Journée d étude : La santé mammaire 02/12 Herve L analyse PCR, un outil pour le producteur et son vétérinaire E. Piraux Comité du lait
Plan de l exposé 1. La PCR, c est quoi? 2. Caractéristiques de la PCR- PathoProof 3. Comment utiliser la PCR dans mon exploitation 4. Documents et mise en pratique
1. La PCR, c est quoi? PCR = Polymerase Chain reaction Concentration et amplification génétique par réaction de polymérisation en chaîne Multiplication d une séquence spécifique d ADN du germe Mesure de la quantité produite
1. La PCR, c est quoi? Structure de l ADN est spécifique de chaque microorganisme Snyder, L. and Champness, W., Molecular Genetics of Bacteria (Washington, D.C.: ASM Press, 1997)
1. La PCR, c est quoi? N= No * 2 x Après 10 cycles : 2 10 amplifié 1.000 fois Après 20 cycles : 2 20 amplifié 1.000.000 fois Après 30 cycles : 2 30 amplifié 1.000.000.000 fois
1. La PCR, c est quoi? Détection de la présence d un pathogène par la PCR: ADN ciblé présent (ex. Staphylocoque aureus) + Primer PCR ADN ciblé non présent (ex. Streptocoque uberis) PCR + Primer No PCRproduct
1. La PCR, c est quoi? 1. Première étape : Extraction Extraction, purification de l ADN Elimination matière grasse et protéine 7
1. La PCR, c est quoi? 2. Deuxième étape : PCR Multiplication des séquences d ADN 8
1. La PCR, c est quoi? 3. Troisième étape : Interprétation Mesure de la quantité ADN par un signal fluorescent. Valeur seuil = cycle avec intensité définie dépassée Plus valeur seuil basse moins de cycles pour atteindre la quantité ADN Présence importante de la bactérie 9
1. La PCR, c est quoi? 3. Troisième étape : Interprétation 10
2. Caractéristiques de la PCR PathoProof 16 agents pathogènes en même temps Rapidité Détection bactéries mortes et vivantes (conservants traitements antibiotiques) Prélèvements échantillons stériles ou non stériles (échantillons du contrôle laitier) Sensibilité Spécificité 11
2. Caractéristiques de la PCR PathoProof On ne trouve que ce que l on cherche Détection des bactéries suite à une contamination Prix Pas d antibiogramme (résistance à la pénicilline) 12
3. Comment utiliser la PCR PathoProof dans mon exploitation A. Echantillon de tank Déterminer sur l échantillon de tank quatre germes majeurs : Mycoplasma bovis Staphylococcus aureus Streptococcus agalactiae Streptococcus uberis Intérêt : Régulier teneurs hautes en cellules Voir si dans l exploitation on est en présence d un des germes contagieux des mammites 13 Orienter le diagnostic
3. Comment utiliser la PCR PathoProof dans mon exploitation B. Echantillon de vaches - Germes recherchés Staphylococcus aureus Staphylococcus sp. Streptocoques agalactiae Streptocoques dysgalactiae Streptocoque uberis Klebsiella sp. Escherichia coli Levures Mycoplasma bovis Mycoplasma sp. Prototheca sp. Corynebacterium bovis Enterococcus faecalis et faecium Serratia marcescens Arcanobacterium pyogenes et Peptostreptococcus indolicus Staphylocoque Beta-lactamase gene (***) 14
3. Comment utiliser la PCR PathoProof dans mon exploitation B. Echantillon de vaches a) Echantillon prélevé par éleveur/vétérinaire vache(s) à analyser b) Demander d analyser les vaches N XXXX, sur les échantillons du contrôle laitier c) Demander d analyser les vaches > à 300.000 cellules/ml (2 contrôles) ou le top des vaches les plus hautes sur les échantillons du contrôle laitier 15
3. Comment utiliser la PCR PathoProof dans mon exploitation B. Echantillon de vaches Pour les échantillons du contrôle laitier : Analyse des 16 germes et communication des 4 majeurs du Kit 4 plus un germe(s) dominant(s) 16
4. Documents et mise en pratique a) Demande : Demande via le document «demande d analyse» Disponible sur le site web www.comitedulait.be 17
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4. Documents et mise en pratique b) Analyse : Deux fois par semaine Mardi et jeudi 19
4. Documents et mise en pratique c) Rapport : Tank 20
4. Documents et mise en pratique c) Rapport : Vache 21
4. Documents et mise en pratique c) Rapport : Interprétation 22
4. Documents et mise en pratique d) Prix : Lait tank Recherche de 4 bactéries 20 Lait vaches individuelles Recherches de 16 bactéries 25-20 si plus de 4 éch. 23
5. Conclusions Analyses PCR au CDL = bon outil pour le producteur / vétérinaire car Rapidité Sensibilité Spécificité Possibilité analyse sur échantillon contrôle laitier après analyses cellules Détection des germes même après traitement 24
Merci de votre attention!