PLAN Le microscope à fond clair principes les diverses pièces l éclairage de Köhler L examen en lumière polarisée L examen en fond noir Le contraste de phase selon Zernicke Le contraste interférentiel Le microscope à fluorescence
PLAN Le microscope à fond clair les diverses pièces principes l éclairage de Köhler
plans conjugués 1: plans image (limitant l ouverture) lampe préparation filament condenseur objectif oculaire diaphragme de champ diaphragme d ouverture plan focal objectif pupille
L OBJECTIF Pouvoir de résolution: capacité de séparer 2 points contigus Distance minimale de résolution(dmr): concept plus facile Equation d Abbe: DMR= kλ/n.sinα k= constante, d environ 0,5 λ= longueur d onde n= indice de réfraction du milieu (entre lamelle et objectif) α= demi angle d ouverture de la lentille de l objectif n.sinα= fonction de la lentille, appelée ouverture numérique DMR= λ/2 ON
L ouverture numérique lentille frontale rayon lumineux non capté ON = n sinα α spécimen objet β cône de lumière du condenseur
L OBJECTIF Pouvoir de résolution: capacité de séparer 2 points contigus Distance minimale de résolution(dmr): concept plus facile Equation d Abbe: DMR= kλ/n.sinα k= constante, d environ 0,5 λ= longueur d onde n= indice de réfraction du milieu (entre lamelle et objectif) α= demi angle d ouverture de la lentille de l objectif n.sinα= fonction de la lentille, appelée ouverture numérique DMR= λ/2 ON
LE CONDENSEUR
PARAMETRES Longueur d onde: vers le bleu? ouverture numérique: qualité majeure d un objectif contraste Coloration de l objet amélioration des lentilles (apochromats) moyens optiques (contraste de phase) traitement du signal (vidéo) Différences d indice de réfraction Epaisseur de l objet: DMR = 1/10 de l épaisseur de l objet
performances des lentilles aberration chromatique: les courtes longueurs d onde ne sont pas focalisées au même endroit que les longues. objectif achromatique (corrigé pour bleu et rouge) aberration sphérique: le centre de l image n est pas focalisé au même endroit que la périphérie. objectif plan (corrigé pour vert) objectif apochromat(corrigé b,v,r, et 2 long d onde) longueur de tube: 160mm, 170mm et infini
Aberration chromatique
Aberration sphérique
Eclairage de Köhler - mettre au point un objet - fermer l iris condenseur (diaph. d ouverture) - fermer l iris d éclairage (diaph. de champ) - centrer si besoin le condenseur - régler hauteur du condenseur pour mettre au point l iris du diaphragme de champ - ouvrir presque complètement l iris condenseur (7/8) - ouvrir suffisamment le diapgragme de champ (juste pour ne plus le voir)
Limite du diaphragme De champ
Limite du diaphragme du condenseur
1 S 2 3 A 4 S : source ponctuelle A : orifice de petite taille 1, 2, 3, 4 rayons lumineux issus de S a, b, c, d rayons diffractés par A
S Optique géométrique D A S S A S Optique ondulatoire
Température de couleur Une pellicule couleur est caractérisée par: sensibilité (ASA, DIN) température (Kelvin: lumière du jour, artificielle)
Trop jaune ( filament trop froid) Bonne température Trop bleu (filament trop chauffé)
L examen en lumière polarisée
La lumière polarisée polariseur lumière naturelle lumière polarisée
Examen en lumière polarisée polariseur lumière naturelle lumière polarisée corps anisotrope: divise le rayon lumineux polarisé en deux rayons de vélocité différente. Les deux rayons émergents, provenant de la même source, interfèrent: franges colorées
polariseur analyseur lumière naturelle lumière polarisée extinction
lumière naturelle corps anisotrope lumière polarisée lumière b = a cosα
Amylose Dépôt artériel Dépots glomérulaires
Rouge congo, fond clair
Rouge congo, polarisation
Fond clair Polarisation
Fond clair
Fond clair diaphragmé
Fond Noir
Fond noir: grains d argent brillant sur fond noir, faible grossissement Fond clair, fort gross.
Comment augmenter le contraste des objets transparents contraste de phase (Zernicke) contraste interférentiel (Normarski)
Contrastede phase (zernicke)
Contraste de phase
Contraste interférentiel
Scolex, Fond clair
Scolex vivant, contraste de ph. interférentiel
Scolex vivant, contraste de ph. Interférentiel: détail.