Syndromes lymphoprolifératifs et LNH de bas grade de malignité

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1 Syndromes lymphoprolifératifs et LNH de bas grade de malignité

2 Les syndromes lymphoprolifératifs chroniques Néoplasies B matures Néoplasies T matures Syndromes lymphoprolifératifs des immunodéprimés : - déficits immunitaires primitifs - lymphomes et VIH - sd lymphoprolifératifs post-transplantation (PTLD) -...

3 Classification OMS des hémopathies lymphoïdes matures (1999) Hémopathies lymphoïdes B Leucémie lymphoïde chronique/ lymphome lymphocytique Leucémie prolymphocytaire B Lymphome lymphoplasmocytaire Lymphome splénique à ly villeux Leucémie à tricholeucocytes Lymphome de la zone marginale nodal ou extranodal Lymphome du MALT Lymphome folliculaire Lymphome du manteau Lymphome B diffus à grandes cellules Diebold J. Hématologie Hémopathies lymphoïdes T Leucémie prolymphocytaire T Leucémie à LGL (grands lymphocytes granuleux) Syndrome de Sezary Leucémie/lymphome T de l adulte Lymphome T angioimmunoblastique Lymphome anaplasique à grandes cellules

4 Classifications histologiques Architecture du ganglion Origine de la cellule tumorale (cytologie+ marqueurs) Analyse cytogénétique ( t 11-14, t 14-18, t8-14) Analyse moléculaire (Bcl2, Bcl1, C myc )

5 ZONE MARGINALE lymphocytes B mémoires Représentation schématique d un follicule secondaire Sinus périphérique ZONE DU MANTEAU petites cellules B naïves CENTRE GERMINATIF Zone claire apicale Survie => C mémoire ou plasmocytes Zone claire basale Sélection (apoptose) Zone sombre Prolifération Zone corticale profonde Modifié d après P. Felman & O. Gentilhomme. Atlas de cytopathologie ganglionnaire. Eds Arnette. 1997

6 Ganglion lymphatique Centre germinatif Zone du manteau Zone interfolliculaire

7 Correspondance entre les cellules lymphoïdes B humaines et leur contrepartie lymphomateuse SANS MUTATION DES REGIONS VARIABLES DES IgH MUTATIONS SOMATIQUES DES REGIONS VARIABLES DES IgH LAL ZONE DU MANTEAU CENTRE GERMINATIF Cellule B CD5+ Plasmocyte Plasmocyte Progéniteur B Cellule B naïve Prolifération Sélection Mutations somatiques Commutation de classe Cellule Cellule B du du CG CG Myélome multiple Lymphome folliculaire Lymphome de Burkitt Lymphome diffus à grandes cellules LLC-B Lymphome du manteau Cellule B mémoire? Lymphome B monocytoïde Lymphome du MALT SLVL LLC-B Leucémie à tricholeucocytes? Leucémie prolymphocytaire?

8 Diagnostic des syndromes lymphoprolifératifs Un diagnostic multidisciplinaire Clinique Radiologique Anatomo-pathologique Biologique Hématologie : cytologie, immunologie, cytogénétique, moléculaire Biochimie

9 Les différents examens biologiques dans le diagnostic des SLPC 1- Morphologie : - Cytologie : -sanguine : leucémies / lymphomes leucémisés Hyperlymphocytose > ly/mm 3 et/ou lymphocytes pathologiques - médullaire (ponctions, empreintes de BOM) Infiltration lymphoïde > 30% et/ou lymphocytes pathologiques -ganglionnaire (ponctions, empreintes de biopsie) Valeur d orientation des cytoponctions ganglionnaires, à confirmer histologiquement liquide de ponctions - Histologie : indispensable au diagnostic de lymphome - ganglionnaire - médullaire : lymphomes médullaires, bilan d extension - autres tissus : digestifs, cutanés, ORL,

10 Frottis sanguin MGG Leucémie lymphoïde chronique (LLC)

11 Leucémie prolymphocytaire B Frottis sanguin MGG (Site Tribvn)

12 Morphologie : Frottis sanguin MGG Leucémie à tricholeucocytes (Site Tribvn) DU Oncologie, avril 2005

13 Lymphome folliculaire Frottis sanguin MGG (Site Tribvn)

14 Proliférations clonales T Classification morphologique : Leucémie à LGL Leucémie prolymphocytaire T Syndrome de Sézary Lymphome T de l adulte (HTLV1) (Site Tribvn)

15 Les différents examens biologiques dans le diagnostic des SLPC 2- Immunophénotypage lymphocytaire : Permet la mise en évidence d antigènes cellulaires (membranaires, intracytoplasmiques ou nucléaires). Antigènes clusterisés en «CD» - Cytométrie de flux : Marquage des cellules par des anticorps monoclonaux fluorescents. Analyse des caractéristiques individuelles de chaque cellule d une suspension cellulaire, lors de son passage à travers un faisceau LASER => Information sur la taille, la structure et la fluorescence de la cellule, proportionnelle à l expression de l antigène testé GAMAL GAMAL Sang Moelle parfois ganglion R TAILLE CD5 APC

16 Leucémie lymphoïde chronique (LLC) Immunophénotypage : Kappa FITC CD19 PerCP Cy 5.5 EMMANUELLO Lambda PE R LAMBDA PE Mean de fluorescence = 103 EMMANUELLO FMC7 FITC FMC7 FITC CD19 PerCP Cy 5.5 CD19 PerCP Cy 5.5 EMMANUELLO CD5 APC CD5 APC EMMANUELLO CD79b PE CD79b PE CD19 PerCP Cy 5.5 CD19 PerCP Cy 5.5 EMMANUELLO CD23 PE CD23 PE EMMANUELLO CD38 PE CD38 PE (M. Legarff) Population monotypique lambda de faible intensité CD5/CD23+, FMC7-, CD79b faible DU Oncologie, avril 2005

17 Leucémie lymphoïde chronique (LLC) Immunophénotypage : indispensable au diagnostic prolifération CD19+, CD5+, CD23+, CD79b ou de faible intensité, Ig Kappa ou Ig Lambda de surface de faible intensité (restriction monotypique) Score de Matutes (1994) : Prolifération B (CD19+), clonale : - scores 4 et 5 = LLC - scores 0, 1 et 2 LLC - score 3 : LLC atypiques? Autres marqueurs : - CD10- - CD38+/- - CD25- - ZAP-70 +/- 0 1 CD5 + - CD FMC7 - + CD79b/CD22 - ou faible FORT IgS faible FORT DU Oncologie, avril 2005

18 Immunophénotypage des hémopathies lymphoïdes chroniques B Marqueurs LLC LPL HCL HCL-V SLVL MCL FL MZL Intensité des Ig de surface faible forte forte forte moyenne forte moyenne/ forte CD CD CD /- - +/- - FMC CD5 + +/ / CD10 - +/ /- - moyenne/ forte CD25 +/ /- +/- CD11c +/ /- +/- CD CD79b = positif dans la majorité des cas ; +/- = positif dans la minorité des cas ; - = négatif dans la majorité des cas LLC : Leucémie lymphoïde chronique HCL : Leucémie à tricholeucocytes SLVL : Lymphome splénique à lymphocytes villeux FL : Lymphome folliculaire LPL : Leucémie prolymphocytaire HCL-V : Forme variante de HCL MCL : Lymphome du manteau MZL : Lymphome de la zone marginale DU Oncologie, avril 2005

19 Proliférations clonales T Classification immunologique : Proliférations de cellules T matures CD3+ TCR+ Marqueurs communs : CD3, CD2, CD5 Autres marqueurs : CD4, CD8, CD25, CD56 LGL-T LGL-NK LP ATL Sézary CD3/TCR CD CD CD CD CD CD LGL : Large granular lymphocyte, NK : Natural Killer, LP : Leucémie prolymphocytaire, ATL : Adult T Leukemia/Lymphoma DU Oncologie, avril 2005

20 Les différents examens biologiques dans le diagnostic des SLPC 2- Immunophénotypage lymphocytaire : - Techniques immuno-histochimiques : Sur coupes de tissu Réalisées par les anatomo-pathologistes CD20 CD3 (Photos : F. Charlotte)

21 CD20 Ganglion lymphatique CD3 Bcl-2

22 Lymphome lymphocytique Petits lymphocytes ( ) prolymphocytes ( ) Immunophénotype CD20+ CD5+ CD23+ CD10-

23 Expression de Bcl-2 Hyperplasie folliculaire LNH folliculaire

24 Les différents examens biologiques dans le diagnostic des SLPC 3- Cytogénétique : - Conventionnelle : caryotype analyse tout le génome Ex. t(14;18) - Moléculaire : FISH «Fluorescent In-Situ Hybridization» ne détecte que les anomalies recherchées BCL2, 18q21, green 14q32.3, red,

25 Les différents examens biologiques dans le diagnostic des SLPC 4- Biologie moléculaire : PCR «Polymerase Chain Reaction» Détection moléculaire d une population lymphoïde clonale : => Réarrangement des gènes des chaînes lourdes des Immunoglobulines et du TCR gamma Configuration germinale des gènes IgH n n RECOMBINAISON D-J RECOMBINAISON V-D-J Gènes IgH réarrangés VH JH!!! défaut possible d informativité si hypermutations somatiques +++ => toujours analyser un pvt tumoral Leukemia (2003) 17,

26 Les différents examens biologiques dans le diagnostic des SLPC 4- Biologie moléculaire : PCR «Polymerase Chain Reaction» Détection de réarrangements génomiques : Ex. : IgH-Bcl2 équivalent de la t(14;18) IgH-Bcl1 équivalent de la t(11;14) Tous ne sont pas analysables par PCR : ex. réarrangements de c-myc Détection de l hyperexpression de la cycline D1 : PCR quantitative sur cdna (après rétro-transcription de l ARN) Prélèvements analysables : sang, moelle, ganglions, tissus, liquide de ponction,...

27 Programme Leucémie lymphoïde chronique Autres syndromes lymphoprolifératifs chroniques Cas Cliniques

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