ponctuelles : néant ü Intérêts indirects : néant

3 Diagnostic de l allergie alimentaire : Clinique (SPT) Histoire Clinique Sensibilisation (trophallergène) Biologique IgE spécifiques Test de Provocation Orale Tests Cellulaires

4 Applications du TAB dans le diagnostic de l allergie Nombre de publications ( ) : ü Allergie médicamenteuse : 41 #IgE spécifiques = 17 ü Venins d hyménoptères : 12 ü Allergie alimentaire : 7 #IgE spécifiques = 242 dont 37 moléculaires (Uyttebroek AP et al., Expert Rev. Clin. Immunol, 2014)

5 Pourquoi l utilisation des TAB est limitée dans le diagnostic de l allergie? ü Pas d apport supplémentaire par rapport aux tests classiques? (Tests cutanés et IgE spécifiques) ü Contraintes techniques par rapport au dosage des IgE spécifiques (allergènes moléculaires)?

6 ü Principe du Test d Activation des Basophiles ü Applications dans le diagnostic de l allergie alimentaire ü Intérêts de son utilisation dans d autres applications

7 Physiopathologie de l hypersensibilité de type 1 I : Phase de sensibilisation Phase de déclenchement CD4 Cellule Th2 Cellule B + allergène Basophile ou mastocyte sensibilisé DEGRANULATION Plasmocyte (Dr P. Rouzaire, 2014)

8 Concrètement : 2. Pontage des récepteurs FcεRI par l allergène (via les IgE spécifiques de celui-ci) 1. Incubation des basophiles sensibilisés avec l allergène ayant provoqué la réaction 3. Libération des médiateurs et modifications du phénotype du basophile Expression constitutive faible de CD203c à la surface Surexpression de CD203c à la surface Phosphorylation de p38 Exposition de CD63 à la surface Relargage de médiateurs solubles / Histaflow (Dr P. Rouzaire, 2014)

9 Physiopathologie Protocole de routine de au l hypersensibilité laboratoire : de type I : Sang frais Dilutions d Allergène Incubation Analyse Mélange d Anticorps

10 Physiopathologie Exemple d Activation de l hypersensibilité en présence d Allergène de type : I : Contrôle négatif Contrôle positif (anti-ige) Allergène testé CD203c CRTH2

11 Physiopathologie Principaux marqueurs de l hypersensibilité d identification de type I : ü Pas de marqueur spécifique des basophiles (sauf CD203c) ü Combinaison de marqueurs : ü CD123/HLA-DR ü Anti-IgE/CD203c ü CCR3/SSC low ü CD3/CRTH2 Flowcast Allergenicity kit

12 Physiopathologie Principaux marqueurs de l hypersensibilité d activation : de type I : Nom CD203c Ectonucleo/de Pyrophosphatase phospho- diesterase (E- NPP3) CD63 Lysosomal Associated protein 3 (LAMP- 3) Exprimé par Basophiles, mastocytes Basophiles, mastocytes, monocytes, plaquedes Expression sur les basophiles quiescents Expression sur les basophiles ac/vés Expression cons/tu/ve faible Sur- expression Non exprimé à la surface Exprimé à la surface des granules de sécré/on Exposi<on à la surface cellulaire Ciné/que Rapide (5-15 min) Plus lente (10-25 min) Effet de l IL- 3 Induc/on Pas d induc/on Caractéris/que Marqueur d ac<va<on Marqueur de dégranula<on

13 Physiopathologie Expression des résultats de l hypersensibilité : de type I : CDMax Pourcentage maximal d activation Réactivité du basophile CDsens Dose d allergène correspondant à l ED50 Sensibilité du basophile Prend en compte chaque dilution d Ag (Patil SU et al., Clin Exp Allergy, 2011) R = % de basophiles activés par l allergène % de basophiles activés par le contrôle positif

14 Physiopathologie Exemple de résultats de l hypersensibilité chez des patients de allergiques type I : aux traces d arachide : %$basophile$activé$via$cd203c$ 100! 90! 80! 70! 60! 50! 40! 30! 20! Patient!1!(échec)! Patient!2! Patient!3! Patient!4! Patients CD203c AUC CD ! 0! Concentration$en$arachide$ T H E S E pour le DIPLOME D'ETAT DE DOCTEUR EN PHARMACIE TEST D'ACTIVATION DES BASOPHILES ET ALLERGIE ALIMENTAIRE : Aide à la décision de réalisation d'un Test de Provocation Orale?

15 Physiopathologie Exemple de résultats de l hypersensibilité chez des patients de allergiques type I : aux traces d arachide :

16 ü Principe du Test d Activation des Basophiles ü Applications dans le diagnostic de l allergie alimentaire ü Intérêts de son utilisation dans d autres applications

17 Physiopathologie TAB et diagnostic de l hypersensibilité l allergie alimentaire de : type une I utilisation : limitée ( ) (Uyttebroek AP et al., Expert Rev. Clin Immunol, 2014)

18 ü Principe du Test d Activation des Basophiles ü Applications dans le diagnostic de l allergie alimentaire ü Intérêts de son utilisation dans d autres applications

19 Physiopathologie 1. Un outil pour limiter de l hypersensibilité le recours au de TPO type I : Allergie à l arachide chez l enfant (Santos AF et al., JACI, 2014) TAB Pricks Tests IgEs Ara h 2 IgEs Arachide Population totale Population avec diagnostic ambigu Réduction de 2/3 du nombre de TPO à réaliser

20 Physiopathologie 2. Un marqueur de l hypersensibilité sévérité de type I : Allergie à l arachide chez l enfant (Santos AF et al., JACI, 2015) R = 0.53 R = 1.32 D après cette étude, le résultat du TAB semble permettre de différencier les patients : ü Sévères ü Modérés

21 Physiopathologie 2. Un marqueur de l hypersensibilité sévérité de type I : Allergie au lait de vache chez l enfant (Rubio A et al., Allergy, 2010) ü Corrélation entre le résultat du TAB et la sévérité de la réaction au TPO

22 Physiopathologie 3. Outil pour établir de l hypersensibilité des niveaux de tolérance de type I : Allergie au lait de vache chez l enfant Différence de réactivité des basophiles au lait de vache selon le niveau de tolérance (Wanich N et al., JACI, 2009) (Ford LS et al., JACI, 2013)

23 Physiopathologie 4. Outil de décision de l hypersensibilité de la réintroduction de type I : Allergie au lait de vache chez l enfant (Rubio A et al., Allergy, 2010) ü Un TAB négatif permet d envisager d emblée un TPO ü Le résultat du TAB, couplé aux tests classiques permet une bonne prise en charge dans 94% des cas

24 Physiopathologie 5. Déterminer l impact de l hypersensibilité de la transformation de type alimentaire I : sur l allergénicité Allergie à l arachide (Sabato V et al., J Investig Allergol Clin Immunol, 2011) ü Impact du processus de fabrication sur la réactivité des basophiles

25 Physiopathologie Conclusion de l hypersensibilité de type I : Utilité des TAB dans un contexte général ü Pour les allergènes dont il n existe pas de dosage d IgE spécifiques ü Test fonctionnel ü Très spécifique

26 Physiopathologie Conclusion de l hypersensibilité de type I : Utilité des TAB en allergie alimentaire Intérêts: ü Test sensible et spécifique ü Permet de réduire/mieux cibler les TPO ü Permet d apprécier la gravité de l allergie ü Affiner un diagnostic qui reste ambigu avec les tests classiques Limites : ü «Concurrence» des allergènes moléculaires pour IgE spécifiques en allergie alimentaire (#37 tests) ü Contraintes techniques et de prélèvement ü Coûts

27 Physiopathologie Perspectives de l hypersensibilité de type I : ü Utilisation du TAB dans le suivi des inductions de tolérance? ü Supériorité des «nouveaux» marqueurs d activation? À tester ü Nécessité de standardiser les méthodes, en particulier l interprétation des résultats (Allergobionet, Eurobat) (Thyagarajan A et al., Clin Exp Allergy 2012) ü Diminution de la réactivité des basophiles au cours de l immunothérapie?

28 Physiopathologie Remerciements de l hypersensibilité de type I : Pr J Bienvenu Dr F Bienvenu Dr P Rouzaire Dr L Garnier D Gaujac C Fernandez F Marion MA Guinand J Baudot L Belmont

29 Physiopathologie Perspectives de l hypersensibilité de type I : Merci de votre attention