LES LEUCOCYTES «ACTEURS» DE L IMMUNITE Les liquides circulants de l organisme (la lymphe et le sang) véhiculent des molécules et des cellules dont certaines sont des «acteurs de l immunité». Votre travail consiste à repérer sur un frottis sanguin des leucocytes et à étudier plus particulièrement ceux impliqués dans la sécrétion de molécules d'anticorps N.B. : Le sang est un tissu où les cellules (hématies, leucocytes) baignent dans un milieu liquide (le plasma). Un frottis sanguin est obtenu après étalement sur une lame de verre d'une goutte de sang en couche mince ; la préparation est ensuite colorée et fixée. On vous propose - de réaliser un frottis sanguin vous permettant d'observer les leucocytes circulants - - de rechercher sur un frottis du commerce un lymphocyte d'expliquer la sécrétion des molécules d'anticorps par un plasmocyte, provenant de la différenciation d'un lymphocyte B. -------------------------------- SEQUENCE A 1. Réalisation d'un frottis sanguin permettant d'observer les leucocytes circulants MATERIEL ET DOCUMENTS DISPONIBLES un échantillon de sang de mouton * un bâtonnet pour prélever une goutte de sang un microscope ; une lame et une lamelle «rigide» pour réaliser l étalement du sang sur la lame ; un flacon d'eau distillée du papier absorbant, un petit récipient creux, un détergeant pour le nettoyage de la lamelle et une poubelle de table «déchets sanguins». un colorant et fixateur : une solution de bleu de méthylène qui colore les noyaux en bleu. des allumettes et une boîte de Pétri en verre dans laquelle a lieu la fixation et la coloration des cellules sanguines. une petite étiquette (ou un papier collant) pour écrire votre nom en vue de reconnaître et évaluer le frottis réalisé lors de cette séquence. un document illustrant les gestes à effectuer (annexe 1) une fiche de détermination des cellules du sang (annexe 2) * On justifie ce choix en précisant que ce sang est livré sur commande et par abonnement au laboratoire de biochimie du LYP. Cela garantit une sécurité en vue de la manipulation de ce produit sanguin. Néanmoins, ce sang présente 2 inconvénients : 1. Ce sang provient d un animal tué depuis plus de 8 jours : ce n est plus tout à fait un sang «frais». 2. Le sang de mouton est plus riche en globules rouges que le sang humain (8.10 6 contre 4 à 5.10 6 par mm 3 de sang) et est donc plus pauvre en globules blancs (cellules qui font l objet de cette étude).
a. Protocole expérimental 1. Etalement sanguin - Principe : étaler une goutte de sang sur une lame de verre, de façon uniforme, afin qu il n y ait qu une couche de cellules sanguines. - Méthode donnée pour une main droite (ANNEXE 1) Figure 1 : Déposer avec le bâtonnet une goutte de sang de 2 mm de diamètre environ à 1 cm du bord droit de la lame en verre. Amener la lamelle au contact de la lame, suivant un angle de 30 à 45, de façon que son arête se trouve à gauche de la goutte de sang. Figures 2 et 3 : Faire glisser la lamelle vers la goutte de sang : celle-ci s étire par capillarité le long de l arête. Figure 4 : Pousser la lamelle d un mouvement lent, continu et régulier vers l extrémité gauche de la lame, sans trop appuyer. Tout le sang doit être étalé avant qu on atteigne l extrémité de la lame. Sécher aussitôt le frottis en agitant la lame. ANNEXE 1 Réalisation du frottis sanguin : Figures 1 à 4 2. Fixation et coloration Placer la lame dans la boîte de Pétri en verre sur les morceaux d allumettes. Recouvrir la lame de solution de bleu de méthylène (une dizaine de gouttes). Laisser agir 2 minutes. Rincer à l eau distillée, sécher à l air. Ne pas recouvrir par une lamelle. Puis, coller l étiquette sur un bord de la lame avec votre nom.
b. Recherche d'un leucocyte Observer ce frottis au microscope, rechercher et identifier une cellule immunocompétente. Pour la reconnaissance on s'aidera de l'annexe 3. Appeler l'enseignant(e) pour vérification. ANNEXE 2 Trois types de leucocytes observés au microscope optique un granulocyte = un polynucléaire un lymphocyte un monocyte x1400 x2700 x1400 N.B : avant de terminer cette séquence, il faut veiller à respecter les consignes concernant le «plan de travail». SEQUENCE B 2. Exploitation de documents MATERIEL ET DOCUMENTS DISPONIBLES un frottis sanguin du commerce une fiche de détermination des cellules du sang (annexe 3) un microscope optique une demi feuille unie et blanche pour le dessin la photographie de deux leucocytes dont l un a des caractères de cellule sécrétrice (annexe 4)
2 a. Rechercher sur un frottis du commerce un granulocyte et un lymphocyte. On dispose d'une préparation du commerce : un «frottis sanguin» coloré. 1. Rechercher sur ce frottis, au microscope optique, deux cellules immunocompétentes : un granulocyte et un lymphocyte. Pour la reconnaissance, on s'aidera de l'annexe 3. Appeler l enseignant(e) pour vérification. ANNEXE 3 Trois types de leucocytes observés au microscope optique un granulocyte = un polynucléaire un lymphocyte un monocyte x1400 x2700 x1400 2. Dessiner sur la feuille unie et blanche les deux cellules immunocompétentes choisies en respectant les consignes apprises depuis la classe de seconde. 3. Préciser sur le compte-rendu les critères de reconnaissance de ces cellules et permettant de les distinguer des autres cellules immunocompétentes (taille de la cellule, forme du noyau). 2 b. Identifier un plasmocyte. Cette cellule qui sécrète des molécules d'anticorps (ce sont des protéines) provient de la différenciation d'un lymphocyte B. Vous disposez d'un document de l APBG (ANNEXE 4) : il s'agit de photographies de ces 2 cellules. ANNEXE 4
Cellule A (x8500) Cellule B (x8200) Exploiter ces différentes données et utiliser ses connaissances : 1. identifier la cellule (A ou B) qui a les caractères d'une cellule sécrétrice après avoir précisé les critères de reconnaissance d'une telle cellule 2. nommer cette cellule (plasmocyte ou lymphocyte B). GRILLE D'EVALUATION SEQUENCE A ACTIVITES CAPACITES EXPERIMENTALES et COMMUNICATION Barème UTILISER des TECHNIQUES BIOLOGIQUES /10
1 - Réaliser l'étalement sanguin Respect du protocole 6 2 - Fixer et colorer le frottis Qualité du frottis : observation au M.O. par l enseignant 4 3 - Observer votre préparation au microscope et placer au centre du champ une cellule immunocompétente EMPLOYER des TECHNIQUES d OBSERVATION /8 Recherche de la cellule immunocompétente 4 Choix du bon grossissement 2 Mise au point correcte 2 ORGANISATION du PLAN de TRAVAIL /2 Organisation correcte et propreté de la paillasse 1 4 - Ranger le plan de travail Microscope laissé prêt à l emploi pour une nouvelle observation 1 Microscope laissé prêt à l emploi pour une nouvelle observation 1 SEQUENCE B UTILISER des MODES de REPRESENTATION Barème Dessin exact de la cellule immunocompétente (tracé appliqué, fin et continu) 1 Dessin fidèle au modèle 1 Légendes exactes (3 attendues) 1 Titre et grossissement utilisé 1 ADOPTER une DEMARCHE EXPLICATIVE Barème Critères de reconnaissance de la cellule immunocompétente choisie 2 Indication des noms précis des cellules du document fourni 2 Mise en relation correcte lors de l'exploitation du document fourni 2