SOLABIA SAS 29 RUE DELIZY PANTIN. NF VALIDATION Validation des méthodes alternatives d analyse Application à la microbiologie alimentaire

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1 ACCREDITATION N PORTEE DISPONIBLE SUR SOLABIA SAS 29 RUE DELIZY PANTIN NF VALIDATION Validation des méthodes alternatives d analyse Application à la microbiologie alimentaire Rapport de synthèse Validation EN ISO de la méthode COMPASS Agar pour la détection de spp. et de monocytogenes dans les produits d alimentation humaine et les échantillons de l environnement Méthode qualitative Ce rapport comprend 117 pages dont 12 annexes. La reproduction de ce rapport n est autorisée que sous sa forme intégrale. L accréditation du COFRAC atteste de la compétence du laboratoire pour les seuls essais couverts par l accréditation qui sont identifiés par le symbole. 30 janvier 2015 ADRIA DEVELOPPEMENT Creac h Gwen - F QUIMPER Cedex - Tél. (33) Fax (33) [email protected] - Site web : ASSOCIATION LOI DE N SIRET N EXISTENCE N TVA FR

2 Sommaire Rappel sur la méthode alternative Historique de la validation Protocole et principe de la méthode alternative Méthode de référence à laquelle la méthode alternative a été comparée Domaine d application demandé... 7 Principaux résultats obtenus lors de la validation initiale et des études de reconduction et d'extension Etude comparative des méthodes Etude de validation initiale (2002) Etude de spécificité (24 et 48 h) Limite de détection intrinsèque (24 h et 48 h) Limite de détection en matrices (24 h et 48 h) Etude de justesse Etude de reconduction (2007) Exactitude relative, spécificité relative et sensibilité relative Niveau de détection relatif Inclusivité / exclusivité Praticabilité Conclusion Etude d extension (2007) Protocole Résultats Conclusion Etude d extension (2011) Exactitude relative, spécificité relative et sensibilité relative Niveau de détection relatif Inclusivité - Exclusivité Conclusion Etude d extension (2013) Inclusivité et exclusivité Conclusion Etudes inter-laboratoires Etude de validation initiale (2002) Etude de reconduction (2007) Organisation de l étude Contrôle des paramètres expérimentaux Résultats des analyses Calculs Interprétation Conclusion...46 ADRIA Développement 2/ janvier 2015

3 Annexe 1 - Méthode COMPASS Agar 47 Annexe 2 - Méthode de référence NF EN ISO /A1 (février 2005) 49 Etude de reconduction (2007) Annexe 3 Souches utilisées et stress appliqués 50 Annexe 4 Résultats bruts de l exactitude relative 52 Annexe 5 Résultats bruts de l inclusivité et de l exclusivité 62 Etude d extension (2007) Annexe 6 Résultats bruts de l inclusivité et de l exclusivité 64 Etude d extension (2011) Annexe 7 Souches utilisées et stress appliqués 77 Annexe 8 Résultats de l exactitude relative 79 Annexe 9 - Résultats bruts de l inclusivité et l exclusivité 90 Etude d extension (2013) Annexe 10 - Résultats bruts de l inclusivité et l exclusivité 101 Etude de reconduction (2007) Annexe 11 - Degré d accord 115 Annexe 12 - Calcul de la concordance 117 ADRIA Développement 3/ janvier 2015

4 Avant Propos L ensemble des renseignements permettant de valider la garantie des analyses est tenu à la disposition de la Société SOLABIA. Les résultats sont synthétisés au sein de tableaux et interprétés selon la norme NF EN ISO Fabricant : SOLABIA Division Biokar Diagnostics Rue des Quarante Mines - BP BEAUVAIS Cedex Laboratoire expert : ADRIA Développement ZA Creac h Gwen QUIMPER Cedex Méthode à valider : COMPASS Agar avec incubation en 24 heures (recherche) Référentiel de validation : EN ISO (octobre 2003) : microbiologie des aliments - Protocole pour la validation des méthodes alternatives Méthode de référence : EN ISO /A1 (février 2005): Méthode horizontale pour la recherche et le dénombrement de monocytogenes - Partie 1 : méthode de recherche - Amendement 1 : modification des milieux d'isolement, de la recherche de l'hémolyse et introduction de données de fidélité Etendue de la validation : Tous produits d alimentation humaine et échantillons de l environnement Organisme certificateur : AFNOR Certification Essai effectué sous le couvert de l accréditation ADRIA Développement 4/ janvier 2015

5 Rappel sur la méthode alternative 1 HISTORIQUE DE LA VALIDATION La méthode COMPASS Agar a été validée en 2002 pour la recherche des monocytogenes dans les produits d alimentation humaine et les échantillons de l environnement, avec deux références d attestation : BKR 23/1 09/02 pour la recherche en 48 h et BKR 23/2 11/02 pour la recherche en 24 h. En 2007, la méthode a fait l objet d une étude de reconduction et d extension pour une nouvelle option de confirmation : COMPASS L. mono Agar. La formulation de la gélose COMPASS Agar étant différente de celle de la gélose COMPASS L. mono Agar, une étude complète de validation a été réalisée selon le référentiel EN ISO Les deux attestations de validation précédemment citées ont alors été regroupées en une seule : BKR 23/02 11/02. La méthode a été reconduite en septembre 2010 sans essai complémentaire. En 2011, une étude d extension a été réalisée afin d étendre la détection de spp. ; l étude comparative des méthodes a été entièrement refaite. En 2013, une étude d extension a été effectuée afin d introduire une nouvelle option de confirmation, le bouillon CONFIRM L. mono basé sur la fermentation du rhamnose pour la recherche de monocytogenes par la méthode COMPASS Agar. La méthode COMPASS Agar a été reconduite en ADRIA Développement 5/ janvier 2015

6 2 PROTOCOLE ET PRINCIPE DE LA METHODE ALTERNATIVE SOLABIA COMPASS Agar est un milieu de culture gélosé. La méthode permet la détection de monocytogenes et des autres espèces appartenant au genre spp, après une seule étape d enrichissement sélectif, repiquage et incubation 24 heures des boîtes à 37 C (il est possible de prolonger l'incubation jusqu'à 48 heures). Les colonies caractéristiques de monocytogenes et certaines souches de ivanovii apparaissent bleu à bleu-vert, entourées d un halo opaque. Les autres espèces de forment des colonies bleues à bleu vert, sans halo. La confirmation est ensuite effectuée à partir des colonies caractéristiques isolées sur COMPASS Agar. La confirmation des échantillons positifs se fait de l une des manières suivantes : - monocytogenes : par les tests classiques décrits dans les méthodes normalisées par le CEN ou l ISO (en incluant l étape de purification) en repartant des colonies caractéristiques isolées sur COMPASS Agar, par la gélose CONFIRM' L.mono Agar, par le bouillon CONFIRM L. mono, en mettant en œuvre une autre méthode certifiée NF VALIDATION, de principe différent de celui de la méthode COMPASS Agar. Le protocole validé de la méthode utilisée devra être respecté dans son ensemble, c'est à dire que toutes les étapes antérieures à l'étape intermédiaire de laquelle on repart pour la confirmation doivent être communes aux deux méthodes. Les deux méthodes doivent donc avoir un tronc commun. - spp : par les tests classiques décrits dans les méthodes normalisées par le CEN ou l ISO, en incluant l étape de purification (par exemple, tests Gram et Catalase), en repartant des colonies caractéristiques isolées sur COMPASS Agar, ADRIA Développement 6/ janvier 2015

7 par piqûre sur PALCAM ou par micro-galerie d identification biochimique, à partir d une colonie isolée, en mettant en œuvre une autre méthode certifiée NF VALIDATION, de principe différent de celui de la méthode COMPASS Agar. Le protocole validé de la méthode utilisée devra être respecté dans son ensemble, c'est à dire que toutes les étapes antérieures à l'étape intermédiaire de laquelle on repart pour la confirmation doivent être communes aux deux méthodes. Les deux méthodes doivent donc avoir un tronc commun. Le protocole est donné en Annexe 1. 3 METHODE DE REFERENCE A LAQUELLE LA METHODE ALTERNATIVE A ETE COMPAREE La méthode de référence est la norme NF EN ISO /A1 (février 2005) : méthode horizontale pour la recherche et le dénombrement de monocytogenes - Partie 1 : méthode de recherche. Le protocole est schématisé en Annexe 2. 4 DOMAINE D APPLICATION DEMANDE Tous produits d alimentation humaine Echantillons de l environnement Essai effectué sous le couvert de l accréditation ADRIA Développement 7/ janvier 2015

8 Principaux résultats obtenus lors de la validation initiale et des études de reconduction et d'extension 1 ETUDE COMPARATIVE DES METHODES 1.1 Etude de validation initiale (2002) Etude de spécificité (24 et 48 h) Au cours de la première validation AFNOR selon le référentiel AFNOR, 50 souches cibles et 30 souches non cibles avaient été testées. Toutes les souches de monocytogenes s étaient développées en 24 h et avaient montré des colonies caractéristiques. Toutes les souches négatives avaient donné : - soit une réaction non caractéristique (colonies bleues sans halo) après 24 h d incubation, - soit une réaction faiblement caractéristique pour L. ivanovii (colonies bleues avec halo) en 48 h - soit une absence de croissance Limite de détection intrinsèque (24 h et 48 h) Elle est de 100 bactéries/ml. ADRIA Développement 8/ janvier 2015

9 1.1.3 Limite de détection en matrices (24 h et 48 h) La limite de détection de la méthode se situe entre 1 et 10 bactéries/25 g. La limite de détection est équivalente à celle de la méthode de référence Etude de justesse - Méthode 24 h : l étude portait sur 481 échantillons dont 67 % étaient naturellement contaminés avec 173 produits positifs. Les résultats étaient les suivants : Tableau récapitulatif toutes catégories confondues Méthode NF EN ISO Méthode + - Total COMPASS L. mono Agar Total Méthode 48 h : l étude portait également sur 481 échantillons dont 67 % étaient naturellement contaminés. Les résultats étaient les suivants : Méthode NF EN ISO Méthode + - Total COMPASS L. mono Agar Total ADRIA Développement 9/ janvier 2015

10 1.2 Etude de reconduction (2007) Exactitude relative, spécificité relative et sensibilité relative L exactitude est l étroitesse de l accord entre le résultat d essai et la valeur de référence acceptée. La spécificité relative est définie comme le degré auquel la méthode est affectée (ou non) par les autres composants dans un échantillon en contenant plusieurs. C est la capacité de la méthode à mesurer avec exactitude un analyte donné, ou sa quantité, dans l échantillon sans qu il y ait d interférence avec les composants non ciblés, tels un effet de la matrice ou un bruit de fond. La sensibilité relative est définie comme la capacité de la méthode alternative à détecter deux quantités différentes d analyte qui ont été mesurées avec la méthode de référence en utilisant une matrice donnée sur toute l étendue de mesure. C est la variation de quantité minimale (accroissement de la concentration d analyte x) qui donne une variation significative du signal mesuré (réponse y). Nombre et nature des échantillons 334 échantillons ont été analysés au total. La répartition par catégorie est donnée dans le tableau ci-après : Catégories Types Positifs Négatifs Total (nombre) (nombre) (nombre) Produits carnés Volaille, porc, bœuf Produits laitiers Laits crus, fromages au lait cru, poudres de lait Produits de la mer Poissons fumés, poissons crus et fruits de mer, poissons cuisinés Végétaux et divers Végétaux cuisinés et assaisonnés, végétaux crus surgelés, divers Echantillons de l environnement Environnement salaison, pâtisserie, poissons et divers TOTAL ADRIA Développement 10/ janvier 2015

11 Contamination artificielle des échantillons Des contaminations artificielles ont été réalisées par des inoculations ou des contaminations croisées. Les souches utilisées, ainsi que les stress appliqués sont donnés en annexe échantillons ont été contaminés artificiellement dont 74 ont donné un résultat positif par l une ou l autre des méthodes. Les échantillons naturellement contaminés représentent donc 54,6 % des échantillons positifs. Protocoles de confirmation Les confirmations ont été réalisées par repiquage d une à cinq colonies suspectes à partir de gélose COMPASS Agar. Les protocoles décrits dans la méthode de référence ont été appliqués (Gram, catalase, hémolyse, CAMP Test et Galerie API ). Résultats des essais A+ = positifs confirmés A- = négatifs immédiats et négatifs après confirmation quand présomptifs positifs Tableau 1 - Couples de résultats des méthodes de référence et alternative Réponses Méthode alternative positive (A+) Méthode alternative négative (A-) Méthode de référence positive (R+) Accord positif (A+/R+) PA = 151 Déviation négative (A-/R+) ND = 7 Méthode de référence négative (R-) Déviation positive (R-/A+) PD = 2 Accord négatif (A-/R-) NA = 174 (PPNA = 3) Tableau 2 - Produits carnés Réponses Méthode de référence positive (R+) Méthode de référence négative (R-) Méthode alternative positive (A+) Méthode alternative négative (A-) Accord positif (A+/R+) PA = 29 Déviation négative (A-/R+) ND = 0 Déviation positive (R-/A+) PD = 0 Accord négatif (A-/R-) NA = 37 (PPNA = 1) ADRIA Développement 11/ janvier 2015

12 Tableau 3 - Produits laitiers Réponses Méthode de référence positive (R+) Méthode de référence négative (R-) Méthode alternative positive (A+) Méthode alternative négative (A-) Accord positif (A+/R+) PA = 30 Déviation négative (A-/R+) ND = 5 Déviation positive (R-/A+) PD = 1 Accord négatif (A-/R-) NA =31 (PPNA = 1) Tableau 4 - Produits de la mer Réponses Méthode de référence positive (R+) Méthode de référence négative (R-) Méthode alternative positive (A+) Méthode alternative négative (A-) Accord positif (A+/R+) PA = 34 Déviation négative (A-/R+) ND = 0 Déviation positive (R-/A+) PD = 0 Accord négatif (A-/R-) NA = 40 Tableau 5 - Végétaux et divers Réponses Méthode de référence positive (R+) Méthode de référence négative (R-) Méthode alternative positive (A+) Méthode alternative négative (A-) Accord positif (A+/R+) PA = 27 Déviation négative (A-/R+) ND = 2 Déviation positive (R-/A+) PD = 1 Accord négatif (A-/R-) NA = 33 (PPNA = 1) Tableau 6 - Echantillons de l environnement Réponses Méthode alternative positive (A+) Méthode alternative négative (A-) Méthode de référence positive (R+) Accord positif (A+/R+) PA =31 Déviation négative (A-/R+) ND = 0 Méthode de référence négative (R-) Déviation positive (R-/A+) PD = 0 Accord négatif (A-/R-) NA = 33 ADRIA Développement 12/ janvier 2015

13 Tableau 7 - Calcul de l exactitude relative (AC), de la sensibilité relative (SE) et de la spécificité relative (SP) PA = Accord positif (R+/A+) PD = déviation positive (R-/A+) NA = Accord négatif (R-/A-) ND = déviation négative (A-/R+) Exactitude Matrices PA NA ND PD N relative AC (%) [100x(PA+NA])/N] N+ PA + ND Sensibilité relative SE (%) [100xPA]/N+] N- NA + PD Spécificité relative SP (%) [100xNA]/N-] Produits carnés , , ,0 Produits laitiers , , ,9 Produits de la pêche , , ,0 Végétaux et divers , , ,1 Environnement , , ,0 TOTAL , , ,9 Les résultats bruts de l exactitude relative sont donnés en Annexe 4. Calcul de l exactitude relative (AC), de la sensibilité relative (SE) et de la spécificité relative (SP) Les valeurs en pourcentage calculées pour la méthode alternative sont les suivantes : Exactitude relative AC = 97,3 Spécificité relative SP = 98,9 Sensibilité relative SE = 95,6 La sensibilité des deux méthodes (recalculée en tenant compte des positifs supplémentaires confirmés de la méthode alternative) est la suivante : Méthode alternative Sensibilité ( PA PD) 95, 6 ( PA PD ND Méthode de référence ( PA ND) 98,8 ( PA PD ND Analyse des discordants Les 9 échantillons discordants sont répartis comme suit : ADRIA Développement 13/ janvier 2015

14 Produits laitiers (5) Echantillon 2710 (Fromage à raclette) Echantillon 178 (Poudre de lait écrémé) Echantillon 321 (Fromage non affiné au lait cru) Echantillon 334 (Brie de Meaux) Echantillon 368 (Fromage à pâte molle au lait cru) Produits végétaux et divers (2) Echantillon 73 (Carottes en rondelles) Echantillon 186 (Carottes en rondelles) 7 DEVIATIONS NEGATIVES Contamination (taux d inoculation/sac) Naturelle Artificielle (5) Naturelle Naturelle Naturelle Naturelle Artificielle (2) Commentaires La présence de monocytogenes n a été mise en évidence qu à partir des isolements issus du Fraser 1. La présence de monocytogenes a été mise en évidence dès les isolements issus du Fraser 1/2 par la méthode de référence. La présence de monocytogenes n a été mise en évidence qu à partir des isolements issus du Fraser 1 Produits laitiers (1) Echantillon 2603 (Fromage au lait cru) Produits végétaux et divers (1) Echantillon 2618 (Farine de blé noir) 2 DEVIATIONS POSITIVES Contamination Naturellement contaminé Naturellement contaminé Commentaires La présence de monocytogenes a été mise en évidence uniquement par la méthode alternative. Seuls des isolats spp autres que monocytogenes ont été mis en évidence par la méthode de référence. La présence de monocytogenes a été mise en évidence uniquement par la méthode alternative. Seuls des isolats spp autres que monocytogenes ont été mis en évidence par la méthode de référence. Le nombre de discordants entre la méthode de référence et la méthode alternative est de : Y = ND + PD = = 9 9 Y 11, m = 2 M = 1 m M : les deux méthodes ne sont pas différentes à = 0,05. L exactitude de la méthode COMPASS Agar est équivalente à celle de la méthode de référence. ADRIA Développement 14/ janvier 2015

15 1.2.2 Niveau de détection relatif Le niveau de détection relatif correspond au nombre le plus petit de microorganismes cultivables qu il est possible de détecter dans l échantillon, avec une probabilité de 50 %, à l aide des méthodes alternative et de référence. Matrices utilisées Cette étude a pour objectif de déterminer les quantités minimales de monocytogenes détectables dans la matrice alimentaire et de les comparer à celles obtenues par la méthode de référence. Les limites de détection seront définies par l analyse de cinq couples (matrice / souche) à quatre niveaux. Six réplicats de chaque condition seront réalisés. Les matrices testées sont les suivantes : - rillettes, inoculées par monocytogenes 1/2 V2/124 - saumon fumé, inoculé par monocytogenes 1/2a BR32, - végétaux crus, inoculés par monocytogenes 1/ /1410, - lait cru, inoculé par monocytogenes 4b 153, - eau de process, inoculée par monocytogenes 877/113 isolée d environnement. Protocole de contamination Six sachets de 25 g ont été préparés par matrice et par taux. Les sachets ont été inoculés individuellement par une suspension bactérienne. Les analyses ont été effectuées à la fois par la méthode de référence et la méthode alternative. Les matrices utilisées ont été analysées avant inoculation par la méthode EN ISO /A1 (2004), afin de s assurer de l absence d une contamination par monocytogenes des échantillons. Un dénombrement de la flore totale a également été réalisé sur chaque matrice. ADRIA Développement 15/ janvier 2015

16 Résultats Tableau 8 - Valeurs des niveaux de détection relatifs Couples (souche / matrice) Niveau de détection relatif (UFC / 25 g ou 25 ml) selon le test de Spearman-Kärber Méthode de référence Méthode alternative Rillettes / monocytogenes 1/2 V2/124 0,4 [0,1 ; 1,3] 0,4 [0,1 ; 1,3] Lait cru / monocytogenes 4b 153 0,6 [0,4 ; 0,9] 0,6 [0,4 ; 1,0] Saumon fumé / monocytogenes 1/2a BR32 0,4 [0,2 ; 1,1] 0,4 [0,2 ; 1,1] Haricot vert / monocytogenes 1/2 1011/1410 0,1 [0,1 ; 0,4] 0,1 [0,1 ; 0,4] Eau de process / monocytogenes 877/113 0,7 [0,5 ; 0,9] 0,7 [0,5 ; 0,9] Le niveau de détection relatif est compris entre 0,1 et 1,3 pour la méthode de référence et la méthode alternative. Les niveaux de détection de la méthode alternative sont similaires à ceux de la méthode de référence Inclusivité / exclusivité L inclusivité est la capacité de la méthode alternative à détecter l analyte cible à partir d un large éventail de souches. L exclusivité est l absence d interférences par un éventail approprié de souches non cibles de la méthode alternative. L objectif de l étude de spécificité est de vérifier que toutes les souches monocytogenes sont détectées par la méthode COMPASS Agar et qu il n y a pas de réaction croisée avec des souches autres que monocytogenes. Protocoles d essai - Protocole pour l inclusivité : Cinquante souches de monocytogenes ont été décongelées et mises en culture en bouillon cœur-cervelle à 37 C. Les souches ont été inoculées à un taux compris entre 10 et 100 cellules pour 225 ml en bouillon Fraser 1/2. Le protocole complet de la méthode COMPASS Agar a ensuite été appliqué. ADRIA Développement 16/ janvier 2015

17 - Protocole pour l exclusivité : Trente souches négatives ont été décongelées et mises en culture en bouillon cœur-cervelle à 37 C. Les souches ont ensuite été inoculées à un taux de 10 5 /225 ml en bouillon nutritif. Le protocole complet de la méthode alternative a ensuite été appliqué. Résultats Les résultats sont présentés en Annexe 5. - Inclusivité : Toutes les souches de monocytogenes testées ont donné des colonies caractéristiques bleues avec une auréole d opacification. - Exclusivité : Sur les trente souches testées, seules les souches L. ivanovii donnent des colonies bleues avec auréole d opacification après 24 h d incubation. On peut noter cependant que les auréoles sont plus petites que celles obtenues avec monocytogenes. La méthode COMPASS Agar est spécifique et sélective Praticabilité La praticabilité a été évaluée d après les treize critères définis dans les exigences relatives aux études de validation : 1. Mode de conditionnement des éléments de la méthode : Les boîtes sont conditionnées en coffret de 20 boîtes, conditionnées en deux sous-unités de 10 boîtes en film plastique. 2. Volume des réactifs : 19 ml par boîte de 90 mm de diamètre 3. Condition de stockage : La température de stockage est mentionnée sur le coffret ; elle est de 2 8 C. ADRIA Développement 17/ janvier 2015

18 4. Modalités d utilisation après première utilisation : Sans objet 5. Equipements ou locaux spécifiques nécessaires : La méthode ne nécessite pas de locaux spécifiques ; elle peut être mise en œuvre dans des locaux et équipements habituellement utilisés dans un laboratoire de microbiologie manipulant des germes pathogènes. 6. Réactifs prêts à l emploi ou à reconstituer : Sans objet 7. Durée de formation de l opérateur non initié à la méthode : Pour un technicien formé aux techniques de microbiologie, moins d une demi-journée est nécessaire pour se former à la méthode. 8. Temps de réel de manipulation et flexibilité de la technique ADRIA Développement 18/ janvier 2015 NF EN ISO Temps en minutes COMPASS Agar Nombre d échantillons Prélèvement et ajout du Fraser 1/ , ,5 Broyage 1,5 7,5 22,5 1,5 7,5 22,5 Repiquage en Fraser 1 0,83 4,38 11,85 Isolement O1/P1 1,65 8,75 24 Isolement COMPASS 0,83 4,38 11,85 Isolement O2/P2 1,65 8,75 24 Lecture O1/P1 1 4,4 15 Lecture COMPASS 1 4,4 10 Lecture O2/P2 1 4,4 15 Total pour des échantillons négatifs (sans colonies suspectes) 11,6 58,2 164,9 7,3 36,3 96,9 Total / échantillon négatif 11,6 11,6 11,0 7,3 7,3 6,5 Isolement sur gélose TSYEA 2 à Tests de confirmation (Hémolyse, CAMP, Gram, Catalase, sucres) Total pour des échantillons positifs ou présentant des colonies suspectes Total / échantillon positif ou présentant des colonies suspectes O1 / P1 = Ottaviani Agosti / Pacalm 8 à 15 31, ,6 122, ,3 59,3 134,9 22,6 à 32,6 24,6 22,9 14,3 11,9 9,0

19 Conclusion : Pour des échantillons négatifs, le temps nécessaire à l analyse par la méthode de référence est plus important que celui nécessaire pour la méthode COMPASS Agar pour des grandes séries. Dans le cas d échantillons positifs ou présentant des colonies suspectes, cette différence est augmentée. 9. Délai d obtention des résultats - Dans le cas où aucune colonie suspecte n est visible sur les milieux, les délais d obtention des résultats sont les suivants : Etape Méthode de référence NF EN ISO Méthode COMPASS Agar Enrichissement primaire Fraser 1/2 J0 J0 1er isolement sur gélose sélective J1 J1 Enrichissement secondaire Fraser 1 J1 2e isolement sur gélose sélective J3 Lecture 1er isolement J2 J3 J2 Lecture 2e isolement J4 J5 - Dans le cas où des colonies suspectes sont présentes sur les géloses sélectives, les délais d obtention des résultats sont donnés ci-après : Etape Méthode de référence NF EN ISO Méthode COMPASS Agar Enrichissement primaire Fraser 1/2 J0 J0 1er isolement sur gélose sélective J1 J1 Enrichissement secondaire Fraser 1 J1 2e isolement sur gélose sélective OAA / Palcam J3 Lecture 1er isolement J2 J3 J2 Repiquage colonies suspectes du 1er isolement sur TSYEA J2 J3 J2 Lecture 2e isolement J4 J5 Repiquage colonies suspectes du 2e isolement sur TSYEA J4 J5 Tests de confirmation (réalisation) J3 J6 J3 Tests de confirmation (lectures) J4 - J7 J4 (J8 J11 (1) ) (J8 (1) ) (1) : Dans le cas où les tests des sucres, selon le protocole de référence, sont réalisés en tubes. ADRIA Développement 19/ janvier 2015

20 Pour un résultat négatif (sans colonies suspectes), 5 jours sont nécessaires pour la méthode de référence contre 2 jours pour la méthode COMPASS Agar. Pour un échantillon positif ou présentant des colonies suspectes, un résultat présomptif à J2 et positif à J3 est obtenu pour la méthode COMPASS Agar. 10. Type de qualification de l opérateur : Elle est identique à celle nécessaire à la mise en œuvre de la méthode de référence NF EN ISO Etapes communes avec la méthode de référence : L étape d enrichissement primaire en Fraser 1/2 est commune avec la méthode de référence. 12. Traçabilité des résultats d analyses : La traçabilité des analyses et des résultats est celle habituellement appliquée en laboratoire, à savoir : la traçabilité des milieux utilisés, les visas des opérateurs, les dates d analyses et l enregistrement des résultats. Elle est la même que celle de la méthode de référence. 13. Maintenance par le laboratoire : Sans objet Conclusion L exactitude de la méthode COMPASS Agar est équivalente à la méthode de référence. Les niveaux de détection de la méthode alternative sont similaires à ceux de la méthode de référence La méthode COMPASS Agar est spécifique et sélective. La méthode COMPASS Agar offre une simplicité de manipulation et un gain de temps dans le délai d obtention des résultats. ADRIA Développement 20/ janvier 2015

21 1.3 Etude d extension (2007) 154 souches cibles et 108 souches non cibles ont été testées Protocole Le protocole est présenté ci-après : Décongélation en BHI 37 C - 24 h Souches non cibles Souches cibles Culture en BHI Culture en bouillon Fraser 1/2 37 C, 24 h 30 C, 24 h Isolement sur Isolement sur COMPASS TSAYE COMPASS TSAYE Agar Agar 37 C, 24 h 37 C, 24 h Strie sur CONFIRM L. mono Agar Strie sur CONFIRM L. mono Agar Lecture En cas de discordance avec le résultat attendu, le protocole de confirmation de la méthode de référence a été appliqué, c est-à-dire : Gram, Catalase, hémolyse, CAMP Test, fermentation du rhamnose et du xylose Résultats Souches cibles Les résultats sont présentés en Annexe 6. Sur 153 souches monocytogenes testées, 152 ADRIA Développement 21/ janvier 2015 ont donné une colonie caractéristique bleue avec auréole d opacification sur gélose COMPASS Agar. Toutes ces souches ont donné une réaction caractéristique sur CONFIRM L. mono Agar.

22 La souche monocytogenes 6072 ne s est pas développée sur COMPASS Agar à partir de Fraser 1/2. Une croissance a été obtenue sur CONFIRM L. mono Agar à partir d une colonie issue de TSYEA. Un halo d opacification a été obtenu avec un test Rhamnose négatif. Cette souche isolée sur ALOA et OCLA donne une réaction caractéristique. La souche donne un test Rhamnose positif en galerie API et en tube. L identification à l espèce monocytogenes a été confirmée Souches non cibles Au total, 106 souches ont été testées. 22 souches innocua testées ont donné des colonies non caractéristiques sur COMPASS Agar et sur CONFIRM L. mono Agar Sur 15 souches ivanovii testées, 14 ont donné des colonies bleues avec auréole sur COMPASS Agar. Ces souches donnent une réaction négative sur CONFIRM L. mono Agar (Rhamnose -), excepté les souches L. ivanovii Ad 616 qui donne une réaction Rhamnose faiblement positive et L. ivanovii Ad 648 qui donne une réaction caractéristique sur CONFIRM L. mono Agar. La souche ivanovii Ad 662 ne donne pas d auréole d opacification sur COMPASS Agar même après 48 heures d incubation. Cette souche ne se développe pas sur CONFIRM L. mono Agar. Les 9 souches seeligeri et 2 souches grayi testées donnent des réactions négatives, à la fois sur COMPASS Agar et sur CONFIRM L. mono Agar. Sur les 21 souches Bacillus cereus testées, 12 donnent une auréole d opacification sur COMPASS Agar avec ou sans croissance (5 souches). Le même phénomène est observé sur gélose CONFIRM L.mono, mais avec un test Rhamnose négatif. Les autres espèces de Bacillus testées ne donnent pas de réaction caractéristique, ni sur gélose COMPASS Agar, ni sur CONFIRM L. mono Agar. Il en est de même pour les souches Enterococcus, Lactococcus et Streptococcus testées, qui ne se développent pas ou ne présentent pas de réaction caractéristique sur COMPASS Agar. ADRIA Développement 22/ janvier 2015

23 1.3.3 Conclusion Inclusivité 152 souches sur 153 souches L. monocytogenes testées montrent une réaction caractéristique, à la fois sur COMPASS Agar et sur CONFIRM L. mono Agar Exclusivité Le test CONFIRM L. mono Agar permet d écarter toutes les souches de ivanovii ou de B. cereus ayant pu montrer une réaction plus ou moins caractéristique sur COMPASS Agar. 1.4 Etude d extension (2011) Exactitude relative, spécificité relative et sensibilité relative L exactitude est l étroitesse de l accord entre le résultat d essai et la valeur de référence acceptée. La spécificité relative est définie comme le degré auquel la méthode est affectée (ou non) par les autres composants dans un échantillon en contenant plusieurs. C est la capacité de la méthode à mesurer avec exactitude un analyte donné, ou sa quantité, dans l échantillon sans qu il y ait d interférence avec les composants non ciblés, tels un effet de la matrice ou un bruit de fond. La sensibilité relative est définie comme la capacité de la méthode alternative à détecter deux quantités différentes d analyte qui ont été mesurées avec la méthode de référence en utilisant une matrice donnée sur toute l étendue de mesure. C est la variation de quantité minimale (accroissement de la concentration d analyte x) qui donne une variation significative du signal mesuré (réponse y) Nombre et nature des échantillons 279 échantillons ont été analysés à la fois par la méthode de référence et la méthode COMPASS Agar. La répartition par catégorie est donnée dans le tableau ci-après : ADRIA Développement 23/ janvier 2015

24 Catégories Carnés Laitiers Produits de la pêche Végétaux Environnement Type spp Positifs spp autre que monocytogenes monocytogenes SOLABIA Négatifs Volaille porc Bœuf et divers Total Laits crus Fromages au lait cru Poudres de lait Total Crus Fumés Cuisinés Total Crus Surgelés Cuisinés Total Eaux de process Surfaces Poussières, eaux de lavage Total Total Total Contamination artificielle des échantillons Des contaminations artificielles ont été réalisées par des inoculations ou des contaminations croisées. 51 échantillons ont été inoculés par des souches stressées. 43 échantillons ont donné un résultat positif. 73,8 % d échantillons naturellement contaminés ont été analysés. Les stress appliqués et l évaluation des stress sont donnés en Annexe Protocoles de confirmation Les colonies typiques de spp. ont été confirmées par piqûre sur gélose Palcam et par réalisation d une galerie biochimique dans le cadre de l étude. ADRIA Développement 24/ janvier 2015

25 Résultats des essais Les interprétations ont été réalisées après 24 h et 48 h d incubation des boîtes. Tableau 9 - Couples de résultats des méthodes de référence et alternative - Tous produits Réponses Incubation 24 h Incubation 48 h Méthode alternative Positive (A+) Méthode alternative Négative (A-) Méthode de référence positive (R+) Accord positif (A+/R+) PA = 158 Déviation négative (A-/R+) ND = 4 (PPND = 1) Méthode de référence négative (R-) Déviation positive (R-/A+) PD =2 Accord négatif (A-/R-) NA = 115 (PPNA = 7) Méthode de référence positive (R+) Accord positif (A+/R+) PA = 160 Déviation négative (A-/R+) ND = 2 (PPND = 2) Méthode de référence négative (R-) Déviation positive (R-/A+) PD = 2 Accord négatif (A-/R-) NA = 115 (PPNA = 8) A+ = positifs confirmés A- = négatifs immédiats et négatifs après confirmation quand présomptifs positifs PA = accord positif NA = accord négatif PD = déviation positive ND = déviation négative PP = présumé positif non confirmé Tableau 10 - Produits carnés Réponses Incubation 24 h Incubation 48 h Méthode alternative Positive (A+) Méthode alternative Négative (A-) Méthode de référence positive (R+) Accord positif (A+/R+) PA = 31 Déviation négative (A-/R+) ND = 1 Méthode de référence négative (R-) Déviation positive (R-/A+) PD = 1 Accord négatif (A-/R-) NA = 21 (PPNA = 3) Méthode de référence positive (R+) Accord positif (A+/R+) PA = 32 Déviation négative (A-/R+) ND = 0 Tableau 11 - Produits laitiers Réponses Incubation 24 h Incubation 48 h Méthode alternative Positive (A+) Méthode alternative Négative (A-) Méthode de référence positive (R+) Accord positif (A+/R+) PA = 33 Déviation négative (A-/R+) ND = 1 (PPND = 1) Méthode de référence négative (R-) Déviation positive (R-/A+) PD = 1 Accord négatif (A-/R-) NA = 22 Méthode de référence positive (R+) Accord positif (A+/R+) PA = 33 Déviation négative (A-/R+) ND = 1 Méthode de référence négative (R-) Déviation positive (R-/A+) PD = 1 Accord négatif (A-/R-) NA = 21 (PPNA = 3) Méthode de référence négative (R-) Déviation positive (R-/A+) PD = 1 Accord négatif (A-/R-) NA = 22 (PPNA = 1) ADRIA Développement 25/ janvier 2015

26 Tableau 12 - Produits de la mer Réponses Incubation 24 h Incubation 48 h Méthode alternative Positive (A+) Méthode alternative Négative (A-) Méthode de référence positive (R+) Accord positif (A+/R+) PA = 36 Déviation négative (A-/R+) ND = 0 Méthode de référence négative (R-) Déviation positive (R-/A+) PD = 0 Accord négatif (A-/R-) NA = 14 (PPNA = 2) Méthode de référence positive (R+) Accord positif (A+/R+) PA = 36 Déviation négative (A-/R+) ND = 0 Méthode de référence négative (R-) Déviation positive (R-/A+) PD = 0 Accord négatif (A-/R-) NA = 14 (PPNA = 1) Tableau 13 - Végétaux Réponses Incubation 24 h Incubation 48 h Méthode alternative Positive (A+) Méthode alternative Négative (A-) Méthode de référence positive (R+) Accord positif (A+/R+) PA = 33 Déviation négative (A-/R+) ND = 1 Méthode de référence négative (R-) Déviation positive (R-/A+) PD = 0 Accord négatif (A-/R-) NA = 22 (PPNA = 2) Méthode de référence positive (R+) Accord positif (A+/R+) PA = 33 Déviation négative (A-/R+) ND = 1 (PPND = 1) Tableau 14 - Echantillons de l environnement Réponses Incubation 24 h Incubation 48 h Méthode alternative Positive (A+) Méthode alternative Négative (A-) Méthode de référence positive (R+) Accord positif (A+/R+) PA = 25 Déviation négative (A-/R+) ND = 1 Méthode de référence négative (R-) Déviation positive (R-/A+) PD = 0 Accord négatif (A-/R-) NA = 36 Méthode de référence positive (R+) Accord positif (A+/R+) PA = 26 Déviation négative (A-/R+) ND = 0 Méthode de référence négative (R-) Déviation positive (R-/A+) PD = 0 Accord négatif (A-/R-) NA = 22 (PPNA = 3) Méthode de référence négative (R-) Déviation positive (R-/A+) PD = 0 Accord négatif (A-/R-) NA = 36 ADRIA Développement 26/ janvier 2015

27 Calcul de l exactitude relative (AC), de la sensibilité relative (SE) et de la spécificité relative (SP) SOLABIA Tableau 15 - Calcul de l exactitude relative (AC), de la sensibilité relative (SE) et de la spécificité relative (SP) Matrices PA NA ND PD N Produits carnés Produits laitiers Produits de la pêche Incubation : 24 h Exactitude Relative AC (%) [100x(PA+NA])/N] N+ PA + ND Sensibilité relative SE (%) [100xPA]/N+] N- NA + PD Spécificité relative SP (%) [100xNA]/N-] , , , , , , , , ,0 Végétaux , , ,0 Environnement , , ,0 TOTAL , , ,3 Matrices PA NA ND PD N Produits carnés Produits laitiers Produits de l a pêche Incubation : 48 h Exactitude Relative AC (%) [100x(PA+NA])/N] N+ PA + ND Sensibilité relative SE (%) [100xPA]/N+] N- NA + PD Spécificité relative SP (%) [100xNA]/N-] , , , , , , , , ,0 Végétaux , , ,0 Environnement , , ,0 TOTAL , , ,3 PA = Accord positif (R+/A+) PD = déviation positive (R-/A+) NA = Accord négatif (R-/A-) ND = déviation négative (A-/R+) Les résultats bruts de l exactitude relative sont donnés en Annexe 8. ADRIA Développement 27/ janvier 2015

28 Les valeurs en pourcentage calculées pour la méthode alternative sont les suivantes : Incubation 24 h Incubation 48 h Exactitude relative 97,8 98,6 Spécificité relative 98,3 98,3 Sensibilité relative 97,5 98,8 La sensibilité des deux méthodes, en tenant compte des positifs supplémentaires obtenus pour la méthode alternative, est la suivante : Incubation 24 h Incubation 48 h Méthode alternative (SE) 97,6 98,8 Méthode de référence (SE) 98,8 98, Analyse des discordants Déviations négatives Après 24 h d incubation, 4 déviations négatives sont observées ; elles sont listées dans le tableau ci-après : N Produit Souches Résultat de la méthode de référence Résultats après éch. identifiées Fraser ½ Colonies suspectes Fraser 1 48 h d incubation 571 Nuggets de innocua dinde Tome au lait Inoculation par + cru innocua Colonies suspectes mais non confirmées Rouleau de pâte brisée monocytogenes Chiffonnette innocua Pour 2 de ces échantillons, la prolongation de l incubation des boîtes de COMPASS Agar jusqu à 48 h a permis de recouvrer les. ADRIA Développement 28/ janvier 2015

29 Déviations positives 2 déviations positives ont été observées pour les échantillons suivants : - échantillon n 433 (viande de bœuf) : échantillon naturellement contaminé par monocytogenes, - échantillon n 1338 (camembert au lait cru) : échantillon artificiellement contaminé par innocua. Tests statistiques selon l annexe F de la norme ISO Les résultats des tests statistiques observés pour une incubation de 24 h sont les suivants : Y = ND + PD = = 6 m = PD = 2 M = 0 m > M, les deux méthodes ne sont pas différentes à α < 0, Conservation des bouillons Fraser 1/2 72 h à 4 C 3 changements de résultats sont observés après stockage des bouillons Fraser 1/2 72 h à 4 C ; ils sont listés ci-après : N éch. Résultat de la méthode alternative Résultat de la Avant stockage Après stockage méthode de référence (PD) - (=) (=) - (ND) (PD) - (=) - L analyse des discordants devient donc : Y = ND + PD = = 5 Y < 6 Aucun test statistique n est disponible Les deux méthodes ne sont pas différentes à α < 0,05. ADRIA Développement 29/ janvier 2015

30 1.4.2 Niveau de détection relatif Le niveau de détection relatif correspond au nombre le plus petit de micro-organismes cultivables qu il est possible de détecter dans l échantillon, avec une probabilité de 50 %, à l aide des méthodes alternative et de référence Matrices utilisées Cette étude a pour objectif de déterminer les quantités minimales de monocytogenes détectables dans la matrice alimentaire et de les comparer à celles obtenues par la méthode de référence. Les limites de détection ont été définies par l analyse du couple (matrice / souche) à quatre niveaux. Six réplicats de chaque condition ont été réalisés. Les couples matrices / souches testés sont les suivantes : - saumon fumé inoculé par innocua 1, - fromage frais de chèvre inoculé par ivanovii Ad Protocole de contamination Six sachets de 25 g ont été préparés par matrice et par taux. Les sachets ont été inoculés individuellement par une suspension bactérienne. Les analyses ont été effectuées à la fois par la méthode de référence et la méthode alternative. Les matrices utilisées ont été analysées avant inoculation par la méthode EN ISO /A1 (2004), afin de s assurer de l absence d une contamination par monocytogenes des échantillons. Un dénombrement de la flore totale a également été réalisé sur chaque matrice. ADRIA Développement 30/ janvier 2015

31 Résultats Tableau 16 - Valeurs des niveaux de détection relatifs Couples (souche, matrice) Niveau de détection relatif (UFC / 25 g) selon le test de Spearman-Kärber 1 Méthode de référence Méthode alternative Saumon fumé / innocua 1 0,3 [0,2 ; 0,4] 0,3 [0,2 ; 0,4] Fromage frais de chèvre / ivanovii Ad 991 0,8 [0,5 ; 1,5] 0,8 [0,5 ; 1,5] Le niveau de détection relatif est compris entre 0,2 et 1,5 pour la méthode de référence et la méthode alternative. Le niveau de détection de la méthode alternative est identique à celui de la méthode de référence pour les deux couples matrice / souche testés Inclusivité - Exclusivité L objectif de l étude de spécificité est de vérifier que toutes les souches monocytogenes sont détectées par la méthode COMPASS Agar et qu il n y a pas de réaction croisée avec des souches autres que monocytogenes. Les résultats de l étude d extension réalisée en 2007 ont été repris : souches de monocytogene, 22 souches de Listerai innocua, 15 souches de ivanovii, 9 souches de seeligeri et enfin 25 souches de grayi avaient été testées en inclusivité. Une souche de ivanovii sps londoniensis a été testée afin de compléter l étude souches ont été testées en exclusivité. Les résultats sont présentés en Annexe 9. 1 "Hitchins A. Proposed Use of a 50 % Limit of Detection Value in Defining Uncertainty Limits in the Validation of Presence-Absence Microbial Detection Methods, Draft 10th December, 2003". ADRIA Développement 31/ janvier 2015

32 Inclusivité Pour rappel, lors des précédentes études de validation et d extension, 152 souches sur 153 souches L. monocytogenes ont donné des colonies caractéristiques sur COMPASS Agar. Une souche ( monocytogenes 6072) ne s est pas développée sur le milieu. Des essais réalisés sur cette même souche en 2011 ont mis en évidence une croissance très faible sur la gélose COMPASS Agar après 24 h d incubation (micro-colonies avec halo opaque important) et la présence de colonies caractéristiques après 48 h d incubation. Toutes les souches de spp. autres que monocytogenes ont donné des colonies caractéristiques bleues avec ou sans halo sur la gélose COMPASS Agar Exclusivité Aucune des souches testées n a donné de colonies caractéristiques sur gélose COMPASS Agar gélose. La méthode COMPASS Agar est spécifique et sélective Conclusion La méthode COMPASS Agar montre une étude d exactitude, de spécificité et de sensibilité relatives satisfaisante pour la recherche de spp. dans les échantillons d alimentation humaine et les échantillons d environnement. Les niveaux de détection de la méthode COMPASS Agar sont similaires à ceux de la méthode de référence. La méthode est sélective et spécifique. ADRIA Développement 32/ janvier 2015

33 1.5 Etude d extension (2013) En 2013, une étude d extension a été effectuée afin d introduire une nouvelle option de confirmation, le bouillon CONFIRM L. mono basé sur la fermentation du rhamnose pour la recherche de monocytogenes par la méthode COMPASS Agar. Cette option de confirmation avait déjà fait l objet d une extension de validation pour la méthode de dénombrement, avec des tests effectués pour 50 souches cibles et 30 souches non cibles. L étude a été complétée avec 100 souches cibles et 70 souches non cibles pour être conforme avec les règles techniques de l AFNOR. Le bouillon CONFIRM L.mono permet la mise en évidence de la fermentation du rhamnose, test positif pour monocytogenes et test négatif pour ivanovii. Le test positif apparaît sous la forme d une coloration jaune qui survient après incubation du bouillon pendant 6 à 24 h à 37 C ± 1 C Inclusivité et exclusivité Protocoles L objectif de l étude de spécificité est de vérifier que toutes les souches monocytogenes sont détectées par la méthode COMPASS Agar et qu il n y a pas de réaction croisée avec des souches autres que monocytogenes. L étude a donc été complétée en testant 100 souches cibles et 70 souches non cibles en appliquant le protocole suivant : ADRIA Développement 33/ janvier 2015

34 Décongélation en BHI 37 C 24 h Souches non cibles Souches cibles Culture en BHI 37 C ± 1 C, 24 h ± 2 h Culture en bouillon Fraser ½ 30 C ± 1 C, 24 h ± 2 h Isolement sur Isolement sur TSYEA COMPASS Agar TSYEA COMPASS Agar Incubation 37 C ± 1 C, 24 h ± 2 h Incubation 37 C ± 1 C, 24 h ± 2 h Repiquage d une colonie en bouillon CONFIRM L.mono Repiquage d une colonie en bouillon CONFIRM L.mono 37 C ± 1 C 6 h et 24 h 37 C ± 1 C 6 h et 24 h Lecture Résultat positif : virage au jaune du milieu Résultats Les résultats sont reportés en Annexe 10. Inclusivité Pour le test de confirmation CONFIRM L. mono, 145 souches ont donné un test positif (virage au jaune) après 6 h d incubation à 37 C. Pour les souches monocytogenes 7711/7516, A00C036, Ad 235, Ad 626 et A00C054, le virage d indicateur était plus faible (couleur brune) à 6 h. Pour 3 d entre elles, la poursuite de l incubation jusqu à 24 h a permis d obtenir un test positif. ADRIA Développement 34/ janvier 2015

35 Par contre, pour les souches monocytogenes 7711/7516 et A00C054, le test est resté douteux. Des résultats identiques ont été obtenus à partir de la gélose TSYEA. Exclusivité Sur les 70 souches testées, seules les 20 souches de ivanovii ont donné des colonies typiques avec halo sur gélose COMPASS Agar ; toutes ces souches ont donné un test de CONFIRM L. mono négatif (après 6 h et 24 d incubation). La méthode COMPASS Agar est spécifique et sélective Conclusion Le test CONFIRM L. mono apparaît spécifique et sélectif. En cas de réaction dite «douteuse» après 24 h, il est souhaitable de réaliser une simple galerie biochimique ou l ensemble des tests de confirmation de la méthode de référence ISO La méthode est sélective et spécifique. ADRIA Développement 35/ janvier 2015

36 2 ETUDES INTER-LABORATOIRES 2.1 Etude de validation initiale (2002) Les synthèses des résultats obtenus par les laboratoires collaborateurs sont présentées ci-après : - Méthode 24 h Taux de Nombre Nombre de Nombre Pourcentage Nombre total contamination d échantillons résultats de résultats de d échantillons (UFC/25 g) analysés négatifs positifs concordance , (21)* 95, , ,0 * Un laboratoire n a pas confirmé la présence de monocytogenes après réalisation des tests de confirmation sur les colonies suspectes obtenues sur COMPASS L. mono Agar pour un échantillon (Hémolyse -, CAMP -, Rhamnose +, Xylose -). Les tests d hémolyse et de CAMP ont été refaits sur les colonies par le laboratoire expert qui les a bien trouvés positifs. - Méthode 48 h Taux de Nombre Nombre de Nombre Pourcentage Nombre total contamination d échantillons résultats de résultats de d échantillons (UFC/25 g) analysés négatifs positifs concordance , (21)* 95, , ,0 * Un laboratoire n a pas confirmé la présence de monocytogenes après réalisation des tests de confirmation sur les colonies suspectes obtenues sur COMPASS L. mono Agar pour un échantillon (Hémolyse -, CAMP -, Rhamnose +, Xylose -). Les tests d hémolyse et de CAMP ont été refaits sur les colonies par le laboratoire expert qui les a bien trouvés positifs. ADRIA Développement 36/ janvier 2015

37 2.2 Etude de reconduction (2007) Les résultats de l ensemble des laboratoires participants ont été acquis après 24 h d incubation des géloses COMPASS Agar Organisation de l étude Quatorze colis ont été livrés mais seulement douze laboratoires ont participé à l étude. Du lait pasteurisé demi-écrémé a été inoculé par monocytogenes 4b 153. Les flacons de lait ont été inoculés individuellement à raison de 8 flacons par taux et par laboratoire, soit 24 flacons à analyser par laboratoire Modalités de préparation et de contamination des échantillons (y compris le niveau de contamination) Tous les échantillons ont été répartis par le laboratoire expert en flacons stériles, à raison de 25 ml par flacon, avant d être contaminés. Préparation des suspensions contaminantes Deux suspensions (125 cellules/ml et 25 cellules/ml) ont été préparées à partir d une culture d une nuit en bouillon BHI à 37 C selon le protocole décrit dans les exigences relatives aux études préliminaires et collaboratives des règles techniques de l AFNOR. Protocole de contamination des échantillons L inoculation au taux faible a été réalisée à l aide de 200 µl de la suspension à 25 cellules/ml et l inoculation à taux fort a été effectuée par 200 µl de la suspension à 125 cellules/ml. Après inoculation, les échantillons ont été homogénéisés et fermés hermétiquement par un parafilm, puis stockés au froid avant expédition. ADRIA Développement 37/ janvier 2015

38 Les taux d inoculation visés étaient les suivants : - 0 UFC/25 ml, UFC/25 ml, UFC/25 ml Modalités d expédition : date, moyens mis en œuvre pour le contrôle des températures (pendant le transport et à réception) Les échantillons ont été expédiés le lundi 16 avril 2007, la réception et la réalisation des analyses étant prévues dans les laboratoires le mardi 17 avril Les échantillons codés (code connu uniquement du laboratoire expert) ont été placés dans des caisses isothermes contenant des blocs réfrigérants et expédiés aux différents laboratoires à l aide d un transport express. Un flacon témoin température contenant un enregistreur de température a été joint au colis, afin de suivre la température au cours du transport et de la mesurer à réception. Chaque laboratoire, identifié par une lettre, a reçu : - 24 échantillons (25 g) codés pour la recherche de monocytogenes par la méthode COMPASS Agar et la méthode EN ISO /A1 (2004), - 1 échantillon non codé pour le dénombrement de la flore aérobie mésophile du lait par la méthode ISO 4833, - 1 flacon d eau contenant un thermobouton destiné à enregistrer la température au cours de l acheminement du colis vers le laboratoire et permettant de contrôler la température à réception, - un accusé de réception, - un tableau de résultats à compléter et renvoyer au laboratoire expert. ADRIA Développement 38/ janvier 2015

39 Eléments nécessaires à la réalisation des essais par les laboratoires collaborateurs - Réactifs utilisés : Une partie des réactifs a été transmise aux laboratoires collaborateurs directement par la Société SOLABIA, l autre partie a été fournie par le laboratoire expert. - Instructions : Les instructions détaillées ont été transmises aux laboratoires par le laboratoire expert Contrôle des paramètres expérimentaux Taux de contamination avant ensemencement, taux obtenus après contamination artificielle et stabilité des échantillons Avant ensemencement La recherche de monocytogenes a été effectuée sur cinq prélèvements de 25 ml de lait par la méthode ISO /A1 (2004) avant ensemencement. Toutes les analyses se sont révélées négatives. Taux de contamination obtenus Les taux de contamination obtenus dans la matrice et les estimations de précision sont donnés dans le tableau suivant : Niveau Niveau 0 Niveau bas Niveau haut Echantillons Taux théorique ciblé (b/25 ml) Taux réel (b/25 ml d échantillon) Estimation de la limite inférieure de la contamination par 25 ml d échantillon Estimation de la limite supérieure de la contamination par 25 ml d échantillon / / / / 5 4,9 4,2 5, ,1 20,1 26,6 ADRIA Développement 39/ janvier 2015

40 Stabilité des échantillons Trois flacons de lait ont été inoculés au taux fort (5-50 UFC/25 ml) et conservés à 7 C pendant 48 h. Un dénombrement sur 5 ml a été effectué sur gélose Palcam à J0, J1 et J2. En parallèle, trois flacons ont été inoculés au taux faible (1-10 UFC/25 ml) et conservés à 7 C pendant 48 h. Sur ces échantillons, une recherche de monocytogenes a été effectuée par la méthode de référence. Les résultats sont présentés dans le tableau suivant : Jour Méthode de référence (recherche) UFC/25 ml (Palcam) Flacon 1 Flacon 2 Flacon 3 Flacon 1 Flacon 2 Flacon 3 J J J Aucune évolution n est à noter. Température relevée au cours du transport, température à réception et délais de réception Les températures au cours du transport et mesurées à réception, ainsi que la date de réception des échantillons sont données ci-après : Température des échantillons à réception Laboratoires Température relevée par le thermobouton ( C) Température mesurée à réception ( C) Date et heure de réception des échantillons A 0,50 3,0 17/04/07 12h00 B 3,50 4,2 17/04/07 09h15 C 1,00 2,7 17/04/07 10h30 D 3,00 3,6 17/04/07 09h30 F 0,00 5,0 17/04/07 09h30 G 2,50 3,6 17/04/07 08h40 H 0,00 0,7 17/04/07 09h15 I 1,00 6,8 (contrôlé à 14h) 17/04/07 11h00 J 1,50 0,3 17/04/07 16h00 K 0,50 2,5 17/04/07 08h45 L 0,50 2,5 17/04/07 11h15 M 0,00 1,9 17/04/07 08h45 Aucun problème n a été rencontré au cours du transport, ni à la réception des échantillons. ADRIA Développement 40/ janvier 2015

41 2.2.3 Résultats des analyses Dénombrement de la flore aérobie mésophile Un échantillon non codé a été fourni aux laboratoires collaborateurs afin qu ils réalisent le dénombrement de la flore aérobie mésophile du lait par la méthode ISO Les dénombrements obtenus varient entre 360 et UFC/ml. Résultats obtenus par le laboratoire expert Les résultats sont donnés ci-après : Niveau Méthode de référence Méthode alternative L0 0/8 0/8 L1 8/8 8/8 L2 8/8 8/8 Tous les échantillons inoculés ont été trouvés positifs par les deux méthodes. La concordance entre les deux méthodes est de 100 %. Résultats obtenus par les laboratoires collaborateurs Les résultats détaillés sont donnés ci-après : ADRIA Développement 41/ janvier 2015

42 Méthode de référence Laboratoire L0 L1 L2 A 0/8 8/8 8/8 B 0/8 8/8 8/8 C 0/8 8/8 8/8 D 0/8 8/8 8/8 F 0/8 7/8 8/8 G 0/8 7/8 8/8 H 0/8 8/8 8/8 I 0/8 8/8 8/8 J 0/8 7/8 8/8 K 0/8 8/8 8/8 L 0/8 8/8 8/8 M 0/8 8/8 8/8 Méthode alternative Laboratoire L0 L1 L2 A 0/8 8/8 8/8 B 0/8 8/8 8/8 C 0/8 8/8 8/8 D 0/8 8/8 8/8 F 0/8 7/8 8/8 G 0/8 7/8 8/8 H 0/8 8/8 8/8 I 0/8 8/8 8/8 J 0/8 7/8 8/8 K 0/8 8/8 8/8 L 0/8 8/8 8/8 M 0/8 8/8 8/8 L interprétation a été réalisée avec les résultats des douze laboratoires qui ont participé à l étude. Tous les résultats de la méthode alternative concordent avec ceux de la méthode de référence Calculs Calcul des pourcentages de spécificité (%SP) et de sensibilité (% SE) pour les deux méthodes Le pourcentage de spécificité, pour le niveau L0 et pour chaque méthode, est calculé à l aide de l équation suivante : avec : FP SP 1 x 100% N N- = nombre total de tous les essais L0 FP = nombre de faux positifs Le pourcentage de sensibilité, pour chaque niveau de contamination positif et pour chaque méthode, est calculé à l aide de l équation suivante : avec : TP SE x 100% N N+ = nombre total de tous les essais L1 ou L2 TP = nombre de vrais positifs ADRIA Développement 42/ janvier 2015

43 Les résultats sont reportés dans le tableau suivant : Niveau Méthode de référence Méthode alternative SP/SE LCL % SP/SE LCL % L0 SP% = SP% = L1 SE% = 96,9 93 SE% = 96,9 93 L2 SE% = SE% = L1+L2 SE% = 98,4 97 SE% = 98,4 97 Calcul de l exactitude relative (AC) Les résultats pour tous niveaux confondus sont donnés ci-après : Tableau 17 - Couples de résultats de la méthode alternative et de la méthode de référence Méthode alternative Méthode de référence Total PA = 189 PD = ND = 0 NA = Total N+ = 189 N- = 99 N = 288 L exactitude relative (AC), exprimée en pourcentage, est calculée à l aide de ( PA NA) l équation suivante : AC x 100% N avec : N = nombre d échantillons soumis à essai PA = nombre d accords positifs NA = nombre d accords négatifs Les valeurs d exactitude de la méthode alternative par rapport à la méthode de référence ont été calculées pour chacun des niveaux et figurent dans le tableau ci-après : Tableau 18 Niveau AC % LCL % L L L L1 + L Total ADRIA Développement 43/ janvier 2015

44 Etude des résultats discordants Aucune discordance n ayant été observée, le test statistique n a pas été mis en œuvre Interprétation Comparaison des valeurs d exactitude relative, de spécificité et de sensibilité L exactitude est l étroitesse de l accord entre le résultat d essai et la valeur de référence acceptée. La spécificité relative est définie comme le degré auquel la méthode est affectée (ou non) par les autres composants dans un échantillon en contenant plusieurs. C est la capacité de la méthode à mesurer avec exactitude un analyte donné, ou sa quantité, dans l échantillon sans qu il y ait d interférence avec les composants non ciblés, tels un effet de la matrice ou un bruit de fond. La sensibilité relative est définie comme la capacité de la méthode alternative à détecter deux quantités différentes d analyte qui ont été mesurées avec la méthode de référence en utilisant une matrice donnée sur toute l étendue de mesure. C est la variation de quantité minimale (accroissement de la concentration d analyte x) qui donne une variation significative du signal mesuré (réponse y). Les valeurs obtenues dans les deux parties de l étude de validation (étude comparative des méthodes et étude interlaboratoire) sont reportées dans le tableau 19 : Tableau 19 - Comparaison des valeurs obtenues lors de l étude inter-laboratoire avec celles obtenues dans le cadre de l étude comparative des méthodes, pour la méthode alternative Etude inter-laboratoire Etude comparative des méthodes Exactitude relative (AC) ,3 Sensibilité (SE) 98,4 95,6 Spécificité (SP) ,9 ADRIA Développement 44/ janvier 2015

45 Degré d accord (DA) Le degré d accord est le pourcentage de chances de trouver le même résultat (c està-dire tous les deux positifs ou tous les deux négatifs) pour deux prises d essai identiques analysées dans le même laboratoire, dans des conditions de répétabilité (c est-à-dire un seul opérateur utilisant le même appareillage et les mêmes réactifs dans l intervalle de temps le plus court possible). Le degré d accord est ainsi l équivalent de la répétabilité pour les méthodes quantitatives. Les différents tableaux permettant de déduire le degré d accord sont donnés en Annexe 11. Les degrés d accord pour la méthode de référence et la méthode alternative et pour chaque niveau sont reportés ci-après : Niveau Méthode de référence Méthode alternative L0 DA % = 100 DA % = 100 L1 DA % = 94,5 DA % = 94,5 L2 DA % = 100 DA % = 100 Concordance La concordance est le pourcentage de chances de trouver le même résultat pour deux échantillons identiques analysés dans deux laboratoires différents. La concordance est donc l équivalent de la reproductibilité pour les méthodes quantitatives. Les calculs de la concordance sont donnés en Annexe 12. Les pourcentages de concordance pour la méthode de référence et la méthode alternative, à chaque niveau, sont repris dans le tableau ci-après : Niveau Méthode de référence Méthode alternative L0 Concordance % = 100 Concordance % = 100 L1 Concordance % =93,9 Concordance % = 93,9 L2 Concordance % =100 Concordance % =100 ADRIA Développement 45/ janvier 2015

46 Odds Ratio (COR) Il est calculé selon la formule suivante : degré d' accord x 100 concordance COR concordance x(100 degré d' accord) Les Odds ratio pour la méthode de référence et la méthode alternative sont donnés ci-après : Niveau Méthode de référence Méthode alternative L0 COR = 1,00 COR = 1,00 L1 COR = 1,12 COR = 1,12 L2 COR = 1,00 COR = 1, Conclusion La variabilité de la méthode alternative (degré d accord, concordance, Odds ratio) est équivalente à celle de la méthode de référence. ADRIA Développement 46/ janvier 2015

47 Annexe 1 - Méthode COMPASS Agar Détection de spp. xg ou ml d échantillon + 9 xg ou ml de Fraser 1/2 24 h 2 h à 30 C 1 C Isolement sur le milieu COMPASS Agar (100 µl) 24 h à 37 C 1 C Présence de colonies caractéristiques Absence de colonies caractéristiques Confirmation oui non Présence de spp. Absence de spp. Confirmation : - par piqûre sur gélose Palcam - par identification sur galerie biochimique - par les tests classiques décrits dans les méthodes normalisées de référence en incluant l étape de purification ADRIA Développement 47/ janvier 2015

48 Détection de monocytogenes xg ou ml d échantillon + 9 xg ou ml de Fraser 1/2 24 h 2 h à 30 C 1 C Isolement sur le milieu COMPASS Agar (100 µl) 24 h à 37 C 1 C Présence de colonies caractéristiques Absence de colonies caractéristiques Confirmation oui non Présence de monocytogenes Absence de monocytogenes Confirmation : - par piqûre sur gélose Palcam - par identification sur galerie biochimique - par les tests classiques décrits dans les méthodes normalisées de référence en incluant l étape de purification - par réalisation d une strie sur la gélose CONFIRM L.mono Agar - par inoculation d une colonie en bouillon CONFIRM L.mono ADRIA Développement 48/ janvier 2015

49 Annexe 2 - Méthode de référence NF EN ISO /A1 (février 2005): méthode de recherche de monocytogenes Prise d essai x g ou ml de produit Dilution au 1/10 en bouillon d enrichissement primaire Fraser ½ Incubation 30 C 1 C pendant 24 h 2 h 0,1 ml de l enrichissement primaire dans 10 ml de bouillon d enrichissement secondaire (Fraser) Incubation 37 C 1 C pendant 48 2 h Isolement sur Palcam et OAA Isolement sur Palcam et OAA Incubation 37 C 1 C pendant 24 h 2 h Présence de colonies caractéristiques Oui Non Test de confirmation Incubation h supplémentaires à 37 C 1 C Présence de colonies caractéristiques L. monocytogenes Autre que L. monocytogenes Oui Test de confirmation Non Présence de L. monocytogenes x g ou ml Absence de L. monocytogenes x g ou ml L. monocytogenes Autre que L. monocytogenes Absence de L. monocytogenes x g ou ml Présence de L. monocytogenes x g ou ml Absence de L. monocytogenes x g ou ml Test de confirmation : Gram, Catalase, Hémolyse, CAMP Test, Galerie API ADRIA Développement 49/ janvier 2015

50 Echantillons ADRIA Développement 50/ janvier 2015 Annexe 3 Etude de reconduction (2007) : Souches utilisées et stress appliqués Contaminations artificielles N Produit Souche Origine Type de stress 2674 Poudre de lait (RAEMA) 2675 Poudre de lait (RAEMA) Terrine de coquille 129 St Jacques Terrine de poison 130 à la Bretonne Ad128 Ad128 Saumon fumé Saumon fumé 131 Rillettes de thon Ad128 Saumon fumé -20 C;TT30min 55 C -20 C;TT30min 55 C -20 C;TT30min 55 C Evaluation du stress Taux d'inoculation Résultat 0, , , St Pierre A00M023 Saumon fumé -20 C;+4 C 1, Longe de Marlin A00M023 Saumon fumé -20 C;+4 C 1, Filet de daurade A00M023 Saumon fumé -20 C;+4 C 1, Filet de saumon A00M010 Poisson -20 C;+4 C 0, Filet de Haddock A00M010 Poisson -20 C;+4 C 0, Filet de merlan A00M010 Poisson -20 C;+4 C 0, Pommes de terre- carottes 1011/1410 Brocolis surgelés -20 C;+4 C 0, Mélange carottes poireaux 1011/1410 Brocolis surgelés -20 C;+4 C 0, Salade de tomates poivrons 1011/1410 Brocolis surgelés -20 C;+4 C 0, Mélange de légumes en julienne Epinards en branches Choux brocolis - Contamination croisée avec végétaux naturellement contaminés 144 Julienne de légumes Brocolis Poêlée champêtre Poudre de lait infantile Ad257 Lait TT30min 55 C 0, Poudre de lait écrémé Ad257 Lait TT30min 55 C 0, Poudre de lait écrémé Ad257 Lait TT30min 55 C 0, Terrine de St Jacques A00M0114 Saumon fumé TT30min 55 C 0, Rillettes de thon A00M0114 Saumon fumé TT30min 55 C 0, Terrine de saumon A00M0114 Saumon fumé TT30min 55 C 0, Salade de lentilles cuisinées 1016/1413 Brocolis surgelés TT30min 55 C 0,5 2 + Potiron, pommes de terre 184 cuisinés 1016/1413 Brocolis surgelés TT30min 55 C 0, Chou blanc 1016/1413 Brocolis surgelés TT30min 55 C 0, Carottes rondelles 1016/1413 Brocolis surgelés TT30min 55 C 0, Poudre de lait infantile A00L0105 Lait TT30min 55 C Poudre de lait infantile A00L0105 Lait TT30min 55 C Poudre de lait infantile A00L0105 Lait TT30min 55 C Poudre de lait infantile A00L0105 Lait TT30min 55 C Chutes de saumon fumé Darnes de saumon fumé Filets de Haddock fumés + Contamination croisée avec saumon fumé 231 Filets de hareng fumé Filets de Haddock fumés Saumon fumé Lait cru Lait cru Contamination croisée avec lait de brebis Lait cru Lait cru Lait cru Contamination croisée avec lait de brebis Lait cru Surface table Ad 548 Environnement poisson ph10 >4, Balance Ad 548 Environnement poisson ph10 >4,15 6 +

51 Echantillons Contaminations artificielles N Produit Souche Origine Type de stress Evaluation du stress SOLABIA Taux d'inoculation Résultat 386 Grille d'égout Ad 548 Environnement poisson ph10 >4, Bac Ad 548 Environnement poisson ph10 >4, Lame de couteau Ad 549 Environnement salaison ph10 >4, Chariot Ad 549 Environnement salaison ph10 >4, Plan de travail Ad 549 Environnement salaison ph10 >4, Evier Ad 549 Environnement salaison ph10 >4, Tapis Ad 550 Environnement laiterie ph10 >4, Plan de travail Ad 550 Environnement laiterie ph10 >4, Tapis Ad 550 Environnement laiterie ph10 >4, Evier Ad 550 Environnement laiterie ph10 >4, Petits pois cuisinés Ad547 Pâte à galette ph10 >4, Purée de brocolis Ad547 Pâte à galette ph10 >4, Epinards hachés à la crème Ad547 Pâte à galette ph10 >4, Purée d'artichauts nature Ad547 Pâte à galette ph10 >4, Coule d'œuf Ad547 Pâte à galette ph10 >4, Louche Ad551 Environnement pâtisserie ph10 >3, Grille d'égout biscuiterie Ad551 Environnement pâtisserie ph10 >3, Chariot salle conditionnement Ad551 Environnement pâtisserie ph10 >3, Bac plonge Ad548 Environnement poisson ph3 >2, Sol salle de cuisson Ad548 Environnement poisson ph3 >2, Tapis salle de cuisson Ad548 Environnement poisson ph3 >2, Tapis salle biscuiterie Ad549 Environnement salaison ph3 0, Table salle de cuisson Ad549 Environnement salaison ph3 0, Evier salle de cuisson Ad549 Environnement salaison ph3 0, Chariot salle conditionnement Ad550 Environnement laiterie ph3 0, Plan de travail salle de cuisson Ad550 Environnement laiterie ph3 0, Balance salle de cuisson Ad550 Environnement laiterie ph3 0, Salade Bretonne Ad543 Poivrons lamelles ph3 0, Piémontaise Ad543 Poivrons lamelles ph3 0, Salade Auvergnate Ad543 Poivrons lamelles ph3 0, Taboulé à l'orientale Ad543 Poivrons lamelles ph3 0, Tomates en dés Ad543 Poivrons lamelles ph3 0, Poivrons rouges surgelés Ad544 Oignons préfrits ph3 0, Haricots verts surgelés Ad544 Oignons préfrits ph3 0, Tomates en dés Ad544 Oignons préfrits ph3 0, Poivrons verts surgelés Ad544 Oignons préfrits ph3 0, Navets surgelés Ad544 Oignons préfrits ph3 0, Petits pois cuisinés surgelés Ad545 Salade chou carotte ph3 0,4 4 + Epinards hachés à la crème 594 surgelés Ad545 Salade chou carotte ph3 0, Julienne de légumes surgelée Ad545 Salade chou carotte ph3 0, Carottes en rondelles surgelées Ad545 Salade chou carotte ph3 0,4 4 + ADRIA Développement 51/ janvier 2015

52 Annexe 4 Etude de reconduction (2007) : Résultats bruts de l exactitude relative Echantillons N Produit éch. PRODUITS CARNES NF EN ISO COMPASS Agar Fraser 1/2 Fraser OAA PALCAM OAA PALCAM Colonies suspectes Colonies suspectes Colonies suspectes Colonies suspectes Colonies Résultat Résultat Concordance suspectes 2581 Tête roulée = 2584 Paupiettes nature = 2591 Blanc de poulet = 2592 Blanc de poulet = 2593 Blanc de poulet = 2594 Blanc de poulet = 2615 Poitrine de veau = 2617 Saucisse fumée = 2619 Chipolatas = 2620 Merguez = 2621 Merguez = 2622 Saucisse = 2623 Escalope de veau hachée = 2624 Merguez = 2628 Chorizo = 2634 Foie gras = 2636 Côtelette de veau = 2637 Jambon tranché = 2648 Collier = 2649 Escalope de veau hachée = 2650 Escalope de veau hachée = 2651 Escalope de veau hachée = 2652 Escalope de veau hachée = 2653 Escalope de veau hachée = 2654 Escalope de veau hachée = 2655 Escalope de veau hachée = 2656 Poulet cuisiné = 2657 Poulet cuisiné = 2658 Canard sauce aigre douce = 2660 Paupiettes = 2661 Poitrine de veau = 2662 Paupiettes = 2663 Saucisse sèche = 2664 Jambonneau = Essai effectué sous le couvert de l accréditation ADRIA Développement 52/ janvier 2015

53 Echantillons N Produit éch. SOLABIA PRODUITS CARNES NF EN ISO COMPASS Agar Fraser 1/2 Fraser OAA PALCAM OAA PALCAM Colonies suspectes Colonies suspectes Colonies suspectes Colonies suspectes Colonies Résultat Résultat Concordance suspectes 2665 Saucisses de Toulouse = 2666 Paupiettes = 2667 Epaule = 2668 Paupiettes = 2672 Escalope de veau hachée = 2673 Escalope de veau hachée = 2676 Poule = 2677 Poule = 2678 Poule = 2681 Escalope 1ère de veau = 2682 Sauté de veau = 2683 Sauté de veau = 2704 Paupiettes col + = 2705 Paupiettes = 2707 Tomates farcies = 2715 Poule = 2716 Poule = 2717 Quasi = 2718 Rôti de veau Orloff = 11 Poulet aux herbes = 12 Poulet à l'indienne = 13 Cordon bleu de dindonneau = 14 Poulet mexicain = 15 Dinde = 16 Mousse de canard = 17 Cuisse de poulet = 21 Pané de dinde = 24 Gésiers de poulet = 25 Escalope de veau hachée = 26 Escalope de veau hachée = 31 Poule = 33 Escalope de veau = ADRIA Développement 53/ janvier 2015

54 Echantillons N Produit éch. SOLABIA PRODUITS LAITIERS NF EN ISO COMPASS Agar Fraser 1/2 Fraser OAA PALCAM OAA PALCAM Colonies suspectes Colonies suspectes Colonies suspectes Colonies suspectes Colonies Résultat Résultat Concordance suspectes 2585 Lait cru = 2586 Lait cru = 2587 Lait cru = 2588 Lait cru = 2589 Lait cru = 2590 Chèvre au saumon fumé = 2603 Fromage au lait cru PD 2604 Fromage au lait cru = 2638 Fromage à pâte molle (lait cru) = 2639 Bleu (lait cru) = 2640 Fromage au lait cru col + = 2641 Fromage au lait cru = 2642 Fromage au lait cru = 2674 Poudre de lait (RAEMA) = 2675 Poudre de lait (RAEMA) = 2708 Fromage à raclette = 2709 Fromage à raclette = 2710 Fromage à raclette ND 177 Poudre de lait infantile = 178 Poudre de lait écrémé ND 179 Poudre de lait écrémé = 187 Poudre de lait infantile = 188 Poudre de lait infantile = 189 Poudre de lait infantile /- - = 190 Poudre de lait infantile = 319 Fromage non affiné au lait cru = 320 Fromage non affiné au lait cru = 321 Fromage non affiné au lait cru ND 322 Fromage non affiné au lait cru = 323 Fromage affiné au lait cru = 324 Fromage affiné au lait cru = 325 Lait de brebis = 326 Lait de brebis = 327 Lait de brebis = 328 Lait de brebis = 329 Lait de brebis = 330 Lait de brebis = Essai effectué sous le couvert de l accréditation ADRIA Développement 54/ janvier 2015

55 Echantillons N Produit éch. SOLABIA PRODUITS LAITIERS NF EN ISO COMPASS Agar Fraser 1/2 Fraser OAA PALCAM OAA PALCAM Colonies suspectes Colonies suspectes Colonies suspectes Colonies suspectes Colonies Résultat Résultat Concordance suspectes 331 Lait de brebis = 332 Lait de brebis = 333 Cœur de fromage au lait cru = 334 Brie de Meaux ND 335 Tomme = 336 Raclette = 337 Fromage à pâte molle non cuite = 368 Fromage à pâte molle au lait cru ND 378 Lait cru = 379 Lait cru = 380 Lait cru = 381 Lait cru = 382 Lait cru = 383 Lait cru = 522 Raclette au lait cru = 523 St Nectaire fermier = 524 Comté = 525 Tomme de Savoie au lait cru = 526 Crottin de Chavignol = 527 Roquefort = 528 Tomme de montagne = 529 Emmental = 530 Lait cru = 531 Lait cru = 532 Poudre de lait = 533 Poudre de lait = 534 Poudre de lait = 642 Fromage à pâte molle = 667 Poudre de lait = 668 Poudre de lait = ADRIA Développement 55/ janvier 2015

56 Echantillons N Produit éch. SOLABIA PRODUITS DE LA MER NF EN ISO COMPASS Agar Fraser 1/2 Fraser OAA PALCAM OAA PALCAM Colonies suspectes Colonies suspectes Colonies suspectes Colonies suspectes Colonies Résultat Résultat Concordance suspectes 2582 Filets de limande meunière = 2598 Saumon fumé de l'atlantique = 2599 Dés de saumon = 2600 Cubes de saumon = 2626 Chutes de saumon fumé = 2627 Saumon fumé = 2629 Saumon fumé = 2630 Saumon fumé = 2631 Saumon fumé = 2632 Saumon fumé = 2633 Saumon fumé = 2659 Paella = 2669 Filet de merlan = 2670 Pulpe de cabillaud = 2671 Filet de merlan = 2679 Filet de merlan = 2680 Saumon = 2684 Saumon fumé Norvégien = 2685 Saumon fumé Norvégien = 2686 Saumon fumé Norvégien = 2687 Saumon fumé Norvégien = 2688 Saumon fumé Norvégien = 2689 Saumon fumé Atlantique = 2690 Saumon fumé Atlantique = 2691 Saumon fumé Atlantique = 2692 Saumon fumé Irlande = 2693 Saumon fumé Ecosse = 2694 Saumon fumé Norvège = 2695 Saumon fumé Royaume Uni = 2703 Filet de merlan = 2712 Filet de pangosius = 2713 Filet de pangosius = 2714 Filet de raie = 2719 Merlu blanc = 2720 Merlu pelé = 2721 Filet de sandre = 2722 Filet de raie = Essai effectué sous le couvert de l accréditation ADRIA Développement 56/ janvier 2015

57 N éch. Echantillons Produit Fraser 1/2 PRODUITS DE LA MER NF EN ISO Fraser OAA PALCAM OAA PALCAM Colonies suspectes Colonies suspectes Colonies suspectes Colonies suspectes Résultat SOLABIA COMPASS Agar Colonies suspectes Résultat Concordance 18 Rillettes de thon = 19 Soufflé au brochet = 22 Darnes de saumon = 27 Filet de colin = 28 Filet de merlan = 29 Darne de saumon = 30 Filet de grenadier = 32 Longes de thon = 34 Merlu blanc sauce au curry et riz = 66 Raie = 67 Brochettes de saumon = 68 Pièce de saumon = 69 Saumon fumé = 70 Saumon fumé Atlantique = 71 Saumon fumé Atlantique = 72 Saumon fumé Norvège = 129 Terrine de coquille St Jacques = 130 Terrine de poison à la Bretonne = 131 Rillettes de thon = 132 St Pierre = 133 Longe de Marlin = 134 Filet de daurade = 135 Filet de saumon = 136 Filet de Haddock = 137 Filet de merlan = 180 Terrine de St Jacques = 181 Rillettes de thon = 182 Terrine de saumon = 228 Chutes de saumon fumé = 229 Darnes de saumon fumé = 230 Filets de Haddock fumés = 231 Filets de hareng fumé = 232 Filets de Haddock fumés = 233 Saumon fumé = 303 Galette de saumon aux petits légumes 304 Galette de saumon aux petits légumes = = 305 Filet de limande = ADRIA Développement 57/ janvier 2015

58 Echantillons N Produit éch. SOLABIA VEGETAUX et DIVERS NF EN ISO COMPASS Agar Fraser 1/2 Fraser OAA PALCAM OAA PALCAM Colonies suspectes Colonies suspectes Colonies suspectes Colonies suspectes Colonies Résultat Résultat Concordance suspectes 2583 Poivrons rouges = 2595 Poivrons lamelles = 2596 Macédoine de légumes = 2597 Oignons préfrits = 2601 Salade poireaux poulet = 2602 Salade choux carottes = 2616 Poivrons rouges = 2618 Farine de blé noir PD 2625 Pâte à galettes = 2643 Miche de pain (pâte crue) /- - = Auréole faible 2644 Poivrons rouges = 2645 Persil surgelé = 2646 Poivrons rouges = 2647 Poivrons verts = 2706 Taboulé à l'orientale = 20 Poivrons rouges = 23 Salade de carottes, haricots verts, = petits pois 73 Carottes en rondelles ND 74 Courgettes rondelles = 75 Petits pois = 76 Brocolis = 77 Choux de Bruxelles = 138 Pommes de terre- carottes = 139 Mélange carottes poireaux = 140 Salade de tomates poivrons = 141 Mélange de légumes en julienne = 142 Epinards en branches = 143 Choux brocolis = 144 Julienne de légumes = 145 Brocolis = 146 Poêlée champêtre = 183 Salade de lentilles cuisinées = 184 Potiron, pommes de terre = cuisinés 185 Chou blanc = Essai effectué sous le couvert de l accréditation ADRIA Développement 58/ janvier 2015

59 Echantillons N Produit éch. SOLABIA VEGETAUX et DIVERS NF EN ISO COMPASS Agar Fraser 1/2 Fraser OAA PALCAM OAA PALCAM Colonies suspectes Colonies suspectes Colonies suspectes Colonies suspectes Colonies Résultat Résultat Concordance suspectes 186 Carottes rondelles ND 306 Pâte à baguette = 503 Petits pois cuisinés = 504 Purée de brocolis = 505 Epinards hachés à la crème = 506 Purée d'artichauts nature = 507 Coule d'œuf = 582 Poivrons verts = 583 Salade Bretonne = 584 Piémontaise = 585 Salade Auvergnate = 586 Taboulé à l'orientale = 587 Tomates en dés = 588 Poivrons rouges surgelés = 589 Haricots verts surgelés = 590 Tomates en dés = 591 Poivrons verts surgelés = 592 Navets surgelés = 593 Petits pois cuisinés surgelés = 594 Epinards hachés à la crème = surgelés 595 Julienne de légumes surgelée = 596 Carottes en rondelles surgelées = 597 Courgettes en rondelles surgelées = 598 Brocolis e fleurettes surgelés = 599 Purée de brocolis nature = 600 Puére d'artichaut nature = 601 Poêlée champêtre = 665 Légumes pour pot au feu = 666 Julienne de légumes surgelés = ADRIA Développement 59/ janvier 2015

60 n éch. Echantillons Produits ECHANTILLONS DE L ENVIRONNEMENT Fraser 1/2 NF EN ISO Fraser OAA PALCAM OAA PALCAM Colonies Colonies Colonies Colonies suspectes suspectes suspectes suspectes Résultats Colonies suspectes SOLABIA COMPASS Agar Résultat Concordance 2605 Chiffonnette salle désarêtage = 2606 Chiffonnette salle dosage (doseur) = 2607 Chiffonnette salle laverie(bennes) = 2608 Chiffonnette salle cutter (évacuation) = 2609 Lingette surface atelier pâtisserie = 2610 Lingette surface atelier pâtisserie = 2611 Lingette surface atelier pâtisserie = 2612 Lingette surface atelier pâtisserie = 2613 Lingette surface atelier pâtisserie = 2614 Lingette surface atelier pâtisserie = Lingette-Atelier charcuterie de poisson Lingette-Atelier charcuterie de poisson Lingette-Atelier charcuterie de poisson Lingette-Atelier charcuterie de poisson Lingette-Atelier charcuterie de poisson Lingette-Atelier charcuterie de poisson Lingette-Atelier charcuterie de poisson = = = = = = = 59 Lingette égout -laiterie = 60 Lingette égout extérieur-laiterie = 61 Lingette égout salle-laiterie = 62 Lingette égout extérieur-laiterie = 63 Lingette égout salle-laiterie = 166 Lingette tapis-pâtisserie = 167 Lingette tapis-pâtisserie = 168 Lingette lave semelles-pâtisserie = 169 Lingette tapis pétrin-pâtisserie = 170 Lingette dosette levure-pâtisserie = 171 Lingette poche balance-pâtisserie = 172 Lingette tapis façonneuse = Essai effectué sous le couvert de l accréditation ADRIA Développement 60/ janvier 2015

61 n éch. 264 Pâtisserie Echantillons Produits Lingette-atelier transformation poisson ECHANTILLONS DE L ENVIRONNEMENT Fraser 1/2 NF EN ISO Fraser OAA PALCAM OAA PALCAM Colonies Colonies Colonies Colonies suspectes suspectes suspectes suspectes Résultats Colonies suspectes SOLABIA COMPASS Agar Résultat Concordance = 265 Lingette surface tapis-pâtisserie = 266 Lingette surface tapis-pâtisserie = 267 Lingette surface tapis-pâtisserie = 268 Lingette doseur levure-pâtisserie = 384 Surface table = 385 Balance = 386 Grille d'égout = 387 Bac = 388 Lame de couteau = 389 Chariot = 390 Plan de travail = 391 Evier = 392 Tapis = 393 Plan de travail = 394 Tapis = 395 Evier = 396 Eau bac échaudage = 397 Eau pédiluve entrée abattoir = 398 Caniveau salle des machines = 399 Eau abat foie = 400 Banc de Ven -cutter = 401 Sol salle emballage = 537 Louche = 538 Grille d'égout biscuiterie = 539 Chariot salle conditionnement = 540 Bac plonge = 541 Sol salle de cuisson = 542 Tapis salle de cuisson = 543 Tapis salle biscuiterie = 544 Table salle de cuisson = 545 Evier salle de cuisson = 546 Chariot salle conditionnement = 547 Plan de travail salle de cuisson = 548 Balance salle de cuisson = ADRIA Développement 61/ janvier 2015

62 Annexe 5 Etude de reconduction (2007) : Résultats bruts de l inclusivité et de l exclusivité Souches négatives N Souche Référence Origine COMPASS Agar 24H Couleur de la colonie Taille Auréole 1 innocua SICC 4202 Bleue innocua CIP (NCTC 10528) Bleue innocua T727 Produit carné Bleue innocua lait Bleue ivanovii CIP (ATCC49954) Bleue 0,5 +(1) 6 ivanovii CIP7842T (ATCC19119) Bleue 0,5 +(1) 7 ivanovii Poisson Bleue 0,5 +(1) 8 ivanovii BR11 Environnement pisciculture Bleue 0,5 +(2) 9 ivanovii BR14 Environnement pisciculture Bleue 0,5 +(1) 10 ivanovii BR22 Environnement pisciculture Bleue 0,5 +(1) 11 ivanovii BR23 Environnement pisciculture Bleue 0,5 +(2) 12 ivanovii Ad466 Rognons de veau Bleue 1,5 + seeligeri CIP T 13 (ATCC35967) Bleue <0,5-14 seeligeri CNR Bleue 0,5-15 welshimeri CIP Bleue 1 - welshimeri CIP 8149T 16 (ATCC35897) Bleue 0,5-1,0 - grayi CIP 6818T 17 (ATCC19120) Bleue 1,5 - murrayi CIP (ATCC25401) Bleue 1,5-19 Lactobacillus brevis Ad405 86L126 Jambon / / / 20 Lb plantarum 89L319 Fromage / / / 21 Enterococcus faecalis CIP A186 / / / 22 Enterococcus faecium Ad 180 Coule d'œuf / / / 23 Micrococcus luteus ATCC Bleue µcolonies - 24 Staphylococcus aureus Adria501 Lait cru Blanche 0,5-25 Staphylococcus aureus ATCC Blanche 0,5-26 Brochothrix thermosphacta CIP 696 / / / 27 Brochothrix thermosphacta EN Truite / / / 28 Bacillus cereus Adria17 Riz au lait / / / Bacillus subtilis CIP (ATCC6635) / / / 30 Bacillus pumilus A00V124 Végétaux Bleue plate 2 - ADRIA Développement 62/ janvier 2015

63 Souches positives COMPASS Agar 24H N Souche Référence Origine Couleur de la colonie Taille Auréole 1 CIP 7831 Bleue CIP87/6172 Bleue /5087 Bleue /6396 Bleue /140 Brocolis surgelés Bleue V2/124 Porc Bleue V5/126 Veau Bleue V8/127 Bœuf Bleue /181 Saucisses fumées Bleue /3145 Poitrine de porc Bleue /109 Assiette nordique Bleue /113 Environnement Bleue CIP7840 (ATCC19117) Humaine Bleue CIP Bleue CIP 7832 Bleue CIP 7833 Bleue CNR Bleue CIP7834 (ATCC19113) Bleue CIP 7835 Bleue CIP 7836 Bleue /1408 Boudin noir Bleue /6179 Lardons fumés Bleue /1413 Brocolis surgelés Bleue /7516 Rillettes Bleue /2399 Tourte aux champignons Bleue /2400 Quiche Lorraine Bleue /3139 Tripes à la tomate Bleue Ad 268 Jambon de Vendée Bleue CIP7837 (ATCC19114) Humaine Bleue CIP 7838 (ATCC19115) Bleue /690 Bleue /7137 Bleue Munster Bleue CIP 7839 (ATCC19116) Poulet Bleue CIP 7843 Bleue Lait Bleue Ad 141 Saumon Bleue Ad 140 Magret Bleue Ad 148 Saumon Bleue A00 L098 Produit laitier Bleue A00 L101 Produit laitier Bleue A00 C022 Merguez Bleue A00 C043 Bacon Bleue A00 M047 Poisson Bleue Lait Bleue A00 M011 Poisson Bleue A00 M080 Poisson Bleue A00 L105 Produit laitier Bleue Ad 267 Volaille Bleue Ad 285 Poivrons Bleue 2 + ADRIA Développement 63/ janvier 2015

64 Annexe 6 Etude d extension (2007) : Résultats bruts de l inclusivité et de l exclusivité n Genre Espèce Référence Origine ADRIA Développement 64/ janvier 2015 SOUCHES POSITIVES COMPASS Agar 24H COMPASS Agar 48H CONFIRM L. mono Agar Couleur de la colonie Taille Halo d opacification Couleur de la colonie Taille Halo d opacification Halo d opacification Décoloration jaune (Rhamnose) 1. monocytogenes 153 Munster bleue 2 + bleue monocytogenes 909 lait bleue 2 + bleue monocytogenes 910 lait bleue 2 + bleue monocytogenes 917 lait bleue 2 + bleue faible + 5. monocytogenes lait bleue 2 + bleue monocytogenes lait bleue 2 + bleue monocytogenes 1011/1410 brocolis surgelés bleue 2 + bleue monocytogenes 1016/1413 brocolis surgelés bleue 2 + bleue monocytogenes lait bleue 2 + bleue monocytogenes 1972/2399 tourte aux champignons bleue 2 + bleue monocytogenes 1973/2400 quiche lorraine bleue 2 + bleue monocytogenes 2407/3139 tripes à la tomate bleue 2 + bleue monocytogenes 2760/3145 parures de poitrine bleue 2 + bleue monocytogenes croque Monsieur bleue 2 + bleue monocytogenes 38/181 saucisse de Toulouse bleue 2 + bleue monocytogenes 5721/6179 lardons fumés bleue 2 + bleue monocytogenes 6072 saumon fumé Pas de pousse / / Pas de pousse / / / / 18. monocytogenes 7111/7516 rillettes bleue 2 + bleue monocytogenes 850/109 assiette nordique bleue 2 + bleue monocytogenes 86/690 produit alimentaire bleue 2 + bleue

65 n Genre Espèce Référence Origine SOUCHES POSITIVES COMPASS Agar 24H COMPASS Agar 48H CONFIRM L. mono Agar Couleur de la colonie Taille Halo d opacification Couleur de la colonie Taille Halo d opacification Halo d opacification Décoloration jaune (Rhamnose) 21. monocytogenes 87/6172 produit alimentaire bleue 2 + bleue monocytogenes 877/113 écouvillon tapis sur tunnel de glaçage bleue 2 + bleue monocytogenes 88/7137 produit alimentaire bleue 2 + bleue monocytogenes 913/1 048 boudin noir bleue 2 + bleue monocytogenes A00C014 Chipolatas bleue 2 + bleue monocytogenes A00C015 Chipolatas bleue 2 + bleue monocytogenes A00C022 merguez bleue 2 + bleue monocytogenes A00C024 chipolatas aux herbes bleue 2 + bleue monocytogenes A00C036 pintade bleue 2 + bleue monocytogenes A00C039 diots de Savoie bleue 2 + bleue monocytogenes A00C040 museau bleue 2 + bleue monocytogenes A00C041 chair à saucisse bleue 2 + bleue monocytogenes A00C042 saucisse de Toulouse bleue 2 + bleue monocytogenes A00C043 bacon fumé bleue 2 + bleue monocytogenes A00C044 canette de barbarie bleue 2 + bleue monocytogenes A00C052 osso bucco de dinde bleue 2 + bleue monocytogenes A00C053 gésier bleue 2 + bleue monocytogenes A00C054 cœur de bœuf bleue 2 + bleue monocytogenes A00C055 saucisse de Toulouse bleue 2 + bleue monocytogenes A00E008 tapis reconstitution bleue 2 + bleue monocytogenes A00E033 trancheuse bleue 2 + bleue ADRIA Développement 65/ janvier 2015

66 n Genre Espèce Référence Origine SOUCHES POSITIVES COMPASS Agar 24H COMPASS Agar 48H CONFIRM L. mono Agar Couleur de la colonie Taille Halo d opacification Couleur de la colonie Taille Halo d opacification Halo d opacification Décoloration jaune (Rhamnose) 42. monocytogenes A00E049 support tapis fileteuse bleue 2 + bleue monocytogenes A00E082 environnement saumon fumé bleue 2 + bleue monocytogenes A00L097 lait bleue 2 + bleue monocytogenes A00L101 lait bleue 2 + bleue monocytogenes A00L107 lait bleue 2 + bleue monocytogenes A00M009 saumon fumé bleue 2 + bleue monocytogenes A00M019 saumon fumé bleue 2 + bleue monocytogenes A00M020 saumon fumé bleue 2 + bleue monocytogenes A00M021 saumon fumé bleue 2 + bleue monocytogenes A00M023 saumon fumé bleue 2 + bleue monocytogenes A00M029 mat. 1ère norv SF bleue 2 + bleue monocytogenes A00M030 matière première saumon fumé bleue 2 + bleue monocytogenes A00M032 saumon norvégien bleue 2 + bleue monocytogenes A00M045 saumon fumé bleue 2 + bleue monocytogenes A00M050 mat. 1ère espadon bleue 2 + bleue monocytogenes A00M051 mat. 1ère norv SF bleue 2 + bleue monocytogenes A00M080 mat première saumon bleue 2 + bleue monocytogenes A00M081 saumon fumé bleue 2 + bleue monocytogenes A00M088 saumon fumé irlandais bleue 2 + bleue monocytogenes A00M089 saumon fumé norvégien bleue 2 + bleue monocytogenes A00M096 saumon fumé écossais bleue 2 + bleue ADRIA Développement 66/ janvier 2015

67 n Genre Espèce Référence Origine SOUCHES POSITIVES COMPASS Agar 24H COMPASS Agar 48H CONFIRM L. mono Agar Couleur de la colonie Taille Halo d opacification Couleur de la colonie Taille Halo d opacification Halo d opacification Décoloration jaune (Rhamnose) 63. monocytogenes A00M111 saumon fumé écossais bleue 2 + bleue monocytogenes A00M112 saumon fumé norvégien bleue 2 + bleue monocytogenes A00M113 saumon fumé irlandais bleue 2 + bleue monocytogenes A00M123 saumon fumé bleue 2 + bleue monocytogenes Ad148 produit de la mer bleue 2 + bleue monocytogenes Ad235 volaille bleue 2 + bleue monocytogenes Ad252 produit laitier bleue 2 + bleue monocytogenes Ad253 pâte pressée cuite bleue 2 + bleue monocytogenes Ad255 produit laitier bleue 2 + bleue monocytogenes Ad258 produit laitier bleue 2 + bleue monocytogenes Ad260 pâte pressée bleue 2 + bleue monocytogenes Ad262 produit laitier bleue 2 + bleue monocytogenes Ad265 langue bleue 2 + bleue monocytogenes Ad266 poulet bleue 2 + bleue monocytogenes Ad267 saucisson sec bleue 2 + bleue monocytogenes Ad268 jambon de Vendée bleue 2 + bleue monocytogenes Ad270 rosette de Lyon bleue 2 + bleue monocytogenes Ad271 filet de bacon bleue 2 + bleue monocytogenes Ad272 saucisse sèche d'auvergne bleue 2 + bleue monocytogenes Ad273 jambon sec de Savoie bleue 2 + bleue monocytogenes Ad274 assortiment asiatique bleue 2 + bleue ADRIA Développement 67/ janvier 2015

68 n Genre Espèce Référence Origine SOUCHES POSITIVES COMPASS Agar 24H COMPASS Agar 48H CONFIRM L. mono Agar Couleur de la colonie Taille Halo d opacification Couleur de la colonie Taille Halo d opacification Halo d opacification Décoloration jaune (Rhamnose) 84. monocytogenes Ad275 cervelas pistaché de Lyon bleue 2 + bleue monocytogenes Ad276 saucisse de Strasbourg bleue 2 + bleue monocytogenes Ad277 chorizo doux bleue 2 + bleue monocytogenes Ad278 poitrine fumée bleue 2 + bleue monocytogenes Ad279 poêlée parisienne cuisinée bleue 2 + bleue monocytogenes Ad280 lardons nature bleue 2 + bleue monocytogenes Ad281 raviolines au Roquefort bleue 2 + bleue monocytogenes Ad285 poivrons verts bleue 2 + bleue monocytogenes Ad291 lardons fumés bleue 2 + bleue monocytogenes Ad292 knacky bleue 2 + bleue monocytogenes Ad293 coppa en tranches bleue 2 + bleue monocytogenes Ad294 clinique bleue 2 + bleue monocytogenes Ad295 clinique bleue 2 + bleue monocytogenes Ad299 coques bleue 2 + bleue monocytogenes Ad470 fromage bleue 2 + bleue monocytogenes Ad474 saumon fumé bleue 2 + bleue monocytogenes Ad494 piémontaise bleue 2 + bleue monocytogenes Ad523 fromage à raclette bleue 2 + bleue monocytogenes Ad532 fruits bleue 2 + bleue monocytogenes Ad534 fruits bleue 2 + bleue monocytogenes Ad543 poivron lamelle bleue 2 + bleue ADRIA Développement 68/ janvier 2015

69 n Genre Espèce Référence Origine SOUCHES POSITIVES COMPASS Agar 24H COMPASS Agar 48H CONFIRM L. mono Agar Couleur de la colonie Taille Halo d opacification Couleur de la colonie Taille Halo d opacification Halo d opacification Décoloration jaune (Rhamnose) 105. monocytogenes Ad544 oignon préfrit bleue 2 + bleue monocytogenes Ad545 salade chou carotte bleue 2 + bleue monocytogenes Ad546 farine de blé noir bleue 2 + bleue monocytogenes Ad548 salle désarêtage bleue 2 + bleue monocytogenes Ad549 atelier charcuterie de poisson bleue 2 + bleue monocytogenes Ad550 égout extérieur bleue 2 + bleue monocytogenes Ad551 lave semelles bleue 2 + bleue monocytogenes Ad610 lait bleue 2 + bleue monocytogenes Ad611 lait bleue 2 + bleue monocytogenes Ad612 Livarot bleue 2 + bleue monocytogenes Ad613 Munster bleue 2 + bleue monocytogenes Ad614 environnement laitier bleue 2 + bleue monocytogenes Ad615 environnement laitier bleue 2 + bleue monocytogenes Ad617 environnement laitier bleue 2 + bleue monocytogenes Ad618 Munster bleue 2 + bleue monocytogenes Ad619 fromage bleue 2 + bleue monocytogenes Ad620 environnement laitier bleue 2 + bleue monocytogenes Ad621 environnement laitier (sol) bleue 2 + bleue monocytogenes Ad622 fromage bleue 2 + bleue monocytogenes Ad623 chapelure (laiterie) bleue 2 + bleue monocytogenes Ad624 environnement laitier bleue 2 + bleue monocytogenes Ad625 environnement laitier bleue 2 + bleue ADRIA Développement 69/ janvier 2015

70 n Genre Espèce Référence Origine ADRIA Développement 70/ janvier 2015 SOUCHES POSITIVES COMPASS Agar 24H COMPASS Agar 48H CONFIRM L. mono Agar Couleur de la colonie Taille Halo d opacification Couleur de la colonie Taille Halo d opacification Halo d opacification Décoloration jaune (Rhamnose) 127. monocytogenes Ad626 Gorgonzola bleue 2 + bleue monocytogenes Ad627 emballage produit laitier bleue 2 + bleue monocytogenes Ad628 emballage produit laitier bleue 2 + bleue monocytogenes Ad629 Cantal bleue 2 + bleue monocytogenes Ad630 Cantal bleue 2 + bleue monocytogenes Ad631 environnement laitier bleue 2 + bleue monocytogenes Ad632 lait bleue 2 + bleue monocytogenes Ad633 environnement laitier bleue 2 + bleue monocytogenes Ad634 environnement laitier (sol) bleue 2 + bleue monocytogenes ADQP105 saumon fumé bleue 2 + bleue monocytogenes AER100 poulet bleue 2 + bleue monocytogenes AER101 lait bleue 2 + bleue monocytogenes AER102 saumure bleue 2 + bleue monocytogenes AER103 volaille bleue 2 + bleue monocytogenes BR32 truite bleue 2 + bleue monocytogenes CL3:29 environnement produit carné bleue 2 + bleue monocytogenes LMH180 salade fraîcheur bleue 2 + bleue monocytogenes V2/124 porc bleue 2 + bleue monocytogenes V5/126 bœuf bleue 2 + bleue monocytogenes V8/127 bœuf bleue 2 + bleue monocytogenes Ad 664 fromage non affiné au lait cru bleue 2 + bleue monocytogenes Ad 665 lait cru bleue 2 + bleue

71 n Genre Espèce Référence Origine SOUCHES POSITIVES COMPASS Agar 24H COMPASS Agar 48H CONFIRM L. mono Agar Couleur de la colonie Taille Halo d opacification Couleur de la colonie Taille Halo d opacification Halo d opacification Décoloration jaune (Rhamnose) 149. monocytogenes Ad 666 coquelet bleue 2 + bleue monocytogenes Ad 667 cuisse de poulet bleue 2 + bleue monocytogenes Ad 668 aile de poulet bleue 2 + bleue monocytogenes Ad 669 rillettes bleue 2 + bleue monocytogenes Ad 670 saumon fumé bleue 2 + bleue ADRIA Développement 71/ janvier 2015

72 n Genre Espèce Référence Origine TSYEA SOUCHES NEGATIVES COMPASS Agar 24H COMPASS Agar 48H CONFIRM L. mono Agar Décoloration Couleur de Halo Couleur de Halo Halo Taille Taille jaune la colonie d opacification la colonie d opacification d opacification (Rhamnose) 1 innocua 1 chutes de saumon fumé + Bleue 2 - Bleue innocua T727 produit carné + Bleue 2 - Bleue innocua NCTC Bleue 2 - Bleue innocua T654 fromage + Bleue 0,5-1 - Bleue innocua ATCC33090 cervelle de bœuf + Bleue 2 - Bleue innocua CIP Bleue 2 - Bleue innocua pannes de poitrine de porc + Bleue 2 - Bleue innocua lait + Bleue 2 - Bleue innocua lait + Bleue 2 - Bleue innocua Ad 658 Gorgonzola + Bleue 2 - Bleue innocua Transporteur fromagerie transporteur + Bleue 2 - Bleue innocua 902 produit laitier + Bleue 2 - Bleue innocua DSM Bleue 2 - Bleue innocua Ad663 haloirs + Bleue 2 - Bleue innocua Ad660 chapelure + Bleue 2 - Bleue innocua Ad657 Cantal + Bleue 2 - Bleue très faible 17 innocua As661 Pont L'Evêque + Bleue 2 - Bleue innocua Ad656 fromage à pâte molle + Bleue 2 - Bleue innocua Ad655 saumure + Bleue 2 - Bleue innocua Ad653 environnement + Bleue 2 - Bleue innocua Ad654 produit laitier + Bleue 2 - Bleue innocua Ad671 lardons fumés + bleue 2 - Bleue ivanovii CIP Bleue tête d'épingle + Bleue léger - 24 ivanovii CIP7842T + Bleue 0,5-1 + Bleue ivanovii CIP Bleue 0,5-1 + Bleue ivanovii CIP truite + Bleue 0,5-1 + Bleue ADRIA Développement 72/ janvier 2015

73 n Genre Espèce Référence Origine TSYEA 27 ivanovii BR11 28 ivanovii BR15 ADRIA Développement 73/ janvier 2015 environnement de pisciculture, filet anti-oiseaux environnement de pisciculture, paroi de bassin SOUCHES NEGATIVES COMPASS Agar 24H COMPASS Agar 48H CONFIRM L. mono Agar Décoloration Couleur de Halo Couleur de Halo Halo Taille Taille jaune la colonie d opacification la colonie d opacification d opacification (Rhamnose) + Bleue 0,5-1 + Bleue léger - + Bleue 0,5-1 + Bleue léger - 29 ivanovii Ad466 rognons de veau + Bleue 0,5-1 + Bleue léger - 30 ivanovii Ad662 emballage + Bleue Bleue Pas de pousse 31 ivanovii Ad648 (AERIAL 28) Collection + Bleue 1 + Bleue faible au point d inoculation 32 ivanovii L2-2 Volaille + Bleue Bleue ivanovii L2-9 Lait de brebis + Bleue Bleue faible - 34 ivanovii L2-11 Fromage au lait cru + Bleue Bleue ivanovii L2-12 Poudre de lait + Bleue Bleue ivanovii L41 Lait cru + Bleue Bleue ivanovii Ad616 environnement laitier (sol) + bleue faible Bleue faible au point d inoculation 38 seeligeri CIP Bleue µcolonie - Bleue 0, léger 39 seeligeri CNR Bleue 0,1-0,5 - Bleue 0, léger 40 seeligeri BR1 truite + Bleue 0,1-0,5 - Bleue 0, léger 41 seeligeri BR4 poisson + Bleue 0,1-0,5 - Bleue 0, léger 42 seeligeri BR18 environnement de pisciculture, paroi de bassin + Bleue 0,1-0,5 - Bleue 0, léger 43 seeligeri Ad652 pédiluve + Bleue µcolonie - Bleue 0, seeligeri Ad649 (AERIAL 26) Fromage + Bleue µcolonie - Bleue 0,5-2 - Pas de pousse 45 seeligeri Ad651 (AERIAL 46) Environnement + Bleue µcolonie - Bleue légère seeligeri Ad674 Munster + Bleue µcolonie - Bleue Pousse très faible 47 welshimeri CIP Bleue 2 - Bleue welshimeri CIP Bleue 0,1-0,5 - Bleue 0, léger 49 welshimeri Ad650 (AERIAL 45) Volaille + Bleue 0,5 - Bleue welshimeri volaille + bleue 2 - Bleue grayi ATCC Bleue pâle 0,5-1 - Bleue léger 52 grayi CIP Bleue pâle 0,5-1 - Bleue

74 SOUCHES NEGATIVES COMPASS Agar 24H COMPASS Agar 48H CONFIRM L. mono Agar n Genre Espèce Référence Origine TSYEA Décoloration Couleur de Halo Couleur de Halo Halo Taille Taille jaune la colonie d opacification la colonie d opacification d opacification (Rhamnose) 53 Bacillus cereus 1 coule d'œuf + Pas de pousse / - Pas de pousse / + + Pas de pousse 54 Bacillus cereus 8 pâtes à l'espagnole + Pas de pousse / - Pas de pousse / / Pas de pousse 55 Bacillus cereus 11 garniture riz-purée + Pas de pousse / - Pas de pousse / + au point d'inoculation Pas de pousse 56 Bacillus cereus 14.2 île flottante + Pas de pousse / - Pas de pousse / / Pas de pousse 57 Bacillus cereus 16 spaghettis aux fruits de mer + Pas de pousse / + Pas de pousse / + Pas de pousse 58 Bacillus cereus 17 riz au lait + Pas de pousse / + Pas de pousse / + Pas de pousse 59 Bacillus cereus 20 sauce poulet-carottes + Pas de pousse / + Pas de pousse / 60 Bacillus cereus 21 riz au curry + Pas de pousse / - Pas de pousse / 61 Bacillus cereus 22 farine de blé + Blanche étalée, centre bleu >2 + Blanche étalée, centre bleu + au point d'inoculation + au point d'inoculation + à l'inoculum Pas de pousse - + >2 + Pas de pousse 62 Bacillus cereus 26 lait cru de vache + Pas de pousse / + Pas de pousse / + + à l'inoculum Pas de pousse 63 Bacillus cereus 30 crevettes crues décortiquées ionisées à 3Kgray + Pas de pousse / + au point d'inoculation Pas de pousse / + au point d'inoculation + Pas de pousse 64 Bacillus cereus 31 beurre en poudre + Pas de pousse / + Pas de pousse / + + Pas de pousse 65 Bacillus cereus Ad420 poudre de caséinates + Blanche étalée, centre bleu >2 + Blanche étalée, centre bleu >2 + Pas de pousse 66 Bacillus cereus Ad465 terrine de saumon + Pas de pousse / - Pas de pousse / - + Pas de pousse 67 Bacillus cereus Ad483 Punch + Pas de pousse / + Pas de pousse / + Pas de pousse 68 Bacillus cereus Ad495 farine de riz + Blanche étalée, Blanche étalée, >2 + centre vert centre vert >2 + Pas de pousse 69 Bacillus cereus INRA104 purée conservée au froid + Pas de pousse / - Pas de pousse / - Pas de pousse Blanche étalée, Blanche étalée, 70 Bacillus cereus Ad608 pâte à baguette + centre bleu >2 + centre bleu >2 + + Pas de pousse turquoise turquoise 71 Bacillus cereus 54 produit laitier + Pas de pousse / - Quelques colonies >2 - + Pas de pousse blanches étalées 72 Bacillus cereus Ad607 environnement + Turquoise étalée >2 + Turquoise étalée >2 + + léger Pas de pousse ADRIA Développement 74/ janvier 2015

75 n Genre Espèce Référence Origine TSYEA 73 Bacillus cereus Ad609 ADRIA Développement 75/ janvier 2015 lingette égout, atelier produit laitier SOUCHES NEGATIVES + COMPASS Agar 24H COMPASS Agar 48H CONFIRM L. mono Agar Décoloration Couleur de Halo Couleur de Halo Halo Taille Taille jaune la colonie d opacification la colonie d opacification d opacification (Rhamnose) Blanche, centre vert >2 - Blanche, centre vert >2 - Pas de pousse 74 Bacillus weihenstephanensis N12 ovoproduit + Pas de pousse / - Pas de pousse / - Pas de pousse 75 Bacillus weihenstephanensis INRA87 purée conservée au froid + Pas de pousse / - Pas de pousse / - Pas de pousse 76 Bacillus weihenstephanensis INRA140 plat cuisiné + Pas de pousse / - Pas de pousse / - Pas de pousse 77 Bacillus weihenstephanensis INRA171 légume pasteurisé + Pas de pousse / - Pas de pousse / - Pas de pousse 78 Bacillus weihenstephanensis A1 ovoproduit + Pas de pousse / - Pas de pousse / + au point d'inoculation Pas de pousse 79 Bacillus weihenstephanensis SDA NFFE640 produit laitier + Pas de pousse / - Pas de pousse / + au point d'inoculation Pas de pousse 80 Bacillus thuringiensis IEBC T31 végétaux + Pas de pousse / - Pas de pousse / - Pas de pousse 81 Bacillus licheniformis 7600 produit laitier + Blanche étalée >2 - Blanche étalée >2 - Pas de pousse 82 Bacillus licheniformis LMSA 049 ovoproduit + Blanche étalée, Blanche étalée, >2 - centre vert centre vert >2 - Pas de pousse 83 Bacillus pumilus 7572 produit laitier + Blanche 01-0,5 - Bleue étalée, baveuse Pas de pousse 84 Bacillus pumilus INRA 260 légumes + Verte claire Blanche étalée, centre bleu >2 - Pas de pousse 85 Bacillus circulans B8 produit laitier + Turquoise 1 - Bleue 1-2 Halo éclaircissement Bacillus coagulans 7179 produit laitier + Pas de pousse / - Pas de pousse / léger 87 Bacillus sphaericus / produit laitier + Blanche 1 - Marron étalée >2 - Pas de pousse 88 Bacillus subtilis 7750 produit laitier + Pas de pousse / - Pas de pousse / - Pas de pousse 89 Bacillus subtilis LMSA 092 ovoproduit + Pas de pousse / - Pas de pousse / - Pas de pousse 90 Bacillus mycoïdes NFSO60 lait + Pas de pousse / - Pas de pousse / - Pas de pousse 91 Bacillus pseudomycoides S38 végétaux + Pas de pousse / - Pas de pousse / - Pas de pousse 92 Enterococcus durans Ad 149 jambon blanc + Pas de pousse / - Pas de pousse / - Pas de pousse 93 Enterococcus durans Ad181 coule d'œuf pasteurisée + Pas de pousse / - Pas de pousse / léger 94 Enterococcus faecalis 89L326 Vacherin + Pas de pousse / - Pas de pousse / Enterococcus faecalis 89L333 Appenzel + Pas de pousse / - Pas de pousse / - Pas de pousse 96 Enterococcus faecalis F4 Fromage + Pas de pousse / - Pas de pousse / Enterococcus faecalis 25 cuisse de poulet + Pas de pousse / - Pas de pousse / - Pas de pousse

76 n Genre Espèce Référence Origine TSYEA SOUCHES NEGATIVES COMPASS Agar 24H COMPASS Agar 48H CONFIRM L. mono Agar Décoloration Couleur de Halo Couleur de Halo Halo Taille Taille jaune la colonie d opacification la colonie d opacification d opacification (Rhamnose) 98 Enterococcus faecalis Ad289 plat cuisiné + Pas de pousse / - Turquoise Trace Enterococcus faecium Ad180 coule d'œuf pasteurisée + Verte µcolonie - Turquoise pâle < Enterococcus faecium CNRZ1391 fromage + Pas de pousse / - Turquoise Trace Enterococcus hirae CNRZ1380 fromage + Verte µcolonie - Turquoise pâle < inoculum 102 Enterococcus avium Ad183 coule d'œuf crue + Pas de pousse / - Pas de pousse / - Pas de pousse 103 Lactococcus lactis cremoris 91G030 gros lait + Pas de pousse / - Pas de pousse / Lactococcus lactis 89L335 Reblochon + Pas de pousse / - Pas de pousse / - Pas de pousse 105 Streptococcus salivarius Ad441 Lait + Pas de pousse / - Pas de pousse / - Pas de pousse 106 Streptococcus bovis 92L613 fromage + Pas de pousse / - Pas de pousse / - Pas de pousse ADRIA Développement 76/ janvier 2015

77 Annexe 7 Etude d extension (2011) : Souches utilisées et stress appliqués N Ech. Produit Contaminations artificielles Souche Origine Stress appliqué Evaluation du stress Taux d'inoculation spp autre que monocytogenes Résultat global 910 Chiffonnette tapis bleu perforé innocua Ad663 Environnement laitier TT 56 c 10min 0, (16,6) Chiffonnette tapis bleu perforé seeligeri BR18 Environnement pisciculture TT 56 c 10min >2, (15,4) Chiffonnette godet ivanovii Ad616 Environnement laitier TT 56 c 10min 2, (13,2) Chiffonnette tuyau plafond ivanovii Ad616 Environnement laitier TT 56 c 10min 2, (13,2) Chiffonnette moule innocua Ad663 Environnement laitier TT 56 c 10min 0, (16,6) Eau sol près laveuse ivanovii Ad616 Environnement laitier TT 56 c 10min 2, (13,2) Rocamadour au lait cru innocua Ad656 Fromage TT 56 c 10min 0, (7,0) Tomme au lait cru innocua Ad656 Fromage TT 56 c 10min 0, (7,0) Comté au lait cru innocua Ad656 Fromage TT 56 c 10min 0, (7,0) Lait frais pasteurisé Contamination croisée avec lait cru Lait frais pasteurisé Contamination croisée avec lait cru Lait frais pasteurisé Contamination croisée avec lait cru Steak haché charolais innocua Ad671 Lardons fumés -20 c 0, (6,8) Steak haché innocua Ad671 Lardons fumés -20 c 0, (6,8) Steak haché extra moelleux innocua Ad671 Lardons fumés -20 c 0, (6,8) Camembert au lait cru ivanovii Ad680 Lait cru TT 56 c 5min 0, (12,6) Tomme au lait cru innocua 913 Lait cru -20 c 1, (20,2) Reblochon au lait cru innocua 913 Lait cru -20 c 1, (20,2) Selles sur Cher innocua 913 Lait cru -20 c 1, (20,2) Camembert au lait cru innocua 913 Lait cru -20 c 1, (20,2) Poudre de lait (RAEMA) 1340 Poudre de lait (RAEMA) 1341 Poudre de lait (RAEMA) spp monocytogenes Emincé de poireaux innocua Ad1176 Epinards 4 c 0, (9,8) Chou blanc râpé innocua Ad1176 Epinards 4 c 0, (9,8) ADRIA Développement 77/ janvier 2015

78 N Ech. Produit Contaminations artificielles Souche Origine Stress appliqué Evaluation du stress Taux d'inoculation spp autre que monocytogenes Résultat global 1344 Carottes râpées innocua Ad1176 Epinards 4 c 0, (9,8) Mélange pois carottes innocua Ad1176 Epinards -20 c 0, (9,4) Poêlée de légumes innocua Ad1176 Epinards -20 c 0, (9,4) Julienne de légumes seeligeri Ad1293 Persil haché -20 c 0, (7,0) Jardinière de légumes seeligeri Ad1293 Persil haché -20 c 0, (7,0) Brisures de saumon fumé innocua 1 Saumon fumé 10%NaCl 0, (14,4) Lardons de saumon fumé seeligeri BR2 Truite 10% NaCl 0, (6) Truite fumée seeligeri BR2 Truite 10% NaCl 0, (6) Emincé de saumon fumé aux 5 baies innocua 1 Saumon fumé 10%NaCl 0, (6,2) Steak de thon innocua 1 Saumon fumé 10%NaCl 0, (6,2) Merlu blanc innocua 1 Saumon fumé 10%NaCl 0, (6,2) Lait entier en poudre ivanovii Ad680 Lait cru TT 5 min 50 c 2, (6,6) Lait demi écrémé en poudre ivanovii Ad680 Lait cru TT 5 min 50 c 2, (6,6) Lait écrémé en poudre ivanovii Ad680 Lait cru TT 5 min 50 c 2, (6,6) Lait demi écrémé en poudre innocua Ad659 Environnement laiterie TT 10 min 50 c 0, (11,0) Lait en poudre innocua Ad659 Environnement laiterie TT 10 min 50 c 0, (11,0) Lait en poudre écrémé innocua Ad659 Environnement laiterie TT 10 min 50 c 0, (11,0) Lait en poudre écrémé innocua Ad659 Environnement laiterie TT 10 min 50 c 0, (11,0) Eau de rinçage plaque inox welshimeri Ad1270 Environnement volaille TT 8min 50 c 0, (9,2) Eau de rinçage table de saignée welshimeri Ad1262 Environnement TT 8min 50 c 0, (11,2) Eau de refroidissement poulets welshimeri Ad1270 Environnement volaille TT 8min 50 c 0, (9,2) Eau de lavage table saignée welshimeri Ad1262 Environnement TT 8min 50 c 0, (11,2) Eau refroidisseur cous welshimeri Ad1270 Environnement volaille TT 8min 50 c 0, (9,2) Eau refroidisseur cous welshimeri Ad1262 Environnement TT 8min 50 c 0, (11,2) Eau rinçage cutter welshimeri Ad1270 Environnement volaille TT 8min 50 c 0, (9,2) Eau rinçage cutter welshimeri Ad1262 Environnement TT 8min 50 c 0, (11,2) spp monocytogenes ADRIA Développement 78/ janvier 2015

79 Annexe 8 Etude d extension (2011) : Résultats de l exactitude relative H-: colonies sans halo H+: colonies avec halo? : colonies douteuses En caractère gras : échantillons artificiellement contaminés PRODUITS CARNES Méthode ISO Méthode COMPASS Agar EPT stockée 72H à 4 C N éch. Produit Fraser 1/2 Fraser 1 spp Compass- Compass- Confirmations Confirmation autre que Incubation Incubation spp monocytogenes monocytogenes 24h 48h OAA Palcam OAA Palcam Palcam Gram Catalase API spp (24h) spp (48h) spp autre que monocytogenes monocytogenes 421 Allumettes de jambon / = = 422 Boudin blanc - - H- + L.innocua H-? H-? L.innocua = = H- + = 423 Sandwich poulet crudités H+ + H H+ H = = H+ + = 424 Porc à la moutarde / = = 427 Ailes de poulet épicées H+ + H H+ H = = H+ + = 431 Terrine de lapin / = = 432 Jambonneau pané / = = 433 Viande de bœuf / H+ 1col H+ 1col PD PD - / = 434 Viande gros grain poulet H+/H- + H H+ H = = H+/H- + = 444 Tartare de bœuf H-? - H- + L.welshimeri H-? H L.welshimeri = = H- + = 494 Poitrine de porc H+ + H H+ H = = H+/H- + = 495 Viande de poulet H+ + H+/H Viande de dinde H+ + H Viande de faisan H+/H- + H+/H Chipolatas aux herbes L.welshimeri/ H+/H- H+/H L.welshimeri = = H+ + = L.welshimeri/ H+ H L.innocua/ H+/H- H+/H L.welshimeri Concordance 24H Concordance 48H COMPASS Agar Palcam Concordance = = H+/H- + = L.grayi/ = = H+/H- + = H+ + H H+ H = = H+ + = 506 Croque monsieur H+ + H H+ H = = H+ + = 507 Paella H+ + H H+ H = = H+ + = 557 Sandwich au poulet rôti H+ + H H+ H = = H+ + = 558 Aile de volaille / = = 559 Barde H+/H- + H+/H- + L.welshimeri/ H+ H = = 560 Viande de cheval / = = 562 Cubes de poulet H+ + H H+ H = = H+ + = 563 Gras croûte / = = 564 Protéines H+/H- + H+/H- + L.welshimeri/ H+/H- H+/H H+/H- (L.welshimeri) + = L.welshimeri/ = = H+/H- + = 571 Nuggets de dinde - - H- + L.innocua H-? + + L.innocua ND = H-(L.innocua) + = 577 Chili con carne H-? H-? H-? Feuileté jambon emmental H+/H- + H+/H- + L.innocua/ H+/H- H+/H Taboulé au poulet / H-? H-? PPNA - PPNA - - = = L.innocua/ = = H+/H- + = - PPNA - PPNA - - = = 613 Pâté / = = 615 VSM / = = 620 Emincés de dinde H- + H- + L.innocua H- H L.innocua = = H- + = 621 Foies / H-? H-? PPNA - PPNA - - = = Essai effectué sous le couvert de l accréditation ADRIA Développement 79/ janvier 2015

80 PRODUITS CARNES Méthode ISO Méthode COMPASS Agar EPT stockée 72H à 4 C N éch. Produit Fraser 1/2 Fraser 1 spp Compass- Compass- Confirmations Confirmation autre que Incubation Incubation spp monocytogenes monocytogenes 24h 48h OAA Palcam OAA Palcam Palcam Gram Catalase API spp (24h) spp (48h) spp autre que monocytogenes monocytogenes 624 Cubes de poulet / = = 626 Viande triée de poulet 632 Sandwich jambon beurre H+/H-? - H-? + / L.innocua H+/H- H+/H Concordance 24H Concordance 48H COMPASS Agar Palcam Concordance L.welshimeri/ = = H+/H- + = / = = 633 Poulet provençale / = = 638 Croque monsieur / = = 644 Croque monsieur / = = 645 Salami danois - - H-? = = 648 Viande de poulet broyée H+/H- + H+/H- + L.welshimeri/ H+/H- H+/H L.welshimeri/ = = H+/H- + = 650 Saucisse fumée H- + H- + L.innocua H- H L.innocua = = H- + = 656 Pavé de bœuf mariné à l'échalotte H+ + H H+ H = = H+ + = 1043 Maigre de porc H- + H- + L.welshimeri H- H L.welshimeri = = H- + = 1044 Andouille H+ + H H+ H = = H+ + = 1046 Maigre de Mouton H+/H- + H- + L.ivanovii/ L.innocua H+/H- H+/H L.welshimer/ L. ivanovii = = H- + = 1050 Maigre de veau / = = 1051 Gorge de porc / = = 1052 Merguez H- + H- + L.welshimeri H- H L.welshimeri = = H- + = 1053 Sauté de porc H- +1col H- + L.welshimeri H- H L.welshimeri = = H- + = 1054 Steak haché de veau / = = 1055 Tartare de bœuf - - H- + L.welshimeri H- H L.welshimeri = = H- + = 1331 Steak haché charolais H- + H- + L.innocua H- H L.innocua = = H- + = 1332 Steak haché H- + H- + L.innocua H- H L.innocua = = H- + = 1333 Steak haché extra moelleux H- + H- + L.innocua H- H L.innocua = = H- + = ADRIA Développement 80/ janvier 2015

81 N Ech 500 Produit Fromage de chèvre pané Méthode ISO PRODUITS LAITIERS Méthode COMPASS Agar Fraser 1/2 Fraser 1 spp Compass- Compass- Confirmations Confirmation autre que Incubation Incubation spp monocytogenes monocytogenes 24h 48h OAA Palcam OAA Palcam Palcam Gram Catalase API 573 Feuilletés au chèvre H+/H- + H+/H- + spp (24h) spp (48h) spp autre que monocytogenes monocytogenes Concordance 24H Concordance 48H COMPASS Agar EPT stockée 72H à 4 C H+ + H H+ H = = H+ + = L.innocua/ H+/H- H+/H Palcam Concordance L.innocua / = = H+/H- + = 614 Camembert pané / = = 734 Lait cru de brebis n 10 H+ + H+/H- + L.innocua/ H+ H = = H+ + = 735 Lait cru de brebis A / = = 736 Lait cru de brebis C / = = 737 Lait cru de vache T / = = 738 Lait cru de vache T / = = 739 Lait cru de vache T / = = 740 Fromage au lait cru / = = Brie de Maux au lait cru Fromage au lait cru de vache n 8 Fromage non affiné au lait cru de vache n 2 Fromage au lait cru de vache n 8 Fromage non affiné au lait cru de vache n 3 Poudre de lait Poudre de lait Poudre de lait Poudre de lait Poudre de lait col H+ 2col H+ 2col = = - / ND / = = H+ + H+/H Lait cru T38/1 H+/H- + H+/H- + L.innocua/ H+ H = = H+ + = H+ + H H+ H = = H+ + = / = = H+ + H H+ H = = H+ + = H+ + H H+ H = = H+ + = H+ + H H+ H = = H+ + = / = = / = = L.innocua/ H+/+H- H+/+H L.innocua/ = = H+/+H- + = 837 Lait cru T41/1 H- + H- + L.innocua H- H L.innocua = = H- + = 838 Lait cru T42/2 H+ + H+/H- + L.innocua/ H+/H- H+/H L.innocua/ = = H+/H- + = 839 Lait cru T35/ / = = 840 Lait cru T23/ / = = 841 Lait cru 32/1 H+/H- + H+/H- + L.innocua/ H+/H- H+/H L.innocua/ = = H+/H- + = 842 Lait cru 34/2 H+ + H H+ H = = H+ + = 843 Lait cru 31/1 H+/H- + H+/H- + L.innocua / H+/H- H+/H L.innocua/ = = H+/H- + = 844 Lait cru 32/2 H- + H- + L.innocua H- H L.innocua = = H- + = 845 Lait cru 33/ / = = Fromage au lait cru n 10 Fromage au lait cru n 6 Fromage au lait cru n / = = H+ + H H+ H = = H+ + = H+ + H H+ H = = H+ + = 892 Fromage à tartiflette H+ + H H+ H = = H+ + = Essai effectué sous le couvert de l accréditation ADRIA Développement 81/ janvier 2015

82 N Ech Produit Fromage au lait cru de vache n 9 Rocamadour au lait cru Méthode ISO PRODUITS LAITIERS Méthode COMPASS Agar Fraser 1/2 Fraser 1 spp Compass- Compass- Confirmations Confirmation autre que Incubation Incubation spp monocytogenes monocytogenes 24h 48h OAA Palcam OAA Palcam Palcam Gram Catalase API spp (24h) spp (48h) spp autre que monocytogenes monocytogenes / = = H-? - H-? H PPNA Concordance 24H Concordance 48H COMPASS Agar EPT stockée 72H à 4 C Palcam Concordance - - = = H- - = 919 Tomme au lait cru / = = 920 Comté au lait cru - +/ H-? = = - / = 961 Lait frais pasteurisé H-? + H- + L.innocua/ H+/H- H+/H L.innocua/ = = H+/H- + = 962 Lait frais pasteurisé H- + H- + L.seeligeri H-? H L.innocua = = H- + = 963 Lait frais pasteurisé H- + H- + L.innocua H- H L.innocua = = H- + = Fromage au lait cru de vache Camembert au lait cru / = = / = = 1335 Tomme au lait cru H- - H- + L.innocua H-? H-? - / / / 1336 Reblochon au lait cru 1337 Selles sur Cher 1338 Camembert au lait cru - PPND - PPND - - ND ND H-? - ND H- + H- + L.innocua H- H L.innocua = = H- + = 1col H- +1col H- + L.innocua H-1col H L.innocua = = H- + = / H-1col H-1col L.innocua PD PD - / = 1339 Poudre de lait H+ + H H+ H = = H+ + = 1340 Poudre de lait / = = 1341 Poudre de lait H+ + H H+ H = = H+ + = 1576 Lait entier en poudre H+ - H+ - L.ivanovii H+ H L.ivanovii = = H+ + = Lait demi écrémé en poudre Lait écrémé en poudre Lait demi écrémé en poudre H+ +/- H+ - L.ivanovii H+ H L.ivanovii = = H+ + = H+ - H+ - L.ivanovii H+ H L.ivanovii = = H+ + = H- + H- + L.innocua H- H L.innocua = = H- + = 1580 Lait en poudre H- + H- + L.innocua H- H L.innocua = = H- + = Lait en poudre écrémé Lait en poudre écrémé H- + H- + L.innocua H- H L.innocua = = H- + = H- + H- + L.innocua H- H L.innocua = = H- + = ADRIA Développement 82/ janvier 2015

83 N Ech Produit Méthode ISO PRODUITS DE LA MER Méthode COMPASS Agar Fraser 1/2 Fraser 1 spp Compass- Compass- Confirmations Confirmation autre que Incubation Incubation spp monocytogenes monocytogenes 24h 48h OAA Palcam OAA Palcam Palcam Gram Catalase API 428 Colin d'alaska H+/H- + H+/H Sandwich saumon fumé fromage blanc L.innocua/ H+/H- H+/H spp (24h) spp (48h) spp autre que monocytogenes monocytogenes Concordance 24H Concordance 48H COMPASS Agar EPT stockée 72H à 4 C Palcam Concordance L.innocua/ = = H+/H- + = / = = 436 Filet de merlan / = = 437 Colin pané H+ + H H+ H = = H+/H- + = 438 Saumon fumé H+ + H H+ H = = H+/H- + = 440 Terrine de truite et légumes H+ + H H+ H = = H+/H- + = 442 Terrine de saumon H+ + H H+ H = = H+ + = 496 Tarama de saumon / H-? Coquilles de fruits de mer - PPNA = = - H+ + H H+ H = = H+ + = 509 Truite de mer H+ + H H+ H = = H+ + = 511 Filet de Tilapia H+ + H Saumon fumé H+/H- + H+/H Merlu blanc pané H+/H- + H+/H Taboulé aux fruits de mer Aumônières de Saint Jacques Paniers de Saint - Jacques aux légumes L.innocua/ H+ H L.innocua/ H+/H- H+/H L.innocua/ H+/H- H+/H L.innocua/ = = H+/H- + = L.innocua/ = = H+/H- + = L.innocua/ = = H+/H- + = / = = H-? H-? H-? PPNA - PPNA - - = = H- - H- + L.innocua H-2col H-2col L.innocua = = H-(L.innocua) + = 618 Poisson pané H- + H- + L.innocua H- H L.innocua = = H+(L.mono)/H- + = 619 Colin - - H H+ H = = H+ + = 623 Colin pané / = = 625 Coquilles Saint- Jacques H- - H = = 627 Panier de saumon H+ - H H+ H = = H+ + = 628 Tarama de saumon / = = 629 Merlu pané / = = Poisson pané à la tomate Tranche de colin pané Coquille de fruits de mer / = = H+/H- + H- + L.innocua/ H+/H- H+/H L.innocua/ = = H+/H- + = / = = 637 Verrine de saumon - - H-? = = 639 Filet de Tilapia H+ + H+/H H+ H = = H+ + = 640 Rillettes de thon H+/H- + H+/H Bâtonnets colin pané H+/H- + H+/H Filet de Merlan Meunière 643 Feuilletés de saumon H+/H- + H+/H- + L.innocua/ H+ H = = L.innocua / H+ H+/H H+/H- (L.innocua) + = L.innocua/ = = H+/H- + = - - H-? = = L.innocua/ H+/H- H+/H L.innocua/ = = H+/H- + = 646 Beurre de saumon H+ + H H+ H = = H+/H- + = 649 Hoki poêlé H+ + H H+ H = = H+ + = 655 Filet colin grillé / = = Essai effectué sous le couvert de l accréditation ADRIA Développement 83/ janvier 2015

84 N Ech Produit Méthode ISO PRODUITS DE LA MER Méthode COMPASS Agar Fraser 1/2 Fraser 1 spp Compass- Compass- Confirmations Confirmation autre que Incubation Incubation spp monocytogenes monocytogenes 24h 48h OAA Palcam OAA Palcam Palcam Gram Catalase API 1045 Colin d'alaska H+/H- + H Bâtonnets de colin d'alaska Croquettes poisson nature Terrine de Saint Jacques H+/H- + H+/H- + H+/H- +2col H+/H Poisson pané cuit H+/H- + H+/H Tartare poisson/légumes Pithiviers saint jacques crevettes Tomate poisson blanc pané Feuilleté Saint Jacques Brisures de saumon fumé Lardons de saumon fumé spp (24h) spp (48h) spp autre que monocytogenes monocytogenes Concordance 24H Concordance 48H COMPASS Agar EPT stockée 72H à 4 C L.innocua / H+/H- H+/H L.innocua = = H- + = L.innocua/ H+/H- H+/H L.innocua/ H+/H- H+/H Palcam Concordance L.innocua/ = = H- + = L.innocua/ = = H- + = H+ +2col H H+ H = = H+ + = L.innocua/ H+/H- H+/H L.innocua/ = = H+/H- + = H+ + H H+ H = = H+ + = H- +1col H- + L.innocua H- H L.innocua = = H- + = H+ + H H+/H- H+/H = = H+ + = H+/H- + H+/H- - L.innocua/ H+/H- H+/H L.innocua/ = = H+/H- + = H- + H- + L.innocua H- H L.innocua = = H- + = H- + H- + L.welshimeri H- H L.welshimeri = = H- + = 1351 Truite fumée H- + H- + L.welshimeri H- H L.welshimeri = = H- + = 1352 Emincé de saumon fumé aux 5 baies H- + H- + L.innocua H- H L.innocua = = H- + = 1353 Steak de thon H- + H- + L.innocua H- H L.innocua = = H- + = 1354 Merlu blanc H- + H- + L.innocua H- H L.innocua = = H- + = ADRIA Développement 84/ janvier 2015

85 N Ech Produit Méthode ISO VEGETAUX Méthode COMPASS Agar 425 Riz à l'espagnole H+/H- + H+/H Chou fleur H+/H- + H+/H- + L.innocua/ H+/H- H+/H L.innocua / H+/H- H L.innocua/ spp (24h) spp (48h) spp autre que monocytogenes monocytogenes Concordance 24H Concordance 48H COMPASS Agar EPT stockée 72H à 4 C Palcam Concordance = = H+/H- + = L.innocua/ = = H+/H- + = 429 Poêlée de légumes / = = 435 Brocolis H+ + H H+ H = = H+/H- + = 439 Bol de soupe moulinée H+ + H+ + L.innocua/ H+ H = = H+/H- + = 441 Epinards à la crème H- + H- + L.innocua H- H L.innocua = = H+/H- + = 443 Potage surgelé / = = 501 Poêlée paysanne H+/H- + H H+ H = = H+ + = 502 Poêlée Savoyarde H+ + H H+ H = = H+ + = 503 Pâte feuilletée H+ + H H+ H = = H+ + = 505 Taboulé oriental / = = 508 Pommes allumettes H+ + H H+ H = = H+ + = 510 Persil / = = 512 Purée carottes, navets H+ - H H+ H = = H+ + = 514 Courgettes émincées H+ + H H+ H = = H+ + = 516 Légumes couscous H+ + H H+ H = = H+ + = 517 Julienne de légumes H+ + H H+ H = = H+ + = 556 Quinoa H-? - H-? = = 565 Enrobant H+/H- + H+/H- + L.innocua/ H+/H- H+/H L.innocua/ = = H+/H- + = 566 Ratatouille / = = 567 Courgettes émincées H+/H- + H+/H- + L.innocua/ H- H+/H L.innocua/ = = H+/H- + = 568 Légumes couscous / = = 569 Persil plat / = = 570 Légumes couscous / = = 574 Brocolis / = = 576 Ciboulette H-? - H H-? H-? Fagots de haricots H+/H- + H+/H- + - PPNA - PPNA - - = = L.innocua/ H+ H = = 610 Ciboulette / = = 611 Potage surgelé - - H H+1col H+1col = = H+ + = 612 Poivrons en lanières / H-? H-? PPNA - PPNA - - = = 616 Sandwich H+ + H H+ H = = H+ + = 617 Riz cuisiné / = = 622 Salade composée / = = 635 Pâte brisée au beurre / = = 636 Paniers épinards chèvre / = = 647 Champignons H- - H- + L.innocua H- H L.innocua = = H- + = 651 Mélange de légumes surgelés H- + H- + L.innocua H- H L.innocua = = H- + = Fraser 1/2 Fraser 1 spp Compass- Compass- Confirmations Confirmation autre que Incubation Incubation spp monocytogenes OAA Palcam OAA Palcam monocytogenes 24h 48h Palcam Gram Catalase API H+/H- (L.innocua) + = Essai effectué sous le couvert de l accréditation ADRIA Développement 85/ janvier 2015

86 N Ech Produit Méthode ISO VEGETAUX Méthode COMPASS Agar Fraser 1/2 Fraser 1 spp Compass- Compass- Confirmations Confirmation autre que Incubation Incubation spp monocytogenes OAA Palcam OAA Palcam monocytogenes 24h 48h Palcam Gram Catalase API spp (24h) spp (48h) spp autre que monocytogenes monocytogenes 652 Pulpe d'avocat / = = 653 Julienne de légumes / = = Pommes de terre crue Rouleau de pâte brisée Croquettes ail et fines herbes / = = 1H+ - H H-?1col - / / / - - PPND Concordance 24H Concordance 48H COMPASS Agar EPT stockée 72H à 4 C Palcam Concordance - - ND ND H-? - ND H- + H- + L.welshimeri H- H L.welshimeri = = H- + = 1048 Champignons H- - H- + L.innocua H- H L.innocua = = H- + = 1056 Poêlée à la Bretonne H+ + H H+ H = = H+ + = 1200 Champignons H- - H- + L.innocua H- H L.innocua = = H- + = 1201 Epinards branches H+/H- + H+/H- + L.innocua H+/H- H+/H L.innocua/ = = H- + = 1203 Petits pois lardons H+ + H H+ H = = H+ + = 1205 Epinards hachés à la crème / H-? - / / / - - PPNA - - = = H-? - = 1207 Persil plat / = = 1342 Emincé de poireaux H- + H- + L.innocua H- H L.innocua = = H- + = 1343 Chou blanc râpé H- + H- + L.innocua H- H L.innocua = = H- + = 1344 Carottes râpées H- + H- + L.innocua H- H L.innocua = = H- + = 1345 Mélange pois carottes H- + H- + L.innocua H- H L.innocua = = H- + = 1346 Poêlée de légumes H- + H- + L.innocua H- H L.innocua = = H- + = Julienne de légumes Jardinière de légumes H- + H- + L.seeligeri H- H L.seeligeri = = H- + = H- + H- + L.seeligeri H- H L.seeligeri = = H- + = ADRIA Développement 86/ janvier 2015

87 N Ech Produit Eau de refroidissement des cous (Volaille) Eau de refroidissement poulet B Eau de refroidissement poulet Eau de lavage mélangeur VSM Eau de décongélation I1 crevettes Eau de rinçage I2 crevettes Méthode ISO ECHANTILLONS DE L ENVIRONNEMENT Méthode COMPASS Agar Fraser 1/2 Fraser 1 spp Compass- Compass- Confirmations Confirmation autre que Incubation Incubation spp monocytogenes OAA Palcam OAA Palcam monocytogenes 24h 48h Palcam Gram Catalase API spp (24h) spp (48h) spp autre que monocytogenes monocytogenes / = = / = = H+/H- + H- + L.innocua/ H- H+ 1col/H Concordance 24H Concordance 48H COMPASS Agar EPT stockée 72H à 4 C Palcam Concordance L.innocua / = = H+ 1col/H- + = / = = / = = / = = 733 Saumure I3 crevettes / = = Lingette poussières dessu bloc (saumon) Lingette tapis peux co-produit (saumon) Lingette balance coproduit (saumon) Lingette eau résiduelle près de balance co-produit (saumon) Lingette sol près porte coulissante entrefiletage et coproduit (saumon) Lingette bac gris salle de lavage (saumon) Lingettes élévateur shida surface (crevettes) Lingette élévateur Neautec surface (crevettes) Lingette tapis Shida surface (crevettes) Lingette tapis transversal surface (crevettes) Lingette plafond dessus Neautec environnement (crevettes) Lingette groupe froid S750 environnement (crevettes) Eau après peleuse (saumon) Eau résiduelle avant injecteuse en dessous tapis parage n 10 (saumon) Eau résiduelle en dessous épineuse n 11 (saumon) / = = / = = / = = / = = / = = / = = / = = / = = / = = / = = / = = / = = / = = / = = / = = Essai effectué sous le couvert de l accréditation ADRIA Développement 87/ janvier 2015

88 N Ech Produit Eau dessous tapis évacuation déchet parage n 12 (saumon) Chiffonnette sol salage n 7 (saumon) Chiffonnette poussière sous bloc en maturation salage n 8 (saumon) Chiffonnette tour accumulatrice (crevettes) Chiffonnette dessus tapis sortie peleuse Chiffonnette guide poisson sur tapis avant peleuse Chiffonnette dessus tapis parage Chiffonnette tapis bleu perforé Chiffonnette dessus tapis lave poisson Chiffonnette tapis bleu perforé Méthode ISO ECHANTILLONS DE L ENVIRONNEMENT Méthode COMPASS Agar Fraser 1/2 Fraser 1 spp Compass- Compass- Confirmations Confirmation autre que Incubation Incubation spp monocytogenes OAA Palcam OAA Palcam monocytogenes 24h 48h Palcam Gram Catalase API spp (24h) spp (48h) spp autre que monocytogenes monocytogenes / = = / = = / = = / = = / = = / = = / = = Concordance 24H Concordance 48H COMPASS Agar EPT stockée 72H à 4 C H- + H- + L.innocua H- H L.innocua = = H- + = H- - H- - L.innocua H L.innocua ND = H- + = / = = 913 Chiffonnette godet / = = 914 Chiffonnette tuyau plafond H+ + H+ + L.ivanovii H+ H L.ivanovii = = H+2col + = 915 Chiffonnette moule H- + H- + L.innocua H- H L.innocua = = H- + = Eau tuyau en dessous laveuse poisson Eau sol près laveuse Chiffonnette table de saignée Lingette goulotte hampe Lingette guide de marquage Chiffonnette sol 1 (volaille) Chiffonnette chariot (volaille) Chiffonnette hotte (volaille) Chiffonnette tapis montant (volaille) Chiffonnette carters chargeur (volaille) Chiffonnette sol 2 (volaille) Chiffonnette tapis L1 Meyn (volaille) Chiffonnette tapis entrée surgel L1 (volaille) Chiffonnette tapis sortie L1 (volaille) H- +/- H- + L.innocua H-? H Palcam Concordance L.seeligeri/ L.innocua = = H- + = / = = H- + H- + L.innocua/ H+/H- H+/H H- + H- + L.innocua H+/H- H+/H H- + H- + L.innocua/ H+/H- H+/H L.innocua/ = = H+/H- + = L.innocua/ = = H+/H- + = L.innocua/ = = H+/H- + = H+ + H H+ H = = H+ + = H+ + H H+ H = = H+ + = / = = H+ + H H+ H = = H+ + = / = = H+ + H H+ H = = H+ + = / = = / = = H- + H- + L.innocua H- H L.innocua = = H- + = Essai effectué sous le couvert de l accréditation ADRIA Développement 88/ janvier 2015

89 N Ech Produit Chiffonnette lavesemelle (volaille) Eau de refroidissement Eau de refroidissement Eau de rinçage plaque inox Eau de rinçage table de saignée Eau de refroidissement poulets Eau de lavage table saignée Eau refroidisseur cous Eau refroidisseur cous Méthode ISO ECHANTILLONS DE L ENVIRONNEMENT Méthode COMPASS Agar Fraser 1/2 Fraser 1 spp Compass- Compass- Confirmations Confirmation autre que Incubation Incubation spp monocytogenes OAA Palcam OAA Palcam monocytogenes 24h 48h Palcam Gram Catalase API spp (24h) spp (48h) spp autre que monocytogenes monocytogenes / = = H+/H- + H+/H- + Concordance 24H Concordance 48H COMPASS Agar EPT stockée 72H à 4 C L.innocua/ H- H L.innocua = = H+(L.mono)/H- + = H- + H- + L.innocua H- H L.innocua = = H- + = H- + H- + L.welshimeri H- H L.welshimeri = = H- + = H- + H- + L.welshimeri H- H L.welshimeri = = H- + = H+ + H+/H- + L.welshimeri/ H+/H- H+/H Palcam Concordance L.welshimeri/ = = H+/H- + = H- + H- + L.welshimeri H- H L.welshimeri = = H- + = H- + H- + L.welshimeri H- H L.welshimeri = = H- + = H- + H- + L.welshimeri H- H L.welshimeri = = H- + = 1678 Eau rinçage cutter H- + H- + L.welshimeri H- H L.welshimeri = = H- + = 1679 Eau rinçage cutter H- + H- + L.welshimeri H- H L.welshimeri = = H- + = 1680 Chiffonnette jambière H+/H- + H+/H Chiffonnette barre anti retour H+/H- + H+/H- + L.innocua/ H+/H- H+/H L.innocua/ H+/H- H+/H L.innocua/ = = H+/H- + = L.innocua/ = = H+/H- + = Essai effectué sous le couvert de l accréditation ADRIA Développement 89/ janvier 2015

90 Annexe 9 - Etude d extension (2011) : Résultats bruts de l inclusivité et l exclusivité SOUCHES POSITIVES ( monocytogenes) COMPASS Genre Espèce Référence Origine Agar 24H COMPASS Agar 48H n Couleur de la colonie Taille Halo d opacification Couleur de la colonie Taille Halo d opacification 1. monocytogenes 153 Munster bleue 2 + bleue monocytogenes 909 lait bleue 2 + bleue monocytogenes 910 lait bleue 2 + bleue monocytogenes 917 lait bleue 2 + bleue monocytogenes lait bleue 2 + bleue monocytogenes lait bleue 2 + bleue monocytogenes 1011/1410 brocolis surgelés bleue 2 + bleue monocytogenes 1016/1413 brocolis surgelés bleue 2 + bleue monocytogenes lait bleue 2 + bleue monocytogenes 1972/2399 tourte aux champignons bleue 2 + bleue monocytogenes 1973/2400 quiche lorraine bleue 2 + bleue monocytogenes 2407/3139 tripes à la tomate bleue 2 + bleue monocytogenes 2760/3145 parures de poitrine bleue 2 + bleue monocytogenes croque Monsieur bleue 2 + bleue monocytogenes 38/181 saucisse de Toulouse bleue 2 + bleue monocytogenes 5721/6179 lardons fumés bleue 2 + bleue monocytogenes 6072 saumon fumé micro-colonies bleues <0,5 + bleue monocytogenes 7111/7516 rillettes bleue 2 + bleue monocytogenes 850/109 assiette nordique bleue 2 + bleue monocytogenes 86/690 produit alimentaire bleue 2 + bleue monocytogenes 87/6172 produit alimentaire bleue 2 + bleue monocytogenes 877/113 écouvillon tapis sur tunnel de glaçage bleue 2 + bleue monocytogenes 88/7137 produit alimentaire bleue 2 + bleue monocytogenes 913/1 048 boudin noir bleue 2 + bleue 3 + ADRIA Développement 90/ janvier 2015

91 SOUCHES POSITIVES ( monocytogenes) COMPASS Genre Espèce Référence Origine Agar 24H COMPASS Agar 48H n Couleur de la colonie Taille Halo d opacification Couleur de la colonie Taille Halo d opacification 25. monocytogenes A00C014 Chipolatas bleue 2 + bleue monocytogenes A00C015 Chipolatas bleue 2 + bleue monocytogenes A00C022 merguez bleue 2 + bleue monocytogenes A00C024 chipolatas aux herbes bleue 2 + bleue monocytogenes A00C036 pintade bleue 2 + bleue monocytogenes A00C039 diots de Savoie bleue 2 + bleue monocytogenes A00C040 museau bleue 2 + bleue monocytogenes A00C041 chair à saucisse bleue 2 + bleue monocytogenes A00C042 saucisse de Toulouse bleue 2 + bleue monocytogenes A00C043 bacon fumé bleue 2 + bleue monocytogenes A00C044 canette de barbarie bleue 2 + bleue monocytogenes A00C052 osso bucco de dinde bleue 2 + bleue monocytogenes A00C053 gésier bleue 2 + bleue monocytogenes A00C054 cœur de bœuf bleue 2 + bleue monocytogenes A00C055 saucisse de Toulouse bleue 2 + bleue monocytogenes A00E008 tapis reconstitution bleue 2 + bleue monocytogenes A00E033 trancheuse bleue 2 + bleue monocytogenes A00E049 support tapis fileteuse bleue 2 + bleue monocytogenes A00E082 environnement saumon fumé bleue 2 + bleue monocytogenes A00L097 lait bleue 2 + bleue monocytogenes A00L101 lait bleue 2 + bleue monocytogenes A00L107 lait bleue 2 + bleue monocytogenes A00M009 saumon fumé bleue 2 + bleue monocytogenes A00M019 saumon fumé bleue 2 + bleue monocytogenes A00M020 saumon fumé bleue 2 + bleue monocytogenes A00M021 saumon fumé bleue 2 + bleue 3 + ADRIA Développement 91/ janvier 2015

92 SOUCHES POSITIVES ( monocytogenes) COMPASS Genre Espèce Référence Origine Agar 24H COMPASS Agar 48H n Couleur de la colonie Taille Halo d opacification Couleur de la colonie Taille Halo d opacification 51. monocytogenes A00M023 saumon fumé bleue 2 + bleue monocytogenes A00M029 mat. 1ère norv SF bleue 2 + bleue monocytogenes A00M030 matière première saumon fumé bleue 2 + bleue monocytogenes A00M032 saumon norvégien bleue 2 + bleue monocytogenes A00M045 saumon fumé bleue 2 + bleue monocytogenes A00M050 mat. 1ère espadon bleue 2 + bleue monocytogenes A00M051 mat. 1ère norv SF bleue 2 + bleue monocytogenes A00M080 mat première saumon bleue 2 + bleue monocytogenes A00M081 saumon fumé bleue 2 + bleue monocytogenes A00M088 saumon fumé irlandais bleue 2 + bleue monocytogenes A00M089 saumon fumé norvégien bleue 2 + bleue monocytogenes A00M096 saumon fumé écossais bleue 2 + bleue monocytogenes A00M111 saumon fumé écossais bleue 2 + bleue monocytogenes A00M112 saumon fumé norvégien bleue 2 + bleue monocytogenes A00M113 saumon fumé irlandais bleue 2 + bleue monocytogenes A00M123 saumon fumé bleue 2 + bleue monocytogenes Ad148 produit de la mer bleue 2 + bleue monocytogenes Ad235 volaille bleue 2 + bleue monocytogenes Ad252 produit laitier bleue 2 + bleue monocytogenes Ad253 pâte pressée cuite bleue 2 + bleue monocytogenes Ad255 produit laitier bleue 2 + bleue monocytogenes Ad258 produit laitier bleue 2 + bleue monocytogenes Ad260 pâte pressée bleue 2 + bleue monocytogenes Ad262 produit laitier bleue 2 + bleue monocytogenes Ad265 langue bleue 2 + bleue monocytogenes Ad266 poulet bleue 2 + bleue 3 + ADRIA Développement 92/ janvier 2015

93 SOUCHES POSITIVES ( monocytogenes) COMPASS Genre Espèce Référence Origine Agar 24H COMPASS Agar 48H n Couleur de la colonie Taille Halo d opacification Couleur de la colonie Taille Halo d opacification 77. monocytogenes Ad267 saucisson sec bleue 2 + bleue monocytogenes Ad268 jambon de Vendée bleue 2 + bleue monocytogenes Ad270 rosette de Lyon bleue 2 + bleue monocytogenes Ad271 filet de bacon bleue 2 + bleue monocytogenes Ad272 saucisse sèche d'auvergne bleue 2 + bleue monocytogenes Ad273 jambon sec de Savoie bleue 2 + bleue monocytogenes Ad274 assortiment asiatique bleue 2 + bleue monocytogenes Ad275 cervelas pistaché de Lyon bleue 2 + bleue monocytogenes Ad276 saucisse de Strasbourg bleue 2 + bleue monocytogenes Ad277 chorizo doux bleue 2 + bleue monocytogenes Ad278 poitrine fumée bleue 2 + bleue monocytogenes Ad279 poêlée parisienne cuisinée bleue 2 + bleue monocytogenes Ad280 lardons nature bleue 2 + bleue monocytogenes Ad281 raviolines au Roquefort bleue 2 + bleue monocytogenes Ad285 poivrons verts bleue 2 + bleue monocytogenes Ad291 lardons fumés bleue 2 + bleue monocytogenes Ad292 knacky bleue 2 + bleue monocytogenes Ad293 coppa en tranches bleue 2 + bleue monocytogenes Ad294 clinique bleue 2 + bleue monocytogenes Ad295 clinique bleue 2 + bleue monocytogenes Ad299 coques bleue 2 + bleue monocytogenes Ad470 fromage bleue 2 + bleue monocytogenes Ad474 saumon fumé bleue 2 + bleue monocytogenes Ad494 piémontaise bleue 2 + bleue monocytogenes Ad523 fromage à raclette bleue 2 + bleue monocytogenes Ad532 fruits bleue 2 + bleue 3 + ADRIA Développement 93/ janvier 2015

94 SOUCHES POSITIVES ( monocytogenes) COMPASS Genre Espèce Référence Origine Agar 24H COMPASS Agar 48H n Couleur de la colonie Taille Halo d opacification Couleur de la colonie Taille Halo d opacification 103. monocytogenes Ad534 fruits bleue 2 + bleue monocytogenes Ad543 poivron lamelle bleue 2 + bleue monocytogenes Ad544 oignon préfrit bleue 2 + bleue monocytogenes Ad545 salade chou carotte bleue 2 + bleue monocytogenes Ad546 farine de blé noir bleue 2 + bleue monocytogenes Ad548 salle désarêtage bleue 2 + bleue monocytogenes Ad549 atelier charcuterie de poisson bleue 2 + bleue monocytogenes Ad550 égoût extérieur bleue 2 + bleue monocytogenes Ad551 lave semelles bleue 2 + bleue monocytogenes Ad610 lait bleue 2 + bleue monocytogenes Ad611 lait bleue 2 + bleue monocytogenes Ad612 Livarot bleue 2 + bleue monocytogenes Ad613 Munster bleue 2 + bleue monocytogenes Ad614 environnement laitier bleue 2 + bleue monocytogenes Ad615 environnement laitier bleue 2 + bleue monocytogenes Ad617 environnement laitier bleue 2 + bleue monocytogenes Ad618 Munster bleue 2 + bleue monocytogenes Ad619 fromage bleue 2 + bleue monocytogenes Ad620 environnement laitier bleue 2 + bleue monocytogenes Ad621 environnement laitier (sol) bleue 2 + bleue monocytogenes Ad622 fromage bleue 2 + bleue monocytogenes Ad623 chapelure (laiterie) bleue 2 + bleue monocytogenes Ad624 environnement laitier bleue 2 + bleue monocytogenes Ad625 environnement laitier bleue 2 + bleue monocytogenes Ad626 Gorgonzola bleue 2 + bleue monocytogenes Ad627 emballage produit laitier bleue 2 + bleue 3 + ADRIA Développement 94/ janvier 2015

95 SOUCHES POSITIVES ( monocytogenes) COMPASS Genre Espèce Référence Origine Agar 24H COMPASS Agar 48H n Couleur de la colonie Taille Halo d opacification Couleur de la colonie Taille Halo d opacification 129. monocytogenes Ad628 emballage produit laitier bleue 2 + bleue monocytogenes Ad629 Cantal bleue 2 + bleue monocytogenes Ad630 Cantal bleue 2 + bleue monocytogenes Ad631 environnement laitier bleue 2 + bleue monocytogenes Ad632 lait bleue 2 + bleue monocytogenes Ad633 environnement laitier bleue 2 + bleue monocytogenes Ad634 environnement laitier (sol) bleue 2 + bleue monocytogenes ADQP105 saumon fumé bleue 2 + bleue monocytogenes AER100 poulet bleue 2 + bleue monocytogenes AER101 lait bleue 2 + bleue monocytogenes AER102 saumure bleue 2 + bleue monocytogenes AER103 volaille bleue 2 + bleue monocytogenes BR32 truite bleue 2 + bleue monocytogenes CL3:29 environnement produit carné bleue 2 + bleue monocytogenes LMH180 salade fraîcheur bleue 2 + bleue monocytogenes V2/124 porc bleue 2 + bleue monocytogenes V5/126 bœuf bleue 2 + bleue monocytogenes V8/127 bœuf bleue 2 + bleue monocytogenes Ad 664 Fromage non affiné au lait cru bleue 2 + bleue monocytogenes Ad 665 Lait cru bleue 2 + bleue monocytogenes Ad 666 Coquelet bleue 2 + bleue monocytogenes Ad 667 Cuisse de poulet bleue 2 + bleue monocytogenes Ad 668 Aile de poulet bleue 2 + bleue monocytogenes Ad 669 rillettes bleue 2 + bleue monocytogenes Ad 670 Saumon fumé bleue 2 + bleue 3 + ADRIA Développement 95/ janvier 2015

96 SOUCHES POSITIVES ( autre que monocytogenes) COMPASS Agar 24H COMPASS Agar 48H n Genre Espèce Référence Origine TSYEA Couleur de Halo Couleur de Halo Taille Taille la colonie d opacification la colonie d opacification 1 innocua 1 chutes de saumon fumé + Bleue 2 - Bleue 2-2 innocua T727 produit carné + Bleue 2 - Bleue 2-3 innocua NCTC Bleue 2 - Bleue 2-4 innocua T654 fromage + Bleue 0,5-1 - Bleue innocua ATCC33090 cervelle de bœuf + Bleue 2 - Bleue 2-6 innocua CIP Bleue 2 - Bleue 2-7 innocua pannes de poitrine de porc + Bleue 2 - Bleue 2-8 innocua lait + Bleue 2 - Bleue 2-9 innocua lait + Bleue 2 - Bleue 2-10 innocua Ad 658 Gorgonzola + Bleue 2 - Bleue 2-11 innocua Transporteur fromagerie transporteur + Bleue 2 - Bleue 2-12 innocua 902 produit laitier + Bleue 2 - Bleue 2-13 innocua DSM Bleue 2 - Bleue 2-14 innocua Ad663 haloirs + Bleue 2 - Bleue 2-15 innocua Ad660 chapelure + Bleue 2 - Bleue 2-16 innocua Ad657 Cantal + Bleue 2 - Bleue 2-17 innocua As661 Pont L'Evêque + Bleue 2 - Bleue 2-18 innocua Ad656 fromage à pâte molle + Bleue 2 - Bleue 2-19 innocua Ad655 saumure + Bleue 2 - Bleue 2-20 innocua Ad653 environnement + Bleue 2 - Bleue 2-21 innocua Ad654 produit laitier + Bleue 2 - Bleue 2-22 innocua Ad671 lardons fumés + bleue 2 - Bleue 2-23 ivanovii londoniensis CIP Bleue 0,5-1 + Bleue ivanovii CIP7842T + Bleue 0,5-1 + Bleue ivanovii CIP Bleue 0,5-1 + Bleue ivanovii CIP truite + Bleue 0,5-1 + Bleue ADRIA Développement 96/ janvier 2015

97 n SOUCHES POSITIVES ( autre que monocytogenes) Genre Espèce Référence Origine TSYEA COMPASS Agar 24H Couleur de la colonie Taille Halo d opacification COMPASS Agar 48H Couleur de Halo Taille la colonie d opacification 27 ivanovii BR11 environnement de pisciculture, filet anti-oiseaux + Bleue 0,5-1 + Bleue ivanovii BR15 environnement de pisciculture, paroi de bassin + Bleue 0,5-1 + Bleue ivanovii Ad466 rognons de veau + Bleue 0,5-1 + Bleue ivanovii Ad662 emballage + Bleue Bleue ivanovii Ad648 (AERIAL 28) Collection + Bleue 1 + Bleue ivanovii L2-2 Volaille + Bleue Bleue ivanovii L2-9 Lait de brebis + Bleue Bleue ivanovii L2-11 Fromage au lait cru + Bleue Bleue ivanovii L2-12 Poudre de lait + Bleue Bleue ivanovii L41 Lait cru + Bleue Bleue ivanovii Ad616 environnement laitier (sol) + bleue faible Bleue seeligeri CIP Bleue µcolonie - Bleue 0, seeligeri CNR Bleue 0,1-0,5 - Bleue 0, seeligeri BR1 truite + Bleue 0,1-0,5 - Bleue 0, seeligeri BR4 poisson + Bleue 0,1-0,5 - Bleue 0, seeligeri BR18 environnement de pisciculture, paroi de bassin + Bleue 0,1-0,5 - Bleue 0, seeligeri Ad652 pédiluve + Bleue µcolonie - Bleue 0, seeligeri Ad649 (AERIAL 26) Fromage + Bleue µcolonie - Bleue 0, seeligeri Ad651 (AERIAL 46) Environnement + Bleue µcolonie - Bleue légère 46 seeligeri Ad674 Munster + Bleue µcolonie - Bleue welshimeri CIP Bleue 2 - Bleue 2-48 welshimeri CIP Bleue 0,1-0,5 - Bleue 0, welshimeri Ad650 (AERIAL 45) Volaille + Bleue 0,5 - Bleue welshimeri volaille + bleue 2 - Bleue grayi ATCC Bleu pâle 0,5-1 - Bleue 3-52 grayi CIP Bleu pâle 0,5-1 - Bleue 3 - ADRIA Développement 97/ janvier 2015

98 SOUCHES NEGATIVES COMPASS Agar 24H COMPASS Agar 48H n Genre Espèce Référence Origine TSYEA Couleur de Halo Couleur de Halo Taille Taille la colonie d opacification la colonie d opacification 1 Bacillus cereus 1 coule d'œuf + Pas de pousse / - Pas de pousse / + 2 Bacillus cereus 8 pâtes à l'espagnole + Pas de pousse / - Pas de pousse / / 3 Bacillus cereus 11 garniture riz-purée + Pas de pousse / - Pas de pousse / + au point d'inoculation 4 Bacillus cereus 14.2 île flottante + Pas de pousse / - Pas de pousse / / 5 Bacillus cereus 16 spaghettis aux fruits de mer + Pas de pousse / + Pas de pousse / + 6 Bacillus cereus 17 riz au lait + Pas de pousse / + Pas de pousse / + 7 Bacillus cereus 20 sauce poulet-carottes + Pas de pousse / + Pas de pousse / + au point d'inoculation 8 Bacillus cereus 21 riz au curry + Pas de pousse / - Pas de pousse / + au point d'inoculation 9 Bacillus cereus 22 farine de blé + Blanche étalée, centre Blanche étalée, >2 + bleu centre bleu > Bacillus cereus 26 lait cru de vache + Pas de pousse / + Pas de pousse / + 11 Bacillus cereus 30 crevettes crues décortiquées + au point + au point + Pas de pousse / Pas de pousse / ionisées à 3Kgray d'inoculation d'inoculation 12 Bacillus cereus 31 beurre en poudre + Pas de pousse / + Pas de pousse / + 13 Bacillus cereus Ad420 poudre de caséinates + Blanche étalée, centre Blanche étalée, >2 + bleu centre bleu > Bacillus cereus Ad465 terrine de saumon + Pas de pousse / - Pas de pousse / - 15 Bacillus cereus Ad483 Punch + Pas de pousse / + Pas de pousse / + 16 Bacillus cereus Ad495 farine de riz + Blanche étalée, centre Blanche étalée, >2 + vert centre vert > Bacillus cereus INRA104 purée conservée au froid + Pas de pousse / - Pas de pousse / - 18 Bacillus cereus Ad608 pâte à baguette + Blanche étalée, centre Blanche étalée, >2 + bleu turquoise centre bleu turquoise > Bacillus cereus 54 produit laitier + Pas de pousse / - Quelques colonies blanches étalées >2 - ADRIA Développement 98/ janvier 2015

99 ADRIA Développement 99/ janvier 2015 SOUCHES NEGATIVES COMPASS Agar 24H COMPASS Agar 48H n Genre Espèce Référence Origine TSYEA Couleur de Halo Couleur de Halo Taille Taille la colonie d opacification la colonie d opacification 20 Bacillus cereus Ad607 environnement + Turquoise étalée >2 + Turquoise étalée > Bacillus cereus Ad609 lingette égout, atelier produit laitier + Blanche, centre vert >2 - Blanche, centre vert >2-22 Bacillus weihenstephanensis N12 ovoproduit + Pas de pousse / - Pas de pousse / - 23 Bacillus weihenstephanensis INRA87 purée conservée au froid + Pas de pousse / - Pas de pousse / - 24 Bacillus weihenstephanensis INRA140 plat cuisiné + Pas de pousse / - Pas de pousse / - 25 Bacillus weihenstephanensis INRA171 légume pasteurisé + Pas de pousse / - Pas de pousse / - 26 Bacillus weihenstephanensis A1 ovoproduit + Pas de pousse / - Pas de pousse / + au point d'inoculation 27 Bacillus weihenstephanensis SDA + au point produit laitier + Pas de pousse / - Pas de pousse / NFFE640 d'inoculation 28 Bacillus thuringiensis IEBC T31 végétaux + Pas de pousse / - Pas de pousse / - 29 Bacillus licheniformis 7600 produit laitier + Blanche étalée >2 - Blanche étalée >2-30 Bacillus licheniformis LMSA 049 ovoproduit + Blanche étalée, centre Blanche étalée, >2 - vert centre vert >2-31 Bacillus pumilus 7572 produit laitier + Blanche 01-0,5 - Bleue étalée, baveuse Bacillus pumilus INRA 260 légumes + Verte claire Blanche étalée, centre bleu >2-33 Bacillus circulans B8 produit laitier + Turquoise 1 - Bleue 1-2 Halo éclaircissement 34 Bacillus coagulans 7179 produit laitier + Pas de pousse / - Pas de pousse / - 35 Bacillus sphaericus / produit laitier + Blanche 1 - Marron étalée >2-36 Bacillus subtilis 7750 produit laitier + Pas de pousse / - Pas de pousse / - 37 Bacillus subtilis LMSA 092 ovoproduit + Pas de pousse / - Pas de pousse / - 38 Bacillus mycoïdes NFSO60 lait + Pas de pousse / - Pas de pousse / - 39 Bacillus pseudomycoides S38 végétaux + Pas de pousse / - Pas de pousse / - 40 Enterococcus durans Ad 149 jambon blanc + Pas de pousse / - Pas de pousse / - 41 Enterococcus durans Ad181 coule d'œuf pasteurisée + Pas de pousse / - Pas de pousse / - 42 Enterococcus faecalis 89L326 Vacherin + Pas de pousse / - Pas de pousse / -

100 n Genre Espèce Référence Origine TSYEA SOUCHES NEGATIVES Couleur de la colonie COMPASS Agar 24H Taille Halo d opacification COMPASS Agar 48H Couleur de Halo Taille la colonie d opacification 43 Enterococcus faecalis 89L333 Appenzel + Pas de pousse / - Pas de pousse / - 44 Enterococcus faecalis F4 Fromage + Pas de pousse / - Pas de pousse / - 45 Enterococcus faecalis 25 cuisse de poulet + Pas de pousse / - Pas de pousse / - 46 Enterococcus faecalis Ad289 plat cuisiné + Pas de pousse / - Turquoise Trace - 47 Enterococcus faecium Ad180 coule d'œuf pasteurisée + Verte µcolonie - Turquoise pâle <1-48 Enterococcus faecium CNRZ1391 fromage + Pas de pousse / - Turquoise Trace - 49 Enterococcus hirae CNRZ1380 fromage + Verte µcolonie - Turquoise pâle <1-50 Enterococcus avium Ad183 coule d'œuf crue + Pas de pousse / - Pas de pousse / - 51 Lactococcus lactis cremoris 91G030 gros lait + Pas de pousse / - Pas de pousse / - 52 Lactococcus lactis 89L335 Reblochon + Pas de pousse / - Pas de pousse / - 53 Streptococcus salivarius Ad441 Lait + Pas de pousse / - Pas de pousse / - 54 Streptococcus bovis 92L613 fromage + Pas de pousse / - Pas de pousse / - ADRIA Développement 100/ janvier 2015

101 Annexe 10 - Etude d extension (2013) : Résultats bruts de l inclusivité et l exclusivité st : stérile H- : colonies typiques bleues sans halo H+ : colonies typiques avec halo d'opacification + : CONFIRM'Lmono bouillon : coloration jaune +/- : CONFIRM'Lmono bouillon : résultat douteux (coloration brune) Souches testées dans le cadre de la reconduction de la méthode COMPASS Agar Dénombrement SOUCHES POSITIVES n Souche Espèce Référence Origine INCLUSIVITE Sérotypes moléculaires Méthode alternative COMPASS Agar COMPASS Agar TSYEA (22 h à 37 C) (22 h à 37 C) Aspect des colonies CONFIRM'L.mono Croissance CONFIRM'L.mono 6 h 24 h 6 h à 37 C à 37 C à 37 C 1 monocytogenes 153 Munster VI b H monocytogenes 909 lait H monocytogenes 910 lait H monocytogenes 917 lait H+ (petites colonies) 24 h à 37 C monocytogenes lait H monocytogenes lait H monocytogenes lait H monocytogenes 1011/1410 brocolis surgelés II a H monocytogenes 1016/1413 brocolis surgelés H monocytogenes 1972/2399 tourte aux champignons VI b H monocytogenes 1973/2400 quiche lorraine VI b H monocytogenes 2407/3139 tripes à la tomate IV b H monocytogenes 2760/3145 parures de poitrine II a H ADRIA Développement 101/ janvier 2015

102 st : stérile H- : colonies typiques bleues sans halo H+ : colonies typiques avec halo d'opacification + : CONFIRM'Lmono bouillon : coloration jaune +/- : CONFIRM'Lmono bouillon : résultat douteux (coloration brune) Souches testées dans le cadre de la reconduction de la méthode COMPASS Agar Dénombrement ADRIA Développement 102/ janvier 2015 SOUCHES POSITIVES n Souche Espèce Référence Origine INCLUSIVITE Sérotypes moléculaires Méthode alternative COMPASS Agar COMPASS Agar TSYEA (22 h à 37 C) (22 h à 37 C) Aspect des colonies CONFIRM'L.mono Croissance CONFIRM'L.mono 6 h 24 h 6 h à 37 C à 37 C à 37 C 14 monocytogenes croque-monsieur II b H monocytogenes 38/181 saucisse de Toulouse II a H monocytogenes 5721/6179 lardons fumés IV b H monocytogenes 7111/7516 rillettes IV b H+ +/- +/- + +/- +/- 18 monocytogenes 850/109 assiette nordique II a H monocytogenes 86/690 produit alimentaire H+ (halo faible) 24 h à 37 C monocytogenes 87/6172 produit alimentaire H monocytogenes 877/113 écouvillon tapis sur tunnel de glaçage II a H monocytogenes 88/7137 produit alimentaire H monocytogenes 913/1 048 boudin noir IV b H monocytogenes A00C014 chipolatas II a H monocytogenes A00C015 chipolatas H monocytogenes A00C022 merguez II a H monocytogenes A00C024 chipolatas aux herbes II a H monocytogenes A00C036 pintade II a H+ +/ monocytogenes A00C039 Diots de Savoie II a H

103 st : stérile H- : colonies typiques bleues sans halo H+ : colonies typiques avec halo d'opacification + : CONFIRM'Lmono bouillon : coloration jaune +/- : CONFIRM'Lmono bouillon : résultat douteux (coloration brune) Souches testées dans le cadre de la reconduction de la méthode COMPASS Agar Dénombrement SOUCHES POSITIVES n Souche Espèce Référence Origine INCLUSIVITE Sérotypes moléculaires Méthode alternative COMPASS Agar COMPASS Agar TSYEA (22 h à 37 C) (22 h à 37 C) Aspect des colonies CONFIRM'L.mono Croissance CONFIRM'L.mono 6 h 24 h 6 h à 37 C à 37 C à 37 C 30 monocytogenes A00C040 Pâté IV b H monocytogenes A00C041 chair à saucisse La H monocytogenes A00C042 saucisse de Toulouse IV b H monocytogenes A00C043 bacon fumé II a H monocytogenes A00C044 canette de barbarie II b H monocytogenes A00C052 osso bucco de dinde II b H monocytogenes A00C053 gésier II a H monocytogenes A00C054 cœur de bœuf IV b H+ +/- +/- + +/- +/- 38 monocytogenes A00C055 saucisse de Toulouse II a H monocytogenes A00E008 tapis reconstitution II a H monocytogenes A00E033 trancheuse H monocytogenes A00E049 support tapis fileteuse II a H monocytogenes A00E082 environnement saumon fumé II a H monocytogenes A00L097 lait II a H monocytogenes A00L101 lait H monocytogenes A00L107 lait H h à 37 C ADRIA Développement 103/ janvier 2015

104 st : stérile H- : colonies typiques bleues sans halo H+ : colonies typiques avec halo d'opacification + : CONFIRM'Lmono bouillon : coloration jaune +/- : CONFIRM'Lmono bouillon : résultat douteux (coloration brune) Souches testées dans le cadre de la reconduction de la méthode COMPASS Agar Dénombrement SOUCHES POSITIVES n Souche Espèce Référence Origine INCLUSIVITE Sérotypes moléculaires Méthode alternative COMPASS Agar COMPASS Agar TSYEA (22 h à 37 C) (22 h à 37 C) Aspect des colonies CONFIRM'L.mono Croissance CONFIRM'L.mono 6 h 24 h 6 h à 37 C à 37 C à 37 C 46 monocytogenes A00M009 saumon fumé II a H monocytogenes A00M019 saumon fumé H monocytogenes A00M020 saumon fumé H monocytogenes A00M021 saumon fumé H monocytogenes A00M023 saumon fumé H monocytogenes A00M029 mat. 1ère norv SF H monocytogenes A00M030 matière première saumon fumé H monocytogenes A00M032 saumon norvégien IV b H monocytogenes A00M045 saumon fumé II a H monocytogenes A00M050 mat. 1ère espadon H monocytogenes A00M051 mat. 1ère norv SF H monocytogenes A00M080 mat première saumon H monocytogenes A00M081 saumon fumé H monocytogenes A00M088 saumon fumé irlandais II a H monocytogenes A00M089 saumon fumé norvégien H monocytogenes A00M096 saumon fumé écossais H h à 37 C ADRIA Développement 104/ janvier 2015

105 st : stérile H- : colonies typiques bleues sans halo H+ : colonies typiques avec halo d'opacification + : CONFIRM'Lmono bouillon : coloration jaune +/- : CONFIRM'Lmono bouillon : résultat douteux (coloration brune) Souches testées dans le cadre de la reconduction de la méthode COMPASS Agar Dénombrement SOUCHES POSITIVES n Souche Espèce Référence Origine INCLUSIVITE Sérotypes moléculaires Méthode alternative COMPASS Agar COMPASS Agar TSYEA (22 h à 37 C) (22 h à 37 C) Aspect des colonies CONFIRM'L.mono Croissance CONFIRM'L.mono 6 h 24 h 6 h à 37 C à 37 C à 37 C 62 monocytogenes A00M111 saumon fumé écossais H monocytogenes A00M112 saumon fumé norvégien H monocytogenes A00M113 saumon fumé irlandais H monocytogenes A00M123 saumon fumé H monocytogenes Ad 664 fromage non affiné au lait cru H monocytogenes Ad 665 lait cru H monocytogenes Ad 666 coquelet H monocytogenes Ad 667 cuisse de poulet H+ (colonies microscopiques) 24 h à 37 C monocytogenes Ad 668 aile de poulet H monocytogenes Ad 669 rillettes H monocytogenes Ad148 produit de la mer H H+ (colonies microscopiques) 73 monocytogenes Ad235 volaille II b +/ monocytogenes Ad249 environnement produit carné II b H monocytogenes Ad252 produit laitier H ADRIA Développement 105/ janvier 2015

106 st : stérile H- : colonies typiques bleues sans halo H+ : colonies typiques avec halo d'opacification + : CONFIRM'Lmono bouillon : coloration jaune +/- : CONFIRM'Lmono bouillon : résultat douteux (coloration brune) Souches testées dans le cadre de la reconduction de la méthode COMPASS Agar Dénombrement SOUCHES POSITIVES n Souche Espèce Référence Origine INCLUSIVITE Sérotypes moléculaires Méthode alternative COMPASS Agar COMPASS Agar TSYEA (22 h à 37 C) (22 h à 37 C) Aspect des colonies CONFIRM'L.mono Croissance CONFIRM'L.mono 6 h 24 h 6 h à 37 C à 37 C à 37 C 76 monocytogenes Ad253 pâte pressée cuite II b H- (H+ à 48h) monocytogenes Ad255 produit laitier H monocytogenes Ad258 produit laitier H monocytogenes Ad260 pâte pressée II a H monocytogenes Ad262 produit laitier H monocytogenes Ad265 langue II b H monocytogenes Ad266 poulet II a H monocytogenes Ad267 saucisson sec II b H monocytogenes Ad268 jambon de Vendée IV b H monocytogenes Ad270 saucisse IV b H monocytogenes Ad270 rosette de Lyon IV b H monocytogenes Ad271 filet de bacon H monocytogenes Ad272 saucisse sèche d'auvergne IV b H monocytogenes Ad273 jambon sec de Savoie II b H monocytogenes Ad274 assortiment asiatique II a H monocytogenes Ad275 cervelas pistaché de Lyon H h à 37 C ADRIA Développement 106/ janvier 2015

107 st : stérile H- : colonies typiques bleues sans halo H+ : colonies typiques avec halo d'opacification + : CONFIRM'Lmono bouillon : coloration jaune +/- : CONFIRM'Lmono bouillon : résultat douteux (coloration brune) Souches testées dans le cadre de la reconduction de la méthode COMPASS Agar Dénombrement SOUCHES POSITIVES n Souche Espèce Référence Origine INCLUSIVITE Sérotypes moléculaires Méthode alternative COMPASS Agar COMPASS Agar TSYEA (22 h à 37 C) (22 h à 37 C) Aspect des colonies CONFIRM'L.mono Croissance CONFIRM'L.mono 6 h 24 h 6 h à 37 C à 37 C à 37 C 92 monocytogenes Ad276 saucisse de Strasbourg H monocytogenes Ad277 chorizo doux H monocytogenes Ad278 poitrine fumée H monocytogenes Ad279 poêlée parisienne cuisinée H monocytogenes Ad280 lardons nature H monocytogenes Ad281 raviolines au Roquefort H monocytogenes Ad285 poivrons verts La H monocytogenes Ad291 lardons fumés H monocytogenes Ad292 knacky H monocytogenes Ad293 coppa en tranches H monocytogenes Ad294 clinique H monocytogenes Ad295 clinique H monocytogenes Ad299 coques H monocytogenes Ad470 fromage H+ (halo faible) monocytogenes Ad474 saumon fumé H monocytogenes Ad494 piémontaise II a H h à 37 C ADRIA Développement 107/ janvier 2015

108 st : stérile H- : colonies typiques bleues sans halo H+ : colonies typiques avec halo d'opacification + : CONFIRM'Lmono bouillon : coloration jaune +/- : CONFIRM'Lmono bouillon : résultat douteux (coloration brune) Souches testées dans le cadre de la reconduction de la méthode COMPASS Agar Dénombrement ADRIA Développement 108/ janvier 2015 SOUCHES POSITIVES n Souche Espèce Référence Origine INCLUSIVITE Sérotypes moléculaires Méthode alternative COMPASS Agar COMPASS Agar TSYEA (22 h à 37 C) (22 h à 37 C) Aspect des colonies CONFIRM'L.mono Croissance CONFIRM'L.mono 6 h 24 h 6 h à 37 C à 37 C à 37 C 108 monocytogenes Ad523 fromage à raclette H monocytogenes Ad532 fruits H monocytogenes Ad534 Fruits II b H monocytogenes Ad543 poivron lamelle H monocytogenes Ad544 oignon préfrit II a H monocytogenes Ad545 salade chou carotte H monocytogenes Ad546 farine de blé noir II a H monocytogenes Ad548 salle désarêtage II a H monocytogenes Ad549 atelier charcuterie de poisson H monocytogenes Ad550 égout extérieur H monocytogenes Ad551 lave semelles II a H monocytogenes Ad610 lait H monocytogenes Ad611 lait H monocytogenes Ad613 Munster H monocytogenes Ad614 environnement laitier H monocytogenes Ad617 environnement laitier H monocytogenes Ad618 Munster IV b H h à 37 C

109 st : stérile H- : colonies typiques bleues sans halo H+ : colonies typiques avec halo d'opacification + : CONFIRM'Lmono bouillon : coloration jaune +/- : CONFIRM'Lmono bouillon : résultat douteux (coloration brune) Souches testées dans le cadre de la reconduction de la méthode COMPASS Agar Dénombrement ADRIA Développement 109/ janvier 2015 SOUCHES POSITIVES n Souche Espèce Référence Origine INCLUSIVITE Sérotypes moléculaires Méthode alternative COMPASS Agar COMPASS Agar TSYEA (22 h à 37 C) (22 h à 37 C) Aspect des colonies CONFIRM'L.mono 6 h à 37 C 24 h à 37 C Croissance CONFIRM'L.mono 125 monocytogenes Ad619 fromage H monocytogenes Ad620 environnement laitier H monocytogenes Ad621 environnement laitier (sol) H monocytogenes Ad622 fromage H monocytogenes Ad623 chapelure (laiterie) II b H monocytogenes Ad624 environnement laitier H monocytogenes Ad625 environnement laitier IV b H monocytogenes Ad626 Gorgonzola II a H+ (colonies microscopiques et claires) 6 h à 37 C 24 h à 37 C +/ monocytogenes Ad627 emballage produit laitier H monocytogenes Ad629 Cantal H monocytogenes Ad630 Cantal II a H monocytogenes Ad631 environnement laitier H monocytogenes Ad632 lait H monocytogenes Ad634 environnement laitier (sol) H monocytogenes Ad665 lait II a H monocytogenes A00M047 saumon fumé H

110 st : stérile H- : colonies typiques bleues sans halo H+ : colonies typiques avec halo d'opacification + : CONFIRM'Lmono bouillon : coloration jaune +/- : CONFIRM'Lmono bouillon : résultat douteux (coloration brune) Souches testées dans le cadre de la reconduction de la méthode COMPASS Agar Dénombrement SOUCHES POSITIVES n Souche Espèce Référence Origine INCLUSIVITE Sérotypes moléculaires Méthode alternative COMPASS Agar COMPASS Agar TSYEA (22 h à 37 C) (22 h à 37 C) Aspect des colonies CONFIRM'L.mono Croissance CONFIRM'L.mono 6 h 24 h 6 h à 37 C à 37 C à 37 C 141 monocytogenes AER100 poulet H monocytogenes AER101 lait H monocytogenes AER102 saumure H monocytogenes AER103 volaille H monocytogenes BR32 truite H monocytogenes CL3:29 environnement produit carné H monocytogenes LMH180 salade fraîcheur H monocytogenes V2/124 porc H monocytogenes V5/126 bœuf H monocytogenes V8/127 bœuf H h à 37 C ADRIA Développement 110/ janvier 2015

111 st : stérile +/-: croissance faible H- : colonies typiques bleues sans halo H+ : colonies typiques avec halo d'opacification Souches testées dans le cadre de la reconduction de la méthode COMPASS Agar Dénombrement SOUCHES NEGATIVES EXCLUSIVITE N Souche Espèce Référence Origine Méthode alternative COMPASS Agar COMPASS Agar (22 h à 37 C) CONFIRM'L.mono CONFIRM'L.mono Aspect des Croissance colonies 6 h à 24h à 6 h à 24 h à 37 C 37 C 37 C 37 C 1 Bacillus cereus 1 coule d'œuf st / / Bacillus cereus 8 pâtes à l'espagnole st / / Bacillus cereus 11 garniture riz-purée st / / Bacillus cereus 14.2 île flottante st / / Bacillus cereus 16 spaghettis aux fruits de mer st / / Bacillus cereus 17 riz au lait st / / Bacillus cereus 20 sauce poulet-carottes st / / Bacillus cereus 21 riz au curry st / / Bacillus cereus 22 farine de blé st / / Bacillus cereus 26 lait cru de vache st / / Bacillus cereus 30 crevettes crues décortiquées st / / Bacillus cereus 31 beurre en poudre st / / Bacillus cereus Ad1681 produit laitier st / / + / / 14 Bacillus cereus Ad420 poudre de caséinates st / / Bacillus cereus Ad465 terrine de saumon st / / Bacillus cereus Ad483 Punch st / / Bacillus cereus Ad495 farine de riz st / / Bacillus cereus Ad758 environnement st / / Bacillus cereus Ad608 pâte à baguette st / / Bacillus cereus Ad609 lingette égout, atelier, produit laitier st / / + / / 21 Bacillus circulans Ad734 produit laitier st / / TSYEA ADRIA Développement 111/ janvier 2015

112 SOUCHES NEGATIVES EXCLUSIVITE N Souche Espèce Référence Origine Méthode alternative COMPASS Agar COMPASS Agar (22 h à 37 C) CONFIRM'L.mono CONFIRM'L.mono Aspect des Croissance colonies 6 h à 24h à 6 h à 24 h à 37 C 37 C 37 C 37 C 22 Bacillus coagulans Ad732 produit laitier st / / st / / 23 Bacillus licheniformis Ad741 produit laitier st / / + / / 24 Bacillus licheniformis Ad798 ovoproduit st / / Bacillus mycoïdes Ad762 lait st / / st / / 26 Bacillus pseudomycoides Ad767 / st / / + / / 27 Bacillus pumilus Ad733 produit laitier st / / Bacillus pumilus Ad768 légumes st / / Bacillus sphaericus Ad872 produit laitier st / / Bacillus subtilis Ad736 produit laitier st / / Bacillus subtilis Ad786 ovoproduit st / / Bacillus thuringiensis Ad773 végétaux st / / + / / 33 Bacillus weihenstephanensis Ad726 ovoproduit st / / + / / 34 Bacillus weihenstephanensis Ad727 ovoproduit st / / Bacillus weihenstephanensis Ad778 purée conservée au froid st / / Bacillus weihenstephanensis Ad780 plat cuisiné st / / Bacillus weihenstephanensis Ad781 légume pasteurisé st / / Bacillus weihenstephanensis Ad782 produit laitier st / / zone verte au 39 Enterococcus avium Ad 183 coule d'œuf crue point d'inoculation / / + / / 40 Enterococcus durans Ad 149 jambon blanc st / / +/ Enterococcus durans Ad 181 coule d'œuf pasteurisée st / / + / / 42 Enterococcus faecalis Ad 602 lait cru st / / + / / 43 Enterococcus faecalis 25 cuisse de poulet st / / Enterococcus faecalis Ad 289 plat cuisiné st / / Enterococcus faecium Ad 180 coule d'œuf pasteurisée Colonies vertes / / + / / zone verte au 46 Enterococcus hirae CNRZ1380 fromage point d'inoculation / / Lactococcus lactis Ad 425 ferment st / / + TSYEA ADRIA Développement 112/ janvier 2015

113 ADRIA Développement 113/ janvier 2015 SOUCHES NEGATIVES EXCLUSIVITE Méthode alternative COMPASS Agar COMPASS Agar (22 h à 37 C) TSYEA N Souche Espèce Référence Origine CONFIRM'L.mono CONFIRM'L.mono Aspect des Croissance colonies 6 h à 24h à 6 h à 24 h à 37 C 37 C 37 C 37 C 48 Lactococcus lactis cremoris 91G030 gros lait st / / st / / 49 grayi Ad 1295 épinards en branches st / / + / / zone verte au 50 grayi Ad 1504 terrine de saumon point d'inoculation / / + / / 51 innocua Ad 643 paupiette de veau H- / / innocua Ad 644 baguette crue H- / / innocua Ad 653 environnement H- / / innocua Ad 654 produit laitier H- / / innocua Ad 655 saumure H- / / innocua Ad 656 fromage au lait cru H- / / innocua Ad 657 Cantal H- / / innocua Ad 660 chapelure H- / / innocua Ad 661 Pont L'Evêque H- / / + / / 60 innocua Ad 663 haloirs H- / / innocua Ad 671 lardons fumés H- / / innocua Ad 1176 épinards H- / / innocua Ad 1177 champignons H- / / innocua Ad 1233 filet de cabillaud pané H- / / innocua Ad 1230 saint Jacques et gambas H- / / + / / 66 ivanovii Ad 466 rognons de veau H / / 67 ivanovii Ad 616 environnement laitier (sol) H / / 68 ivanovii Ad 648 Collection H ivanovii Ad 662 emballage H ivanovii Ad 675 fromage à pâte persillée H ivanovii Ad 676 joue de porc H / / 72 ivanovii Ad 677 crevettes grises H / / 73 ivanovii Ad 991 Roquefort H ivanovii Ad 1288 lait de brebis H / /

114 SOUCHES NEGATIVES EXCLUSIVITE N Souche Espèce Référence Origine Méthode alternative COMPASS Agar COMPASS Agar (22 h à 37 C) CONFIRM'L.mono CONFIRM'L.mono Aspect des Croissance colonies 6 h à 24h à 6 h à 24 h à 37 C 37 C 37 C 37 C 75 ivanovii Ad 1289 fromage au lait cru H ivanovii Ad 1290 poudre de lait H / / 77 ivanovii Ad 1291 volaille H ivanovii Ad 1292 merguez H / / 79 ivanovii Ad 1308 maigre de mouton H / / 80 ivanovii Ad 1748 lait de chèvre H ivanovii Ad 1752 merguez H ivanovii Ad 1768 lait de brebis H ivanovii BR15 environnement de pisciculture, paroi de bassin H ivanovii L41 lait cru H ivanovii sps londoniensis CIP / H seeligeri Ad 649 fromage H- / / + / / 87 seeligeri Ad 651 environnement H- / / seeligeri Ad 652 pédiluve H- / / seeligeri Ad 674 Munster H- / / seeligeri Ad 1237 lait cru de vache H- / / seeligeri Ad 1293 persil H- / / + / / 92 seeligeri BR1 truite H- / / seeligeri BR18 environnement de pisciculture, paroi de bassin H- / / seeligeri BR4 poisson H- / / welshimeri Ad 1221 saucisses aux herbes H- / / + / / 96 welshimeri Ad 1175 riz cantonais H- / / welshimeri Ad 1194 saucisse aux herbes H- / / welshimeri Ad 1669 pavé de lieu noir H- / / + / / 99 Streptococcus bovis 92L613 fromage st / / st / / 100 Streptococcus salivarius Ad 441 lait st / / st / / TSYEA ADRIA Développement 114/ janvier 2015

115 Annexe 11 - Degré d accord Méthode de référence Niveau L0 Nombre Probabilité Probabilité de Nombre Probabilité Probabilité de Probabilité de paires Laboratoire de positifs obtenus de positifs paires de positifs de négatifs obtenus de négatifs paires de négatifs de résultats identiques A B C D F G H I J K L M Moyenne 1 Degré d accord 100% Niveau L1 Nombre Probabilité Probabilité de Nombre Probabilité Probabilité de Probabilité de paires Laboratoire de positifs obtenus de positifs paires de positifs de négatifs obtenus de négatifs paires de négatifs de résultats identiques A B C D F 7 0,875 0, ,125 0,0156 0,781 G 7 0,875 0, ,125 0,0156 0,781 H I J 7 0,875 0, ,125 0,0156 0,781 K L M Moyenne 0,945 Degré d accord 95% Niveau L2 Nombre Probabilité Probabilité de Nombre Probabilité Probabilité de Probabilité de paires Laboratoire de positifs obtenus de positifs paires de positifs de négatifs obtenus de négatifs paires de négatifs de résultats identiques A B C D F G H I J K L M Moyenne 1 Degré d accord 100% ADRIA Développement 115/ janvier 2015

116 Méthode alternative Laboratoire Nombre Probabilité de positifs obtenus de positifs Probabilité de paires de positifs Niveau L0 Nombre de négatifs obtenus Probabilité de négatifs Probabilité de paires de négatifs Probabilité de paires de résultats identiques A B C D F G H I J K L M Moyenne 1 Degré d accord 100% Laboratoire Nombre Probabilité de positifs obtenus de positifs Probabilité de paires de positifs Niveau L1 Nombre de négatifs obtenus Probabilité de négatifs Probabilité de paires de négatifs Probabilité de paires de résultats identiques A B C D F 7 0,875 0, ,125 0,0156 0,781 G 7 0,875 0, ,125 0,0156 0,781 H I J 7 0,875 0, ,125 0,0156 0,781 K L M Moyenne 0,9453 Degré d accord 95% Niveau L2 Nombre Probabilité Probabilité de Nombre Probabilité Probabilité de Probabilité de paires Laboratoire de positifs obtenus de positifs paires de positifs de négatifs obtenus de négatifs paires de négatifs de résultats identiques A B C D F G H I J K L M Moyenne 1 Degré d accord 100% ADRIA Développement 116/ janvier 2015

117 ADRIA Développement 117/ janvier 2015 Annexe 12 - Calcul de la concordance Méthode de référence Méthode alternative Niveau LO Niveau LO Nombre de laboratoires : 12 Nombre de laboratoires : 12 Nombre de négatifs par laboratoire : 8 Nombre de négatifs par laboratoire : 8 Laboratoire Nombre de négatifs Paires Interlaboratoires avec le même résultat Nombre total de paires interlaboratoires Laboratoire Nombre de négatifs Paires Interlaboratoires avec le même résultat Nombre total de paires interlaboratoires A A B B C C D D F F G G H H I I J J K K L L M M Total Total Concordance 100,0% Concordance 100,0% Total + 0 Total + 0 Total - 96 Total - 96 Niveau L1 Niveau L1 Nombre de laboratoires : 12 Nombre de laboratoires : 12 Nombre de positifs par laboratoire : 8 Nombre de positifs par laboratoire : 8 Laboratoire Nombre de positifs Paires Interlaboratoires avec le même résultat Nombre total de paires interlaboratoires Laboratoire Nombre de positifs Paires Interlaboratoires avec le même résultat Nombre total de paires interlaboratoires A A B B C C D D F F G G H H I I J J K K L L M M Total Total Concordance 93,9% Concordance 93,9% Total + 93 Total + 93 Total - 3 Total - 3 Niveau L2 Niveau L2 Nombre de laboratoires : 12 Nombre de laboratoires : 12 Nombre de positifs par laboratoire : 8 Nombre de positifs par laboratoire : 8 Laboratoire Nombre de positifs Paires Interlaboratoires avec le même résultat Nombre total de paires interlaboratoires Laboratoire Nombre de positifs Paires Interlaboratoires avec le même résultat Nombre total de paires interlaboratoires A A B B C C D D F F G G H H I I J J K K L L M M Total Total Concordance 100,0% Concordance 100,0% Total + 96 Total + 96 Total - 0 Total - 0