Schweizerische Gesellschaft für Rechtsmedizin SGRM Société Suisse de Médecine Légale Società Svizzera di Medicina Legale Groupe de travail sur les analyses de cheveux Détermination de drogues et de médicaments dans les cheveux Version du 05 juillet 2014 Approuvé par le comité directeur de la et autorisé à la publication le 01.09.2014.
cheveux Page 2 sur 11 Sommaire 1 AVANT-PROPOS... 3 2 DEFINITIONS / GLOSSAIRE... 4 3 PRINCIPES... 5 3.1 Applications pour les analyses de drogues et de médicaments dans les cheveux 5 3.2 Généralités... 5 3.3 Groupes de substances... 5 3.3.1 Opiacés/Opioïdes... 5 3.3.2 Cocaïne... 5 3.3.3 Autres stimulants... 5 3.3.4 Benzodiazépines... 5 3.3.5 Substances apparentées aux benzodiazépines (Z-drugs)... 5 3.3.6 Cannabinoïdes... 6 3.3.7 Listes de substances propres aux laboratoires... 6 4 PROCEDURE PRATIQUE... 6 4.1 Prélèvement d échantillon... 6 4.2 Phase préanalytique... 6 4.2.1 Lavage... 6 4.2.2 Segmentation... 6 4.3 Méthodes... 6 4.3.1 Poids net... 6 4.3.2 Homogénéisation... 6 4.3.3 Extraction et détection... 7 5 EXIGENCES ANALYTIQUES... 7 5.1 Validation... 7 5.2 Etalonnage... 7 5.3 Contrôle de qualité... 7 5.3.1 Contrôle de qualité interne... 7 5.3.2 Comparaisons interlaboratoires... 8 5.3.3 Contrôles de qualité internationaux... 8 5.4 Incertitude de mesure... 8 6 INTERPRETATION... 8 6.1 Précisions sur la limite de détection et les seuils de décision... 8 6.2 Concentrations dans les cheveux et seuils de décisions... 8 6.3 Contamination externe... 9 6.4 Facteurs supplémentaires pour l'interprétation... 9 6.4.1 Cosmétiques pour cheveux... 9 6.4.2 Phénomène de persistance... 9 6.4.3 Poils... 10 ANNEXE... 11
cheveux Page 3 sur 11 1 AVANT-PROPOS Ce document a été élaboré par les membres du groupe de travail Analyses de cheveux de la (Société suisse de médecine légale). Ce groupe de travail se compose de membres de la section de chimie et de toxicologie forensiques, ainsi que de la section de médecine du trafic de la. Il s agit d un document consensuel interne à la, qui vise à harmoniser la terminologie et l interprétation des résultats d analyses effectuées sur des cheveux. En même temps, il définit les exigences minimales, ainsi que les principes de la gestion de la qualité concernant les analyses médico-légales effectuées sur des cheveux. Membres du groupe de travail: méd. prat. Ph. Keller, IRM Argovie Dr en sc. nat. W. Martz, IRM Argovie Dr en phil. II F. Dussy, IRM Bâle Prof. W. Weinmann Dr en sc. nat., IRM Berne Dr en phil. nat. S. König, IRM Berne Dr en sc. nat. F. Sporkert, CURML Lausanne Dr en sc. For. M.-T. Pinorini, FASV Olivone Dr en sc. nat. J. Beyer, IRM St-Gall Dr en sc. nat. A. Cronin, IRM St-Gall Dr en phil. II M.R. Baumgartner, IRM Zurich Dr en sc. nat. T.M. Binz, IRM Zurich Dr en sc. nat. C. Klemm, IRM Zurich Dr en méd. B. Liniger, IRM Zurich Pharmacienne M.M. Madry, IRM Zurich Dans ce document, les titres des personnes sont mentionnés de manière neutre; pour faciliter la compréhension, c est la forme masculine qui est la plupart du temps, employée.
cheveux Page 4 sur 11 2 DEFINITIONS / GLOSSAIRE Champ d application Cut-off distal CPG / GC GTFCh CIL LC LOD LOQ MS pg/mg proximal SoHT SPE Etendue des concentrations des substances recherchées dans l échantillon (limite inférieure/supérieure), avec un degré d exactitude et de précision acceptables. Doit être mentionné dans le rapport de validation. Angl. Limite de décision Éloigné du cuir chevelu Chromatographie en phase gazeuse = procédé chromatographique pour séparer les mélanges de substances (applicable aux substances gazeuses ou évaporables sans décomposition) Société de toxicologie et de chimie forensiques (http://www.gtfch.org) Comparaisons inter-laboratoires de la Angl. Liquid Chromatography (chromatographie en phase liquide): Procédé chromatographique pour séparer les mélanges de substances (applicable aussi aux substances non volatiles) Angl. Limit Of Detection: Limite de détection, limite de la détection qualitative et fiable d une substance Angl. Limit Of Quantification: Limite de quantification, limite de la détection quantitative et fiable d une substance Spectrométrie de masse: Procédé de mesure du rapport masse/charge des ions (utilisable pour la détection qualitative et quantitative des substances) Picogramme par milligramme Près du cuir chevelu Société suisse de médecine légale (www.sgrm.ch) Angl. Society of Hair Testing (www.soht.org) Angl. Solid Phase Extraction: extraction en phase solide
cheveux Page 5 sur 11 3 PRINCIPES 3.1 Applications pour les analyses de drogues et de médicaments dans les cheveux La détection de drogues et de médicaments doit être effectuée dans l optique d obtenir des réponses aux questions suivantes: - Contrôle de l abstinence, par ex. dans le cadre de l évaluation de l aptitude à (médecine du trafic) - Evaluation du comportement vis-à-vis de la consommation de substances, par ex. lorsqu il est question de droit de garde dans le droit de la famille, ou quand il s agit d obligation de mise à l épreuve et de détention dans le régime pénitentiaire - Contrôle de la compliance 3.2 Généralités La concentration d une substance mesurée dans les cheveux est en corrélation avec la dose de substance absorbée. La quantité incorporée dans les cheveux dépend de la couleur naturelle des cheveux, parce que les cheveux pigmentés et non pigmentés (blancs) incorporent de façon inégale certaines substances, en particulier celles basiques. Un traitement cosmétique peut détruire ou éliminer une partie considérable des substances incorporées. 3.3 Groupes de substances 3.3.1 Opiacés/Opioïdes Morphine, monoacétylmorphine 1, codéine, acétylcodéine 2, dihydrocodéine, oxycodone, oxymorphone, hydromorphone, tramadol, desméthyltramadol, méthadone, EDDP, buprénorphine, norbuprénorphine. 3.3.2 Cocaïne Cocaïne, benzoylecgonine, norcocaïne, éthylcocaïne. 3.3.3 Autres stimulants Amphétamine, méthamphétamine, MDMA (ecstasy), MDA, MDEA, méthylphénidate. 3.3.4 Benzodiazépines Alprazolam, bromazépam, clonazépam, diazépam, flunitrazépam, flurazépam, lorazépam, midazolam, nitrazépam, nordazépam, oxazépam, prazépam, témazépam, triazolam. 3.3.5 Substances apparentées aux benzodiazépines (Z-drugs) 1 La monoacétylmorphine (MAM) est un métabolite de l héroïne (diacétylmorphine) 2 L acétylcodéine est une impureté de l héroïne de rue, résultant de l acétylation des extraits d opium.
cheveux Page 6 sur 11 Zaleplon, zolpidem, zopiclone. 3.3.6 Cannabinoïdes Tétrahydrocannabinol (THC), cannabidiol (CBD), cannabinol (CBN), acide carboxylique du THC (THC-COOH). 3.3.7 Listes de substances propres aux laboratoires Chaque laboratoire peut proposer une liste d analytes supplémentaires. 4 PROCEDURE PRATIQUE 4.1 Prélèvement d échantillon Les particularités du prélèvement de cheveux pour des analyses toxicologiques et médicolégales, sont déterminées dans le document «Analyses médico-légales et toxicologiques des cheveux» rédigé par le groupe de travail «Analyse de cheveux» de la. 4.2 Phase préanalytique 4.2.1 Lavage Pour effectuer le lavage des cheveux, il est conseillé de rincer le segment de cheveu dans de l eau puis de le mélanger avec un détergent organique en le secouant ou l agitant fortement pendant quelques minutes. 4.2.2 Segmentation En règle générale, on est censé analyser des segments proximaux de cheveux, de 6 cm de longueur au maximum 2,3). Toutefois, il est recommandé d analyser des segments proximaux de cheveux de 3 à 5 cm de longueur. Si un changement significatif de la quantité de substance consommée est invoqué pendant la période couverte par l analyse qui est fixée en fonction de la longueur du cheveu, il est recommandé de faire une segmentation conforme aux indications de la personne participant à l examen en tenant compte de la vitesse moyenne de croissance des cheveux. 4.3 Méthodes 4.3.1 Poids net La quantité des échantillons pesée doit se situer entre 10 et 50 mg. 4.3.2 Homogénéisation Les échantillons de cheveux doivent être homogénéisés avant l extraction, par ex. en les pulvérisant ou en les coupant en petits morceaux (env. 1 à 3 mm) et en les mélangeant.
cheveux Page 7 sur 11 4.3.3 Extraction et détection Dans la littérature scientifique, on trouve différents processus d extraction pour les drogues et des médicaments des cheveux homogénéisés. Il est recommandé de secouer ou d agiter en permanence l échantillon, et de le soumettre à une incubation de plusieurs heures à température élevée (par ex. 50 C) ou à un traitement aux ultrasons d au moins une heure. L efficacité des différents procédés d extraction doit être contrôlée. L extraction doit se dérouler le plus simplement possible sans artéfact (hydrolyse, oxydation, etc.). Différentes méthodes de spectrométrie de masse (MS CPG, MS/MS CPG, MS/MS LC) sont appropriées pour mettre en évidence les drogues et les médicaments dans des extraits capillaires. Selon la méthode d analyse, une dérivation ou une purification à l aide d une SPE peut ensuite s avérer nécessaire. Des méthodes basées sur le dépistage immunochimique à haute sensibilité peut être envisagé pour certaines substances ou groupe de substances pour l'analyse des extraits de cheveux. Toutefois, il est obligatoire d effectuer une analyse de confirmation quand le dépistage immunochimique est positif. L identification des substances doit satisfaire aux critères internationaux. 5 EXIGENCES ANALYTIQUES 5.1 Validation Tous les processus analytiques mis en œuvre doivent être validés conformément aux directives en vigueur. 5.2 Etalonnage Nous recommandons d effectuer l étalonnage à partir d échantillons de cheveux fortifiés en utilisant des étalons internes deutérés (étalons marqués par des isotopes stables). 5.3 Contrôle de qualité 5.3.1 Contrôle de qualité interne Des contrôles de qualité internes effectués régulièrement et la documentation des résultats constituent la base permettant de montrer la fiabilité des résultats d analyse. Il est recommandé d effectuer au moins un contrôle négatif et un contrôle positif lors d une série de mesures. Les valeurs mesurées du contrôle positif doivent être consignées. Il faut utiliser des échantillons de cheveux réels pour effectuer le contrôle positif.
cheveux Page 8 sur 11 5.3.2 Comparaisons interlaboratoires Les laboratoires des instituts suisses de médecine légale ont l obligation de participer une fois par an à un CIL organisé par la. Chaque année, un autre laboratoire est chargé de l organisation du CIL. 5.3.3 Contrôles de qualité internationaux Les laboratoires doivent participer à au moins un contrôle de qualité (test multicentrique) par an à l échelle internationale. Des tests multicentriques adaptés sont actuellement proposés par la SoHT et la GTFCh. Cependant toutes les substances mentionnées sous chiffre 3.3 ne sont pas proposées lors de tels contrôles. 5.4 Incertitude de mesure Les valeurs mesurées lors des examens analytiques possèdent une incertitude de mesure. L incertitude de mesure spécifique à la méthode utilisée est déterminée dans le cadre de la validation. 6 INTERPRETATION 6.1 Précisions sur la limite de détection et les seuils de décision La limite de détection (LOD en angl.) dépend de la méthode analytique et peut varier d un laboratoire à l autre. En outre, une adaptation supplémentaire de la limite de détection est envisageable à cause de l optimisation permanente des techniques analytiques. Par contre, les seuils de décision supérieurs et inférieurs (cut-off en angl.) représentent des seuils qui peuvent être définis aussi bien à partir de considérations analytiques que de considérations liées à l interprétation des résultats. Dans le futur, les seuils de décision peuvent être adaptés selon le résultat d études ou l optimisation de méthodes (amélioration de la sensitivité). 6.2 Concentrations dans les cheveux et seuils de décisions Pour l'interprétation des résultats, il faut utiliser des seuils de décisions (cut-offs). Le groupe de travail de la conseille d utiliser en premier lieu les seuils de décisions de la SoHT 3 4, puis, en second lieu, ceux d autres organisations (par ex. la GTFCh). Des seuils de décisions sont déterminés pour le tramadol et le desméthyltramadol par les auteurs de ce document en se basant sur leur propre expérience. Si aucun seuil de décision n est défini par une société scientifique, alors le groupe de travail recommande l utilisation des LOD spécifiques aux méthodes, pour lesquels, la condition minimale (LOD recommandé) est déterminée dans ce document (voir tableau annexe). Pour mettre en évidence une administration unique d'une substance (par ex. ajout d un produit 3 http://soht.org/index.php/statements/9-nicht-kategorisiert/85-statement-2011 4 Gail A.A. Cooper, Robert Kronstrand, Pascal Kintz, Society of Hair Testing guidelines for drug testing in hair, For Sci Int, 218 (1 3) 20-24 (2012).
cheveux Page 9 sur 11 hypnotique dans un cas de soumission chimique impliquant un viol ou Drug Facilitated Sexual Assault DFSA ), l expertise devra se baser sur les seuils analytiques (LOD, LOQ) et non pas sur les seuils de décisions, à cause de la sensibilité extrême nécessaire pour ces cas. L'analyse des cheveux dans des cas post-mortem nécessitent une interprétation individuelle (rem.: attention aux contaminations). Les résultats des analyses sont exprimés en pg/mg. 6.3 Contamination externe Pour interpréter les résultats, il est nécessaire de prendre en considération les risques de contamination externe. Les critères correspondants aux différentes catégories de substances doivent être déterminés par le laboratoire. L'analyse quantitative de métabolites appropriés doit être prise en compte. Les cannabinoïdes (THC, CBD, CBN) peuvent être détectés dans les cheveux quand ils ont été consommés activement à plusieurs reprises. Selon les connaissance scientifiques actuelles, ils sont aussi incorporés dans les cheveux par le biais de la fumée passive. Cela signifie que l'absence de THC dans les cheveux parle en faveur d'une abstinence de consommation de cannabis, alors qu'en cas de présence de THC dans les cheveux, une contamination de THC par le biais de la fumée, d une autre source (par ex. contact avec le matériau végétal lors de la culture ou du commerce) ou d une consommation passive ne peut être exclue. Le métabolite inactif principal du THC, le THCCOOH est détectable en de très petites concentrations dans les cheveux. Ainsi, dans de nombreux cas de consommation active il peut ne pas être détecté chez tous les consommateurs (seuil de décision pour le THC-COOH : 0,2 pg/mg). Pour les contrôles d abstinence de consommation de cannabis dans le cadre d une expertise d aptitude à conduire (médecine du trafic), il est nécessaire de suivre les indications mentionnées dans le document intitulé Aide-mémoire: contrôle de l abstinence au cannabis (http://www.sgrm.ch/uploads/media/12haagh02 Merkblatt_THC-UP_SGRM_25.1.2014_f_DEF.pdf). 6.4 Facteurs supplémentaires pour l'interprétation 6.4.1 Cosmétiques pour cheveux En principe, on peut remarquer que la concentration de drogues et de médicaments dans les cheveux n est pas stable face à certaines influences environnementales, et qu elle peut être diminuée en particulier à cause de soins cosmétiques et/ou d un lavage intensif des cheveux. 6.4.2 Phénomène de persistance Le phénomène de persistance a été plusieurs fois décrit lors de l interruption de la consommation d une substance. Il décrit la possibilité de mettre en évidence dans les cheveux la présence d une substance malgré l arrêt de la consommation de celle-ci. La raison de la persistance de la présence d'une substance dans les cheveux pendant quelques semaines après l arrêt de la consommation se trouve dans le cycle de croissance des cheveux. Lorsqu une mèche de cheveux est prélevée, il y a toujours une certaine proportion de cheveux en phase télogène (arrêt
cheveux Page 10 sur 11 de croissance). Selon notre expérience le phénomène de persistance peut se produire suite à un arrêt brusque de la consommation abusive ou modérée de la substance ayant perduré longtemps. Dans une telle situation, on peut observer une diminution significative de la concentration de la substance dans le segment proximal, de l ordre d au minimum un facteur 3 (la plupart du temps entre 2 et 5, dépendant de la longueur du segment) par rapport au segment distal. Si la substance ne peut pas être mise en évidence dans un segment de cheveux proximal de 5 cm de longueur, alors on peut conclure à une abstinence de consommation de la substance durant les 6 derniers mois, en raison du phénomène de persistance. 6.4.3 Poils En principe, il vaut mieux privilégier les cheveux pour effectuer des analyses. S il n y a pas de cheveux à disposition, il est recommandé d utiliser des poils des bras, des jambes, de la barbe, du torse, ou du pubis. Selon notre expérience, les poils des aisselles ne sont pas appropriés. Il est difficile de déterminer la longueur du matériel à étudier, quand il s agit de poils. On peut partir des poils les plus longs pour une première approximation. Pour l interprétation des résultats des poils, on peut utiliser les mêmes seuils de décision que ceux définis pour les cheveux. Pour pouvoir estimer la période correspondante, il faut prendre en considération un pourcentage nettement plus important de poils en phase télogène et une cinétique de croissance différente. Note : ce document est une traduction du texte original publié en allemand qui fait foi
cheveux Page 11 sur 11 ANNEXE Tableau des seuils de décisions (cut-off) et des limites de détection recommendées Groupe de substance Substance Cut-off LOD recommandée (pg/mg) Source (pg/mg) Opiacés/Opioïdes Morphine 200 SoHT Monoacétylmorphine 200 SoHT Codéiné 200 SoHT Acétylcodéine 20 Dihydrocodéine 200 SoHT Oxycodone 20 Oxymorphone 20 Hydromorphone 20 Tramadol 200 Desméthyltramadol 100 Méthadone 200 SoHT EDDP 50 SoHT Buprénorphine 10 SoHT Norbuprénorphine 10 SoHT Cocaïne Cocaïne 500 SoHT Benzoylecgonine 50 SoHT Norcocaïne 50 SoHT Ethylcocaïne 50 SoHT Stimulants Amphétamine 200 SoHT Méthamphétamine 200 SoHT MDMA 200 SoHT MDA 200 SoHT MDEA 200 SoHT Méthylphénidate 20 Benzodiazépines Alprazolam 50 SoHT Bromazépam 50 SoHT Clonazépam 20 7-Aminoclonazépam 20 Diazépam 50 SoHT Flurazépam 20 N-Desalkylflurazépam 20 Flunitrazépam 50 SoHT 7-Aminoflunitrazépam 50 GTFCh Lorazépam 50 SoHT Midazolam 20 Nitrazépam 20 Nordazépam 50 SoHT Oxazépam 50 SoHT Témazépam 20 Triazolam 20 Z-drugs Zolpidem 20 Zopiclone 20 Cannabinoïdes THC 50 SoHT THC-COOH 0.2 SoHT