Contamination des aliments par des moisissures et/ou des mycotoxines : analyse 1- Stratégies d échantillonage 2- Conditions de conservation 3- Analyses mycologiques et /ou mycotoxicologiques 4- Analyses biologiques P. Guerre Analyse & Diagnostic 1 Comment évaluer la contamination? Echantillon représentatif: Erreur d échantillonnage Lot/sous lot Echantillon élémentaire/échantillon global Echantillon de laboratoire/prise d essai Méthodes de mesure: Erreur de mesure Méthode Sensibilité (LD, LQ) Spécificité ELISA +/- +/- HPLC UV/Fluo ++(+) ++(+) HPLC SM +++(+) ++++ 1
Echantillonage P. Guerre Analyse & Diagnostic 3 Echantillonage 10 kg??? => 1 kg Fonction des objectifs P. Guerre Analyse & Diagnostic 4 2
Conservation des prélèvements Mycotoxines, spores résistent à la congélation Problèmes d interprétation des flores Activité hydrique extemporanément??? Echantillothèques des usines de fabrication P. Guerre Analyse & Diagnostic Analyses mycologiques et /ou mycotoxicologiques Analyse Avantages Inconvénients Examen macroscopique microscopique - Identification des genres possible Ergostérol - Toute contamination fongique détectée - Moyennement quantitatif Flore (identification en culture des espèces) - Identification d une flore potentiellement toxinogène Détection ELISA ou - Spécifique & Quantitatif CCM des - Sensibilité suffisante (ppm) mycotoxines - N valeurs, analyse statistique Détection HPLC des - Spécifique & Quantitatif mycotoxines - Très sensible (ppb) - N valeurs, analyse statistique Détection CPG/SM - Spécifique & Quantitatif des mycotoxines - Très sensible (ppt) - Plusieurs analyses groupées - Peu sensible - Pas réalisable sur aliments préparés ou congelés - Peu d information sur la toxicité de l aliment - Difficulté d interprétation - Pas de différentiation d une flore banale d une flore potentiellement toxinogène - Aucune information sur la toxicité de l aliment - Faux positifs avec levures - Faux négatifs assez fréquents (destruction de la moisissure mais pas des mycotoxines pendant la préparation de l aliment) - Difficilement réalisable sur aliments congelés - Aucune information sur la toxicité de l aliment - Moyennement onéreux - Différentes analyses pour chaque mycotoxine - Onéreux - Différentes analyses pour chaque mycotoxine - Très onéreux - Adapté à une recherche ponctuelle tous azimuts, pas à des études P. Guerre Analyse & Diagnostic 6 3
Comment évaluer l'exposition? Fréquence 40 3 30 2 20 1 10 0 * maïs n région x Fréquence 40 3 30 2 20 1 10 0 * blé n+1 région y Moy: 842 P9: 2726 Pire cas: 800 DON (µg/kg) Moy: 37 P9: 100 Pire cas: 8996 DON (µg/kg) Comment évaluer l'exposition? Matières premières (%) Poulet standard Démarrage Croissance Retrait Maïs 18. 12.2 8.3 Blé 40 0 60 T. soja 48 34.8 28.1 1.6 Autres <10 <10 <10 CMV 4.1 3.8 3.3 Total 100 100 100 Contributeur majeur/contributeur mineur (peu contaminé, peu abondant) Matières Poulet standard premières Démarrage Croissance Retrait Moy P9 Max Moy P9 Max Moy P9 Max Maïs 16 04 173 103 333 1037 70 226 706 Blé 10 600 398 188 70 4498 22 900 398 Recommandation 2006/76/CE: céréales et dérivés/maïs: 8000/12000 µg/kg DON aliment volailles 000 µg/kg DON 4
Méthodes biologiques Analyse Avantages Inconvénients Tests biologiques non spécifiques - Limité aux trichothécènes dermonécrosants (toxine T2, - Révèle les effets cumulés de plusieurs déoxynivalénol, nivalénol, diacétoxyscirpénol, ) mycotoxines ayant les mêmes mécanismes - Semi-quantitatif et peu sensible (plus adapté à un d action diagnostic de mycotoxicose qu à la détermination d un niveau ) Biochimie classique - Non spécifique (aide au diagnostic) Marqueurs biologiques spécifiques - Spécifique - Moyennement onéreux - Eventuellement prédictif Sérologie protéines - Moyennement spécifique Formule +/- - Approche globale rep. Immune numération - Réfrigération prélèvements Poids carcasses et organes - Non spécifique - Adapté à un diagnostic de mycotoxicose pas à la détermination d un niveau => nécessite de grands nombres - Pour toxines perturbant le métabolisme des sphingolipides (fumonisines et précurseurs, AALtoxines, sphingofungines ) - Fortes variations individuelles chez canard - Nécessite une validation chez la dinde - Peu spécifique - Sensibilité variable (fibrinogène/ig) - Non spécifique - Pas de congélation - Coût variable - Simple - Peu spécifique et peu sensible - Nécessite autopsie P. Guerre Analyse & Diagnostic 9 Conclusions Diagnostic difficile Bien réfléchir aux objectifs Savoir ce que l on cherche Connaître les limites de chaque paramètre P. Guerre Analyse & Diagnostic 10