L AROMATOGRAMME Par Guilhem BASTIDE D IZARD Objectifs de ce cours : Présentation d une technique de laboratoire d analyse médicale permettant le choix d H.E. pour l aromathérapie. La mise au point de cette technique a permis de mieux connaître les activités antimicrobiennes d une quarantaine d Huiles Essentielles. Plan du cours : Petit historique Définition Principales techniques - Milieu gazeux - Milieu liquide - Milieu solide Le mode d action - Action locale - Action par voie générale Mes notes : - Qu apporte l historique? Page 1 Compléter les pointillés : Térébinthe :. Cannelle :.. Girofle :.. Quel était le «référent»?. Quelle essence remplace le référent et pourquoi?. - Qu est-ce qu un? Page 3 Compléter les pointillés : Définition :. Par quelle technique définir une Huile Essentielle?.. Pourquoi une technique si sophistiquée? Quelles techniques ont permis de mettre en évidence les pouvoirs antibactériens des Huiles Essentielles? Page 4 o Milieu gazeux : qu en pensez-vous pour l utilisation courante : o Milieu liquide : Qu en pensez-vous pour l utilisation courante?.
o Milieu solide Sur le schéma ci-joint placer les mots suivants (par un trait) : Boite de pétri Papiers buvards de 8mm imprégnés de 8 µl d Huiles Essentielles Milieu de culture sur lequel un germe s est développé Halo d inhibition Diamètre du halo Mettre des initiales d essences sur chaque disque : Quelle est l essence la plus active?. Quelles sont les essences inactives? - Comment réaliser un en laboratoire d analyse médicale? Page 7 Préparation des disques : inscrire l initiale de l H.E., imprégnation d alcool, stérilisation, séchage, imprégnation d Huile Essentielle bien répertoriée et conservation dans un flacon Préparation du milieu de culture : Mueller Hinton (bactéries), Sabouraud (mycoses) Préparation de l inoculum : - Pour des souches Gram + (se colorant au violet de gentiane par leur paroi polysaccharidique) : 1 à 3 colonies dans 2 ml d ED, puis 10 gouttes dans 10 ml d ED - Pour des souches Gram - (se colorant à la fuscine par leur paroi lipidique) : 1 colonie dans 5 m l d ED, puis 4 gouttes dans 10 ml d ED Ensemencement : étaler l inoculum à la surface du milieu de culture Introduction de l H.E. : déposer 6 à 8 disques Culture : mettre à l étuve 24 h Calcul de l inhibition : mesurer les diamètres des zones d inhibition : Indice des croix : - De 1 à 2 mm : + - De 2 à 3 mm : ++ - Plus de 3 mm : +++ - Comment lire les résultats? Page 10 On compte le nombre de croix. Ainsi pour 36 cas, il y aurait dans l idéal 36 x 3 = 108 croix. Exemple pour l Origan d Espagne (Thymus capitatus) : 29 +++ soit 29x3 = 87 + 2 ++ soit 2x2 = 4 + 5 résistants Total pour 36 cas 91 + L indice aromatique est donc 91/108 = 0,84. En faisant cet indice sur de nombreuses souches, la moyenne des indices est 0,87. L Origan est donc devenu le référent en aromathérapie.
Plus l indice est proche de, plus l H.E. est. P. Belaiche a calculé les indices aromatiques de 40 Huiles Essentielles selon le même procédé. Le tableau ci-joint donne les noms de ces essences ainsi que leur indice aromatique moyen. Repérez et compléter : Les 5 H.E. majeures (indice aromatique supérieur à..) (couleur ) Les 10 Huiles Essentielles médium (indice aromatique supérieur à ) (couleur..) Les autres sont des «Huiles Essentielles dites de terrain» selon P. Belaiche. HUILE ESSENTIELLE Indice aromatique moyen HUILE ESSENTIELLE Indice aromatique moyen ASPIC 0,089 HYSOPE 0,014 BASILIC 0,012 LAURIER 0,028 BERGAMOTE 0,025 LAVANDE 0,296 CAJEPUT 0,333 LEMON GRASS 0,021 CAMOMILLE 0,002 MENTHE 0,073 CANNELLE 0,687 MYRTE 0,250 CARVI 0,050 NEROLI 0,094 CEDRE 0,030 NIAOULI 0,100 CHENOPODE 0,025 NOIX DE 0,030 MUSCADE CITRON 0,085 ORIGAN 0,873 D'ESPAGNE CITRONNELLE 0,036 PETIT GRAIN 0,171 CORIANDRE 0,049 PIN 0,317 CUMIN 0,014 ROMARIN 0,075 CYPRES 0,033 SANTAL 0,017 ESTRAGON 0,140 SARRIETTE 0,457 EUCALYPTUS 0,312 SASSAFRAS 0,002 FENOUIL 0,040 S A UGE 0,036 GENIEVRE 0,015 SERPOLET 0,126 GERANIUM 0,187 TEREBENTHINE 0,035 GINGEMBRE 0,014 THYM 0,711 GIROFLE 0,517 VERVEINE 0,018 Quel est l usage de ces Huiles Essentielles de terrain?... - Y a-t-il des règles de prescription? Page 16 Important : l H.E. prescrite doit être la même (même lot) que celle ayant servi à réaliser l. Quels problèmes cela soulève-t-il? - La nécessité d une relation très étroite entre..,.,.. - Le problème de délivrance d une H.E. du même lot que celle ayant servi à l : problème de dichotomie.
Trois suggestions pour éviter des problèmes de dichotomie : 1 er cas : Le stock du pharmacien et le lot testé par le biologiste sont les mêmes : Médecin Biologiste - délivre médicale Pharmacien Client 2 ème cas : Le pharmacien fait tester ses H.E. prescrites avant de les délivrer : Test H.E. Médecin Biologiste Pharmacien délivre Client médicale Résultat 3 ème cas : Le pharmacien fournit ses H.E. pour réaliser l Médecin Pharmacien fournit les H.E. Biologiste médicale délivre Client - Comment les H.E. agissent-elles? Page 17 In vitro : In vivo : hypothèse :.. Quelles doses doivent être utilisées en aromathérapie? Par voie locale :. Par voie générale :. Quelles sont les 3 familles chimiques les plus microbicides :.... Quel est le mécanisme d action par exemple des phénols présents dans la, le, l. La paroi cellulaire du staphylocoque doré Le cytoplasme Dans ce cours vous pouvez consulter les fiches plantes suivantes : Girofle Cannelle Thym Sarriette Lavande Et vous pouvez ajouter à votre mémo les phytoconseils sur : Les otites à répétition