Syndromes lymphoprolifératifs et LNH de bas grade de malignité

Syndromes lymphoprolifératifs et LNH de bas grade de malignité

Les syndromes lymphoprolifératifs chroniques Néoplasies B matures Néoplasies T matures Syndromes lymphoprolifératifs des immunodéprimés : - déficits immunitaires primitifs - lymphomes et VIH - sd lymphoprolifératifs post-transplantation (PTLD) -...

Classification OMS des hémopathies lymphoïdes matures (1999) Hémopathies lymphoïdes B Leucémie lymphoïde chronique/ lymphome lymphocytique Leucémie prolymphocytaire B Lymphome lymphoplasmocytaire Lymphome splénique à ly villeux Leucémie à tricholeucocytes Lymphome de la zone marginale nodal ou extranodal Lymphome du MALT Lymphome folliculaire Lymphome du manteau Lymphome B diffus à grandes cellules Diebold J. Hématologie Hémopathies lymphoïdes T Leucémie prolymphocytaire T Leucémie à LGL (grands lymphocytes granuleux) Syndrome de Sezary Leucémie/lymphome T de l adulte Lymphome T angioimmunoblastique Lymphome anaplasique à grandes cellules

Classifications histologiques Architecture du ganglion Origine de la cellule tumorale (cytologie+ marqueurs) Analyse cytogénétique ( t 11-14, t 14-18, t8-14) Analyse moléculaire (Bcl2, Bcl1, C myc )

ZONE MARGINALE lymphocytes B mémoires Représentation schématique d un follicule secondaire Sinus périphérique ZONE DU MANTEAU petites cellules B naïves CENTRE GERMINATIF Zone claire apicale Survie => C mémoire ou plasmocytes Zone claire basale Sélection (apoptose) Zone sombre Prolifération Zone corticale profonde Modifié d après P. Felman & O. Gentilhomme. Atlas de cytopathologie ganglionnaire. Eds Arnette. 1997

Ganglion lymphatique Centre germinatif Zone du manteau Zone interfolliculaire

Correspondance entre les cellules lymphoïdes B humaines et leur contrepartie lymphomateuse SANS MUTATION DES REGIONS VARIABLES DES IgH MUTATIONS SOMATIQUES DES REGIONS VARIABLES DES IgH LAL ZONE DU MANTEAU CENTRE GERMINATIF Cellule B CD5+ Plasmocyte Plasmocyte Progéniteur B Cellule B naïve Prolifération Sélection Mutations somatiques Commutation de classe Cellule Cellule B du du CG CG Myélome multiple Lymphome folliculaire Lymphome de Burkitt Lymphome diffus à grandes cellules LLC-B Lymphome du manteau Cellule B mémoire? Lymphome B monocytoïde Lymphome du MALT SLVL LLC-B Leucémie à tricholeucocytes? Leucémie prolymphocytaire?

Diagnostic des syndromes lymphoprolifératifs Un diagnostic multidisciplinaire Clinique Radiologique Anatomo-pathologique Biologique Hématologie : cytologie, immunologie, cytogénétique, moléculaire Biochimie

Les différents examens biologiques dans le diagnostic des SLPC 1- Morphologie : - Cytologie : -sanguine : leucémies / lymphomes leucémisés Hyperlymphocytose > 4 000 ly/mm 3 et/ou lymphocytes pathologiques - médullaire (ponctions, empreintes de BOM) Infiltration lymphoïde > 30% et/ou lymphocytes pathologiques -ganglionnaire (ponctions, empreintes de biopsie) Valeur d orientation des cytoponctions ganglionnaires, à confirmer histologiquement +++ - liquide de ponctions - Histologie : indispensable au diagnostic de lymphome - ganglionnaire - médullaire : lymphomes médullaires, bilan d extension - autres tissus : digestifs, cutanés, ORL,

Frottis sanguin MGG Leucémie lymphoïde chronique (LLC)

Leucémie prolymphocytaire B Frottis sanguin MGG (Site Tribvn)

Morphologie : Frottis sanguin MGG Leucémie à tricholeucocytes (Site Tribvn) DU Oncologie, avril 2005

Lymphome folliculaire Frottis sanguin MGG (Site Tribvn)

Proliférations clonales T Classification morphologique : Leucémie à LGL Leucémie prolymphocytaire T Syndrome de Sézary Lymphome T de l adulte (HTLV1) (Site Tribvn)

Les différents examens biologiques dans le diagnostic des SLPC 2- Immunophénotypage lymphocytaire : Permet la mise en évidence d antigènes cellulaires (membranaires, intracytoplasmiques ou nucléaires). Antigènes clusterisés en «CD» - Cytométrie de flux : Marquage des cellules par des anticorps monoclonaux fluorescents. Analyse des caractéristiques individuelles de chaque cellule d une suspension cellulaire, lors de son passage à travers un faisceau LASER => Information sur la taille, la structure et la fluorescence de la cellule, proportionnelle à l expression de l antigène testé GAMAL04.006 GAMAL04.001 Sang Moelle parfois ganglion R1 0 200 400 600 800 1000 TAILLE 10 0 10 1 10 2 10 3 10 4 CD5 APC

Leucémie lymphoïde chronique (LLC) Immunophénotypage : Kappa FITC CD19 PerCP Cy 5.5 EMMANUELLO02.001 Lambda PE R3 10 0 10 1 10 2 10 3 10 4 LAMBDA PE Mean de fluorescence = 103 EMMANUELLO02.004 10 0 10 1 10 2 10 3 10 4 FMC7 FITC FMC7 FITC CD19 PerCP Cy 5.5 CD19 PerCP Cy 5.5 EMMANUELLO02.003 10 0 10 1 10 2 10 3 10 4 CD5 APC CD5 APC EMMANUELLO02.003 10 0 10 1 10 2 10 3 10 4 CD79b PE CD79b PE CD19 PerCP Cy 5.5 CD19 PerCP Cy 5.5 EMMANUELLO02.002 10 0 10 1 10 2 10 3 10 4 CD23 PE CD23 PE EMMANUELLO02.004 10 0 10 1 10 2 10 3 10 4 CD38 PE CD38 PE (M. Legarff) Population monotypique lambda de faible intensité CD5/CD23+, FMC7-, CD79b faible DU Oncologie, avril 2005

Leucémie lymphoïde chronique (LLC) Immunophénotypage : indispensable au diagnostic prolifération CD19+, CD5+, CD23+, CD79b ou de faible intensité, Ig Kappa ou Ig Lambda de surface de faible intensité (restriction monotypique) Score de Matutes (1994) : Prolifération B (CD19+), clonale : - scores 4 et 5 = LLC - scores 0, 1 et 2 LLC - score 3 : LLC atypiques? Autres marqueurs : - CD10- - CD38+/- - CD25- - ZAP-70 +/- 0 1 CD5 + - CD23 + - FMC7 - + CD79b/CD22 - ou faible FORT IgS faible FORT DU Oncologie, avril 2005

Immunophénotypage des hémopathies lymphoïdes chroniques B Marqueurs LLC LPL HCL HCL-V SLVL MCL FL MZL Intensité des Ig de surface faible forte forte forte moyenne forte moyenne/ forte CD19 + + + + + + + + CD22 - + + + + + + + CD23 + - - - +/- - +/- - FMC7 - + + + + + + + CD5 + +/- - - +/- + - - CD10 - +/- - - - - +/- - moyenne/ forte CD25 +/- - + - - - +/- +/- CD11c +/- - + + + - +/- +/- CD103 - - + + - - - - CD79b - + + + + + + + + = positif dans la majorité des cas ; +/- = positif dans la minorité des cas ; - = négatif dans la majorité des cas LLC : Leucémie lymphoïde chronique HCL : Leucémie à tricholeucocytes SLVL : Lymphome splénique à lymphocytes villeux FL : Lymphome folliculaire LPL : Leucémie prolymphocytaire HCL-V : Forme variante de HCL MCL : Lymphome du manteau MZL : Lymphome de la zone marginale DU Oncologie, avril 2005

Proliférations clonales T Classification immunologique : Proliférations de cellules T matures CD3+ TCR+ Marqueurs communs : CD3, CD2, CD5 Autres marqueurs : CD4, CD8, CD25, CD56 LGL-T LGL-NK LP ATL Sézary CD3/TCR + - + + + CD2 + + + + + CD5 + - + + + CD4 - - + + + CD8 + - - - - CD25 - - - + - CD56 - + - - LGL : Large granular lymphocyte, NK : Natural Killer, LP : Leucémie prolymphocytaire, ATL : Adult T Leukemia/Lymphoma DU Oncologie, avril 2005

Les différents examens biologiques dans le diagnostic des SLPC 2- Immunophénotypage lymphocytaire : - Techniques immuno-histochimiques : Sur coupes de tissu Réalisées par les anatomo-pathologistes CD20 CD3 (Photos : F. Charlotte)

CD20 Ganglion lymphatique CD3 Bcl-2

Lymphome lymphocytique Petits lymphocytes ( ) prolymphocytes ( ) Immunophénotype CD20+ CD5+ CD23+ CD10-

Expression de Bcl-2 Hyperplasie folliculaire LNH folliculaire

Les différents examens biologiques dans le diagnostic des SLPC 3- Cytogénétique : - Conventionnelle : caryotype analyse tout le génome Ex. t(14;18) - Moléculaire : FISH «Fluorescent In-Situ Hybridization» ne détecte que les anomalies recherchées BCL2, 18q21, green 14q32.3, red, http://www.infobiogen.fr/services/chromcancer/anomalies/t1418id2006.html

Les différents examens biologiques dans le diagnostic des SLPC 4- Biologie moléculaire : PCR «Polymerase Chain Reaction» Détection moléculaire d une population lymphoïde clonale : => Réarrangement des gènes des chaînes lourdes des Immunoglobulines et du TCR gamma Configuration germinale des gènes IgH 1 2 3 4 5 n 1 2 3 4 n 123456 RECOMBINAISON D-J RECOMBINAISON V-D-J Gènes IgH réarrangés VH JH!!! défaut possible d informativité si hypermutations somatiques +++ => toujours analyser un pvt tumoral Leukemia (2003) 17, 2257 2317.

Les différents examens biologiques dans le diagnostic des SLPC 4- Biologie moléculaire : PCR «Polymerase Chain Reaction» Détection de réarrangements génomiques : Ex. : IgH-Bcl2 équivalent de la t(14;18) IgH-Bcl1 équivalent de la t(11;14) Tous ne sont pas analysables par PCR : ex. réarrangements de c-myc Détection de l hyperexpression de la cycline D1 : PCR quantitative sur cdna (après rétro-transcription de l ARN) Prélèvements analysables : sang, moelle, ganglions, tissus, liquide de ponction,...

Programme Leucémie lymphoïde chronique Autres syndromes lymphoprolifératifs chroniques Cas Cliniques