VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION

FAVV BESTUUR LABORATORIA / AFSCA ADMINISTRATION DES LABORATOIRE LABO: LFSAL SECTIE - SECTION: PHYTO / RESIDUS VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION Analysemethode Méthode d analyse Techniek Technique Matrix / matrixgroep Matrice / Groupe de matrices Datum laatste aanpassing Date de la dernière adaptation MET-LFSAL-122 Détermination de la teneur en acide propionique et ses sels dans le pain. GC-FID Pain 3/12/2012 LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 1/87

FAVV BESTUUR LABORATORIA / AFSCA ADMINISTRATION DES LABORATOIRE LABO: LFSAL SECTIE - SECTION: PHYTO / RESIDUS Résumé des critères de performance : Matrice Gamme de quantification Modèle mathématique Nombre de niveaux d'étalonnage Critère sur l'étalonnage Ecart maximum observé sur l'étalonnage Critère sur l'identification par temps de rétention Ecart maximum observé sur le temps de rétention Critère sur le rendement Rendement le plus bas observé pain 250 à 4000 mg/kg linéaire 5 ± 10 % 7,4 % ± 0,9 % 0,5 % entre 80 et 110 % 95,3 % Domaine de validation Etalonnage Spécificité Rendement le plus haut observé Rendement moyen obtenu Comparaison résultat avec laboratoire accrédité LOQ LOD à 500 mg/kg à 1000 mg/kg à 3000 mg/kg 107,7 % 101,7 % non significativement différent 250 mg/kg LOQ 125 mg/kg LOD 7,9 mg/kg 67,8 mg/kg 73,5 mg/kg Justesse Répétabilité à 500 mg/kg à 1000 mg/kg à 3000 mg/kg à 500 mg/kg à 1000 mg/kg à 3000 mg/kg 16,2 mg/kg 102,2 mg/kg 371,8 mg/kg 7,83 % 7,00 % 12,04 % Reproductibilité intralaboratoire Incertitude de mesure élargie La validation répond aux exigences de la procédure LAB 00 P180. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 2/87

FAVV BESTUUR LABORATORIA / AFSCA ADMINISTRATION DES LABORATOIRE LABO: LFSAL SECTIE - SECTION: PHYTO / RESIDUS Le laboratoire qui veut appliquer cette méthode doit démontrer que les critères ci-dessous soient remplis pour les combinaisons matrices/paramètres : : doit satisfaire à l équation d Horwitz. Participation à un test interlaboratoire (ou comparaison avec un laboratoire accrédité ; voir 8.2.2) et obtention de résultats corrects. les contrôles décrits au 11.1 de la méthode doivent être respectés (blanc méthode, droite d'étalonnage, échantillons dopés). Historique de validation : Edition Révision par/date Motif de la révision Modifications 1 De Tandt Thierry / 03/12/2012 Adaptation au nouveau Adaptation au nouveau template template du dossier de validation. Contenu : Dossier de validation. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 3/87

FAVV BESTUUR LABORATORIA / AFSCA ADMINISTRATION DES LABORATOIRE LABO: LFSAL SECTIE - SECTION: PHYTO / RESIDUS VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION Analysemethode Méthode d analyse Techniek Technique Matrix / matrixgroep Matrice / Groupe de matrices Type validatie Type de validation Verantwoordelijke Responsable MET-LFSAL-122 Détermination de la teneur en acide propionique et ses sels dans le pain. GC-FID Pain Totale Naam-Nom : ETIENNE-THEWISSEN Functie - Fonction: RESPONSABLE DE SECTION Opgesteld door Rédaction par Naam Nom : DE TANDT THIERRY Functie - Fonction: EXPERT TECHNIQUE Datum - Date: 13/11/2012 Handtekeningen - Signatures: Sé Medewerkers Collaborateurs Periode van validatie Période de validation Functie - Fonction: EXPERT TECHNIQUE - DE TANDT THIERRY (finalisation méthode, essais de validation et rédaction dossier de validation) - OFFERMANNE MARIE-CHRISTINE (essais de validation) - DUPUCHE NATHALIE (essais de validation) - MONISSE ISABELLE (essais de validation) - ERVEN VINCIANNE (bibliographie, rédaction méthode et essais préliminaires) Functie - Fonction: ASSISTANT TECHNIQUE : - DELBROUCK STANY (essais de validation : partie préparation uniquement) Start - Début: 09/05/2011 Einde - Fin: 19/11/2012 (adaptation au nouveau template de rapport de validation : 03/12/2012) Methode goedgekeurd en geschikt bevonden door Méthode approuvée et jugé convenable pour la routine par Naam-Nom : ETIENNE-THEWISSEN Functie - Fonction: RESPONSABLE DE SECTION Datum - Date: 19/05/2011 Handtekeningen - Signatures: Sé Hierna volgt een beschrijving van de resultaten van het validatieonderzoek zoals aangegeven in stap 8 van de procedure LAB 00 P 180. Ce qui suit est une description des résultats de l'étude de validation comme indiqué dans l'étape 8 de la procédure LAB P 00 180. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 4/87

Dossier de validation de la méthode analytique : DETERMINATION DE LA TENEUR EN ACIDE PROPIONIQUE ET SES SELS DANS LE PAIN PAR GC-FID (MET-LFSAL-122) Table des matières 1. Paramètres de validation 1.1 Plan de validation 1.2 Domaine de validation 1.3 Spécificité 1.4 LOD 1.5 LOQ 1.6 Etalonnage 1.7 Justesse 1.8 Répétabilité & reproductibilité 1.9 Incertitude de mesure 2. Plan de validation 2.1 Description 2.2 Tableau récapitulatif des essais 2.3 Matrices utilisées 3. Domaine de validation 4. Données brutes et résultats 5. Spécificité 6. LOD & LOQ 6.1 Détermination de la LOQ 6.2 Détermination de la LOD 6.3 Aspect pratique de la LOD et de la LOQ 7. Etalonnage 8. Justesse 8.1 A partir des rendements sur matrices blanches dopées 8.2 A partir de matrices non blanches (série n 5) 9. Répétabilité & reproductibilité intra-laboratoire 9.1 Niveau : 1000 mg/kg 9.2 Niveau : 3000 mg/kg 9.3 Niveau : 500 mg/kg 10. Incertitude de mesure 10.1 Niveau : 1000 mg/kg 10.2 Niveau : 3000 mg/kg 10.3 Niveau : 500 mg/kg 11. Conclusion LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 5/87

1. Paramètres de validation 1.1 Plan de validation Le plan d'expérience des essais de validation sert à estimer, dans les conditions où le mode opératoire sera appliqué en routine, quelles sont les performances de la méthode. Celui-ci devra définir le nombre de séries et d'essais par série. Le nombre minimum de séries est fixé à 3 et au minimum 3 essais par série. La validation sera réalisée sur une ou des matrices représentatives des échantillons de routine. Dans le cas d'une méthode multi-matrices, la validation pourra être réalisée sur une matrice constituée des sousmatrices. 1.2 Domaine de validation Le domaine de validation de la méthode sera caractérisé par la gamme de concentrations où la méthode aura été validée et les matrices analysées. 1.3 Spécificité En fonction de la technique analytique, la spécificité d'une méthode peut être appréciée sur base du temps de rétention, de la spécifité avec un réactif, d'un spectre UV ou de masse,... 1.4 LOD La limite de détection de la méthode sera égale la teneur de l'analyte dans la matrice qui donnera, en suivant le mode opératoire de la méthode, une réponse analytique correspondant à la moitié de celle du plus petit niveau d'étalonnage. 1.5 LOQ La limite de quantification de la méthode sera égale la teneur de l'analyte dans la matrice qui donnera, en suivant le mode opératoire de la méthode, une réponse analytique correspondant à celle du plus petit niveau d'étalonnage. 1.6 Etalonnage L'étalonnage est réalisé avec un minimum de 5 niveaux. Lors du calcul de la courbe d'étalonnage, le rejet d un des niveaux est autorisé à condition que cela ne soit ni le premier ni le dernier. Le modèle de réponse sera soit linéaire, soit quadratique. La validité de la courbe d'étalonnage est évalué sur la correspondance entre la valeur mesurée et la valeur théorique de chaque niveau d'étalonnage sur base d'un écart maximum de 10 %. 1.7 Justesse L'écart entre la récupération moyenne de chaque série déterminée expérimentalement sur un CRM et lors de la validation et la valeur théorique doit se situer dans les limites suivantes en fonction des concentrations : Justesse minimale des méthodes quantitatives Journal officiel des Communautés européennes DÉCISION DE LA COMMISSION du 12 août 2002 portant modalités d application de la directive 96/23/CE du Conseil en ce qui concerne les performances des méthodes d analyse et l interprétation des résultats (2002/657/CE) Note : Lorsqu'aucun matériau de référence n'est disponible, la justesse des mesures est évaluée par la récupération d'ajouts de quantités connues de l'analyte ou des analytes à un blanc matrice. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 6/87

1. Paramètres de validation La justesse peut aussi être évaluée grâce à la participation à des tests interlaboratoires ou, à défaut, par la comparaison des résultats d'échantillons analysés à la fois par le laboratoire et par un laboratoire tiers accrédité pour le couple paramètre/matrice concerné. 1.8 Répétabilité & reproductibilité intra-laboratoire La répétabilité et la reproductibilité intra-laboratoire sont calculées à partir de minimum 3 séries de 3 essais réalisées sur des matrices contenant "naturellement" l'analyte recherché. Pour être dans les conditions de reproductibilité intra-laboratoire, il faut faire varier au moins un paramètre (analyste, jour, appareil,...) d'une série à l'autre. La répétabilité et la reproductibilité doivent être déterminés à différents niveaux, par exemple à ceux correspondant aux normes légales en vigueur. Critère d'évaluation : vérifier que le %RSDr et/ou le %RSDRW calculés sont inférieurs ou égaux aux valeurs maximales admissibles découlant de l'équation d'horwitz. 1.9 Incertitude de mesure L'incertitude de mesure de la méthode est calculée sur base de la fidélité intermédiaire dans le cas où les résultats analytiques sont corrigés par le rendement ou de l'approche TOP-DOWN s'il n'y a pas de correction par le rendement sur le résultat analytique. Elle doit être déterminée à différents niveaux, par exemple à ceux correspondant aux normes légales en vigueur. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 7/87

2. Plan de validation 2.1 Description 2.1.1 Plan original La validation de la méthode a été réalisée sur 4 séries de 6 essais à la norme la plus stricte, à savoir un maximum autorisé de 1000 mg/kg dans les pains (la norme la plus élevée est à 3000 mg/kg dans le cas de pains découpés). Les essais ont été effectués sur des petits pains type sandwich, en faisant varier les paramètres jour et analyste. Ce plan de validation répond donc aux exigences présentées au point 1.1 Plan de validation. 2.1.2 Essais complémentaires suite à l'audit interne Suite à l'audit interne du 25/05/2011 d'alain Dubois, une cinquième série d'essai a été réalisée sur 3 matrices (pain toast, pain pita et pain burger) supposées non blanches (l'emballage indique la présence de propionate de calcium), afin d'évaluer l'efficactité de l'extraction. Cette évaluation a été faite à la fois de manière qualitative et quantitative. D'un point de vue qualitatif, si l'extraction a bien lieu, on doit retrouver un pic d'acide propionique pour chacune de ces 3 matrices. Ces essais nous montreront également si la méthode est applicable, du point de vue de l'effet de matrice, à des types de pain très différents. D'un point de vue quantitatif, si l'extraction est efficace (le reste de la méthode ayant été précédemment validé), notre résultat doit concorder avec celui d'un laboratoire accrédité pour le dosage de l'acide propionique dans le pain. Pour ce faire, nous avons fait analyser une aliquote (un demi pain) d'une de ces 3 matrices par le laboratoire SGS Belgium (Agro Food Services). Cet essai, à défaut d'avoir trouvé un CRM ou un test interlaboratoires, nous permettra de vérifier la justesse de la méthode sur une autre base que les rendements d'échantillons dopés. 2.1.3 Essais complémentaires suite à l'audit Belac Suite à l'audit Belac du 01/06/2011, 4 séries d'essais supplémentaires ont été réalisées afin d'une part, de déterminer une incertitude de mesure à 3000 mg/kg (4 x 6 dopés à 3000 mg/kg) et d'autre part, afin de déterminer la répétabilité et la reproductibilité de la méthode aux 2 niveaux correspondant aux normes légales (1000 et 3000 mg/kg). Ces séries (n 6 à 9) ont été effectués en faisant varier les paramètres jour et analyste. La matrice utilisée pour déterminer l'incertitude de mesure à 3000 mg/kg sont des (matrice blanche que l'on a dopé à 3000 mg/kg). La matrice utilisée pour déterminer la répétabilité et la reproductibilité à 1000 mg/kg est du pain complet dont la teneur "naturelle" est équivalente à ce niveau. La matrice utilisée pour déterminer la répétabilité et la reproductibilité à 3000 mg/kg est du pain toast dont la teneur "naturelle" est équivalente à ce niveau. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 8/87

2. Plan de validation 2.1.4 Essais complémentaires suite à la nouvelle procédure de validation de méthode. Selon la nouvelle procédure de validation de méthode (LAB-00-P-180-Validation méthodes analyse v02-15/03/2012), il faut réaliser les essais de validation à 3 niveaux de concentration, généralement à 1/2 fois, 1 fois et 2 fois la norme. Comme des essais de validation ont déjà été réalisés à 2 niveaux (correspondant aux 2 normes de 1000 et 3000 mg/kg), nous avons décidé de réaliser des essais complémentaires à 1/2 fois la norme la plus petite, soit au niveau de 500 mg/kg. Trois séries d'essais supplémentaires ont donc été réalisées pour déterminer la répétabilité, la reproductibilité et l'incertitude de mesure à 500 mg/kg (3 x 6 dopés à 500 mg/kg). Ces séries (n 10 à 12) ont été effectuées en faisant varier les paramètres jour et analyste. Ne disposant pas de pain contenant "naturelllement" cette teneur en acide propionique, la matrice utilisée sont les mini- Carrefour (matrice blanche) que l'on a dopés à 500 mg/kg. Il s'agit des mêmes qu'utilisés lors des séries de validation précédentes (6 à 9) que nous avions conservés au congélateur. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 9/87

2. Plan de validation 2.2 Tableau récapitulatif des essais Série n Date Analyste blanc méthode matrice non dopé dopé New Cal. Nbre level Contrôles 1 09/05/2011 Dupuche Nathalie OUI 3 6 (+1000 mg/kg) OUI 5 1ère ligne 2 10/05/2011 De Tandt Thierry NON* 1 6 (+1000 mg/kg) OUI 5 1ère ligne (matrice blanche) 3 12/05/2011 Monisse Isabelle OUI 1 6 (+1000 mg/kg) OUI 5 1ère ligne 4 12/05/2011 Stany Delbrouck** OUI 1 6 (+1000 mg/kg) OUI 5 1ère ligne Toast (~3000 mg/kg) 3 3 (+1000 mg/kg) 5 26/05/2011 Marie-Christine Offermanne OUI Burger (~1700 mg/kg) 2 - OUI 5 1ère ligne 3ème ligne Pita (~1250 mg/kg) 2 - (matrice blanche) 1 6 (+3000 mg/kg) 6 17/06/2011 De Tandt Thierry OUI Toast (~3000 mg/kg) 3 - OUI 5 1ère ligne Pain complet (~1000 mg/kg) 3 - (matrice blanche) 1 6 (+3000 mg/kg) 7 17/06/2011 Marie-Christine Offermanne OUI Toast (~3000 mg/kg) 3 - OUI 5 1ère ligne Pain complet (~1000 mg/kg) 3 - (matrice blanche) 1 6 (+3000 mg/kg) 8 20/06/2011 De Tandt Thierry OUI OUI 5 1ère ligne Pain complet (~1000 mg/kg) 3-9 22/06/2011 Marie-Christine Offermanne (matrice blanche) 1 6 (+3000 mg/kg) OUI OUI 5 Toast (~3000 mg/kg) 3-1ère ligne 10 10/10/2012 De Tandt Thierry OUI 0 6 (+500 mg/kg) OUI 5 1ère ligne 11 06/11/2012 M-C Offermanne OUI (matrice blanche) 0 6 (+500 mg/kg) OUI 5 1ère ligne 12 19/11/2012 M-C Offermanne OUI 0 6 (+500 mg/kg) OUI 5 1ère ligne * oubli. ** partie préparation uniquement, la partie GC étant réalisée par De Tandt Thierry. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 10/87

2. Plan de validation 2.3 Matrices utilisées 2.3.1 Matrice des séries n 1 à 4 La matrice utilisée pour les séries n 1 à 4 est du pain préemballé type sandwich (mini- La Lorraine). Cette matrice ne contenant pas d'acide propionique d'après nos essais (concordant avec la liste d'ingrédients indiquée sur l'emballage), seule la première série comprend une répétition du dosage sur la matrice non dopée. Les 3 séries suivantes ne comprenne qu'un seul essai non dopé. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 11/87

2. Plan de validation 2.3.2 Matrices de la série n 5 Les 3 matrices non blanches utilisées pour la série n 5 sont : 1) pain Toast Carrefour (contenant environ 3000 mg/kg) LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 12/87

2. Plan de validation 2) pain Burger Carrefour (contenant environ 1700 mg/kg) LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 13/87

2. Plan de validation 3) pain Pita Carrefour (contenant environ 1250 mg/kg) LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 14/87

2. Plan de validation 2.3.3 Matrices des séries n 6 à 9 1) Carrefour (matrice blanche) 2) pain Toast Carrefour (contenant environ 3000 mg/kg) LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 15/87

2. Plan de validation 3) pain complet Boerkens (contenant environ 1000 mg/kg) LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 16/87

2. Plan de validation 2.3.4 Matrice des séries n 10 à 12 Sandwiches Carrefour (matrice blanche) LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 17/87

3. Domaine de validation La gamme de concentration couverte par la méthode correspond à des pains dont la teneur en acide propionique se situe entre 250 et 4000 mg/kg, ceci afin de couvrir les 2 normes en vigueur, à savoir 1000 mg/kg pour les pains et 3000 mg/kg pour les pains et découpés. Seule la matrice pain a été testée puisque c'est la seule actuellement visée par les contrôles de l'afsca concernant le paramètre acide propionique. Toutefois, des pains de types très différents ont pu être analysés avec cette méthode : pain complet, pain sandwich, pain toast, pain burger et pain pita. Fiche technique du secteur "Transformation" comprenant le paramètre "Acide propionique" LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 18/87

3. Champ d'application Fiche technique du secteur "Distribution" comprenant le paramètre "Acide propionique" LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 19/87

3. Champ d'application Remarquons ici qu'aucune des 5 matrices testées ne présente d'effet de matrice indésirable et que les chromatogrammes obtenus sont assez semblables : Pain Toast Pain Burger LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 20/87

3. Champ d'application Pain Pita Pain Sandwich (dopé à 1000 mg/kg) LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 21/87

3. Champ d'application Pain complet LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 22/87

4. Données brutes et résultats Série n 1 : données brutes Données brutes des rapports d'injection : Standard interne Acide propionique Solutions Tps rét. Surface Tps rét. Surface quantité (mg) L01 9,37 59256 7,64 4278 0,2792 L02 9,37 50900 7,62 7682 0,5177 L03 9,36 46000 7,61 15308 1,0687 L04 9,37 46772 7,61 31394 2,0941 L05 9,36 46876 7,60 66766 4,3758 C1 9,36 48146 7,62 9094 0,6327 C2 9,37 47293 7,61 45732 2,9903 blanc méthode* 9,36 40039 non détecté 0 0,0000 non dopé 1 9,36 41812 non détecté 0 0,0000 non dopé 2 9,36 39989 non détecté 0 0,0000 non dopé 3 9,36 45149 non détecté 0 0,0000 dopé 1 9,36 46356 7,61 15424 1,0685 dopé 2 9,37 45252 7,61 14559 1,0352 dopé 3 9,37 48338 7,62 15515 1,0329 dopé 4 9,37 45127 7,62 14565 1,0383 dopé 5 9,36 43246 7,61 14103 1,0485 dopé 6 9,36 43436 7,61 14209 1,0515 C1 9,36 44889 7,62 8352 0,6242 C2 9,36 47900 7,60 45870 2,9619 * Standard interne ajouté au blanc méthode par erreur. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 23/87

4. Données brutes et résultats Série n 1 : résultats des contrôles Préparation et contrôle de la droite de calibration : pesée acide propionique (mg) : pureté (%) : volume : concentration solution mère : 108,4 mg 99,94 % 50 ml 2,1667 mg/ml L1 : dilution 125 µl / 20 ml L2 : dilution 250 µl / 20 ml L3 : dilution 500 µl / 20 ml L4 : dilution 1000 µl / 20 ml L5 : dilution 2000 µl / 20 ml ac.propionique (mg) pour 200 µl de SI tolérance de 10 % calculée mesurée écart (%) accepté 0,2708 0,2792 3,1 oui 0,5417 0,5177-4,4 oui 1,0833 1,0687-1,4 oui 2,1667 2,0941-3,4 oui 4,3334 4,3758 1,0 oui Préparation des solutions de contrôle et suivi de la réponse : pesée acide propionique (mg) : pureté (%) : volume : concentration solution mère : C1 (120 µl / 20 ml) : C2 (600 µl / 20 ml) : 250,3 mg 99,94 % 50 ml 5,0030 mg/ml 0,6004 mg acide propionique pour 200 µl de la solution de SI 3,0018 mg acide propionique pour 200 µl de la solution de SI ac.propionique (mg) pour 200 µl de SI tolérance de 10 % calculée mesurée écart (%) accepté C1 0,6004 0,6327 5,4 oui C2 3,0018 2,9903-0,4 oui C1 0,6004 0,6242 4,0 oui C2 3,0018 2,9619-1,3 oui LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 24/87

4. Données brutes et résultats Série n 1 : résultats des dopés Solution de dopage = solution mère des solutions de contrôle Concentration solution de dopage (mg/ml) : 5,0030 nature de l'échantillon numéro de l'échantillon dopé 1 dopé 2 dopé 3 dopé 4 dopé 5 dopé 6 prise d'essai (g) 4,93 4,90 4,89 4,90 4,86 4,90 volume de solution de dopage ajouté (ml) 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 soit en acide propionique pur (mg) 5,0030 5,0030 5,0030 5,0030 5,0030 5,0030 Ac. Propionique (mg)* 1,0685 1,0352 1,0329 1,0383 1,0485 1,0515 Teneur mesurée dans l'échantillon dopé (mg/kg) 1083,7 1056,3 1056,1 1059,5 1078,7 1073,0 Teneur mesurée dans l'échantillon non dopé (mg/kg) 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 donc il y a dans la PE avant dopage (mg) 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 => dans l'échantillon dopé, il y a en théorie (mg/kg) 1014,8 1021,0 1023,1 1021,0 1029,4 1021,0 Taux de récupération (%) 106,8 103,5 103,2 103,8 104,8 105,1 * Résultat donné par le GC en ayant introduit dans le logiciel les valeurs calculées pour L1 à L5 comme levels de calibration. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 25/87

4. Données brutes et résultats Série n 2 : données brutes Données brutes des rapports d'injection : Standard interne Acide propionique Solutions Tps rét. Surface Tps rét. Surface quantité (mg) L01 9,36 46979 7,63 3156 0,2408 L02 9,36 41555 7,62 6198 0,4809 L03 9,36 39191 7,61 12162 0,9532 L04 9,36 41729 7,60 27047 1,9430 L05 9,36 40603 7,60 54047 3,9441 C1 9,36 43043 7,61 8421 0,6171 C2 9,36 39292 7,60 38670 2,9275 non dopé 9,36 38314 non détecté 0 0,0000 dopé 1 9,36 37139 7,61 11906 0,9832 dopé 2 9,36 37448 7,61 12108 0,9913 dopé 3 9,36 38338 7,61 12596 1,0066 dopé 4 9,36 38015 7,61 12050 0,9727 dopé 5 9,36 36513 7,61 11909 0,9996 dopé 6 9,36 38379 7,61 12413 0,9916 C1 9,36 41708 7,62 8127 0,6149 C2 9,36 41217 7,60 39959 2,8845 LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 26/87

4. Données brutes et résultats Série n 2 : résultats des contrôles Préparation et contrôle de la droite de calibration : pesée acide propionique (mg) : pureté (%) : volume : concentration solution mère : 98,2 mg 99,94 % 50 ml 1,9628 mg/ml L1 : dilution 125 µl / 20 ml L2 : dilution 250 µl / 20 ml L3 : dilution 500 µl / 20 ml L4 : dilution 1000 µl / 20 ml L5 : dilution 2000 µl / 20 ml ac.propionique (mg) pour 200 µl de SI tolérance de 10 % calculée mesurée écart (%) accepté 0,2454 0,2408-1,9 oui 0,4907 0,4809-2,0 oui 0,9814 0,9532-2,9 oui 1,9628 1,9430-1,0 oui 3,9256 3,9441 0,5 oui Préparation des solutions de contrôle et suivi de la réponse : pesée acide propionique (mg) : pureté (%) : volume : concentration solution mère : C1 (120 µl / 20 ml) : C2 (600 µl / 20 ml) : 247,2 mg 99,94 % 50 ml 4,9410 mg/ml 0,5929 mg acide propionique pour 200 µl de la solution de SI 2,9646 mg acide propionique pour 200 µl de la solution de SI ac.propionique (mg) pour 200 µl de SI tolérance de 10 % calculée mesurée écart (%) accepté C1 0,5929 0,6171 4,1 oui C2 2,9646 2,9275-1,3 oui C1 0,5929 0,6149 3,7 oui C2 2,9646 2,8845-2,7 oui LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 27/87

4. Données brutes et résultats Série n 3 : données brutes Données brutes des rapports d'injection : Standard interne Acide propionique Solutions Tps rét. Surface Tps rét. Surface quantité (mg) L01 9,38 36307 7,65 2394 0,2433 L02 9,38 35581 7,64 4919 0,4668 L03 9,39 39668 7,64 11931 0,9690 L04 9,38 37107 7,63 22567 1,9192 L05 9,39 37607 7,62 47239 3,9218 C1 9,39 37530 7,64 6386 0,5654 C2 9,39 36662 7,63 34880 2,9799 blanc méthode non détecté 0 non détecté 0 0,0000 non dopé 9,38 40285 non détecté 0 0,0000 dopé 1 9,38 36037 7,63 11599 1,0342 dopé 2 9,38 35789 7,63 11065 0,9951 dopé 3 9,38 35458 7,63 11094 1,0065 dopé 4 9,38 36816 7,63 11176 0,9777 dopé 5 9,38 36990 7,63 11204 0,9756 dopé 6 9,38 35049 7,63 10854 0,9966 C1 9,38 38378 7,64 6539 0,5661 C2 9,37 36953 7,61 35075 2,9731 LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 29/87

4. Données brutes et résultats Série n 3 : résultats des contrôles Préparation et contrôle de la droite de calibration : pesée acide propionique (mg) : pureté (%) : volume : concentration solution mère : 97,6 mg 99,94 % 50 ml 1,9508 mg/ml L1 : dilution 125 µl / 20 ml L2 : dilution 250 µl / 20 ml L3 : dilution 500 µl / 20 ml L4 : dilution 1000 µl / 20 ml L5 : dilution 2000 µl / 20 ml ac.propionique (mg) pour 200 µl de SI tolérance de 10 % calculée mesurée écart (%) accepté 0,2439 0,2433-0,2 oui 0,4877 0,4668-4,3 oui 0,9754 0,9690-0,7 oui 1,9508 1,9192-1,6 oui 3,9017 3,9218 0,5 oui Préparation des solutions de contrôle et suivi de la réponse : pesée acide propionique (mg) : pureté (%) : volume : concentration solution mère : C1 (120 µl / 20 ml) : C2 (600 µl / 20 ml) : 246,2 mg 99,94 % 50 ml 4,9210 mg/ml 0,5905 mg acide propionique pour 200 µl de la solution de SI 2,9526 mg acide propionique pour 200 µl de la solution de SI ac.propionique (mg) pour 200 µl de SI tolérance de 10 % calculée mesurée écart (%) accepté C1 0,5905 0,5654-4,3 oui C2 2,9526 2,9799 0,9 oui C1 0,5905 0,5661-4,1 oui C2 2,9526 2,9731 0,7 oui LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 30/87

4. Données brutes et résultats Série n 4 : données brutes Données brutes des rapports d'injection : Standard interne Acide propionique Solutions Tps rét. Surface Tps rét. Surface quantité (mg) L01 9,37 37972 7,64 3132 0,2831 L02 9,37 36818 7,63 6310 0,5447 L03 9,37 35570 7,63 12840 1,1024 L04 9,37 35411 7,62 26907 2,2759 L05 9,37 34609 7,60 52985 4,5445 C1 9,37 34824 7,62 6720 0,6082 C2 9,37 34743 7,61 37263 3,1957 blanc méthode non détecté 0 non détecté 0 0,0000 non dopé 9,36 34538 non détecté 0 0,0000 dopé 1 9,36 34165 7,62 11637 1,0425 dopé 2 9,36 33558 7,62 11731 1,0689 dopé 3 9,36 32970 7,62 11476 1,0644 dopé 4 9,37 33091 7,62 11410 1,0549 dopé 5 9,36 31929 7,62 10859 1,0409 dopé 6 9,36 33432 7,61 11354 1,0396 C1 9,36 37154 7,62 7046 0,5984 C2 9,37 35671 7,61 37491 3,1326 LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 32/87

4. Données brutes et résultats Série n 4 : résultats des contrôles Préparation et contrôle de la droite de calibration : pesée acide propionique (mg) : pureté (%) : volume : concentration solution mère : 113,5 mg 99,94 % 50 ml 2,2686 mg/ml L1 : dilution 125 µl / 20 ml L2 : dilution 250 µl / 20 ml L3 : dilution 500 µl / 20 ml L4 : dilution 1000 µl / 20 ml L5 : dilution 2000 µl / 20 ml ac.propionique (mg) pour 200 µl de SI tolérance de 10 % calculée mesurée écart (%) accepté 0,2836 0,2831-0,2 oui 0,5672 0,5447-4,0 oui 1,1343 1,1024-2,8 oui 2,2686 2,2759 0,3 oui 4,5373 4,5445 0,2 oui Préparation des solutions de contrôle et suivi de la réponse : pesée acide propionique (mg) : pureté (%) : volume : concentration solution mère : C1 (120 µl / 20 ml) : C2 (600 µl / 20 ml) : 259,8 mg 99,94 % 50 ml 5,1929 mg/ml 0,6231 mg acide propionique pour 200 µl de la solution de SI 3,1157 mg acide propionique pour 200 µl de la solution de SI ac.propionique (mg) pour 200 µl de SI tolérance de 10 % calculée mesurée écart (%) accepté C1 0,6231 0,6082-2,4 oui C2 3,1157 3,1957 2,6 oui C1 0,6231 0,5984-4,0 oui C2 3,1157 3,1326 0,5 oui LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 33/87

4. Données brutes et résultats Série n 5 : données brutes Données brutes des rapports d'injection : Standard interne Acide propionique Solutions Tps rét. Surface Tps rét. Surface quantité (mg) L01 9,32 40249 7,59 3036 0,2754 L02 9,32 37847 7,58 5694 0,5051 L03 9,31 34028 7,57 10680 1,0055 L04 9,31 38461 7,56 24180 1,9694 L05 9,32 34624 7,56 46391 4,1470 C1 9,31 40995 7,57 7124 0,5765 C2 9,32 41786 7,56 39687 2,9525 blanc méthode non détecté 0 non détecté 0 0,0000 toast non dopé 1 9,31 33562 7,55 32329 2,9939 toast non dopé 2 9,31 36717 7,56 35203 2,9801 toast non dopé 3 9,31 37021 7,55 36027 3,0241 toast dopé 1 9,31 36459 7,55 49422 4,1950 toast dopé 2 9,31 40721 7,55 54191 4,1192 toast dopé 3 9,31 37527 7,55 50846 4,1930 C1 9,32 43009 7,57 7683 0,5914 C2 9,32 44368 7,56 42862 3,0025 burger non dopé 1 9,32 33957 7,57 18258 1,9607 burger non dopé 2 9,31 40110 7,56 21308 1,6710 pita non dopé 1 9,3 38362 7,56 15801 1,3057 pita non dopé 2 9,32 32310 7,57 12557 1,2344 C1 9,31 40415 7,57 7140 0,5854 C2 9,31 38341 7,55 37136 3,0101 LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 35/87

4. Données brutes et résultats Série n 5 : résultats des contrôles Préparation et contrôle de la droite de calibration : pesée acide propionique (mg) : pureté (%) : volume : concentration solution mère : 102,6 mg 99,94 % 50 ml 2,0508 mg/ml L1 : dilution 125 µl / 20 ml L2 : dilution 250 µl / 20 ml L3 : dilution 500 µl / 20 ml L4 : dilution 1000 µl / 20 ml L5 : dilution 2000 µl / 20 ml ac.propionique (mg) pour 200 µl de SI tolérance de 10 % calculée mesurée écart (%) accepté 0,2563 0,2754 7,4 oui 0,5127 0,5051-1,5 oui 1,0254 1,0055-1,9 oui 2,0508 1,9694-4,0 oui 4,1015 4,1470 1,1 oui Préparation des solutions de contrôle et suivi de la réponse : pesée acide propionique (mg) : pureté (%) : volume : concentration solution mère : C1 (120 µl / 20 ml) : C2 (600 µl / 20 ml) : 258,8 mg 99,94 % 50 ml 5,1729 mg/ml 0,6207 mg acide propionique pour 200 µl de la solution de SI 3,1037 mg acide propionique pour 200 µl de la solution de SI ac.propionique (mg) pour 200 µl de SI tolérance de 10 % calculée mesurée écart (%) accepté C1 0,6207 0,5765-7,1 oui C2 3,1037 2,9525-4,9 oui C1 0,6207 0,5914-4,7 oui C2 3,1037 3,0025-3,3 oui C1 0,6207 0,5854-5,7 oui C2 3,1037 3,0101-3,0 oui LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 36/87

4. Données brutes et résultats Série n 5 : résultats des non dopés nature de l'échantillon et norme N échantillon prise d'essai (g) Ac. Propionique (mg)* Teneur en Ac. Propionique (mg/kg) LOQ sur base du L1 (mg/kg) pain toast (emballé tranché) toast non dopé 1 5,03 2,9939 2976,0 pain toast (emballé tranché) toast non dopé 2 5,00 2,9801 2980,1 pain toast (emballé tranché) toast non dopé 3 5,06 3,0241 2988,2 pain burger (emballé tranché) burger non dopé 1 5,01 1,6907 1687,3 pain burger (emballé tranché) burger non dopé 2 5,00 1,6710 1671,0 pain pita (emballé) pita non dopé 1 5,14 1,3057 1270,1 pain pita (emballé) pita non dopé 2 5,00 1,2344 1234,4 254,8 256,3 253,3 255,8 256,3 249,4 256,3 * Résultat donné par le GC en ayant introduit dans le logiciel les valeurs calculées pour L1 à L5 comme levels de calibration. Teneur moyenne du pain toast = 2981,5 mg/kg (valeur utilisée pour le calcul des rendements des dopés) LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 37/87

4. Données brutes et résultats Série n 5 : résultats des dopés Solution de dopage = solution mère des solutions de contrôle Concentration solution de dopage (mg/ml) : 5,1729 nature de l'échantillon pain toast (emballé tranché) pain toast (emballé tranché) pain toast (emballé tranché) numéro de l'échantillon toast dopé 1 toast dopé 2 toast dopé 3 prise d'essai (g) 5,03 5,00 5,06 volume de solution de dopage ajouté (ml) 1,00 1,00 1,00 soit en acide propionique pur (mg) 5,1729 5,1729 5,1729 Ac. Propionique (mg)* 4,1950 4,1192 4,1930 Teneur mesurée dans l'échantillon dopé (mg/kg) 4170,0 4119,2 4143,3 Teneur mesurée dans l'échantillon non dopé (mg/kg) 2981,5 2981,5 2981,5 donc il y a dans la PE avant dopage (mg) 14,997 14,907 15,086 => dans l'échantillon dopé, il y a en théorie (mg/kg) 4009,9 4016,0 4003,8 Taux de récupération (%) 104,0 102,6 103,5 * Résultat donné par le GC en ayant introduit dans le logiciel les valeurs calculées pour L1 à L5 comme levels de calibration. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 38/87

4. Données brutes et résultats Série n 6 : données brutes Données brutes des rapports d'injection : Standard interne Acide propionique Solutions Tps rét. Surface Tps rét. Surface quantité (mg) L01 9,26 53761 7,52 3981 0,2662 L02 9,26 55648 7,52 8337 0,4900 L03 9,26 41912 7,52 13513 0,9997 L04 9,26 54059 7,51 35846 2,0059 L05 9,26 48347 7,50 66698 4,1219 C1 9,27 42043 7,53 42043 0,6242 C2 9,27 49079 7,51 49080 3,0011 blanc méthode non détecté 0 non détecté 0 0,0000 Sand. non dopé 9,27 60834 non détecté 0 0,0000 Sand. dopé 1 9,27 54071 7,51 54253 3,0109 Sand. dopé 2 9,28 550,36 7,52 57480 3,1321 Sand. dopé 3 9,28 56952 7,52 57397 3,0240 Sand. dopé 4 9,28 59750 7,52 61217 3,0735 Sand. dopé 5 9,28 59759 7,52 61164 3,0704 Sand. dopé 6 9,28 56606 7,52 58722 3,1114 C1 9,29 47097 7,55 9085 0,6172 C2 9,29 39345 7,54 39909 3,0433 Pain complet 1 9,29 42067 7,55 13968 1,0275 Pain complet 2 9,29 33325 7,55 11222 1,0420 Pain complet 3 9,30 43498 7,50 14657 1,0427 Toast 1 9,30 55559 7,54 53656 2,8998 Toast 2 9,29 47075 7,54 46054 2,9368 Toast 3 9,29 44959 7,54 44112 2,9453 C1 9,30 47641 7,56 9207 0,6183 C2 9,29 47192 7,53 48131 3,0597 LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 39/87

4. Données brutes et résultats Série n 6 : résultats des contrôles Préparation et contrôle de la droite de calibration : pesée acide propionique (mg) : pureté (%) : volume : concentration solution mère : 102,4 mg 99,94 % 50 ml 2,0468 mg/ml L1 : dilution 125 µl / 20 ml L2 : dilution 250 µl / 20 ml L3 : dilution 500 µl / 20 ml L4 : dilution 1000 µl / 20 ml L5 : dilution 2000 µl / 20 ml ac.propionique (mg) pour 200 µl de SI tolérance de 10 % calculée mesurée écart (%) accepté 0,2558 0,2662 4,0 oui 0,5117 0,4900-4,2 oui 1,0234 0,9997-2,3 oui 2,0468 2,0059-2,0 oui 4,0935 4,1219 0,7 oui Préparation des solutions de contrôle et suivi de la réponse : pesée acide propionique (mg) : pureté (%) : volume : concentration solution mère : C1 (120 µl / 20 ml) : C2 (600 µl / 20 ml) : 250,0 mg 99,94 % 50 ml 4,9970 mg/ml 0,5996 mg acide propionique pour 200 µl de la solution de SI 2,9982 mg acide propionique pour 200 µl de la solution de SI ac.propionique (mg) pour 200 µl de SI tolérance de 10 % calculée mesurée écart (%) accepté C1 0,5996 0,6242 4,1 oui C2 2,9982 3,0011 0,1 oui C1 0,5996 0,6172 2,9 oui C2 2,9982 3,0433 1,5 oui C1 0,5996 0,6183 3,1 oui C2 2,9982 3,0597 2,1 oui LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 40/87

4. Données brutes et résultats Série n 6 : résultats des non dopés nature de l'échantillon et norme N échantillon prise d'essai (g) Ac. Propionique (mg)* Teneur en Ac. Propionique (mg/kg) LOQ sur base du L1 (mg/kg) mini- Carrefour Sand. non dopé 4,99 0,0000 0,0 pain complet Boerkens Pain complet 1 5,08 1,0275 1011,3 pain complet Boerkens Pain complet 2 5,00 1,0420 1042,0 pain complet Boerkens Pain complet 3 5,06 1,0427 1030,3 paint toast Carrefour Toast 1 5,01 2,8998 2894,0 paint toast Carrefour Toast 2 5,02 2,9368 2925,1 paint toast Carrefour Toast 3 5,01 2,9453 2939,4 256,9 252,3 256,3 253,3 255,8 255,3 255,8 * Résultat donné par le GC en ayant introduit dans le logiciel les valeurs calculées pour L1 à L5 comme levels de calibration. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 41/87

4. Données brutes et résultats Série n 6 : résultats des dopés Solution de dopage = solution mère des solutions de contrôle Concentration solution de dopage (mg/ml) : 4,9970 nature de l'échantillon numéro de l'échantillon Sand. dopé 1 Sand. dopé 2 Sand. dopé 3 Sand. dopé 4 Sand. dopé 5 Sand. dopé 6 prise d'essai (g) 5,01 5,00 5,00 5,04 5,00 5,01 volume de solution de dopage ajouté (ml) 3,00 3,00 3,00 3,00 3,00 3,00 soit en acide propionique pur (mg) 14,9910 14,9910 14,9910 14,9910 14,9910 14,9910 Ac. Propionique (mg)* 3,0109 3,1321 3,0240 3,0735 3,0704 3,1114 Teneur mesurée dans l'échantillon dopé (mg/kg) 3004,9 3132,1 3024,0 3049,1 3070,4 3105,2 Teneur mesurée dans l'échantillon non dopé (mg/kg) 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 donc il y a dans la PE avant dopage (mg) 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 => dans l'échantillon dopé, il y a en théorie (mg/kg) 2992,2 2998,2 2998,2 2974,4 2998,2 2992,2 Taux de récupération (%) 100,4 104,5 100,9 102,5 102,4 103,8 * Résultat donné par le GC en ayant introduit dans le logiciel les valeurs calculées pour L1 à L5 comme levels de calibration. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 42/87

4. Données brutes et résultats Série n 7 : données brutes Données brutes des rapports d'injection : Standard interne Acide propionique Solutions Tps rét. Surface Tps rét. Surface quantité (mg) L01 9,29 69058 7,56 4766 0,2440 L02 9,29 47869 7,56 7257 0,4983 L03 9,29 40030 7,55 12290 0,9768 L04 9,29 48407 7,54 31678 2,0463 L05 9,29 54458 7,53 71068 4,0493 C1 9,29 43663 7,55 8083 0,6014 C2 9,28 41463 7,53 41245 3,0941 blanc méthode non détecté 0 non détecté 0 0,0000 Sand. non dopé 9,28 46286 non détecté 0 0,0000 Sand. dopé 1 9,28 54101 7,52 56016 3,2193 Sand. dopé 2 9,28 47028 7,52 49731 3,2873 Sand. dopé 3 9,28 47638 7,52 50020 3,2643 Sand. dopé 4 9,28 64196 7,52 54882 3,1432 Sand. dopé 5 9,28 37574 7,52 40390 3,3410 Sand. dopé 6 9,28 55496 7,51 57054 3,1967 C1 9,28 65129 7,54 11952 0,5965 C2 9,28 44650 7,53 42719 2,9772 Pain complet 1 9,28 51516 7,54 16799 1,0355 Pain complet 2 9,28 55643 7,53 18690 1,0656 Pain complet 3 9,28 42541 7,54 14635 1,0906 Toast 1 9,28 43015 7,52 43134 3,1188 Toast 2 9,28 48340 7,52 48584 3,1258 Toast 3 9,28 33504 7,52 33205 3,0828 C1 9,28 47517 7,54 9066 0,6189 C2 9,28 44274 7,52 43415 3,0506 LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 43/87

4. Données brutes et résultats Série n 7 : résultats des contrôles Préparation et contrôle de la droite de calibration : pesée acide propionique (mg) : pureté (%) : volume : concentration solution mère : 101,3 mg 99,94 % 50 ml 2,0248 mg/ml L1 : dilution 125 µl / 20 ml L2 : dilution 250 µl / 20 ml L3 : dilution 500 µl / 20 ml L4 : dilution 1000 µl / 20 ml L5 : dilution 2000 µl / 20 ml ac.propionique (mg) pour 200 µl de SI tolérance de 10 % calculée mesurée écart (%) accepté 0,2531 0,2440-3,6 oui 0,5062 0,4983-1,6 oui 1,0124 0,9768-3,5 oui 2,0248 2,0463 1,1 oui 4,0496 4,0493 0,0 oui Préparation des solutions de contrôle et suivi de la réponse : pesée acide propionique (mg) : pureté (%) : volume : concentration solution mère : C1 (120 µl / 20 ml) : C2 (600 µl / 20 ml) : 254,5 mg 99,94 % 50 ml 5,0869 mg/ml 0,6104 mg acide propionique pour 200 µl de la solution de SI 3,0522 mg acide propionique pour 200 µl de la solution de SI ac.propionique (mg) pour 200 µl de SI tolérance de 10 % calculée mesurée écart (%) accepté C1 0,6104 0,6014-1,5 oui C2 3,0522 3,0941 1,4 oui C1 0,6104 0,5965-2,3 oui C2 3,0522 2,9772-2,5 oui C1 0,6104 0,6189 1,4 oui C2 3,0522 3,0506-0,1 oui LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 44/87

4. Données brutes et résultats Série n 7 : résultats des non dopés nature de l'échantillon et norme N échantillon prise d'essai (g) Ac. Propionique (mg)* Teneur en Ac. Propionique (mg/kg) LOQ sur base du L1 (mg/kg) mini- Carrefour Sand. non dopé 4,99 0,0000 0,0 pain complet Boerkens Pain complet 1 5,03 1,0355 1029,3 pain complet Boerkens Pain complet 2 5,01 1,0656 1063,5 pain complet Boerkens Pain complet 3 5,02 1,0906 1086,3 paint toast Carrefour Toast 1 5,01 3,1188 3112,6 paint toast Carrefour Toast 2 5,01 3,1258 3119,6 paint toast Carrefour Toast 3 5,01 3,0828 3076,6 256,9 254,8 255,8 255,3 255,8 255,8 255,8 * Résultat donné par le GC en ayant introduit dans le logiciel les valeurs calculées pour L1 à L5 comme levels de calibration. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 45/87

4. Données brutes et résultats Série n 8 : données brutes Données brutes des rapports d'injection : Standard interne Acide propionique Solutions Tps rét. Surface Tps rét. Surface quantité (mg) L01 9,25 53398 7,52 3796 0,2508 L02 9,25 37965 7,52 5762 0,4828 L03 9,25 38875 7,51 12569 0,9763 L04 9,25 47795 7,50 31143 1,9205 L05 9,25 33637 7,49 46135 3,9913 C1 9,25 31644 7,51 5836 0,5767 C2 9,25 48620 7,49 51064 3,0672 blanc méthode non détecté 0 non détecté 0 0,0000 Sand. non dopé 9,25 46494 non détecté 0 0,0000 Sand. dopé 1 9,25 38229 7,49 37399 2,8601 Sand. dopé 2 9,25 48947 7,49 48014 2,8677 Sand. dopé 3 9,25 27938 7,50 27727 2,9009 Sand. dopé 4 9,25 39146 7,49 38469 2,8728 Sand. dopé 5 9,25 43259 7,49 43179 2,9172 Sand. dopé 6 9,25 22841 7,50 22496 2,8791 C1 9,24 41622 7,51 7711 0,5791 C2 9,25 43968 7,49 45524 3,0244 Pain complet 1 9,24 37184 7,50 12087 0,9812 Pain complet 2 9,25 39631 7,50 12937 0,9852 Pain complet 3 9,24 36569 7,50 12492 1,0288 C1 9,25 54661 7,51 9831 0,5636 C2 9,24 51364 7,49 51983 2,9572 LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 47/87

4. Données brutes et résultats Série n 8 : résultats des contrôles Préparation et contrôle de la droite de calibration : pesée acide propionique (mg) : pureté (%) : volume : concentration solution mère : 99,0 mg 99,94 % 50 ml 1,9788 mg/ml L1 : dilution 125 µl / 20 ml L2 : dilution 250 µl / 20 ml L3 : dilution 500 µl / 20 ml L4 : dilution 1000 µl / 20 ml L5 : dilution 2000 µl / 20 ml ac.propionique (mg) pour 200 µl de SI tolérance de 10 % calculée mesurée écart (%) accepté 0,2474 0,2508 1,4 oui 0,4947 0,4828-2,4 oui 0,9894 0,9763-1,3 oui 1,9788 1,9205-2,9 oui 3,9576 3,9913 0,9 oui Préparation des solutions de contrôle et suivi de la réponse : pesée acide propionique (mg) : pureté (%) : volume : concentration solution mère : C1 (120 µl / 20 ml) : C2 (600 µl / 20 ml) : 249,4 mg 99,94 % 50 ml 4,9850 mg/ml 0,5982 mg acide propionique pour 200 µl de la solution de SI 2,9910 mg acide propionique pour 200 µl de la solution de SI ac.propionique (mg) pour 200 µl de SI tolérance de 10 % calculée mesurée écart (%) accepté C1 0,5982 0,5767-3,6 oui C2 2,9910 3,0672 2,5 oui C1 0,5982 0,5791-3,2 oui C2 2,9910 3,0244 1,1 oui C1 0,5982 0,5636-5,8 oui C2 2,9910 2,9572-1,1 oui LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 48/87

4. Données brutes et résultats Série n 8 : résultats des non dopés nature de l'échantillon et norme N échantillon prise d'essai (g) Ac. Propionique (mg)* Teneur en Ac. Propionique (mg/kg) LOQ sur base du L1 (mg/kg) mini- Carrefour Sand. non dopé 5,02 0,0000 0,0 pain complet Boerkens Pain complet 1 5,00 0,9812 981,2 pain complet Boerkens Pain complet 2 5,00 0,9852 985,2 pain complet Boerkens Pain complet 3 5,00 1,0288 1028,8 255,3 256,3 256,3 256,3 * Résultat donné par le GC en ayant introduit dans le logiciel les valeurs calculées pour L1 à L5 comme levels de calibration. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 49/87

4. Données brutes et résultats Série n 9 : données brutes Données brutes des rapports d'injection : Standard interne Acide propionique Solutions Tps rét. Surface Tps rét. Surface quantité (mg) L01 9,25 39014 7,52 3064 0,2797 L02 9,25 35378 7,52 5652 0,5150 L03 9,25 55320 7,51 17972 0,9933 L04 9,25 54579 7,50 37243 2,0288 L05 9,25 57407 7,49 82383 4,2093 C1 9,25 45143 7,51 8480 0,5964 C2 9,26 41436 7,50 42727 3,0392 blanc méthode non détecté 0 non détecté 0 0,0000 Sand. non dopé 9,25 22225 non détecté 0 0,0000 Sand. dopé 1 9,25 46687 7,49 46638 2,9459 Sand. dopé 2 9,25 20222 7,50 20966 3,0555 Sand. dopé 3 9,25 23922 7,50 24687 3,0415 Sand. dopé 4 9,25 45215 7,49 44740 2,9185 Sand. dopé 5 9,26 346 7,54 288 2,4624 Sand. dopé 6 9,24 63866 7,48 62626 2,8927 C1 9,25 39071 7,51 7811 0,6313 C2 9,23 48660 7,48 46796 2,8380 Toast 1 9,22 53600 7,47 51704 2,8465 Toast 2 9,22 46004 7,46 43996 2,8225 Toast 3 9,22 56253 7,46 51107 2,6840 C1 9,22 51037 7,49 9823 0,6097 C2 9,22 47434 7,47 47688 2,9645 LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 51/87

4. Données brutes et résultats Série n 9 : résultats des contrôles Préparation et contrôle de la droite de calibration : pesée acide propionique (mg) : pureté (%) : volume : concentration solution mère : 104,3 mg 99,94 % 50 ml 2,0847 mg/ml L1 : dilution 125 µl / 20 ml L2 : dilution 250 µl / 20 ml L3 : dilution 500 µl / 20 ml L4 : dilution 1000 µl / 20 ml L5 : dilution 2000 µl / 20 ml ac.propionique (mg) pour 200 µl de SI tolérance de 10 % calculée mesurée écart (%) accepté 0,2606 0,2797 7,3 oui 0,5212 0,5150-1,2 oui 1,0424 0,9933-4,7 oui 2,0847 2,0288-2,7 oui 4,1695 4,2093 1,0 oui Préparation des solutions de contrôle et suivi de la réponse : pesée acide propionique (mg) : pureté (%) : volume : concentration solution mère : C1 (120 µl / 20 ml) : C2 (600 µl / 20 ml) : 253,0 mg 99,94 % 50 ml 5,0570 mg/ml 0,6068 mg acide propionique pour 200 µl de la solution de SI 3,0342 mg acide propionique pour 200 µl de la solution de SI ac.propionique (mg) pour 200 µl de SI tolérance de 10 % calculée mesurée écart (%) accepté C1 0,6068 0,5964-1,7 oui C2 3,0342 3,0392 0,2 oui C1 0,6068 0,6313 4,0 oui C2 3,0342 2,8380-6,5 oui C1 0,6068 0,6097 0,5 oui C2 3,0342 2,9645-2,3 oui LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 52/87

4. Données brutes et résultats Série n 9 : résultats des non dopés nature de l'échantillon et norme N échantillon prise d'essai (g) Ac. Propionique (mg)* Teneur en Ac. Propionique (mg/kg) LOQ sur base du L1 (mg/kg) mini- Carrefour Sand. non dopé 5,03 0,0000 0,0 toast Carrefour Toast 1 5,01 2,8465 2840,8 toast Carrefour Toast 2 5,00 2,8225 2822,5 toast Carrefour Toast 3 5,00 2,6840 2684,0 254,8 255,8 256,3 256,3 * Résultat donné par le GC en ayant introduit dans le logiciel les valeurs calculées pour L1 à L5 comme levels de calibration. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 53/87

4. Données brutes et résultats Série n 9 : résultats des dopés Solution de dopage = solution mère des solutions de contrôle Concentration solution de dopage (mg/ml) : 5,0570 nature de l'échantillon numéro de l'échantillon Sand. dopé 1 Sand. dopé 2 Sand. dopé 3 Sand. dopé 4 Sand. dopé 5 Sand. dopé 6 prise d'essai (g) 5,00 4,99 4,97 5,00 5,01 5,16 volume de solution de dopage ajouté (ml) 3,00 3,00 3,00 3,00 3,00 3,00 soit en acide propionique pur (mg) 15,1709 15,1709 15,1709 15,1709 15,1709 15,1709 Ac. Propionique (mg)* 2,9459 3,0555 3,0415 2,9185 2,4624 2,8927 Teneur mesurée dans l'échantillon dopé (mg/kg) 2945,9 3061,6 3059,9 2918,5 2457,5 2803,0 Teneur mesurée dans l'échantillon non dopé (mg/kg) 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 donc il y a dans la PE avant dopage (mg) 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 => dans l'échantillon dopé, il y a en théorie (mg/kg) 3034,2 3040,3 3052,5 3034,2 3028,1 2940,1 Taux de récupération (%) 97,1 100,7 100,2 96,2 81,2 95,3 * Résultat donné par le GC en ayant introduit dans le logiciel les valeurs calculées pour L1 à L5 comme levels de calibration. Problème à l'injection (pics 20 fois plus petits que normalement) => ne pas tenir compte de ce résultat. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 54/87

4. Données brutes et résultats Série n 10 : données brutes Données brutes des rapports d'injection : Standard interne Acide propionique Solutions Tps rét. Surface Tps rét. Surface quantité (mg) L01 8,73 36643 7,03 2761 0,2530 L02 8,74 34706 7,03 5374 0,4827 L03 8,74 37057 7,02 11646 0,9435 L04 8,73 28726 7,01 19100 1,9568 L05 8,73 39983 7,00 54125 3,9474 C1 8,74 30771 7,03 6121 0,6101 C2 8,74 44030 7,01 44779 2,9745 blanc méthode non détecté 0 non détecté 0 0,0000 Sand. dopé 1 8,73 55530 7,02 9231 0,5157 Sand. dopé 2 8,73 59097 7,02 9789 0,5140 Sand. dopé 3 8,73 55544 7,02 9305 0,5194 Sand. dopé 4 8,73 49205 7,02 8496 0,5343 Sand. dopé 5 8,73 60904 7,02 10306 0,5243 Sand. dopé 6 8,73 57023 7,02 9818 0,5328 C1 8,73 48339 7,02 9598 0,6091 C2 8,73 55956 7,00 56651 2,9611 LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 55/87

4. Données brutes et résultats Série n 10 : résultats des contrôles Préparation et contrôle de la droite de calibration : pesée acide propionique (mg) : pureté (%) : volume : concentration solution mère : 98,8 mg 99,50 % 50 ml 1,9661 mg/ml L1 : dilution 125 µl / 20 ml L2 : dilution 250 µl / 20 ml L3 : dilution 500 µl / 20 ml L4 : dilution 1000 µl / 20 ml L5 : dilution 2000 µl / 20 ml ac.propionique (mg) pour 200 µl de SI tolérance de 10 % calculée mesurée écart (%) accepté 0,2458 0,2530 2,9 oui 0,4915 0,4827-1,8 oui 0,9831 0,9435-4,0 oui 1,9661 1,9568-0,5 oui 3,9322 3,9474 0,4 oui Préparation des solutions de contrôle et suivi de la réponse : pesée acide propionique (mg) : pureté (%) : volume : concentration solution mère : C1 (120 µl / 20 ml) : C2 (600 µl / 20 ml) : 255,4 mg 99,50 % 50 ml 5,0825 mg/ml 0,6099 mg acide propionique pour 200 µl de la solution de SI 3,0495 mg acide propionique pour 200 µl de la solution de SI ac.propionique (mg) pour 200 µl de SI tolérance de 10 % calculée mesurée écart (%) accepté C1 0,6099 0,6101 0,0 oui C2 3,0495 2,9745-2,5 oui C1 0,6099 0,6091-0,1 oui C2 3,0495 2,9611-2,9 oui LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 56/87

4. Données brutes et résultats Série n 11 : résultats des contrôles Préparation et contrôle de la droite de calibration : pesée acide propionique (mg) : pureté (%) : volume : concentration solution mère : 107,9 mg 99,50 % 50 ml 2,1472 mg/ml L1 : dilution 125 µl / 20 ml L2 : dilution 250 µl / 20 ml L3 : dilution 500 µl / 20 ml L4 : dilution 1000 µl / 20 ml L5 : dilution 2000 µl / 20 ml ac.propionique (mg) pour 200 µl de SI tolérance de 10 % calculée mesurée écart (%) accepté 0,2684 0,2659-0,9 oui 0,5368 0,5311-1,1 oui 1,0736 1,0654-0,8 oui 2,1472 2,1345-0,6 oui 4,2944 4,3037 0,2 oui Préparation des solutions de contrôle et suivi de la réponse : pesée acide propionique (mg) : pureté (%) : volume : concentration solution mère : C1 (120 µl / 20 ml) : C2 (600 µl / 20 ml) : 250,0 mg 99,50 % 50 ml 4,9750 mg/ml 0,5970 mg acide propionique pour 200 µl de la solution de SI 2,9850 mg acide propionique pour 200 µl de la solution de SI ac.propionique (mg) pour 200 µl de SI tolérance de 10 % calculée mesurée écart (%) accepté C1 0,5970 0,6007 0,6 oui C2 2,9850 2,9894 0,1 oui C1 0,5970 0,5876-1,6 oui C2 2,9850 2,9992 0,5 oui LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 59/87

4. Données brutes et résultats Série n 12 : résultats des contrôles Préparation et contrôle de la droite de calibration : pesée acide propionique (mg) : pureté (%) : volume : concentration solution mère : 109,3 mg 99,50 % 50 ml 2,1751 mg/ml L1 : dilution 125 µl / 20 ml L2 : dilution 250 µl / 20 ml L3 : dilution 500 µl / 20 ml L4 : dilution 1000 µl / 20 ml L5 : dilution 2000 µl / 20 ml ac.propionique (mg) pour 200 µl de SI tolérance de 10 % calculée mesurée écart (%) accepté 0,2719 0,2704-0,5 oui 0,5438 0,5350-1,6 oui 1,0875 1,0440-4,0 oui 2,1751 2,2246 2,3 oui 4,3501 4,3374-0,3 oui Préparation des solutions de contrôle et suivi de la réponse : pesée acide propionique (mg) : pureté (%) : volume : concentration solution mère : C1 (120 µl / 20 ml) : C2 (600 µl / 20 ml) : 250,9 mg 99,50 % 50 ml 4,9929 mg/ml 0,5991 mg acide propionique pour 200 µl de la solution de SI 2,9957 mg acide propionique pour 200 µl de la solution de SI ac.propionique (mg) pour 200 µl de SI tolérance de 10 % calculée mesurée écart (%) accepté C1 0,5991 0,6071 1,3 oui C2 2,9957 2,9796-0,5 oui C1 0,5991 0,6015 0,4 oui C2 2,9957 2,9553-1,4 oui LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 62/87

5. Spécificité La spécificité de la méthode est basée uniquement sur le temps de rétention. L'identification de l acide propionique dans la solution d échantillon se fait en comparant le temps de rétention avec ceux des solutions de contrôle l encadrant. Les temps de rétention ne peuvent différer de plus de 0,9 %. Cet écart a été déterminé de manière empirique : Comme le montrent les 2 chromatogrammes ci-dessous, un tout petit pic peut être présent dans la matrice, juste avant l acide propionique (voir dans le zoom du chromatogramme du non dopé à 7,521 min). Sandwich non dopé : vue d ensemble (en haut) et zoom (en bas) Pas d acide propionique à 7,61 min acide isovalérique (SI) à 9,360 min. Pic présent dans certains pains, bien séparé du pic d acide propionique (voir chromatogramme du dopé). LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 64/87

5. Spécificité En cas de présence de ce pic, les essais de validation ont montré qu il était parfaitement séparé du pic d acide propionique (voir dans le zoom du chromatogramme du dopé). L'écart acceptable de 0,9 % sur le temps de rétention, introduit dans le logiciel pour l'identification du pic d'acide propionique, est suffisamment petit que pour ne pas confondre ce petit pic présent dans la matrice avec l'acide propionique, et suffisamment grand pour palier aux légères variations du temps de rétention d'une injection à l'autre (l'écart maximum observé est de 0,04 min, soit environ 0,5 % du temps de rétention). A noter également que les blancs méthode n'ont présenté aucun pic ayant un S/N>10 (paramètre introduit dans le logiciel pour l'intégration des pics) dans la fenêtre du temps de rétention de l acide propionique (voir données brutes de chaque série). Sandwich dopé à 1000 mg/kg : vue d ensemble (en haut) et zoom (en bas) acide propionique à 7,612 min acide isovalérique (SI) à 9,361 min. Mise en évidence de la bonne séparation entre le pic d acide propionique et un petit pic (présent dans certains pains) qui le précède. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 65/87

6. LOD & LOQ En se basant sur nos définitions de la LOD et de la LOQ, on peut les déterminer à partir de la formule du calcul de la teneur en acide propionique et du mode opératoire de la méthode. Formule : Teneur en acide propionique et ses sels (mg/kg) = X (mg) x 5 / P (g) x 1000 où X = résultat obtenu à partir de la courbe d'étalonnage (mg) P = prise d'essai (g) = 5 g (selon le mode opératoire) 6.1 Détermination de la LOQ Selon le mode opératoire, si X est équivalent au plus petit niveau d'étalonnage alors X = 0,250 mg D'où LOQ = 0,250 x 5 / 5 x 1000 = 250 mg/kg La LOQ de la méthode est donc de 250 mg/kg, soit 1/4 de la norme la plus stricte. 6.2 Détermination de la LOD Selon le mode opératoire, si X est équivalent à la moitié du plus petit niveau d'étalonnage alors X = 0,125 mg D'où LOQ = 0,125 x 5 / 5 x 1000 = 125 mg/kg La LOD de la méthode est donc de 125 mg/kg, soit 1/8 de la norme la plus stricte. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 66/87

6. LOD & LOQ 6.3 Aspect pratique de la LOD et de la LOQ Après ces déterminations théoriques des LOD et LOQ, nous pouvons montrer que la méthode permet réellement de les atteindre : sur base d'un chromatogramme du level le plus petit (level 1 ci-dessous), on peut constater que l'intensité du signal obtenu est bien supérieure au bruit de fond et est parfaitement exploitable. La spécificité de la méthode ayant été précédemment démontrée, on peut conclure que : - un échantillon qui contiendrait 250 mg/kg (LOD), et qui donnerait donc un signal équivalent à celui ci-dessous est bien quantifiable. - un échantillon qui contiendrait 125 mg/kg (LOQ), et qui donnerait donc un signal deux fois plus petit que cidessous, est tout à fait détectable. Level 1 : vue d ensemble (en haut) et zoom (en bas) acide propionique à 7,627 min acide isovalérique (SI) à 9,364 min. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 67/87

7. Etalonnage Comme prévu au point 1.6 Etalonnage, cinq niveaux sont réalisés (le rejet d un des points d'étalonnage est autorisé à condition que cela ne soit ni le premier ni le dernier). Le modèle de réponse obtenu est linéaire. Pour les 12 séries effectuées, l'écart maximum de 10 % entre la valeur mesurée et la valeur théorique de chaque niveau a été respecté, et donc aucun point d'étalonnage n'a été rejeté. L'écart maximum observé est de 7,4 %. écart (%) Level 1 Level 2 Level 3 Level 4 Level 5 Série n 1 3,1-4,4-1,4-3,4 1,0 Série n 2-1,9-2,0-2,9-1,0 0,5 Série n 3-0,2-4,3-0,7-1,6 0,5 Série n 4-0,2-4,0-2,8 0,3 0,2 Série n 5 7,4-1,5-1,9-4,0 1,1 Série n 6 4,0-4,2-2,3-2,0 0,7 Série n 7-3,6-1,6-3,5 1,1 0,0 Série n 8 1,4-2,4-1,3-2,9 0,9 Série n 9 7,3-1,2-4,7-2,7 1,0 Série n 10 2,9-1,8-4,0-0,5 0,4 Série n 11-0,9-1,1-0,8-0,6 0,2 Série n 12-0,5-1,6-4,0 2,3-0,3 Récapitulatif des écarts obtenus entre la valeur mesurée et la valeur théorique de chaque niveau d'étalonnage. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 68/87

7. Etalonnage Exemple de droite d'étalonnage obtenue. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 69/87

8. Justesse 8.1 Evaluation de la justesse à partir des rendements mesurés pour les matrices blanches dopées En l'absence de CRM, la justesse peut être évaluée en dopant les échantillons. Les 3 niveaux étudiés sont : - 500 mg/kg (moitié de la norme la plus basse) - 1000 mg/kg (norme pour les pains non découpés) - 3000 mg/kg (norme des pains prédécoupés) Pour chacune de ces concentrations, conformément au tableau présenté au point 1.7 Justesse, le rendement de récupération devra être compris entre 80% et 110%. Niveau : 1000 mg/kg Niveau : 3000 mg/kg Rendement (%) Série 1 Série 2 Série 3 Série 4 Série 6 Série 7 Série 8 Série 9 dopé 1 106,8 99,5 105,1 100,4 100,4 105,5 95,6 97,1 dopé 2 103,5 100,3 101,1 102,9 104,5 107,7 95,9 100,7 dopé 3 103,2 101,9 102,3 102,5 100,9 107,0 97,0 100,2 dopé 4 103,8 98,4 99,3 101,6 102,5 103,0 96,0 96,2 dopé 5 104,8 101,2 99,1 100,2 102,4 109,5 97,5 81,2* dopé 6 105,1 100,3 101,3 100,1 103,8 104,7 96,3 95,3 Moyenne 104,5 100,3 101,4 101,3 102,4 106,2 96,4 97,9 SD 1,33 1,21 2,18 1,23 1,58 2,30 0,73 2,42 * Problème à l'injection (pics 20 fois plus petits que normalement) => ne pas tenir compte de ce résultat. Niveau : 500 mg/kg Rendement (%) Série 10 Série 11 Série 12 dopé 1 101,5 101,3 99,1 dopé 2 101,1 106,3 101,9 dopé 3 102,2 102,6 102,0 dopé 4 105,1 105,9 99,1 dopé 5 103,2 102,8 100,4 101,7 % dopé 6 104,8 103,3 99,3 Moyenne 103,0 103,7 100,3 SD 1,70 1,98 1,37 Pour information : rendement moyen des 12 séries : LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 70/87

Rendement (%) 8. Justesse 115 Rendements sur matrice blanche dopée 110 105 100 Série1 Série2 Série3 Série4 Série6 Série7 Série8 Série9 Série 10 Série 11 Série 12 95 90 1 2 3 4 5 6 Chaque rendement obtenu est bien compris entre 80 et 110 %. Le plus petit rendement observé est de 95,3 % tandis que le plus élevé est de 107,7 %. Le rendement moyen est de 101,7 %. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 71/87

Rendement (%) Rendement (%) 8. Justesse Rendements sur matrice blanche dopée à 1000 mg/kg 120 100 80 60 40 20 0 1 2 3 Série1 Série2 Série3 Série4 4 5 6 Série1 Série2 Série3 Série4 Rendements sur matrice blanche dopée à 3000 mg/kg 120 100 80 60 40 20 0 1 2 3 Série6 Série7 Série8 Série9 4 5 6 Série6 Série7 Série8 Série9 LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 72/87

Rendement (%) 8. Justesse Rendements sur matrice blanche dopée à 500 mg/kg 120 100 80 60 40 20 0 1 2 3 Série 10 Série 11 Série 12 4 5 6 Série 10 Série 11 Série 12 LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 73/87

8. Justesse 8.2 Evaluation de la justesse à partir de matrices non blanches (série n 5) Suite à l'audit interne, nous avons analysé des matrices non blanches afin de vérifier d'une part que l'on arrive bien à extraire les propionates présents intrinsèquement dans la matrice (ce qui est différent de la récupération d'un ajout dosé), et d'autre part que cette extraction est complète. 8.2.1 Approche qualitative Comme annoncé sur les emballages des 3 matrices, de l'acide propionique ou un de ses sels a été retrouvé dans chacune des matrices. Les teneurs trouvées sont relativements élevées et montrent que l'extraction semble répétable (écart par rapport à la moyenne < 2%) : nature de l'échantillon pain toast (emballé tranché) pain burger (emballé tranché) pain pita (emballé) Teneur en Ac. Propionique (mg/kg) 2976,0 2980,1 2988,2 1687,3 1671,0 1270,1 1234,4 Teneur moyenne en Ac. Propionique (mg/kg) 2981,5 1679,2 1252,3 Ecart par rapport à la moyenne (%) -0,18-0,05 0,23 0,49-0,49 1,43-1,43 De plus, les 3 rendements obtenus sur le pain toast dopé (teneur "naturelle" de 3000 mgkg; dopage de +1000 mg/kg) sont également compris entre 80 et 110 % : 104,0 % - 102,6 % - 103,5 %. Ces rendements sont similaires à ceux obtenus pour les matrices blanches dopées. Cependant, ces essais ne démontrent pas que l'extraction est totale mais juste répétable : en effet, même si l'extraction des propionates intrinsèques à la matrice n'était que de 50 %, pour peu que cette extraction soit répétable, comme on a montré auparavant que la récupération d'un ajout dosé est totale, les rendements finaux d'une matrice non blanche dopée seraient aussi proches de 100 %. On ne peut donc toujours pas parler ici d'une évalutation quantitave de la justesse. 8.2.2 Approche quantitative A défaut d'avoir trouvé un CRM ou un test interlaboratoire, la meilleure façon d'évaluer la justesse d'une méthode est finalement d'analyser un échantillon contenant l'analyte recherché et de comparer le résultat du laboratoire avec celui d'un laboratoire tiers accrédité pour le couple analyte/matrice concerné. C'est pourquoi nous avons envoyé la moitié du pain toast au laboratoire SGS Agrilab - Agro Food Service. Les résultats sont les suivants : LFSAL 1 LFSAL 2 LFSAL 3 SGS Teneur (mg/kg) 2976,0 2980,1 2988,2 3155 IM (%) 12,04 12,04 12,04 25 IM (mg/kg) 358,3 358,8 359,8 789 LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 74/87

8. Justesse Extrait du rapport d'analyse du pain toast anlysé par un laboratoire accrédité (SGS). Mails précisant l'incertitude de mesure sur le résultat du rapport cidessus. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 75/87

Teneur (mg/kg) 8. Justesse Comment comparer les résultats de deux laboratoire? Selon l'auditeur technique Belac, la justesse du laboratoire peut être démontrée si ses résultats sont compris dans l'intervalle définit par les résultats du laboratoire accrédité. D'après ce critère, comme le montre le graphique ci-dessous, la justesse de la méthode est démontrée. Comparaison des résultats du LFSAL et de SGS 1 2 3 4500 LFSAL 2976,0 2980,1 2988,2 SGS 3155,0 3155,0 3155,0 4000 SGS-IM 2366,3 2366,3 2366,3 SGS+IM 3943,8 3943,8 3943,8 3500 3000 2976 2980 2988 2500 2000 1500 SGS + IM (3944) SGS (3155) SGS - IM (2366) En application de notre procédure LAB00 P180 Validation des méthodes d'analyse v02, les résultats des deux laboratoires ne seront pas significativement différents si la condition suivante est satisfaite : avec : m 1 : résultat du laboratoire 1 U 1 : incertitude du laboratoire 1 m 2 : résultat du laboratoire 2 U 2 : incertitude du laboratoire 2 Appliqué à nos résultats, la condition est satisfaite (voir ci-dessous). D'après ce critère, les résultats du LFSAL et du laboratoire accrédité SGS ne sont donc pas significativement différents. Teneur (mg/kg) IM (mg/kg) m 1 -m 2 (U 2 1 + U 2 2 ) LFSAL 1 2976,0 358,3 179 < LFSAL 2 2980,1 358,8 175 < LFSAL 3 2988,2 359,8 167 < SGS 3155 789 866 867 867 LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 76/87

9. Répétabilité & reproductibilité intra-laboratoire A chaque niveau, la répétabilité et la reproductibilité a été calculée : à partir de 3 séries de 3 essais sur des matrices non blanches pour les 2 niveaux correspondants aux normes légales; à partir de 3 séries de 6 essais sur une matrice blanche dopée pour le niveau correspondant à la moitié de la norme la plus basse (pas de matrice contenant "naturellement" cette teneur disponible). Le résumé se trouve ci-dessous et le détail des calculs se trouvent dans les 3 pages suivantes. Critère d'évaluation : vérifier que le %RSDr et/ou le %RSDRW calculés sont inférieurs ou égaux aux valeurs maximales admissibles découlant de l'équation d'horwitz. 9.1 Niveau : 1000 mg/kg Résumé des résultats obtenus sur l'analyse d'un pain complet Boerkens : Série n 6 Série n 7 Série n 8 Jour 17/06/2011 17/06/2011 20/06/2011 Analyste De Tandt Thierry M-C Offermanne De Tandt Thierry Essai 1 1011,3 1029,3 981,2 Essai 2 1042,0 1063,5 985,2 Essai 3 1030,3 1086,3 1028,8 Répétabilité = 67,8 mg/kg Reproductibilité intra-laboratoire = 102,2 mg/kg 9.2 Niveau : 3000 mg/kg Résumé des résultats obtenus sur l'analyse d'un pain toast Carrefour : Série n 6 Série n 7 Série n 9 Jour 17/06/2011 17/06/2011 22/06/2011 Analyste De Tandt Thierry M-C Offermanne M-C Offermanne Essai 1 2894,0 3112,6 2840,8 Essai 2 2925,1 3119,6 2822,5 Essai 3 2939,4 3076,6 2884,0 Répétabilité = 73,5 mg/kg Reproductibilité intra-laboratoire = 371,8 mg/kg LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 77/87

9. Répétabilité & reproductibilité intra-laboratoire 9.3 Niveau : 500 mg/kg Résumé des résultats obtenus sur l'analyse des mini- La Lorraine dopés à 500 mg/kg : Série n 10 Série n 11 Série n 12 Jour 10/10/2012 06/11/2012 19/11/2012 Analyste De Tandt Thierry M-C Offermanne M-C Offermanne Essai 1 505,2 493,6 493,4 Essai 2 508,3 495,5 490,5 Essai 3 504,2 497,5 500,3 Essai 4 502,2 497,5 495,3 Essai 5 502,2 497,5 497,3 Essai 6 508,3 495,5 499,3 Répétabilité = 7,9 mg/kg Reproductibilité intra-laboratoire = 16,2 mg/kg Evaluation de la répétabilité et de la reproductibilité du laboratoire Vérifier que la %RSD r et/ou %RSD RW déterminées sont inférieures ou égales à la valeur maximale admissibles découlant de l équation d Horwitz : max. %RSD Rw = CV = 2 (1-0.5logC) avec : CV = coefficient de variation (sous des conditions de reproductibilité) C = concentration exprimée en puissance de 10 (par exemple 1 mg/g = 10-3 ) max. %RSD r = 2 (1-0.5logC) x 2/3 avec: max. %RSD r = déviation standard relative maximale sous des conditions de répétabilité %RSDr %RSDRw Niveau C LFSAL Horwitz LFSAL Horwitz 500 mg/kg 0,0005 0,56 4,19 1,16 6,28 1000 mg/kg 0,001 2,35 3,77 3,55 5,66 3000 mg/kg 0,003 0,89 3,20 4,49 4,79 Les valeurs obtenues par le laboratoire sont acceptables car inférieures à celles issuent de l'équation d'horwitz. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 78/87

9. Répétabilité & reproductibilité intra-laboratoire Pour plus d'information sur ce formulaire, se référer à la procédure LAB23 P012 Validation des méthodes analytiques. Série 6 (u-moyenne)² 1011,3 2,74E+02 Paramètre de validation de méthode pour un seul niveau de concentration Niveau : 1000 mg/kg 1042,0 2,00E+02 1030,3 5,92E+00 Analyse : Dosage de l'acide propionique et ses sels dans le pain Unités des données encodées : mg/kg Série Nb de résultats (n) Moyenne n² total résultats (u) (moy sér - moy tot )² mg/kg Série 1 3 9 3083,600 1027,86667 0,62 480,12667 série 7 (u-moyenne)² Série 2 3 9 3179,100 1059,70000 963,76 1646,16000 1029,3 9,24E+02 Série 3 3 9 2995,200 998,40000 915,40 1394,24000 1063,5 1,44E+01 Série 4 1086,3 7,08E+02 nb de série (p) 3 somme des (u-moyenne)² somme des sommes des (u-moyenne)² = 3520,5267 nombre total de résultats = 9 somme totale des résultats: 9257,9000 mg/kg série 8 (u-moyenne)² moyenne totale = 1028,6556 mg/kg 981,2 2,96E+02 somme (n i ) - p 6 985,2 1,74E+02 var. de répétabilité: s²j ( r ) = 5,87E+02 1028,8 9,24E+02 coeff. de variation de répétabilité (%) = 2,35 nombre moyen par séries: 3,00 variance inter séries s² j (g) = 7,44E+02 ( = 0 si < 0) variance de fidélité intermédiaire s²j ( FI ) ou de reproductibilité: Coeff. De variation de fidélité intermédiaire CVj ( FI ) ou de reproductibilité en % = Répétabilité r [2,8*Sj(r)] Reproductibilité R [2,8*Sj(FI)] k (n-1)dl = Incertitude de mesure élargie (basée sur fidélité intermédiaire) = 2,306 1,33E+03 3,55 ni(mi-mp)² série 9 (u-moyenne)² 67,82 mg/kg 2891,272593 102,15 mg/kg 2746,195926 84,13 mg/kg 1,867037037 5639,335556 Valeur de k pour (n-1) dl (table t) 2,306 Nombre de dl = 8 LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 79/87

9. Répétabilité & reproductibilité intra-laboratoire Pour plus d'information sur ce formulaire, se référer à la procédure LAB23 P012 Validation des méthodes analytiques. Série 6 (u-moyenne)² 2894,0 6,50E+02 Paramètre de validation de méthode pour un seul niveau de concentration Niveau : 3000 mg/kg 2925,1 3,14E+01 2939,4 3,96E+02 Analyse : Dosage de l'acide propionique et ses sels dans le pain Unités des données encodées : mg/kg Série Nb de résultats (n) Moyenne n² total résultats (u) (moy sér - moy tot )² mg/kg Série 1 3 9 8758,500 2919,50000 1419,61 1077,62000 série 7 (u-moyenne)² Série 2 3 9 9308,800 3102,93333 21244,68 1064,66667 3112,6 9,34E+01 Série 3 3119,6 2,78E+02 Série 4 3 9 8547,300 2849,10000 11680,81 1994,46000 3076,6 6,93E+02 nb de série (p) 3 somme des (u-moyenne)² somme des sommes des (u-moyenne)² = 4136,7467 nombre total de résultats = 9 somme totale des résultats: 26614,6000 mg/kg série 8 (u-moyenne)² moyenne totale = 2957,1778 mg/kg somme (n i ) - p 6 var. de répétabilité: s²j ( r ) = 6,89E+02 coeff. de variation de répétabilité (%) = 0,89 nombre moyen par séries: 3,00 variance inter séries s² j (g) = 1,69E+04 ( = 0 si < 0) variance de fidélité intermédiaire s²j ( FI ) ou de reproductibilité: Coeff. De variation de fidélité intermédiaire CVj ( FI ) ou de reproductibilité en % = Répétabilité r [2,8*Sj(r)] Reproductibilité R [2,8*Sj(FI)] 1,76E+04 k (n-1)dl = 2,306 35042,41815 Incertitude de mesure élargie (basée sur fidélité intermédiaire) = 4,49 ni(mi-mp)² série 9 (u-moyenne)² 4258,844815 103035,3089 2840,8 68,89 73,52 mg/kg 63734,04593 2822,5 707,56 371,80 mg/kg 2884,0 1218,01 306,21 mg/kg Valeur de k pour (n-1) dl (table t) 2,306 Nombre de dl = 8 LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 80/87

9. Répétabilité & reproductibilité intra-laboratoire Pour plus d'information sur ce formulaire, se référer à la procédure LAB23 P012 Validation des méthodes analytiques. Série 10 (u-moyenne)² 505,2 2,41E-02 Paramètre de validation de méthode pour un seul niveau de concentration Niveau : 500 mg/kg 508,3 1,02E+01 504,2 7,18E-01 Analyse : Dosage de l'acide propionique et ses sels dans le pain Unités des données encodées : mg/kg 502,2 8,07E+00 Série 502,2 8,07E+00 Moyenne somme des 508,3 1,02E+01 n² total résultats (u) (moy sér - moy tot )² mg/kg (u-moyenne)² Série 1 6 36 3030,382 505,06360 35,76 37,18269 série 11 (u-moyenne)² Série 2 6 36 2977,087 496,18124 8,43 13,01242 493,6 6,92E+00 Série 3 6 36 2976,040 496,00667 9,47 68,96948 495,5 4,40E-01 Série 4 497,5 1,74E+00 nb de série (p) 3 497,5 1,74E+00 497,5 1,74E+00 somme des sommes des (u-moyenne)² = 119,1646 495,5 4,40E-01 nombre total de résultats = 18 somme totale des résultats: 8983,5091 mg/kg série 12 (u-moyenne)² moyenne totale = 499,0838 mg/kg 493,4 6,95E+00 somme (n i ) - p 15 490,5 3,07E+01 var. de répétabilité: s²j ( r ) = 7,94E+00 500,3 1,84E+01 coeff. de variation de répétabilité (%) = 0,56 495,3 4,61E-01 nombre moyen par séries: 6,00 497,3 1,67E+00 variance inter séries s² j (g) = 2,55E+01 ( = 0 si < 0) 499,3 1,08E+01 variance de fidélité intermédiaire s²j ( FI ) ou de reproductibilité: k (n-1)dl = Nb de résultats (n) Coeff. De variation de fidélité intermédiaire CVj ( FI ) ou de reproductibilité en % = Répétabilité r [2,8*Sj(r)] Reproductibilité R [2,8*Sj(FI)] Incertitude de mesure élargie (basée sur fidélité intermédiaire) = 2,110 3,34E+01 1,16 ni(mi-mp)² série (u-moyenne)² 7,89 mg/kg 50,55037352 16,19 mg/kg 56,81375779 12,20 mg/kg 214,545411 321,9095423 Valeur de k pour (n-1) dl (table t) 2,110 Nombre de dl = 17 LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 81/87

10. Incertitude de mesure Comme il n'y a pas de correction par le rendement sur le résultat analytique, l'incertitude de mesure de la méthode est calculée sur base de l'approche TOP-DOWN. Elle est déterminée aux niveaux correspondant aux 2 normes légales en vigueur. Pour chaque norme légale, l'incertitude de mesure est calculée sur base de 4 séries de 6 essais d'une matrice blanche dopée au niveau correspondant. Le résumé se trouve ci-dessous et le détail des calculs se trouvent dans les 2 pages suivantes. 10.1 Niveau : 1000 mg/kg Résumé des résultats obtenus sur l'analyse de La Lorraine : Série n 1 Série n 2 Série n 3 Série n 4 Jour 09/05/2011 10/05/2011 12/05/2011 12/05/2011 Analyste Dupuche Nathalie De Tandt Thierry Monisse Isabelle Stany Delbrouck Essai 1 106,8 99,5 105,1 100,4 Essai 2 103,5 100,3 101,1 102,9 Essai 3 103,2 101,9 102,3 102,5 Essai 4 103,8 98,4 99,3 101,6 Essai 5 104,8 101,2 99,1 100,2 Essai 6 105,1 100,3 101,3 100,1 Incertitude de mesure élargie = 7 % 10.2 Niveau : 3000 mg/kg Résumé des résultats obtenus sur l'analyse de Sandwiches Carrefour : Série n 6 Série n 7 Série n 8 Série n 9 Jour 17/06/2011 17/06/2011 20/06/2011 22/06/2011 Analyste De Tandt Thierry M-C Offermanne De Tandt Thierry M-C Offermanne Essai 1 100,4 105,5 95,6 97,1 Essai 2 104,5 107,7 95,9 100,7 Essai 3 100,9 107,0 97,0 100,2 Essai 4 102,5 103,0 96,0 96,2 Essai 5 102,4 109,5 97,5 81,2* Essai 6 103,8 104,7 96,3 95,3 *Problème à l'injection (pics 20 fois plus petits que normalement) => ne pas tenir compte de ce résultat. Incertitude de mesure élargie = 12,04 % LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 82/87

10. Incertitude de mesure 10.3 Niveau : 500 mg/kg Résumé des résultats obtenus sur l'analyse de Sandwiches Carrefour : Série n 10 Série n 11 Série n 12 Jour 10/10/2012 06/11/2012 19/11/2012 Analyste De Tandt Thierry M-C Offermanne M-C Offermanne Essai 1 101,5 101,3 99,1 Essai 2 101,1 106,3 101,9 Essai 3 102,2 102,6 102,0 Essai 4 105,1 105,9 99,1 Essai 5 103,2 102,8 100,4 Essai 6 104,8 103,3 99,3 Incertitude de mesure élargie = 7,83 % LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 83/87

10. Incertitude de mesure Pour plus d'information sur ce formulaire, se référer à la procédure LAB P508 Détermination de l'incertitude de mesure pour les analyses chimiques quantitatives. Calcul pratique de l'incertitude de mesure suivant l'approche TOP-DOWN calcul de la variance d'intra-reproductibilité %u Rw 2 Niveau : 1000 mg/kg Nr. Experience x : résultats mesurés C dopage : valeur du dopage bias %bias %bias 2 A partir d'un échantillon de contrôle de matrice identique Paramètre Valeur abs. Niveau Relatif % remarques 1 106,786 100,0000-6,79-6,35 40,38 déviation standard de la carte de contrôle, échantillon matrice identique : s Rw (= s CC ) 2,174 101,857 2,135 = RSD CC, est pour une valeur suffisament 2 grande, 2 une bonne estimation de RSD variance d'incertitude intra-rep : %u Rw 4,56 RSD Rw 6.3.1 2 103,458 100,0000-3,46-3,34 11,17 3 103,228 100,0000-3,23-3,13 9,78 4 103,768 100,0000-3,77-3,63 13,18 5 104,787 100,0000-4,79-4,57 20,87 6 105,087 100,0000-5,09-4,84 23,43 Calcul de la justesse / bias (combinaison quadratique) 7 99,493 100,0000 0,51 0,51 0,26 8 100,313 100,0000-0,31-0,31 0,10 A partir d'expériences de recouvrement Paramètre Valeur abs. Niveau Relatif % remarques 9 101,861 100,0000-1,86-1,83 3,34 Données des expériences de recouvrement carré moyen relatif du biais : %MS bias 7,30 somme des carrés moyens 10 98,431 100,0000 1,57 1,59 2,54 11 101,153 100,0000-1,15-1,14 1,30 12 100,343 100,0000-0,34-0,34 0,12 incertitude sur le dopage (spiking) par pesée et/ou volume : %u dopage 0,63 13 105,079 100,0000-5,08-4,83 23,37 variance de la mesure d'incertitude sur le dopage (spiking): %u dopage 2 0,40 svt petit vis-à-vis de %Ms bias 14 101,107 100,0000-1,11-1,09 1,20 Incertitude sur la solution/réactif de dopage %u Cref,dopage 0,010 99,94 0,01 à partir du certificat fournisseur 15 102,265 100,0000-2,26-2,21 4,90 variance de la mesure d'incertitude solution/réactif dopage : 2 %u Cref,dopage 0,00 svt petit vis-à-vis de %Ms bias 16 99,339 100,0000 0,66 0,67 0,44 varaince de l'incertitude sur le biais : 2 %u bias 7,70 MS bias + %u 2 2 belast + %u Cref,belast 17 99,125 100,0000 0,87 0,88 0,78 6.4.3 18 101,259 100,0000-1,26-1,24 1,55 19 100,378 100,0000-0,38-0,38 0,14 20 102,920 100,0000-2,92-2,84 8,05 Indiquer ici la précision de la balance utilisée le cas échéant dans le processus de dopage 21 102,486 100,0000-2,49-2,43 5,89 précision (mg) pesée (mg) %u b 2 22 101,572 100,0000-1,57-1,55 2,39 0,1 250 0,0016 23 100,224 100,0000-0,22-0,22 0,05 Indiquer ici la (micro)pipette utilisée le cas échéant pour préparer la solution de dopage et/ou doper. 24 100,099 100,0000-0,10-0,10 0,01 volume de bias volume pipette (ml) répétabilité (précision, écart-type) pipettage (ml) somme des carrés des bias : %S bias 175,24 la pipette nombre de mesures : n 24 (ml) u v %u v 2 Calculs Bottom-up de %udopage (incertitude sur le dopage) u p %u p 2 somme des carrés moyens : %MSbias 7,30 1,00 0,006 0,360 0,0020 0,040 2 somme %u v 0,360 2 somme %u p 0,040 micropipette Eppendorf volume variable (µl) %u 2 dopage : 0,40 Volume Error limit : ± Std deviation %u dopage : 0,63 u v u p calcul de l'incertitude de mesure relative élargie %U 100-1000 50-200 1,2 6,0 0,4 2,0 Paramètre Valeur abs. Niveau Relatif % remarques mesure d'incertitude relative élargie %U 7,00 2 * %u c variance sur l'incertitude de mesure du bias : 2 %u bias 7,70 variance sur l'incertitude intra-reproductibilité : 2 %u Rw 4,56 combinaison des variances de l'incertitude : 2 %u c 12,26 %u 2 2 bias + %u Rw mesure d'incertitude combinée : %u c 3,50 Niveau : 1000 mg/kg 6.5 LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 84/87

10. Incertitude de mesure Pour plus d'information sur ce formulaire, se référer à la procédure LAB P508 Détermination de l'incertitude de mesure pour les analyses chimiques quantitatives. Calcul pratique de l'incertitude de mesure suivant l'approche TOP-DOWN calcul de la variance d'intra-reproductibilité %u Rw 2 Niveau : 3000 mg/kg Nr. Experience x : résultats mesurés C dopage : valeur du dopage bias %bias %bias 2 A partir d'un échantillon de contrôle de matrice identique Paramètre Valeur abs. Niveau Relatif % remarques 1 100,424 100,0000-0,42-0,42 0,18 déviation standard de la carte de contrôle, échantillon matrice identique : s Rw (= s CC ) 4,344 100,854 4,307 = RSD CC, est pour une valeur suffisament 2 grande, 2 une bonne estimation de RSD variance d'incertitude intra-rep : %u Rw 18,55 RSD Rw 6.3.1 2 104,466 100,0000-4,47-4,28 18,28 3 100,861 100,0000-0,86-0,85 0,73 4 102,512 100,0000-2,51-2,45 6,00 5 102,408 100,0000-2,41-2,35 5,53 6 103,776 100,0000-3,78-3,64 13,24 Calcul de la justesse / bias (combinaison quadratique) 7 105,476 100,0000-5,48-5,19 26,95 8 107,704 100,0000-7,70-7,15 51,16 A partir d'expériences de recouvrement Paramètre Valeur abs. Niveau Relatif % remarques 9 106,950 100,0000-6,95-6,50 42,23 Données des expériences de recouvrement carré moyen relatif du biais : %MS bias 17,59 somme des carrés moyens 10 102,983 100,0000-2,98-2,90 8,39 11 109,463 100,0000-9,46-8,65 74,74 12 104,735 100,0000-4,74-4,52 20,44 incertitude sur le dopage (spiking) par pesée et/ou volume : %u dopage 0,34 13 95,623 100,0000 4,38 4,58 20,95 variance de la mesure d'incertitude sur le dopage (spiking): %u dopage 2 0,12 svt petit vis-à-vis de %Ms bias 14 95,877 100,0000 4,12 4,30 18,49 Incertitude sur la solution/réactif de dopage %u Cref,dopage 0,010 99,94 0,01 à partir du certificat fournisseur 15 96,987 100,0000 3,01 3,11 9,65 variance de la mesure d'incertitude solution/réactif dopage : 2 %u Cref,dopage 0,00 svt petit vis-à-vis de %Ms bias 16 96,048 100,0000 3,95 4,11 16,93 varaince de l'incertitude sur le biais : 2 %u bias 17,71 MS bias + %u 2 2 belast + %u Cref,belast 17 97,532 100,0000 2,47 2,53 6,40 6.4.3 18 96,259 100,0000 3,74 3,89 15,11 19 97,091 100,0000 2,91 3,00 8,98 20 100,703 100,0000-0,70-0,70 0,49 Indiquer ici la précision de la balance utilisée le cas échéant dans le processus de dopage 21 100,241 100,0000-0,24-0,24 0,06 précision (mg) pesée (mg) %u b 2 22 96,187 100,0000 3,81 3,96 15,71 0,1 250 0,0016 23 95,337 100,0000 4,66 4,89 23,92 Indiquer ici la (micro)pipette utilisée le cas échéant pour préparer la solution de dopage et/ou doper. somme des carrés des bias : %S bias 404,54 volume de bias volume pipette (ml) répétabilité (précision, écart-type) pipettage (ml) nombre de mesures : n 23 la pipette somme des carrés moyens : %MSbias 17,59 (ml) u v %u v 2 Calculs Bottom-up de %udopage (incertitude sur le dopage) u p %u p 2 3,00 0,010 0,111 0,0021 0,005 micropipette Eppendorf volume variable (µl) calcul de l'incertitude de mesure relative élargie %U somme %u v 2 0,111 somme %u p 2 0,005 Volume %u 2 dopage : 0,12 %u dopage : 0,34 50-200 100-1000 Paramètre Valeur abs. Niveau Relatif % remarques Volume Error limit : ± Std deviation u v u p 1,2 0,4 6,0 2,0 pipette en verre classe A/AS (ml) Error limit : ± Std deviation variance sur l'incertitude de mesure du bias : 2 %u bias 17,71 0,5 ml variance sur l'incertitude intra-reproductibilité : 2 %u Rw 18,55 1 ml combinaison des variances de l'incertitude : 2 %u c 36,26 %u 2 2 bias + %u Rw 2 ml mesure d'incertitude combinée : %u c 6,02 2,5 ml mesure d'incertitude relative élargie %U Niveau : 3000 mg/kg 12,04 2 * %u c 3 ml 6.5 u v 0,005 0,007 0,01 0,01 0,01 u p 0,0011 0,0015 0,0019 0,0019 0,0021 LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 85/87

10. Incertitude de mesure Pour plus d'information sur ce formulaire, se référer à la procédure LAB P508 Détermination de l'incertitude de mesure pour les analyses chimiques quantitatives. Calcul pratique de l'incertitude de mesure suivant l'approche TOP-DOWN calcul de la variance d'intra-reproductibilité %u Rw 2 Niveau : 500 mg/kg Nr. Experience x : résultats mesurés C dopage : valeur du dopage bias %bias %bias 2 A partir d'un échantillon de contrôle de matrice identique Paramètre Valeur abs. Niveau Relatif % remarques 1 101,466 100,0000-1,47-1,44 2,09 déviation standard de la carte de contrôle, échantillon matrice identique : s Rw (= s CC ) 2,193 102,335 2,143 = RSD CC, est pour une valeur suffisament 2 grande, 2 une bonne estimation de RSD variance d'incertitude intra-rep : %u Rw 4,59 RSD Rw 6.3.1 2 101,131 100,0000-1,13-1,12 1,25 3 102,194 100,0000-2,19-2,15 4,61 4 105,125 100,0000-5,13-4,88 23,77 5 103,158 100,0000-3,16-3,06 9,37 6 104,830 100,0000-4,83-4,61 21,23 Calcul de la justesse / bias (combinaison quadratique) 7 101,327 100,0000-1,33-1,31 1,71 8 106,332 100,0000-6,33-5,95 35,46 A partir d'expériences de recouvrement Paramètre Valeur abs. Niveau Relatif % remarques 9 102,633 100,0000-2,63-2,57 6,58 Données des expériences de recouvrement carré moyen relatif du biais : %MS bias 9,12 somme des carrés moyens 10 105,910 100,0000-5,91-5,58 31,13 11 102,754 100,0000-2,75-2,68 7,18 12 103,296 100,0000-3,30-3,19 10,18 incertitude sur le dopage (spiking) par pesée et/ou volume : %u dopage 1,27 13 99,121 100,0000 0,88 0,89 0,79 variance de la mesure d'incertitude sur le dopage (spiking): %u dopage 2 1,60 svt petit vis-à-vis de %Ms bias 14 101,885 100,0000-1,88-1,85 3,42 Incertitude sur la solution/réactif de dopage %u Cref,dopage 0,010 99,94 0,01 à partir du certificat fournisseur 15 102,025 100,0000-2,02-1,98 3,94 variance de la mesure d'incertitude solution/réactif dopage : 2 %u Cref,dopage 0,00 svt petit vis-à-vis de %Ms bias 16 99,141 100,0000 0,86 0,87 0,75 varaince de l'incertitude sur le biais : 2 %u bias 10,73 MS bias + %u 2 2 belast + %u Cref,belast 17 100,443 100,0000-0,44-0,44 0,19 6.4.3 18 99,261 100,0000 0,74 0,74 0,55 somme des carrés des bias : %S bias 164,22 Calculs Bottom-up de %udopage (incertitude sur le dopage) nombre de mesures : n 18 Indiquer ici la précision de la balance utilisée le cas échéant dans le processus de dopage somme des carrés moyens : %MSbias 9,12 2 précision (mg) pesée (mg) %u b 0,1 250 0,0016 Indiquer ici la (micro)pipette utilisée le cas échéant pour préparer la solution de dopage et/ou doper. micropipette Eppendorf volume variable (µl) volume de bias volume pipette (ml) répétabilité (précision, écart-type) pipettage (ml) Volume la pipette (ml) u v 2 %u v u p 2 %u p 50-200 0,50 0,006 1,440 0,0020 0,160 100-1000 Error limit : ± Std deviation u v u p 1,2 0,4 6,0 2,0 somme %u v 2 %u dopage 2 : 1,60 %u dopage : 1,27 1,440 somme %u p 2 0,160 calcul de l'incertitude de mesure relative élargie %U Paramètre Valeur abs. Niveau Relatif % remarques mesure d'incertitude relative élargie %U 7,83 2 * %u c variance sur l'incertitude de mesure du bias : 2 %u bias 10,73 variance sur l'incertitude intra-reproductibilité : 2 %u Rw 4,59 combinaison des variances de l'incertitude : 2 %u c 15,32 %u 2 2 bias + %u Rw mesure d'incertitude combinée : %u c 3,91 Niveau : 500 mg/kg 6.5 LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 86/87

11. Conclusion La méthode MET-LFSAL-122 "DETERMINATION DE LA TENEUR EN ACIDE PROPIONIQUE ET SES SELS DANS LE PAIN" présente, sur base des essais de validation, les indicateurs de prestation suivants : Matrice pain Gamme de quantification 250 à 4000 mg/kg Modèle mathématique linéaire Nombre de niveaux d'étalonnage 5 Critère sur l'étalonnage ± 10 % Ecart maximum observé sur l'étalonnage 7,4 % Critère sur l'identification par temps de rétention ± 0,9 % Ecart maximum observé sur le temps de rétention 0,5 % Critère sur le rendement entre 80 et 110 % Rendement le plus bas observé 95,3 % Rendement le plus haut observé 107,7 % Rendement moyen obtenu 101,7 % Comparaison résultat avec laboratoire accrédité non significativement différent LOQ 250 mg/kg LOD 125 mg/kg à 500 mg/kg 7,9 mg/kg à 1000 mg/kg 67,8 mg/kg à 3000 mg/kg 73,5 mg/kg à 500 mg/kg 16,2 mg/kg à 1000 mg/kg 102,2 mg/kg à 3000 mg/kg 371,8 mg/kg à 500 mg/kg 7,83 % à 1000 mg/kg 7,00 % à 3000 mg/kg 12,04 % Domaine de validation Etalonnage Spécificité Justesse LOQ LOD Répétabilité Reproductibilité intralaboratoire Incertitude de mesure élargie Conclusion : Sur base des résultats des essais de validation, tous les critères prérequis étant respectés, la méthode proposée permet la détermination de l'acide propionique dans le pain sur un domaine couvrant les 2 normes existantes (1000 et 3000 mg/kg). L'incertitude de mesure élargie associée à l'analyse est de 7,83 % à 500 mg/kg, de 7,00 % à 1000 mg/kg et de 12,04 % à 3000 mg/kg. La LOQ de la méthode est de 250 mg/kg et la LOD est de 125 mg/kg. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 87/87