Système d'identification des Enterobacteriaceae et autres bacilles à Gram négatif non fastidieux

20 100 / 20 160 07584G - fr - 2007/06 20 E Système d'identification des Enterobacteriaceae et autres bacilles à Gram négatif non fastidieux IVD INTRODUCTION ET OBJET DU TEST API 20 E est un système standardisé pour l'identification des Enterobacteriaceae et autres bacilles à Gram négatif non fastidieux, comprenant 21 tests biochimiques miniaturisés, ainsi qu'une base de données. La liste complète des bactéries qu'il est possible d'identifier avec ce système est présente dans le Tableau d'identification en fin de notice. PRINCIPE La galerie API 20 E comporte 20 microtubes contenant des substrats déshydratés. Les microtubes sont inoculés avec une suspension bactérienne qui reconstitue les tests. Les réactions produites pendant la période d'incubation se traduisent par des virages colorés spontanés ou révélés par l'addition de réactifs. La lecture de ces réactions se fait à l'aide du Tableau de Lecture et l'identification est obtenue à l'aide du Catalogue Analytique ou d'un logiciel d'identification. PRESENTATION Coffret de 25 tests (réf. 20 100) - 25 galeries API 20 E - 25 boîtes d'incubation - 25 fiches de résultats - 1 barrette de fermeture - 1 notice Coffret de 100 tests (réf. 20 160) - 100 galeries API 20 E (4x25 galeries) - 100 boîtes d'incubation - 100 fiches de résultats - 1 barrette de fermeture - 1 notice COMPOSITION DE LA GALERIE La composition de la galerie API 20 E est reportée dans le Tableau de Lecture de cette notice. REACTIFS ET MATERIEL NECESSAIRES MAIS NON FOURNIS Réactifs - API NaCl 0,85 % Medium, 5 ml (Réf. 20 230) ou API Suspension Medium, 5 ml (Réf. 20 150) - API 20 E coffret de réactifs (Réf. 20 120) ou réactifs individuels : TDA (Réf. 70 402) JAMES (Réf. 70 542) VP 1 + VP 2 (Réf. 70 422) NIT 1 + NIT 2 (Réf. 70 442) - Réactif Zn (Réf. 70 380) - Oxydase (Réf. 55 635*) * référence non commercialisée dans certains pays : utiliser un réactif équivalent. - Huile de paraffine (Réf. 70 100) - Catalogue Analytique API 20 E (Réf. 20 190) ou logiciel d'identification apiweb TM (Réf. 40 011) (consulter biomérieux) Matériel - Pipettes ou PSIpettes - Protège-ampoule - Portoir pour ampoules - Equipement général de laboratoire de bactériologie REACTIFS COMPLEMENTAIRES - API OF Medium (Réf. 50 110) : Test pour la détermination du métabolisme fermentatif ou oxydatif du glucose. - API M Medium (Réf. 50 120) : Test pour la détermination de la mobilité des bactéries aéro-anaérobies. PRECAUTIONS D'UTILISATION Pour diagnostic in vitro et pour contrôle microbiologique. Pour usage professionnel uniquement. Ce coffret contient des composants d'origine animale. La maîtrise de l'origine et/ou de l'état sanitaire des animaux ne pouvant garantir de façon absolue que ces produits ne contiennent aucun agent pathogène transmissible, il est recommandé de les manipuler avec les précautions d'usage relatives aux produits potentiellement infectieux (ne pas ingérer; ne pas inhaler). Les prélèvements, cultures bactériennes et produits ensemencés doivent être considérés comme potentiellement infectieux et doivent être manipulés de façon appropriée. Les techniques aseptiques et les précautions usuelles de manipulation pour le groupe bactérien étudié doivent être respectées tout au long de la manipulation ; se référer à "CLSI M29-A, Protection of Laboratory Workers from Occupationally Acquired Infections; Approved Guideline - Révision en vigueur". Pour informations complémentaires sur les précautions de manipulation, se référer à "Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories - CDC/NIH - Dernière édition", ou à la réglementation en vigueur dans le pays d'utilisation. Ne pas utiliser les réactifs après la date de péremption. Avant utilisation, s'assurer de l'intégrité de l'emballage des différents composants. Ne pas utiliser de galeries ayant subi une altération physique : cupule déformée, sachet déshydratant ouvert, Les performances présentées sont obtenues avec la méthodologie indiquée dans cette notice. Toute déviation de méthodologie peut altérer les résultats. L'interprétation des résultats du test doit être faite en tenant compte du contexte clinique ou autre, de l'origine du prélèvement, des aspects macro et microscopiques de la souche et éventuellement des résultats d'autres tests, en particulier de l'antibiogramme. biomérieux SA Français - 1

api 20 E 07584G - fr - 2007/06 CONDITIONS DE STOCKAGE Les galeries sont présentes dans une poche en aluminium avec sachets déshydratants. Après ouverture de celle-ci (*), conserver les galeries restantes avec les déshydratants en refermant la poche à l'aide de la barrette de fermeture (présente dans le coffret) : placer l'extrémité de la poche entre les deux pièces de la barrette et les clamper soigneusement, à fond, sur toute leur longueur. Les galeries peuvent ainsi être conservées 10 mois après ouverture de la poche, à 2-8 C (ou jusqu'à la date limite d'utilisation indiquée sur l'emballage, si celle-ci est antérieure). (*) Recommandation pour l'ouverture de celle-ci : couper juste en dessous de la soudure, en maintenant la poche droite, pour éviter d'endommager les sachets déshydratants. ECHANTILLONS (PRELEVEMENT ET PREPARATION) API 20 E ne doit pas être utilisé directement à partir des prélèvements d'origine clinique ou autres. Les microorganismes à identifier doivent dans un premier temps être isolés sur un milieu de culture adapté à la culture des Enterobacteriaceae et/ou des bacilles à Gram négatif non fastidieux selon les techniques usuelles de bactériologie. MODE OPERATOIRE Test oxydase Le test oxydase doit être réalisé selon les instructions du fabricant, il constitue le 21 ème test d identification à noter sur la fiche de résultats. Préparation de la galerie Réunir fond et couvercle d'une boîte d'incubation et répartir environ 5 ml d'eau distillée ou déminéralisée [ou toute eau sans additif ou dérivés susceptibles de libérer des gaz (Ex : Cl2, CO2...)] dans les alvéoles pour créer une atmosphère humide. Inscrire la référence de la souche sur la languette latérale de la boîte. (Ne pas inscrire la référence sur le couvercle, celui-ci pouvant être déplacé lors de la manipulation). Sortir la galerie de son emballage. Placer la galerie dans la boîte d'incubation. NOTE : API 20 E doit être utilisé avec des Enterobacteriaceae et/ou des bacilles à Gram négatif non fastidieux. Les microorganismes fastidieux, exigeants et nécessitant des précautions de manipulation particulières (ex. Brucella et Francisella) ne font pas partie de la base de données API 20 E. Il convient d'utiliser d'autres techniques pour exclure ou confirmer leur présence. Préparation de l'inoculum Ouvrir une ampoule d'api NaCl 0,85 % Medium (5 ml) ou une ampoule d'api Suspension Medium (5 ml) comme indiqué au paragraphe "Précautions" de la notice du produit, ou utiliser un tube contenant 5 ml d'eau physiologique stérile ou d'eau distillée stérile, sans additif. A l'aide d'une pipette ou d'une PSIpette, prélever une seule colonie bien isolée sur milieu gélosé. Utiliser préférentiellement des cultures jeunes (18-24 heures). Réaliser une suspension bactérienne en homogénéisant soigneusement les bactéries dans le milieu. Cette suspension doit être utilisée extemporanément. NOTE : la plupart des espèces de Vibrio sont halophiles. En cas de suspicion d'un Vibrio, réaliser la suspension bactérienne dans API NaCl 0,85 % Medium. Inoculation de la galerie Introduire la suspension bactérienne dans les tubes de la galerie à l'aide de la même pipette (pour éviter la formation de bulles au fond des tubes, poser la pointe de la pipette ou de la PSIpette sur le côté de la cupule, en inclinant légèrement la boîte d'incubation vers l'avant) : - pour les tests CIT, VP et GEL, remplir tube et cupule, - pour les autres tests, remplir uniquement les tubes (et non les cupules), - pour les tests : ADH, LDC, ODC, H2S, URE créer une anaérobiose en remplissant leur cupule d'huile de paraffine. Refermer la boîte d'incubation. Incuber à 36 C ± 2 C pendant 18-24 heures. LECTURE ET INTERPRETATION Lecture de la galerie Après incubation, la lecture de la galerie doit se faire en se référant au Tableau de Lecture. Si 3 tests ou plus (test GLU + ou ) sont positifs, noter sur la fiche de résultats toutes les réactions spontanées puis révéler les tests nécessitant l'addition de réactifs : - Test TDA : ajouter 1 goutte de réactif TDA. Une couleur marron-rougeâtre indique une réaction positive à noter sur la fiche de résultats. - Test IND : ajouter 1 goutte de réactif JAMES. Une couleur rose diffusant dans toute la cupule indique une réaction positive à noter sur la fiche de résultats. - Test VP : ajouter 1 goutte des réactifs VP 1 et VP 2. Attendre au minimum 10 minutes. Une couleur rose ou rouge indique une réaction positive à noter sur la fiche de résultats. Une faible coloration rose apparaissant après 10 minutes doit être considérée négative. NOTE : Le test de la recherche de production d indole doit être réalisé en dernier, car cette réaction libère des gaz qui risquent d altérer l interprétation d autres tests de la galerie. Ne pas remettre le couvercle d incubation après l ajout du réactif. Si le nombre de tests positifs avant ajout des réactifs (y compris le test GLU) est inférieur à 3 : - Réincuber la galerie 24 heures (± 2 heures) de plus sans rajouter les réactifs. - Révéler les tests nécessitant l'addition de réactifs (voir paragraphe précédent). - Pour compléter l'identification, il peut être utile de réaliser des tests complémentaires (se reporter au paragraphe Identification). Interprétation L'identification est obtenue à partir du profil numérique. Détermination du profil numérique : Sur la fiche de résultats, les tests sont séparés par groupes de trois et une valeur 1, 2 ou 4 est indiquée pour chacun. La galerie API 20 E comportant 20 tests, en additionnant à l'intérieur de chaque groupe les valeurs correspondant à des réactions positives, on obtient 7 chiffres ; la réaction de l'oxydase qui constitue le 21 ème test est affectée de la valeur 4 lorsqu'elle est positive. Identification : Elle est réalisée à partir de la base de données (V4.1) * à l'aide du Catalogue Analytique : - Rechercher le profil numérique dans la liste des profils. * à l'aide du logiciel d'identification apiweb TM : - Entrer manuellement au clavier le profil numérique à 7 chiffres. biomérieux SA Français - 2

api 20 E 07584G - fr - 2007/06 Par ailleurs dans certains cas, le profil à 7 chiffres étant insuffisamment discriminant, les tests complémentaires suivants sont nécessaires : - Réduction des nitrates en nitrites (NO2) et en azote (N2) : ajouter 1 goutte des réactifs NIT 1 et NIT 2 dans le tube GLU. Attendre 2 à 5 minutes. Une coloration rouge indique une réaction positive (NO2). Une réaction négative (coloration jaune) peut être due à la production d'azote (éventuellement signalée par la présence de microbulles) : ajouter 2 à 3 mg de réactif Zn dans la cupule GLU. Après 5 minutes, un tube resté jaune indique une réaction positive (N2) à noter sur la fiche de résultats. Si la cupule est orange-rouge, la réaction est négative, les nitrates encore présents dans le tube ont été réduits en nitrites par le Zinc. Cette réaction est intéressante pour les bacilles à Gram négatif oxydase positive. NOTE : Pour les mêmes raisons que le test indole (se référer à la note du paragraphe "Lecture de la galerie"), le test de réduction des nitrates doit être réalisé en dernier. - Mobilité (MOB) : Inoculer une ampoule d'api M Medium (cf notice). - Culture sur gélose de MacConkey (McC) : Ensemencer un milieu de Mac Conkey (cf notice). - Oxydation du glucose (OF-O) : Inoculer une ampoule d'api OF Medium (cf notice). - Fermentation du glucose (OF-F) : Inoculer une ampoule d'api OF Medium (cf notice). Ces tests complémentaires, mentionnés dans l'introduction (Codage des profils) du Catalogue Analytique, peuvent être utilisés pour constituer un profil à 9 chiffres, identifiable avec le logiciel d'identification. 5 315 173 (57) Enterobacter gergoviae D autres tests supplémentaires peuvent être proposés en cas de faible discrimination. Se référer au logiciel ou Catalogue Analytique. CONTROLE DE QUALITE Les milieux, galeries et réactifs font l'objet de contrôles de qualité systématiques aux différentes étapes de leur fabrication. Un contrôle bactériologique des tests de la galerie est de plus réalisable par l utilisateur avec la souche 1. Escherichia coli ATCC 25922 de préférence ou l une des souches suivantes : 2. Stenotrophomonas maltophilia ATCC 51331 3. Enterobacter cloacae ATCC 13047 4. Proteus mirabilis ATCC 35659 5. Klebsiella pneumoniae ssp pneumoniae ATCC 35657 ATCC : American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, VA 20110-2209, USA. ONPG ADH LDC ODC CIT H2S URE TDA IND VP GEL GLU MAN INO SOR RHA SAC MEL AMY ARA NO2 N2* 1. + + + + + + + + + + + 2. + V V + 3. + + V + + + + V + + + + + + + 4. + V + + + V + V + 5. + + + V V + + + + + + + + + + V * Le stade N2 (+) peut être observé pour la souche ATCC 13047 et la souche ATCC 25922. Profil obtenu après 24-48 H d'incubation pour la souche ATCC 51331, à partir de colonies cultivées sur gélose Trypcase Soja + sang. Profils obtenus après 18-24 H d'incubation pour les autres souches, à partir de colonies cultivées sur gélose Trypcase Soja + sang. Suspension bactérienne préparée en API NaCl 0,85 % Medium. Il est de la responsabilité de l'utilisateur de s'assurer que le contrôle de qualité est mis en oeuvre conformément à la législation locale en vigueur. LIMITES DU TEST Le système API 20 E est destiné à l'identification des Enterobacteriaceae et des bacilles à Gram négatif non fastidieux présents dans la base de données (voir Tableau d'identification en fin de notice) et à eux seuls. Il ne peut être utilisé pour identifier d'autres microorganismes ou exclure leur présence. Des discordances par rapport aux techniques conventionnelles peuvent être observées. Elles sont dues aux différences de principe des réactions utilisées en technique API. Des écarts de pourcentages peuvent également être observés et s'expliquent par des variations de substrat. Pour certaines espèces (ex. Klebsiella ou Proteus), des réactions du test glucose initialement positives peuvent parfois devenir négatives (apparition d'une coloration bleu-vert). Dans ce cas, cette réaction doit être considérée comme négative. Les pourcentages indiqués dans le Tableau d'identification prennent en compte ce genre de phénomène. Dans le cas d identification à Salmonella ou Shigella, une identification sérologique doit être effectuée pour confirmer l identification bactérienne. Les bacilles à Gram négatif non fermentants, isolés de patients atteints de mucoviscidose, peuvent générer des profils biochimiques atypiques susceptibles d altérer leur identification. biomérieux SA Français - 3 Seules des cultures pures contenant un seul type de microorganisme doivent être utilisées. RESULTATS ATTENDUS Se référer au Tableau d'identification en fin de cette notice pour les résultats attendus des différentes réactions biochimiques. PERFORMANCES Enterobacteriaceae : 5514 souches de diverses origines et souches de collection appartenant aux espèces de la base de données ont été testées : - 92,80 % des souches ont été correctement identifiées (avec ou sans tests complémentaires). - 4,61 % des souches n'ont pas été identifiées. - 2,59 % des souches ont été mal identifiées. autres bacilles à Gram négatif non fastidieux : 2386 souches de diverses origines et souches de collection appartenant aux espèces de la base de données ont été testées : - 90,32 % des souches ont été correctement identifiées (avec ou sans tests complémentaires). - 6,16 % des souches n'ont pas été identifiées. - 3,52 % des souches ont été mal identifiées.

api 20 E 07584G - fr - 2007/06 ELIMINATION DES DECHETS Eliminer les réactifs utilisés ou non utilisés ainsi que les matériels à usage unique contaminés en suivant les procédures relatives aux produits infectieux ou potentiellement infectieux. Il incombe à chaque laboratoire de gérer les déchets et les effluents qu'il produit selon leur nature et leur dangerosité, et d'en assurer (ou faire assurer) le traitement et l'élimination selon les réglementations applicables. TESTS ONPG COMPOSANTS ACTIFS 2-nitrophényl-ßDgalactopyranoside QTE (mg/cup.) 0,223 TABLEAU DE LECTURE REACTIONS/ENZYMES ß-galactosidase (Ortho NitroPhényl-ßD- Galactopyranosidase) NEGATIF RESULTATS POSITIF incolore jaune (1) ADH L-arginine 1,9 Arginine DiHydrolase jaune rouge / orangé (2) LDC L-lysine 1,9 Lysine DéCarboxylase jaune rouge / orangé (2) ODC L-ornithine 1,9 Ornithine DéCarboxylase jaune rouge / orangé (2) CIT trisodium citrate 0,756 utilisation du CITrate vert pâle / jaune bleu-vert / bleu (3) H2S sodium thiosulfate 0,075 production d'h2s incolore / grisâtre dépot noir / fin liseré URE urée 0,76 UREase jaune rouge / orangé (2) TDA / immédiat TDA L-tryptophane 0,38 Tryptophane DésAminase jaune marron-rougeâtre IND L-tryptophane 0,19 production d INDole VP sodium pyruvate 1,9 GEL gélatine (origine bovine) GLU D-glucose 1,9 MAN D-mannitol 1,9 INO inositol 1,9 SOR D-sorbitol 1,9 RHA L-rhamnose 1,9 SAC D-saccharose 1,9 MEL D-melibiose 1,9 AMY amygdaline 0,57 ARA L-arabinose 1,9 production d'acétoïne (Voges Proskauer) JAMES / immédiat incolore vert pâle / jaune VP 1 + VP 2 / 10 min rose incolore / rose pâle rose / rouge (5) 0,6 Gélatinase (GELatine) non diffusion diffusion du pigment noir fermentation / oxydation (GLUcose) (4) fermentation / oxydation (MANnitol) (4) fermentation / oxydation (INOsitol) (4) fermentation / oxydation (SORbitol) (4) fermentation / oxydation (RHAmnose) (4) fermentation / oxydation (SACcharose) (4) fermentation / oxydation (MELibiose) (4) fermentation / oxydation (AMYgdaline) (4) fermentation / oxydation (ARAbinose) (4) bleu / bleu-vert bleu / bleu-vert bleu / bleu-vert bleu / bleu-vert bleu / bleu-vert bleu / bleu-vert bleu / bleu-vert bleu / bleu-vert bleu / bleu-vert jaune / jaune gris OX (voir notice du test oxydase) cytochrome-oxydase (voir notice du test oxydase) (1) Une très légère couleur jaune est également positive. (2) Une couleur orange apparaissant après 36-48 H d'incubation doit être considérée négative. (3) Lecture dans la cupule (zone aérobie). (4) La fermentation commence dans la partie inférieure des tubes, l'oxydation commence dans la cupule. (5) Une légère coloration rose apparaissant après 10 minutes doit être lue négative. Les quantités indiquées peuvent être ajustées en fonction des titres des matières premières. Certaines cupules contiennent des composants d origine animale, notamment des peptones. jaune jaune jaune jaune jaune jaune jaune jaune biomérieux SA Français - 4

api 20 E 07584G - fr - 2007/06 TESTS COMPLEMENTAIRES TESTS Réduction des nitrates tube GLU COMPOSANTS ACTIFS QTE (mg/cup.) potassium nitrate 0,076 REACTIONS/ENZYMES NEGATIF RESULTATS NIT 1 + NIT 2 / 2-5 min POSITIF production de NO2 jaune rouge Zn / 5 min réduction au stade N2 orange-rouge jaune MOB API M Medium ou microscope mobilité immobile mobile McC milieu de MacConkey culture absence présence OF-F OF-O glucose (API OF Medium) fermentation : sous huile oxydation : à l'air vert vert jaune jaune METHODOLOGIE p. I TABLEAU D'IDENTIFICATION p. II BIBLIOGRAPHIE p. IV TABLE DES SYMBOLES p. V CLSI est une marque utilisée, déposée et/ou enregistrée appartenant à Clinical and Laboratory Standards Institute Inc. ATCC est une marque utilisée, déposée et/ou enregistrée appartenant à American Type Culture Collection. biomérieux SA au capital de 12 029 370 673 620 399 RCS LYON 69280 Marcy-l'Etoile / France Tél. 33 (0)4 78 87 20 00 Fax 33 (0)4 78 87 20 90 http://www.biomerieux.com biomérieux, Inc Box 15969, Durham, NC 27704-0969 / USA Tél. (1) 919 620 20 00 Fax (1) 919 620 22 11 Imprimé en France biomérieux, le logo bleu, API, API 20 E et apiweb sont des marques utilisées, déposées et/ou enregistrées appartenant à biomérieux SA ou à l une de ses filiales.

20 100 / 20 160 07584G - en - 2007/06 20 E Identification system for Enterobacteriaceae and other non-fastidious Gram-negative rods IVD SUMMARY AND EXPLANATION API 20 E is a standardized identification system for Enterobacteriaceae and other non-fastidious, Gramnegative rods which uses 21 miniaturized biochemical tests and a database. The complete list of those organisms that it is possible to identify with this system is given in the Identification Table at the end of this package insert. PRINCIPLE The API 20 E strip consists of 20 microtubes containing dehydrated substrates. These tests are inoculated with a bacterial suspension that reconstitutes the media. During incubation, metabolism produces color changes that are either spontaneous or revealed by the addition of reagents. The reactions are read according to the Reading Table and the identification is obtained by referring to the Analytical Profile Index or using the identification software. CONTENT OF THE KIT Kit for 25 tests (ref. 20 100) - 25 API 20 E strips - 25 incubation boxes - 25 result sheets - 1 clip seal - 1 package insert Kit for 100 tests (ref. 20 160) - 100 API 20 E strips (4x25 strips) - 100 incubation boxes - 100 result sheets - 1 clip seal - 1 package insert COMPOSITION OF THE STRIP The composition of the API 20 E strip is given in the Reading Table of this package insert. REAGENTS AND MATERIAL REQUIRED BUT NOT PROVIDED Reagents - API NaCl 0.85 % Medium, 5 ml (Ref. 20 230) or API Suspension Medium, 5 ml (Ref. 20 150) - API 20 E reagent kit (Ref. 20 120) or individual reagents : TDA (Ref. 70 402) JAMES (Ref. 70 542) VP 1 + VP 2 (Ref. 70 422) NIT 1 + NIT 2 (Ref. 70 442) - Zn reagent (Ref. 70 380) - Oxidase (Ref. 55 635*) * reference not sold in certain countries : use an equivalent reagent. - Mineral oil (Ref. 70 100) - API 20 E Analytical Profile Index (Ref. 20 190) or apiweb TM identification software (Ref. 40 011) (consult biomérieux) Material - Pipettes or PSIpettes - Ampule protector - Ampule rack - General microbiology laboratory equipment POSSIBLE ADDITIONAL REAGENTS - API OF Medium (Ref. 50 110) : Test for the determination of fermentative or oxidative metabolism. - API M Medium (Ref. 50 120) : Test for motility of facultative anaerobic bacteria. WARNINGS AND PRECAUTIONS For in vitro diagnostic use and microbiological control. For professional use only. This kit contains products of animal origin. Certified knowledge of the origin and/or sanitary state of the animals does not totally guarantee the absence of transmissible pathogenic agents. It is therefore recommended that these products be treated as potentially infectious, and handled observing the usual safety precautions (do not ingest or inhale). All specimens, microbial cultures and inoculated products should be considered infectious and handled appropriately. Aseptic technique and usual precautions for handling the bacterial group studied should be observed throughout this procedure. Refer to "CLSI M29-A, Protection of Laboratory Workers from Occupationally Acquired Infections; Approved Guideline - Current revision". For additional handling precautions, refer to "Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories - CDC/NIH - Latest edition", or to the regulations currently in use in each country. Do not use reagents past the expiry date. Before use, check that the packaging of the various components is intact. Do not use strips which have been damaged : cupules deformed, desiccant sachet open, etc. The performance data presented were obtained using the procedure indicated in this package insert. Any change or modification in the procedure may affect the results. Interpretation of the test results should be made taking into consideration the patient history, the source of the specimen, colonial and microscopic morphology of the strain and, if necessary, the results of any other tests performed, particularly the antimicrobial susceptibility patterns. biomérieux SA English - 1

api 20 E 07584G - en - 2007/06 STORAGE CONDITIONS The strips are supplied in an aluminum pouch with desiccant sachets. Once opened (*), the pouch should be re-sealed using the clip seal (included in the kit) to preserve the remaining strips with the desiccant sachets : place the open end of the pouch along the seal and carefully clamp between the two parts. The strips may then be kept for up to 10 months after the pouch has been opened, at 2-8 C (or until the expiry date indicated on the packaging, if this comes before). (*) Recommended method for opening the pouches : cut open the pouch just below the seal while holding the pouch upright, in order to avoid damaging the desiccant sachets. SPECIMENS (COLLECTION AND PREPARATION) API 20 E is not for use directly with clinical or other specimens. The microorganisms to be identified must first be isolated on a culture medium adapted to the culture of Enterobacteriaceae and/or non-fastidious Gram-negative rods, according to standard microbiological techniques. INSTRUCTIONS FOR USE Oxidase test The oxidase test must be performed according to the manufacturer's instructions for use. The result should be recorded on the result sheet as it is an integral part of the final profile (21st identification test). Preparation of the strip Prepare an incubation box (tray and lid) and distribute about 5 ml of distilled water or demineralized water [or any water without additives or chemicals which may release gases (e.g., Cl2, CO2, etc.)] into the honeycombed wells of the tray to create a humid atmosphere. Record the strain reference on the elongated flap of the tray. (Do not record the reference on the lid as it may be misplaced during the procedure.) Remove the strip from its packaging. Place the strip in the incubation box. NOTE : API 20 E should only be used with Enterobacteriaceae and/or non-fastidious Gram-negative rods. Fastidious organisms having demanding nutritional requirements and requiring appropriate handling precautions (i.e., Brucella and Francisella) are not included in the API 20 E database. Alternative procedures must be used to exclude or confirm their presence. Preparation of the inoculum Open an ampule of API NaCl 0.85 % Medium (5 ml) or an ampule of API Suspension Medium (5 ml) as indicated in the paragraph "Warnings and Precautions" of the package insert for these products, or use any tube containing 5 ml of sterile saline or sterile distilled water, without additives. Using a pipette or PSIpette, remove a single wellisolated colony from an isolation plate. It is recommended to use young cultures (18-24 hours old). Carefully emulsify to achieve a homogeneous bacterial suspension. This suspension must be used immediately after preparation. NOTE : most Vibrio species are halophilous. If a Vibrio is suspected, suspend the bacteria in API NaCl 0.85 % Medium. Inoculation of the strip With the same pipette, distribute the bacterial suspension into the tubes of the strip (to avoid the formation of bubbles at the base of the tubes, tilt the strip slightly forward and place the tip of the pipette or PSIpette against the side of the cupule): - For the CIT, VP and GEL tests, fill both tube and cupule, - For the other tests, fill only the tubes (and not the cupules), - for the tests ADH, LDC, ODC, H2S and URE, create anaerobiosis by overlaying with mineral oil. Close the incubation box. Incubate at 36 C ± 2 C for 18-24 hours. READING AND INTERPRETATION Reading the strip After the incubation period, read the strip by referring to the Reading Table. If 3 or more tests (GLU test + or ) are positive, record all the spontaneous reactions on the result sheet and then reveal the tests which require the addition of reagents : - TDA Test : add 1 drop of TDA reagent. A reddish brown color indicates a positive reaction to be recorded on the result sheet. - IND Test : add 1 drop of JAMES reagent. A pink color developed in the whole cupule indicates a positive reaction to be recorded on the result sheet. - VP Test : add 1 drop each of VP 1 and VP 2 reagents. Wait at least 10 minutes. A pink or red color indicates a positive reaction to be recorded on the result sheet. If a slightly pink color appears after 10 minutes, the reaction should be considered negative. NOTE : The indole production test must be performed last since this reaction releases gaseous products which interfere with the interpretation of other tests on the strip. The plastic incubation lid should not be replaced after the addition of the reagent. If the number of positive tests (including the GLU test) before adding the reagents is less than 3 : - Reincubate the strip for a further 24 hours (± 2 hours) without adding any reagents. - Reveal the tests requiring the addition of reagents (see previous paragraph). - To complete the identification, it may be necessary to perform supplementary tests (refer to Identification paragraph). Interpretation Identification is obtained with the numerical profile. Determination of the numerical profile : On the result sheet, the tests are separated into groups of 3 and a value 1, 2 or 4 is indicated for each. By adding together the values corresponding to positive reactions within each group, a 7-digit profile number is obtained for the 20 tests of the API 20 E strip. The oxidase reaction constitutes the 21st test and has a value of 4 if it is positive. Identification : This is performed using the database (V4.1) * with the Analytical Profile Index : - Look up the numerical profile in the list of profiles. * with the apiweb TM identification software : - Enter the 7-digit numerical profile manually via the keyboard. biomérieux SA English - 2

api 20 E 07584G - en - 2007/06 In some cases, the 7-digit profile is not discriminatory enough and the following supplementary tests need to be carried out : - Reduction of nitrates to nitrites (NO2) and N2 gas (N2) : add 1 drop each of NIT 1 and NIT 2 reagents to the GLU tube. Wait 2 to 5 minutes. A red color indicates a positive reaction (NO2). A negative reaction (yellow) may be due to the reduction to nitrogen (as sometimes evidenced by gas bubbles) : add 2 to 3 mg of Zn reagent to the GLU tube. After 5 minutes, if the tube remains yellow this indicates a positive reaction (N2) to be recorded on the result sheet. If the test turns orangered, this is a negative reaction : the nitrates still present in the tube have been reduced by the Zinc. This reaction is useful when testing Gram-negative, oxidase positive rods. NOTE : For the same reason as the indole test (see the note in the paragraph "Reading the strip"), the nitrate reduction test must be performed last. - Motility (MOB) : Inoculate an ampule of API M Medium (see package insert). - Growth on MacConkey agar medium (McC) : Streak a MacConkey agar plate (see package insert). - Oxidation of glucose (OF-O) : Inoculate an ampule of API OF Medium (see package insert). - Fermentation of glucose (OF-F) : Inoculate an ampule of API OF Medium (see package insert). These supplementary tests, indicated in the introduction section (Profile coding) of the Analytical Profile Index, may be used to form a 9-digit profile. Identification is then obtained using the identification software. 5 315 173 (57) Enterobacter gergoviae Further tests may be proposed in case of low discrimination. Refer to the identification software or Analytical Profile Index. QUALITY CONTROL The media, strips, and reagents are systematically quality controlled at various stages of their manufacture. For those users who wish to perform their own quality control tests with the strip, it is preferable to use the strain 1. Escherichia coli ATCC 25922 or else one of the following strains : 2. Stenotrophomonas maltophilia ATCC 51331 3. Enterobacter cloacae ATCC 13047 4. Proteus mirabilis ATCC 35659 5. Klebsiella pneumoniae ssp pneumoniae ATCC 35657 ATCC : American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, VA 20110-2209, USA. ONPG ADH LDC ODC CIT H2S URE TDA IND VP GEL GLU MAN INO SOR RHA SAC MEL AMY ARA NO2 N2* 1. + + + + + + + + + + + 2. + V V + 3. + + V + + + + V + + + + + + + 4. + V + + + V + V + 5. + + + V V + + + + + + + + + + V * The N2 (+) state may be observed for the strain ATCC 13047 and the strain ATCC 25922. Profile obtained after 24-48 hours of incubation for the strain ATCC 51331, using colonies grown on Trypticase Soy agar + blood. Profiles obtained after 18-24 hours of incubation for the other strains, using colonies grown on Trypticase Soy agar + blood. Bacterial suspensions prepared in API NaCl 0.85 % Medium. It is the responsibility of the user to perform Quality Control in accordance with any local applicable regulations. LIMITATIONS OF THE METHOD The API 20 E system is intended uniquely for the identification of Enterobacteriaceae and those nonfastidious, Gram-negative rods included in the database (see Identification Table at the end of this package insert). It cannot be used to identify any other microorganisms or to exclude their presence. Discrepancies with respect to conventional methods may be observed. They are due to the different principles of the reactions used in the API technique. In addition, substrate variations exist that also account for percentage differences. On rare occasions, the glucose reactions for organisms such as Klebsiella or Proteus may revert from positive to negative, in which instance a bluish-green color is seen. This reaction will be recorded as a negative reaction. Such occurrences are reflected in the percentages indicated in the Identification Table. If Salmonella or Shigella are identified, serological identification must be performed to confirm the bacterial identification. Nonfermentative, Gram-negative rods, isolated from patients with cystic fibrosis, may generate atypical biochemical profiles, which may affect identification. Only pure cultures of a single organism should be used. RANGE OF EXPECTED RESULTS Consult the Identification Table at the end of this package insert for the range of expected results for the various biochemical reactions. PERFORMANCE Enterobacteriaceae : 5514 collection strains and strains of various origins belonging to species included in the database were tested: - 92.80 % of the strains were correctly identified (with or without supplementary tests). - 4.61 % of the strains were not identified. - 2.59 % of the strains were misidentified. Other non-fastidious Gram-negative rods : 2386 collection strains and strains of various origins belonging to species included in the database were tested : - 90.32 % of the strains were correctly identified (with or without supplementary tests). - 6.16 % of the strains were not identified. - 3.52 % of the strains were misidentified. biomérieux SA English - 3

api 20 E 07584G - en - 2007/06 WASTE DISPOSAL Dispose of used or unused reagents as well as any other contaminated disposable materials following procedures for infectious or potentially infectious products. It is the responsibility of each laboratory to handle waste and effluents produced according to their type and degree of hazardousness and to treat and dispose of them (or have them treated and disposed of) in accordance with any applicable regulations. WARRANTY biomérieux disclaims all warranties, express or implied, including any implied warranties of MERCHANTABILITY AND FITNESS FOR A PARTICULAR USE. biomérieux shall not be liable for any incidental or consequential damages. IN NO EVENT SHALL BIOMERIEUX S LIABLITY TO CUSTOMER UNDER ANY CLAIM EXCEED A REFUND OF THE AMOUNT PAID TO BIOMERIEUX FOR THE PRODUCT OR SERVICE WHICH IS THE SUBJECT OF THE CLAIM. TESTS ONPG ACTIVE INGREDIENTS 2-nitrophenyl-ßDgalactopyranoside QTY (mg/cup.) 0.223 READING TABLE REACTIONS/ENZYMES ß-galactosidase (Ortho NitroPhenyl-ßD- Galactopyranosidase) NEGATIVE RESULTS POSITIVE colorless yellow (1) ADH L-arginine 1.9 Arginine DiHydrolase yellow red / orange (2) LDC L-lysine 1.9 Lysine DeCarboxylase yellow red / orange (2) ODC L-ornithine 1.9 Ornithine DeCarboxylase yellow red / orange (2) CIT trisodium citrate 0.756 CITrate utilization pale green / yellow blue-green / blue (3) H2S sodium thiosulfate 0.075 H2S production colorless / greyish black deposit / thin line URE urea 0.76 UREase yellow red / orange (2) TDA / immediate TDA L-tryptophane 0.38 Tryptophane DeAminase yellow reddish brown IND L-tryptophane 0.19 INDole production colorless pale green / yellow JAMES / immediate VP 1 + VP 2 / 10 min pink VP sodium pyruvate 1.9 acetoin production (Voges Proskauer) colorless / pale pink pink / red (5) GEL Gelatin (bovine origin) 0.6 GELatinase no diffusion diffusion of black pigment GLU D-glucose 1.9 fermentation / oxidation (GLUcose) (4) blue / blue-green yellow / greyish yellow MAN D-mannitol 1.9 fermentation / oxidation (MANnitol) (4) blue / blue-green yellow INO inositol 1.9 fermentation / oxidation (INOsitol) (4) blue / blue-green yellow SOR D-sorbitol 1.9 fermentation / oxidation (SORbitol) (4) blue / blue-green yellow RHA L-rhamnose 1.9 fermentation / oxidation (RHAmnose) (4) blue / blue-green yellow SAC D-sucrose 1.9 fermentation / oxidation (SACcharose) (4) blue / blue-green yellow MEL D-melibiose 1.9 fermentation / oxidation (MELibiose) (4) blue / blue-green yellow AMY amygdalin 0.57 fermentation / oxidation (AMYgdalin) (4) blue / blue-green yellow ARA L-arabinose 1.9 fermentation / oxidation (ARAbinose) (4) blue / blue-green yellow OX (see oxidase test package insert) cytochrome-oxidase (see oxidase test package insert) (1) A very pale yellow should also be considered positive. (2) An orange color after 36-48 hours incubation must be considered negative. (3) Reading made in the cupule (aerobic). (4) Fermentation begins in the lower portion of the tubes, oxidation begins in the cupule. (5) A slightly pink color after 10 minutes should be considered negative. The quantities indicated may be adjusted depending on the titer of the raw materials used. Certain cupules contain products of animal origin, notably peptones. biomérieux SA English - 4

api 20 E 07584G - en - 2007/06 TESTS ACTIVE INGREDIENTS QTY (mg/cup.) Nitrate reduction GLU tube MOB potassium nitrate 0.076 API M Medium or microscope SUPPLEMENTARY TESTS REACTIONS/ENZYMES NEGATIVE RESULTS NIT 1 + NIT 2 / 2-5 min POSITIVE NO2 production yellow red Zn / 5 min reduction to N2 gas orange-red yellow - motility non-motile motile McC MacConkey medium - growth absence presence OF-F OF-O glucose (API OF Medium) - - fermentation : under mineral oil oxidation : exposed to the air green green yellow yellow PROCEDURE p. I IDENTIFICATION TABLE p. II LITERATURE REFERENCES p. IV INDEX OF SYMBOLS p. V CLSI is a used, pending and/or registered trademark belonging to Clinical Laboratory and Standards Institute, Inc. ATCC is a used, pending and/or registered trademark belonging to American Type Culture Collection. biomérieux SA au capital de 12 029 370 673 620 399 RCS LYON 69280 Marcy-l'Etoile / France Tel. 33 (0)4 78 87 20 00 Fax 33 (0)4 78 87 20 90 http://www.biomerieux.com biomérieux, Inc Box 15969, Durham, NC 27704-0969 / USA Tel. (1) 919 620 20 00 Fax (1) 919 620 22 11 Printed in France biomérieux, the blue logo, API, API 20 E and apiweb are used, pending and/or registered trademarks belonging to biomérieux SA or one of its subsidiaries.

20 100 / 20 160 07584G - de - 2007/06 20 E System zur Identifizierung von Enterobacteriaceae und anderen gramnegativen, nicht anspruchsvollen Stäbchen IVD EINFÜHRUNG UND TESTERKLÄRUNG API 20 E ist ein standardisiertes System zur Identifizierung von Enterobacteriaceae und anderen gramnegativen, nicht anspruchsvollen Stäbchen anhand von 21 miniaturisierten biochemischen Reaktionen und einer Datenbasis. Die komplette Liste der mit dem System zu identifizierenden Mikroorganismen finden Sie in der Prozenttabelle am Ende der Arbeitsanleitung. PRINZIP Der API 20 E Streifen besteht aus 20 Mikroröhrchen, die dehydrierte Substrate enthalten. Die Röhrchen werden mit einer Keimsuspension beimpft, welche die Substrate löst. Die Stoffwechselprodukte, die während der Inkubation entstehen, bewirken Farbumschläge, entweder direkt oder nach Zugabe der Reagenzien. Die Ablesung der Reaktionen erfolgt anhand der Ablesetabelle, die Identifizierung mit dem Analytischen Profil Index oder einer Identifizierungssoftware. PACKUNGSGRÖSSE Packung für 25 Tests (Best.Nr. 20 100) - 25 API 20 E Streifen - 25 Inkubationswannen - 25 Ergebnisblätter - 1 Verschlussleiste - 1 Arbeitsanleitung Packung für 100 Tests (Best.Nr. 20 160) - 100 API 20 E Streifen (4x25 Streifen) - 100 Inkubationswannen - 100 Ergebnisblätter - 1 Verschlussleiste - 1 Arbeitsanleitung ZUSAMMENSETZUNG DES STREIFENS Die Zusammensetzung des API 20 E Streifens finden Sie in der Ablesetabelle dieser Arbeitsanleitung. ZUSÄTZLICH ERFORDERLICHE REAGENZIEN UND MATERIALIEN Reagenzien - API NaCl 0,85 % Medium, 5 ml (Best.Nr. 20 230) oder API Suspension Medium, 5 ml (Best.Nr. 20 150) - API 20 E Reagenzienkit (Best.Nr. 20 120) oder Einzelreagenzien: TDA (Best.Nr. 70 402) JAMES (Best.Nr. 70 542) VP 1 + VP 2 (Best.Nr. 70 422) NIT 1 + NIT 2 (Best.Nr. 70 442) - Zn Reagenz (Best.Nr. 70 380) - Oxidase (Best.Nr. 55 635*) *Dieses Produkt wird in einigen Ländern nicht vertrieben. Verwenden Sie ein gleichwertiges Reagenz. - Paraffinöl (Best.Nr. 70 100) - Analytischer Profil Index API 20 E (Best.Nr. 20 190) oder Identifizierungssoftware apiweb TM (Best.Nr. 40 011) (bei biomérieux anfragen) Materialien - Pipetten oder PSIpetten - Schutzhülle für Ampullen - Ampullenständer - Allgemeine mikrobiologische Laborausrüstung ERGÄNZENDE REAGENZIEN - API OF Medium (Best.Nr. 50 110): zur Untersuchung des oxidativen oder fermentativen Glukoseabbaus. - API M Medium (Best.Nr. 50 120): für die Beweglichkeitsprüfung von aeroben/anaeroben Bakterien. VORSICHTSMASSNAHMEN Für die in vitro Diagnostik und die mikrobiologische Kontrolle Nur für die Verwendung durch Fachkundige bestimmt. Dieser Kit enthält Bestandteile tierischen Ursprungs. Da durch die Kontrolle der Herkunft und/oder des Gesundheitszustandes der Tiere nicht völlig gewährleistet werden kann, dass diese Produkte keine übertragbaren pathogenen Agenzien enthalten, ist es empfehlenswert, diese als potenziell infektiös zu betrachten und unter Beachtung entsprechender Vorsichtsmaßnahmen zu behandeln (nicht einnehmen, nicht einatmen). Die Proben, Mikroorganismen und beimpften Produkte müssen als potenziell infektiös betrachtet und unter Beachtung geeigneter Vorsichtsmaßnahmen sachgemäß behandelt werden. Während der gesamten Testdurchführung müssen aseptische Arbeitsbedingungen und entsprechende Vorsichtsmaßnahmen für die zu untersuchende Keimgruppe eingehalten werden, siehe CLSI M29-A, Protection of Laboratory Workers from Occupationally Acquired Infections; Approved Guideline aktuelle Revision. Weitere diesbezügliche Informationen finden Sie in Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, CDC/NIH Letzte Ausgabe oder in den jeweils gültigen Richtlinien. Die Reagenzien nach Ablauf des Verfallsdatums nicht mehr verwenden. Vergewissern Sie sich vor Gebrauch, dass die Verpackung der verschiedenen Bestandteile nicht beschädigt ist. Streifen mit äußeren Anzeichen einer Beschädigung (deformierte Vertiefungen, geöffnete Trockenmittelbeutel etc.) nicht verwenden. Die angegebene Performance wurde gemäß dem Verfahren der vorliegenden Arbeitsanleitung ermittelt. Jede Abweichung von diesem Verfahren kann die Ergebnisse beeinflussen. Bei der Interpretation der Ergebnisse müssen der klinische Hintergrund oder andere Zusammenhänge, die Probenherkunft, Kolonie- und mikroskopische Morphologie des Stammes sowie gegebenenfalls die Ergebnisse anderer Tests, insbesondere das Antibiogramm, berücksichtigt werden. LAGERUNGSBEDINGUNGEN Die Streifen sind in einem Aluminiumbeutel verpackt, der Trockenmittel enthält. Legen Sie nach dem Öffnen des Beutels (*) die nicht benötigten Streifen zusammen mit dem Trockenmittel in den Aluminiumbeutel zurück und verschließen Sie diesen mit der (mitgelieferten) Verschlussleiste: das offene Beutelende zwischen die beiden Leisten legen und über die ganze Länge sorgfältig festklemmen. Die Streifen können auf diese Weise bis zu 10 Monate nach dem ersten Öffnen des Beutels (oder bis zu dem auf der Packung angegebenen Verfallsdatum, wenn dieses kürzer ist) bei 2-8 C gelagert werden. (*) Empfehlungen zum Öffnen des Beutels: Halten Sie den Beutel gerade und schneiden Sie ihn direkt unterhalb der Schweißnaht auf, so dass das Trockenmittel nicht beschädigt wird. biomérieux SA Deutsch - 1

api 20 E 07584G - de - 2007/06 PROBEN (ENTNAHME UND VORBEREITUNG) API 20 E darf nicht zur direkten Testung von klinischen oder anderen Untersuchungsmaterialien verwendet werden. Die zu identifizierenden Mikroorganismen müssen zuerst gemäß den üblichen mikrobiologischen Verfahren auf einem Kulturmedium isoliert werden, das für die Anzucht von Enterobacteriaceae und/oder gramnegativer, nicht anspruchsvoller Stäbchen geeignet ist. TESTDURCHFÜHRUNG Oxidase-Test Der Oxidase-Test muss gemäß den Angaben des Herstellers durchgeführt werden. Er stellt die 21. Identifikationsreaktion dar, die auf dem Ergebnisblatt notiert wird. Vorbereitung des Streifens Stellen Sie eine Inkubationswanne mit Deckel bereit und geben Sie zur Herstellung einer feuchten Kammer ca. 5 ml destilliertes oder demineralisiertes Wasser [oder anderes Wasser ohne Zusätze bzw. Derivate, die Gase freisetzen können (z.b. Cl2, CO2...)] in die Wanne. Notieren Sie die Referenznummer des Stammes auf dem dafür vorgesehenen seitlichen Abschnitt der Inkubationswanne. (Die Referenznummer nicht auf dem Deckel notieren, da er während des Arbeitsablaufes verwechselt werden oder abhanden kommen kann). Nehmen Sie den Streifen aus der Verpackung. Legen Sie den Streifen in die Wanne. ANMERKUNG: API 20 E ist nur zur Identifizierung von Enterobacteriaceae und gramnegativen, nicht anspruchsvollen Stäbchen bestimmt. Anspruchsvolle Keime, bei deren Handhabung spezielle Vorsichtsmaßnahmen erforderlich sind (z.b. Brucella und Francisella), sind nicht in der API 20 E Datenbasis enthalten. Wir empfehlen, für den Ausschluss oder die Identifizierung dieser Keime andere Tests zu verwenden. Vorbereitung des Inokulums Eine Ampulle API NaCl 0,85% Medium (5 ml) oder eine Ampulle API Suspension Medium (5 ml) öffnen, wie im Abschnitt "Vorsichtsmaßnahmen" der Arbeitsanleitung des Produktes beschrieben oder ein anderes Röhrchen mit 5 ml steriler physiologischer Kochsalzlösung oder sterilem Aqua dest. ohne Zusätze. Nehmen Sie mit einer Pipette oder PSIpette eine gut isolierte Einzelkolonie vom Agar ab. Verwenden Sie vorzugsweise junge Kulturen (18-24 h). Die Keime im Suspensionsmedium sorgfältig homogenisieren. Diese Suspension muss sofort verwendet werden. ANMERKUNG: Die meisten Vibrio Spezies sind halophil. Bei Verdacht auf Vibrio-Spezies stellen Sie die Keimsuspension mit API NaCl 0,85% Medium her. Beimpfung des Streifens Pipettieren Sie die Keimsuspension mit derselben Pipette, mit der Sie die Keime abgenommen haben, in die Mikroröhrchen (um Blasenbildung am Boden des Röhrchens zu vermeiden, halten Sie die Inkubationswanne leicht schräg nach vorne und legen Sie die Spitze der Pipette bzw. PSIpette am Rand des Bechers auf): - Füllen Sie für die Reaktionen CIT, VP und GEL Becher und Röhrchen, - Füllen Sie für die anderen Reaktionen nur die Röhrchen (und nicht die Becher), - Überschichten Sie bei den unterstrichenen Reaktionen: ADH, LDC, ODC, H2S, URE die Becher mit Paraffinöl, so dass anaerobe Bedingungen entstehen. Decken Sie die Inkubationswanne ab. Inkubieren Sie für 18-24 h bei 36 C ± 2 C. ABLESUNG UND INTERPRETATION Ablesung des Streifens Lesen Sie nach der Inkubation den Streifen mit Hilfe der Ablesetabelle ab. Wenn 3 oder mehr Tests (GLU + oder ) positiv sind, notieren Sie auf dem Ergebnisblatt alle Spontanreaktionen und prüfen Sie anschließend die Tests, die Reagenzzugaben erfordern: - TDA: Geben Sie 1 Tropfen TDA Reagenz zu. Eine rotbraune Farbe zeigt eine positive Reaktion an. Notieren Sie das Resultat auf dem Ergebnisblatt. - IND: Geben Sie 1 Tropfen JAMES Reagenz zu. Eine rosa Farbe, die im ganzen Becher diffundiert, zeigt eine positive Reaktion an. Notieren Sie das Resultat auf dem Ergebnisblatt. - VP: Geben Sie je 1 Tropfen VP 1 und VP 2 Reagenz zu. Warten Sie mindestens 10 min. Eine rosa oder rote Farbe ist als positiv zu bewerten. Notieren Sie das Ergebnis auf dem Ergebnisblatt. Eine nach 10 min auftretende schwache rosa Verfärbung wird als negativ bewertet. HINWEIS: Die Indolbildung muss zuletzt geprüft werden, da diese Reaktion Gase freisetzt, welche die Interpretation anderer Tests des Streifens beeinträchtigen können. Decken Sie nach Zugabe dieses Reagenzes den Streifen nicht wieder ab. Wenn die Anzahl der positiven Tests (einschließlich der GLUKOSE) vor der Reagenzienzugabe kleiner als 3 ist: - Inkubieren Sie den Streifen erneut für 24 h (± 2 h) ohne Reagenzienzugabe. - Lesen Sie anschließend die Reaktionen ab, für die Reagenzien zugegeben werden müssen (siehe vorheriger Abschnitt). - Zur Ergänzung der Identifizierung kann es hilfreich sein, weitere Tests durchzuführen (siehe Abschnitt Identifizierung). Interpretation Die Identifizierung erhält man anhand des numerischen Profils. Erstellung des numerischen Profils: Die biochemischen Reaktionen auf dem Ergebnisblatt sind in 3-er Gruppen eingeteilt. Jede positive Reaktion erhält den Wert 1, 2 oder 4 je nach Position des Tests innerhalb der Gruppe (1., 2. oder 3. Test). Die Zahlenwerte jeder Gruppe werden addiert (negative Reaktion = 0), so erhält man 7 Ziffern, welche das numerische Profil ergeben. Die Oxidasereaktion stellt den 21. Test dar, ihr wird bei positiver Reaktion der Zahlenwert 4 zugeordnet. Identifizierung: Die Identifizierung erfolgt anhand der Datenbasis (V4.1) * mit dem Analytischen Profil Index: - Schlagen Sie das numerische Profil in der Profilliste nach. * mit der Identifizierungssoftware apiweb TM : - Geben Sie das 7-stellige numerische Profil über die Tastatur ein. biomérieux SA Deutsch - 2

api 20 E 07584G - de - 2007/06 In den Fällen, in denen das 7-stellige Zahlenprofil keine ausreichende Selektivität ergibt, müssen folgende Zusatzreaktionen durchgeführt werden: - Nitratreduktion zu Nitrit (NO2) und Stickstoff (N2): Geben Sie je 1 Tropfen NIT 1 und NIT 2 Reagenz in das GLU-Röhrchen. Warten Sie 2 bis 5 min. Eine rote Färbung zeigt eine positive Reaktion (NO2) an. Eine negative Reaktion (gelbe Farbe) kann auf eine eventuelle Stickstoffproduktion (gelegentlich durch Bildung kleiner Bläschen angezeigt) zurückgeführt werden: Geben Sie 2-3 mg Zn Reagenz in den GLU- Becher. Bleibt das Röhrchen nach 5 min gelb, ist die Reaktion (N2) positiv, notieren Sie das Ergebnis auf dem Ergebnisblatt. Wird es orangerot, ist die Reaktion negativ, da die im Becher noch vorhandenen Nitrate durch Zink zu Nitrit reduziert wurden. Diese Reaktion ist für gramnegative, Oxidase positive Stäbchen wichtig. HINWEIS: Der Nitratnachweis muss aus denselben Gründen wie die Indolbildung (siehe HINWEIS im Abschnitt «Ablesung des Streifens») zuletzt durchgeführt werden. QUALITÄTSKONTROLLE - Beweglichkeit (MOB): Beimpfen Sie eine Ampulle API M Medium (siehe Arbeitsanleitung). - Anzucht auf MacConkey (McC) Agar: Beimpfen Sie einen MacConkey Agar (siehe Arbeitsanleitung). - Glukoseoxidation (OF-O): Beimpfen Sie eine Ampulle API OF Medium (siehe Arbeitsanleitung). - Glukosefermentation (OF-F): Beimpfen Sie eine Ampulle OF Medium (siehe Arbeitsanleitung). Diese Zusatztests, die im Abschnitt Einführung (Codierung der Profile) des Analytischen Profil Index aufgeführt sind, können auch für die Erstellung eines mit der Software identifizierbaren 9-stelligen Profils verwendet werden. 5 315 173 (57) Enterobacter gergoviae Bei schwacher Selektivität können Zusatztests zur Differenzierung vorgeschlagen werden. Siehe Identifizierungssoftware oder Analytischer-Profil-Index. Die Medien, Streifen und Reagenzien unterliegen in den verschiedenen Stadien der Produktion systematisch durchgeführten Qualitätskontrollen. Die mikrobiologische Qualitätskontrolle der API-Teststreifen im Labor kann vorzugsweise mit dem 1. Stamm Escherichia coli ATCC 25922 oder einem der folgenden Stämme durchgeführt werden: 2. Stenotrophomonas maltophilia ATCC 51331 3. Enterobacter cloacae ATCC 13047 4. Proteus mirabilis ATCC 35659 5. Klebsiella pneumoniae ssp pneumoniae ATCC 35657 ATCC: American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, VA 20110-2209, USA. ONPG ADH LDC ODC CIT H2S URE TDA IND VP GEL GLU MAN INO SOR RHA SAC MEL AMY ARA NO2 N2* 1. + + + + + + + + + + + 2. + V V + 3. + + V + + + + V + + + + + + + 4. + V + + + V + V + 5. + + + V V + + + + + + + + + + V * Die Reduktion zu N2 (+) kann mit dem Stamm ATCC 13047 und dem Stamm ATCC 25922 nachgewiesen werden. Profile nach 24-48 h Inkubation für den ATCC Stamm 51331, nach Anzucht auf Trypcase-Soja-Agar mit Hammelblut. Profile nach 18-24 h Inkubation für die anderen Stämme, nach Anzucht auf Trypcase-Soja-Agar mit Hammelblut. Mit API NaCl 0,85% Medium hergestellte Keimsuspension. Es liegt in der Verantwortung des Anwenders, die Qualitätskontrolle in Übereinstimmung mit den jeweils gültigen Vorschriften durchzuführen. LIMITIERUNGEN API 20 E ist nur für die Identifizierung von Enterobacteriaceae und in der Datenbasis enthaltener gramnegativer, nicht anspruchsvoller Stäbchen bestimmt (siehe Prozenttabelle am Ende der Arbeitsanleitung). Andere Mikroorganismen können weder identifiziert noch ausgeschlossen werden. Im Vergleich zu konventionellen Methoden können diskrepante Ergebnisse einzelner Reaktionen beobachtet werden. Dies ist durch Unterschiede im Reaktionsprinzip bedingt. Außerdem können durch Substratveränderungen abweichende Prozentwerte im Vergleich zu konventionellen Methoden auftreten. Bei einigen Spezies (z.b. Klebsiella oder Proteus) kann eine zunächst positive Reaktionen des Glukose-Tests negativ werden (Auftreten einer blau-grünen Färbung). In diesem Fall wird diese Reaktion negativ bewertet. Dieses Phänomen ist in der Prozenttabelle berücksichtigt. Bei Erhalt des Identifizierungsergebnisses Salmonella oder Shigella muss die biochemische Identifizierung serologisch bestätigt werden. Gramnegative, nicht fermentierende Stäbchen, die von Patienten mit Mukoviszidose isoliert wurden, können zu atypischen biochemischen Profilen führen, die die Identifizierung beeinträchtigen können. Es dürfen nur Reinkulturen verwendet werden. ERWARTETE ERGEBNISSE Die erwarteten Ergebnisse der verschiedenen biochemischen Reaktionen entnehmen Sie der Prozenttabelle am Ende dieser Arbeitsanleitung. PERFORMANCE Enterobacteriaceae: 5514 Stämme unterschiedlicher Herkunft und Stämme aus Stammsammlungen, die zu den Spezies der Datenbasis gehören, wurden getestet: - 92,80 % der Stämme wurden korrekt identifiziert (mit oder ohne Zusatztests). - 4,61 % der Stämme wurden nicht identifiziert. - 2,59 % wurden falsch identifiziert. biomérieux SA Deutsch - 3

api 20 E 07584G - de - 2007/06 Andere gramnegative, nicht anspruchsvolle Stäbchen: 2386 Stämme unterschiedlicher Herkunft und Stämme BESEITIGUNG DER ABFÄLLE Entsorgen Sie alle gebrauchten und nicht gebrauchten aus Stammsammlungen, die zu den Spezies der Reagenzien sowie kontaminierte Einwegmaterialien Datenbasis gehören, wurden getestet: - 90,32 % der Stämme wurden korrekt identifiziert (mit gemäß den für infektiöse oder potenziell infektiöse Materialien geltenden Bestimmungen. oder ohne Zusatztests). Es liegt in der Verantwortung jedes Labors, die - 6,16 % der Stämme wurden nicht identifiziert. entstandenen Fest- und Flüssigabfälle gemäß der - 3,52 % wurden falsch identifiziert. jeweiligen Risikogruppe zu behandeln und deren Entsorgung in Übereinstimmung mit den gültigen gesetzlichen Bestimmungen sicherzustellen. ABLESETABELLE TESTS ONPG AKTIVE BESTANDTEILE 2-Nitrophenyl-ßD- Galaktopyranosid MENGE (mg/vert.). 0,223 REAKTIONEN/ENZYME ß-Galaktosidase (Ortho-Nitrophenyl-ßD- Galaktopyranosidase) NEGATIV ERGEBNISSE POSITIV farblos gelb (1) ADH L-Arginin 1,9 Arginin DiHydrolase gelb rot / orange (2) LDC L-Lysin 1,9 Lysin DeCarboxylase gelb rot / orange (2) ODC L-Ornithin 1,9 Ornithin DeCarboxylase gelb rot / orange (2) CIT Trinatriumcitrat 0,756 CITratverwertung hellgrün / gelb blau-grün / blau (3) H2S Natriumthiosulfat 0,075 H2S-Bildung farblos / gräulich schwarzer Niederschlag URE Harnstoff 0,76 UREase gelb rot / orange (2) TDA / sofort TDA L-Tryptophan 0,38 Tryptophan DesAminase gelb rotbraun IND L-Tryptophan 0,19 INDol-Bildung farblos hellgrün / gelb JAMES / sofort rosa VP Natriumpyruvat 1,9 Acetoinbildung (Voges Proskauer) VP 1 + VP 2 / 10 min farblos / blassrosa rosa / rot (5) GEL Gelatine (bovinen Ursprungs) 0,6 Gelatinase (GELatine) keine Diffusion Diffusion der schwarzen Tusche GLU D-Glukose 1,9 Fermentation / Oxidation (GLUkose) (4) blau / blau-grün gelb / gelb grau MAN D-Mannit 1,9 Fermentation / Oxidation (MANnit) (4) blau / blau-grün gelb INO Inosit 1,9 Fermentation / Oxidation (INOsit) (4) blau / blau-grün gelb SOR D-Sorbit 1,9 Fermentation / Oxidation (SORbit) (4) blau / blau-grün gelb RHA L-Rhamnose 1,9 Fermentation / Oxidation (RHAmnose) (4) blau / blau-grün gelb SAC D-Saccharose 1,9 Fermentation / Oxidation (SACcharose) (4) blau / blau-grün gelb MEL D-Melibiose 1,9 Fermentation / Oxidation (MELibiose) (4) blau / blau-grün gelb AMY Amygdalin 0,57 Fermentation / Oxidation (AMYgdalin) (4) blau / blau-grün gelb ARA L-Arabinose 1,9 Fermentation / Oxidation (ARAbinose) (4) blau / blau-grün gelb OX (siehe Arbeitsanleitung des Oxidase-Tests) Cytochrom OXidase (siehe Arbeitsanleitung des Oxidase-Tests) (1) Auch eine nur ganz leichte Gelbfärbung ist als positiv zu bewerten. (2) Eine orange Verfärbung nach einer 36-48-stündigen Inkubation wird als negativ bewertet. (3) Ablesung im Becher (aerober Bereich) (4) Die Fermentation beginnt im unteren Teil der Röhrchens, die Oxidation im Becher. (5) Eine nach 10 min auftretende schwache rosa Verfärbung wird als negativ bewertet. Die angegebenen Mengen können je nach Konzentration der verwendeten Ausgangsmaterialien angeglichen werden. Einige Näpfchen enthalten Bestandteile tierischen Ursprungs, vor allem Peptone. biomérieux SA Deutsch - 4

api 20 E 07584G - de - 2007/06 ZUSATZREAKTIONEN TESTS Nitratreduktion GLU Röhrchen AKTIVE BESTANDTEILE MENGE (mg/vert.) Kaliumnitrat 0,076 REAKTIONEN/ENZYME NEGATIV ERGEBNISSE NIT 1 + NIT 2 / 2-5 min POSITIV NO2 Bildung gelb rot Zn / 5 min Reduktion zu N2 orange-rot gelb MOB API M Medium oder Mikroskop Beweglichkeit unbeweglich beweglich McC MacConkey Agar Wachstum auf McConkey kein Wachstum Wachstum Agar OF-F OF-O Glukose (API OF Medium) Fermentation: unter Öl Oxidation: aerob grün grün gelb gelb METHODIK S. I PROZENTTABELLE S. II LITERATUR S. IV SYMBOLE S. V CLSI ist eine verwendete, angemeldete und/oder eingetragene Marke von Clinical and Laboratory Standards Institute Inc. ATCC ist eine verwendete, angemeldete und/oder eingetragene Marke von American Type Culture Collection. biomérieux SA au capital de 12 029 370 673 620 399 RCS LYON 69280 Marcy-l'Etoile / France Tél. 33 (0)4 78 87 20 00 Fax 33 (0)4 78 87 20 90 http://www.biomerieux.com biomérieux, Inc Box 15969, Durham, NC 27704-0969 / USA Tel. (1) 919 620 20 00 Fax (1) 919 620 22 11 Gedruckt in Frankreich biomérieux, das blaue Logo, API, API 20 E und apiweb sind verwendete, angemeldete und/oder eingetragene Marken von biomérieux SA oder einer ihrer Niederlassungen.

20 100 / 20 160 07584G - es - 2007/06 20 E Sistema de identificación de Enterobacteriaceae y otros bacilos Gram negativos no exigentes IVD INTRODUCCIÓN Y OBJETO DEL ENSAYO API 20 E es un sistema estandarizado que permite la identificación de Enterobacteriaceae y otros bacilos Gram negativos no exigentes, que incluyen 21 tests bioquímicos miniaturizados, así como una base de datos. La lista completa de las bacterias posibles de identificar con este sistema se presenta en la Tabla de Identificación al final de la presente ficha técnica. PRINCIPIO La galería del sistema API 20 E se compone de 20 microtubos que contienen los substratos deshidratados. Los microtubos se inoculan con una suspensión bacteriana que reconstituye los tests. Las reacciones producidas durante el periodo de incubación se traducen en cambios de color espontáneos o revelados mediante la adición de reactivos. La lectura de estas reacciones se lleva a cabo utilizando la Tabla de Lectura, y la identificación se obtiene con la ayuda del Catálogo Analítico o del software de identificación. PRESENTACIÓN Caja de 25 tests (ref. 20 100) - 25 galerías API 20 E - 25 cámaras de incubación - 25 hojas de resultados - 1 barra de cierre - 1 ficha técnica Caja de 100 tests (ref. 20 160) - 100 galerías API 20 E - 100 cámaras de incubación - 100 hojas de resultados - 1 barra de cierre - 1 ficha técnica COMPOSICIÓN DE LA GALERÍA La composición de la galería API 20 E se puede consultar en la Tabla de Lectura de la presente ficha técnica. REACTIVOS Y MATERIAL NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS Reactivos - API NaCl 0,85 % Medium, 5 ml (ref. 20 230) o API Suspension Medium, 5 ml (ref. 20 150) - Caja de reactivos API 20 E (ref. 20 120) o reactivos individuales: TDA (ref. 70 402) JAMES (ref. 70 542) VP 1 + VP 2 (ref. 70 422) NIT 1 + NIT 2 (ref. 70 442) - Reactivo Zn (ref. 70 380) - Oxidasa (ref. 55 635*) * referencia no comercializada en ciertos países: utilizar un reactivo equivalente - Aceite de parafina (ref. 70 100) - Catálogo Analítico API 20 E (ref. 20 190) o Software de Identificación apiweb TM (Réf. 40 011) (consultar con biomérieux) Material - Pipetas o PSIpettes - Gradilla para ampollas - Protege-ampollas - Equipo general de laboratorio de bacteriología REACTIVOS COMPLEMENTARIOS - API OF Medium (ref. 50 110): Ensayo para la determinación del metabolismo fermentativo u oxidativo de la glucosa. - API M Medium (ref. 50 120): Ensayo para la determinación de la movilidad de las bacterias aero-anaerobias. PRECAUCIONES DE UTILIZACIÓN Para diagnóstico in vitro y control microbiológico. Exclusivamente para uso profesional. Este envase contiene componentes de origen animal. Dado que no se puede controlar el origen y/o el estado sanitario de los animales, no es posible garantizar de forma absoluta que estos productos no contengan ningún agente patógeno transmisible, por lo que se recomienda manipularlos con todas las precauciones de uso relativas a los productos potencialmente infecciosos, (no ingerir, no inhalar). Todas las muestras, cultivos bacterianos y productos inoculados deben ser considerados como potencialmente infecciosos y deben ser manipulados de modo apropiado. Durante toda la manipulación, deben respetarse las normas de asépsia y tomar las precauciones habituales de manipulación para el grupo de bacterias estudiadas; consultar "CLSI M29-A, Protection of Laboratory Workers from Occupationally Acquired Infection; Approved Guideline Revisión en vigor". Para información complementaria sobre las precauciones de manipulación, consultar al "Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, CDC/NIH - última edición", o la reglamentación vigente en el país de utilización. No utilizar los reactivos después de su fecha de caducidad. Antes de su utilización, asegurarse de la integridad del embalaje y sus componentes. No utilizar galerías que hayan sufrido una alteración física: cúpula deformada, bolsa deshidratante abierta,... Los resultados presentados han sido obtenidos mediante la metodología indicada en la presente ficha técnica. Toda desviación de la metodología puede alterar los resultados. La interpretación de los resultados del test debe ser realizada teniendo en cuenta un contexto clínico o de otro tipo, el origen de las muestras, los aspectos macro y microscópicos de la cepa y, eventualmente, los resultados de otros tests, en particular del antibiograma. CONDICIONES DE ALMACENAMIENTO Las galerías API 20 E se presentan en una bolsa de aluminio con bolsitas deshidratantes. Después de su apertura (*), conservar las galerías restantes con los deshidratantes, volviendo a cerrar la bolsa con la ayuda del Sistema de cierre (presente en la caja): Colocar la extremidad de la bolsa entre las dos piezas de la barra y cerrarlos cuidadosamente, a fondo, en toda su longitud. biomérieux SA Español - 1

api 20 E 07584G - es - 2007/06 Las galerías pueden conservarse de este modo hasta 10 meses después de la apertura de la bolsa, a 2-8º C (o hasta la fecha de caducidad indicada en el envase, si ésta fuese anterior). (*) Recomendación para su apertura: Cortar justo por debajo de la soldadura, manteniendo la bolsa recta, para evitar que las bolsitas deshidratantes puedan resultar dañadas. MUESTRAS (RECOGIDA Y PREPARACIÓN) La galería API 20 E no debe ser utilizada directamente a partir de muestras de origen clínico o de otro tipo. Los microorganismos a identificar deben aislarse en una primera fase sobre un medio de cultivo adecuado según las técnicas usuales de bacteriología. MODO DE EMPLEO Test de la Oxidasa El test Oxidasa debe ser realizado según las instrucciones de utilización del fabricante, y constituye el test de identificación n 21 a anotar en la hoja de resultados. Preparación de la galería Reunir fondo y tapa de una cámara de incubación y repartir aproximadamente 5 ml de agua destilada o desmineralizada [o cualquier agua sin aditivos o derivados susceptibles de liberar gases (Ej.: Cl 2, CO 2...)] en los alvéolos para crear la atmósfera húmeda. Inscribir la referencia de la cepa en la lengüeta lateral de la cámara (no inscribir la referencia sobre la tapa, ya que ésta puede quedar desplazada durante la manipulación). Sacar la galería de su envase. Colocar la galería en la cámara de incubación. NOTA: La galería API 20 E debe ser utilizada con las Enterobacteriaceae y/o los bacilos Gram negativos no exigentes. Los microorganismos exigentes y que necesiten precauciones de manipulación particulares (Ej.: Brucella y Francisella) no forman parte de la base de datos API 20 E. Conviene usar otras técnicas para excluir o confirmar su presencia. Preparación del inóculo Abrir una ampolla de API NaCl 0,85% Medium (5 ml) o una ampolla de API Suspension Medium (5 ml), como se indica en el párrafo Precauciones de utilización de la presente ficha técnica o utilizar un tubo que contenga 5 ml de agua fisiológica estéril o de agua destilada estéril, sin aditivos. Con una pipeta o una PSIpipete, extraer una sola colonia bien aislada sobre medio agar. Utilizar preferentemente cultivos jóvenes (18-24 horas). Realizar una suspensión bacteriana homogeneizando cuidadosamente las bacterias en el medio. Esta suspensión debe ser utilizada inmediatamente después de su preparación. NOTA: La mayoría de las especies de Vibrio son halófilas. En caso de sospechar la presencia de un Vibrio, realizar la suspensión bacteriana en el API NaCl 0,85% Medium. Inoculación de la galería Introducir la suspensión bacteriana en los tubos de la galería con la ayuda de la misma pipeta (para evitar la formación de burbujas en el fondo de los tubos,colocar la punta de la pipeta o de la PSIpette sobre la pared de la cúpula, inclinando ligeramente la cámara de incubación hácia delante) : - Para las pruebas CIT, VP y GEL, llenar el tubo y la cúpula, - Para las otras pruebas, llenar únicamente los tubos (no las cúpulas), - Para las pruebas : ADH, LDC, ODC, H2S, URE crear una atmósfera anaerobia llenando la cúpula con aceite de parafina. Cerrar la cámara de incubación. Incubar a 36ºC 2ºC durante 18-24 horas. LECTURA E INTERPRETACIÓN Lectura de la galería Después de la incubación, la lectura de la galería debe hacerse remitiéndose a la Tabla de Lectura. Caso de que 3 o más ensayos (test GLU + o -), resultasen positivos, anotar en la hoja de resultados todas las reacciones espontáneas y después revelar los ensayos que necesitan la adición de reactivos: - Prueba TDA: agregar una gota del reactivo TDA. Uncolor marrón-rojizo indica una reacción positiva que se anotará en la hoja de resultados. - Prueba IND: agregar 1 gota del reactivo JAMES. Un color rosado que se difumina en toda la cúpula indica una reacción positiva, que se debe anotar en la hoja de resultados. - Prueba VP: agregar una gota de los reactivos VP 1 y VP 2. Esperar un mínimo de 10 minutos. Un color rosa o rojo indica una reacción positiva que se anotará en la hoja de resultados. Una débil coloración rosa que aparece después de 10 minutos debe ser considerada como negativa. NOTA: La prueba de investigación sobre la producción de Indól debe ser realizada en último lugar, pues esta reacción libera gases que pueden alterar la interpretación de las otras pruebas de la galería. No volver a colocar la tapa de la incubadora después de agregar el reactivo. Si el número de pruebas positivas antes de añadir los reactivos (incluyendo el ensayo GLU) es inferior a 3: - Reincubar la galería 24 horas ( 2 horas) suplementarias sin volver a añadir los reactivos. - Revelar los ensayos que precisan adición de reactivos (ver párrafo precedente). - Para completar la identificación, puede ser útil realizar ensayos complementarios (consultar el párrafo "Identificación"). Interpretación La identificación se obtiene a partir del perfil numérico: Determinación del perfil numérico: En la hoja de resultados, los tests están separados en grupos de tres y se indica para cada uno un valor de 1, 2 ó 4. Como la galería API 20 E comporta 20 ensayos, sumando al interior de cada grupo los valores que corresponden a reacciones positivas, se obtiene un perfil numérico de 7 cifras. (A la reacción de la oxidasa, que constituye el test n 21 se le asigna el valor 4, cuando resulte positiva). Identificación: Se realiza a partir de la base de datos (V4.1). * Con la ayuda del Catálogo Analítico: -Localizar el perfil numérico en la lista de los perfiles. * Con la ayuda del software de identificación apiweb TM : - Introducir manualmente mediante el teclado el perfil numérico de 7 cifras. biomérieux SA Español - 2

api 20 E 07584G - es - 2007/06 Como además, en ciertos casos, el perfil de 7 cifras resulta insuficientemente discriminante, es necesario realizar los siguientes ensayos complementarios: - Reducción de los nitratos en nitritos (NO 2 ) y en nitrógeno (N 2 ): añadir una gota de los reactivos NIT 1 y NIT 2 en el tubo GLU. Esperar de 2 a 5 minutos. Una coloración roja indica una reacción positiva (NO 2 ). Una reacción negativa (coloración amarilla) puede de verse a la producción de nitrógeno (eventualmente señalado por la presencia de micro-burbujas): agregar de 2 a 3 mg de reactivo Zn en la cúpula GLU. Después de 5 minutos, si el color sigue siendo amarillo, indica una reacción positiva (N 2 ), que anotaremos en la hoja de resultados. Si el color de la cúpula cambia a naranja-rojo, la reacción es negativa, ya que los nitratos aún presentes en el tubo han sido reducidos a nitritos por el Zinc. Esta reacción es interesante para los bacilos Gram negativos y oxidasa positivos. NOTA: Por las mismas razones que en el ensayo de Indól (ver la nota del párrafo "Lectura de la galería"), el ensayo de reducción de los nitratos debe realizarse en último lugar. - Movilidad (MOB): inocular una ampolla API M Medium (ver ficha técnica). - Cultivo sobre agar MacConkey (McC: inocular un medio MacConkey (ver ficha técnica). - Oxidación de la glucosa (OF-O): inocular una ampolla API OF Medium (ver ficha técnica). - Fermentación de la glucosa (OF-F): inocular una ampolla API OF Medium (ver ficha técnica). Estos ensayos complementarios mencionados en la introducción (codificación de perfiles) del Catálogo Analítico pueden ser utilizados para constituir un perfil de 9 cifras, identificable mediante el software de identificación. 5 315 173 (57) Enterobacter gergoviae En casos de discriminación débil, pueden proponerse otros ensayos suplementarios. Consultar el software o Catálogo Analítico. CONTROL DE CALIDAD Los medios, galerías y reactivos son sometidos a controles de calidad sistemáticos en las diferentes etapas de su fabricación. Puede además realizarse un control bacteriológico de las diferentes pruebas de la galería por el usuario con la cepa: 1. Escherichia coli ATCC 25922 de preferencia o una de las cepas siguientes: 2. Stenotrophomonas maltophilia ATCC 51331 3. Enterobacter cloacae ATCC 13047 ATCC: 4. Proteus mirabilis ATCC 35659 5. Klebsiella pneumoniae ssp pneumoniae ATCC 35657 American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, VA 20110-2209, USA. ONPG ADH LDC ODC CIT H2S URE TDA IND VP GEL GLU MAN INO SOR RHA SAC MEL AMY ARA NO2 N2* 1. + - + + - - - - + - - + + - + + - + - + + - 2. + - V - V - - - - - + - - - - - - - - - - - 3. + + V + + + + V + + + + + + + 4. + V + + + V + V + 5. + + + V V + + + + + + + + + + V * El estado N 2 (+) puede observarse para la cepa ATCC 13047 y la cepa ATCC 25922. Perfil obtenido después de 24-48 horas de incubación para la cepa ATCC 51331 a partir de colonias cultivadas sobre agar Trypcase Soja + sangre. Perfiles obtenidos después de 18-24 horas de incubación para otras cepas, a partir de las colonias cultivadas sobre agar Trypcase Soja + sangre. Suspensión bacteriana preparada en API NaCl 0,85% Medium. El usuario es responsable de asegurarse de que el control de calidad ha sido realizado conforme a la legislación local vigente. LIMITACIONES DEL ENSAYO El sistema API 20 E está destinado a la identificación de las Enterobacteriaceae y de los bacilos Gram negativos no exigentes presentes en la base de datos (ver Tabla de Identificación al final de esta ficha técnica) y sólo y exclusivamente a estos gérmenes. No puede ser utilizado para identificar otros microorganismos o excluir su presencia. Puede observarse discordancias con respecto a las técnicas convencionales. Esto se debe a los diferentes principios utilizados en la técnicas API. También puede observarse desviaciones en los porcentajes, hecho que se explica por las variaciones del substrato. Para algunas especies (Ej.: Klebsiella o Proteus), ciertas reacciones inicialmente positivas del ensayo de glucosa pueden transformarse en negativas (aparición de una coloración azul-verde). En estos casos esta reacción debe considerarse como negativa. Los porcentajes indicados en la Tabla de Identificación, toman en cuenta este tipo de fenómeno. En el caso de la identificación de Salmonella o Shigella, debe realizarse una identificación serológica para confirmar la identificación bacteriana. Los bacilos Gram negativos no fermentadores, aislados en pacientes afectados de mucoviscidosis, pueden generar perfiles bioquímicos atípicos susceptibles de alterar su identificación. Sólo se deberán emplear cultivos puros que contengan un sólo tipo de microorganismo. RESULTADOS ESPERADOS Consultar la Tabla de Identificación que se incluye al final de esta ficha técnica para aclarar los resultados esperados en las diferentes reacciones bioquímicas. PRESTACIONES Enterobacteriaceae Han sido ensayadas 5.514 cepas de diversos orígenes, así como cepas de colección pertenecientes a especies de la base de datos: - 92,80% de las cepas han sido identificadas correctamente (con o sin ensayos suplementarios). - 4,61% de las cepas no han sido identificadas. - 2,59% de las cepas se han identificado incorrectamente. biomérieux SA Español - 3

api 20 E 07584G - es - 2007/06 Otros bacilos Gram negativos no perniciosos: ELIMINACION DE LOS RESIDUOS Han sido ensayadas 2.386 cepas de diversos orígenes, Eliminar los reactivos utilizados o no utilizados, así como así como cepas de colección pertenecientes a especies los materiales de un solo uso contaminados siguiendo los de la base de datos: procedimientos relacionados con los productos - 90,32% de las cepas han sido identificadas infecciosos o potencialmente infecciosos. correctamente (con o sin ensayos suplementarios). Es responsabilidad de cada laboratorio la gestión de los - 6,16% de las cepas no han sido identificadas. dresiduos y efluentes que produce, según la naturaleza y - 3,52% de las cepas se han identificado peligrosidad, garantizando (o haciendo garantizar) su incorrectamente. tratamiento y eliminación según las reglamentaciones aplicables. TABLA DE LECTURA RESULTADOS TESTS COMPONENTES QTE REACCIONES/ENZIMAS ACTIVOS (mg/cúp) NEGATIVO POSITIVO ONPG 2-nitro-fenil- Dgalactopiranosida 0,223 -galactosidasa (orto-nitrofenil- Dgalactoprianosidasa) incoloro amarillo (1) ADH L-arganina 1,9 Arginina-dihidrolasa amarillo rojo/anaranjado (2) LDC L-lisina 1,9 Lisina Decarboxilasa amarillo rojo/anaranjado (2) ODC L-ornitina 1,9 Ornitina Decarboxilasa amarillo rojo/anaranjado (2) CIT citrato trisódico 0,756 utilización del CITrato verde pálido/amarillo azul-verde/azul (3) H 2 S tiosulfato sódico 0,075 producción de H 2 S incoloro/grisáceo depósito negro/fin liserado URE urea 0,76 UREasa amarillo rojo/anaranjado (2) TDA / inmediato TDA L-triptófano 0,38 Triptofano DesAminasa amarillo marrón-rojizo IND L-triptófano 0,19 producción de ÍNDole incoloro verde pálido/ amarillo VP piruvato sódico 1,9 GEL Gelatina (origen bovino) producción de acetoína (Voges Proskauer) 0,6 Gelatinasa (GELatina) GLU D-glucosa 1,9 fermentación/oxidación (GLUcosa) (4) MAN D-manitol 1,9 INO inositol 1,9 SOR D-sorbitol 1,9 RHA L-ramnosa 1,9 SAC D-sacarosa 1,9 MEL D-melibiosa 1,9 AMY amigdalina 0,57 ARA L-arabinosa 1,9 OX fermentación/oxidación (MANitol) (4) fermentación/oxidación (INOsitol) (4) fermentación/oxidación (SORbitol) (4) fermentación/oxidación (RHAmnosa) (4) fermentación/oxidación (SACarosa) (4) fermentación/oxidación (MELibiosa) (4) fermentación/oxidación (AMYgdalina) (4) fermentación/oxidación (ARAbinosa) (4) JAMES / inmediato VP 1 + VP 2 / 10 min rosa Incoloro / rosa pálido Rosa / rojo (5) no difusión azul/azul verdoso azul/azul verdoso azul/azul verdoso azul/azul verdoso azul/azul verdoso azul/azul verdoso azul/azul verdoso azul/azul verdoso azul/azul verdoso difusión pigmento negro amarillo/amarillo grisáceo amarillo amarillo amarillo amarillo amarillo amarillo amarillo amarillo (ver ficha técnica del test de oxidasa) citocromo-oxidasa (ver ficha técnica del test de oxidasa) (1) Un color amarillo muy ligero también implica resultado positivo. (2) La aparición de un color naranja tras 36-48 H de incubación debe considerarse negativa. (3) Lectura en la cúpula (zona aerobia). (4) La fermentación comienza en la parte inferior de los tubos, mientras que la oxidación empieza en la cúpula. (5) Una ligera coloración rosa, que aparece tras 10 minutos, debe ser leída como negativa. Las cantidades indicadas pueden ser ajustadas en función de los títulos de las materias primas. Ciertas cúpulas contienen componentes de origen animal, notablemente peptonas. biomérieux SA Español - 4

api 20 E 07584G - es - 2007/06 ENSAYOS COMPLEMENTARIOS TESTS Reducción de nitratos tubo GLU MOB McC OF-F OF-O COMPONENTES QTE (mg/cúp) RESULTADOS REACCIONES/ENZIMAS NEGATIVO POSITIVO NIT 1 + NIT 2 / 2-5 min producción de NO 2 amarillo rojo nitrato potásico 0,076 Zn / 5 min reducción al estado N 2 naranja-rojo amarillo API M Medium o microscopio movilidad inmóvil móvil Medio de MacConkey cultivo ausencia presencia Glucose (API OF Medium) fermentación: bajo aceite oxidación: al aire Verde verde Amarillo amarillo METODOLOGÍA p. I TABLA DE IDENTIFICACIÓN p. II BIBLIOGRAFÍA p. IV TABLA DE SÍMBOLOS p. V CLSI es una marca utilizada, depositada y/o registrada perteneciente a Clinical Laboratory and Standards Institute, Inc. ATCC es una marca utilizada, depositada y/o registrada perteneciente a American Type Culture Collection. biomérieux SA au capital de 12 029 370 673 620 399 RCS LYON 69280 Marcy-l'Etoile / France Tél. 33 (0)4 78 87 20 00 Fax 33 (0)4 78 87 20 90 http://www.biomerieux.com biomérieux, Inc Box 15969, Durham, NC 27704-0969 / USA Tél. (1) 919 620 20 00 Fax (1) 919 620 22 11 Impreso en Francia biomérieux, el logo azul, API, API 20 E y apiweb son marcas utilizadas, depositadas y/o registradas pertenecientes a biomérieux SA o a cada un ade sus filiales.