Projet MANOE. Vendredi 17 juin 2016

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Ariane Généreux
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Détection et quantification des allergènes présents à faibles doses dans des matrices

1 Projet MANOE Etude de la réactivité de patients allergiques à des faibles doses d'allergènes (blé, œuf, lait, arachide). Détection et quantification des allergènes présents à faibles doses dans des matrices alimentaires complexes Olivier Tranquet Vendredi 17 juin 2016 Allergies, intolérances et hypersensibilités alimentaires

Réglementation sur l étiquetage - Europe Allergènes à Déclaration

Oeuf Poissons Lupin Arachide Soja Lait Fruits à coques Sulphites 10 ppm

Puissance, Sévérité and Prévalence Björkstén et al.

2011 Sésame Mollusques HACCP Allergènes Analyses Risques de

2 Réglementation sur l étiquetage - Europe Allergènes à Déclaration Obligatoire Pas de seuils Cliniques Céréales Gluten 20 ppm * Crustacés Oeuf Poissons Lupin Arachide Soja Lait Fruits à coques Sulphites 10 ppm Pas de seuils réglementaires Céleri Moutarde 2003/89/CE & 2007/68/CE Puissance, Sévérité and Prévalence Björkstén et al. 2008; van Bilsen et al Sésame Mollusques HACCP Allergènes Analyses Risques de contaminations croisées Etiquetage de précaution inconsistant Difficile à appréhender pour les patients Choix alimentaire restreint Qualité de vie affectée

Projet MANOE On souhaite régler 100 % des cas On ne souhaite pas régler 100 % des cas Quels sont ces seuils dans une population pédiatrique française?

3 Comment prendre en charge une telle problématique au niveau d une collectivité? Opinion Allergologues : de nombreux patients ne réagissent pas à des «Traces» d allergènes. Projet MANOE On souhaite régler 100 % des cas On ne souhaite pas régler 100 % des cas Quels sont ces seuils dans une population pédiatrique française? Principe de précaution Régime strict pour tous Individus «Hyper réactifs» Individus non «Hyper réactifs» Comment les fabricants peuvent-ils les utiliser? Les méthodes de dosages des allergènes permettent-elles de les garantir? Comment les patients perçoivent-ils les seuils?

Projet FUI Financé par la région PdL Coordonné par Biofortis Volet Industriel Développer

Etudier la tolérance de petites doses pour les enfants allergiques pour les 4 allergènes

allergènes adaptées aux matrices des industriels Volet consommateur Compréhension des

4 Projet FUI Financé par la région PdL Coordonné par Biofortis Volet Industriel Développer de nouveaux produits «garantis sans» ou à teneur maitrisée en allergènes Volet clinique Etudier la tolérance de petites doses pour les enfants allergiques pour les 4 allergènes Projet MANOE Volet Analytique Optimiser et développer de nouvelles méthodes de dosage des allergènes adaptées aux matrices des industriels Volet consommateur Compréhension des pratiques alimentaires de l enfant allergique et de son entourage Lait - Œuf - Arachide - Blé

5 Volet Clinique Test de Réintroduction Petites Doses (RPD) Pratique usuelle : Seuil réactogène Petites doses vs placébo (max qq dizaine de mg). En hôpital de jour Réaction non recherchée Si réaction, Individualisation de la dose

6 RPD Arachide 103 enfants sélectionnés 99 enfants retenus 4 Exclus Réaction tardive : 57 min RPD 71 enfants tolérants 28 enfants non tolérants Dose réactogène protégeant 95 % des enfants : ED05 = 1,2 mg de protéines Assouplissement du régime pendant 3 mois une cacahuète de taille moyenne = 400 à 500 mg soit 100 à 125 mg de protéines d arachide

7 Conclusion RPD arachide En cas de tolérance de la RPD, un régime assoupli a été proposé. Conseil suivi par 52 enfants / 69 (75,3%) Régime non assoupli pour 7 enfants (10,15 %) Régime «compromis» pour 10 enfants (14,5%) Observations Après assouplissement du régime, 3 enfants (4,3%) ont présenté une réaction après consommation de traces Malgré le régime assoupli, de nombreux patients restent méfiants à l égard de l huile d arachide (35 patients sur 69 soit 50,7%)

méthodes sont-elles assez précises sensibles?

8 Les méthodes analytiques dans un contexte des seuils Pas de seuils DETECTION Résultats + ou - Seuils QUANTIFICATION Seuils des méthodes Les méthodes sont-elles assez précises sensibles? Peut-on garantir un risque de contamination inférieure à un seuil? Peut-on quantifier de petites contaminations?

9 Méthodes d analyse Robuste matrices alimentaires complexes procédés de fabrication et traitements technologiques Sensible une sensibilité entre 1 et 10 ppm est admise comme nécessaire. 1mg à 10 mg par kg

10 Ex de la détection du lait Cookies contaminés à 500 ppm de lait Kits Analytes Carmen Diaz-Amigo, Food Anal. Methods (2010) 3: Impact fort de la cuisson sur la détection Quel facteur de conversion utiliser pour rendre le résultat?

11 Démarche MANOE 4 Allergènes 7 Produits Analyses Amélioration Arachide, blé, lait et œuf 0, 10 et 1000 ppm Vrais produits- recettes complexes Contaminations homogènes Cuisson Extraction Détection Quantification Optimisation Développement de méthodes Transfert Fond de sauce Cyranie Boulette de viande en sauce Charal Muffins nature /chocolat Brioche Pasquier Croissant Brische Pasquier Biscuits infantiles Picot (Lactalis) Céréales infantiles Picot (Lactalis) Contaminations réalistes: en début de recette (avant cuisson) Sur des équipements industriels Méthodes de dosages utilisables en routine

12 Homogénéité des contaminations avant cuisson Production de plusieurs kilos - analyse sur 1 à 5 g 7 produits 3 niveaux de contaminations ( 0, 10 et 1000 mg/kg) 21 lots Allergène Cyranie Fond de sauce Lait Œuf Blé Charal Boulettes de viande + sauce Lait Blé Muffins nature Lait Arachide Pasquier Muffins pépite Lait Arachide Croissants Œuf Biscuits infantiles Lait Blé Lactalis Céréales infantiles Lait Plus de 900 analyses Les faibles niveaux ne sont pas tous détectés

Exemple Détection et Quantification de l œuf avant et après cuisson mg/kg Contamination volontaire à 10 mg/kg 30 25 20 15 10 5 0 valeur cible Fond de sauce croissant cru cuit

13 Exemple Détection et Quantification de l œuf avant et après cuisson mg/kg Contamination volontaire à 10 mg/kg valeur cible Fond de sauce croissant cru cuit 1. Défaut de standardisation Cru : Surestimation 2. Impact fort de la cuisson Absence de détection à 10 mg/kg Croissant 1000 mg/kg cru Taux de recouvrement 0,1% cuit ,65

14 Bilan des méthodes du marché Contamination avec 10 ppm d allergène avant et après cuisson Allergène produit Détection Quantification Blé Avant cuisson Après cuisson Avant cuisson Après cuisson Fond de sauce Boulette de viande Biscuits ± ± Détection Avant cuisson OK Après cuisson 1 cas limitepour le lait Perte complète pour l oeuf Arachide Lait Œuf Muffins nature Muffins pépite Fond de sauce Boulette de viande Biscuits Infantiles Céréales Infantiles (trop détecté) Fond de sauce Croissant Quantification Conforme dans 2/3 pour le blé Non conforme pour le lait, l arachide et l œuf Défaut de standardisation Défaut d extraction Dénaturation des cibles

15 Améliorations des méthodes Immuno (ELISA) Exhaustivité de l extraction (durée puissance) Allergène 10 mg/kg Blé Arachide produit Avant cuisson Détection Après cuisson Avant cuisson Fond de sauce Boulette de viande Quantification Après cuisson Biscuits ± ± Muffins nature ± Muffins pépite ± Fond de sauce Compatibilité des sondes Lait Boulette de viande Biscuits Infantiles Céréales Infantiles (trop détecté) Œuf Fond de sauce Croissant

16 Conclusions Volet Clinique : Le protocole de RPD est efficace A quoi et pourquoi les 3 enfants ont réagi après l assouplissement de leur régime? Volet Analytique : Sous réserve d adaptations, les méthodes sont efficaces pour la détection à 10 mg/kg. Les quantification n est pas acquise d emblée Sauf pour le gluten (pour lequel il existe un seuil dans une autre réglementation) Remarques La perte de détection ne signifie pas la perte d allergénicité. Les méthodes ne remplacent pas un HACCP Contaminations non homogènes L'ENFANT ALLERGIQUE - Mardi 6 octobre Nantes

17 De la dose réactogène au seuil analytique MANOE VITAL2 Taylor et al Arachide ED05 Arachide ED01 Œuf ED01 Blé ED05 Patient Méthode (mg de protéines) portion (g) Seuil (ppm) 1, , , , , ,6 0, ,

18 Merci de votre attention

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Mots-clés : denrée, préemballé, étiquetage, ingrédient, information, consommateur, allergène, boulanger, pain Circulaire n 6252 2 Février 2015 Gestion de l entreprise Fabrication Réglementation hygiénique et sanitaire 7 0 5 Dossier suivi par : Flavie SOUPLY Rédactrice : Flavie SOUPLY Ligne directe : 01.43.59.45.08